專利名稱：抗氧化組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及抑制生物體內活性氧的發(fā)生，并能減少所發(fā)生活性氧的抗氧化組合物及含有該抗氧化組合物的飲食品。
背景技術：
近年來得知活性氧在生物體內的生物體防御系及細胞中信號系擔任重要工作，但另一方面對生物體成分引起各種氧化障礙而成為老化及疾病的原因。
就活性氧而言，可舉例如超氧化物(.O2-)、羥自由基(HO.)、氫過氧化自由基(HOO.)、烷氧自由基(LO.)、烷過氧化自由基(LOO.)、一氧化氮(NO)等自由基類，及過氧化氫(H2O2)、單一態(tài)氧(1O2、singletoxygen)、過氧化硝酸鹽(ONOO-)、脂質過氧化物(LOOH)、次亞氯酸(HOCl)、臭氧(O3)等非自由基類。其中，超氧化物(.O2-)、羥自由基(HO.)、過氧化氫(H2O2)、及單一態(tài)氧(1O2)稱為狹義的活性氧。
至于這些活性氧對生物體的影響，可舉例如DNA螺旋的部分解開及因連鎖性自由基發(fā)生引起的組織損傷等。其結果已知引起支氣管氣喘等過敏性反應，因釋放組織胺引起發(fā)炎，心肌梗塞、狹心癥等缺血性心臟疾病及急性肝炎、脂肪肝等肝臟障礙疾病的惡化，誘發(fā)腦梗塞等腦血管障礙及因腦組織損傷引起的癡呆，及早產兒視網膜癥、肺氣腫、糖尿病、痛風、皮膚癌、妊娠中毒癥等疾病原因之一。
另外，活性氧對生物體的影響不僅如上述，在食品方面常成為引起變質或劣化或加速變質或劣化是眾所周知的事。
因此，在生物體或食品抑制活性氧的產生或減少活性氧的產生，在治療或預防這些疾病及抑制或預防食品引起變質或劣化方面極為重要。因此，對于具有能夠抑制在生物體內或食品產生活性氧的物質，或具有能夠減少在生物體內或食品產生活性氧的作用(即抗氧化作用)的物質(以下有時稱為抗氧化物質)，廣泛進行探索。
抗氧化物質，可舉例如源自天然物的脂溶性的生育酚(維生素E)、類胡蘿卜素(carotenoid)，水溶性的抗壞血酸(維生素C)等，及合成化合物的丁羥基甲苯(BHT)、丁羥基苯胺(BHA)等。
還有報告以減少活性氧為目的而試用超氧化岐化酶(SOD)。
另外還有報告將氨基酸當作抗氧化物質時，表現(xiàn)防止皮膚老化及各種疾病的效果(如參照專利文獻1)。
另外最近為求得充分的藥效與安全性，而試由生藥萃取物求得具有抗氧化作用的物質也有很多(如參照專利文獻2～14)，這些均利用源自生藥或植物的具抗氧化作用物質。
「專利文獻1」國際公開第94/14755號說明書「專利文獻2」日本專利特開昭60-224629號公報「專利文獻3」日本專利特開昭61-24522號公報「專利文獻4」日本專利特開平2-193930號公報「專利文獻5」日本專利特開平2-243632號公報「專利文獻6」日本專利特開平2-264727號公報「專利文獻7」日本專利特開平3-153629號公報「專利文獻8」日本專利特開平3-221587號公報「專利文獻9」日本專利特開平4-69343號公報「專利文獻10」日本專利特開平4-202138號公報「專利文獻11」日本專利特開平4-247010號公報「專利文獻12」日本專利特開平10-226787號公報「專利文獻13」日本專利特開2000-129256號公報「專利文獻14」日本專利特開2002-308767號公報發(fā)明內容但是，上述抗氧化物質的活性氧減少作用不充分，而BHT及BHA有致癌性的疑慮，故均難實際有實用性。
另外還因SOD為蛋白質，不僅其取得困難，且有口服給藥時被消化的問題，就算為解決此問題而改采注射給藥時，其血中的半衰期短，故無法滿足作為抗氧化物質。
還有，上述氨基酸并非天然存在的氨基酸，未被認可當作食品或食品添加物使用，故不能使用于向來的食品。
另外還已知生藥或植物萃取物所含多酚及丹寧類等的活性氧消除機制，在發(fā)生活性氧的反應中與如進行催化劑作用的鐵分結合而阻止其吸收，以抑制活性氧的發(fā)生。因此，多酚及丹寧類等抗氧化組合物，雖然抑制活性氧的發(fā)生，但因阻止鐵分吸收而引起貧血。
例如在腎疾病患者，出現(xiàn)紅血球膜中過氧化磷脂質的增加、血清羥自由基消除能力的減低等癥狀，而試用抗氧化劑于其治療。但腎疾病患者卻常伴隨腎臟性貧血，因此如上述理由，使用抗氧化劑可能使腎臟性貧血惡化。
因此，本發(fā)明的目的在于提供能作為食品、化妝品及醫(yī)藥品使用，且抑制活性氧的發(fā)生，并能減少所發(fā)生的活性氧，且能改善貧血之一種抗氧化組合物。
因此，本發(fā)明為(1)含有焦磷酸鐵所組成的抗氧化組合物；(2)上述(1)所述的抗氧化組合物中，焦磷酸鐵的平均粒徑為1μm以下；(3)上述(1)或(2)所述的抗氧化組合物中，焦磷酸鐵被乳化劑涂覆；(4)上述(1)～(3)所述中任一的抗氧化組合物為食品或醫(yī)藥品；及(5)上述(4)所述的抗氧化組合物為錠劑或膠囊劑的任一種。
因此，本發(fā)明的效果為依據(jù)本發(fā)明可提供能作為食品、化妝品及醫(yī)藥品使用，能抑制活性氧的發(fā)生，并能減少所發(fā)生的活性氧，且能改善貧血之一種抗氧化組合物。


圖1為腎疾病患者的血紅素值的變化圖。
圖2為以化學發(fā)光法測定腎疾病患者的過氧化氫含量的變化圖。
圖3為以化學發(fā)光法測定腎疾病患者的氧自由基含量的變化圖。
圖4為ESRD患者的血紅素值及血細胞比容值的變化圖。
圖5為ESRD患者的過氧化磷脂質含量的變化圖。
具體實施例方式
本發(fā)明的抗氧化組合物以含有焦磷酸鐵為一大特征。含鐵分的組合物當作鐵分補充劑使用向來廣為所知，但如本發(fā)明的同時具有鐵分補充與其相反的抗氧化作用的組合物則尚未知。具有此種特征的結果，能夠提供兼具抗氧化作用與改善貧血雙方功能的組合物。
另外對于本發(fā)明，所述的抗氧化即指抑制活性氧的發(fā)生或減少活性氧。
就活性氧而言，可舉例如超氧化物(.O2-)、羥自由基(HO.)、氫過氧化自由基(HOO.)、烷氧自由基(LO.)、烷過氧化自由基(LOO.)、一氧化氮(NO)等自由基類，及過氧化氫(H2O2)、單一態(tài)氧(1O2)、過氧化硝酸鹽(ONOO-)、脂質過氧化物(LOOH)、次亞氯酸(HOCl)、臭氧(O3)等非自由基類。其中，超氧化物(.O2-)、羥自由基(HO.)、過氧化氫(H2O2)、及單一態(tài)氧(1O2)稱為狹義的活性氧。
焦磷酸鐵是否表現(xiàn)抗氧化作用，可如使用化學發(fā)光分析儀(CLA-SP2、東北電子產業(yè)公司制、Chemiluminescence Analyzer)，測定因活性氧而由發(fā)光物質發(fā)生的化學發(fā)光以進行評估。因此，因本發(fā)明的抗氧化組合物而表現(xiàn)抗氧化作用時，化學發(fā)光會減少。
本發(fā)明的組合物中的焦磷酸鐵含量，只要能夠獲得抗氧化作用與改善貧血的必要量則無特別限定。
使用于本發(fā)明的焦磷酸鐵的平均粒徑，由提升鐵分吸收性的觀點，以1μm以下為佳，0.5μm以下更佳。此種平均粒徑的焦磷酸鐵，可如依國際公開第98/14072號說明書記載的以中和造鹽的制法，或以噴射磨(jet mill)等干式粉碎機或球磨機、橫置式濕式粉碎機DYNO-MILL等濕式粉碎機粉碎的制法等制造。另外還平均粒徑可如以雷射衍射型粒度分布測定裝置(SYMPATEC公司制、HELOS & RODOS)測定的。
還有，使用于本發(fā)明的焦磷酸鐵，由提升生物體吸收性及飲食品加工適應性的觀點，最好被乳化劑涂覆。
在此，所述的被乳化劑涂覆的狀態(tài)，乃指使用乳化劑進行乳化處理的狀態(tài)，而該狀態(tài)可以是否安定分散于水中來確認。
使用于涂覆的乳化劑，可舉例如甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、聚甘油縮合蓖麻醇酸酯、蔗糖脂肪酸酯、卵磷脂、溶血卵磷脂、三油酸五甘油、酵素分解卵磷脂等，而由生物體吸收性的觀點，以酵素分解卵磷脂較好。這些可單獨使用或2種以上并用。
被乳化劑涂覆的焦磷酸鐵(于本說明書中有時稱為乳化劑涂覆焦磷酸鐵)，可如以在溶解乳化劑的溶液中依國際公開第98/14072號說明書記載之中和造鹽反應得沉淀物后進行固液分離的方法，在可溶解如水等的乳化劑的溶劑中混合鐵鹽于溶解乳化劑的溶液后以噴霧干燥或冷凍干燥等去除溶劑的方法，或加熱熔解乳化劑再混合鐵鹽后冷卻、固化的方法等制得；而乳化劑在常溫下為液狀時，可直接均勻混合鐵鹽的方法等制得。另外還亦可使用太陽化學公司制的SUN ACTIVEFe-12、SUN ACTIVE Fe-P80等市售品。
在本發(fā)明的組合物中的乳化劑含量，由生物體吸收性及味道的觀點，對100重量份焦磷酸鐵以0.01～20重量份乳化劑為佳，而0.1～15重量份更佳。
本發(fā)明的組合物在不妨礙表現(xiàn)本發(fā)明所希望效果的范圍內，可再共同含有多糖類及其分解物、低聚糖、單糖類等糖類、蛋白質、勝肽、氨基酸等。這些可單獨或2種以上混合使用。
另外還本發(fā)明的組合物，由適合日常使用的觀點，以食品或醫(yī)藥品較好。
對本發(fā)明的食品，不僅為含有焦磷酸鐵的食品，也包含含有焦磷酸鐵的食品添加物。
包含于本發(fā)明的食品，可舉例如干燥食品、輔助食物等固體食品，及清涼飲料、礦泉水、嗜好飲料、酒精飲料等液體食品。至于固體食品，可舉例如錠片、慕斯、果凍、冰品、飴糖、巧克力、蘇打餅干、蛋糕、面包、口香糖、小點心等糕點，火腿、香腸等畜產加工品，魚板等水產加工品。又液體食品，可舉例如綠茶、烏龍茶、紅茶、花草茶等茶類，濃縮果汁、濃縮還原果汁、純果汁、混合果汁、果粒果汁、果汁飲料、蔬果汁、蔬菜汁、碳酸飲料、清涼飲料、乳類飲料、乳酸菌飲料、咖啡飲料、日本酒、啤酒、紅酒、雞尾酒、燒酒、威士忌酒等。
另外還包含于本發(fā)明的醫(yī)藥品，只要含有焦磷酸鐵即無特別限定。例如，其形態(tài)以溶液、懸浮物、粉末、固體成形物均可，而其劑型，可舉例如錠劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、口服液劑、注射劑、貼附劑、栓劑、吸入劑等。
本發(fā)明的組合物的制法并無特別限定，例如將焦磷酸鐵與其它原料以粉狀混合的制法、或焦磷酸鐵與其它原料溶解在溶劑中成為混合溶液的制法、或將此混合溶液冷凍干燥或噴霧干燥的制法等，可適用一般食品或醫(yī)藥品的制法。
例如對食品時，對既有食品以常法配合焦磷酸鐵，使制造后食品中焦磷酸鐵含量在所希望范圍內，以制造本發(fā)明的食品。又如于醫(yī)藥品，亦與制造食品相同，將焦磷酸鐵以常法與適合口服給藥的有機或無機載體、賦形劑、黏合劑、安定劑等配合，使焦磷酸鐵含量在所希望范圍內，以制造本發(fā)明的醫(yī)藥品。
為獲得本發(fā)明所希望的效果，本發(fā)明的組合物的給藥量通常若以焦磷酸鐵計算，則以0.1～200mg/日為佳，1～100mg/日更佳。但因有個人差異(癥狀種類與程度、年齡等)，故本發(fā)明的給藥量不限定如上述范圍，而為獲得本發(fā)明所希望的效果，可適當設定各人的具體給藥量。
本發(fā)明的組合物的給藥方法并無特別限定，但以口服給藥、靜脈給藥、直腸給藥較佳，而以口服給藥更佳，只要給藥使焦磷酸鐵含量在所希望范圍內即可。
其次，以實施例具體說明本發(fā)明，但本發(fā)明不受這些實施例的限定。
實施例1.制造抗氧化組合物將焦磷酸鐵30g、酵素分解卵磷脂(SUN LECITHIN L、太陽化學公司制)3g及三油酸五甘油(SUN SOFT A-173E、太陽化學公司制)17g用球磨機(神鋼PANTEC公司制)混合，得到被乳化劑涂覆的焦磷酸鐵。其次，加離子交換水800ml于此焦磷酸鐵后用翼型攪拌機分散數(shù)分鐘，隨后加糊精70g于此分散溶液，室溫攪拌數(shù)分鐘以溶解糊精。將所得溶液用噴霧干燥機噴霧干燥得抗氧化組合物100g。此抗氧化組合物中的焦磷酸鐵含量為26.6重量％，而以雷射衍射型粒度分布測定裝置(SYMPATEC公司制、HELOS & RODOS)測定的平均粒徑為0.68μm。
實施例2.制造抗氧化組合物將被乳化劑涂覆的焦磷酸鐵(太陽化學公司制、SUN ACTIVEFe-P80)、麥芽糖醇(東和化成公司制、AMALTY MR50)、乳糖、蔗糖脂肪酸酯(三菱化學食品公司制、RYOTO SUGARESTER S-370)、優(yōu)格香料(高砂香料工業(yè)公司制、YOUGERT MICRON)、DL-蘋果酸及甜菊依下示組成混合，并造粒壓錠成每錠250mg，制成含焦磷酸鐵錠劑，當作本發(fā)明的抗氧化組合物的1例。
乳化劑涂覆焦磷酸鐵 10.0重量％(25.00mg)麥芽糖醇 40.0重量％(100.00mg)乳糖 39.3重量％(98.25mg)蔗糖脂肪酸酯 4.0重量％(10.00mg)優(yōu)格香料 4.0重量％(10.00mg)DL-蘋果酸2.5重量％(6.25mg)甜菊 0.2重量％(0.50mg)所得錠劑中的焦磷酸鐵含量為2.66重量％，而所使用乳化劑涂覆焦磷酸鐵以雷射衍射型粒度分布測定裝置(SYMPATEC公司制、HELOS & RODOS)測定的平均粒徑為0.66μm。
實施例3.制造抗氧化組合物根據(jù)常規(guī)方法將實施例1制造的抗氧化組合物2g、小麥粉(低筋)500g、砂糖200g、奶油200g、全蛋汁(liquid whole egg)100g、及香草香料(高砂香料工業(yè)公司制)0.1g混合后制成小甜餅(cookies)。此小甜餅中的焦磷酸鐵含量為0.57重量％。
實施例4.制造抗氧化組合物根據(jù)常規(guī)方法將乳化劑涂覆焦磷酸鐵(太陽化學公司制、SUNACTIVE Fe-P80)2g、優(yōu)格450g、橘子汁(固體成分12％)400g、果糖葡萄糖液糖50g、乳酸鈣5g、HM果膠4g、橘子香料(高砂香料工業(yè)公司制)0.2g混合后，以水調制成全量為1000ml，進行均質化處理，制成水果優(yōu)酪乳。水果優(yōu)酪乳中的焦磷酸鐵含量為0.53重量％。
實施例5.抗氧化組合物的評估將實施例2制造的錠劑，對45名腎疾病患者每日給藥3錠，共5個月；又對25名ESRD(End-stage renal disease、末期腎疾病)患者每日給藥3錠，共6個月。每個月采取患者血液，測定血液成分。又給藥開始前定為第0個月。
所采取血液，冷凍保存至測定血液成分前為止，解凍后就下列項目進行評估。
(1)血紅素值用自動血球計數(shù)器測定血液中的血紅素值。
(2)血細胞比容值用自動血球計數(shù)器測定血液中的血細胞比容值。
(3)血液中活性氧含量用化學發(fā)光分析儀(CLA-SP2、東北電子產業(yè)公司制、Chemiluminescence Analyzer)，測定因活性氧而由發(fā)光物質發(fā)生的化學發(fā)光，以測定血液中的活性氧含量。
將血液樣品0.2mL與50mM磷酸緩沖生理食鹽水(pH7.4)0.1mL混合調制成供試樣品。取此供試樣品200μl放入化學發(fā)光分析儀(CLA-SP2、東北電子產業(yè)公司制)的樣品室中。在添加樣品后100秒期間，測定背景水平。隨后添加溶解于50mM磷酸緩沖生理食鹽水(pH7.4)的0.1mM光澤精(Lucigenin)0.1mL于樣品室中，當作發(fā)光物質。其次，測定于470nm的化學發(fā)光600秒，由測得數(shù)值減去背景水平數(shù)值的值即代表血液中的活性氧含量。
(4)過氧化磷脂質(Phosphatidylcholine hydroperoxide、PCOOH)含量用化學發(fā)光檢測-高效能液相層析法(CL-HPLC法)測定血液中的過氧化磷脂質含量。
取血清0.4mL加氯仿-甲醇混合液(1∶2(v/v))2.4mL，攪拌1分鐘后以4℃、3000rpm遠心分離15分鐘，采取上清液。其次，加氯仿0.8mL及去離子水1.04mL于此上清液并攪拌1分鐘后，以4℃、3000rpm遠心分離10分鐘，萃取脂質。
將所得樣品以CL-HPLC測定過氧化磷脂質。又CL-HPLC的條件如下移動相異丙醇∶甲醇∶去離子水＝0.695∶0.23∶0.75(v/v)流速1.0mL/分管柱Amide-80(TOSOH公司制)發(fā)光試劑溶解于50mM硼酸緩沖液(pH10)的2μg/ml魯米諾(Luminol)及10μg/ml細胞色素C的混合液；1.8mL/分(管柱分離后混合)
檢測波長430nm就來自腎疾病患者的血液，評估血紅素值、過氧化氫及超氧化物含量；而來自ESRD患者的血液，評估血紅素值、血細胞比容值及過氧化磷脂質含量。其結果如圖1～5所示。
由圖1～4的結果，可知本發(fā)明的抗氧化組合物不損害改善貧血效果，而由圖2、圖3及圖5的結果，得知本發(fā)明的抗氧化組合物能夠減低生物體內的活性氧。
因此，得知本發(fā)明的抗氧化組合物具有將生物體內產生的活性氧充分減少的作用及改善貧血效果。
由于本發(fā)明的抗氧化組合物不僅具有改善貧血效果，并具有有效的抗氧化作用，因此可以作為食品、化妝品或醫(yī)藥品使用。
權利要求
1.一種抗氧化組合物，其特征在于含有焦磷酸鐵。
2.根據(jù)權利要求1所述的抗氧化組合物，其特征在于所述的焦磷酸鐵的平均粒徑為1μm以下。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的抗氧化組合物，其特征在于所述的焦磷酸鐵被乳化劑涂覆。
4.根據(jù)權利要求1至3中任一項所述的抗氧化組合物，其特征在于其為食品或醫(yī)藥品。
5.根據(jù)權利要求4所述的抗氧化組合物，其為錠劑或膠囊劑的任一種。
全文摘要
本發(fā)明的目的在于提供能作為食品、化妝品及醫(yī)藥品使用，能夠抑制活性氧的發(fā)生，并能減少所發(fā)生的活性氧，且能改善貧血的一種抗氧化組合物。該抗氧化組合物為含有焦磷酸鐵所組成，及該抗氧化組合物為含有平均粒徑1μm以下的焦磷酸鐵所組成。
文檔編號A61K47/02GK1795768SQ20041010242
公開日2006年7月5日 申請日期2004年12月22日 優(yōu)先權日2004年12月22日
發(fā)明者伊藤俊宏, L·R·朱內賈, 鄭劍廷, 劉紹毅 申請人:財團法人臺灣血液凈化基金會