專利名稱：一種治療放射病的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種治療放射病的藥物，特別是關(guān)于一種治療放射病的生物制劑和中藥配合制成的藥物。
背景技術(shù)：
放射病是人體遭受大劑量強穿透力射線均勻或比較均勻地全身照射引起的損傷。根據(jù)受照射時間長短和照射次數(shù)分為急性放射病和慢性放射病。急性放射病是指人體在短時間(通常是數(shù)日)內(nèi)受到一次或多次大劑量照射所引起的全身性疾?。宦苑派洳∈侵冈谳^長時間內(nèi)連續(xù)或間斷受到超當量劑量限值的電離輻射作用，達到一定累積劑量后引起的多系統(tǒng)損害的全身性疾病。放射病可由外照射或內(nèi)照射引起，外照射放射病主要是受X射線、γ射線或中子流照射引起；內(nèi)照射放射病則是由于放射性物質(zhì)進入體內(nèi)而引起。
放射病的發(fā)病機理可歸納為(一)對分子的作用射線直接作用于生物大分子，大分子吸收能量后，發(fā)生激發(fā)、電離，引起化學鍵斷裂，生成大分子自由基，導致大量生物大分子結(jié)構(gòu)的破壞，如作用于核酸導致基因突變，染色體畸變；作用于氨基酸使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)破壞，影響蛋白質(zhì)的活性，酶和受體等的功能；作用于不飽和脂肪酸可致膜結(jié)構(gòu)損傷，影響線粒體的氧化磷酸化與三磷酸腺苷的生成。
(二)對細胞的影響細胞對電離輻射的敏感性與細胞增殖周期長短有關(guān)，增殖周期短對電離輻射敏感。如造血干細胞、小腸隱窩細胞、精原細胞、繁殖期卵泡顆粒細胞、晶體上皮等細胞周期短，對射線敏感性高，在較低劑量照射后即發(fā)生細胞凋亡。
(三)對組織器官的影響1.造血器官是電離輻射的主要靶器官，干細胞的輻射敏感性很高，照射后骨髓造血細胞增殖能力明顯受抑，其中幼紅細胞與淋巴細胞影響最早，粒細胞和巨核細胞次之，血竇也有明顯破壞。
2.淋巴細胞對電離輻射高度敏感，脾、胸腺、淋巴結(jié)和腸道淋巴濾胞等組織淋巴細胞減少或完全消失，機體免疫功能下降，易致感染發(fā)生。
3.凝血系統(tǒng)在大劑量照射后早期可被激活，血小板聚集反應增強，血液粘滯性升高，出現(xiàn)血液高凝性改變，導致微小血栓形成和微循環(huán)障礙，由于凝血因子消耗增多而生成不足，血小板減少、聚集功能降低，常導致出血綜合征。
4.消化系統(tǒng)以小腸對電離輻射最為敏感，依次為食管、胃、結(jié)腸、直腸、口腔。
5.內(nèi)分泌系統(tǒng)中垂體前葉照后初期分泌細胞增多，分泌功能增強，數(shù)日后漸減退。腎上腺皮質(zhì)和甲狀腺功能照射后增強，后漸減弱。性腺對射線很敏感，照射可產(chǎn)生永久性不育。
6.神經(jīng)系統(tǒng)在照射后早期大腦皮質(zhì)興奮，有煩躁、恐懼、頭痛、失眠等癥狀，以后進入抑制期。
7.皮膚的輻射損傷先出現(xiàn)的是小血管擴張，并可能伴有水腫與表皮細胞退變。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療放射病的藥物，此藥物是一種將生物制劑與中藥復合制成的膠囊，它對現(xiàn)代醫(yī)學和傳統(tǒng)醫(yī)學科學、巧妙的結(jié)合起來，發(fā)揮兩者的協(xié)同作用，對典禮輻射引起的損傷起到獨特的療效，并且無毒副作用，服用方便。
本發(fā)明的技術(shù)方案是設(shè)計一種治療放射病的藥物，其特征是它主要包括α-甘露聚糖肽10-40％、清除自由基類中藥60-90％。
所述的藥物包括有α-甘露聚糖肽10-40％、清除自由基類中藥10-60％、補中益氣類中藥10-50％。
所述的藥物包括有α-甘露聚糖肽10-40％、清除自由基類中藥10-50％、補中益氣類中藥10-40％、活血祛瘀類中藥10-30％。
所述的α-甘露聚糖肽10-40％、清除自由基類中藥10-30％、補中益氣類中藥5-20％、活血祛瘀類中藥10-20％、滋補肝腎類中藥10-30％。
所述的清除自由基類中藥有川芎、丹參、當歸、何首烏、茯苓、五味子、人參、黨參、黃芪、女貞子、鹿茸、冬蟲草、淫羊藿、菟絲子、山茱萸；補中益氣類中藥有黨參、淮山、黃芪、人參、甘草、當歸、熟地；所述的活血祛瘀類中藥有桃仁、當歸、枳殼、川芎、柴胡、紅花、牛膝、赤勺、地黃、桔梗、甘草、丹參、蒲黃、乳香、沒藥、延胡索等；三棱、莪術(shù)；所述的滋補肝腎類中藥有熟地黃、山萸、山藥、女貞子、枸杞子、天麻、白芷、何首烏、丹參、川芎、當歸、妙蒺藜、桑葉、墨旱蓮、白芍、黃精、甘草。
所述的藥物每1000g中包括有α-甘露聚糖肽270g、川芎50g、丹參50g、當歸50g、何首烏50g、茯苓80g、五味子80g、人參30g、黨參50g、黃芪50g、女貞子50g、鹿茸30g、冬蟲草30g、淫羊藿30g、菟絲子50g、山茱萸50g。
所述的藥物每1000g中包括有α-甘露聚糖肽260g、川芎40g、丹參40g、何首烏30g、茯苓40g、五味子50g、女貞子40g、鹿茸20g、冬蟲草20g、淫羊藿20g、菟絲子40g、山茱萸40g、黨參80g、淮山20g、黃芪80g、人參80g、甘草20g、當歸60g、熟地20g。
所述的藥物每1000g中包括有α-甘露聚糖肽260g、丹參30g、何首烏20g、茯苓30g、五味子40g、女貞子30g、鹿茸10g、冬蟲草20g、淫羊藿20g、菟絲子30g、山茱萸20g、黨參50g、淮山20g、黃芪40g、人參50g、熟地30g、桃仁20g、當歸20g、枳殼20g、川芎20g、柴胡20g、紅花20g、牛膝20g、赤勺10g、地黃10g、桔梗20g、甘草20g、丹參10g、蒲黃10g、乳香10g、沒藥20g、延胡索20g、三棱10g、莪術(shù)20g。
所述的藥物每1000g中包括有α-甘露聚糖肽260g、何首烏20g、茯苓30g、五味子30g、鹿茸10g、冬蟲草20g、淫羊藿20g、菟絲子30g、山茱萸20g、黨參30g、淮山20g、黃芪20g、人參20g、熟地20g、桃仁20g、枳殼15g、柴胡10g、紅花15g、牛膝10g、赤勺10g、地黃10g、桔梗15g、丹參15g、蒲黃5g、乳香10g、沒藥15g、延胡索10g、三棱10g、莪術(shù)10g、熟地黃10g、山萸10g、山藥20g、女貞子10g、枸杞子20g、天麻10g、白芷10g、何首烏10g、丹參20g、川芎30g、當歸30g、妙蒺藜10g、桑葉20g、墨旱蓮10g、白芍10g、黃精10g、甘草30g。
本發(fā)明特點是α-甘露聚糖肽是一種生物反應調(diào)節(jié)劑，具有增強機體免疫力，促進骨髓造血功能，保護胃腸道免受損傷，能調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)的活動使之處于平衡狀態(tài)；黨參、黃芪、當歸等中藥具有補中益氣，補氣固表，補血活血，養(yǎng)血之功效；桃仁、三七、穿山甲等中藥具有消腫排膿，散瘀止血，活血祛瘀，消腫止痛；枸杞子、甘草等中藥有滋補肝腎，益精明目，補脾益氣，清熱解毒功效；維生素C、銀杏葉等中藥具有極強的自由基清除能力，并能激活機體的抗氧化酶類。該方為中西藥復方制劑，各成分之間相互協(xié)同，作用獨特。
具體實施例方式
由于本發(fā)明將α-溶血鏈球菌菌種搭載返回式太空飛行器(宇宙飛船或返回式衛(wèi)星)，利用太空中微(零)重力、宇宙射線、交變磁場、高真空、高熱深冷等因素的綜合作用，使菌株的DNA雙鏈結(jié)構(gòu)斷裂，基因組發(fā)生重排，從而產(chǎn)生新的菌株。返回地面后，對經(jīng)過太空搭載的菌株進行培養(yǎng)和篩選，通過研究其形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化反應、代謝產(chǎn)物、遺傳性狀及蛋白表達、遺傳穩(wěn)定性、中試生產(chǎn)指標等內(nèi)容，優(yōu)選出其中的正變異、遺傳特性穩(wěn)定的菌種，經(jīng)培養(yǎng)發(fā)酵后得到治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥物。該菌種已經(jīng)在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，編號為CGMCCNo.1082。
特別是α-溶血鏈球菌D33菌株經(jīng)太空搭載誘變，地面上的篩選、分離和純化后，選育出發(fā)酵單位更高、所分泌的甘露聚糖肽含量更高的高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)菌株T33株。通過中國科學院微生物研究所對T33菌株及D33菌株的全細胞蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)分析和菌株的基因組DNA限制性酶切分析(RFLP/PFGE)比較，可以證明空間誘變及地面篩選出的T33菌株其基因有變異。該突變菌株在遺傳上穩(wěn)定，有較強的生產(chǎn)適應性，由其發(fā)酵產(chǎn)生的甘露聚糖肽含量提高，多肽含量比國家標準(80％)提高3至5倍，西安市藥品檢驗所送樣測定達到271.6％，發(fā)酵含量比對照組產(chǎn)物含量平均高出三倍以上。該菌種經(jīng)過神舟系列飛船航天搭載太空誘變，由北京中科院微生物所和西北大學生物系對菌種進一步篩選培養(yǎng)育種形成遺傳性質(zhì)穩(wěn)定，變異特征明顯的高產(chǎn)高效菌種。該菌種每發(fā)酵單位中α-太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽含量提高了幾倍以上。(見附件材料1陜西省科學技術(shù)廳陜西省科學技術(shù)成果鑒定證書材料附件材料2太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽生產(chǎn)菌株經(jīng)“神舟三號”飛船搭載公證書。
附件材料3太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽生產(chǎn)菌株經(jīng)“神舟三號”飛船搭載返回地面篩選報告附件材料4中國科學院微生物所關(guān)于“神舟三號”飛船搭載太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽生產(chǎn)菌株與地面對照菌的形態(tài)生理生化鑒定報告書附件材料5中國科學院微生物所關(guān)于“神舟三號”飛船搭載太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽生產(chǎn)菌株與地面對照菌的SDS-PAGE及RFLP/PFGE分析鑒定報告書附件材料6陜西省藥品檢驗所“神舟三號”太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽口服液檢測報告附件材料7科技查新報告復印件附件材料8中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏菌種保藏受理通知書)菌種選育在α-溶血鏈球菌生長規(guī)律的基礎(chǔ)上，選定較合適生長時期的菌種，采用平皿生長的菌落、浸入其它物質(zhì)中的菌懸液、帶菌的砂土等方法，于2002年3月25日搭載“神舟三號”宇宙飛船。在太空軌道(近地點高度200公里、遠地點高度350公里)進行了6天零18小時的在軌飛行。太空的特殊條件主要體現(xiàn)為微重力、高真空、高輻射、交變磁場等特殊環(huán)境。在外層空間飛行的菌種被置于一個與地球上的生態(tài)環(huán)境完全不同的環(huán)境中，主要包括來自磁場俘獲的電子、質(zhì)子及低能重粒子；來自銀河系的宇宙射線如質(zhì)子、粒子及更重的高能重粒子；來自太陽磁暴的質(zhì)子及重粒子等。這些粒子作用于微生物細胞核中的DNA雙鏈結(jié)構(gòu)，可導致雙鏈斷裂。微重力、高真空環(huán)境可使DNA的堿基序列發(fā)生重組，即基因組的重組和變異。變異后產(chǎn)生的新菌株，其形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化反應、代謝產(chǎn)物、遺傳性狀及蛋白表達、中試生產(chǎn)指標等均會發(fā)生不同程度的變化。在宇宙飛船返回地面后，經(jīng)過進一步篩選，僅優(yōu)選出其中0.2％的正變異且遺傳特性穩(wěn)定的菌株，經(jīng)培育制成生產(chǎn)菌種。這種經(jīng)航天搭載誘變后選育出的菌種已經(jīng)在在2003年12月29日由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，編號為CGMCCNo.1082。
實驗及中試生產(chǎn)結(jié)果表明，經(jīng)空間誘變后的新型太空菌種在遺傳特性上穩(wěn)定，有較強的生產(chǎn)適應性，由其發(fā)酵產(chǎn)生的甘露聚糖肽含量提高，多肽含量比國家標準(80％)提高3至5倍，西安市藥品檢驗所送樣測定達到271.6％，發(fā)酵含量比對照組產(chǎn)物含量平均高出三倍以上，發(fā)酵周期大大縮短。
制備方法太空誘變菌種生產(chǎn)甘露聚糖肽的制備過程本發(fā)明所述的太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽是由以下方法制備太空菌種制備---一級發(fā)酵---二級發(fā)酵-----發(fā)酵液提純，最終生產(chǎn)出甘露聚糖肽。
①太空菌種制備以經(jīng)過空間誘變育種精心選育的α-溶血鏈球菌作為生產(chǎn)菌種。
A.斜面種子培養(yǎng)基牛肉膏0.5％，酵母膏0.6％，蛋白胨0.5％，葡萄糖0.4％，氯化鈉0.5％，瓊脂3％，綿羊血8％；pH7.4。
斜面種子培養(yǎng)基滅菌溫度121℃，時間30分鐘，蒸汽壓力0.12Mpa。
啟封菌種冷凍管，用無菌肉湯培養(yǎng)基稀釋，在無菌條件下接入血斜面，接種后置38℃恒溫培養(yǎng)30小時。
B.肉湯種子培養(yǎng)基牛肉膏0.5％，酵母膏0.6％，蛋白胨0.5％，葡萄糖0.4％，氯化鈉0.5％；pH7.4。
肉湯種子培養(yǎng)基滅菌溫度121℃，時間30分鐘，蒸汽壓力0.12Mpa。
將培養(yǎng)好的斜面菌種在無菌條件下按9％接種量，接入肉湯種子培養(yǎng)基內(nèi)，38℃恒溫培養(yǎng)30小時。
②發(fā)酵過程發(fā)酵培養(yǎng)基牛肉膏0.4％，酵母膏0.5％，蛋白胨0.5％，葡萄糖0.4％，氯化鈉0.5％。
發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌溫度121℃，時間30分鐘，蒸汽壓力0.12Mpa。
A.一級發(fā)酵罐將優(yōu)良的肉湯菌種在無菌條件下按10％接種量，接入一級種子罐，在29℃恒溫培養(yǎng)30小時，罐壓不超過0.02Mpa，通氣量以能翻動培養(yǎng)液為宜，連續(xù)充分攪拌。
B.二級發(fā)酵罐將一級發(fā)酵培養(yǎng)液在無菌條件下按20％接種量，接入發(fā)酵罐，在29℃恒溫培養(yǎng)70小時，罐壓不0.02Mpa，滅活放罐。滅活采用加溫使發(fā)酵液溫度達到100℃，保溫60分鐘，冷卻靜置。
③提取過程a、發(fā)酵液進行濃縮，使?jié)饪s液體積與發(fā)酵液體積比控制在1∶15-1∶20或酌情而定。
b、發(fā)酵液的濃縮液加入80-99％乙醇，體積量比控制在1∶1.5-1∶5.5或酌情而定。充分攪拌靜置后，離心去除上清液，沉淀用蒸餾水溶解，調(diào)pH5.0，得到溶解液并將溶解液靜置。
c、再將溶解液離心去除雜質(zhì)得到上清液，準確量取清液體積，按上清液體積計算出所需乙醇量，調(diào)pH值，將乙醇緩慢加入到上清液中，并充分攪拌，靜置后離心去除上清液得到沉淀物。
d、沉淀物再用蒸餾水溶解，調(diào)pH，離心，上清液再加乙醇沉淀。這樣的工藝反復操作至中間檢測合格為止，得到的沉淀物為太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽粗品。真空干燥3-8小時，即得到太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽產(chǎn)品。
上述方法得到的產(chǎn)品的檢驗[性狀]本品為白色或微黃色無定形粉末；無臭、無味。
本品在水中易溶，在乙醇、氯仿及丙酮中不溶。
比旋度取本品，精密稱定，加水溶解并稀釋成每1ml中約含IOmg的溶液，依法測定(中國藥典2000年版二部附錄vIE)，比旋度為+70℃至+80℃。
1、取本品10mg，加水0.5ml使溶解，加a-萘酚乙醇溶液(5-100)1ml，搖勻，沿管壁緩緩加硫酸0.5ml，數(shù)分鐘后，界面呈紫紅色。
2、取本品，加水制成每1ml中含1mg的溶液，取約10ul點于濾紙上，晾干，用無水乙醇固定，置高硝酸溶液(取高碘酸1.2g，加水30ml溶解后。加0.2mol/L醋酸鈉溶液1.5ml與乙醇100ml，混勻即得。置暗處保存，可使用數(shù)月)中浸泡5分鐘，取出，用70％乙醇溶液沖洗，置還原液(取碘化鉀5g，硫代硫酸鈉5g，加水100ml使溶解，再加乙醇150ml、2mol/L鹽酸液2.5ml，隨加隨攪拌，臨用時配)中浸泡5分鐘，取出，用70％乙醇溶液沖洗，置品紅業(yè)硫酸試液中浸泡約30分鐘，取出，用焦亞硫酸鈉溶液(取焦亞硫酸鈉0.4g，加鹽酸1ml，加水溶解使成100ml，即得)，沖洗，晾干，在濾紙片點樣處應呈紫紅色。
3、取供試品和對照品適量，分別加氯化鈉注射液制成每1ml中含1mg的溶液作為供試品溶液和對照品溶液，按甘露聚糖肽免疫原性測定法試驗，供試品和對照品管應均無溶血發(fā)生。
1、酸度取本品，加水制成每1ml中含10mg的溶液，依法測定(中國藥典2000年版二部附錄VIH)，pH值應為3.0-5.0。
2、吸收度取本品，加水制成每1ml中含0.4mg的溶液，照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄VIA)，在260nm的波長處，其吸收度不得大于0.25，在280nm的波長處，其吸收度不得大于0.20。
3、總氮量取本品，照氮測定法(中國藥典2000年版二部附錄VIID第二法)測定。按干燥品計算，含總氮量應為0.8-2.0％。
4、免疫原性取供試品和對照品適量，分別加氯化鈉注射液制成每1ml中含10mg的溶液，再分別用磷酸鹽緩沖液制成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256的稀釋液作為供試品溶液和對照品溶液，依法檢查(附甘露聚糖肽免疫原性測定法)，供試品不溶血管的最低濃度應不得高于對照品相應濃度的一倍以上。
5、干燥失重 取本品，在105℃干燥至恒重，減失重量不得過5.0％(中國藥典2000年版二部附錄VIIIL)。
6、重金屬 取本品，在1.0g，依法檢查(中國藥典2000年版VIIIH)含重金屬不得過百萬分之二十。
7、異常毒性取本品，加氯化鈉注射液制成每1ml中含0.5mg的溶液，依法檢查(中國藥典2000年版附錄XIC)。按靜脈注射法給藥，應符合規(guī)定(供注射用)。
1.對照品溶液的制備精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的D-甘露糖對照品0.1g置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度。搖勻；精密量取5ml，置100ml的量瓶中，加水至刻度，搖勻。每1ml中含甘露糖50ug。
2.供試品溶液備取本品適量，精密稱定，加水溶解制成每1ml中含40ug的溶液。
3.標準曲線的制備精密稱取對照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分別置具塞試管中，各加水至1.0ml，再加3％苯酚溶液1.0ml，搖勻，沖入硫酸4.5ml，搖勻，放置于室溫，以0管為空白。照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄IVA)在490nm的波長處測定吸收度。以甘露糖ug數(shù)對相應的吸收度，計算回歸方程。
4.測定法精密量取供試品溶液1.0ml，照標準曲線制備項下自“再加3％苯酚溶液1.0ml”起依法操作，測定吸收度，由回歸方程計算甘露糖含量。
甘露聚糖肽免疫原性測定法(補體結(jié)合法)；1、試液A.酸鹽緩沖液(pH7.2)取氯化鈉8.5g、磷酸氫二鈉0.565g及磷酸二氫鉀0.135g，加水至1000ml使其溶解，加10％硫酸鎂溶液1ml，搖勻。
B.1％羊紅細胞懸液羊血紅細胞的制備由綿羊頸靜脈無菌采血于盛有等量阿氏液(取葡萄糖20.5g、枸椽酸鈉8.0g、氯化鈉4.2g，枸椽酸5.5g，加水至1000ml使溶解，100℃滅菌30分鐘)的無菌容器中，4℃保存。
1％羊血紅細胞懸液的制備 取上述羊血紅細胞適量，用氯化鈉注射液洗滌三次，每次離心5分鐘(2000轉(zhuǎn)/分)，取壓積羊血紅細胞，用氯化鈉注射液制成1％羊血紅細胞懸液。取懸液，用氯化鈉注射液稀釋20倍制成供試品溶液，另取等量懸液加水稀釋20倍作為空白溶液，照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄IVA)，在541nm的波長處測定，其吸收度應為0.65-0.70，如超出限度應調(diào)節(jié)1％羊紅細胞懸液的濃度。
C.溶血素及致敏羊血紅細胞溶血素的制備取上述壓積羊血紅細胞，用氯化鈉注射液制成25％羊血紅細胞懸液。取家兔1只，靜脈注射上述羊血紅細胞懸液，每日一次，共七次，前三次3ml，后三次5ml，末次注射后七日采血。分離血清，56℃.30分鐘滅活，分裝，0℃以下保存。
溶血素單位的測定取溶血素適量，加磷酸鹽緩沖液分別制成1∶1000、1∶2000、1∶3000、1∶4000、1∶5000、1∶6000、1∶7000、1∶8000、1∶9000、1∶10000的稀釋液，各取0.1ml置試管中，加1％羊血細胞懸液0.1ml，搖勻，加稀釋度為1∶30的豚鼠血清(補體)0.2ml及磷酸鹽緩沖液0.2ml，搖勻，37℃保溫30分鐘，完全溶血管的最高稀釋度為1單位溶血素。
致敏羊血紅細胞的制備臨用前，將2％的羊血紅細胞懸液與2單位溶血索等體積混合，37℃保溫15分鐘即得。
補體取三只以上的豚鼠，心臟采血，離心分離血清，0℃以下保存。
補體單位的測定取補體適量，加磷酸鹽緩沖液，分別制成1∶40、1∶60、1∶80、1∶100、1∶120、1∶140、1∶160、1∶180的稀釋液，各取0.2ml置試管中，加0.2ml磷酸鹽緩沖液，搖勻，37℃保溫30分鐘后，分別加致敏羊血紅細胞0.2ml，搖勻，37℃再保溫30分鐘。完全溶血管的最高稀釋度為1單位的補體。
抗體取甘露聚糖肽對照品適量，加氯化鈉注射液制成每1ml中含10mg的對照品溶液免疫家兔，隔日采用耳靜脈注射對照品溶液一次。第一次注射0.2ml，第二次至第五次各注射0.5ml，第六次至第十次各注射1.0ml，第十一次至第十五次各注射2.0ml，末次注射后三日采血，離心分離血清，56℃下30分鐘滅活，分裝，0℃以下保存(臨用前，需56℃30分鐘再次滅活)。
抗體單位的測定取抗體適量，加磷酸鹽緩沖液分別制成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32.1∶64、1∶128的稀釋液，各取0.1ml置試管中，加甘露聚糖肽對照品溶液0.1ml及2單位補體0.2ml，搖勻，于4-8℃放置4小時以上，置37℃保溫30分鐘，不溶血管的最高稀釋度為1單位抗體。同時設(shè)抗原(不加抗體，以0.1ml磷酸鹽緩沖液代替)、抗體(不加抗原，以0.1ml磷酸鹽緩沖液代替)、補體(不加抗原，抗體，以0.2ml磷酸鹽緩沖液代替)對照管，以上三種對照管應全溶血；另設(shè)的致敏羊血紅細胞(不加抗原、抗體和補體，以0.4ml磷酸鹽緩沖液代替)對照管應不溶血。
2、免疫原性測定法取甘露驟糖肽對照品與供試品適量，照藥品項下的規(guī)定制成不同濃度的對照品溶液和供試品溶液，各取0.1ml置試管中，加入2單位抗體0.1ml及2單位補體0.2m1.搖勻，于4-8℃放置4小時以上，置37℃保溫30分鐘，加入致敏羊血紅細胞0.2ml，搖勻，37℃再保溫30分鐘。觀察各管的溶血情況，不溶血管的最低濃度代表甘露聚糖肽的免疫原性。同時設(shè)抗原(不加抗體，以0.1ml磷酸鹽緩沖液代替)、抗體(不加抗原，以0.1ml磷酸鹽緩沖液代替)、補體(不加抗原、抗體、以0.2ml磷酸鹽緩沖液代替)對照管，以上三種對照管應全溶血另設(shè)的致敏羊血紅細胞(不加抗原、抗體和補體，以0.4ml磷酸鹽緩沖液代替)對照管應不溶血。
實施例1取上述α-甘露聚糖肽100mg，維生素C3g，銀杏葉100g，黨參120g，黃芪100g，當歸100g，桃仁80g，三七80g，穿山甲80g，枸杞子150g，甘草100g，制成膠囊粒，每粒5g。
制備過程將以上中藥煎煮→提取藥汁→過濾去渣→進行醇沉濃縮→再干燥噴霧→粉碎→與α-甘露聚糖肽和維生素C混合→制?！|(zhì)檢合格后→進行膠囊填充→分裝成品。
具體生產(chǎn)方法按中華人民共和國藥典2000版一部膠囊的制備工藝執(zhí)行(國家藥典委員會編，化學工業(yè)出版社出版)。
其它實施例與實施例1只是用藥成分不同，其它生產(chǎn)過程完全相同。
實施例2的藥物1000g中含α-甘露聚糖肽270g、川芎50g、丹參50g、當歸50g、何首烏50g、茯苓80g、五味子80g、人參30g、黨參50g、黃芪50g、女貞子50g、鹿茸30g、冬蟲草30g、淫羊藿30g、菟絲子50g、山茱萸50g。
實施例3的藥物1000g中含α-甘露聚糖肽260g、川芎40g、丹參40g、何首烏30g、茯苓40g、五味子50g、女貞子40g、鹿茸20g、冬蟲草20g、淫羊藿20g、菟絲子40g、山茱萸40g、黨參80g、淮山20g、黃芪80g、人參80g、甘草20g、當歸60g、熟地20g。
實施例4的藥物1000g中含α-甘露聚糖肽260g、丹參30g、何首烏20g、茯苓30g、五味子40g、女貞子30g、鹿茸10g、冬蟲草20g、淫羊藿20g、菟絲子30g、山茱萸20g、黨參50g、淮山20g、黃芪40g、人參50g、熟地30g、桃仁20g、當歸20g、枳殼20g、川芎20g、柴胡20g、紅花20g、牛膝20g、赤勺10g、地黃10g、桔梗20g、甘草20g、丹參10g、蒲黃10g、乳香10g、沒藥20g、延胡索20g、三棱10g、莪術(shù)20g。
實施例5藥物1000g中包括有α-甘露聚糖肽260g、何首烏20g、茯苓30g、五味子30g、鹿茸10g、冬蟲草20g、淫羊藿20g、菟絲子30g、山茱萸20g、黨參30g、淮山20g、黃芪20g、人參20g、熟地20g、桃仁20g、枳殼15g、柴胡10g、紅花15g、牛膝10g、赤勺10g、地黃10g、桔梗15g、丹參15g、蒲黃5g、乳香10g、沒藥15g、延胡索10g、三棱10g、莪術(shù)10g、熟地黃10g、山萸10g、山藥20g、女貞子10g、枸杞子20g、天麻10g、白芷10g、何首烏10g、丹參20g、川芎30g、當歸30g、妙蒺藜10g、桑葉20g、墨旱蓮10g、白芍10g、黃精10g、甘草30g。
本發(fā)明所述治療放射病膠囊的毒理研究①急性毒性試驗家兔一次口服50g，未見死亡及任何不良反應發(fā)生；②亞急性毒性試驗家兔每日口服25g，連續(xù)用藥2個月檢查肝腎功能、血象及各臟器組織均無異常變化；③豚鼠過敏試驗為陰性；④致畸致死試驗均為陰性。
動物藥效學試驗實驗一上述四種復方膠囊對小鼠急性造血功能停滯的影響。
通過觀察BACB/C小鼠經(jīng)60Co射線一次全身照射后外周血像、骨髓像、骨髓、肝脾的病理改變，建立了適合本實驗的急性造血功能停滯的動物模型，并探討了本發(fā)明所述的四種復方膠囊對急性造血功能停滯的治療作用，實驗結(jié)果提示本發(fā)明所述的四種復方膠囊均可作為治療造血功能障礙的有效藥物，并且無毒副作用。
1材料與方法1.1材料(1)動物近交系BACB/C小鼠1120只，8-12周齡，體重18-20g，雌雄各半。由西安交通大學醫(yī)學院實驗動物中心提供。
(2)儀器S/SMEXDP-460型外周血像檢測儀、baker810型血小板檢測儀，均為日本產(chǎn)。
(3)檢測和觀察項目 肝、脾、骨髓病理切片；骨髓像、外周血像。
(4)藥品α-甘露聚糖肽、本發(fā)明所述四種復方膠囊均由本公司提供；沙棘油由秦永沙棘有限公司提供。
1.2方法(1)模型建立220只小鼠自由飲水，進硬塊食。禁食6-8h后經(jīng)60Co射線一次全身照射，距離100cm，劑量率203.66rad/min，劑量450rad，時間2min22s。照射后(除死亡外)在3d，7d，15d，30d分別處死40只，查上述檢測項目。
(2)分組小鼠900只，60Co射線照射后隨機分成七組I組單純生理鹽水對照組，II組本發(fā)明所述第一種復方膠囊治療組，III組本發(fā)明所述第二種復方膠囊治療組，IV組本發(fā)明所述第三種復方膠囊治療組，V組本發(fā)明所述第四種復方膠囊治療組，VI組α-甘露聚糖肽治療組，VII組沙棘油治療組。
(3)實驗過程 I組生理鹽水灌胃0.2ml/只，每日2次；II組本發(fā)明所述第一種復方膠囊灌胃0.5g/只，每日2次；III組本發(fā)明所述第二種復方膠囊灌胃0.5g/只，每日2次；IV組本發(fā)明所述第三種復方膠囊灌胃0.5g/只，每日2次；V組本發(fā)明所述第四種復方膠囊灌胃0.5g/只，每日2次；VI組α-甘露聚糖肽口服液灌胃1ml/只，每日2次；VII組沙棘油灌胃0.2ml/只，每日2次。治療20d，40d，60d后每組分別取40只，檢查各項指標。其中用8號或9號針頭捶打小鼠左后腿股骨干骨髓，10μl小鼠血清稀釋后涂片，6h內(nèi)瑞氏染色，顯微鏡油鏡觀察骨髓像，取小鼠右股骨及肝脾等臟器作病理檢查。
2實驗結(jié)果2.1模型模型小鼠主要臟器病理改變3d肝細胞壞死顯著，部分細胞變性退變，細胞碎裂，核固縮；脾臟髓質(zhì)內(nèi)可見灶性細胞壞死，輕度纖維化及含鐵血黃素沉積；骨髓增生減低，造血細胞減少，血竇充血、擴張。7d肝脾大部退變，部分壞死；骨髓增生重度減低，造血細胞明顯減少，非造血細胞增多，血竇明顯擴張，中小靜脈擴張、充血、出血。15d肝細胞壞死，殘有條索狀肝細胞，脾臟髓質(zhì)中有片狀壞死區(qū)；骨髓造血進一步惡化，個別出現(xiàn)脂肪髓。30d肝細胞有輕度增生，邊緣有片狀壞死區(qū)，脾臟髓質(zhì)中有片狀壞死點，周圍組織部分纖維化；骨髓增生減低，有核細胞有所回升，血竇仍有擴張、充血。造模后不同時間小鼠外周血像變化，見表1。造模后不同時間小鼠骨髓像變化，見表2。
表1照射后動物外周血像改變(X±SE)

注模型組與對照組比較，P＜0.05。
表1、表2的實驗數(shù)據(jù)表明造模后動物在開始的7d內(nèi)血像逐漸下降，模型組外周血WBC、RBC及HB的量均明顯下降，與對照組有顯著性差異，造模第15d-30d造血功能嚴重障礙，30d后血像有回升的趨勢；造模第3d、7d、15d、30d，骨髓涂片模型組粒系細胞和紅系細胞數(shù)均明顯減少，與對照組有顯著性差異，增生程度從減低，重度減低，低下到活躍，30d后骨髓像有回升的趨勢。故此造血功能障礙，給藥物治療創(chuàng)造了有利條件，符合本實驗要求。
表2照射后動物骨髓像改變(X±SE)

注模型組與對照組比較，P＜0.01。
2.2藥物作用于模型的實驗觀察治療后骨髓病理改變治療20dI組骨髓造血功能進一步惡化，個別出現(xiàn)脂肪髓。II組-V組骨髓增生活躍，有核細胞數(shù)增多，造血細胞增多，非造血細胞減少，骨髓間質(zhì)血竇水腫擴張充血較前好轉(zhuǎn)。VI組、VII組骨髓病理改變程度介于上兩種之間。
治療40dI組骨髓增生減低，有核細胞有所回升，血竇仍有擴張、充血。II組-V組骨髓增生明顯活躍，造血細胞明顯增多，血竇無明顯擴張充血水腫。VI組、VII組骨髓增生活躍，有核細胞數(shù)增多，造血細胞增多，骨髓間質(zhì)血竇仍有水腫擴張充血。
治療60dI組骨髓造血明顯恢復，血竇擴張充血恢復不明顯。II組-VII組骨髓造血基本恢復正常。
治療后動物外周血像變化見表3，治療后動物骨髓像變化見表4。
表3治療后動物外周血像變化(X±SE)


表3的實驗數(shù)據(jù)表明I組(即生理鹽水對照組)外周血WBC、RBC及HB的量較正常水平低，40d-60d血像有所回升；II組-V組(即本發(fā)明所述的四種復方膠囊治療組)外周血WBC、RBC及HB的量均顯著升高，且隨著膠囊配方的加強，療效愈加顯著；VI組(即α-甘露聚糖肽口服液治療組)外周血像較I組稍有回升，但不顯著；VII組(即沙棘油治療組)外周血像與VI組無顯著差異。說明本發(fā)明所述的四種復方膠囊對放射所致的外周血像下降有很好的治療作用，療效顯著優(yōu)于單用α-甘露聚糖肽口服液和沙棘油。
表4治療后動物骨髓像變化(X±SE)


表4的實驗數(shù)據(jù)表明I組(即生理鹽水對照組)骨髓的粒系和紅系增生程度較正常水平低，40d-60d骨髓增生程度有所回升；II組-V組(即本發(fā)明所述的四種復方膠囊治療組)骨髓的粒系和紅系增生程度均顯著提高，且隨著膠囊配方的加強，療效愈加顯著；VI組(即α-甘露聚糖肽口服液治療組)骨髓的粒系和紅系增生程度較I組稍有回升，但不顯著；VII組(即沙棘油治療組)骨髓的粒系和紅系增生程度與VI組無顯著差異。說明本發(fā)明所述的四種復方膠囊對放射所致的骨髓的粒系和紅系增生程度下降有很好的治療作用，療效顯著優(yōu)于單用α-甘露聚糖肽口服液和沙棘油。
本發(fā)明所述治療放射病膠囊的臨床療效驗證王某，男，54歲，某省級醫(yī)院心導管主任醫(yī)師。因疲乏無力，健忘，性功能明顯降低，外周血白細胞數(shù)減少3年，于2004年2月入院。患者于1986年至2004年從事心血管介入放射學工作，據(jù)估算，個人受照累積劑量當量為2.21Sv。從事放射性工作前身體健康，1991年開始出現(xiàn)從事放射性工作后疲乏無力，外周血白細胞數(shù)一過性減少，休息后可恢復，故未給予治療。2001年以后上述癥狀加重，并出現(xiàn)健忘，有時易怒，性格異常，性功能明顯降低，檢查血像外周血紅細胞數(shù)為3.50×1012/L，白細胞數(shù)為1.50×1012/L。查體T36.5℃，P80次/分，BP16/10Kpa。神清，發(fā)育營養(yǎng)良好，心肺(-)，腹平軟，肝脾未觸及；雙晶體裂隙燈檢查發(fā)現(xiàn)后囊下小點狀灰白色混濁，右眼可見空泡；皮膚檢查發(fā)現(xiàn)左前臂皮膚稍干燥，有糠樣脫屑，邊界不清，皮膚病理檢查提示表皮輕度角化過度。實驗室檢查外周血紅細胞、白細胞減少，畸變；精液檢查發(fā)現(xiàn)，精子死亡率高達60％，偶見畸形，運動力一般；內(nèi)分泌功能紊亂；免疫功能降低等。服用該復方膠囊，每日一次，每次一粒，連用一個月后，自覺癥狀明顯改善，精神氣色佳，睡眠良好。繼續(xù)服藥三個月，檢查發(fā)現(xiàn)血中紅細胞數(shù)為7.50×1012/L，白細胞數(shù)為4.50×1012/L，已基本恢復正常水平，精子運動力加強，死亡率低于5％，身體抵抗力明顯增強。隨訪1年，機體各系統(tǒng)功能正常。
本發(fā)明所述治療放射病膠囊的臨床療效統(tǒng)計本研究收集30例外照射慢性放射病患者的資料，其中男性19例，女性11例，接受射線時間最短的4年，最長的29年，個人受照累積劑量當量從1.6Sv-5.95Sv，主要癥狀表現(xiàn)大致可分為三類，即血細胞數(shù)量減少型(20例)、免疫功能抑制型(10例)。所有患者服用本發(fā)明所述復方膠囊，每日一次，每次一粒，連用一個月。結(jié)果發(fā)現(xiàn)20例血細胞數(shù)量減少型患者用藥前紅細胞數(shù)為2.0-3.5×1012/L、白細胞數(shù)為0.9-1.5×109/L、血小板數(shù)為30-60×109/L，用藥一個月后19例患者紅細胞數(shù)為7.0-10×1012/L、白細胞數(shù)為4.0-5.5×109/L、血小板數(shù)為80-95×109/L，僅1例患者血細胞數(shù)變化不大；10例免疫功能抑制型患者用藥前血中IgG為6-8g/L，明顯較正常值(8-15g/L)偏低，用藥一個月后測IgG波動范圍，有9例患者為10-13g/L，顯然已經(jīng)明顯提高并恢復正常，僅1例患者無明顯變化。統(tǒng)計總有效率為93.3％。
經(jīng)過收集大量服藥患者病歷資料深入研究歸納總結(jié)證實該中西藥復方膠囊具有①刺激骨髓的造血功能，恢復外周血象，對因造血功能障礙引起的臨床癥狀有全面的改善作用，如疲乏無力、頭昏頭痛、睡眠障礙、記憶力減退等；②激活機體的細胞免疫和體液免疫功能，提高機體的免疫力，對電離輻射引起的各種感染療效顯著；③減少出血傾向；④消除胃腸道損傷，恢復其生理功能；⑤調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-靶腺軸的活動，使腎上腺皮質(zhì)、甲狀腺和性腺的功能恢復正常；⑥協(xié)調(diào)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的興奮-抑制活動，改善衰弱無力，精神淡漠，煩躁等；⑦徹底治療皮膚損害如水腫、出血等。
權(quán)利要求
1.一種治療放射病的藥物，其特征是它主要包括α-甘露聚糖肽10-40％、清除自由基類中藥60-90％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療放射病的藥物，其特征是所述的藥物包括有α-甘露聚糖肽10-40％、清除自由基類中藥10-60％、補中益氣類中藥10-50％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療放射病的藥物，其特征是所述的藥物包括有α-甘露聚糖肽10-40％、清除自由基類中藥10-50％、補中益氣類中藥10-40％、活血祛瘀類中藥10-30％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療放射病的藥物，其特征是所述的α-甘露聚糖肽10-40％、清除自由基類中藥10-30％、補中益氣類中藥5-20％、活血祛瘀類中藥10-20％、滋補肝腎類中藥10-30％。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療放射病的藥物，其特征是所述的清除自由基類中藥有川芎、丹參、當歸、何首烏、茯苓、五味子、人參、黨參、黃芪、女貞子、鹿茸、冬蟲草、淫羊藿、菟絲子、山茱萸；補中益氣類中藥有黨參、淮山、黃芪、人參、甘草、當歸、熟地；所述的活血祛瘀類中藥有桃仁、當歸、枳殼、川芎、柴胡、紅花、牛膝、赤勺、地黃、桔梗、甘草、丹參、蒲黃、乳香、沒藥、延胡索等；三棱、莪術(shù)；所述的滋補肝腎類中藥有熟地黃、山萸、山藥、女貞子、枸杞子、天麻、白芷、何首烏、丹參、川芎、當歸、妙蒺藜、桑葉、墨旱蓮、白芍、黃精、甘草。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療放射病的藥物，其特征是所述的藥物每1000g中包括有α-甘露聚糖肽270g、川芎50g、丹參50g、當歸50g、何首烏50g、茯苓80g、五味子80g、人參30g、黨參50g、黃芪50g、女貞子50g、鹿茸30g、冬蟲草30g、淫羊藿30g、菟絲子50g、山茱萸50g。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療放射病的藥物，其特征是所述的藥物每1000g中包括有α-甘露聚糖肽260g、川芎40g、丹參40g、何首烏30g、茯苓40g、五味子50g、女貞子40g、鹿茸20g、冬蟲草20g、淫羊藿20g、菟絲子40g、山茱萸40g、黨參80g、淮山20g、黃芪80g、人參80g、甘草20g、當歸60g、熟地20g。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療放射病的藥物，其特征是所述的藥物每1000g中包括有α-甘露聚糖肽260g、丹參30g、何首烏20g、茯苓30g、五味子40g、女貞子30g、鹿茸10g、冬蟲草20g、淫羊藿20g、菟絲子30g、山茱萸20g、黨參50g、淮山20g、黃芪40g、人參50g、熟地30g、桃仁20g、當歸20g、枳殼20g、川芎20g、柴胡20g、紅花20g、牛膝20g、赤勺10g、地黃10g、桔梗20g、甘草20g、丹參10g、蒲黃10g、乳香10g、沒藥20g、延胡索20g、三棱10g、莪術(shù)20g。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療放射病的藥物，其特征是所述的藥物每1000g中包括有α-甘露聚糖肽260g、何首烏20g、茯苓30g、五味子30g、鹿茸10g、冬蟲草20g、淫羊藿20g、菟絲子30g、山茱萸20g、黨參30g、淮山20g、黃芪20g、人參20g、熟地20g、桃仁20g、枳殼15g、柴胡10g、紅花15g、牛膝10g、赤勺10g、地黃10g、桔梗15g、丹參15g、蒲黃5g、乳香10g、沒藥15g、延胡索10g、三棱10g、莪術(shù)10g、熟地黃10g、山萸10g、山藥20g、女貞子10g、枸杞子20g、天麻10g、白芷10g、何首烏10g、丹參20g、川芎30g、當歸30g、妙蒺藜10g、桑葉20g、墨旱蓮10g、白芍10g、黃精10g、甘草30g。
全文摘要
本發(fā)明是一種治療放射病的藥物，特別是關(guān)于一種治療放射病的生物制劑和中藥配合制成的藥物，其特征是它主要包括α－甘露聚糖肽10－40％、清除自由基類中藥60－90％。所述的藥物包括有α－甘露聚糖肽10－40％、清除自由基類中藥10－60％、補中益氣類中藥10－50％。所述的藥物包括有α－甘露聚糖肽10－40％、清除自由基類中藥10－50％、補中益氣類中藥10－40％、活血祛瘀類中藥10－30％。這種治療放射病的藥物是一種將生物制劑與中藥復合制成的膠囊，它將現(xiàn)代醫(yī)學和傳統(tǒng)醫(yī)學科學和巧妙的結(jié)合起來，充分發(fā)揮兩者的協(xié)同作用，對典禮輻射引起的損傷起到獨特的療效，并且無毒副作用，服用方便。
文檔編號A61P39/00GK1663606SQ20041010443
公開日2005年9月7日 申請日期2004年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月31日
發(fā)明者趙恒 申請人:趙恒