專利名稱：一種蓖麻蠶精提物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種具有治療女性雌激素失調(diào)引起的疾病的蓖麻蠶提取物及其制備方法。包括含有此提取物的各種制劑類型。這些制劑可以用來作為藥物也可以用做具有保健功能的食品。
背景技術(shù)：
昆蟲作為動(dòng)物藥在中醫(yī)藥上的應(yīng)用及研究，在我國(guó)具有悠久的歷史。我們的祖先很早就知道采用一些常見昆蟲治病。在昆蟲作為補(bǔ)益藥用方面，研究并發(fā)現(xiàn)藥用價(jià)值較為突出的是螞蟻、雄蠶蛾、冬蟲夏草及蜂蜜蜂乳。其中，激素是昆蟲補(bǔ)益物質(zhì)中較為重要的一類。雄蠶蛾中含有的補(bǔ)益物質(zhì)是三種激素腦激素、蛻皮激素與保幼激素。這三種激素不但作用奇特，而且是其它生物藥中沒有，也無法取代的。處于生殖階段的蠶蛾，體內(nèi)含有大量的生理活性物質(zhì)，其藥用價(jià)值早在李時(shí)珍的《本草綱目》中就有記載。上述三種激素，已在家蠶雄蛾、柞蠶雄蛾開發(fā)利用，400年前《龜齡集》長(zhǎng)壽名方，就是以家蠶蛾為入方要藥。目前.國(guó)內(nèi)利用雄蠶蛾已研制出多種保健藥品，如現(xiàn)代馳名的補(bǔ)益抗衰《延生護(hù)寶液》，是以柞蠶雄蛾為主藥的成藥。雌蠶蛾中同樣含有以上三種激素(腦激素、蛻皮激素與保幼激素)，但在以往蠶桑副產(chǎn)物蠶蛾的開發(fā)利用中，幾乎都是用雄蠶蛾，而對(duì)雌蠶蛾藥用價(jià)值的研究卻很少。開發(fā)利用雄蠶蛾只利用了不到一半的蠶蛾資源，如果能開發(fā)成功雌蠶蛾就可大大提高蠶業(yè)資源的利用率。既可以擴(kuò)大中藥的資源，更可以充分利用蠶業(yè)資源，大大增加社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。對(duì)蠶類昆蟲的生理生化研究表明，雌蠶體內(nèi)可以同時(shí)檢測(cè)到雌二醇、孕酮和睪酮類似物[1]。已有研究報(bào)道，利用柞蠶雌蛾提取液佐以茯苓等中草藥研制出的新藥“九如天寶液”對(duì)治療前列腺肥大和婦女更年期綜合癥有較好的效果[2]；家蠶雌蛾提取液可能含有類雌激素物質(zhì)[3]。蓖麻蠶繭與桑蠶繭、柞蠶繭同是當(dāng)今世界絹絲工業(yè)生產(chǎn)的三大原料資源，其雌蠶蛾在我國(guó)資源相當(dāng)豐富、價(jià)廉易得。
蓖麻蠶(eri-silkworm)是一種無滯育期多化性完全變態(tài)的絹絲昆蟲，全年都可飼養(yǎng)。蓖麻蠶屬鱗翅目，天蠶蛾科，學(xué)名為Samia cynthia ricini Boisduval，因主食蓖麻葉，故名蓖麻蠶。包括廣西、廣東、湖南、四川等省用木薯、馬桑葉飼養(yǎng)，又稱木薯蠶或馬桑蠶的蓖麻蠶。
本室近幾年來對(duì)蓖麻雌蠶蛾精提物進(jìn)行了雌激素樣活性相關(guān)研究，其研究結(jié)果表明蓖麻雌蠶蛾精提物不僅對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物具有顯著的雌激素樣效應(yīng)，而且增強(qiáng)免疫器官臟器指數(shù)。這一實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象表明雌蠶蛾中含有理想的治療更年期綜合癥藥源物質(zhì)。有關(guān)這方面的研究國(guó)內(nèi)外均未見報(bào)道。本發(fā)明采用先進(jìn)的大孔樹脂分離純化技術(shù)與高效液相色譜法檢測(cè)手段，去除了提取物中無效成分，而且還具有施用劑量小，療效確切等優(yōu)點(diǎn)，不但可以制備成口服制劑，還達(dá)到了靜脈或肌肉注射的水平。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一種具有治療女性雌激素失調(diào)引起的疾病的蓖麻蠶精提物及其制備方法。還包括含有此提取物的所有制劑類型。這些制劑可以用來作為藥物也可以用做具有保健功能的食品。其中蓖麻蠶精提物中蓖麻蠶總甾醇含量為20-75％。
本發(fā)明涉及的蓖麻蠶精提取物是由以下方法制備的將蓖麻蠶精粉，加入2-10倍量的50-90％的乙醇或甲醇溶液浸泡4-24h，水浴回流提取，每次2-6小時(shí)，共提取1-5次。合并乙醇或甲醇液，回收乙醇或甲醇，得棕色浸膏，加入1-3倍熱水，使溶，放冷，再加入0.5-2倍乙酸乙酯或者正丁醇萃取，共提取2-6次，合并并回收乙酸乙酯或者正丁醇，調(diào)PH值至中性，減壓回收溶劑，得棕褐色膏，即為含有總甾醇的蓖麻精提物粗品；將此提取物用1-5倍量的水或10-30％乙醇溶解，上大孔吸附樹脂柱，先用2-5倍柱體積的水洗，再用2-5倍柱體積10-30％的乙醇洗脫，棄洗脫液，繼續(xù)用2-5倍體積40-90％的乙醇洗脫，收集40-90％洗脫液，減壓回收乙醇，噴霧干燥得蓖麻精提物。由上述方法制成的蓖麻精提物，可以制成單方制劑，也可以制成含有上述精提物的復(fù)方制劑。制劑類型包括片劑、緩釋片劑、膠囊劑、緩釋膠囊劑、軟膠囊劑和微丸劑等，還可以是針劑、粉針劑、輸液劑和脂肪乳注射劑。各種劑型是用常規(guī)方法制成，其中精制蓖麻蠶提取物存在狀態(tài)是固體狀或液體狀，給藥方式是口服、皮貼、靜脈內(nèi)或肌肉注射。本發(fā)明的提取方法中浸提使用的乙醇溶液，其PH范圍為3-9。萃取溶劑是正丁醇、環(huán)己烷或乙酸乙脂。大孔吸附樹脂柱包括AB-8，D-16，H-103，NK-107，X-5，D-101、DA-201、CAD-40、SIP系列等市場(chǎng)上流通的各種規(guī)格和型號(hào)。提取蓖麻蠶總甾醇試用的藥材為蓖麻蠶(任何品種)，包括廣西、廣東、湖南、四川等省用木薯、馬桑葉飼養(yǎng)，又稱木薯蠶或馬桑蠶的蓖麻蠶。
實(shí)施例 以下實(shí)施例描述了本發(fā)明，但不應(yīng)將其看作是對(duì)本發(fā)明的限定。
實(shí)施例一將蓖麻蠶粉100g，加入8倍量的80％的乙醇溶液浸泡16h，加入乙醇滲漉到檢測(cè)滲漉液中沒有蓖麻甾醇時(shí)，收集滲漉液，減壓回收乙醇，濃縮滲漉液至藥材重量的2倍，調(diào)PH＝7.0，濃縮液用藥材等量的正丁醇萃取4次，合并萃取液，減壓回收得含有總甾醇的蓖麻蠶粗提物，將此提取物用藥材量3倍量的水溶解，上大孔吸附樹脂柱，先用5倍拄體積的水洗，再用3倍柱體積20％的乙醇洗脫，棄洗脫液，繼續(xù)用5倍柱體積50％的乙醇洗脫，收集50％洗脫液，減壓回收乙醇，噴霧干燥得蓖麻蠶精提物4.5g。本實(shí)驗(yàn)以手術(shù)切除成年雌性大鼠雙側(cè)卵巢為模型，模擬女性絕經(jīng)狀態(tài)，以大鼠子宮指數(shù)及骨代謝為指標(biāo)，探討用本發(fā)明的工藝制備的蓖麻蠶精提物對(duì)更年期綜合征大鼠骨代謝的影響。
實(shí)施例二將蓖麻蠶精粉100g，加入6倍量的90％的乙醇溶液浸泡24h，水浴回流提取，每次2小時(shí)，共提取3次。合并乙醇或甲醇液，回收乙醇或甲醇，得棕色浸膏，加入2倍熱水，使溶，放冷，再加入2倍乙酸乙酯萃取，共提取3次，合并并回收乙酸乙酯，調(diào)PH值至中性，減壓回收溶劑，得棕褐色膏，即為含有總甾醇的蓖麻蠶粗提物；將此提取物用2倍量的20％乙醇溶解，上大孔吸附樹脂柱，先用3倍柱體積的水洗，再用4倍柱體積30％的乙醇洗脫，棄洗脫液，繼續(xù)用5倍體積60％的乙醇洗脫，收集60％洗脫液，減壓回收乙醇，噴霧干燥得蓖麻蠶精提物3.8g。同上實(shí)施例一，以手術(shù)切除成年雌性大鼠雙側(cè)卵巢為模型，以大鼠子宮指數(shù)及骨代謝為指標(biāo)進(jìn)行效用檢測(cè)。
實(shí)施例三將蓖麻蠶精粉100g，加入10倍量的70％甲醇溶液浸泡12h，水浴回流提取，每次2小時(shí)，共提取3次。合并甲醇液，回收甲醇，得棕色浸膏，加入2倍熱水，使溶，放冷，再加入1.5倍乙酸乙酯萃取，共提取3次，合并并回收乙酸乙酯，調(diào)PH值至中性，減壓回收溶劑，得棕褐色膏，即為含有蓖麻蠶總甾醇的蓖麻蠶粗提物；將此提取物用3倍量的水溶解，上大孔吸附樹脂柱，先用4倍柱體積的水洗，再分別用2倍柱體積10％，30％的乙醇洗脫，棄洗脫液，繼續(xù)用4倍體積70％的乙醇洗脫，收集70％洗脫液，減壓回收乙醇，噴霧干燥得蓖麻蠶精提物3.2g。同上實(shí)施例一，以手術(shù)切除成年雌性大鼠雙側(cè)卵巢為模型，以大鼠子宮指數(shù)及骨代謝為指標(biāo)進(jìn)行效用檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)效果通過大鼠實(shí)驗(yàn)對(duì)實(shí)施例一中的蓖麻蠶甾醇精提物進(jìn)行大鼠子宮指數(shù)、骨代謝活性驗(yàn)證。
1.動(dòng)物雌性wistar大白鼠，3月齡，體重(190±20)g，本試驗(yàn)所有動(dòng)物飼養(yǎng)條件一致，室溫調(diào)節(jié)(24±2)℃，自由攝食與飲水，各組飼料與飲用水完全相同。
2.去勢(shì)大鼠模型的制作以35mg/kg戊巴比妥鈉液腹腔給藥麻醉大鼠，腹位固定，并以浸透乙醚的棉球放置動(dòng)物的口鼻部位維持麻醉。然后取最末肋骨下、腋中線和距脊柱外側(cè)約2cm交叉處，剪毛，切開皮膚和背肌約1.5-2cm，切口視野中可見一乳白色發(fā)亮的脂肪團(tuán)，卵巢即包埋其中，以小鑷子輕輕夾住脂肪團(tuán)拉出切口外，分離脂肪團(tuán)，使可見到粉紅色的卵巢。剪取時(shí)，先將卵巢下輸卵管(包括脂肪)用絲線結(jié)扎，再摘除卵巢，術(shù)后順勢(shì)將子宮宮角送回腹腔中。同法摘除另一側(cè)卵巢。術(shù)后第9天，采用陰道涂片法觀察動(dòng)情周期。表現(xiàn)為不出現(xiàn)動(dòng)情前期和動(dòng)情期的雌激素的變化，符合“更年期”表現(xiàn)。
3.模型大鼠子宮指數(shù)的影響將40只雌性wistar去勢(shì)大鼠分成5組，每組8只，分別是B(模型組)、C(高劑量組20mg/kg)、D(低劑量組10mg/kg)、E(DES0.085mg/kg)，另取正常雌性wistar大鼠8只，作為空白對(duì)照A組。服藥8周。末次給藥24h后稱體質(zhì)量并脫頸椎處死，剖腹取出子宮并迅速用電子天平稱其質(zhì)量，計(jì)算子宮指數(shù)(mg子宮質(zhì)量/100g體質(zhì)量)。數(shù)據(jù)處理用SPSS軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分祈，計(jì)算觀察指標(biāo)的均數(shù)與標(biāo)準(zhǔn)差，用t檢驗(yàn)比較組間差異。結(jié)果見表1.
4.模型大鼠骨代謝的影響將40只雌性wistar去勢(shì)大鼠分成5組，每組8只，分別是B(模型組)、C(高劑量組12mg/kg)、D(低劑量組6mg/kg)、E(DES0.085mg/kg)，另取正常雌性wistar大鼠8只，作為空白對(duì)照A組。服藥8周后進(jìn)行骨代謝SPECT成像測(cè)定。骨代謝測(cè)定方法為經(jīng)大鼠尾靜脈注射0.3ml99TcM-MDP，7.4MBq，3小時(shí)后以SPECT儀配低能通用準(zhǔn)直器對(duì)大鼠進(jìn)行伽瑪照像，選擇雙側(cè)股骨進(jìn)行勾畫感興趣區(qū)(ROI)，對(duì)其計(jì)數(shù)，進(jìn)行算術(shù)平均后與體重相除，計(jì)算機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。結(jié)果見表2.
表1.對(duì)大鼠子宮指數(shù)的影響(mg/100g)

注與模型組相比*p＜0.05，**p＜0.01，DES乙烯雌酚表2.對(duì)大鼠骨代謝的影響[(x±s)，n＝8]

注與模型組比較#P＜0.05，與對(duì)照組比較P＜0.05實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明用本發(fā)明制備的蓖麻蠶甾醇精提物對(duì)大鼠子宮指數(shù)、骨代謝的影響極為顯著。其對(duì)更年期綜合征大鼠骨代謝所具有的明顯改善作用是通過抑制骨吸收，促進(jìn)骨形成，防止骨量丟失來發(fā)揮作用的。因此可以開發(fā)成促骨形成和抗骨吸收以及治療女性雌激素失調(diào)而引起的疾病如更年期綜合癥方面的藥物或保健食品。
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1.一種具有治療女性雌激素失調(diào)引起的疾病的蓖麻蠶精提物。其特征在于此蓖麻蠶精提物中蓖麻蠶總甾醇含量為20-75％，還包括含有此提取物的所有制劑類型，制成的制劑可以作為藥物也可以用作具有保健功能的食品。
2.按照權(quán)利要求1所述蓖麻蠶精提物的制備方法，其特征在于將蓖麻蠶干粉，加入2-10倍量的50-90％的乙醇或甲醇溶液浸泡4-24h，水浴回流提取，每次2-6小時(shí)，共提取1-5次。合并乙醇或甲醇液，回收乙醇或甲醇，得棕色浸膏，加入1-3倍熱水，使溶，放冷，再加入0.5-2倍乙酸乙酯或者正丁醇萃取，共提取2-6次，合并并回收乙酸乙酯或者正丁醇，調(diào)PH值至中性，減壓回收溶劑，得棕褐色膏，即為含有總甾醇部分的蓖麻精提物粗品；將此提取物用1-5倍量的水或10-30％乙醇溶解，上大孔吸附樹脂柱，先用2-5倍柱體積的水洗，再用2-5倍柱體積10-30％的乙醇洗脫，棄洗脫液，繼續(xù)用2-5倍體積40-90％的乙醇洗脫，收集40-90％洗脫液，減壓回收乙醇，噴霧干燥得蓖麻蠶精提物。
3.按照權(quán)利要求1中所述的制劑，其中包括以蓖麻蠶精提物為活性成分的單方制劑，也包括含有上述精提物的藥物組合物。
4.按照權(quán)利要求1中所述含有此蓖麻蠶精提物的制劑類型，包括片劑、緩釋片劑、膠囊劑、緩釋膠囊劑、軟膠囊劑和微丸劑等，其劑型還可以是針劑、粉針劑、輸液劑和脂肪乳注射劑及皮膚貼劑。各種劑型是用常規(guī)方法制成，其中精制蓖麻蠶提取物存在狀態(tài)是固體狀或液體狀，給藥方式是口服、皮貼、靜脈內(nèi)或肌肉注射。
5.按照權(quán)利要求2中浸泡及水浴回流使用的乙醇或者甲醇溶液，其PH范圍為3-9。萃取溶劑是正丁醇、環(huán)己烷或乙酸乙酯。
6.按照權(quán)利要求2所述的蓖麻蠶精提物的制備方法，其特征在于使用的是AB-8，D-16，H-103，NK-107，X-5，D-101、DA-201、CAD-40、SIP系列等市場(chǎng)上流通的各種規(guī)格和型號(hào)的大孔吸附樹脂柱。
7.按照權(quán)利要求2中所述提取總蓖麻蠶甾醇用的藥材為任何品種的蓖麻蠶，包括廣西、廣東、湖南、四川等省用木薯、馬桑葉飼養(yǎng)，又稱木薯蠶或馬桑蠶的蓖麻蠶。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種蓖麻蠶精提物及其制備方法，包括含有此精提物的各種制劑類型。蓖麻蠶精提物中蓖麻蠶總甾醇含量為20－75％，可以用來治療女性雌激素失調(diào)而引起的疾病，可以開發(fā)成促骨形成和抗骨吸收以及治療女性雌激素失調(diào)而引起的疾病如更年期綜合癥方面的藥物或保健食品。
文檔編號(hào)A61K35/64GK1660142SQ20041008150
公開日2005年8月31日 申請(qǐng)日期2004年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月17日
發(fā)明者高平, 萬德光, 甘明哲 申請(qǐng)人:成都中醫(yī)藥大學(xué), 四川大學(xué)