專(zhuān)利名稱(chēng)：一種三七三醇皂苷組合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體涉及中藥三七的提純物及其制備方法和制藥用途。
背景技術(shù)：
三七(Panax notoginseng(Burk.)F.H.chen)又稱(chēng)田七、人參三七、田三七、山漆、金不換和血參等，為五加科(Araliaceae)人參屬(Panax Linn)多年生草本植物，因其播種后三至七年挖采而且每株長(zhǎng)三個(gè)葉柄，每個(gè)葉柄生七個(gè)葉片，故名三七，其莖、葉、花均可入藥，是中國(guó)特有的名貴中藥材。據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)記載，三七使用歷史近600年，栽培歷史近500年。三七因其自古以來(lái)就被公認(rèn)為具有顯著的活血化瘀、消腫定痛功效而被譽(yù)為“金不換”、“南國(guó)神草”。
中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)93105774(公開(kāi)號(hào)CN1083819A，
公開(kāi)日1994年3月16日)公開(kāi)了一種三七總皂苷的制備方法。中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)01108591(公開(kāi)號(hào)CN1334267A，
公開(kāi)日2002年2月6日)也公開(kāi)了一種三七總皂苷的制備方法。中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)02144840(公開(kāi)號(hào)CN1412162A，
公開(kāi)日2003年4月23日)、02158727(公開(kāi)號(hào)CN1424321A，
公開(kāi)日2003年6月18日)也都分別公開(kāi)了一種從三七莖葉中提取三七總皂苷的方法。
上述中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)所描述的方法均在于提取或制備三七總皂苷。三七總皂苷屬達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜類(lèi)皂苷，按照其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)可進(jìn)一步分為原人參二醇型和原人參三醇型兩類(lèi)。由于這兩類(lèi)皂苷結(jié)構(gòu)的不同，它們的生物學(xué)活性也大不相同，人參二醇型皂苷具有較強(qiáng)的直接抗炎鎮(zhèn)痛作用，而人參三醇型皂苷則具有較強(qiáng)的抑制血小板聚集、抑制血栓形成的作用。而目前基于這種三七總皂苷的藥物制劑很難針對(duì)具體的病癥發(fā)揮出更大的有針對(duì)性的藥效。因此，人們需要從三七中分離出含有不同組分的有效部位，以便能提供出對(duì)具體的病癥更加適合的三七藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種以人參皂苷Rg1、Re和三七皂苷R1為主要成分的三七三醇皂苷組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供本發(fā)明三七三醇皂苷組合物的制備方法。
本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供本發(fā)明三七三醇皂苷組合物的制藥用途。
本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供本發(fā)明三七三醇皂苷組合物用于治療疾病的用途。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的一個(gè)技術(shù)方案提供了一種三七三醇皂苷組合物，該組合物是由三七提純得到的，其基本上由人參皂苷Rg1、Re和三七皂苷R1組成；其中Rg1的含量為30～70wt％，優(yōu)選為40～65wt％，更優(yōu)選為50～65wt％，最優(yōu)選為55～65wt％；人參皂苷Re的含量為4～15wt％，優(yōu)選為4～10wt％，更優(yōu)選為6～9wt％；三七皂苷R1的含量為7～25wt％，優(yōu)選為8～18wt％，更優(yōu)選為10～15wt％；以及人參皂苷Rg1、Re和三七皂苷R1的含量之和最高為98wt％。
本發(fā)明提供的三七三醇皂苷組合物的主要組分的分子式和結(jié)構(gòu)式如下表1中所示表1.

在本發(fā)明的上述技術(shù)方案中所述三七三醇皂苷組合物還可含有微量的人參皂苷Rg2、人參皂苷Rh1、三七皂苷R2和/或三七皂苷R3。
本發(fā)明提供的三七三醇皂苷組合物，具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)在藥效學(xué)方面，該組合物對(duì)于心腦血管栓塞性疾病的病理生理過(guò)程具有更強(qiáng)的針對(duì)性，能夠更有效地抑制血栓的形成和發(fā)展，并促進(jìn)血栓的溶解和血管的疏通；(2)在藥理作用方面，該組合物的針對(duì)性明顯優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)中的三七總皂苷制劑。
本發(fā)明的另一個(gè)技術(shù)方案提供了本發(fā)明三七三醇皂苷組合物的制備方法，該方法包括以下步驟(1)用濃度為50～90wt％、優(yōu)選55～70wt％、最優(yōu)選約60wt％的乙醇浸泡提取三七，所用的乙醇量為所用三七重量的至少3倍，收集乙醇提取液；(2)使所述乙醇提取液通過(guò)苯乙烯型大孔樹(shù)脂柱，優(yōu)選使用非極性或弱極性的苯乙烯型大孔樹(shù)脂，這些樹(shù)脂包括但不限于D101、D140、Dj-1或D201；(3)用濃度為30～50wt％、優(yōu)選35～45wt％、最優(yōu)選約40wt％的乙醇對(duì)所述苯乙烯型大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行洗脫，收集洗脫液。優(yōu)選的是，在用所述乙醇進(jìn)行洗脫前，用水對(duì)苯乙烯型大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行洗脫，以除去水溶性雜質(zhì)。
在本發(fā)明的上述技術(shù)方案中所述步驟(1)中使用乙醇的濃度約60wt％是指其濃度在可接受誤差范圍內(nèi)，一般為60±3wt％。所述步驟(3)中使用乙醇的濃度約40wt％是指其濃度在可接受誤差范圍內(nèi)，一般為40±2wt％。
在上述步驟(1)和步驟(3)中，對(duì)所使用的乙醇量沒(méi)有太多限制。但對(duì)于步驟(1)而言，一般所用的乙醇量為所用三七重量的3～15倍。如果所用的乙醇量太少，則浸泡提取不充分，但是如果用的乙醇量太多，將會(huì)導(dǎo)致乙醇的浪費(fèi)并使后續(xù)的乙醇回收步驟的能源成本增加。同樣對(duì)于步驟(3)而言，一般所用的乙醇量為所用三七量的1～15倍。如果所用的乙醇量太少，則洗脫不充分，但是如果用的乙醇量太多，將會(huì)導(dǎo)致乙醇的浪費(fèi)并使后續(xù)的乙醇回收步驟的能源成本增加。
為了提高提取的效率，在本發(fā)明三七三醇皂苷組合物的制備方法中所述步驟(1)用乙醇對(duì)三七進(jìn)行浸泡提取前，從有利于后續(xù)步驟的效率考慮，需要將三七進(jìn)行粉碎。優(yōu)選將三七粉碎成粒徑范圍在《中國(guó)藥典》2000年版一部(化學(xué)工業(yè)出版社，2000年1月出版)規(guī)定的最粗粉和粗粉之間，對(duì)于粉碎的方式?jīng)]有任何限制。
因此，本發(fā)明三七三醇皂苷組合物的制備方法中所述步驟(1)優(yōu)選實(shí)施方式如下(a)將三七粉碎，得三七粉；(b)采用濃度為50～90wt％、優(yōu)選55～70wt％、最優(yōu)選約60wt％的乙醇對(duì)所述步驟(a)所得的三七粉進(jìn)行浸泡，所用的乙醇量為所用三七粉重量的至少2倍；和(c)采用濃度為50～90wt％、優(yōu)選55～70wt％、最優(yōu)選約60wt％的乙醇對(duì)所述步驟(b)所得的浸泡后的三七粉進(jìn)行滲漉，所用的乙醇量為所用三七粉重量的至少1倍，收集滲漉液。
在本發(fā)明的上述技術(shù)方案中所述步驟(b)和步驟(c)中使用乙醇的濃度約60wt％是指其濃度在可接受誤差范圍內(nèi)，一般為60±3wt％。
在上述步驟(b)中浸泡三七粉所用的乙醇量和步驟(c)中滲漉所用的乙醇量都沒(méi)有太多限制。但浸泡三七粉的所用乙醇量的合理范圍一般為所用三七粉重量的2～4倍，滲漉所用乙醇量的合理范圍一般為所用三七粉重量的1～15倍。如果浸泡三七粉的所用乙醇量和滲漉所用乙醇量低于上述范圍的下限的話(huà)，則不能充分有效地浸泡提取出三七中的有效成份，但如果所用的乙醇量超過(guò)上述范圍的上限的話(huà)，提取效率也不會(huì)再有提高，而且還會(huì)導(dǎo)致乙醇的浪費(fèi)并使后續(xù)的乙醇回收步驟的能源成本增加。
如果需要，還可進(jìn)一步將步驟(3)收集的洗脫液進(jìn)行濃縮，得三七三醇皂苷醇浸膏，并對(duì)上述三七三醇皂苷醇浸膏進(jìn)行干燥。所述的濃縮步驟可以采用任何常規(guī)的方法，但優(yōu)選采用減壓濃縮的方法。所述的干燥步驟可以采用各種手段，如噴霧干燥、減壓干燥等。
為了獲得有效成分更高的三七三醇皂苷組合物，還可進(jìn)一步對(duì)步驟(3)收集的洗脫液、對(duì)步驟(3)收集的洗脫液的濃縮產(chǎn)物或濃縮干燥產(chǎn)物進(jìn)行進(jìn)一步的純化精制，所述的純化精制步驟可以采用各種手段，包括但不限于柱層析、溶劑萃取等。在采用柱層析進(jìn)行純化時(shí)，優(yōu)選使用弱堿性陰離子交換樹(shù)脂，這些樹(shù)脂包括但不限于BS-II、D301或D313。采用萃取方法時(shí)，可以使用的溶劑有正丁醇或乙酸乙酯等。
為了降低成本，在本發(fā)明三七三醇皂苷組合物的制備方法中，還可回收所述步驟(1)中收集的乙醇提取液、步驟(c)中收集的滲漉液或步驟(3)中收集的洗脫液中的乙醇，優(yōu)選采用減壓回收方式。
本發(fā)明提供的三七三醇皂苷組合物的制備方法能夠有效分離三七總皂苷中的三七三醇類(lèi)皂苷有效成分；而且該制備方法所用的溶劑安全、廉價(jià)易得、無(wú)殘留，并且溶劑也可回收利用，大大降低了制備成本。
本發(fā)明的又一個(gè)技術(shù)方案提供了一種三七三醇皂苷組合物用于制備治療血管栓塞性疾病的藥物的應(yīng)用，特別是用于制備治療心腦血管栓塞性疾病的藥物的應(yīng)用。所述的心腦血管栓塞性疾病包括腦卒中、冠心病、心絞痛、心肌梗死、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞等，中風(fēng)癥見(jiàn)半身不遂、口舌歪斜、言語(yǔ)蹇澀、偏身麻木等。
本發(fā)明提供的三七三醇皂苷組合物可以被制成各種劑型，例如，顆粒劑、合劑、片劑、散劑、蜜丸、膠囊、注射劑、滴劑、貼劑等劑型。制備這些劑型的方法和所用的助劑是本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的，例如，可參見(jiàn)《中藥藥劑學(xué)》(上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1986年11月出版)、《藥用輔料大全》(四川科學(xué)技術(shù)出版社，1995年1月出版)、《中國(guó)藥典》2000年版一部(化學(xué)工業(yè)出版社，2000年1月出版)等。
對(duì)于本發(fā)明藥物單劑所含的本發(fā)明三七三醇皂苷組合物的含量沒(méi)有具體的限制，例如，可在50～500毫克/劑。對(duì)于本發(fā)明藥物制劑的給藥途徑也沒(méi)有過(guò)多的限制，例如可以通過(guò)口服、灌胃、肌肉內(nèi)注射、血管內(nèi)注射、透皮、十二指腸給藥、鼻內(nèi)給藥等方式。
本發(fā)明的上述制劑具有活血化瘀，活絡(luò)通脈，抗血小板聚集，防止血栓形成，改善微循環(huán)，降低全血粘度，增強(qiáng)頸動(dòng)脈血流量的功效，因此可主要用于心腦血管栓塞性病癥，例如中風(fēng)、半身不遂、口舌歪斜、言語(yǔ)蹇澀、偏身麻木的治療。
本發(fā)明還提供了一種治療血管栓塞性疾病的方法，其特征在于，給需要治療的患者施用有效劑量的本發(fā)明三七三醇皂苷組合物。所述的血管栓塞性疾病包括但不限于心腦血管栓塞性疾病例如，中風(fēng)、半身不遂、口舌歪斜、言語(yǔ)蹇澀、偏身麻木等。所述的患者包括人，也包括貓、狗、猩猩、猴子等動(dòng)物。所述的有效劑量會(huì)隨患者的疾病嚴(yán)重程度、體重、體質(zhì)、年齡、患病歷史等因素有所變化。但是，醫(yī)師或藥劑師有能力為不同的患者確定出合適的服用量。例如，可在1～15mg/kg體重/天的范圍內(nèi)選擇，優(yōu)選在2～10mg/kg體重/天的范圍內(nèi)選擇。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1使用萬(wàn)能粉碎機(jī)(購(gòu)自上海天和制藥機(jī)械廠，型號(hào)GF-300)粉碎三七干燥根莖150kg(產(chǎn)地云南省文山州)，至粒徑范圍10目～24目的三七粗粉，用2倍藥材重量的濃度為60wt％乙醇浸泡上述三七粗粉后填入滲漉桶，用15倍藥材重量的濃度為60wt％7醇對(duì)濕料進(jìn)行滲漉，減壓回收滲漉液中的乙醇后得三七總皂苷醇浸膏。將上述三七總皂苷醇浸膏用純化水配制成10倍藥材重量的溶液，將所得水溶液上樣到苯乙烯型大孔樹(shù)脂D140(購(gòu)自成都中藍(lán)晨光化工研究院)柱，先用5倍藥材重量的純化水洗脫，再對(duì)經(jīng)純化水洗脫的樹(shù)脂柱用9倍藥材重量的濃度為40wt％乙醇洗脫，流速為0.2倍柱體積/小時(shí)，然后收集洗脫液。對(duì)上述洗脫液進(jìn)行減壓濃縮，回收乙醇得醇浸膏，并對(duì)所得醇浸膏噴霧干燥，即得6kg粉末狀的三七三醇皂苷組合物。為簡(jiǎn)明起見(jiàn)，下文中有時(shí)將三七三醇皂苷組合物簡(jiǎn)稱(chēng)為PTS。
通過(guò)高效液相色譜法，采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-水(體積比為19.5∶80.5)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，分別測(cè)定實(shí)施例1制得的PTS中Rg1含量為60wt％、Re含量為7wt％、R1含量為12wt％。
實(shí)施例2～4按照與實(shí)施例1所述的相同的方法和步驟，采用不同濃度、不同重量的乙醇對(duì)三七粗粉進(jìn)行浸泡、滲漉和洗脫，獲得了下列本發(fā)明的組合物，結(jié)果如下表2所示表2.

實(shí)施例5取實(shí)施例1制得的干燥的PTS 100g，用pH值為6的乙酸緩沖液配制成2.5L溶液，將所得溶液上樣到弱堿性陰離子交換樹(shù)脂BS-II(購(gòu)自成都中藍(lán)晨光化工研究院)柱，樹(shù)脂柱體積為6L，用pH值為6的乙酸緩沖液12L洗脫，流速為0.4倍柱體積/小時(shí)，收集洗脫液，對(duì)所得洗脫液濃縮干燥，即得60g粉末狀的精制三七三醇皂苷組合物。
通過(guò)高效液相色譜法，采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-水(體積比為19.5∶80.5)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，分別測(cè)定實(shí)施例5制得的PTS中Rg1含量為65wt％、Re含量為8wt％、R1含量為20wt％。水分含量約為5wt％，另外還含有約2wt％的雜質(zhì)。
實(shí)施例6取實(shí)施例1制得的干燥的PTS 100g，溶于濃度為50wt％的乙醇中，加淀粉100g，混勻，用一步制粒機(jī)制粒，充填制成膠囊1000粒。
試驗(yàn)例1對(duì)血小板聚集功能和釋放功能的影響采用比濁法，利用PAM-3型雙通道血小板聚集儀(購(gòu)自江蘇省丹陽(yáng)無(wú)線(xiàn)電廠)，對(duì)本發(fā)明組合物的抑制血小板聚集的功能進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)。健康雄性SD大鼠，分為大(150mg/kg)、中(75mg/kg)、小(37.5mg/kg)三個(gè)劑量組和1個(gè)阿斯匹林陽(yáng)性對(duì)照組(300mg/kg)。將實(shí)施例1制得的PTS粉末用生理鹽水配成溶液，按照預(yù)定的劑量十二指腸給藥所制成的PTS溶液。給藥一次，1小時(shí)后，腹主動(dòng)脈取血，制備富血小板血漿，加入濃度為3×10-6mol/L的誘導(dǎo)劑二磷酸腺苷(ADP)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明實(shí)施例1制得的PTS能明顯抑制由ADP誘導(dǎo)的大鼠血小板聚集，并隨劑量增加作用增強(qiáng)，其抑制ADP引起的血小板聚集作用強(qiáng)度與阿斯匹林基本相當(dāng)。
采用比濁法，利用PAM-3型雙通道血小板聚集儀(購(gòu)自江蘇省丹陽(yáng)無(wú)線(xiàn)電廠)，對(duì)本發(fā)明組合物的抑制血小板聚集的功能進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)。首先用生理鹽水將實(shí)施例1制得的PTS粉末配成溶液，濃度分別為1、2、4mg/ml。取健康雄性家兔，頸總動(dòng)脈取血，制備富血小板血漿后，用等體積的所制成的PTS溶液稀釋?zhuān)傧蛏鲜鱿♂尯蟮难獫{中加入濃度為3×10-6mol/L的誘導(dǎo)劑ADP，誘導(dǎo)血小板聚集。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明實(shí)施例1制得的PTS具有明顯抑制由ADP誘導(dǎo)家兔血小板聚集的作用，該作用與劑量呈相關(guān)性，與阿斯匹林比較，與體內(nèi)結(jié)果相似。
試驗(yàn)例2對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性血栓的影響取健康雄性SD大鼠42只，體重300g以上，分為2個(gè)對(duì)照組和4個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組7只。用生理鹽水將實(shí)施例1制得的PTS粉末配成溶液，十二指腸給藥所制成的PTS溶液，4個(gè)實(shí)驗(yàn)組的給藥劑量分別為25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg，給藥一次。陰性對(duì)照組十二指腸給藥和最大劑量實(shí)驗(yàn)組等容量的蒸餾水，陽(yáng)性藥物對(duì)照組灌胃給予阿司匹林(300mg/kg)，給藥一次。給藥1小時(shí)后，采用動(dòng)靜脈旁路的方法進(jìn)行手術(shù)，建立血循環(huán)。結(jié)果證明實(shí)施例1制得的PTS 50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg均能明顯抑制大鼠實(shí)驗(yàn)性血栓的形成，劑量增加，作用增強(qiáng)。
試驗(yàn)例3對(duì)小鼠出血時(shí)間的影響取健康雄性昆明種小鼠40只，分為1個(gè)對(duì)照組和3個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組10只。對(duì)照組腹腔注射給藥阿斯匹林(150mg/kg，給藥一次)，3個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別腹腔注射給藥實(shí)施例1制得的PTS粉末的生理鹽水溶液(濃度為50mg/ml)，分為大(300mg/kg)、中(150mg/kg)、小(75mg/kg)三個(gè)劑量組，給藥一次。給藥20分鐘后，將鼠尾尖部剪斷，以濾紙接血滴，每30秒接一次，直到無(wú)出血為止，記錄出血時(shí)間。結(jié)果證明實(shí)施例1制得的PTS和阿斯匹林都有延長(zhǎng)出血時(shí)間的趨勢(shì)，但無(wú)明顯差異。
試驗(yàn)例4對(duì)沙土鼠實(shí)驗(yàn)性腦缺血的影響取沙土鼠50只，隨機(jī)分為1個(gè)正常組、1個(gè)缺血對(duì)照組、1個(gè)陽(yáng)性藥物對(duì)照組、2個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組10只。正常組正常飼養(yǎng)，未給予任何藥物，其余各組采用沙土鼠單側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎形成一側(cè)腦半球梗塞的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。?shí)驗(yàn)組腹腔注射給藥實(shí)施例1制得的PTS的生理鹽水溶液(濃度為50mg/ml)，分為大(150mg/kg)、小(75mg/kg)兩個(gè)劑量組，每天給藥一次，連續(xù)10天。缺血對(duì)照組腹腔注射給予和大劑量實(shí)驗(yàn)組等容量生理鹽水，每天給藥一次，連續(xù)10天。陽(yáng)性對(duì)照藥物組灌胃給予尼莫地平60mg/kg，每天給藥一次，連續(xù)10天。末次給藥1小時(shí)后，乙醚麻醉，觀察實(shí)施例1制得的PTS對(duì)局部腦缺血引起的腦功能障礙和腦組織鉀、鈉離子的影響。按照Butterfield等(1973年全國(guó)冠心病座談會(huì)資料選編，261頁(yè)，人民衛(wèi)生出版社1974)的方法對(duì)動(dòng)物進(jìn)行行為評(píng)分，結(jié)果表明實(shí)施例1制得的PTS使沙土鼠實(shí)驗(yàn)性腦缺血行為明顯改善，陽(yáng)性對(duì)照藥物尼莫地平亦有明顯作用。對(duì)腦組織采用火焰發(fā)射分光光度法測(cè)定鉀、鈉離子的含量。結(jié)果表明缺血對(duì)照組沙土鼠缺血側(cè)大腦半球鈉含量增加，鉀含量降低。大劑量PTS(150mg/kg)組鉀、鈉含量無(wú)明顯變化，小劑量PTS(75mg/kg)組除鉀含量明顯降低外，鈉含量變化不顯著。尼莫地平亦有這樣對(duì)抗作用。
綜上所述，表明實(shí)施例1制得的PTS對(duì)沙田鼠試驗(yàn)性腦缺血具有一定保護(hù)作用。
試驗(yàn)例5對(duì)大鼠中腦動(dòng)脈阻塞致腦梗塞的保護(hù)作用(1)預(yù)防給藥取雄性Wistar大鼠50只，隨機(jī)分為缺血對(duì)照組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組、大劑量(200mg/kg/天)實(shí)驗(yàn)組、中劑量(100mg/kg/天)實(shí)驗(yàn)組、小劑量(50mg/kg/天)實(shí)驗(yàn)組，每組10只。缺血對(duì)照組灌服蒸餾水4ml/kg/天，陽(yáng)性對(duì)照藥物組灌胃給予尼莫地平50mg/kg/天。將實(shí)施例1制得的PTS粉末用生理鹽水配成懸浮液，對(duì)實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物按照預(yù)定的劑量灌胃給藥。各組連續(xù)給藥7天。于末次給藥2小時(shí)后，對(duì)各組大鼠分別腹腔注射水合氯醛350mg/kg麻醉，灼斷大鼠大腦中動(dòng)脈引起腦梗塞。觀察實(shí)施例1制得的PTS預(yù)防給藥對(duì)局部腦缺血引起的腦功能障礙和梗塞范圍的影響。結(jié)果表明連續(xù)灌服給藥7天(200、100、50mg/kg/天)實(shí)施例1制得的PTS，對(duì)阻斷大鼠大腦中動(dòng)脈所致腦梗塞有明顯療效，腦梗塞組織百分比減了54.2％。采用行為評(píng)分法，結(jié)果表明，與尼莫地平類(lèi)似，高、中劑量實(shí)驗(yàn)組可明顯改善其行為障礙。
(2)治療性給藥取雄性Wistar大鼠50只，按體重隨機(jī)分為缺血對(duì)照組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組、大劑量(200mg/kg/天)實(shí)驗(yàn)組、中劑量(100mg/kg/天)實(shí)驗(yàn)組、小劑量(50mg/kg/天)實(shí)驗(yàn)組，每組10只。對(duì)各組大鼠分別腹腔注射水合氯醛350mg/kg麻醉，灼斷大鼠大腦中動(dòng)脈引起腦梗塞。將實(shí)施例1制得的PTS粉末用生理鹽水配成懸浮液，對(duì)實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物按照預(yù)定的劑量灌胃給藥。缺血對(duì)照組灌服蒸餾水4ml/kg/天，陽(yáng)性對(duì)照藥物組灌胃給予尼莫地平50mg/kg/天。各組連續(xù)給藥6天，于末次給藥2小時(shí)后，觀察阻塞后治療給藥實(shí)施例1制得的PTS對(duì)局部腦缺血引起的腦功能障礙和梗塞范圍的影響。結(jié)果表明阻塞后連續(xù)灌服給藥6天(200、100、50mg/kg/天)實(shí)施例1制得的PTS，對(duì)阻斷大鼠大腦中動(dòng)脈所致腦梗塞的梗塞組織百分比減少了37.1％，亦明顯改善腦梗塞大鼠的行為障礙。
綜上所述，表明實(shí)施例1制得的PTS對(duì)大鼠局部腦缺血有保護(hù)作用。
試驗(yàn)例6對(duì)大鼠血液粘度的影響取健康雄性Wistar大鼠50只，隨機(jī)分為2個(gè)對(duì)照組和3個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組10只，3個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別為大(80mg/kg)、中(40mg/kg)、小(20mg/kg)三個(gè)劑量組。將實(shí)施例1制得的PTS粉末配成的生理鹽水溶液，3個(gè)實(shí)驗(yàn)組按照預(yù)定劑量腹腔注射給藥所制得的PTS溶液，每天一次，共10天。陰性對(duì)照組腹腔注射給予和大劑量實(shí)驗(yàn)組等容量的生理鹽水，陽(yáng)性藥物對(duì)照組腹腔注射給予卡蘭30mg/kg，每天一次，共10天。于最后一次給藥后1小時(shí)用戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈取血，以3.8％枸櫞酸鈉水溶液抗凝，按血液粘度測(cè)定法測(cè)定血液粘度。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，多次腹腔注射實(shí)施例1制得的PTS粉末后可明顯降低全血濃度，高劑量組降低顯著(P＜0.05)，陽(yáng)性對(duì)照藥卡蘭亦明顯降低全血粘度。大劑量組使紅細(xì)胞壓積明顯下降，對(duì)血漿比粘度和血沉無(wú)顯著影響。
試驗(yàn)例7急性毒性試驗(yàn)選體重為18～22克的健康NIH小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，雌雄各半。各組給藥劑量分別為4444.44mg/kg、4000.00mg/kg、3600.00mg/kg、3240.00mg/kg、2916.00mg/kg，劑距比為1∶0.9。用滅菌的生理鹽水將實(shí)施例1制得的PTS粉末配制成PTS溶液，按照預(yù)定劑量給各實(shí)驗(yàn)組小鼠靜脈注射給藥所制得的PTS溶液，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算LD50(藥物半數(shù)致死量即在急性毒性實(shí)驗(yàn)中藥物引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物半數(shù)死亡的劑量)為3422.2mg/kg(3261.8～3590.6)，死亡前出現(xiàn)短暫的抽搐、驚跳、呼吸抑制繼而死亡。
試驗(yàn)例8長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)將實(shí)施例1制得的PTS粉末用生理鹽水配成濃的懸浮液，用灌胃針以2g/kg體重/天的劑量給大鼠灌胃給藥，共90天。試驗(yàn)結(jié)束后，評(píng)價(jià)大鼠的生理情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)大鼠飲食正常，體重增長(zhǎng)正常，血液學(xué)、血液生化指標(biāo)無(wú)明顯影響，組織學(xué)檢查各臟器未見(jiàn)明顯病變。
盡管結(jié)合優(yōu)選實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了說(shuō)明，但本發(fā)明并不局限于上述實(shí)施例，應(yīng)該理解，在本發(fā)明構(gòu)思的教導(dǎo)下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可進(jìn)行各種修改和改進(jìn)，所附權(quán)利要求概括了本發(fā)明的范圍。
權(quán)利要求
1.一種三七三醇皂苷組合物，該組合物是由三七提純得到的，其基本上由人參皂苷Rg1、Re和三七皂苷R1組成，其中人參皂苷Rg1的含量為30～70wt％，人參皂苷Re的含量為4～15wt％，三七皂苷R1的含量為7～25wt％，以及人參皂苷Rg1、Re和三七皂苷R1的含量之和最高為98wt％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三七三醇皂苷組合物，其特征在于，所述人參皂苷Rg1的含量為40～65wt％，所述人參皂苷Re的含量為4～10wt％，所述三七皂苷R1的含量為8～18wt％。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的三七三醇皂苷組合物，其特征在于，所述人參皂苷Rg1的含量為50～65wt％，所述人參皂苷Re的含量為6～9wt％，所述三七皂苷R1的含量為10～15wt％。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的三七三醇皂苷組合物，其特征在于，所述人參皂苷Rg1的含量為55～65wt％。
5.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的三七三醇皂苷組合物，其為顆粒劑、合劑、片劑、散劑、蜜丸、膠囊、注射劑、滴劑或貼劑。
6.一種三七三醇皂苷組合物的制備方法，該方法包括以下步驟(1)用濃度為50～90wt％的乙醇浸泡提取三七，所用的乙醇量為所用三七重量的至少3倍，收集乙醇提取液；(2)使所述乙醇提取液通過(guò)苯乙烯型大孔樹(shù)脂柱；和(3)用濃度為30～50wt％的乙醇對(duì)所述苯乙烯型大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行洗脫，收集洗脫液。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的三七三醇皂苷組合物的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)是如下完成的(a)將三七粉碎，得三七粉；(b)采用濃度為50～90wt％的乙醇對(duì)所述步驟(a)所得的三七粉進(jìn)行浸泡，所用的乙醇量為所用三七粉重量的至少2倍；和(c)采用濃度為50～90wt％的乙醇對(duì)所述步驟(b)所得的浸泡后的三七粉進(jìn)行滲漉，所用的乙醇量為所用三七粉重量的至少1倍，收集滲漉液。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的三七三醇皂苷組合物的制備方法，其特征在于，在所述步驟(b)和步驟(c)中所用乙醇的濃度為55～70wt％。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的三七三醇皂苷組合物的制備方法，其特征在于，在所述步驟(b)和步驟(c)中所用乙醇的濃度為約60wt％。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的三七三醇皂苷組合物的制備方法，其特征在于，在所述步驟(3)洗脫樹(shù)脂用乙醇的濃度為35～45wt％，所用的乙醇量為所用三七粉重量的至少1倍。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的三七三醇皂苷組合物的制備方法，其特征在于，在所述步驟(3)洗脫樹(shù)脂用乙醇的濃度為約40wt％。
12.根據(jù)權(quán)利要求6-11任一項(xiàng)所述的三七三醇皂苷組合物的制備方法，其特征在于，還包括以下步驟將所述步驟(3)收集的洗脫液進(jìn)行濃縮得三七三醇皂苷醇浸膏。
13.根據(jù)權(quán)利要求6-11任一項(xiàng)所述的三七三醇皂苷組合物的制備方法，其特征在于，還包括以下步驟將所述步驟(3)收集的洗脫液，采用柱層析或溶劑萃取的方法進(jìn)行進(jìn)一步純化。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的三七三醇皂苷組合物的制備方法，其特征在于，還包括以下步驟對(duì)所述三七三醇皂苷醇浸膏進(jìn)行干燥。
15.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的三七三醇皂苷組合物用于制備治療血管栓塞性疾病的藥物的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體涉及中藥三七的提純物及其制備方法和制藥用途。本發(fā)明提供的三七三醇皂苷組合物是由三七提純得到的，其基本上由人參皂苷Rg
文檔編號(hào)A61K36/258GK1771978SQ20041009060
公開(kāi)日2006年5月17日 申請(qǐng)日期2004年11月9日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月9日
發(fā)明者萬(wàn)方, 袁毓湘, 李明勁 申請(qǐng)人:成都華神集團(tuán)股份有限公司制藥廠