專利名稱：一種治療肝炎的藥物組合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療肝炎的藥物組合物，具體地說，是涉及以中藥為原料制備的治療肝炎的藥物組合物，屬中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
肝臟為人體重要的臟腑之一，中醫(yī)理論認(rèn)為，主疏泄和主藏血，是肝的主要生理功能。肝主疏泄，系指肝臟具有舒張、開展、調(diào)達(dá)、宣散、流通以保持全身氣機(jī)宣暢的作用。該功能的正常發(fā)揮，可以調(diào)節(jié)精神情志，使人精神愉快，心情舒暢；又可促進(jìn)消化吸收，協(xié)調(diào)脾胃氣機(jī)升降；還能維持氣血的運(yùn)行，調(diào)節(jié)水液代謝。肝主藏血，是指肝臟又有儲(chǔ)藏血液和調(diào)節(jié)血量的作用。肝所藏之血，是其疏泄功能的物質(zhì)基礎(chǔ)，疏泄又是藏血的功能表現(xiàn)。疏泄的正常，全賴陰血的濡養(yǎng)；血液的運(yùn)行通暢，又離不開肝氣的調(diào)節(jié)。一旦肝失疏泄，氣機(jī)郁滯，則出現(xiàn)肝血瘀阻，脾失健運(yùn)，痰水內(nèi)停，進(jìn)而引起肝體腫大，脅下痙痛，肝臟功能異常等病理改變。
目前，西醫(yī)治療臨床應(yīng)用的“抗肝炎藥”主要有三大類抗病毒藥、免疫調(diào)節(jié)藥和保肝護(hù)肝藥(維生素類藥物、具有解毒功能類藥物、促進(jìn)能量代謝類藥物、促進(jìn)蛋白質(zhì)合成類藥物)。抗病毒藥主要有干擾素類抗病毒藥及核苷酸類抗病毒藥，臨床應(yīng)用主要有干擾素和拉米夫定；免疫調(diào)節(jié)藥主要臨床應(yīng)用的有胸腺肽、香菇多糖等；保肝護(hù)肝藥臨床應(yīng)用的主要有甘草酸二銨(甘利欣)、苦參素等。但由于病毒性肝炎的病原學(xué)治療迄今尚無突破性進(jìn)展，臨床上往往都是針對(duì)肝功能異常癥狀進(jìn)行對(duì)癥治療。
在對(duì)肝炎等造成的肝功能異常的中醫(yī)藥治療中，以清熱化濕、活血化瘀、扶正固本為主要治則。其中，以活血化瘀為主的中藥，可含有藥材丹參、三七等，對(duì)肝炎呈現(xiàn)以下治療特點(diǎn)①恢復(fù)肝功能較好、較快，有明顯的降酶、降濁、降膽紅質(zhì)作用；②回縮肝脾，改善瘀癥；③抗肝纖維化；④促肝細(xì)胞再生。目前已有的中成藥產(chǎn)品基本上都是口服粗制劑，未見有效部位注射液劑型。由于肝臟是人體的解毒器官，許多藥物需經(jīng)肝臟代謝，在肝炎治療中，服用大量的藥物常常加重肝臟的負(fù)擔(dān)，需精制提純，減少服藥用量，而粗制劑90％以上為非有效成分，吸收入體內(nèi)將給肝臟增加極大負(fù)擔(dān)；同時(shí)，臨床上多數(shù)患者因肝炎急性發(fā)作，出現(xiàn)明顯肝臟損害而入院求醫(yī)，此時(shí)病情危篤，變化迅速、病死率高。因此，針對(duì)急性肝功能異?；颊?，急待開發(fā)有效部位或有效成分的制成的口服制劑和注射液制劑，以增效減毒并迅速發(fā)揮治療作用。
現(xiàn)今的含有丹參、三七原料藥物制劑，包括口服制劑和注射劑，如丹參注射液、復(fù)方丹參滴丸等在內(nèi)，均未經(jīng)嚴(yán)格的提取純化處理，有效部位含量較低，且報(bào)道的功能主治與適應(yīng)癥用于治療心腦血管。目前，已有丹參和三七分別注射或含有兩味原料藥的口服或注射治療乙肝的報(bào)道(巫善明等，參三七注射液治療血瘀型慢性肝炎及其血液流變學(xué)的初步觀察，上海中醫(yī)藥雜志1983；8，14；童紹宏，丹參穴位注射治療遷、慢性肝炎39例近期療效觀察，福建醫(yī)學(xué)雜志1980；1，50；胡智明.胡金珠，乙肝寶沖劑的研制與療效觀察，現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，1996年03期；徐立明.，“黃芪解毒活血湯”治療慢性乙肝107例，江蘇中醫(yī)，2000年10期；柴平清肝湯治療甲型肝炎146例，中華實(shí)用中西醫(yī)雜志，2002年01期)，但由于中藥成分復(fù)雜，藥材在制劑中發(fā)揮的功效不同，且中藥注射劑中將單味藥物及提取物混合使用，可能產(chǎn)生不可預(yù)知的藥效和毒性，由于中藥用藥的特殊性，藥物選擇不同，用量不同，服用途徑不同，藥效也不同，因此，至今未見有丹參、三七合用注射治療乙肝的報(bào)道，也沒有原料丹參、三七配伍使用治療肝炎的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種治療肝炎藥物組合物，具體地，是一種以中藥材丹參、三七為原料制備的治療肝炎的藥物組合物，本發(fā)明還提供了該藥物組合物的制備方法和用途。
本發(fā)明提供了一種治療肝炎的藥物組合物，它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑丹參3-10份、三七1-3份。
其中，丹參為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖；三七為五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根。
更進(jìn)一步地，它是由下述重量配比的原料制備而所的藥劑丹參6份、三七1份。
該藥物組合物是由藥材丹參、三七的水提取物或醇提取物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。
所述的藥劑是口服制劑或注射劑。
進(jìn)一步地，所述的口服制劑是膠囊劑、片劑、丸劑、顆粒劑、散劑；所述的注射劑是注射水針劑、靜滴劑型、粉針劑。
其中，所述的注射劑每毫升含丹參水溶性總酚3.24～3.36mg、總皂苷1.69～1.76mg、丹參素0.83～0.91mg、原兒茶醛0.23～0.25mg、人參皂苷Rg1 0.63～0.69mg。
其中，該藥物組合物的HPLC指紋圖譜如圖1所示，由4個(gè)特征峰組成，其中色譜條件為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-乙腈-1.67％甲酸溶液(體積比23∶7∶70)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm。
進(jìn)一步地，所述的4個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD均小于10.0％，其中，1號(hào)峰平均相對(duì)保留時(shí)間RT0.134％，2號(hào)峰RT0.184、3號(hào)峰RT0.724、4號(hào)峰1.000。
本發(fā)明還提供了該藥物組合物的制備方法，包括下列步驟a、按各重量配比稱取原料丹參3-10份、三七1-3份；b、丹參提取物的制備取藥材丹參，加水煎煮提取，過濾，濾液濃縮，干燥，干燥浸膏粉用50-95％乙醇作溶劑，滲漉法提取，得滲漉液，加入活性炭，加熱回流提取，濾過，回收乙醇，加水溶解，水溶液通過D101大孔吸附樹脂，用30-85％乙醇洗脫，乙醇洗脫液回收乙醇即得丹參提取物；c、三七提取物的制備取藥材三七，用35-95％乙醇為溶劑，滲漉法提取，得滲漉液，將滲漉液中加入活性炭，回流提取，濾過，濾液減壓回收乙醇，得醇浸膏，將醇浸膏加水溶解，濾過，水溶液通過D101大孔吸附樹脂柱，再用30-90％乙醇洗脫有效部位，得乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，即得三七提取物；d、將步驟b制備的丹參提取物、步驟c制備的三七提取物混合，加水溶解，加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分，制備成藥學(xué)上常用的制劑。
其中，d步驟是將步驟b、步驟c制備的丹參提取物、三七提取物混合，加水溶解，加入藥學(xué)上常用的口服制劑常用輔料得本發(fā)明藥物組合物口服制劑；或步驟d是將步驟b、步驟c制備的丹參提取物、三七提取物混合，加水溶解，加入藥學(xué)上常用的注射劑常用附加劑，調(diào)pH值為5.5～6.5，即得本發(fā)明藥物組合物注射劑。
本發(fā)明還提供了各重量配比的原料在制備治療急、慢性肝炎的藥物中的用途。
進(jìn)一步地，各重量配比的原料在制備口服治療急、慢性肝炎的藥物中的用途。
進(jìn)一步地，各重量配比的原料在制備注射治療急、慢性肝炎的藥物中的用途。
更進(jìn)一步地，各重量配比的原料在制備靜脈注射治療急、慢性肝炎的藥物中的用途。
本發(fā)明藥物組合物原料配方基于中醫(yī)藥理論指導(dǎo)，選藥合理、精當(dāng)，方中丹參，味苦，微寒，無毒，具有寒熱積聚，破癥除瘕，止煩滿，益氣功效，祛瘀逐邪而不易耗傷正氣，并可促進(jìn)營(yíng)血新生，宜于久服，且不易引起不良反應(yīng)，現(xiàn)代研究表明丹參不僅對(duì)心腦血管、微循環(huán)等具有多方面藥理作用，并有較好的降血脂作用，對(duì)于肝臟，能保護(hù)多種原因造成的肝損傷，還有抗肝毒作用；對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝硬變有防治作用，亦可促進(jìn)細(xì)胞再生，抑制肝纖維增生等，故方中用作君藥。三七，性味甘、微苦而偏濕。主歸肝經(jīng)，兼有補(bǔ)氣養(yǎng)血之功(高等教育出版社，面向21世紀(jì)課程教材《中藥學(xué)》)，現(xiàn)代研究表明，三七可降血脂，促進(jìn)血細(xì)胞生成，鎮(zhèn)痛；抗肝損傷，改善肝臟血液循環(huán)、改善肝功能慢性指標(biāo)，并有增強(qiáng)免疫功能及強(qiáng)壯作用等。三七用以協(xié)助丹參的活血化瘀，消癥止痛之力，并有扶正氣，益氣血之效，使全方消而不傷，故作為輔藥。兩原料藥配比使用，發(fā)揮協(xié)同增效的作用。
由于單味中藥未知成分太多，同時(shí)部分有效成分的性質(zhì)也不穩(wěn)定，將中藥混合制備的注射劑容易發(fā)生化學(xué)成分的氧化聚合，降低藥物療效，甚至產(chǎn)生沉淀，臨床出現(xiàn)諸多不良反應(yīng)，甚至造成患者死亡。通過本發(fā)明藥物組合物原料的提取、精制方法，制備得到的本發(fā)明藥物組合物治療肝炎，提取純化有效部位，原料用量少，服用方便。注射劑溶液不產(chǎn)生沉淀，質(zhì)量穩(wěn)定；靜脈注射，無副作用，安全，且能克服了水針劑的缺陷。且本發(fā)明藥物組合物采用指紋圖譜控制注射劑的質(zhì)量，使本發(fā)明藥物組合物可控、穩(wěn)定。
綜上所述，本發(fā)明藥物以丹參、三七為原料制備的制劑，藥材中的提取物丹參水溶性總酚、三七總皂苷混合既減少了用藥量，同時(shí)除去雜質(zhì)，用藥量更加準(zhǔn)確，治療肝炎療效好、安全、可控、穩(wěn)定，為臨床提供了一種新的治療肝炎藥物的選擇。
顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。


圖1本發(fā)明藥物組合物HPLC指紋圖譜，其中，1號(hào)峰保留時(shí)間RT為3.950min、2號(hào)峰保留時(shí)間RT5.425min、3號(hào)峰保留時(shí)間RT21.892min、4號(hào)峰保留時(shí)間30.533min。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 本發(fā)明藥物組合物靜滴劑型的制備a、取丹參1000g，切厚片，加8倍量水煎煮提取4次，每次煎煮1.5小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度約1.05(60℃熱測(cè))的清膏，噴霧干燥，得浸膏粉。取浸膏粉與3倍量硅藻土混勻，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄I O)，用92％乙醇作溶劑，浸漬4小時(shí)后，以每分鐘3ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液15000ml，加活性炭50g，加熱回流60分鐘，放冷，濾過，濾液減壓回收乙醇至干，加水2500ml使溶解，靜置24小時(shí)，濾過，濾液通過已預(yù)處理好的D101大孔吸附樹脂柱，加水5000ml洗脫，棄去水洗液，繼用50％乙醇20000ml洗脫，收集50％的乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，即得丹參提取物，該丹參提取物為丹參水溶性總酚。
其中水煎煮提取工藝丹參水溶性總酚、丹參素、原兒茶醛轉(zhuǎn)移率均在95％以上，干膏收率約63％，干膏中丹參總酚酸含量約5.5％；乙醇滲漉預(yù)除雜工藝丹參水溶性總酚、丹參素、原兒茶醛轉(zhuǎn)移率均在85％以上，干膏收率降至約10％，干膏中丹參水溶性總酚含量約35％；大孔吸附樹脂純化后所得提取物收率約為3.0％，提取物中水溶性總酚含量約為85％，丹參素含量約為25％，原兒茶醛含量約為8％，已經(jīng)達(dá)到靜脈用注射劑新藥的要求。
b、三七提取純化取三七粗粉1000g，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄I Q)，用9倍量65％乙醇作溶劑，浸漬過夜，以每分鐘5ml的速度滲漉，收集滲漉液，加活性炭30g，加熱回流60分鐘，放冷，濾過，濾液減壓回收乙醇，加水2500ml使溶解，濾過，濾液通過已預(yù)處理好的D101大孔吸附樹脂柱，用水洗滌至洗滌液近無色(約1200ml)，棄去洗液，繼用藥材11倍量的50％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，即得三七提取物，該三七提取物為三七總皂苷。
其中乙醇滲漉提取工藝三七總皂苷、人參皂苷Rg1轉(zhuǎn)移率均在90％以上，浸出物收率約20％，浸出物中三七總皂苷含量約為45％；大孔吸附樹脂純化后所得的三七提取物收率約為8.5％，三七總皂苷含量在90％以上，已經(jīng)達(dá)到靜脈用注射劑的要求。
c、取丹參提取物3.3g、三七提取物1.7g，加注射用水400ml使溶解，備用；另取注射用氯化鈉9g，亞硫酸氫鈉0.2g，加注射用水100ml使溶解，加熱煮沸，加活性炭0.2g，攪勻，繼續(xù)煮沸15分鐘，濾過，濾液與上述藥液混勻，加注射用水至1000ml，用10％的氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至6.0，超濾至澄明，分裝于100ml輸液瓶中，軋蓋，滅菌，檢查澄明度，包裝，即得。
實(shí)施例2 本發(fā)明藥物粉針劑的制備方法a、取丹參1000g，切厚片，加8倍量水煎煮提取4次，每次煎煮1.5小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度約1.05(60℃熱測(cè))的清膏，噴霧干燥，得浸膏粉。取浸膏粉與3倍量硅藻土混勻，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄I O)，用92％乙醇作溶劑，浸漬4小時(shí)后，以每分鐘3ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液15000ml，加活性炭50g，加熱回流60分鐘，放冷，濾過，濾液減壓回收乙醇至干，加水2500ml使溶解，靜置24小時(shí)，濾過，濾液通過已預(yù)處理好的D101大孔吸附樹脂柱，加水5000ml洗脫，棄去水洗液，繼用50％乙醇20000ml洗脫，收集50％的乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，即得丹參提取物，該丹參提取物為丹參水溶性總酚。
其中水煎煮提取工藝丹參水溶性總酚、丹參素、原兒茶醛轉(zhuǎn)移率均在95％以上，干膏收率約63％，干膏中丹參總酚酸含量約5.5％；乙醇滲漉預(yù)除雜工藝丹參水溶性總酚、丹參素、原兒茶醛轉(zhuǎn)移率均在85％以上，干膏收率降至約10％，干膏中丹參水溶性總酚含量約35％；大孔吸附樹脂純化后所得提取物收率約為3.0％，提取物中水溶性總酚含量約為85％，丹參素含量約為25％，原兒茶醛含量約為8％，已經(jīng)達(dá)到粉針劑新藥的要求。
b、三七提取純化取三七粗粉1000g，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄I Q)，用9倍量65％乙醇作溶劑，浸漬過夜，以每分鐘5ml的速度滲漉，收集滲漉液，加活性炭30g，加熱回流60分鐘，放冷，濾過，濾液減壓回收乙醇，加水2500ml使溶解，濾過，濾液通過已預(yù)處理好的D101大孔吸附樹脂柱，用水洗滌至洗滌液近無色(約1200ml)，棄去洗液，繼用藥材11倍量的50％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，即得三七提取物，該三七提取物為三七總皂苷。
其中乙醇滲漉提取工藝三七總皂苷、人參皂苷Rg1轉(zhuǎn)移率均在90％以上，浸出物收率約20％，浸出物中三七總皂苷含量約為45％；大孔吸附樹脂純化后所得的三七提取物收率約為8.5％，三七總皂苷含量在90％以上，已經(jīng)達(dá)到粉針劑新藥的要求。
c、取丹參提取物3.3g、三七提取物1.7g，加注射用水400ml使溶解，備用；另注射用輔料100-200g置無菌容器中，加注射用水450ml，攪拌使溶解，與上述藥液混勻，加注射用水補(bǔ)足至1000ml，輕輕攪拌至全部溶解，在正壓條件下，用兩個(gè)串連的微孔濾器過濾藥液，在無菌條件下經(jīng)過噴霧干燥，制成丹七無菌粉末，分裝于瓶中，加塞，壓鋁蓋，封瓶，滅菌，包裝，即得。
實(shí)施例3 本發(fā)明藥物口服制劑的制備a、取丹參1000g，切厚片，加8倍量水煎煮提取4次，每次煎煮1.5小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度約1.05(60℃熱測(cè))的清膏，噴霧干燥，得浸膏粉。取浸膏粉與3倍量硅藻土混勻，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄I O)，用92％乙醇作溶劑，浸漬4小時(shí)后，以每分鐘3ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液15000ml，加活性炭50g，加熱回流60分鐘，放冷，濾過，濾液減壓回收乙醇至干，加水2500ml使溶解，靜置24小時(shí)，濾過，濾液通過已預(yù)處理好的D101大孔吸附樹脂柱，加水5000ml洗脫，棄去水洗液，繼用50％乙醇20000ml洗脫，收集50％的乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，即得丹參提取物。
其中水煎煮提取工藝丹參水溶性總酚、丹參素、原兒茶醛轉(zhuǎn)移率均在95％以上，干膏收率約63％，干膏中丹參總酚酸含量約5.5％；乙醇滲漉預(yù)除雜工藝丹參水溶性總酚、丹參素、原兒茶醛轉(zhuǎn)移率均在85％以上，干膏收率降至約10％，干膏中丹參水溶性總酚含量約35％；大孔吸附樹脂純化后所得提取物收率約為3.0％，提取物中水溶性總酚含量約為85％，丹參素含量約為25％，原兒茶醛含量約為8％，已經(jīng)達(dá)到粉針劑新藥的要求。
b、三七提取純化取三七粗粉1000g，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄I Q)，用9倍量65％乙醇作溶劑，浸漬過夜，以每分鐘5ml的速度滲漉，收集滲漉液，加活性炭30g，加熱回流60分鐘，放冷，濾過，濾液減壓回收乙醇，加水2500ml使溶解，濾過，濾液通過已預(yù)處理好的D101大孔吸附樹脂柱，用水洗滌至洗滌液近無色(約1200ml)，棄去洗液，繼用藥材11倍量的50％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，即得三七提取物。
其中乙醇滲漉提取工藝三七總皂苷、人參皂苷Rg1轉(zhuǎn)移率均在90％以上，浸出物收率約20％，浸出物中三七總皂苷含量約為45％；大孔吸附樹脂純化后所得的三七提取物收率約為8.5％，三七總皂苷含量在90％以上，已經(jīng)達(dá)到粉針劑新藥的要求；c、取丹參提取物3.3g、三七提取物1.7g，加水300ml使溶解，備用；另口服制劑用輔料100-200g置無菌容器中，加水400ml，攪拌使溶解，與上述藥液混勻，加水補(bǔ)足至1000ml，輕輕攪拌至全部溶解，濃縮，制粒，干燥。制成丹七片劑、顆粒劑或膠囊劑，分裝，滅菌。包裝，即得。
實(shí)施例4 本發(fā)明注射劑的制備按實(shí)施例1的方法，取藥材丹參4000g，三七400g，制備所得的丹參提取物13g，三七提取物1g，制備成水針劑。
實(shí)施例5 本發(fā)明注射劑的制備按實(shí)施例1的方法，取藥材丹參3000g，三七1000g，制備所得的丹參提取物9.8g，三七提取物1.8g，制備成水針劑。
實(shí)施例6 本發(fā)明注射劑的制備按實(shí)施例1的方法，取藥材丹參5000g，三七2000g，制備所得的丹參提取物16.6g，三七提取物3.5g，制備成水針劑。
實(shí)施例7 本發(fā)明藥物的HPLC定量控制方法取實(shí)施例1～3制備的本發(fā)明藥物組合物，照高效液相色譜法測(cè)定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-乙腈-1.67％甲酸溶液(體積比23∶7∶70)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm。其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜如附圖1所示。
其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相對(duì)保留時(shí)間依次為0.134(1)，0.184(2)，0.724(3)，1.000(S)，其相對(duì)偏差不得超過10％。
實(shí)施例8 本發(fā)明藥物定量控制方法①水溶性總酚◆儀器與試藥島津UV-2501紫外分光光度儀；試劑試藥均為分析純；丹參素鈉對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所(批號(hào)0855-200102)。
◆分析方法丹七注射液樣品以水稀釋，三氯化鐵和鐵氰化鉀混合溶液顯色，在770nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以丹參素為對(duì)照，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。
◆方法學(xué)考察經(jīng)精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性及加樣回收試驗(yàn)確證該方法可行。
◆測(cè)定結(jié)果見表1。
表1丹七注射液水溶性總酚測(cè)定結(jié)果

②總皂苷◆儀器與試藥島津UV-2501紫外分光光度儀；試劑試藥均為分析純；人參皂苷Rg1對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(批號(hào)0703-200015)。
◆分析方法丹七注射液以正丁醇提取，乙醇溶解稀釋，香草醛-高氯酸顯色，在551nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以人參皂苷Rg1為對(duì)照，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。
◆方法學(xué)考察經(jīng)精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性及加樣回收試驗(yàn)確證該方法可行。
◆測(cè)定結(jié)果見表2。
表2丹七注射液總皂苷測(cè)定結(jié)果

③丹參素及原兒茶醛◆儀器與試藥島津LC-10A高效液相色譜儀，SPD-10AV紫外檢測(cè)器。流動(dòng)相中的甲醇為色譜純，其他試劑試藥均為分析純。丹參素鈉、原兒茶醛對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(批號(hào)分別為0855-200102，0810-200004)。
◆分析方法丹七注射液加水稀釋作為供試品溶液，HPLC法測(cè)定。色譜柱選用Shimpack CLC-ODS柱；流動(dòng)相為甲醇-0.5％冰醋酸溶液(11∶89)；檢測(cè)波長(zhǎng)280nm；外標(biāo)法計(jì)算含量。
◆方法學(xué)考察經(jīng)精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性及加樣回收試驗(yàn)確證該方法可行。
◆測(cè)定結(jié)果見表3。
表3丹七注射液丹參素與原兒茶醛測(cè)定結(jié)果

④人參皂苷Rg1◆儀器與試藥島津LC-10A高效液相色譜儀，SPD-10AV紫外檢測(cè)器。人參皂苷Rg1對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(批號(hào)0703-200015)。其高效液相色譜主峰單一，歸一化法測(cè)定純度為99.8％。
◆分析方法丹七注射液直接作為供試品溶液，HPLC法測(cè)定。色譜柱色譜柱選用辛烷基硅烷鍵合硅膠柱；流動(dòng)相選用乙腈-0.05％磷酸溶液(19∶81)；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；外標(biāo)法計(jì)算含量。
◆方法學(xué)考察經(jīng)精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性及加樣回收試驗(yàn)確證該方法可行。
測(cè)定結(jié)果見表4。
表4丹七注射液人參皂苷Rg1測(cè)定結(jié)果

丹參與三七均是原料藥物中的有效成分，因此，同時(shí)對(duì)兩味原料藥中的成分進(jìn)行質(zhì)量控制，可控性強(qiáng)，質(zhì)量更加穩(wěn)定、可控。
以下通過藥效學(xué)試驗(yàn)證明本發(fā)明的有益效果。
實(shí)驗(yàn)例1 抗急性肝損傷模型試驗(yàn)對(duì)CCL4所致大鼠急性肝損傷模型，本發(fā)明藥物注射液17.0mg/kg能對(duì)ALT(丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶)值升高顯著和AST(天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶)值升高有非常顯著的降低作用(P＜0.001、P＜0.01)；8.5mg/kg能非常顯著的降低ALT值(P＜0.01)。本發(fā)明藥物注射液4.2、8.5、17.0mg/kg對(duì)損傷肝細(xì)胞有一定的恢復(fù)作用，但無顯著意義(P＞0.05)。本發(fā)明藥物口服制劑(實(shí)施例3制備)21.0mg/kg能對(duì)ALT值升高有極顯著和AST值升高有非常顯著的降低作用(P＜0.001、P＜0.01)；10.5mg/kg能非常顯著的降低ALT值(P＜0.01)。本發(fā)明藥物口服制劑5.2、10.5、21.0mg/kg對(duì)損傷肝細(xì)胞有一定的恢復(fù)作用，但無顯著意義(P＞0.05)。
表5本發(fā)明藥物注射液對(duì)CCL4所致大鼠急性肝損傷模型的影響

注各給藥組與模型組比較*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001模型組與正常對(duì)照組比較▲▲▲P＜0.001(雙側(cè)t檢驗(yàn))
從上表可知對(duì)CCL4所致大鼠急性肝損傷模型，本發(fā)明藥物注射液17.0mg/kg能對(duì)ALT值升高有極顯著和AST值升高有非常顯著的降低作用(P＜0.001、P＜0.01)；8.5mg/kg能非常顯著的降低ALT值(P＜0.01)。本發(fā)明藥物注射液4.2、8.5、17.0mg/kg對(duì)損傷肝細(xì)胞有一定的恢復(fù)作用，但無顯著意義(P＞0.05)。
對(duì)CCL4所致小鼠急性肝損傷模型，本發(fā)明藥物注射液17.0mg/kg能極顯著的降低ALT、AST值(P＜0.001、P＜0.001)；8.5mg/kg能非常顯著的降低ALT、AST值(P＜0.01)；4.2mg/kg能顯著的降低ALP(堿性磷酸酶)值(P＜0.05)。4.2、8.5、17.0mg/kg對(duì)損傷肝細(xì)胞有一定的恢復(fù)作用，但無顯著意義(P＞0.05)。本發(fā)明藥物口服制劑21.0mg/kg能極顯著的降低ALT、AST值(P＜0.001、P＜0.001)；10.5mg/kg能非常顯著的降低ALT、AST值(P＜0.01)；5.2mg/kg能顯著的降低ALP值(P＜0.05)。5.2、10.5、21.0mg/kg對(duì)損傷肝細(xì)胞有一定的恢復(fù)作用，但無顯著意義(P＞0.05)。
表6本發(fā)明藥物注射液對(duì)CCL4所致小鼠急性肝損傷模型的影響

注各給藥組與模型組比較*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001模型組與正常對(duì)照組比較▲▲▲P＜0.001(雙側(cè)t檢驗(yàn))對(duì)CCL4所致小鼠急性肝損傷模型，本發(fā)明藥物注射液17.0mg/kg能極顯著的降低ALT、AST值(P＜0.001、P＜0.001)；8.5mg/kg能非常顯著的降低ALT、AST值(P＜0.01)；4.2mg/kg能顯著的降低ALP值(P＜0.05)。4.2、8.5、17.0mg/kg對(duì)損傷肝細(xì)胞有一定的恢復(fù)作用，但無顯著意義(P＞0.05)。
從以上量效關(guān)系試驗(yàn)可以看出高、中劑量組比低劑量組作用明顯。
對(duì)酒精所致小鼠急性肝損傷模型，本發(fā)明藥物注射液17.0mg/kg有非常顯著和極顯著的降低ALT和TB值作用(P＜0.01，P＜0.001)；8.5mg/kg有顯著的降低ALT值作用(P＜0.05)。本發(fā)明藥物口服制劑21.0mg/kg有非常顯著和極顯著的降低ALT和TB值作用(P＜0.01，P＜0.001)；10.5mg/kg有顯著的降低ALT值作用(P＜0.05)。
表7本發(fā)明藥物注射液抗酒精所致小鼠急性肝損傷模型試驗(yàn)

注各給藥組與模型組比較*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001模型組與正常對(duì)照組比較▲▲▲P＜0.001(雙側(cè)t檢驗(yàn))對(duì)酒精所致小鼠急性肝損傷模型，本發(fā)明藥物注射液17.0mg/kg有非常顯著和極顯著的降低ALT和TB值作用(P＜0.01，P＜0.001)；8.5mg/kg有顯著的降低ALT值作用(P＜0.05)。
對(duì)TAA(硫代乙酰胺)所致大鼠急性肝損傷模型，本發(fā)明藥物注射液17.0mg/kg能顯著降低TBil值(P＜0.05)；8.5mg/kg能顯著降低ALT值(P＜0.05)；4.2mg/kg對(duì)ALT、AST和TBil均有顯著的降低作用(P＜0.05)。4.2、8.5、17.0mg/kg均對(duì)損傷肝細(xì)胞有一定的恢復(fù)作用，但無顯著意義(P＞0.05)。本發(fā)明藥物口服制劑21.0mg/kg能顯著降低Tbil(總膽紅素)值(P＜0.05)；10.5mg/kg能顯著降低ALT值(P＜0.05)；5.2mg/kg對(duì)ALT、AST和TBil均有顯著的降低作用(P＜0.05)。5.2、10.5、21.0mg/kg均對(duì)損傷肝細(xì)胞有一定的恢復(fù)作用，但無顯著意義(P＞0.05)。
對(duì)D-GLAN(D-氨基半乳糖胺)所致大鼠急性肝損傷模型，本發(fā)明藥物注射液17.0mg/kg能非常顯著的降低ALT值(P＜0.01)、顯著降低AST值(P＜0.025)；8.5mg/kg有顯著降低ALT值作用(P＜0.05、P＜0.025)。8.5mg/kg對(duì)損傷肝細(xì)胞有顯著的恢復(fù)作用(P＜0.05)；4.2、17.0mg/kg對(duì)損傷肝細(xì)胞有一定的恢復(fù)作用，但無顯著意義(P＞0.05)。本發(fā)明藥物口服制劑21.0mg/kg能非常顯著的降低ALT值(P＜0.01)、顯著降低AST值(P＜0.025)；10.5mg/kg有顯著降低ALT值作用(P＜0.05、P＜0.025)。10.5mg/kg對(duì)損傷肝細(xì)胞有顯著的恢復(fù)作用(P＜0.05)；5.2、21.0mg/kg對(duì)損傷肝細(xì)胞有一定的恢復(fù)作用，但無顯著意義(P＞0.05)。
對(duì)D-GLAN所致小鼠急性肝損傷模型，本發(fā)明藥物注射液17.0mg/kg有顯著和極顯著降低ALT、ALP值作用(P＜0.025、P＜0.001)；8.5mg/kg有顯著和非常顯著的降低AST、ALT、ALP值作用(P＜0.01、P＜0.05、P＜0.01)；4.2mg/kg有顯著和極顯著的降低ALT、ALP作用(P＜0.025、P＜0.001)。4.2、8.5、17.0mg/kg對(duì)損傷肝細(xì)胞有一定的恢復(fù)作用，但無顯著意義(P＞0.05)。本發(fā)明藥物口服制劑21.0mg/kg有顯著和極顯著降低ALT、ALP值作用(P＜0.025、P＜0.001)；10.5mg/kg有顯著和非常顯著的降低AST、ALT、ALP值作用(P＜0.01、P＜0.05、P＜0.01)；5.2mg/kg有顯著和極顯著的降低ALT、ALP作用(P＜0.025、P＜0.001)。5.2、10.5、21.0mg/kg對(duì)損傷肝細(xì)胞有一定的恢復(fù)作用，但無顯著意義(P＞0.05)。
實(shí)驗(yàn)例2 抗免疫性肝損傷模型試驗(yàn)對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素造成的小鼠免疫性肝損傷模型，本發(fā)明藥物注射液17.0mg/kg有非常顯著降低ALT作用(P＜0.01)；8.5mg/kg有顯著降低ALT、AST作用(P＜0.05)。17.0mg/kg對(duì)肝細(xì)胞壞死有明顯降低作用(P＜0.05)；能顯著增加肝細(xì)胞增生(P＜0.05)；8.5mg/kg對(duì)肝細(xì)胞變性有極顯著改善作用(P＜0.001)；4.2mg/kg能極顯著改善肝細(xì)胞變性、壞死(P＜0.001)；能顯著改善肝細(xì)胞的炎性病變(P＜0.05)；能極顯著增加肝細(xì)胞增生(P＜0.001)。本發(fā)明藥物口服制劑21.0mg/kg有非常顯著降低ALT作用(P＜0.01)；10.5mg/kg有顯著降低ALT、AST作用(P＜0.05)。21.0mg/kg對(duì)肝細(xì)胞壞死有明顯降低作用(P＜0.05)；能顯著增加肝細(xì)胞增生(P＜0.05)；10.5mg/kg對(duì)肝細(xì)胞變性有極顯著改善作用(P＜0.001)；5.2mg/kg能極顯著改善肝細(xì)胞變性、壞死(P＜0.001)；能顯著改善肝細(xì)胞的炎性病變(P＜0.05)；能極顯著增加肝細(xì)胞增生(P＜0.001)。
實(shí)驗(yàn)例3 退黃試驗(yàn)對(duì)-萘異硫氰酸酯引起的大鼠阻塞性黃疸模型，本發(fā)明藥物注射液17.0mg/kg有顯著降低DBil、ALT和ALP值作用(P＜0.05)；8.5mg/kg能顯著降低ALT和ALP值(P＜0.05)；4.2mg/kg能極顯著降低ALT(P＜0.001)、非常顯著的降低ALP(P＜0.01)。本發(fā)明藥物口服制劑21.0mg/kg有顯著降低DBil、ALT和ALP值作用(P＜0.05)；10.5mg/kg能顯著降低ALT和ALP值(P＜0.05)；5.2mg/kg能極顯著降低ALT(P＜0.001)、非常顯著的降低ALP(P＜0.01)。
實(shí)驗(yàn)例4 免疫功能試驗(yàn)本發(fā)明藥物注射液17.0mg/kg能非常顯著和4.2mg/kg能顯著的增強(qiáng)小鼠單核細(xì)胞吞噬異物的作用(P＜0.01、P＜0.05)，17.0、8.5、4.2mg/kg對(duì)D-GALN所造成的急性肝損傷模型小鼠分別有極顯著、非常顯著和顯著增強(qiáng)其單核細(xì)胞吞噬異物的作用(P＜0.001、P＜0.01、P＜0.05)，具有增強(qiáng)免疫作用。17.0mg/kg有顯著降低ALT值作用(P＜0.025)。
本發(fā)明藥物口服制劑21.0mg/kg能非常顯著和5.2mg/kg能顯著的增強(qiáng)小鼠單核細(xì)胞吞噬異物的作用(P＜0.01、P＜0.05)，21.0、10.5、5.2mg/kg對(duì)D-GALN所造成的急性肝損傷模型小鼠分別有極顯著、非常顯著和顯著增強(qiáng)其單核細(xì)胞吞噬異物的作用(P＜0.001、P＜0.01、P＜0.05)，具有增強(qiáng)免疫作用。21.0mg/kg有顯著降低ALT值作用(P＜0.025)。
實(shí)驗(yàn)例5 抗應(yīng)激能力試驗(yàn)本發(fā)明藥物注射液8.5、17.0、34.0mg/kg對(duì)正常小鼠在常壓缺氧狀態(tài)下的存活時(shí)間有一定的提高的作用，但無顯著性意義(P＞0.05)。34.0、17.0mg/kg能非常顯著地提高小鼠在冰水中存活時(shí)間(P＜0.01)。
本發(fā)明藥物口服制劑10.5、21.0、42.0mg/kg對(duì)正常小鼠在常壓缺氧狀態(tài)下的存活時(shí)間有一定的提高的作用，但無顯著性意義(P＞0.05)。42.0、21.0mg/kg能非常顯著地提高小鼠在冰水中存活時(shí)間(P＜0.01)。
實(shí)驗(yàn)例6 改善血液流變學(xué)試驗(yàn)對(duì)腎上腺素造成的大鼠肝氣郁結(jié)及寒凝氣滯模型，本發(fā)明藥物注射液50.0mg/kg有極顯著的降低全血粘度作用(P＜0.001)；對(duì)全血還原粘度和全血相對(duì)指數(shù)有極顯著、非常顯著的增高作用(P＜0.001、P＜0.01)25.0、12.5mg/kg均有極顯著、非常顯著的降低全血粘度作用(P＜0.01、P＜0.001)；對(duì)全血還原粘度和全血相對(duì)指數(shù)有非常顯著、顯著的增高作用(P＜0.01、P＜0.05)。25.0mg/kg能極顯著的和12.5mg/kg能顯著降低全血纖維蛋白(P＜0.001、P＜0.05)。本發(fā)明藥物口服制劑60.0mg/kg有極顯著的降低全血粘度作用(P＜0.001)；對(duì)全血還原粘度和全血相對(duì)指數(shù)有極顯著、非常顯著的增高作用(P＜0.001、P＜0.01)30.0、15.0mg/kg均有極顯著、非常顯著的降低全血粘度作用(P＜0.01、P＜0.001)；對(duì)全血還原粘度和全血相對(duì)指數(shù)有非常顯著、顯著的增高作用(P＜0.01、P＜0.05)。30.0mg/kg能極顯著的和15.0mg/kg能顯著降低全血纖維蛋白(P＜0.001、P＜0.05)。
實(shí)驗(yàn)例7 改善微循環(huán)試驗(yàn)本發(fā)明藥物注射液50.0、25.0mg/kg均能顯著地?cái)U(kuò)張微血管管徑(P＜0.05)；均能顯著地對(duì)抗腎上腺素引起的微血管管徑縮小(P＜0.05)。12.5、25.0、50.0mg/kg均能顯著、非常顯著和極顯著地對(duì)抗腎上腺素對(duì)血液流態(tài)的影響，具有改善微循環(huán)的作用(P＜0.05、P＜0.01、P＜0.001)。
本發(fā)明藥物口服制劑60.0、30.0mg/kg均能顯著地?cái)U(kuò)張微血管管徑(P＜0.05)；均能顯著地對(duì)抗腎上腺素引起的微血管管徑縮小(P＜0.05)。15.0、30.0、60.0mg/kg均能顯著、非常顯著和極顯著地對(duì)抗腎上腺素對(duì)血液流態(tài)的影響，具有改善微循環(huán)的作用(P＜0.05、P＜0.01、P＜0.001)。
實(shí)驗(yàn)例8 修復(fù)損傷肝細(xì)胞及促進(jìn)肝細(xì)胞再生對(duì)D-GLAN所致大鼠急性肝損傷模型，本發(fā)明藥物注射液8.5mg/kg對(duì)損傷肝細(xì)胞有顯著的恢復(fù)作用(P＜0.05)；對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素造成的小鼠免疫性肝損傷模型，本發(fā)明藥物注射液17.0mg/kg有明顯降低肝細(xì)胞壞死作用(P＜0.05)，8.5mg/kg有極顯著改善肝細(xì)胞變性作用(P＜0.001)，4.2mg/kg能極顯著改善肝細(xì)胞變性、壞死作用(P＜0.001)，還能顯著改善肝細(xì)胞的炎性病變作用(P＜0.05)。同時(shí)，本發(fā)明藥物注射液17.0mg/kg和4.2mg/kg能顯著、極顯著促進(jìn)肝細(xì)胞增生作用(P＜0.05、P＜0.001)。本發(fā)明藥物口服制劑10.5mg/kg對(duì)損傷肝細(xì)胞有顯著的恢復(fù)作用(P＜0.05)；對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素造成的小鼠免疫性肝損傷模型，本發(fā)明藥物注射液21.0mg/kg有明顯降低肝細(xì)胞壞死作用(P＜0.05)，10.5mg/kg有極顯著改善肝細(xì)胞變性作用(P＜0.001)，5.2mg/kg能極顯著改善肝細(xì)胞變性、壞死作用(P＜0.001)，還能顯著改善肝細(xì)胞的炎性病變作用(P＜0.05)。同時(shí)，本發(fā)明藥物口服制劑21.0mg/kg和5.2mg/kg能顯著、極顯著促進(jìn)肝細(xì)胞增生作用(P＜0.05、P＜0.001)。
另外，CCL4、TAA所致大鼠急性肝損傷模型，以及CCL4、D-GLAN(D-氨基半乳糖胺)所致小鼠急性肝損傷模型的試驗(yàn)結(jié)果均表明，本發(fā)明藥物注射液4.2-17.0mg/kg和本發(fā)明藥物口服制劑5.2-21.0mg/kg對(duì)損傷肝細(xì)胞均有一定的恢復(fù)作用，但無顯著意義(P＞0.05)。
上述藥效學(xué)研究證明，本發(fā)明藥物注射液和口服制劑均對(duì)多種原因引起急性肝損傷和免疫性肝損傷所致ALT、AST、ALP、TB活性升高均有明顯的降低作用；對(duì)肝損傷的組織形態(tài)學(xué)肝細(xì)胞變性、壞死、炎性程度有一定的改善和增生肝細(xì)胞作用；對(duì)膽道阻塞所致的黃疸升高有一定消退作用；能提高正常動(dòng)物與肝損傷動(dòng)物機(jī)體細(xì)胞免疫調(diào)控作用；具有較好的改善血液流變學(xué)和微循環(huán)的作用、有一定的抗應(yīng)激作用。
中藥注射劑的毒性及過敏性一直是難于解決的問題，主要由于中藥材中含有大量不明確的成份。為評(píng)價(jià)其藥效作用和毒理反應(yīng)，對(duì)該制劑進(jìn)行了與功能主治有關(guān)的主要藥效學(xué)，一般藥理學(xué)，急性毒性、長(zhǎng)期毒性(Beagle犬長(zhǎng)期毒性、大鼠長(zhǎng)期毒性)和特殊安全性試驗(yàn)研究，分述如下實(shí)驗(yàn)例9 動(dòng)物急性毒性試驗(yàn)用Biliss法計(jì)算求得本發(fā)明藥物注射液對(duì)ICR種小鼠靜脈注射給藥的LD50及其95％的可信限為2684.81(2554.52～2821.75)mg/Kg；腹腔注射給藥的LD50及其95％的可信限為2750.85(2538.73～2980.70)mg/Kg。用Biliss法計(jì)算求得本發(fā)明藥物口服制劑對(duì)ICR種小鼠灌胃給藥的LD50及其95％的可信限為2879.81(2684.57～3078.63)mg/Kg。
用Biliss法計(jì)算求得本發(fā)明藥物注射液對(duì)SD大鼠靜脈注射給藥的LD50及其95％的可信限為2189.35(2073.62～2311.53)mg/Kg；腹腔注射給藥的LD50及其95％的可信限為2682.58(2493.14～2886.42)mg/Kg。用Biliss法計(jì)算求得本發(fā)明藥物口服制劑對(duì)SD大鼠灌胃給藥的LD50及其95％的可信限為2714.35(2531.84～2916.45)mg/Kg。
靜脈注射給藥后動(dòng)物出現(xiàn)呼吸困難，活動(dòng)減少等癥狀，死亡的動(dòng)物多在注射后30分鐘內(nèi)死亡，死亡數(shù)量和時(shí)間隨劑量的減少而減少和延長(zhǎng)，解剖觀察，無肉眼可見病變。存活動(dòng)物24小時(shí)后恢復(fù)正常，攝食量和體重?zé)o明顯減少，處死動(dòng)物后，肉眼觀察重要器官(心、肝、脾、肺、腎等)均無異常發(fā)現(xiàn)。
腹腔注射給藥后動(dòng)物出現(xiàn)呼吸困難，活動(dòng)減少等癥狀，小鼠死亡多在注射后8小時(shí)內(nèi)死亡；大鼠死亡多在注射后12小時(shí)內(nèi)死亡，死亡數(shù)量和時(shí)間隨劑量的減少而減少和延長(zhǎng)，解剖觀察，無肉眼可見病變。存活動(dòng)物48小時(shí)后恢復(fù)正常，攝食量和體重?zé)o明顯減少，處死動(dòng)物后，肉眼觀察重要器官(心、肝、脾、肺、腎等)均無異常發(fā)現(xiàn)。
灌胃給藥后動(dòng)物出現(xiàn)呼吸困難，活動(dòng)減少等癥狀，48小時(shí)后恢復(fù)正常，攝食量和體重?zé)o明顯減少，處死動(dòng)物后，肉眼觀察重要器官(心、肝、脾、肺、腎等)均無異常發(fā)現(xiàn)。
結(jié)論以上試驗(yàn)表明本發(fā)明藥物注射液和口服制劑安全劑量范圍較大。
實(shí)驗(yàn)例10動(dòng)物長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)1、Beagle犬長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)本發(fā)明藥物注射液按250、125和62.5mg/kg三個(gè)劑量，分別相當(dāng)于其臨床靜脈滴注劑量的30、15和7.5倍，連續(xù)對(duì)Beagle犬靜脈給藥45天及停藥15天，結(jié)果如下(1)生長(zhǎng)發(fā)育及一般情況觀察給藥期間和停藥觀察，動(dòng)物精神行為、活動(dòng)、皮毛、呼吸、循環(huán)、食欲、大小便等均未見明顯異常，給藥及停藥期間，對(duì)犬體重增長(zhǎng)和發(fā)育無明顯影響，也無延遲性毒性反應(yīng)。
(2)尿常規(guī)檢查未見異常。
(3)對(duì)血象的影響未見異常。
(4)對(duì)肝功能的影響未見異常。
(5)對(duì)腎功能的影響未見異常。
(6)對(duì)血糖和血清膽固醇的影響未見異常。
(7)對(duì)心電圖的影響未見異常。
(8)活體動(dòng)物骨髓檢查未見異常。
(9)系統(tǒng)尸解和臟器指數(shù)未見異常。
(10)病理組織學(xué)檢查給藥45天檢查，低劑量組雄性動(dòng)物1例結(jié)腸粘膜下淋巴小結(jié)形成；低劑量組雌性動(dòng)物1例淋巴濾泡增多，并出現(xiàn)于髓質(zhì)。給藥組與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。停藥15天檢查，各組臟器檢查均未見異常。
結(jié)論本發(fā)明藥物注射液連續(xù)給Beagle犬靜脈滴注250mg/Kg 45天無毒性反應(yīng)。250mg/Kg及以下劑量對(duì)犬各項(xiàng)指標(biāo)未見明顯異常影響，亦無明顯延遲性毒性反應(yīng)，屬安全劑量范圍。
2、大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)資料綜述本發(fā)明藥物注射液按250、125和62.5mg/kg三個(gè)劑量，本發(fā)明藥物口服制劑按630、157.5和78mg/kg三個(gè)劑量，分別相當(dāng)于臨床日用劑量的30、15和7.5倍，分別連續(xù)對(duì)大鼠腹腔注射給藥45天及停藥14天，觀察了本發(fā)明藥物注射液及口服制劑對(duì)動(dòng)物的主要不良反應(yīng)為
(1)一般情況及體重給藥45天和停藥14天各組受試大鼠行為活動(dòng)正常，動(dòng)物毛澤光滑，無異常分泌物。動(dòng)物體重和攝食量隨時(shí)間正常增長(zhǎng)，各組均無動(dòng)物死亡。
(2)血常規(guī)本發(fā)明藥物注射液連續(xù)對(duì)大鼠腹腔注射給藥45天血常規(guī)檢查，與對(duì)照組比較，本發(fā)明藥物注射液高、低劑量雌性組RBC分別顯著升高(P＜0.05)，中劑量雌性組RBC非常顯著升高(P＜0.01)；高、中、低劑量雄性組PLT分別極顯著升高P＜0.001)；高、中、低劑量雌、雄性組RC分別顯著、非常顯著和極顯著升高(P＜0.05，P＜0.01和P＜0.001)；高、中劑量雌性組MCHC分別非常顯著降低(P＜0.01)，其余各項(xiàng)指標(biāo)未見異常(P＞0.05)，各組指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)，實(shí)際意義不明顯。停藥14天檢查與對(duì)照組比較，本發(fā)明藥物注射液高劑量雌性組RBC顯著降低(P＜0.05)，中劑量雌性組PDW非常顯著降低(P＜0.01)，各組指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)，實(shí)際意義不明顯。
本發(fā)明藥物口服制劑組連續(xù)對(duì)大鼠腹腔注射給藥45天血常規(guī)檢查，與對(duì)照組比較，本發(fā)明藥物口服制劑組高、低劑量雌性組RBC分別顯著升高(P＜0.05)，中劑量雌性組RBC非常顯著升高(P＜0.01)；高、中、低劑量雄性組PLT分別極顯著升高P＜0.001)；高、中、低劑量雌、雄性組RC分別顯著、非常顯著和極顯著升高(P＜0.05，P＜0.01和P＜0.001)；高、中劑量雌性組MCHC分別非常顯著降低(P＜0.01)，其余各項(xiàng)指標(biāo)未見異常(P＞0.05)，各組指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)，實(shí)際意義不明顯。停藥14天檢查與對(duì)照組比較，本發(fā)明藥物口服制劑組高劑量雌性組RBC顯著降低(P＜0.05)，中劑量雌性組PDW非常顯著降低(P＜0.01)，各組指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)，實(shí)際意義不明顯。
(3)肝功能本發(fā)明藥物注射液連續(xù)給藥45天檢查，與對(duì)照組比較，本發(fā)明藥物注射液中劑量雌性組TP有非常顯著升高(P＜0.01)，其余各組動(dòng)物的肝功能指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)。停藥14天檢查與對(duì)照組檢查，未見明顯差異(P＞0.05)。各組動(dòng)物的肝功能指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)。
本發(fā)明藥物口服制劑組連續(xù)給藥45天檢查，與對(duì)照組比較，本發(fā)明藥物口服制劑組中劑量雌性組TP有非常顯著升高(P＜0.01)，其余各組動(dòng)物的肝功能指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)。停藥14天檢查與對(duì)照組檢查，未見明顯差異(P＞0.05)。各組動(dòng)物的肝功能指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)。
(4)腎功能本發(fā)明藥物注射液、口服制劑組連續(xù)給藥45天和停藥14天腎功能檢查，與對(duì)照組比較，未見明顯差異(P＞0.05)，各組動(dòng)物腎功能指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)。
(5)其它生化指標(biāo)本發(fā)明藥物注射液、口服制劑組連續(xù)給藥45天，與對(duì)照組比較，本發(fā)明藥物注射液、口服制劑組高、低劑量雌性組CHOL分別顯著降低(P＜0.05)。停藥14天后檢查，與對(duì)照組比較，未見明顯差異(P＞0.05)。
(6)系統(tǒng)尸解及臟器指數(shù)結(jié)果顯示，給藥45天和停藥14天，本發(fā)明藥物注射液、口服制劑組各劑量組與對(duì)照組比較，無顯著差異(P＞0.05)。
(7)病理組織學(xué)檢查給藥45天和停藥14天，本發(fā)明藥物注射液各劑量組和對(duì)照組大鼠腦(小腦)、垂體、視神經(jīng)、心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、甲狀腺、胰腺、胸腺、膀胱、胃、十二指腸、回腸、結(jié)腸、卵巢、子宮、睪丸、附睪、前列腺、淋巴結(jié)、脊髓、胸骨、鼻中隔、視網(wǎng)膜的組織形態(tài)學(xué)檢查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)給藥45天本發(fā)明藥物注射液高劑量組雄性動(dòng)物1例、中劑量組雌性動(dòng)物1例胃下部分血管擴(kuò)張伴中性白細(xì)胞浸潤(rùn)。高劑量組雄性動(dòng)物2例、雌性動(dòng)物1例，中劑量雌、雄性動(dòng)物各1例和對(duì)照組雄性動(dòng)物1例結(jié)腸粘膜下淋巴小結(jié)形成。高劑量組雄性動(dòng)物1例膀胱部分肌層明顯出血伴單核、中性細(xì)胞浸潤(rùn)。高劑量組1例子宮內(nèi)膜及肌層少許中性白細(xì)胞浸潤(rùn)。其余各組各項(xiàng)指標(biāo)，均未發(fā)現(xiàn)明顯的病理形態(tài)學(xué)損害。給藥組與對(duì)照組比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。停藥14天檢查，各組均未發(fā)現(xiàn)明顯的病理形態(tài)學(xué)損害。
病理組織學(xué)檢查給藥45天和停藥14天，本發(fā)明藥物口服制劑組各劑量組和對(duì)照組大鼠腦(小腦)、垂體、視神經(jīng)、心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、甲狀腺、胰腺、胸腺、膀胱、胃、十二指腸、回腸、結(jié)腸、卵巢、子宮、睪丸、附睪、前列腺、淋巴結(jié)、脊髓、胸骨、鼻中隔、視網(wǎng)膜的組織形態(tài)學(xué)檢查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)給藥45天本發(fā)明藥物口服制劑組高劑量組雄性動(dòng)物2例、中劑量組雌性動(dòng)物1例胃下部分血管擴(kuò)張伴中性白細(xì)胞浸潤(rùn)。高劑量組雄性動(dòng)物1例、雌性動(dòng)物1例，中劑量雌、雄性動(dòng)物各1例和對(duì)照組雄性動(dòng)物1例結(jié)腸粘膜下淋巴小結(jié)形成。高劑量組雄性動(dòng)物1例膀胱部分肌層明顯出血伴單核、中性細(xì)胞浸潤(rùn)。高劑量組1例子宮內(nèi)膜及肌層少許中性白細(xì)胞浸潤(rùn)。其余各組各項(xiàng)指標(biāo)，均未發(fā)現(xiàn)明顯的病理形態(tài)學(xué)損害。給藥組與對(duì)照組比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。停藥14天檢查，各組均未發(fā)現(xiàn)明顯的病理形態(tài)學(xué)損害。
結(jié)論本發(fā)明藥物注射液、本發(fā)明藥物口服制劑組長(zhǎng)期大劑量腹腔注射給予受試動(dòng)物未出現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)及病理?yè)p害。
3、特殊安全性試驗(yàn)研究資料綜述3.1溶血試驗(yàn)本發(fā)明藥物注射液與2％兔紅細(xì)胞混懸液混合，溫育4小時(shí)，結(jié)果未出現(xiàn)溶血和凝聚現(xiàn)象。
3.2血管刺激試驗(yàn)本發(fā)明藥物注射液對(duì)家兔耳緣靜脈滴注50mg/kg，連續(xù)3天，肉眼觀察無充血、水腫、變性、壞死等刺激反應(yīng)，病理組織形態(tài)學(xué)檢查各結(jié)構(gòu)正常，表明該藥對(duì)注射部位血管無刺激作用。
3.3肌肉刺激試驗(yàn)本發(fā)明藥物注射液對(duì)家兔股四頭肌注射1ml(5mg)，48小時(shí)后，觀察刺激反應(yīng)情況，結(jié)果無充血、水腫、變性等刺激反應(yīng)，表明該藥對(duì)注射部位肌肉無刺激作用。
3.4全身主動(dòng)過敏試驗(yàn)本發(fā)明藥物注射液對(duì)豚鼠隔日腹腔注射每只0.5ml致敏，共3次，動(dòng)物分別于首次注射本發(fā)明藥物注射液后第14天和第21天，靜脈注射本發(fā)明藥物注射液2ml進(jìn)行攻擊，結(jié)果均未出現(xiàn)全身主動(dòng)過敏反應(yīng)癥狀，卵蛋白陽(yáng)性對(duì)照組動(dòng)物全部出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，表明該藥不引起過敏反應(yīng)。
3.5降壓物質(zhì)檢查本發(fā)明藥物注射液對(duì)麻醉貓股靜脈注射8.3mg/kg，以組織胺為對(duì)照進(jìn)行降壓實(shí)驗(yàn)，結(jié)果本發(fā)明藥物注射液未引起降壓反應(yīng)，表明該藥無降壓作用。
小結(jié)本發(fā)明藥物注射液不產(chǎn)生溶血與凝聚反應(yīng)，對(duì)肌肉、血管無刺激性，不引起全身主動(dòng)過敏反應(yīng)，無降壓作用，符合注射劑一般安全性要求。
經(jīng)系統(tǒng)的藥理毒理學(xué)研究證明，本發(fā)明藥物注射液具有對(duì)多種原因引起急性肝損傷和免疫性肝損傷所致ALT、AST、ALP、TB活性升高均有明顯的降低作用；對(duì)肝損傷的組織形態(tài)學(xué)肝細(xì)胞變性、壞死、炎性程度有一定的改善和修復(fù)肝細(xì)胞作用；對(duì)膽道阻塞所致的黃疸升高有一定消退利膽作用；能提高正常動(dòng)物與肝損傷動(dòng)物機(jī)體細(xì)胞免疫調(diào)控作用；具有較好的改善血液流變學(xué)和微循環(huán)的作用、對(duì)正常動(dòng)物和肝損傷動(dòng)物均具有較好的抗應(yīng)激作用功效，為臨床應(yīng)用提供了藥理學(xué)依據(jù)；此外，小鼠急性毒性試驗(yàn)，Beagle犬、大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)和一般藥理學(xué)試驗(yàn)研究結(jié)果表明，該制劑毒性反應(yīng)低，安全度較大，為其臨床安全用藥提供了毒理學(xué)依據(jù)，對(duì)正常動(dòng)物各系統(tǒng)無影響，無不良反應(yīng)。特殊安全性試驗(yàn)研究表明符合注射劑一般安全性要求。
本發(fā)明藥物原料配伍經(jīng)藥效學(xué)篩選與拆方研究而確定，以此原料配伍制成的本發(fā)明藥物注射液制劑經(jīng)藥效與毒理研究證明對(duì)各種原因引起的肝臟損害具有較強(qiáng)的藥理活性，毒副作用較低。雖然無病原學(xué)治療作用，但以降酶和促進(jìn)肝細(xì)胞再生為特色，適用范圍廣，能迅速改善臨床癥狀，采用口服制劑和注射液劑型可以增強(qiáng)中醫(yī)急癥治療的手段。
權(quán)利要求
1.一種治療肝炎的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑丹參3-10份、三七1-3份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療肝炎的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑丹參6份、三七1份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的治療肝炎的藥物組合物，其特征在于它是由藥材丹參、三七的水提取物或醇提取物混合為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的治療肝炎的藥物組合物，其特征在于所述的藥劑是口服制劑或注射劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的治療肝炎的藥物組合物，其特征在于所述的口服制劑是膠囊劑、片劑、丸劑、顆粒劑、散劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的治療肝炎的藥物組合物，其特征在于所述的注射劑是注射水針劑、靜滴劑型、粉針劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的治療肝炎的藥物組合物，其特征在于每毫升注射水針劑中含丹參水溶性總酚3.24～3.36mg、總皂苷1.69～1.76mg、丹參素0.83～0.91mg、原兒茶醛0.23～0.25mg、人參皂苷Rg1 0.63～0.69mg。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的治療肝炎的藥物組合物，其特征在于其特征在于該藥物組合物的HPLC指紋圖譜如圖1所示，由4個(gè)特征峰組成，其中色譜條件為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-乙腈-1.67％甲酸溶液，其體積比為23∶7∶70的流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的治療肝炎的藥物組合物，其特征在于所述的4個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD均小于10.0％，其中，1號(hào)峰平均相對(duì)保留時(shí)間RT 0.134，2號(hào)峰RT 0.184，3號(hào)峰RT 0.724，4號(hào)峰RT 1.000。
10.一種制備上述任意權(quán)利要求所述的治療肝炎的藥物組合物的方法，它包括下列步驟a、按各重量配比稱取原料丹參3-10份、三七1-3份；b、丹參提取物的制備取藥材丹參，加水煎煮提取，過濾，濾液濃縮，干燥，干燥浸膏粉用50-95％乙醇作溶劑，滲漉法提取，得滲漉液，加入活性炭，加熱回流提取，濾過，回收乙醇，加水溶解，水溶液通過大孔吸附樹脂，用30-85％乙醇洗脫，乙醇洗脫液，回收乙醇即得丹參提取物；c、三七提取物的制備取藥材三七，用35-95％乙醇為溶劑，滲漉法提取，得滲漉液，將滲漉液中加入活性炭，回流提取，濾過，濾液減壓回收乙醇，得醇浸膏，將醇浸膏加水溶解，濾過，水溶液通過大孔吸附樹脂柱，再用30-90％乙醇洗脫，得乙醇洗脫液，回收乙醇，即得三七提取物；d、將步驟b制備的丹參提取物、步驟c制備的三七提取物混合，加水溶解，加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分，制備成藥學(xué)上常用的制劑。
11.權(quán)利要求1所述的下述重量配比的原料在制備治療急、慢性肝炎的藥物中的用途丹參3-10份、三七1-3份。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的用途，其特征在于所述藥物為口服治療急、慢性肝炎的藥物。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的用途，其特征在于所述的藥物為注射治療急、慢性肝炎的藥物。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的用途，其特征在于所述的藥物為靜脈注射治療急、慢性肝炎的藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療肝炎的藥物組合物，它是由丹參、三七為原料制備而成的藥劑，該藥劑為口服和注射制劑，藥材中的提取物丹參水溶性總酚、總皂苷混合既減少了用藥量，同時(shí)去除雜質(zhì)，用藥量更加準(zhǔn)確，治療肝炎療效好、安全、可控、穩(wěn)定，為臨床提供了一種新的治療肝炎藥物的選擇。
文檔編號(hào)A61P31/00GK1795893SQ20041008155
公開日2006年7月5日 申請(qǐng)日期2004年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月21日
發(fā)明者蒲旭峰, 楊幼琪, 銀海, 林慶華, 文永盛, 張德波, 孫繼林, 曾雁鳴 申請(qǐng)人:四川迪康科技藥業(yè)股份有限公司