專利名稱：降三萜類化合物，其制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物學(xué)領(lǐng)域，具體地涉及一類降三萜化合物，其制備方法，以該類化合物為活性成分的抗炎劑的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有技術(shù)中未見本發(fā)明所涉及的降三萜類化合物以及其活性的文獻(xiàn)報道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種降三萜類化合物，其制備方法，以及以該類化合物為活性成分的抗炎劑的應(yīng)用。
為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案本發(fā)明新的降三萜類化合物可用下述通式(I)表示 其中R1，R2，R8，R10，R15＝-CH3，-CH2OH，-CHO，-COOH，-COOR(R為烷基或芳基)；R3，R4，R5，R6，R7，R9，R11，R12，R13，R14，R16＝-H，-OH，-OCOR(R為烷基或芳基)，-OR(R為烷基或芳基)，-C＝O，-X(鹵素)，氨基；R3R4，R4R5，R6R7，R9R12，R11R12，R12R13，R14R16＝雙鍵，氧橋，-OCH2O-；優(yōu)選的本發(fā)明化合物是其中R1＝β-CH3，R2＝R8＝R10＝R16＝α-CH3，R3＝R6＝R7＝H，R4＝α-OH，R5＝R9＝R12＝α-H，R11＝β-OH，R13＝R14＝R15＝β-H的化合物1，4:9，15:15，24-triepoxy-7α，20β-dihydroxy-3，4:9，10:16，17-seco-28-nor-cycloartane-3，10:23，26-diolide-16，17-dione，命名為小花內(nèi)酯素D(1)。
優(yōu)選的本發(fā)明化合物是其中R1＝R10＝β-CH3，R2＝R8＝R16＝α-CH3，R3＝R6＝R7＝H，R4＝R11＝α-OH，R5＝R9＝R12＝α-H，R13＝R14＝R15＝β-H的化合物1，4:9，15:15，24-triepoxy-7α，20α-dihydroxy-3，4:9，10:16，17-seco-28-nor-cycloartane-3，10:23，26-diolide-16，17-dione，命名為小花內(nèi)酯素E(2)。
優(yōu)選的本發(fā)明化合物是其中R1＝R10＝β-CH3，R2＝R8＝R16＝α-CH3，R3＝R6＝R7＝H，R4R5＝雙鍵，R9＝R12＝α-H，R11＝α-OH，R13＝R14＝R15＝β-H的化合物1，4:9，15:15，24-triepoxy-20α-hydroxy-3，4:9，10:16，17-seco-28-nor-cycloartane-7-en-3，10:23，26-diolide-16，17-dione，命名為小花內(nèi)酯素F(3)。
優(yōu)選的本發(fā)明化合物是其中R1＝β-CH3，R2＝R8＝R10＝R16＝α-CH3，R3＝R6＝R7＝H，R4＝β-OH，R5＝R11＝R13＝R14＝R15＝β-H，R9＝R12＝α-H的化合物1，4:9，15:15，24-triepoxy-7β-hydroxy-8β-H-3，4:9，10:16，17-seco-28-nor-cycloartane-3，10:23，26-diolide-16，17-dione，命名為小花內(nèi)酯素G(4)。
本發(fā)明還提供了通式(I)化合物的制備方法，包括用溶劑60％-100％的丙酮或乙醇或甲醇冷浸或熱回流浸提五味子科植物莖和葉粗粉得到總浸膏，總浸膏用水分散后再用有機溶劑乙酸乙酯或氯仿或乙醚或石油醚或苯萃取，萃取物經(jīng)反復(fù)柱層析分離后得到式(I)化合物。
選擇小花五味子(Schisandra micrantha A.C.Smith)莖和葉為材料，進(jìn)行提取、分離、結(jié)構(gòu)鑒定和活性篩選，從中得到了4個新的降三萜類化合物1，4:9，15:15，24-triepoxy-7a，20β-dihydroxy-3，4:9，10:16，17-seco-28-nor-cycloartane-3，10:23，26-diolide-16，17-dione(小花內(nèi)酯素D，1)，1，4:9，15:15，24-triepoxy-7α，20α-dihydroxy-3，4:9，10:16，17-seco-28-nor-cycloartane-3，10:23，26-diolide-16，17-dione(小花內(nèi)酯素E，2)，1，4:9，15:15，24-triepoxy-20α-hydroxy-3，4:9，10:16，17-seco-28-nor-cycloartane-7-en-3，10:23，26-diolide-16，17-dione(小花內(nèi)酯素F，3)，1，4:9，15:15，24-triepoxy-7β-hydroxy-8β-H-3，4:9，10:16，17-seco-28-nor-cycloartane-3，10:23，26-diolide-16，17-dione(小花內(nèi)酯素G，4)。
此外，本發(fā)明還提供了式(I)化合物在制備治療炎癥藥物中的的應(yīng)用。
本發(fā)明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。該藥物組合物含有0.1-99％，優(yōu)選為0.5-90％的本發(fā)明化合物，其余為藥物學(xué)上可接受的，對人和動物無毒和和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
所述的藥用載體或賦形劑是一種或多種固體、半固體和液體稀釋劑、填料以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物有單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明的藥物可經(jīng)多種形式給藥。
圖1.小花內(nèi)酯素D(1)重要的HMBC相關(guān)信號圖；圖2.小花內(nèi)酯素E(2)重要的ROESY相關(guān)信號圖；圖3.小花內(nèi)酯素G(4)重要的HMBC相關(guān)信號圖；圖4.用Chemdraw 3D顯示的小花內(nèi)酯素G(4)重要的ROESY相關(guān)信號圖；圖5為小花五味子化學(xué)成分提取分離流程圖。
具體實施例方式下面的實施例可以使本專業(yè)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
實施例11，4:9，15:15，24-triepoxy-7α，20β-dihydroxy-3，4:9，10:16，17-seco-28-nor-cycloartane-3，10:23，26-diolide-16，17-dione(小花內(nèi)酯素D)(簡稱化合物1)的制備干燥小花五味子(Schisandra micrantha A.C.Smith)莖和葉6.8kg，粉碎后用70％丙酮/水溶液室溫浸泡3次(每次25升左右)，提取液合并，減壓蒸餾至無丙酮味后，水部分靜置過夜，濾除沉積的色素，濾液先用石油醚萃取2次，再用乙酸乙酯萃取3次，回收溶劑后，得乙酸乙酯部分(170g)。乙酸乙酯部分用300g粗硅膠(80-100目)拌樣，1.4kg硅膠(100-200目)以粗短型硅膠柱進(jìn)行粗分離，氯仿∶丙酮(1∶0→0∶1)梯度洗脫，每1000ml為一個餾分，共300份。TLC監(jiān)測合并相同的部分，得到8個主要部分。其中第15-18份(15g，部位3)用MCI-gel CHP 20P(50→90％MeOH-H2O)處理后得3個部分Fr.3a-c。Fr.3a(50％MeOH，4g)以石油醚-丙酮(0∶1→1∶0)為洗脫劑，進(jìn)行硅膠柱層析，每100ml為一個餾分，共收集110份，其中第36-42份經(jīng)硅膠柱層析，以CHCl3-MeOH(100∶1)為洗脫劑，共收集85份餾分(每份100ml)，第33-56份經(jīng)反復(fù)重結(jié)晶后得到化合物1(94mg)。
小花內(nèi)酯素D(1)，無色柱狀結(jié)晶，m.p.183℃，[α]D26.3+29.15(c 0.22，C5D5N)。分子式組成C29H36O11，由高分辨HREI MS(計算值560.2258；實測值560.2249)，結(jié)合13C NMR和DEPT譜分析得到。由1H，13C NMR(表-1和表-2)和HMQC譜圖分析可知，化合物1有5個甲基，5個亞甲基，9個次甲基和10個季碳。將化合物1的1H和13C NMR波譜數(shù)據(jù)與小花內(nèi)酯素A(5)進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)二者非常相似。所不同的是在13C NMR譜中，化合物1少了1個含氧季碳(化合物5C-22，δ75.5)，多了1個次甲基(δ41.6)，提示化合物1可能為化合物5的C-22脫羥基產(chǎn)物。這可從化合物1在1H NMR譜中出現(xiàn)了新的質(zhì)子信號(δ3.16)，以及H-14(δ2.89)的化學(xué)位移較化合物5(δ3.31)向高場位移了0.42ppm得到確證。HMBC譜中(圖1)，Me-21和C-22，H-22和C-15，H-14與H-23和C-22的相關(guān)，以及1H-1H COSY譜中H-14和H-22，H-22和H-23的相關(guān)信號，也證實了化合物1的結(jié)構(gòu)。同時，在化合物1中，由于失去了OH-22的去屏蔽作用，Me-18的化學(xué)位移(δ0.99)與化合物5(δH1.58)相比向高場位移，也從另一個角度證實了化合物1的結(jié)構(gòu)。因此，化合物1的結(jié)構(gòu)確定為1，4:9，15:15，24-triepoxy-7α，20β-dihydroxy-3，4:9，10:16，17-seco-28-nor-cycloartane-3，10:23，26-diolide-16，17-dione，命名為小花內(nèi)酯素D。
實施例21，4:9，15:15，24-triepoxy-7α，20α-dihydroxy-3，4:9，10:16，17-seco-28-nor-cycloartane-3，10:23，26-diolide-16，17-dione(小花內(nèi)酯素E)(簡稱化合物2)的制備。
干燥小花五味子(Schisandra micrantha A.C.Smith)莖和葉6.8kg，粉碎后用70％丙酮/水溶液室溫浸泡3次(每次25升左右)，提取液合并，減壓蒸餾至無丙酮味后，水部分靜置過夜，濾除沉積的色素，濾液先用石油醚萃取2次，再用乙酸乙酯萃取3次，回收溶劑后，得乙酸乙酯部分(170g)。乙酸乙酯部分用300g粗硅膠(80-100目)拌樣，1.4kg硅膠(100-200目)以粗短型硅膠柱進(jìn)行粗分離，氯仿∶丙酮(1∶0→0∶1)梯度洗脫，每1000ml為一個餾分，共300份。TLC監(jiān)測合并相同的部分，得到8個主要部分。其中第15-18份(15g，部位3)用MCI-gel CHP 20P(50→90％MeOH-H2O)處理后得3個部分Fr.3a-c。Fr.3a(50％MeOH，4g)以石油醚-丙酮(0∶1→1∶0)為洗脫劑，進(jìn)行硅膠柱層析，每100ml為一個餾分，共收集110份，其中第36-42份經(jīng)硅膠柱層析，以CHCl3-MeOH(100∶1)為洗脫劑，共收集85份餾分(每份100ml)，第33-56份經(jīng)反復(fù)重結(jié)晶后得到化合物1(94mg)；第62-70份經(jīng)CHCl3-MeOH(20∶1)沖柱，反復(fù)純化后得化合物2(37mg)。
小花內(nèi)酯素E(2)，白色固體，m.p.156-158℃；[α]D25.7+42.41(c 0.22，MeOH)。通過高分辨HRESI MS(m/z 583.2143，[M+Na]+)可知分子式為C29H36O11，與化合物1相同。將化合物2的1H和13C NMR譜與化合物1比較(表-1和表-2)，除了C-20，C-22和Me-21的化學(xué)位移不同外，其余部分幾乎相同，說明兩個化合物的結(jié)構(gòu)非常相似。對HMBC和HMQC譜的相關(guān)信號分析表明，化合物2的平面結(jié)構(gòu)與化合物1相同，二者的區(qū)別在于Me-21相對構(gòu)型的不同。在化合物2的13C NMR譜中，C-20和C-22的化學(xué)位移值分別向低場位移至δ76.4，43.5(1δ74.7，41.6)，而Me-21的化學(xué)位移值則向高場位移至δ20.6(1δ24.4)。說明化合物2的Me-21的相對構(gòu)型為已由化合物1的α-型變?yōu)棣?型。NOESY譜中Me-21與H-23和H-24的顯著NOE相關(guān)(圖2)，清楚地表明Me-21只能位于β-位上。因而，化合物2為化合物1在Me-21的差向異構(gòu)體，被鑒定為1，4:9，15:15，24-triepoxy-7α，20α-dihydroxy-3，4:9，10:16，17-seco-28-nor-cycloartane-3，10:23，26-diolide-16，17-dione，命名為小花內(nèi)酯素E。
實施例31，4:9，15:15，24-triepoxy-20α-hydroxy-3，4:9，10:16，17-seco-28-nor-cycloartane-7-en-3，10:23，26-diolide-16，17-dione(小花內(nèi)酯素F)(簡稱化合物3)的制備。
干燥小花五味子(Schisandra micrantha A.C.Smith)莖和葉6.8kg，粉碎后用70％丙酮/水溶液室溫浸泡3次(每次25升左右)，提取液合并，減壓蒸餾至無丙酮味后，水部分靜置過夜，濾除沉積的色素，濾液先用石油醚萃取2次，再用乙酸乙酯萃取3次，回收溶劑后，得乙酸乙酯部分(170g)。乙酸乙酯部分用300g粗硅膠(80-100目)拌樣，1.4kg硅膠(100-200目)以粗短型硅膠柱進(jìn)行粗分離，氯仿∶丙酮(1∶0→0∶1)梯度洗脫，每1000ml為一個餾分，共300份。TLC監(jiān)測合并相同的部分，得到8個主要部分。其中第15-18份(15g，部位3)用MCI-gel CHP 20P(50→90％MeOH-H2O)處理后得3個部分Fr.3a-c。Fr.3a(50％MeOH，4g)以石油醚-丙酮(0∶1→1∶0)為洗脫劑，進(jìn)行硅膠柱層析，每100ml為一個餾分，共收集110份，其中第36-42份經(jīng)硅膠柱層析，以CHCl3-MeOH(100∶1)為洗脫劑，共收集85份餾分(每份100ml)，第33-56份經(jīng)反復(fù)重結(jié)晶后得到化合物1(94mg)；第50-58份以CHCl3-MeOH(50∶1)為洗脫劑，硅膠柱層析后重結(jié)晶得化合物3(28mg)。
小花內(nèi)酯素F(3)，白色固體，[α]D25.0+45.25(c 0.22，MeOH)。UV光譜在λmax229(3.89)nm處的吸收表明分子中存在共扼基團。結(jié)合HRESI MS(計算值565.2049，實測值565.2041)，13C NMR和DEPT數(shù)據(jù)分析，化合物3的分子式確定為C29H34O10，比化合物2少了18個質(zhì)量數(shù)，說明比化合物2少了1分子H2O?；衔?的13C NMR數(shù)據(jù)與化合物2非常相似，不同之處僅在于化合物2的2個次甲基信號(C-7δC67.9，C-8δC60.0)在化合物3中被一對三取代的雙鍵(δC135.5，137.9)所代替，提示化合物3為化合物2的7位脫羥基產(chǎn)物。HMBC譜中，H-7與C-6，C-9和C-16的相關(guān)，以及H2-6和H2-19與C-8的相關(guān)，也證實了化合物3的結(jié)構(gòu)為1，4:9，15:15，24-triepoxy-20α-hydroxy-3，4:9，10:16，17-seco-28-nor-cycloartane-7-en-3，10:23，26-diolide-16，17-dione，命名為小花內(nèi)酯素F。
實施例41，4:9，15:15，24-triepoxy-7β-hydroxy-8β-H-3，4:9，10:16，17-seco-28-nor-cycloartane-3，10:23，26-diolide-16，17-dione(小花內(nèi)酯素G)(簡稱化合物4)的制備。
干燥小花五味子(Schisandra micrantha A.C.Smith)莖和葉6.8kg，粉碎后用70％丙酮/水溶液室溫浸泡3次(每次25升左右)，提取液合并，減壓蒸餾至無丙酮味后，水部分靜置過夜，濾除沉積的色素，濾液先用石油醚萃取2次，再用乙酸乙酯萃取3次，回收溶劑后，得乙酸乙酯部分(170g)。乙酸乙酯部分用300g粗硅膠(80-100目)拌樣，1.4kg硅膠(100-200目)以粗短型硅膠柱進(jìn)行粗分離，氯仿∶丙酮(1∶0→0∶1)梯度洗脫，每1000ml為一個餾分，共300份。TLC監(jiān)測合并相同的部分，得到8個主要部分。其中第15-18份(15g，部位3)用MCI-gel CHP 20P(50→90％MeOH-H2O)處理后得3個部分Fr.3a-c。Fr.3a(50％MeOH，4g)以石油醚-丙酮(0∶1→1∶0)為洗脫劑，進(jìn)行硅膠柱層析，每100ml為一個餾分，共收集110份，其中第36-42份經(jīng)硅膠柱層析，以CHCl3-MeOH(100∶1)為洗脫劑，共收集85份餾分(每份100ml)，第33-56份經(jīng)反復(fù)重結(jié)晶后得到化合物1(94mg)；第50-58份以CHCl3-MeOH(50∶1)為洗脫劑，硅膠柱層析后重結(jié)晶得化合物3(28mg)。
Fr.3b(60％MeOH，9g)以石油醚-乙酸乙酯-丙酮(10∶1∶1)為洗脫劑進(jìn)行硅膠柱層析，每100ml為一個餾分，共收集185份，第75-95份(3g)經(jīng)硅膠柱層析，以CHCl3-丙酮(20∶1)為洗脫劑，共收集70份餾分(每份100ml)，其中第35-48份，經(jīng)制備型ZORBAX SB-C18反向柱(Agilent公司，HP1100型高效液相色譜儀，55％MeOH-H2O，flow rate 3.0mL/min)后得化合物4(3mg)。
小花內(nèi)酯素G(4)，白色固體，[α]D17.4+71.43(c 0.11，MeOH)。HRESI MS確定其分子式為C29H36O10(m/z[M+Na]+567.2208)，比化合物1少一個氧原子。13CNMR和DEPT譜數(shù)據(jù)分析顯示，化合物4有29個碳，包括5個甲基，5個亞甲基，10個次甲基和9個季碳。共有35個質(zhì)子與碳相連，提示分子中有1個羥基。仔細(xì)比較化合物4和化合物1的1H和13C NMR數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)二者的區(qū)別之處在于(a)13C NMR譜中化合物1的20位的含氧季碳(δC74.7)在化合物4中被次甲基(δC44.0)所取代，還觀察到1H NMR譜中化學(xué)位移在δH5.40處的羥基信號不再出現(xiàn)，因此可以推測化合物4為化合物1的20位脫羥基衍生物。HMBC譜中，H-14和Me-21與C-20的清晰的相關(guān)點，以及H-20與C-22和C-23的相關(guān)也進(jìn)一步證實了上述推斷。(b)2個化合物在C-5～C-8和C-11區(qū)域的化學(xué)位移值也有所差別。在HMBC中，H-5和C-7，H-6和C-7、C-8，H-8和C-7、C-11、C-16、C-19的相關(guān)信號說明在化合物4中同樣存在OH-7(圖3)。從HMQC和1H-1H COSY譜中得到的從H-5到H-8的連接片段也說明該羥基確實位于C-7。由此可知，化合物4和化合物1在該區(qū)域的平面結(jié)構(gòu)是完全一樣的。二者化學(xué)位移值的差別，與C-5～C-8區(qū)域的立體化學(xué)不同有關(guān)。Me-29和H-5的NOE顯著相關(guān)，說明H-5仍然為β取向。H-5和H-8的NOESY相關(guān)信號，提示H-8與H-5同為β取向。H-5和H-7沒有象在化合物4中一樣顯示NOESY相關(guān)，故推測H-7為α取向。H-7和H-11α的NOE相關(guān)進(jìn)一步證實了H-7α的存在(圖4)。此外，觀察到的H-5的化學(xué)位移值向相對低場位移(4δH2.91；1δH2.48)，也證實H-5與OH-7同為β-取向，因而H-5β受到OH-7β的去屏蔽效應(yīng)。至此，化合物4的結(jié)構(gòu)被鑒定為1，4:9，15:15，24-triepoxy-7β-hydroxy-8β-H-3，4:9，10:16，17-seco-28-nor-cycloartane-3，10:23，26-diolide-16，17-dione，命名為小花內(nèi)酯素G。
表-1化合物1-4的1H NMR數(shù)據(jù)(C5D5N中測定)aH 1 2 3 41 4.19(d，5.1)4.32(d，6.0) 4.28(d，6.3)4.28(d，4.3)2α 2.71(d，15.0) 2.65(d，18.6) 2.77(d，18.9) 2.85(d，14.5)2β 2.87(dd，5.1， 3.08(dd，6.0，3.13(dd，6.3， 3.19(dd，4.3，15.0) 18.6) 18.9) 14.5)5 2.48(dd，3.4， 2.39(dd，6.0，2.18(overlap) 2.91(br d，10.6)10.3) 10.1)6α 2.08(m) 1.64(m)2.06(m) 2.16(m)6β 2.20(overlap) 1.79(m)7 4.50(dd，7.5，7.9) 4.30(ovelap) 7.06(dd，6.8，7.6) 4.49(m)8 2.95(d，7.9)2.72(d，9.8) - 4.05(d，7.4)11α1.73(m) 1.77(m) 1.70(m) 1.70(m)11β1.98(m) 1.92(m) 2.09(m) 2.00(m)12α1.62(m) 1.60(m) 1.46(m) 1.52(m)12β1.86(m) 1.92(overlap) 1.94(m) 1.82(m)14 2.89(d，6.5)2.79(d，8.8) 2.87(d，9.1)2.76(d，5.5)18 0.99(s) 1.23(s) 1.15(s) 0.91(s)19α2.49(ABd，12.7) 2.52(ABd，16.1) 2.45(ABd，13.3)2.34(d，2.3)19β2.19(ABd，12.7) 2.18(ABd，16.1) 1.93(ABd，13.3)20 - - - 2.55(m)21 1.53(s) 1.68(s) 1.72(s) 1.27(d，5.5)22 3.16(m) 3.33(d，8.8) 3.53(d，8.8)2.75(overlap)23 4.93(br s) 5.02(br s)5.05(br s) 4.47(br s)24 5.22(dd，1.4，3.2) 5.00(d，3.5) 4.74(dd，1.8，2.3) 4.55(d，1.6)25 3.16(overlap) 3.21(m) 3.19(m) 3.01(m)27 1.12(d，5.8)1.12(d，7.6) 1.61(d，7.3)1.33(d，5.9)29 1.23(s) 1.32(s) 1.22(s) 1.28(s)30 1.04(s) 1.14(s) 1.03(s) 1.05(s)20-OH 5.40(s) 4.30(overlap) 4.42(s) -aBruker DRX-500MHz核磁共振儀測定，化學(xué)位移值(δ)用ppm表示，偶合常數(shù)(J)用Hz表示表-2化合物1-4的13C NMR數(shù)據(jù)(C5D5N中測定)C1234181.4 81.5 80.4 80.3235.0 35.0 35.3 35.93175.1175.3175.2174.8483.9 84.0 83.2 84.3558.1 58.3 57.6 53.5636.4 36.1 23.6 33.8767.7 67.9 135.562.9860.1 60.0 137.955.3982.2 81.3 82.2 80.510 95.7 96.0 94.9 97.111 41.3 41.1 39.0 36.412 30.7 30.8 31.0 31.513 49.3 48.6 49.0 49.914 44.8 43.5 44.2 44.615 98.1 98.1 98.5 98.916 208.2209.1198.5208.717 220.0221.2221.7220.318 26.6 27.6 28.2 25.719 42.4 42.3 42.5 44.520 74.7 76.4 76.3 44.021 24.4 20.6 20.9 15.122 41.6 43.5 43.7 39.923 73.6 74.2 74.1 75.224 72.4 70.9 70.4 69.125 41.7 41.9 42.4 42.026 177.6177.5177.8177.927 7.7 7.7 8.4 8.229 27.7 27.8 27.5 27.930 20.9 20.9 20.4 21.0aBruker DRX-500MHz核磁共振儀測定，化學(xué)位移值(δ)用ppm表示本發(fā)明的優(yōu)點是，所得到的新骨架化合物結(jié)構(gòu)獨特，提取分離方法簡易。
實施例5實施例1化合物的抗炎作用1，4:9，15:15，24-triepoxy-7α，20β-dihydroxy-3，4:9，10:16，17-seco-28-nor-cycloartane-3，10:23，26-diolide-16，17-dione(小花內(nèi)酯素D，化合物1)的抗炎活性(1)細(xì)胞毒性檢測采用MTT法(3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyl tetrazolium bromide)來檢測化合物1對小鼠和人中性粒白細(xì)胞(polymorphonuclear leukocytes，PMNL)的細(xì)胞毒性。試驗結(jié)果表明化合物1對小鼠和人PMNL在被測濃度范圍內(nèi)(10-100μM)均未表現(xiàn)出毒性當(dāng)化合物1的濃度達(dá)到100μM時，人PMNL的存活率為100％，小鼠PMNL的存活率大于90％。
(2)對小鼠外周白細(xì)胞(rat peritoneal leukocytes)生成白三烯(leukotrieneB4，LTB4)的抑制作用當(dāng)化合物1的濃度達(dá)到100μM時，可顯著抑制小鼠外周白細(xì)胞中LTB4的生成，抑制率為69％(IC50＝82μM)。
(3)人血小板環(huán)氧合酶-1(cyclooxygenase-1，COX-1)和脂氧酶-12(12-lipoxygenase，12-LOX)的作用當(dāng)化合物1的濃度達(dá)到100μM時，對COX-1產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物12-HHTrE的抑制率為43％，對12-LOX產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物12-HETE的抑制率為79％；當(dāng)化合物1的濃度達(dá)到50μM時，對12-HHTrE的抑制率為54％。
(4)對人彈性蛋白酶(elastase)的抑制作用化合物1對人彈性蛋白酶的抑制作用不明顯。
以上試驗結(jié)果表明，化合物1對小鼠和人中性粒白細(xì)胞未表現(xiàn)出細(xì)胞毒性，對脂氧酶LOX的代謝有選擇性作用，尤其對12-LOX表現(xiàn)出良好的抑制作用。因此化合物1具有的抗炎活性。
下面是化合物1至4的結(jié)構(gòu)示意 1 R1＝OH R2＝CH3R3＝H2 R1＝CH3R2＝OH R3＝H5 R1＝R3＝OH R2＝CH3
實施例5按實施例1至4的方法先制得化合物1，2，3，4；分別按其與賦形劑重量比為5∶1的比例加入賦形劑，制粒壓片。
實施例7按實施例1至4的方法先制得化合物1，2，3，4；分別按常規(guī)注射液制法加注射用水，精濾，灌封滅菌制成注射液。
實施例8按實施例1至4的方法先制得化合物1，2，3，4；分別按常規(guī)膠囊劑制法制成膠囊劑。
實施例9片劑化合物1或2或3或420mg淀粉100mg玉米漿 適量硬脂酸鎂適量實施例10膠囊劑 化合物1或2或3或420mg淀粉100mg葡萄糖 200mg硬脂酸鎂適量制備方法將化合物1或2或3或4與助劑均勻混合，過篩，在合適的容器中均勻混合，把得到的混合物裝入硬明膠膠囊。
實施例11散劑 化合物1或2或3或420mg淀粉100mg蔗糖200mg制備方法將化合物1或2或3或4、淀粉、蔗糖研細(xì)，混均，過篩，分包即得。
權(quán)利要求
1.下述通式(I)化合物 其中R1，R2，R8，R10，R15＝-CH3，-CH2OH，-CHO，-COOH，-COOR(R為烷基或芳基)；R3，R4，R5，R6，R7，R9，R11，R12，R13，R14，R16＝-H，-OH，-OCOR(R為烷基或芳基)，-OR(R為烷基或芳基)，-C＝O，-X(鹵素)，氨基；R3R4，R4R5，R6R7，R9R12，R11R12，R12R13，R14R16＝雙鍵，氧橋，-OCH2O-；
2.按照權(quán)利要求1的化合物，其中當(dāng)R1＝β-CH3，R2＝R8＝R10＝R16＝α-CH3，R3＝R6＝R7＝H，R4＝α-OH，R5＝R9＝R12＝α-H，R11＝β-OH，R13＝R14＝R15＝β-H時，化合物為1，4:9，15:15，24-triepoxy-7α，20β-dihydroxy-3，4:9，10:16，17-seco-28-nor-cycloartane-3，10:23，26-diolide-16，17-dione，即小花內(nèi)酯素D。
3.按照權(quán)利要求1所述的化合物，其中當(dāng)R1＝R10＝β-CH3，R2＝R8＝R16＝α-CH3，R3＝R6＝R7＝H，R4＝R11＝α-OH，R5＝R9＝R12＝α-H，R13＝R14＝R15＝β-H時，化合物為1，4:9，15:15，24-triepoxy-7α，20α-dihydroxy-3，4:9，10:16，17-seco-28-nor-cycloartane-3，10:23，26-diolide-16，17-dione，即小花內(nèi)酯素E。
4.按照權(quán)利要求1所述的化合物，其中當(dāng)R1＝R10＝β-CH3，R2＝R8＝R16＝α-CH3，R3＝R6＝R7＝H，R4R5＝雙鍵，R9＝R12＝α-H，R11＝α-OH，R13＝R14＝R15＝β-H時，化合物為1，4:9，15:15，24-triepoxy-20α-hydroxy-3，4:9，10:16，17-seco-28-nor-cycloartane-7-en-3，10:23，26-diolide-16，17-dione，即小花內(nèi)酯素F。
5.按照權(quán)利要求1所述的化合物，其中當(dāng)R1＝β-CH3，R2＝R8＝R10＝R16＝α-CH3，R3＝R6＝R7＝H，R4＝β-OH，R5＝R11＝R13＝R14＝R15＝β-H，R9＝R12＝α-H時，化合物為1，4:9，15:15，24-triepoxy-7β-hydroxy-8β-H-3，4:9，10:16，17-seco-28-nor-cycloartane-3，10:23，26-diolide-16，17-dione，即小花內(nèi)酯素G。
6.權(quán)利要求1化合物的制備方法，包括用溶劑60％-100％的丙酮或乙醇或甲醇冷浸或熱回流浸提五味子科植物莖和葉粗粉得到總浸膏，總浸膏用水分散后再用有機溶劑乙酸乙酯或氯仿或乙醚或石油醚或苯萃取，萃取物經(jīng)反復(fù)柱層析分離后得到式(I)化合物。
7.權(quán)利要求1化合物在制備治療炎癥藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
提供式(I)降三萜類化合物，其制備方法，以及以該類化合物為活性成分的抗炎劑的應(yīng)用。
文檔編號A61P29/00GK1634926SQ20041007951
公開日2005年7月6日 申請日期2004年10月22日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月22日
發(fā)明者李蓉濤, 肖偉烈, 沈云亨, 彭麗艷, 孫漢董 申請人:中國科學(xué)院昆明植物研究所