專利名稱：二芳基亞甲基哌啶衍生物、其制備及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型化合物、其制備方法、其用途和包含該新型化合物的醫(yī)藥組合物。該新型化合物可用于治療，具體地說，可用于治療疼痛、焦慮和功能性胃腸紊亂。
背景技術(shù)：
受體已被確認(rèn)在很多身體功能例如循環(huán)系統(tǒng)和疼痛系統(tǒng)中有作用。因此，δ受體的配體可以找到作為止痛藥和/或作為抗高血壓劑的潛在用途。也已經(jīng)有人顯示δ受體的配體具有免疫調(diào)節(jié)活性。
鴉片類受體的至少三個不同種群(μ、δ和κ)的確認(rèn)現(xiàn)已得到普遍認(rèn)可，所有三種在包括人在內(nèi)的很多物種的中樞神經(jīng)系統(tǒng)和末梢神經(jīng)系統(tǒng)中都是顯而易見的。在各種動物模型中，當(dāng)這些受體中一種或多種受到活化時，已觀察到痛覺缺失。
除少數(shù)例外，目前可供利用的選擇性鴉片類δ配體在性質(zhì)上是肽的，不適用于經(jīng)由全身性途徑給藥。非肽δ興奮劑的一個實例是SNC80(Bilsky E.J.等人，Journal of Pharmacology and ExperimentalTherapeutics，273(1)，pp.359-366(1995))。
先有技術(shù)上已經(jīng)確認(rèn)的很多δ興奮劑化合物的很多缺點在于它們因藥物動力學(xué)不良而受損害，而且當(dāng)經(jīng)由全身性途徑給藥時不止痛。此外，文獻(xiàn)也已記載，其中很多δ興奮劑化合物當(dāng)全身性給藥時顯示出顯著的驚厥效應(yīng)。
Delorme等人的美國專利No.6,187,792描述了一些δ興奮劑。
然而，目前仍然需要改進(jìn)的δ興奮劑。

發(fā)明內(nèi)容
除非本說明書內(nèi)另有說明，否則本說明書中使用的命名法一般遵循Nomenclature of Organic Chemistry，Sections A，B，C，D，E，F(xiàn)，and H，Pergamon Press，Oxford 1979中所述的實例和規(guī)則，該書因其實例性化學(xué)結(jié)構(gòu)名稱和化學(xué)結(jié)構(gòu)命名規(guī)則而列為本文參考文獻(xiàn)。任選地，化合物名稱也可以使用如下化學(xué)命名程序產(chǎn)生ACD/Chem Sketch，Version5.09/September 2001，Advanced Chemistry Development，Inc.，Toronto，Canada。
單獨或作為前綴使用的“Cm-n”或“Cm-n基團(tuán)”這一術(shù)語系指有m～n個碳原子的任何基團(tuán)。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“烴”這一術(shù)語系指只包含碳原子和氫原子且可多達(dá)14個碳原子的任何結(jié)構(gòu)。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“烴基”這一術(shù)語系指作為從烴去除一個或多個氫的結(jié)果的任何結(jié)構(gòu)。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“烷基”這一術(shù)語系指包含1～約12個碳原子的一價直鏈或支化鏈烴基。除非另有說明，否則一般的“烷基”既包括飽和烷基也包括不飽和烷基。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“亞烷基”這一術(shù)語系指用來將兩種結(jié)構(gòu)連接在一起的、包含1～約12個碳原子的二價直鏈或支化鏈烴基。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“鏈烯基”這一術(shù)語系指一種有至少一個碳—碳雙鍵且包含至少2～約12個碳原子的一價直鏈或支化鏈烴基。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“鏈炔基”這一術(shù)語系指一種有至少一個碳-碳叁鍵且包含至少2～約12個碳原子的一價直鏈或支化鏈烴基。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“環(huán)烷基”這一術(shù)語系指包含至少3～約12個碳原子的一價合環(huán)烴基。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“環(huán)烯基”這一術(shù)語系指有至少一個碳—碳雙鍵且包含至少3～約12個碳原子的一價含環(huán)烴基。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“環(huán)炔基”這一術(shù)語系指有至少一個碳—碳叁鍵且包含約7～約12個碳原子的一價含環(huán)烴基。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“芳基”這一術(shù)語系指有一個或多個有芳香性(例如4n+2離域電子)且包含5～約14個碳原子的多不飽和碳環(huán)的一價烴基。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“亞芳基”這一術(shù)語系指有一個或多個有芳香性(例如4n+2離域電子)且包含5～約14個碳原子的多不飽和碳環(huán)、用來將兩種結(jié)構(gòu)連接在一起的二價烴基。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“雜環(huán)”這一術(shù)語系指有一個或多個獨立地選自N、O和S的多價雜原子作為環(huán)結(jié)構(gòu)的一部分且該環(huán)中包括至少3～約20個原子的含環(huán)結(jié)構(gòu)或分子。雜環(huán)可以是飽和的或不飽和的、含有一個或多個雙鍵的、且雜環(huán)可以含有不止一個環(huán)。當(dāng)雜環(huán)含有不止一個環(huán)時，這些環(huán)可以是稠合的或非稠合的。稠合環(huán)一般系指至少2個環(huán)共享其間的2個原子。雜環(huán)可以有芳香性，也可以沒有芳香性。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“雜烷基”這一術(shù)語系指一種作為有一個或多個選自N、O和S的雜原子置換烷基中一個或多個碳原子的結(jié)果而生成的基團(tuán)。
單獨或者作為后綴或前綴使用“雜芳香族”這一術(shù)語系指有一個或多個獨立地選自N、O和S的多價雜原子作為環(huán)結(jié)構(gòu)的一部分并在該環(huán)中包括至少3～約20個原子的含環(huán)結(jié)構(gòu)或分子，其中該含環(huán)結(jié)構(gòu)或分子有芳香性(例如4n+2離域電子)。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“雜環(huán)基”、“雜環(huán)片斷”、“雜環(huán)的”或“雜環(huán)”這一術(shù)語系指一種從雜環(huán)通過脫除其上的一個或多個氫而衍生的基團(tuán)。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“雜環(huán)基”這一術(shù)語系指一種從雜環(huán)通過脫除其上的一個氫而衍生的一價基團(tuán)。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“亞雜環(huán)基”這一術(shù)語系指一種從雜環(huán)通過脫除其上的兩個氫而衍生的、用來將兩種結(jié)構(gòu)連接在一起的二價基團(tuán)。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“雜芳基”這一術(shù)語系指一種有芳香性的雜環(huán)基。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“雜環(huán)烷基”這一術(shù)語系指沒有芳香性的雜環(huán)基。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“亞雜芳基”這一術(shù)語系指一種有芳香性的亞雜環(huán)基。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“亞雜環(huán)烷基”這一術(shù)語系指一種沒有芳香性的亞雜環(huán)基。
作為前綴使用的“六員”這一術(shù)語系指一種有一個含有六個環(huán)原子的環(huán)的基團(tuán)。
作為前綴使用的“五員”這一術(shù)語系指一種有一個含有五個環(huán)原子的環(huán)的基團(tuán)。
五員環(huán)雜芳基是一種有一個含5個環(huán)原子的環(huán)的雜芳基，其中1、2或3個環(huán)原子獨立地選自N、O和S。
五員環(huán)雜芳基的實例是噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、異噻唑基、異噁唑基、1，2，3-三唑基，四唑基、1，2，3-噻二唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-三唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，3，4-三唑基、1，3，4-噻二唑基、和1，3，4-噁二唑基。
六員環(huán)雜芳基系指一種有一個含6個環(huán)原子的環(huán)的雜芳基，其中1、2或3個環(huán)原子獨立地選自N、O和S。
六員環(huán)雜芳基的實例是吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基和噠嗪基。
作為前綴使用的“有取代”這一術(shù)語系指一種結(jié)構(gòu)、分子或基團(tuán)，其中一個或多個氫置換成一個或多個C1-12烴基，或者一個或多個含有一個或多個選自N、O、S、F、Cl、Br、I和P的雜原子的化學(xué)基團(tuán)。含有一個或多個雜原子的化學(xué)基團(tuán)的實例包括雜環(huán)基、-NO2，-OR，-Cl，-Br，-I，-F，-CF3，-C(＝O)R，-C(＝O)OH，-NH2，-SH，-NHR，-NR2，-SR，-SO3H，-SO2R，-S(＝O)R，-CN，-OH，-C(＝O)OR，-C(＝O)NR2，-NRC(＝O)R，氧代(＝O)、亞胺基(＝NR)、硫代(＝S)、和肟基(＝N-OR)，其中每個“R”都是C1-12烴基。例如，有取代苯基可以指硝基苯基、吡啶基苯基、甲氧基苯基、氯苯基、氨基苯基等，其中該硝基、吡啶基、甲氧基、氯、和氨基可以置換該苯環(huán)上任何一個適用的氫。
作為第一結(jié)構(gòu)、分子或基團(tuán)的前綴使用并跟隨一個或多個化學(xué)基團(tuán)名稱的“有取代”這一術(shù)語系指一種是用一個或多個所列舉化學(xué)基團(tuán)置換第一結(jié)構(gòu)、分子或基團(tuán)的一個或多個氫的結(jié)果的第二結(jié)構(gòu)、分子或基團(tuán)。例如，“有硝基取代的苯基”系指硝基苯基。
“任選地有取代”這一術(shù)語系指有取代的基團(tuán)、結(jié)構(gòu)、或分子和無取代的基團(tuán)、結(jié)構(gòu)或分子兩者。
雜環(huán)包括，例如，單環(huán)式雜環(huán)，如氮丙啶、環(huán)氧乙烷、硫雜丙環(huán)、氮雜環(huán)丁烷、氧雜環(huán)丁烷、硫雜環(huán)丁烷、吡咯烷、吡咯啉、咪唑烷、吡唑烷、吡唑啉、二氧戊環(huán)、環(huán)丁砜、2，3-二氫呋喃、2，5-二氫呋喃、四氫呋喃、四氫噻吩、哌啶、1，2，3，6-四氫吡啶、哌嗪、嗎啉、硫代嗎啉、吡喃、噻喃、2，3-二氫吡喃、四氫吡喃、1，4-二氫吡啶、1，4-二噁烷、1，3-二噁烷、二噁烷、高哌啶、2，3，4，7-四氫-1H-氮雜、高哌嗪、1，3-二氧雜環(huán)庚烷、4，7-二氫-1，3-dioxepin、和氧雜環(huán)庚烷。
此外，雜環(huán)包括芳香族雜環(huán)，例如吡啶、吡嗪、嘧啶、噠嗪、噻吩、呋喃、呋咱、吡咯、咪唑、噻唑、噁唑、吡唑、異噻唑、異噁唑、1，2，3-三唑、四唑、1，2，3-噻二唑、1，2，3-噁二唑、1，2，4-三唑、1，2，4-噻二唑、1，2，4-噁二唑、1，3，4-三唑、1，3，4-噻二唑、和1，3，4-噁二唑。
此外，雜環(huán)還涵蓋多環(huán)式雜環(huán)，例如吲哚、二氫吲哚、異二氫吲哚、喹啉、四氫喹啉、異喹啉、四氫異喹啉、1，4-苯并二噁烷、香豆素、二氫香豆素、苯并呋喃、2，3-二氫苯并呋喃、異苯并呋喃、色烯、苯并二氫吡喃、異苯并二氫吡喃、呫噸、phenoxathiin、噻蒽、中氮茚、異吲哚、吲唑、嘌呤、2，3-二氮雜萘、1，5-二氮雜萘、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、菲啶、啶、菲咯啉、吩嗪、吩噻嗪、吩噁嗪、1，2-苯并異噁唑、苯并噻吩、苯并噁唑、苯并噻唑、苯并咪唑、苯并三唑、噻噸、咔唑、咔啉、吖啶、吡咯烷士定、和quinolizidine。
除以上所述的多環(huán)式雜環(huán)外，雜環(huán)還包括多環(huán)式雜環(huán)，其中兩個或多個環(huán)之間的環(huán)稠合包括不止一個鍵歸兩個環(huán)共有、且不止兩個原子歸兩個環(huán)共有。這樣的橋聯(lián)雜環(huán)的實例包括奎寧環(huán)、二氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷和7-氧雜雙環(huán)[2.2.1]庚烷。
雜環(huán)基包括，例如，單環(huán)式雜環(huán)基，如氮丙啶基、環(huán)氧乙烷基、硫雜丙環(huán)基、氮雜環(huán)丁基、氧雜環(huán)丁基、硫雜環(huán)丁基、吡咯烷基、吡咯啉基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡唑啉基、二氧戊環(huán)基、環(huán)丁砜基、2，3-二氫呋喃基、2，5-二氫呋喃基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、哌啶基、1，2，3，6-四氫吡啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、吡喃基、噻喃基、2，3-二氫吡喃基、四氫吡喃基、1，4-二氫吡啶基、1，4-二噁烷基、1，3-二噁烷基、二噁烷基、高哌啶基、2，3，4，7-四氫-1H-氮雜基、高哌嗪基、1，3-二氧雜環(huán)庚基、4，7-二氫-1，3-dioxepinyl、和氧雜環(huán)庚基。
此外，雜環(huán)基還包括芳香族雜環(huán)基或雜芳基，例如，吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、噻吩基、呋喃基、呋咱基、吡咯基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、異噻唑基、異噁唑基、1，2，3-三唑基、四唑基、1，2，3-噻二唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-三唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，3，4-三唑基、1，3，4-噻二唑基、和1，3，4-噁二唑基。
此外，雜環(huán)基還涵蓋多環(huán)式雜環(huán)基(包括芳香族的和非芳香族的兩種)，例如吲哚基、二氫吲哚基、異二氫吲哚基、喹啉基、四氫喹啉基、異喹啉基、四氫異喹啉基、1，4-苯并二噁烷基、香豆素基、二氫香豆素基、苯并呋喃基、2，3-二氫苯并呋喃基、異苯并呋喃基、色烯基、苯并二氫吡喃基、異苯并二氫吡喃基、呫噸基、phenoxathiinyl、噻蒽基、中氮茚基、異吲哚基、吲唑基、嘌呤基、2，3-二氮雜萘基、1，5-二氮雜萘基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、菲啶基、啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、1，2-苯并異噁唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、噻噸基、咔唑基、咔啉基、吖啶基、吡咯烷士定基、和quinolizidinyl。
除以上所述的多環(huán)式雜環(huán)基外，雜環(huán)基還包括多環(huán)式雜環(huán)基，其中，兩個或多個環(huán)之間的環(huán)稠合包括不止一個鍵歸兩個環(huán)共有，且不止兩個原子歸兩個環(huán)共有。這樣的橋聯(lián)雜環(huán)的實例包括奎寧環(huán)基、二氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚基、和7-氧雜雙環(huán)[2.2.1]庚基。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“烷氧基”這一術(shù)語系指通式-O-R的基團(tuán)，式中R選自烴基。烷氧基的實例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、異丁氧基、環(huán)丙基甲氧基、烯丙氧基、和炔丙氧基。
單獨或者作為后綴或前綴使用的“胺”或“氨基”這一術(shù)語系指通式-NRR’的基團(tuán)，式中R和R’獨立地選自氫或烴基。
單獨或者作為前綴或后綴使用的“?；边@一術(shù)語系指-C(＝O)-R，式中R是任選地有取代的烴基、氫、氨基或烷氧基。?；ǎ?，乙酰基、丙?；⒈郊柞；?、苯乙?；Ⅳ室已趸?、和二甲基氨基甲?；?br> 鹵素包括氟、氯、溴和碘。
作為某一基團(tuán)的前綴使用的“鹵代”這一術(shù)語系指該基團(tuán)上的一個或多個氫置換成一個或多個鹵素。
“RT”或“rt”系指室溫。
第一環(huán)基與第二環(huán)基“稠合”系指第一環(huán)與第二環(huán)共享其間的至少兩個原子。
除非另有說明，否則“連接”這一術(shù)語系指共價連接或鍵合。
這里提供的是式I的一種化合物，其醫(yī)藥上可接受的鹽、其非對映異構(gòu)體、其對映異構(gòu)體、及其混合物 式中R1選自C6-10芳基和C2-6雜芳基，其中所述C6-10芳基和C2-6雜芳基任選地有一個或多個選自-R，-NO2，-OR，-Cl，-Br，-I，-F，-CF3，-C(＝O)R，-C(＝O)OH，-NH2，-SH，-NHR，-NR2，-SR，-SO3H，-SO2R，-S(＝O)R，-CN，-OH，-C(＝O)OR，-C(＝O)NR2，-NRC(＝O)R，和-NRC(＝O)-OR，的基團(tuán)取代，其中R獨立地是氫或C1-6烷基；和R2、R3、R4和R5獨立地選自氫、C1-6烷基、和C3-6環(huán)烷基、其中所述C1-6烷基和C3-6環(huán)烷基任選地有一個或多個選自-R，-NO2，-OR，-Cl，-Br，-I，-F，-CF3，-C(＝O)R，-C(＝O)OH，-NH2，-SH，-NHR，-NR2，-SR，-SO3H，-SO2R，-S(＝O)R，-CN，-OH，-C(＝O)OR，-C(＝O)NR2，-NRC(＝O)R，和-NRC(＝O)-OR的基團(tuán)取代，其中R獨立地是氫或C1-6烷基。
在一種實施方案中，本發(fā)明的化合物是式I的化合物，式中R1選自苯基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、咪唑基、三唑基、吡咯基、噻唑基、和N-氧化吡啶基，其中R1任選地有一個或多個選自C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、-NO2、-CF3、C1-6烷氧基、氯、氟、溴、和碘的基團(tuán)取代；R2、R3、和R4獨立地是C1-3烷基或鹵代C1-3烷基；R5選自氫、C1-6烷基、和C3-6環(huán)烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6環(huán)烷基任選地有一個或多個選自C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、-NO2、-CF3、C1-6烷氧基、氯、氟、溴和碘的基團(tuán)取代。
在另一種實施方案中，本發(fā)明的化合物是式I的化合物，式中R1選自苯基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、咪唑基、吡咯基、和噻唑基，其中R1任選地有一個或多個選自C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、-NO2、-CF3、C1-6烷氧基、氯、氟、溴、和碘的基團(tuán)取代；R2、R3、R4獨立地是C1-3烷基、鹵代C1-3烷基；和R5是氫。
在一種進(jìn)一步的實施方案中，本發(fā)明的化合物是式I的化合物，式中R1選自苯基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、咪唑基、吡咯基、和噻唑基；R2和R3是乙基；R4是C1-3烷基；和R5是氫。
要理解的是，當(dāng)本發(fā)明的化合物含有一個或多個手性中心時，本發(fā)明的化合物可以以對映異構(gòu)體形式或非對映異構(gòu)體形式存在，而且可以分離成為這些形式，或作為外消旋混合物存在。本發(fā)明包括式I化合物的任何可能對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體、外消旋體或其混合物。本發(fā)明化合物的光學(xué)活性形式可以，例如，通過外消旋體的手性色譜分離、通過從光學(xué)活性起始原料的合成、或通過基于后面所述程序的不對稱合成來制備。
也要知道的是，本發(fā)明的某些化合物可以作為幾何異構(gòu)體例如鏈烯的E和Z異構(gòu)體存在。本發(fā)明包括式I化合物的任何幾何異構(gòu)體。要進(jìn)一步理解的是，本發(fā)明涵蓋式I化合物的互變異構(gòu)體。
也要理解的是，本發(fā)明的某些化合物可以以溶劑化形式例如水合形式以及未溶劑化形式存在。要進(jìn)一步理解的是，本發(fā)明涵蓋式I化合物的所有這樣的溶劑化形式。
在本發(fā)明范圍內(nèi)也有式I化合物的鹽。一般來說，本發(fā)明化合物的醫(yī)藥上可接受鹽可以使用業(yè)內(nèi)眾所周知的標(biāo)準(zhǔn)程序得到，例如通過使足夠堿性的化合物例如烷基胺與適用酸例如HCl或乙酸反應(yīng)，提供生理上可接受陰離子。也可以通過在水性介質(zhì)中用1當(dāng)量堿金屬或堿土金屬氫氧化物或醇鹽(例如乙醇鹽或甲醇鹽)或適用堿性有機(jī)胺(例如膽堿或麥格魯明)處理有適用酸性質(zhì)子例如羧酸或苯酚的本發(fā)明化合物隨后用慣常精制技術(shù)，來制造對應(yīng)的堿金屬(例如鈉、鉀、或鋰)鹽或堿土金屬(例如如鈣)鹽。
在一種實施方案中，可以將以上式I化合物轉(zhuǎn)化成其醫(yī)藥上可接受鹽或溶劑合物、尤其酸加成鹽例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、甲磺酸鹽或?qū)妆交撬猁}。
本發(fā)明的新型化合物可用于治療，尤其用于治療各種疼痛病癥，例如慢性疼痛、神經(jīng)病性疼痛、急性疼痛、癌痛、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎引起的疼痛、偏頭痛、內(nèi)臟疼痛等。然而，這份清單不應(yīng)解讀為是窮盡的。
本發(fā)明的化合物可用來作為免疫調(diào)節(jié)劑，尤其用于自免疫疾病例如關(guān)節(jié)炎，用于皮移植、器官移植和類似外科需要，用于膠原疾病、各種變應(yīng)性，用來作為抗腫瘤劑和抗病毒劑。
本發(fā)明的化合物可用于這樣的疾病狀態(tài)，其中，鴉片類受體的退化或機(jī)能障礙存在或隱含于該范例中。這可以涉及本發(fā)明化合物的同位素標(biāo)記版本在診斷技術(shù)和成像應(yīng)用例如正電子發(fā)射斷層掃描(PET)中的用途。
本發(fā)明化合物可用于治療腹瀉、抑郁、焦慮和與壓力有關(guān)的紊亂例如后創(chuàng)傷壓力紊亂、恐慌性紊亂、一般化焦慮紊亂、社會恐怖、和強(qiáng)迫觀念與行為紊亂、尿失禁、早泄、各種精神性疾患、咳嗽、肺水腫、各種胃腸紊亂例如便秘、功能性胃腸紊亂例如刺激性腸綜合征和功能性消化不良、帕金森病及其它運(yùn)動紊亂、創(chuàng)傷性腦受傷、中風(fēng)、心肌梗塞后心臟保護(hù)、脊柱受傷和藥癮，包括治療酒精、尼古丁、鴉片類及其它藥物濫用，和用于交感神經(jīng)系統(tǒng)紊亂例如高血壓。
本發(fā)明化合物可作為止痛劑供全身麻醉和監(jiān)控麻醉護(hù)理期間使用。往往使用不同性能的藥劑組合來達(dá)到維持麻醉狀態(tài)所需要的效果的平衡(例如記憶缺失、痛覺缺失、肌肉松馳和鎮(zhèn)靜作用)。這種組合中包括的是吸入性麻醉劑、安眠藥、抗焦慮藥、神經(jīng)肌肉阻斷劑和鴉片類藥物。
在本發(fā)明范圍內(nèi)也包括按照以上式I的任何一種化合物用于制造以上所討論的任何一種病癥的治療用藥劑的用途。
本發(fā)明的一個進(jìn)一步方面是患有以上所討論的任何一種病癥的受治療者的治療方法，從而對需要這樣一種治療的患者給藥有效量的按照以上式I的化合物。
因此，本發(fā)明提供一種如此前所定義的、用于治療的式I化合物或其醫(yī)藥上可接受鹽或溶劑合物。
在一個進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供一種如此前所定義的式I化合物或其醫(yī)藥上可接受鹽或溶劑合物用于制造一種治療用藥劑的用途。
在本說明書范疇內(nèi)，“治療”這一術(shù)語也包括“預(yù)防”，除非有相反的具體指示。對“治療的”和“治療地”這一術(shù)語應(yīng)當(dāng)有相應(yīng)理解。在本發(fā)明范疇內(nèi)，“治療”這一術(shù)語進(jìn)一步涵蓋給藥有效量的本發(fā)明化合物，以緩解要么先存在的疾病狀態(tài)、急性或慢性的病癥，要么復(fù)發(fā)的病癥。這個定義也涵蓋用于防止復(fù)發(fā)性病癥的預(yù)防性治療和慢性病癥的繼續(xù)治療。
本發(fā)明化合物可用于治療，尤其用于治療各種疼痛病癥，包括但不限于急性疼痛、慢性疼痛、神經(jīng)性疼痛、急性疼痛、背痛、癌痛、和內(nèi)臟痛。
在用于溫血動物例如人的治療方面，本發(fā)明的化合物可以以慣常醫(yī)藥組合物的形式經(jīng)由任何途徑給藥，包括經(jīng)口、經(jīng)肌內(nèi)、經(jīng)皮下、經(jīng)局部、經(jīng)鼻內(nèi)、經(jīng)腹膜內(nèi)、經(jīng)胸內(nèi)、經(jīng)靜脈內(nèi)、經(jīng)硬膜外、經(jīng)膜內(nèi)、經(jīng)腦室內(nèi)和注射到關(guān)節(jié)內(nèi)。
在本發(fā)明的一種實施方案中，給藥途徑可以是經(jīng)口、經(jīng)靜脈內(nèi)或經(jīng)肌內(nèi)的。
劑量將取決于給藥途徑、疾病的嚴(yán)重性、患者的年齡和體重、以及主治醫(yī)生在確定最適合于特定患者的個體治療方案和劑量水平時通?？紤]的其它因素。
為了從本發(fā)明化合物制備醫(yī)藥組合物，惰性醫(yī)藥上可接受載體可以是要么固體要么液體。固體形式制劑包括散劑、片劑、可分散顆粒劑、膠囊劑、扁囊劑、和栓劑。
固體載體可以是一種或多種物質(zhì)，這些物質(zhì)也可以充當(dāng)稀釋劑、矯味矯臭劑、增溶劑、潤滑劑、懸浮劑、粘結(jié)劑、或藥片崩解劑；它也可以是一種包囊材料。
在散劑中，載體是一種微細(xì)固體，該固體呈一種與本發(fā)明的微細(xì)化合物或有效成分的混合物。在片劑中，該有效成分與具有必要粘結(jié)性能的載體以適當(dāng)比例混合并以所希望的形狀和尺寸壓緊。
為了制備栓劑組合物，先將一種低熔點蠟例如甘油脂肪酸酯和可可脂的混合物熔融，通過諸如攪拌將有效成分分散于其中。然后將熔融均勻混合物傾入方便尺寸的模型中，并使之冷卻、凝固。
適用的載體是碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石、乳糖、糖、果膠、糊精、淀粉、西黃著膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低熔點蠟、可可脂等。
組合物這一術(shù)語也意在包括該有效成分和作為提供膠囊的載體的包囊材料的配方，在膠囊中該有效成分(有或無其它載體)被一種因此而與其締合在一起的載體包圍。類似地包括偏囊劑。
片劑、散劑、扁囊劑、和膠囊劑可以用來作為適合于經(jīng)口給藥的固體劑型。
液體形式組合物包括溶液、懸浮液、和乳狀液。例如，該有效化合物的無菌水溶液或水-丙二醇溶液可以是適用于非經(jīng)腸給藥的液體制劑。液體組合物也可以用聚乙二醇水溶液配制成溶液劑。
經(jīng)口給藥的水溶液可以制備如下將有效成分溶于水中，并添加適當(dāng)著色劑、矯味矯臭劑、穩(wěn)定劑、和增稠劑，依希望而定。經(jīng)口用途的水性懸浮液劑可以這樣制作將微細(xì)有效成分連同粘性材料例如天然的和合成的膠、樹脂、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、和醫(yī)藥配方業(yè)內(nèi)已知的其它懸浮劑一起分散在水中。
因給藥方式而異，該醫(yī)藥組合物較好包括0.05～99wt％(重量百分率)、更好0.10～50wt％本發(fā)明化合物，所有重量百分率均以總組合物為基準(zhǔn)。
本發(fā)明實施用的治療有效量，可以由業(yè)內(nèi)技術(shù)人員通過使用已知基準(zhǔn)包括個體患者的年齡、體重和反應(yīng)來確定，并在要治療或要預(yù)防的疾病的范疇內(nèi)予以解讀。
在本發(fā)明范圍內(nèi)的，有如以上所定義的式I的任何一種化合物用于制造一種藥劑的用途。
在本發(fā)明范圍內(nèi)的，也有式I的任何一種化合物用于制造一種疼痛治療用藥劑的用途。
還提供的是按照式I的任何一種化合物用于制造各種疼痛病癥治療用藥劑的用途，該疼痛病癥包括但不限于急性疼痛，慢性疼痛，神經(jīng)性疼痛，急性疼痛，背痛，癌痛，和內(nèi)臟痛。
本發(fā)明的一個進(jìn)一步方面是患有以上所討論的任何一種病癥的患者的治療方法，因而對需要這樣的治療的患者給藥有效量的按照以上式I的化合物。
此外，還提供一種醫(yī)藥組合物，包含與醫(yī)藥上可接受載體配合的式I的化合物或其醫(yī)藥上可接受鹽。
具體地說，提供的是一種用于治療、更具體地用于疼痛治療的醫(yī)藥組合物，包含與醫(yī)藥上可接受載體配合的式I化合物或其醫(yī)藥上可接受鹽。
進(jìn)而，提供的是一種用于以上所討論的任何一種病癥的醫(yī)藥組合物，包含與醫(yī)藥上可接受載體配合的式I化合物或其醫(yī)藥上可接受鹽。
這里也提供的是式I化合物的制備方法。
在一種實施方案中，本發(fā)明提供一種式I化合物制備方法， 包含使式II化合物與X-C(＝O)-O-R4反應(yīng)，
式中X是Cl、Br或I；R1選自C6-10芳基和C2-6雜芳基，其中所述C6-10芳基和C2-6雜芳基任選地有一個或多個選自-R，-NO2，-OR，-Cl，-Br，-I，-F，-CF3，-C(＝O)R，-C(＝O)OH，-NH2，-SH，-NHR，-NR2，-SR，-SO3H，-SO2R，-S(＝O)R，-CN，-OH，-C(＝O)OR，-C(＝O)NR2，-NRC(＝O)R，和-NRC(＝O)-OR的基團(tuán)取代，式中R獨立地是氫或C1-6烷基；和R2、R3、R4和R5獨立地選自氫、C1-6烷基、和C3-6環(huán)烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6環(huán)烷基任選地有一個或多個選自-R，-NO2，-OR，-Cl，-Br，-I，-F，-CF3，-C(＝O)R，-C(＝O)OH，-NH2，-SH，-NHR，-NR2，-SR，-SO3H，-SO2R，-S(＝O)R，-CN，-OH，-C(＝O)OR，-C(＝O)NR2，-NRC(＝O)R，和-NRC(＝O)-OR的基團(tuán)取代，式中R獨立地是氫或C1-6烷基。
在另一種實施方案中，本發(fā)明提供一種式I化合物制備方法， 包含使式IV化合物與R1-CHO或R1-CH2X反應(yīng)，
式中X是Cl、Br或I；R1選自C6-10芳基和C2-6雜芳基，其中所述C6-10芳基和C2-6雜芳基任選地有一個或多個選自-R，-NO2，-OR，-Cl，-Br，-I，-F，-CF3，-C(＝O)R，-C(＝O)OH，-NH2，-SH，-NHR，-NR2，-SR，-SO3H，-SO2R，-S(＝O)R，-CN，-OH，-C(＝O)OR，-C(＝O)NR2-NRC(＝O)R，和-NRC(＝O)-OR的基團(tuán)取代，式中R獨立地是氫或C1-6烷基；和R2、R3、R4和R5獨立地選自氫、C1-6烷基、和C3-6環(huán)烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6環(huán)烷基任選地有一個或多個選自-R，-NO2，-OR，-Cl，-Br，-I，-F，-CF3，-C(＝O)R，-C(＝O)OH，-NH2，-SH，-NHR，-NR2，-SR，-SO3H，-SO2R，-S(＝O)R，-CN，-OH，-C(＝)OR，-C(＝O)NR2，-NRC(＝O)R，和-NRC(＝O)-OR的基團(tuán)取代，式中R獨立地是氫或C1-6烷基。
具體地說，本發(fā)明化合物和用于其制備的中間體可以按照方案1～3中列舉的合成路線制備。
方案1 中間體1
方案2
方案3 因此，在一個進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供式III中間體化合物 式中R2、R3、R4和R5獨立地選自氫、C1-6烷基、和C3-6環(huán)烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6環(huán)烷基任選地有一個或多個選自-R，-NO2，-OR，-Cl，-Br，-I，-F，-CF3，-C(＝O)R，-C(＝O)OH，-NH2，-SH，-NHR，-NR2，-SR，-SO3H，-SO2R，-S(＝O)R，-CN，-OH，-C(＝O)OR，-C(＝O)NR2，-NRC(＝O)R，和-NRC(＝O)-OR的基團(tuán)取代，式中R獨立地是氫或C1-6烷基；和R6選自-H和-C(＝O)-O-C1-6烷基。
生物學(xué)評估已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物對溫血動物例如人體中的δ受體有活性。具體地說，已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物是有效的δ受體配體。以下的離體試驗證實了這些令人驚訝的活性，尤其關(guān)于興奮劑藥效和功效，如同大鼠腦功能試驗和/或人δ受體功能試驗(低)中所證實的。這一特色可能與活體活性有關(guān)，而且可能與粘結(jié)親和力不是線性相關(guān)的。在這些離體試驗中，試驗了一種化合物對δ受體的活性并得到了IC50，以確定一種特定化合物對δ受體的選擇性活性。在本文中，IC50一般地系指觀察到標(biāo)準(zhǔn)放射性δ受體的50％置換的該化合物的濃度。
該化合物對κ受體和μ受體的活性也用類似試驗進(jìn)行測定。
離體模型細(xì)胞培養(yǎng)表達(dá)克隆的人κ、δ和μ受體以及新霉素抗性的人293S細(xì)胞在含有無鈣DMEM 10％FBS、5％BCS、0.1％Pluronic F-68、和600μg/mlgeneticin的懸浮液中、在搖床燒瓶中、在37℃和5％CO2下生長。
將大鼠大腦稱重、用冰冷PBS(含有2.5mM EDTA，pH7.4)漂洗。該大腦在冰冷溶胞緩沖劑(50mM Tris，pH7.0，2.5mM EDTA，臨使用前添加來自DMSO乙醇中的0.5M儲備溶液的苯甲磺酰氟0.5MmM)中用一臺polytron勻化30秒(大鼠)。
膜制備細(xì)胞造粒并再懸浮于溶胞緩沖劑(50mM Tris，pH7.0，2.5mMEDTA，臨使用前添加來自乙醇中0.1M儲備溶液的PMSF 0.1mM)中，在冰上培養(yǎng)15分鐘，然后用一臺polytron勻化30秒。該懸浮液在4℃以1000g(最大)旋轉(zhuǎn)10分鐘。上清液在冰上保存，片狀沉淀物像以前一樣再懸浮和旋轉(zhuǎn)。將兩次旋轉(zhuǎn)的上清液合并，以46,000g(最大)旋轉(zhuǎn)30分鐘。該片狀沉淀物再懸浮于冷Tris緩沖劑(50mMTris/Cl，pH7.0)中，再次旋轉(zhuǎn)。最終片狀沉淀物再懸浮于膜緩沖劑(50mM Tris，0.32M蔗糖，pH7.0)中。將聚丙烯管中的等分樣品(1ml)在干冰/乙醇中冷凍，并于-70℃貯存直至使用。蛋白質(zhì)濃度是用改進(jìn)的Lowry試驗以硫酸十二烷酯鈉測定的。
結(jié)合試驗將膜在37℃解凍、用冰冷卻(或當(dāng)不立即使用時保持在冰上)、3次通過25號針、并稀釋到結(jié)合緩沖劑(50mM Tris，3mM MgCl2，1mg/ml BSA(Sigma A-7888，pH7.4)中，經(jīng)由0.22m過濾器過濾后在4℃貯存，而且若該膜是從組織(大鼠、小鼠、猴子、無DTT)衍生的時則新鮮添加5μg/ml aprotinin、10μM bestatin、10μM diprotin A.將100μl等分試樣添加到含有100μl適當(dāng)放射性配體和100μl各種濃度的試驗化合物的冰冷12×75mm聚丙烯管中.在10μM納洛酮的存在和不存在下，分別測定總結(jié)合(TB)和非特異性結(jié)合(NS)。將這些管旋轉(zhuǎn)、在25℃培養(yǎng)60～75分鐘，然后將內(nèi)容物迅速經(jīng)由用0.1％聚乙烯亞胺預(yù)浸漬至少2小時的GF/B過濾器(Whatman公司)真空過濾，并以約12ml/試管冰冷洗滌緩沖劑(50mM Tris，pH7.0，3mMMgCl2)洗滌。該過濾器在含有6～7ml閃爍流體的微管形瓶中浸漬至少12小時之后，用β計數(shù)器測定該過濾器上保留的放射性(dpm)。若該試驗是在96眼深孔平皿上進(jìn)行，則過濾用96眼PEI浸漬的unifilter進(jìn)行，用3×1ml洗滌緩沖劑洗滌、在55℃烘箱中干燥2小時。該過濾器板在添加50μl MS-20閃爍流體/孔之后用一臺TopCount(Packard公司)計數(shù)。在用96眼深孔平皿進(jìn)行試驗的情況下，化合物的IC50在δ的情況下是從10點排代曲線評估的，而在μ和κ的情況下是從5點排代曲線評估的。該試驗是用300μl以適量膜蛋白(在δ、μ、和κ的情況下分別為2μg、35μg、和1μg)和50000～80000dpm/孔適當(dāng)示蹤劑(在δ、μ、和κ的情況下分別為125I-Deltorphin II，125I-FK33824、和125I-DPDYN)進(jìn)行的。總結(jié)合和非特異性結(jié)合是10μM納洛酮的不存在和存在下進(jìn)行的。
功能試驗該化合物的興奮劑活性是通過確定該化合物受體絡(luò)合物使GTP與該受體與之偶合的G-蛋白結(jié)合活化的程度來測定的。在GTP結(jié)合試驗中，GTP[γ]35S是與試驗化合物和來自表達(dá)克隆人鴉片類受體的HEK-293S或來自勻化大鼠或小鼠大腦的膜結(jié)合的。興奮劑刺激這些膜中的GTP[γ]35S結(jié)合。從劑量響應(yīng)曲線確定化合物的EC50和Emax值。進(jìn)行了δ拮抗劑naltrindole引起的劑量響應(yīng)曲線右移，以驗證興奮劑活性是經(jīng)由δ受體傳遞的。對于人δ受體功能試驗來說，EC50(低)是當(dāng)用于該試驗的人δ受體以比用于測定EC50(高)的那些更低的水平表達(dá)時測定的。Emax值是相對于標(biāo)準(zhǔn)δ興奮劑SNC 80而言確定的，即高于100％的是其功效優(yōu)于SNC 80的化合物。
大鼠大腦GTP的程序大鼠大腦膜在37℃解凍、3次通過25號鈍端針、用GTPγS結(jié)合液(50mM Hepes、20mM NaOH、100mM NaCl、1mM EDTA、5mMMgCl2、pH7.4，現(xiàn)添加1mM DTT、0.1％BSA)稀釋。添加膜稀釋液達(dá)到最終120μM GDP。化合物的EC50和Emax是從用300μl以適量膜蛋白(20μl/孔)和100000～130000dpm GTRγ35S/孔(0.11～0.14nM)得到的10點劑量-響應(yīng)曲線評估的?；A(chǔ)的和最大的刺激結(jié)合是在3μM SNC-80不存在和存在下測定的。在穩(wěn)定地表達(dá)克隆的δ受體的HEK293S細(xì)胞上進(jìn)行的試驗是以稍微不同的緩沖劑(50mM Hepes、20mMNaOH、200mM NaCl、1mM EDTA、5mM MgCl2、pH7.4，現(xiàn)添加0.5％BSA、無DTT)和3μM GDP最終濃度進(jìn)行的。
數(shù)據(jù)分析特異性結(jié)合(SB)是作為TB-NS計算的，各種試驗化合物存在下的SB表示為對照SB的百分率。IC50和配體在置換特異性結(jié)合的放射性配體方面的希爾系數(shù)(nH)的數(shù)值是從對數(shù)圖或曲線擬合程序例如Ligand、GraphPad Prism、SigmaPlot、或ReceptoFit計算的。Ki值是從Cheng-Prussoff方程計算的。對于在至少3條排代曲線中試驗的配體，報告了IC50、Ki和nH的平均±S.E.M.值。本發(fā)明化合物的生物學(xué)活性列于表1和2中。
表1

表2

受體飽和實驗放射性配體Kδ值是通過用適當(dāng)放射性配體以0.2～5倍估計Kδ(若所需要的放射性配體量是可行的，則可多達(dá)10倍)范圍內(nèi)的濃度進(jìn)行細(xì)胞膜上的結(jié)合試驗來確定的。特異性放射性配體結(jié)合表達(dá)為pmol/mg膜蛋白。來自個別實驗的Kδ和Bmax數(shù)值是從特異性結(jié)合(B)對nM游離(F)放射性配體的個體非線性擬合按照單點模式得到的。
使用Von Frey驗的機(jī)械-Allodynia測定使用Chaplan等人(1994年)描述的方法，在08:00～16:00之間進(jìn)行試驗。將大鼠放進(jìn)置于金屬絲網(wǎng)底部上面、使得能夠著爪子的有機(jī)玻璃籠中，并使之習(xí)慣10～15分鐘。試驗區(qū)是中跖左后爪，避免不太敏感的爪墊。使爪子與一系列8根有對數(shù)增量勁度的Von Frey毛(0.41，0.69，1.20，2.04，3.63，5.50，8.51，和15.14克；美國伊利諾州Stoelting)接觸。該Von Frey毛是從金屬絲網(wǎng)地板下面垂直于跖表面以足夠的力施用的，以引起爪子稍微彎曲并保持大約6～8秒。若爪子敏捷回縮，測視為陽性反應(yīng)。在該毛撤除時立即退縮也視為陽性反應(yīng)。移動視為不確定的反應(yīng)，在這樣的情況下重復(fù)刺激。
試驗方案FCA處理組的動物在手術(shù)后第1天進(jìn)行試驗。用Dixon(1980年)的自上而下方法確定50％回縮閾值。試驗用該系列中部的2.04g毛開始。刺激總是以無論上升還是下降的相繼方式提供的。在對最初選擇的毛的爪回縮反應(yīng)不存在時，提供更強(qiáng)烈的刺激；在爪子回縮的情況下，選擇下一個更弱的刺激。用這種方法的最佳閾值計算要求6次反應(yīng)緊挨著50％閾值，而且這6次反應(yīng)的計數(shù)始于反應(yīng)第一次變化發(fā)生時，例如第一次跨越閾限。在閾限落在刺激范圍以外的情況下，分別指定15.14(正常靈敏度)或0.41(最大allodynic)的數(shù)值。所得到的陽性反應(yīng)和陰性反應(yīng)的模式按慣例列表X＝無回縮，O＝回縮；且50％回縮閾限用下式插入50％g閾限＝10(Xf+Kδ)/10000式中Xf＝所使用的最后一根von Frey毛的值(對數(shù)單位)；k＝陽性/陰性反應(yīng)模式的表格值(來自Chaplan等(1994))；且δ＝刺激之間的平均差(對數(shù)單位)。在此，δ＝0.224.
按照Chaplan等人(1994)，將von Frey閾限值轉(zhuǎn)化成最大可能效果的百分率(％MPE)。使用以下方程計算％MPE 試驗物質(zhì)的給藥在von Frey試驗之前給大鼠(經(jīng)皮下、經(jīng)腹膜內(nèi)、經(jīng)靜脈內(nèi)或經(jīng)口)注射試驗化合物，試驗化合物與von Frey試驗之間的時間因試驗化合物的性質(zhì)而異。
Writhing試驗當(dāng)對小鼠經(jīng)腹膜內(nèi)給藥時，乙酸會引起腹部收縮。然后，這些將以典型的方式使其身體伸展。當(dāng)給藥止痛藥時，就不太經(jīng)常觀察到這種所描述的運(yùn)動，該藥物是作為潛在良好候選者選擇的。
只有當(dāng)存在下列要素時才認(rèn)為是完全的和典型的Writhing反射動物不處于運(yùn)動中，較低的背部稍微凹陷，雙爪的跖形態(tài)是可觀察的。在這種試驗中，本發(fā)明的化合物證實經(jīng)口給藥1～100μmol/kg之后Writhing反應(yīng)的顯著抑制。
(i)溶液制備乙酸(AcOH)將120μL乙酸添加到19.88mL蒸餾水中，以期得到最終體積為20mL且最終濃度為0.6％AcOH。然后，將該溶液混合(旋轉(zhuǎn))并準(zhǔn)備好用于注射。
化合物(藥物)每一種化合物都按照標(biāo)準(zhǔn)程序制備和溶解于最適用的載體中。
(ii)溶液給藥在試驗前20、30或40分鐘(按照化合物的類別及其特征)，以10mL/kg(考慮平均小鼠體重)經(jīng)口、經(jīng)腹膜內(nèi)(i.p.)、經(jīng)皮下(s.c.)或經(jīng)靜脈內(nèi)(i.v.)給藥該化合物(藥物)。當(dāng)該化合物經(jīng)中樞例如經(jīng)腦室內(nèi)(i.c.v.)或經(jīng)鞘內(nèi)(i.t.)輸送時，給藥5μL的體積。
AcOH是在臨試驗前以10mL/kg(考慮平均小鼠體重)在2個部位經(jīng)腹膜內(nèi)(i.p.)給藥的。
(iii)試驗對動物(小鼠)觀察為期20分鐘，注意并在實驗結(jié)束時匯總發(fā)生(Writhing反射)的次數(shù)。將小鼠保持在有觸斷層的單個“鞋盒式”籠子里。通常同時觀察總共4只小鼠一只對照和三種藥物劑量。
為了焦慮和類焦慮指示，已經(jīng)在大鼠的geller-seifter沖突試驗中確定了功效。
為了功能性胃腸紊亂指示，可以在Coutinho SV等人，AmericanJournal of Physiology-Gastrointestinal & Liver Physiology，282(2)G307-16，2002Feb.所述的試驗中確定對大鼠的功效。
追加的活體試驗方案對象和居所將純樸的雄性Sprague Dawley大鼠(175-200g)以5只一組關(guān)在控溫室(22℃，40～70％濕度，12小時亮/暗)中。實驗在該循環(huán)的亮期期間進(jìn)行。動物有食物和水供隨意取食和飲用，并在采集數(shù)據(jù)后立即宰殺。
樣品化合物(藥物)試驗包括不接受任何處理的大鼠組和用大腸桿菌脂多糖(LPS)處理的其它組。為了LPS處理實驗，給4個組注射LPS，然后這4個組之一進(jìn)行載體處理、其余3個組注射該藥物及其載體。進(jìn)行第二套實驗，涉及5組大鼠，這些全部不接受LPS處理。純樸組不接受化合物(藥物)或載體；其余4個組用有或無藥物的載體處理。進(jìn)行這些實驗是要確定藥物的抗焦慮或鎮(zhèn)靜效果，這些效果會有助于USV減少。
LPS的給藥處理前讓大鼠在該實驗室中習(xí)慣15～20分種。通過LPS(革蘭氏陰性大腸菌血清型0111B4的內(nèi)毒素，Sigma公司)的給藥誘發(fā)炎癥。在異呋喃麻醉下，使用標(biāo)準(zhǔn)定向外科技術(shù)，以10μL的體積經(jīng)腦室內(nèi)(i.c.v.)注射LPS(2.4μg)。將兩耳之間的皮膚推向嘴側(cè)，做約1cm的縱向切口以使頭顱骨表面露出。打孔部位由坐標(biāo)確定前囟向后0.8mm，λ(矢狀骨縫)左側(cè)1.5mm，和側(cè)腦室頭顱骨表面以下(垂直)5mm。LPS是經(jīng)由用聚乙烯管(PE 20；10～15cm)連接到100μL Hamilton注射器上的5mm長無菌不銹鋼針(26-G 3/8)注射的。將一個從切針(20-G)制成的4mm阻擋器放上去、用硅膠固定到26-G針上，以造成所希望的5mm深度。
在LPS注射后，該針在那個位置上再停留10秒鐘以使該化合物得以擴(kuò)散，然后取出。將該切口縫合、并將該大鼠放回它原來的籠中，并使之在試驗前休息至少3.5小時。
吹氣刺激的實驗裝置在LPS注射和化合物(藥物)給藥后，這些大鼠仍留在該實驗室中。試驗時，將大鼠全部取出、放置在該實驗室外。一次將一只大鼠帶進(jìn)該試驗室、放進(jìn)一個透明盒子(9×9×18cm)中，然后將后者放進(jìn)一個尺寸為62(w)×35(d)×46(h)cm的消音通風(fēng)室(BRS/LVE，Div.Tech-Serv Inc.)中。吹氣經(jīng)由0.32cm的空氣輸出噴嘴的輸送是由一個能以每10秒一吹的頻率輸送固定持續(xù)時間(0.2秒)和固定強(qiáng)度的吹氣的系統(tǒng)(AirStim，San Diego Instruments公司)控制的。給予最多10次吹氣，或直至總是首先出現(xiàn)的發(fā)聲開始為止。第一次吹氣標(biāo)志著記錄開始。
超聲記錄實驗裝置和超聲記錄使用放置在每個(消音通風(fēng))室內(nèi)并由LMS(LMS CADA-X3，5B，Data Acquisition Monitor公司，密歇根州特洛伊)軟件控制的麥克風(fēng)(G.R.A.S.聲音和振動公司，丹麥韋德巴克)記錄發(fā)聲10分鐘。將0～32000Hz的頻率記錄、存儲并以同一軟件(LMS CADA-X3，5B，TimeData Processing Monitor and UPA(用戶編程與分析))分析。
化合物(藥物)
所有化合物(藥物)都調(diào)至pH6.5～7.5之間，并以4mL/kg的體積給藥?；衔?藥物)給藥之后，讓動物返回其原來的蘢中直至試驗時。
分析該記錄進(jìn)行一系列統(tǒng)計分析和傅里葉分析，以過濾(20～24KHz之間)和計算有興趣的參數(shù)。數(shù)據(jù)表達(dá)為平均值±SEM。統(tǒng)計顯著性，對于純樸大鼠與LPS處理大鼠之間的比較來說用T試驗予以評價，而對于藥物有效性來說則先用單通道ANOVA隨后用Dunnett多比較試驗(post-hoc)予以評價。當(dāng)最小p值≤0.05時，認(rèn)為組與組之間的差異是顯著的。實驗重復(fù)至少2次。
使用Hargreaves跖試驗確定熱痛覺過敏FCA或角叉菜聚糖的給藥弗洛因德完全佐劑(FCA)SIGMA cat.#F 5881，結(jié)核分支桿菌(H37Ra，ATCC 25177)，1mg/mL，熱滅活，干燥，0.85mL石蠟，0.15mL二縮甘露醇單油酸酯?；蚪遣娌司厶铅诵虸V(Cg)SIGMA cat.#C-3889(植物性明膠；愛爾蘭苔蘚)，NaCl中的(1.0％溶液)。
注射是用Hamilton注射器以無菌針尺寸26 G5/8”進(jìn)行的。將大鼠捉住并放進(jìn)異呋喃麻醉室中。當(dāng)達(dá)到所希望的效果時，將大鼠取出并以腹側(cè)臥(胸骨位置)放置。抓住左后爪并將針導(dǎo)入#2指與#3指的足墊之間的皮下腹側(cè)，以期達(dá)到爪的中部(跖骨區(qū))。最后，將100μL FCA或100μL角叉菜聚糖溶液的體積緩慢注射到該爪中，并在拔出針之后施加一個小的壓力3～4秒種。
如果動物在該程序期間醒來，則將其送回吸入室中直至達(dá)到所希望的效果。在跖內(nèi)注射之后，讓這些運(yùn)動在它們的籠中在觀察下醒來。
對于FCA處理來說，讓大鼠的炎癥過程發(fā)展48小時。對于角叉菜聚糖處理來說，讓大鼠的炎癥過程發(fā)展3小時。在該試驗的那個早晨，將大鼠放進(jìn)該實驗室(它們的籠中)。讓它們對該房間習(xí)慣至少30分鐘。
試驗部位將熱刺激施加于足墊之間的跖表面中心。試驗部位必須與該玻璃接觸，且其間無尿或糞便，以期保持玻璃對皮膚的正確傳熱性能。
跖裝置由一個有玻璃頂部/平臺的盒子組成，玻璃表面由內(nèi)部反饋機(jī)制保持在30℃。這個玻璃平臺下面有一個安裝在可移動臂上的燈泡，一面鏡子放在下面以使該光線能配置在大鼠的爪子之下。當(dāng)該光線被激活時，它通過一個～2mm直徑的小孔閃耀。實驗者將該光線激活，且當(dāng)該爪子移開時自動傳感器將該光線切斷；20.48秒的切斷確保一旦該大鼠不將其爪子移開也不會發(fā)生組織損害。實驗者也可以在任何一點上切斷該光線。一個計時器會記錄該光線被激活的持續(xù)時間。
通量計測量該光線被激活時的通量/cm2。這應(yīng)當(dāng)保持在～97-98；該通量可以通過調(diào)整跖器件來改變，但一定不要在實驗中間改變。
時間歷程該實驗可以在改變炎癥誘發(fā)后的時間長度之后進(jìn)行。痛覺過敏是FCA注射后48小時或角叉菜聚糖注射后3小時測定的。
試驗程序純樸大鼠對于劑量響應(yīng)曲線的確定程序來說，使用7只大鼠一組作為對照組；它們與其余28只大鼠一起麻醉，但不給予任何注射。純樸組的試驗可以要么在該實驗開始前進(jìn)行，要么在該實驗之后立即進(jìn)行，為了盡可能減少壓力，將大鼠置于放在跖器件上面的單個有機(jī)玻璃盒(14×21×9cm)中；讓它們習(xí)慣為期30分鐘。當(dāng)這些動物準(zhǔn)備進(jìn)行試驗時，將光線直接放在試驗部位之下并予以激活，記錄回縮的潛伏期。在為期5～8分鐘之后，讓皮膚溫度恢復(fù)正常，取第二次讀數(shù)，然后取出該大鼠并重新放回它們的籠子中。
基線值將其余28只已經(jīng)注射了FCA(或角叉菜聚糖)的大鼠(分成4組)放進(jìn)該機(jī)器上的單個盒子中并使之習(xí)慣30分鐘。實驗者應(yīng)驗證爪子發(fā)炎的程度并核對是否變色。將熱刺激置于試驗部位之下，記錄回縮的潛伏期；像以上一樣取2次讀數(shù)。正是這些基線值與純樸動物的那些值的比較確定了痛覺過敏是否存在。
后藥物試驗一旦確定了痛覺過敏，就給大鼠注射有興趣的化合物。每一種化合物都按照標(biāo)準(zhǔn)程序制備和溶解于最適用的載體中。給藥途徑、劑量、體積、和注射后的試驗時間對該化合物(或該類化合物)是特異性的。當(dāng)在注射例如i.v.或s.c.注射后20～30分鐘試驗化合物時，將大鼠放在跖裝置上并使之習(xí)慣，同時藥物產(chǎn)生其效果。當(dāng)在注射后60分鐘或更長時間試驗化合物時，將大鼠連同其籠友一起放回其原來的籠中。大鼠總是與其原來的籠友一起重新放進(jìn)它們原來的籠中，最大限度減少在一群大鼠內(nèi)部重新建立社會結(jié)構(gòu)的壓力。30分鐘后，將大鼠放在跖機(jī)上，并使之對該跖機(jī)習(xí)慣30分鐘。試驗像以上所述那樣進(jìn)行。取2次讀數(shù)。
試驗基準(zhǔn)該動物必須是平和、安靜但警覺的，處于正確位置上，在爪的皮膚與該機(jī)器的玻璃表面之間無尿或糞便。當(dāng)有下列情況時不應(yīng)對動物進(jìn)行試驗-該動物處于運(yùn)動中，包括用鼻吸氣(嗅)、清潔身體和探查；-該動物正在睡覺；-該動物顯示出明顯的壓力征兆(強(qiáng)直性不動、發(fā)聲、耳朵偏平)，除非這些是化合物副作用的可能結(jié)果而且無法避免；-該動物以這樣一種方式配置爪子不與該玻璃直接接觸(爪子放在尾上面)；-該動物的爪子由于注射不良的結(jié)果而顯示藍(lán)色。在這種情況下，該動物(在開始時)就完全從該實驗中排除出去。
當(dāng)尿和糞便存在時，將該動物取出，并將玻璃表面擦試干凈，然后將該動物重新放回。當(dāng)該動物正在睡覺、或顯示強(qiáng)直性不動時，實驗者可以輕輕移動該盒子或?qū)⑵溆谝浦猎摵凶忧懊妫砸鸲唐谧⒁庑袨?。在整個試驗中應(yīng)進(jìn)行動物行為的密切觀察。
再試驗在該實驗期間的任何時候，若實驗者不能肯定爪回縮反應(yīng)不是對熱刺激的反應(yīng)，則可以在5～8分鐘后重新試驗該動物。這可以是由于該動物突然移動的緣故，也可以是施加該刺激時有尿或糞便的緣故。
可接受反應(yīng)將下列任何一種視為對熱刺激的反應(yīng)-爪子離開玻璃的回縮移動(往往隨后舔爪子)-身體側(cè)向移動(受刺激爪子的對側(cè))，-趾從玻璃上移開；-發(fā)炎爪子的中央平面(爪子中部)從該玻璃上移開。
分析數(shù)據(jù)表達(dá)為平均值±SEM。統(tǒng)計顯著性，對于純樸大鼠與發(fā)炎大鼠之間的比較來說是用T試驗評價的，而對于藥物有效性來說是先用單通道ANOVA隨后用Dunnett多比較試驗(post-hoc)評價的。當(dāng)最小p值≤0.05時，就認(rèn)為組與組之間的差異是顯著的。
實施例以下實施例將更詳細(xì)地進(jìn)一步描述本發(fā)明，這些實施例描述可以用來制備、精制、分析和生物學(xué)測試本發(fā)明化合物方法，不要將其理解為對本發(fā)明的限制。
中間體14-[(二甲氧基氧膦基)甲基]苯甲酸甲酯4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(11.2g，49mmol)和亞磷酸三甲酯(25mL)的混合物在N2下回流5小時。通過與甲苯共蒸餾脫除過量亞磷酸三甲酯，以定量產(chǎn)率給出中間體1。
1H NMR(CDCl3)δ3.20(d，2H，J＝22Hz，CHz)，3.68(d，3H 10.8Hz，OCH3)，3.78(d，3H，11.2Hz，OCH3)，3.91(s，3H，OCH3)，7.38(m，2H，Ar-H)，8.00(d，2H，J＝8Hz，Ar-H).
中間體24-(4-甲氧羰基偏亞芐基)哌啶-1-羧酸叔丁酯在-78℃，向中間體1在干燥THF(200mL)中的溶液中滴加二異丙基亞胺化鋰(32.7mL，己烷中1.5M，49mmol)。然后，在添加N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮(9.76g，49mmol，在100mL干燥THF中)之前使反應(yīng)混合物回升到室溫。12小時后，反應(yīng)混合物用水(300mL)熄滅、用乙酸乙酯(3×300mL)萃取。合并的有機(jī)相用MgSO4干燥、蒸發(fā)，給出一種產(chǎn)物，后者用閃急色譜法精制，提供白色固體狀中間體2(5.64g，35％)。
IR(NaCl)3424，2974，2855，1718，1688，1606，1427，1362，1276cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.44(s，9H)，2.31(t，J＝5.5Hz，2H)，2.42(t，J＝5.5Hz，2H)，3.37(t，J＝5.5Hz，2H)，3.48(t，J＝5.5Hz，2H)，3.87(s，3H，OCH3)，6.33(s，1H，CH)，7.20(d J＝6.7Hz，2H，Ar-H)，7.94(d，J，＝6.7Hz，2H，Ar-H)；13C NMR(CDCl3)δ28.3，29.2，36.19，51.9，123.7，127.8，128.7，129.4，140.5，142.1，154.6，166.8.
中間體34-溴-4-[溴-(4-甲氧羰基苯基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯向中間體2(5.2g，16mmol)和K2CO3(1.0g)在干燥二氯甲烷(200mL)中的混合物中添加溴(2.9g，18mmol)在30mL CH2Cl2中的0℃溶液。在室溫下1.5小時后，K2CO3過濾后的溶液濃縮。然后，將殘渣溶于乙酸乙酯(200mL)中，用水(200mL)、0.5M HCl(200mL)和食鹽水(200mL)洗滌，用MgSO4干燥。脫除溶劑提供一種產(chǎn)物，再用甲醇重結(jié)晶，給出白色固體狀中間體3(6.07g，78％)。
IR(NaCl)3425，2969，1725，1669，1426，1365，1279，1243 cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.28(s，9H)，1.75(m，1H)，1.90(m，1H)，2.1(m，2H)，3.08(br，2H)，3.90(s，3H，OCH3)，4.08(br，3H)，7.57(d，J＝8.4Hz，2H，Ar-H)7.98(d，J＝8.4Hz，2H，Ar-H)；13C NMR(CDCl3)δ28.3，36.6，38.3，40.3，52.1，63.2，72.9，129.0，130.3，130.4，141.9，154.4，166.3.
中間體44-[溴-(4-數(shù)基苯基)亞甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯將中間體3(5.4g，11mmol)在甲醇(300mL)和2.0M NaOH(100mL)中的溶液在40℃加熱3小時。該固體過濾收集、真空干燥過夜。將干燥的鹽溶解于40％乙腈/水中，用濃HCl調(diào)整到pH2。過濾分離出白色粉末狀中間體4(3.8g，87％)1H NMR(CDCl3)δ1.45(s，9H，tBu)，2.22(dd，J＝5.5Hz，6.1Hz，2H)，2.64(dd，J＝5.5Hz，6.1Hz，2H)，3.34(dd，J＝5.5Hz，6.1Hz，2H)，3.54(dd，J＝5.5Hz，6.1Hz，2H)，7.35(d，J＝6.7Hz，2H，Ar-H)，8.08(d，J＝6.7Hz，2H，Ar-H)；13C NMR(CDCl3)δ28.3，31.5，34.2，44.0，115.3，128.7，129.4，130.2，137.7，145.2，154.6.170.3中間體54-[溴-(4-二乙基氨基甲?；交?亞甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯向中間體4(1.0g，2.5mmol)在干燥二氯甲烷(10mL)中的-20℃溶液中添加氯甲酸異丁酯(450mg，3.3mmol)。在-20℃20分鐘后，添加二乙胺(4mL)，讓反應(yīng)物回升到室溫。1.5小時后蒸發(fā)溶劑，殘渣在乙酸乙酯與水之間分配。有機(jī)相用食鹽水洗滌、用MgSO4干燥。去除溶劑提供一種產(chǎn)物，后者用閃急色譜法精制，給出白色針狀中間體5(800mg，73％)
IR(NaCl)3051，2975，1694，1633，1416，1281，1168，1115cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.13(br，3H，CH3)，1.22(br，3H，CH3)，1.44(s，9H，tBu)，2.22(t，J＝5.5Hz，2H)，2.62(t，J＝5.5Hz，2H)，3.33(m，4H)，3.55(m，4H)，7.31(dJ＝8.0Hz，2H，Ar-H)，7.36(d，J＝8.0Hz，2H，Ar-H)；13C NMR(CDCl3)δ12.71，14.13，28.3，31.5，34.2，39.1，43.2，79.7，115.9，126.3，129.3，136.8，137.1，140.6，154.6，170.5。
中間體64-[溴(哌啶-4-亞基)甲基]-N，N-二乙基苯甲酰胺向中間體5(15.6g，34.6mmol)在二氯甲烷(200mL)中的溶液中添加三氟乙酸(30mL，311mmol)。該溶液在室溫下攪拌16小時。然后該溶液用飽和NaHCO3中和，水層用二氯甲烷(3×100mL)萃取，合并的有機(jī)萃取物干燥(Na2SO4)、過濾、濃縮，給出淡黃色固體狀中間體6(12.05g，99％)。
中間體7a4-{溴[1-(噻吩-2-基甲基)哌啶-4-亞基]甲基}-N，N-二乙基苯甲酰胺 向中間體6(1.4g，3.99mmol)在1，2-二氯乙烷(30mL)中的溶液中添加2-噻吩甲醛(746μL，7.99mmol)和三乙酰氧基硼氫化鈉(1.694g，7.99mmol)。反應(yīng)物在氮氣下在室溫攪拌。18小時后，反應(yīng)物用二氯甲烷稀釋、用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌。水層用2份二氯甲烷萃取，合并的有機(jī)萃取物用無水硫酸鈉干燥、過濾和濃縮。所得到的材料用閃急色譜法精制、用乙酸乙酯/己烷(7∶3)洗脫，得到粘稠無色油狀的中間體7a(1.702g，95％)。
中間體8a4-{(3-氨基苯基)[1-(噻吩-2-基甲基)哌啶-4-亞基]甲基}-N，N-二乙基苯甲酰胺 向中間體7a(1.702g，3.81mmol)在甲苯(40mL)和乙醇(8mL)的混合物中的溶液中添加間氨基苯硼酸一水合物(0.886g，5.71mmol)和碳酸鈉水溶液(2M，4.76mL，9.52mmol)。然后，讓氮氣在該溶液中鼓泡25分鐘后添加四(三苯膦)鈀(0.439g，0.38mmol)。該溶液在90℃加熱5小時、然后冷卻、添加飽和氯化銨(40mL)和乙酸乙酯。水層用2份乙酸乙酯萃取，合并的有機(jī)萃取物用無水硫酸鈉干燥、過濾、濃縮。所得到的材料用閃急色譜法精制、用5％甲醇/二氯甲烷洗脫，得到黃色泡沫狀中間體8a(1.605g，91％)。
化合物1[3-[[4-[(二乙胺基)羰基]苯基][1-(2-噻吩基甲基)-4-哌啶亞基]甲基]苯基]氨基甲酸甲酯 向中間體8a(465mg，1.01mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加三乙胺(436μL，3.13mmol)，隨后添加氯甲酸甲酯(86μL，1.11mmol)。該溶液攪拌1小時，添加飽和碳酸氫鈉(10mL)。水層用2份二氯甲烷萃取，合并的有機(jī)萃取物用無水硫酸鈉干燥、過濾、濃縮。殘渣用逆相色譜法精制，用含有0.1％三氟乙酸的10％～40％乙腈/水洗脫。產(chǎn)品是作為三氟乙酸鹽得到的，冷凍干燥，得到無色固體狀化合物1(70mg，12％產(chǎn)率)。純度(HPLC)＞99％(215nm)；＞99％(254nm)；＞99％(280nm).實測C，57.56；H，5.46；N，6.35.C30H35N3O3S×1.4TFA×0.4H2O有C，57.55；H，5.48；N，6.14％.1HNMR(400MHz，CDCl3)δ1.09-1.17(br s，3H)，1.19-1.28(br s，3H)，2.68-2.76(m，6H)，3.23-3.30(br s，2H)，3.52-3.65(m，4H)，3.77(s，3H)，4.43(s，2H)，6.71-6.77(m，2H)，7.07-7.12(m，3H)，7.20-7.25(m，4H)，7.31(d，J＝8.58Hz，2H)，7.44(dd，J＝5.2Hz，1.09Hz，1H).
中間體7b4-{溴[1-(2-呋喃基甲基)哌啶-4-亞基]甲基}-N，N-二乙基苯甲酰胺 向中間體6(1.4g，3.99mmol)在1，2-二氯乙烷(30mL)中的溶液中添加2-糠醛(62μL，7.99mmol)和三乙酰氧基硼氫化鈉(1.694g，7.99mmol)。反應(yīng)物在氮氣下在室溫攪拌。18小時后，反應(yīng)物用二氯甲烷稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌。水層用2份二氯甲烷萃取，合并的有機(jī)萃取物用無水硫酸鈉干燥、過濾、濃縮。所得到的材料用閃急色譜法精制、用乙酸乙酯/己烷(7∶3)洗脫，得到淡黃色油狀中間體7b(1.503g，87％)。
中間體8b4-{(3-氨基苯基)[1-(2-呋喃基甲基)哌啶-4-亞基]甲基}-N，N-二乙基苯甲酰胺
向中間體7b(2.120g，4.93mmol)在甲苯(50mL)和乙醇(10mL)的混合物中的溶液中添加間氨基苯硼酸一水合物(1.145g，7.39mmol)和碳酸鈉水溶液(2M，6.15mL，12.31mmol)。然后，讓氮氣在該溶液中鼓泡25分鐘，隨即添加四(三苯膦)鈀(0.569，0.49mmol)。該溶液在90℃加熱5小時、然后冷卻、添加飽和氯化銨(40mL)和乙酸乙酯。水層用2份乙酸乙酯萃取、合并的有機(jī)萃取物用無水硫酸鈉干燥、過濾、濃縮。所得到的材料用閃急色譜法精制、用5％甲醇/二氯甲烷洗脫，得到黃色泡沫狀中間體8b(1.967g，90％)。
化合物2[3-[[4-[(二乙胺基)羰基]苯基][1-(2-呋喃基甲基)-4-哌啶亞基]甲基]苯基]氨基甲酸甲酯 向中間體8b(858mg，1.93mmol)在二氯甲烷(12mL)中的溶液中添加三乙胺(836μL，5.98mmol)，隨后添加氯甲酸甲酯(164μL，2.12mmol)。該溶液攪拌1小時，添加飽和碳酸氫鈉(10mL)。水層用2份二氯甲烷萃取，合并的有機(jī)萃取物用無水硫酸鈉干燥、過濾、濃縮。殘渣用逆相色譜法精制、用含有0.1％三氟乙酸的10％～40％乙腈/水洗脫。產(chǎn)品用閃急色譜法再精制，用1％氫氧化銨10％甲醇/二氯甲烷洗脫。該產(chǎn)品溶解于二乙醚(20mL)中，添加1 MHCl/二乙醚(3mL)溶液、蒸發(fā)溶劑。產(chǎn)品化合物2是作為對應(yīng)鹽酸鹽和作為白色粉末(121mg，12％產(chǎn)率)得到的。
純度(HPLC)＞99％(215nm)；＞99％(254nm)；＞99％(280nm).實測C，64.12；H，6.74；N，7.47.C30H35N3O4×1.4HCl×0.5H2O有C，64.15；H，6.71；N，7.48％.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.12-1.24 (m，6H)，1.87(br s，2H)，2.68(br s，2H)，2.98(s，3H)，3.00(br s，2H)，3.27(br s，2H)，3.45-3.60 (m，4H)，4.29(br s，2H)，6.46(br s，1H)，6.80(br s，2H)，7.08(br s，2H)，7.14(br s，1H)，7.26 br s，2H)，7.30(br s，2H)，7.51(br s，1H).
中間體7c4-{溴[1-(苯甲基)哌啶-4-亞基]甲基}-N，N-二乙基苯甲酰胺 向中間體6(7.783g，22.2mmol)在二氯甲烷(160mL)中的溶液中添加三乙胺(9.3mL，66.8mmol)和芐基溴(3.2mL，26.9mmol)。反應(yīng)物在氮氣下在室溫攪拌。24小時后，反應(yīng)物用水洗滌、水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)萃取物用無水硫酸鈉干燥、過濾、濃縮。所得到的材料用閃急色譜法精制、用乙酸乙酯/己烷(7∶3)洗脫，得到無色固體狀中間體7c(6.89g，70％)。
中間體8c4-{(3-氨基苯基)[1-(苯甲基)哌啶-4-亞基]甲基}-N，N-二乙基苯甲酰胺
向中間體7c(8.50g，19.3mmol)在二甲苯(120mL)和乙醇(80mL)的混合物中的溶液中添加間氨基苯硼酸一水合物(3.96g，28.9mmol)和碳酸鈉水溶液(2M，29.0mL，58mmol)。然后，讓氮氣在該溶液中鼓泡25分鐘，隨即添加四(三苯膦)鈀(1.67g，1.4mmol)。該溶液在90℃加熱18小時，然后冷卻、添加水(60mL)和乙酸乙酯。水層用2份乙酸乙酯萃取，合并的有機(jī)萃取物用無水硫酸鈉干燥、過濾、濃縮。所得到的材料用閃急色譜法精制、用2％～4％甲醇/二氯甲烷洗脫，得到橙色泡沫狀中間體8c(8.14g，93％)。
化合物3[3-[[4-[(二乙胺基)羰基]苯基][1-(苯甲基)-4-哌啶亞基[甲基]苯基]氨基甲酸甲酯 向中間體8c(400mg，0.88mmol)在四氫呋喃(10mL)中的溶液中添加三乙胺(135μL，0.97mmol)，隨后添加氯甲酸甲酯(75μL，0.97mmol)。該溶液攪拌1小時，添加飽和碳酸氫鈉(10mL)。水層用2份二氯甲烷萃取、合并的有機(jī)萃取物用無水硫酸鈉干燥、過濾、濃縮。殘渣用逆相色譜法精制。產(chǎn)品是作為對應(yīng)的三氟乙酸鹽和作為白色粉末得到的(212mg，38％產(chǎn)率)。
純度(HPLC)＞99％(215nm)；＞99％(254mm)；＞99％(280nm).實測C，60.53；H，5.56；N，6.30.C32H37N3O3×1.6TFA×0.2H2O有C，60.60；H，5.63；N，6.02％.1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.07-1.11(m，3H)，1.19-1.22(m，3H)，2.40-2.51(m，2H)，2.70-2.78(m，2H)，3.08-3.11(m，2H)，3.23-3.28(m，2H)，3.49-3.51(m，4H)，3.68(s，3H)，4.32(s，2H)，6.76-6.79(m，1H)，7.21-7.24(m，4H)，7.3 1-7.35(m，3H)，7.45-7.50(m，5H).
中間體94[(3-氨基苯基)[4-[(二乙胺基)羰基]苯基]亞甲基]-1-哌啶羧酸1，1-二甲基乙酯 向一個含有中間體5(5.94g，13.2mmol)的燒瓶中添加甲苯(130mL)、乙醇(25mL)、2.0M碳酸鈉(16mL，32.4mmol)和3-氨基苯硼酸(3.09g，19.9mmol)。該溶液脫氣20分鐘，然后添加四(三苯膦)鈀(1.53g，1.32mmol)。反應(yīng)混合物在90℃在N2下加熱過夜。反應(yīng)物濃縮，殘渣用乙酸乙酯稀釋。該溶液用2份食鹽水洗滌，有機(jī)層干燥(Na2SO4)、過濾、濃縮。殘渣用閃急色譜法精制、用3％甲醇/二氯甲烷洗脫，得到無色固體狀中間體9(6.12g，97％)(400MHz，CDCl3)δ1.08-1.18(m，3H)，1.18-1.28(m，3H)，2.27-2.36(m，4H)，3.23-3.34 (m，2H)，3.40-3.48(m，2H)，3.49-3.58(m，2H)，3.60-3.66 (m，2H)，6.38-6.41(m，1H)，6.50-6.59(m，2H)，7.08(t，J＝7.60Hz，1H)，7.14(d，J＝8.32Hz，2H)，7.30(d，J＝8.17Hz，2H).
中間體103-[{4-[(二甲胺基)羰基]苯基}(哌啶-4-亞基)甲基]苯基氨基甲酸甲酯
氯甲酸甲酯(0.22mL，2.89mmol)和鋅粉(0.190g，2.89mmol)一起在干燥甲苯(10mL)中攪拌10分鐘。中間體9(1.34g，2.89mmol)在甲苯(20mL)中的溶液用導(dǎo)管導(dǎo)入反應(yīng)混合物中。反應(yīng)物在N2下在室溫攪拌過夜。該溶液用二氯甲烷稀釋、用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌。水層用2份二氯甲烷萃取、合并的有機(jī)萃取物用一份食鹽水洗滌、干燥(Na2SO4)、過濾、濃縮。殘渣用閃急色譜法精制、用0％～50％乙酸乙酯/己烷洗脫。將該材料溶解于二氯甲烷(50mL)中，添加三氟乙酸(5mL)。反應(yīng)物在室溫攪拌18小時。緩慢添加飽和碳酸氫鈉水溶液，然后將兩相分離。水層用2份二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)萃取物用一份食鹽水洗滌、然后干燥(Na2SO4)、過濾、濃縮，給出無色固體狀中間體10(0.908g，75％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ1.09-1.17(m，3H)，1.20-1.28(m，3H)，2.43-2.53(m，4H)，2.99-3.09(m，4H)，3.23-3.34(m，2H)，3.49-3.59(m，2H)，3.76(s，3H)，6.77-6.80(m，1H)，7.11-7.17(m，3H)，7.21-7.26(m，1H)，7.27-7.33(m，3H).
化合物43-{{4-[(二乙胺基)羰基]苯基}[1-(1，3-噻唑-4-基甲基)哌啶-4-亞基]甲基}苯基氨基甲酸甲酯 向中間體10(0.284g，0.944mmol)在干燥DMF(8mL)中的溶液中添加碳酸鉀(0.186g，1.35mmol)和鹽酸4-氯甲基噻唑(0.229g，1.35mmol)。反應(yīng)物在氮氣下在室溫攪拌2天。將反應(yīng)混合物濃縮、殘渣用二氯甲烷稀釋、用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌。水層用2份二氯甲烷萃取、合并的有機(jī)萃取物干燥(Na2SO4)、過濾、濃縮。殘渣用逆相色譜法精制、用含有0.1％三氟乙酸的10％～45％乙腈/水洗脫。產(chǎn)品是作為其TFA鹽得到的、冷凍干燥，給出無色固體狀化合物4(0.183g，41％)。
純度(HPLC)＞99％(215nm)；＞99％(254nm)；＞99％(280nm).1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.13(br t，J＝6.83Hz，3H)，1.25(brt，J＝7.03Hz，3H)，2.90-2.97(m，4H)，3.27-3.35(m，2H)，3.49-3.58(m，6H)，3.70-3.73(m，3H)，4.87(s，2H)，6.83-6.87(m，1H)，7.24-7.32 (m，4H)，7.38(d，J＝8.20Hz，2H)，7.41-7.44 (m，1H)，8.31(d，J＝2.15Hz，1H)，9.19(d，J＝1.76Hz，1H).
化合物53-{{4-[(二乙胺基)羰基]苯基}[1-(1，3-噻唑-5-基甲基)哌啶-4-亞基]甲基}苯基氨基甲酸甲酯 向中間體10(0.250g，0.593mmol)在1，2-二氯乙烷(15mL)中的溶液中添加噻唑-5-甲醛(0.107g，0.949mmol)和三乙酰氧基硼氫化鈉(0.214g，1.01mmol)。反應(yīng)物在氮氣下在室溫攪拌2天。混合物用二氯甲烷稀釋、用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌。水層用2份二氯甲烷萃取、合并的有機(jī)萃取物干燥(Na2SO4)、過濾、濃縮。殘渣用逆相色譜法精制、用含有0.1％三氟乙酸的10％～45％乙腈/水洗脫。產(chǎn)品是作為其TFA鹽得到的，冷凍干燥，給出無色固體狀化合物5(0.191g，51％)。
純度(HPLC)＞99％(215m)；＞99％(254nm)；＞99％(280nm).1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.12(br t，J＝6.64Hz，3H)，1.24(br t，J＝7.03Hz，3H)，2.52-2.85(m，4H)，3.25-3.34(m，4H)，3.48-3.58(m，4H)，3.69-3.73(m，3H)，4.73(s，2H)，6.78-6.83(m，1H)，7.23-7.28(m，4H)，7.36(d，J＝8.40Hz，2H)，7.38-7.42(m，1H)，8.08-8.10(m，1H)，9.18-9.21(m，1H).
權(quán)利要求
1.式I化合物、其醫(yī)藥上可接受的鹽、其非對映異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、或其混合物 式中R1選自C6-10芳基和C2-6雜芳基，其中所述C6-10芳基和C2-6雜芳基任選地有一個或多個選自-R，-NO2，-OR，-Cl，-Br，-I，-F，-CF3，-C(＝O)R，-C(＝O)OH，-NH2，-SH，-NHR，-NR2，-SR，-SO3H，-SO2R，-S(＝O)R，-CN，-OH，-C(＝O)OR，-C(＝O)NR2，-NRC(＝OR，和-NRC(＝O)-OR，的基團(tuán)取代，其中R獨立地是氫或C1-6烷基；和R2、R3、R4和R5獨立地選自氫、C1-6烷基、和C3-6環(huán)烷基、其中所述C1-6烷基和C3-6環(huán)烷基任選地有一個或多個選自-R，-NO2，-OR，-Cl，-Br，-I，-F，-CF3，-C(＝O)R，-C(＝O)OH，-NH2，-SH，-NHR，-NR2，-SR，-SO3H，-SO2R，-S(＝O)R，-CN，-OH，-C(＝O)OR，-C(＝O)NR2，-NRC(＝O)R，和-NRC(＝O)-OR的基團(tuán)取代，其中R獨立地是氫或C1-6烷基。
2.按照權(quán)利要求1的化合物，式中R1選自苯基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、咪唑基、三唑基、吡咯基、噻唑基、和N-氧化吡啶基，其中R1任選地有一個或多個選自C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、-NO2、-CF3、C1-6烷氧基、氯、氟、溴、和碘的基團(tuán)取代；R2、R3、和R4獨立地是C1-3烷基或鹵代C1-3烷基；R5選自氫、C1-6烷基、和C3-6環(huán)烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6環(huán)烷基任選地有一個或多個選自C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、-NO2、-CF3、C1-6烷氧基、氯、氟、溴和碘的基團(tuán)取代。
3.按權(quán)利要求1的化合物，式中R1選自苯基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、咪唑基、吡咯基、和噻唑基，其中R1任選地有一個或多個選自C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、-NO2、-CF3、C1-6烷氧基、氯、氟、溴、和碘的基團(tuán)取代；R2、R3、R4獨立地是C1-3烷基、鹵代C1-3烷基；和R5是氫。
4.按照權(quán)利要求1的化合物，式中R1選自苯基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、咪唑基、吡咯基、和噻唑基；R2和R3是乙基；R4是C1-3烷基；和R5是氫。
5.按照權(quán)利要求1的化合物，其中該化合物選自[3-[[4-[(二乙胺基)羰基]苯基][1-(2-噻吩基甲基)-4-哌啶亞基]甲基]苯基]氨基甲酸甲酯；[3-[[4-[(二乙胺基)羰基]苯基][1-(2-呋喃基甲基)-4-哌啶亞基]甲基]苯基]氨基甲酸甲酯；[3-[[4-[(二乙胺基)羰基]苯基][1-(苯甲基)-4-哌啶亞基]甲基]苯基]氨基甲酸甲酯；3-{{4-[(二乙胺基)羰基]苯基}[1-(1，3-噻唑-4-基甲基)哌啶-4-亞基]甲基}苯基氨基甲酸甲酯；3-{{4-[(二乙胺基)羰基]苯基}[1-(1，3-噻唑-5-基甲基)哌啶-4-亞基]甲基}苯基氨基甲酸甲酯；及其醫(yī)藥上可接受鹽。
6.按照權(quán)利要求1～5中任何一項的化合物用來作為一種藥劑。
7.按照權(quán)利要求1～5中任何一項的化合物的用途，用于制造疼痛、焦慮或功能性胃腸紊亂治療用藥劑。
8.一種醫(yī)藥組合物，包含按照權(quán)利要求1～5中任何一項的化合物和醫(yī)藥上可接受的載體。
9.溫血動物中疼痛的治療方法，包含對所述需要此類治療的動物給藥治療有效量的按照權(quán)利要求1～5中任何一項的化合物的步驟。
10.溫血動物中功能性胃腸紊亂的治療方法，包含對所述需要此類治療的動物給藥治療有效量的按照權(quán)利要求1～5中任何一項的化合物的步驟。
11.一種式I化合物制備方法， 包含使式II化合物與X-C(＝O)-O-R4反應(yīng)， 式中X是Cl、Br或I；R1選自C6-10芳基和C2-6雜芳基，其中所述C6-10芳基和C2-6雜芳基任選地有一個或多個選自-R，-NO2，-OR，-Cl，-Br，-I，-F，-CF3，-C(＝O)R，-C(＝O)OH，-NH2，-SH，-NHR，-NR2，-SR，-SO3H，-SO2R，-S(＝O)R，-CN，-OH，-C(＝O)OR，-C(＝O)NR2，-NRC(＝O)R，和-NRC(＝O)-OR的基團(tuán)取代，式中R獨立地是氫或C1-6烷基；和R2、R3、R4和R5獨立地選自氫、C1-6烷基、和C3-6環(huán)烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6環(huán)烷基任選地有一個或多個選自-R，-NO2，-OR，-Cl，-Br，-I，-F，-CF3，-C(＝O)R，-C(＝O)OH，-NH2，-SH，-NHR，-NR2，-SR，-SO3H，-SO2R，-S(＝O)R，-CN，-OH，-C(＝O)OR，-C(＝O)NR2，-NRC(＝O)R，和-NRC(＝O)-OR的基團(tuán)取代，式中R獨立地是氫或C1-6烷基。
12.一種式III化合物 式中R2、R3、R4和R5獨立地選自氫、C1-6烷基、和C3-6環(huán)烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6環(huán)烷基任選地有一個或多個選自-R，-NO2，-OR，-Cl，-Br，-I，-F，-CF3，-C(＝O)R，-C(＝O)OH，-NH2，-SH，-NHR，-NR2，-SR，-SO3H，-SO2R，-S(＝O)R，-CN，-OH，-C(＝O)OR，-C(＝O)NR2，-NRC(＝O)R，和-NRC(＝O)-OR的基團(tuán)取代，式中R獨立地是氫或C1-6烷基；和R6選自-H和-C(＝O)-O-C1-6烷基。
13.一種式I化合物的制備方法， 包含使式IV化合物與R1-CHO或R1CH2-X反應(yīng)， 式中X是Cl、Br或I；R1選自C6-10芳基和C2-6雜芳基，其中所述C6-10芳基和C2-6雜芳基任選地有一個或多個選自-R，-NO2，-OR，-Cl，-Br，-I，-F，-CF3，-C(＝O)R，-C(＝O)OH，-NH2，-SH，-NHR，-NR2，-SR，-SO3H，-SO2R，-S(＝O)R，-CN，-OH，-C(＝O)OR，-C(＝O)NR2，-NRC(＝O)R，和-NRC(＝O)-OR的基團(tuán)取代，式中R獨立地是氫或C1-6烷基；R2、R3、R4和R5獨立地選自氫、C1-6烷基、和C3-6環(huán)烷基，其中所述C1-6烷基和C3-6環(huán)烷基任選地有一個或多個選自-R，-NO2，-OR，-Cl，-Br，-I，-F，-CF3，-C(＝O)R，-C(＝O)OH，-NH2，-SH，-NHR，-NR2，-SR，-SO3R，-SO2R，-S(＝O)R，-CN，-OH，-C(＝)OR，-C(＝O)NR2，-NRC(＝O)R，和-NRC(＝O)-OR的基團(tuán)取代，式中R獨立地是氫或C1-6烷基。
全文摘要
制備了通式(I)的化合物，式中R
文檔編號A61K31/44GK1735596SQ200480002123
公開日2006年2月15日 申請日期2004年1月13日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月16日
發(fā)明者W·布朗, A·格里芬, C·沃波爾 申請人:阿斯利康(瑞典)有限公司