專利名稱：抗－胰島素樣生長因子Ⅰ受體抗體的用途的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及抗-胰島素樣生長因子I受體(IGF-IR)抗體的用途、和包含抗-胰島素樣生長因子I受體抗體的組合物。
胰島素樣生長因子(IGF-I)是一種在血漿內(nèi)以高濃度循環(huán)的7.5-kD多肽，在大多數(shù)組織中都可以檢測得到。IGF-I刺激細胞分化和細胞增殖，是大多數(shù)哺乳動物細胞類型持續(xù)增殖所需的。這些細胞類型尤其包括人二倍體纖維母細胞、上皮細胞、平滑肌細胞、T淋巴細胞、神經(jīng)細胞、骨髓細胞、軟骨細胞、成骨細胞和骨髓干細胞。
導(dǎo)致IGF-I刺激細胞增殖和分化的轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的第一步是IGF-I或IGF-II(或超生理濃度下的胰島素)與IGF-I受體的結(jié)合。IGF-I受體(IGF-IR)由兩種類型的亞單位組成α亞單位(完全位于細胞外且功能為結(jié)合配體的130-135kD蛋白質(zhì))和β亞單位(95-kD的跨膜蛋白質(zhì)，具有跨膜和胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域)。IGF-IR最初合成為單鏈受體原多肽，經(jīng)過糖基化、蛋白酶切割、和共價結(jié)合處理裝配成含有兩個α亞單位和兩個β亞單位的成熟460-kD異四聚體。β亞單位具有由配體激活的酪氨酸激酶活性。這一活性參與介導(dǎo)配體作用的信號傳導(dǎo)途徑，該途徑包括β亞單位的自磷酸化和IGF-IR底物的磷酸化。
已有大量證據(jù)證明IGF-I和/或IGF-IR在體內(nèi)外維持腫瘤細胞中的作用。已經(jīng)評估了肺(Kaiser等人，J.Cancer Res.Clin.Oncol.119665-668，1993；Moody等人，Life Sciences 521161-1173，1993；Macauley等人，Cancer Res.，502511-2517，1990)、乳房(Pollak等人，Cancer Lett.38223-230，1987；Foekens等人，Cancer Res.497002-7009，1989；Cullen等人，Cancer Res.497002-7009，1990；Arteaga等人，J.Clin.Invest.841418-1423，1989)、前列腺和結(jié)腸(Remaole-Bennet等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.75609-616，1992；Guo等人，Gastroenterol.1021101-1108，1992)腫瘤中的IGF-IR水平。此外，IGF-I似乎是人神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤的自分泌刺激劑(Sandberg-Nordqvist等人，Cancer Res.532475-2478，1993)，而IGF-I刺激過表達IGF-IR的纖維肉瘤的生長(Butler等人，Cancer Res.583021-27，1998)。此外，帶有“高正?！彼絀GF-I的個體與帶有“低正?！狈秶鶬GF-I水平的個體相比，患普通癌癥的風(fēng)險更高(Rosen等人，Trends Endocrinol.Metab.10136-41，1999)。關(guān)于IGF-I/IGF-I受體互作在各種腫瘤生長中所起的作用的綜述參見Macaulay，Br.J.Cancer，65311-320，1992。
限制卡路里是提高各種動物物種(包括哺乳動物)壽命的最有效且可重復(fù)的措施。它也是實驗致癌模型中最有效、作用最廣的癌癥預(yù)防療法。作為其諸多有益效果基礎(chǔ)的一種重要生物學(xué)機制是胰島素樣生長因子-1途徑(Hursting等人，Annu.Rev.Med.54131-52，2003)。
考慮到當IGF-I和/或IGF-IR過表達時IGF-I和IGF-IR在比如癌癥和其它增殖性疾病這樣的疾病中的作用，已經(jīng)生產(chǎn)出了阻斷IGF-I或IGF-II與IGF-IR結(jié)合的IGF-IR抗體。這樣的抗體描述在，比如，2002年7月11日公開的WO 02/05359中。這些公開文本，包括所描述的所有序列，引入本文作為參考。用這樣的高親和力人抗-IGF-IR抗體治療人類中的相關(guān)疾病是人們所希望的。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及治療或預(yù)防疾病的方法，其中所述疾病選自哺乳動物的多發(fā)性骨髓瘤、液體腫瘤(liquid tumor)、肝癌、胸腺疾病、T-細胞介導(dǎo)的自體免疫疾病、內(nèi)分泌學(xué)疾病(endocronologicaldisorder)、缺血、和神經(jīng)變性疾病，該方法包括向所述哺乳動物施用對治療所述疾病有效的量的人抗-IGF-IR抗體。在一種實施方式中，該方法還包括與選自皮質(zhì)類固醇、止吐藥、癌癥疫苗、止痛劑、抗血管劑(anti-vascular agent)、和抗增殖劑的試劑聯(lián)合向所述哺乳動物施用所述抗體。
液體腫瘤優(yōu)選為急性淋巴細胞白血病(ALL)或慢性milogenic白血病(CML)。肝癌優(yōu)選為肝細胞瘤、肝細胞癌、膽管癌、血管肉瘤(angiosarcomas)、血管肉瘤(hemangiosarcomas)、或肝胚細胞瘤。胸腺疾病優(yōu)選為胸腺瘤或甲狀腺炎。T-細胞介導(dǎo)的自體免疫疾病優(yōu)選為多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、格雷夫斯病(Grave’s Disease)、橋本甲狀腺炎、重癥肌無力、自身免疫性甲狀腺炎、或Bechet’s病。內(nèi)分泌學(xué)疾病優(yōu)選為II型糖尿病、甲狀腺功能亢進、甲狀腺機能減退、甲狀腺炎、腎上腺皮質(zhì)功能亢進和腎上腺皮質(zhì)機能減退。缺血優(yōu)選為post-cardiac缺血。神經(jīng)變性疾病優(yōu)選為早老性癡呆。
當抗體與抗增殖劑組合給藥時，優(yōu)選該藥劑選自法尼基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶抑制劑、αvβ3抑制劑、αvβ5抑制劑、p53抑制劑、和PDGFR抑制劑。
當該抗體與抗-血管劑組合給藥時，優(yōu)選該藥劑選自bevacizumab或rhuMAb-VEGF。
當該抗體與止吐藥組合給藥時，優(yōu)選該藥劑選自鹽酸昂丹司瓊(ondansetron hydrochloride)、鹽酸格拉司瓊(granisetronhydrochloride)、metroclopramide、多潘立酮(domperidone)、氟哌啶醇(haloperidol)、賽克力嗪(cyclizine)、勞拉西泮(lorazepam)、丙氯拉嗪(prochlorperazine)、地塞米松、甲氧異丁嗪(levomepromazine)、或托烷司瓊(tropisetron)。
當該抗體與疫苗組合給藥時，優(yōu)選該疫苗選自GM-CSF DNA和基于細胞的疫苗、樹突細胞疫苗、重組病毒疫苗、熱休克蛋白(HSP)疫苗、同種異體或自體腫瘤疫苗。在一種實施方式中，該疫苗為以肽、DNA、或細胞為基礎(chǔ)的。
當該抗體與止痛劑組合給藥時，優(yōu)選該藥劑選自布洛芬、萘普生、三水楊酸膽堿鎂、或鹽酸羥考酮。
在一種優(yōu)選實施方式中，該哺乳動物是人。
在一種實施方式中，結(jié)合IGF-IR的抗體具有以下特性對人IGF-IR的結(jié)合親和力的Kd為8×10-9或更低；抑制人IGF-IR和IGF-1間結(jié)合的IC50小于100nM；及含有包含人FRI、FR2、和FR3氨基酸序列的重鏈氨基酸序列，該人FRI、FR2、和FR3氨基酸序列對應(yīng)于VH DP-35、VIV-4/4.35、VHDP-47、或VH DP-71基因的FR1、FR2、和FR3氨基酸序列、或其中的保守替代或體細胞突變(somatic mutations)，其中FR序列與CDR1、CDR2、和CDR3序列相連，且其中抗體在其輕鏈中還含有來自A27、A30、或O12基因的CDR區(qū)域。
作為替代，該抗體與含有選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3、和6.1.1的抗體的重鏈和輕鏈氨基酸序列的抗體競爭結(jié)合。例如，該抗體可以與由含有選自抗體2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3、和6.1.1的重鏈和輕鏈氨基酸序列的抗體所結(jié)合的表位結(jié)合。
在另一種實施方式中，利用含有包含CDR-1、CDR-2、和CDR-3氨基酸序列的重鏈和包含CDR-1、CDR-2、和CDR-3氨基酸序列的輕鏈的抗體來實踐本發(fā)明，其中的重鏈CDR-1、CDR-2和CDR-3氨基酸序列和輕鏈CDR-1、CDR-2和CDR-3氨基酸序列是選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3、和6.1.1的抗體的重鏈CDR-1、CDR-2和CDR-3氨基酸序列和輕鏈CDR-1、CDR-2和CDR-3氨基酸序列，或是與所述CDR序列相比具有如下改變的序列，其中所述改變選自保守改變、非保守替代、添加和缺失，其中所述保守改變選自非極性殘基用不同的非極性殘基替換、極性帶電殘基用不同的極性不帶電殘基替換、極性帶電荷的殘基用不同的極性帶電荷殘基替換和結(jié)構(gòu)相似殘基的替代，其中的非保守替代選自極性不帶電殘基對極性帶電殘基的替代、和極性殘基對非極性殘基的替代。
在一種優(yōu)選實施方式中，該抗體含有含CDR-1、CDR-2、和CDR-3氨基酸序列的重鏈和含CDR-1、CDR-2、和CDR-3氨基酸序列的輕鏈，其中的重鏈CDR-1、CDR-2和CDR-3氨基酸序列和輕鏈CDR-1、CDR-2和CDR-3氨基酸序列是選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3、或6.1.1的抗體的重鏈CDR-1、CDR-2和CDR-3氨基酸序列和輕鏈CDR-1、CDR-2和CDR-3氨基酸序列。在另一種實施方式中，該抗體含有衍生自人基因DP-47的重鏈氨基酸序列和衍生自人基因A30的輕鏈氨基酸序列。
本發(fā)明還涉及一種用于治療哺乳動物疾病的藥物組合物，它包括對治療所述疾病有效的量的人抗-IGF-IR抗體和藥學(xué)可接受載體，其中所述疾病選自多發(fā)性骨髓瘤、液體腫瘤、肝癌、胸腺疾病、T-細胞介導(dǎo)的自體免疫疾病、內(nèi)分泌疾病、缺血、和神經(jīng)變性疾病。在一種實施方式中，本發(fā)明涉及一種還包含與所述抗體聯(lián)合后對治療所述疾病有效的量的皮質(zhì)類固醇、止吐藥、癌癥疫苗、止痛劑、抗血管劑、和抗增殖劑的聯(lián)合型藥物組合物。
本發(fā)明還涉及一定量人抗-IGF-IR抗體用于制備治療哺乳動物疾病的組合物的用途，其中所述抗體量對治療所述疾病有效，其中所述疾病選自多發(fā)性骨髓瘤、液體腫瘤、肝癌、胸腺疾病、T-細胞介導(dǎo)的自體免疫疾病、內(nèi)分泌疾病、缺血、和神經(jīng)變性疾病。
附圖簡述

圖1A-1C顯示來自六個人抗-IGF-IR抗體的輕鏈可變區(qū)核苷酸序列間的相互比對以及與種系序列(germline sequence)的比對。圖1A顯示抗體2.12.1(SEQ ID NO1)、2.13.2(SEQ ID NO5)、2.14.3(SEQ ID NO9)、和4.9.2(SEQ ID NO13)的輕鏈(VL)可變區(qū)核苷酸序列間的相互比對以及與種系VκA30序列(SEQ ID NO39)的比對。圖1B顯示抗體4.17.3(SEQ ID NO17)的VL核苷酸序列與種系VκO12序列(SEQ ID NO41)的比對。圖1C顯示抗體6.1.1(SEQ ID NO21)的VL核苷酸序列與種系VκA27序列(SEQ IDNO37)的比對。這些比對還顯示了來自各抗體VL的CDR區(qū)域。圖1A-1C的共有序列分別示于SEQ ID NO53-55。
圖2A-2D顯示來自六個人抗-IGF-IR抗體的重鏈可變區(qū)核苷酸序列間的相互比對以及與種系序列的比對。圖2A顯示抗體2.12.1的VH核苷酸序列(SEQ ID NO3)與種系VH DP-35序列(SEQ ID NO29)的比對。圖2B顯示抗體2.14.3的VH核苷酸序列(SEQ ID NO11)與種系VIV-4/4.35序列(SEQ ID NO43)的比對。圖2C-1和2C-2顯示抗體2.13.2(SEQ ID NO7)、4.9.2(SEQ ID NO15)和6.1.1(SEQ ID NO23)的VH核苷酸序列間的相互比對以及與種系VH DP-47序列(SEQ ID NO31)的比對。圖2D顯示抗體4.17.3的VH核苷酸序列(SEQ ID NO19)與種系VH DP-71序列(SEQ ID NO35)的比對。該比對還顯示這些抗體的CDR區(qū)域。圖2A-2D的共有序列分別示于SEQ ID NO56-59。
圖3A顯示，與種系序列相比，2.13.2和2.12.1重鏈和輕鏈的不同區(qū)域內(nèi)的突變數(shù)量。圖3A-D顯示抗體2.13.2和2.12.1的重鏈和輕鏈氨基酸序列與它們所來源的種系序列間的比對。圖3B顯示抗體2.13.2(SEQ ID NO45)重鏈氨基酸序列與種系序列DP-47(3-23)/D6-19/JH6氨基酸序列(SEQ ID NO46)的比對。圖3C顯示抗體2.13.2輕鏈氨基酸序列(SEQ ID NO47)與種系序列A30/Jk2氨基酸序列(SEQID NO48)的比對。圖3D顯示抗體2.12.1重鏈氨基酸序列(SEQID NO49)與種系序列DP-35(3-11)/D3-3/JH6氨基酸序列(SEQ IDNO50)的比對。圖3E抗體2.12.1輕鏈氨基酸序列(SEQ ID NO51)與種系序列A30/Jk1氨基酸序列(SEQ ID NO52)的比對。對于圖3B-E，信號序列以斜體表示，CDR以下劃線表示，恒定區(qū)為黑體，構(gòu)架區(qū)(FR)突變在該氨基酸殘基上用加號(“+”)突出顯示，CDR突變用星號在該氨基酸殘基上突出顯示。
圖4顯示，抗-IGF-IR抗體2.13.2和4.9.2減少3T3-IGF-IR腫瘤中的IGF-IR磷酸酪氨酸信號。
圖5顯示，抗-IGF-IR抗體2.13.2抑制體內(nèi)3T3-IGF-IR腫瘤生長。
發(fā)明詳述本文中引用的所有專利、專利申請、和其它參考文獻全文引入本文作為參考。
抗體還可與其它可用于治療異常IGF-IR活性的藥劑，包括但不限于比如WO 02/053596中所述的不同抗-IGF-IR抗體，以及其它也能夠阻斷IGF-IR的藥劑一同使用。
本文所述的聯(lián)合(組合)治療可以通過同時、順序或分開施予各單個治療組分來實現(xiàn)。
使用該抗體可以治療或預(yù)防初次疾病(initial disease)、或治療或預(yù)防復(fù)發(fā)。它可用于治療早期或晚期疾病。
除非另外指明，如本文所使用的術(shù)語“治療(treating)”意指，預(yù)防該用語所應(yīng)用的疾病或狀況、或這樣的疾病或狀況的一或多種癥狀，或逆轉(zhuǎn)、減輕、抑制上述疾病或狀況的進程。除非另外指明，如本文所使用的術(shù)語“治療(treatment)”是指，如上述定義的“治療”的治療行為。
除非在本文中另外指明，所使用的與本發(fā)明相關(guān)的科技術(shù)語應(yīng)當具有本領(lǐng)域技術(shù)人員通常所理解的含義。一般地，本文中所使用的與細胞和組織培養(yǎng)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、遺傳學(xué)以及蛋白質(zhì)和核酸化學(xué)和雜交有關(guān)的命名學(xué)和技術(shù)是本領(lǐng)域已知的和常用的。
除非在本文中另外指明，以下術(shù)語應(yīng)當理解為具有以下含義“抗體”指，與完整抗體競爭特異性結(jié)合的完整免疫球蛋白或其抗原結(jié)合部分?？乖Y(jié)合部分可以通過重組DNA技術(shù)或通過對完整抗體的酶或化學(xué)切割來制備?？乖Y(jié)合部分包括，尤其是，F(xiàn)ab、Fab′、F(ab′)2、Fv、dAb、和互補決定區(qū)(CDR)片段、單鏈抗體(scFv)、嵌合抗體、微型雙功能抗體(diabodies)和包含足以使其具有特異性抗原結(jié)合的至少一部分免疫球蛋白的多肽。
免疫球蛋白鏈呈現(xiàn)相同的一般結(jié)構(gòu)，即通過三個超變區(qū)，也稱作互補決定區(qū)或CDR，連接的相對保守的構(gòu)架區(qū)(FR)。來自每一對的兩條鏈的CDR通過構(gòu)架區(qū)對齊，使得能夠與特異性表位結(jié)合。從N-末端至C-末端，輕鏈和重鏈都含有結(jié)構(gòu)域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。依據(jù)Proteins of Immunological Interest(NationalInstitutes of Health，Bethesda，Md.(1987和1991))、或Chothia& Lesk J.Mol.Biol 196901-917(1987)；Chothia等人，Nature342878-883(1989)的Kabat序列的定義將氨基酸指定到各結(jié)構(gòu)域。
“分離的抗體”是(1)不與在天然狀態(tài)下和它相伴的天然相關(guān)聯(lián)成分，包括其它天然相關(guān)聯(lián)的抗體，相聯(lián)系的抗體，(2)不帶有來源于同一物種的其它蛋白質(zhì)的抗體，(3)由來自不同物種的細胞表達的抗體，或(4)自然界中不存在的抗體。分離的抗體的例子包括，已用IGF-IR親和純化的抗-IGF-IR抗體、由雜交瘤或其它細胞系在體外合成的抗-IGF-IR抗體、和來源于轉(zhuǎn)基因小鼠的人抗-IGF-IR抗體。
術(shù)語“嵌合抗體”是指，包含一或多個來自一種抗體的區(qū)域和一或多個來自一或多種其它抗體的區(qū)域的抗體。在一種優(yōu)選實施方式中，一或多個CDR來源于人抗-IGF-IR抗體。在一種更優(yōu)選的實施方式中，所有的CDR都來源于人抗-IGF-IR抗體。在另一種優(yōu)選實施方式中，將來源于一種以上人抗-IGF-IR抗體的CDR混合并匹配在嵌合抗體中。此外，構(gòu)架區(qū)可以來源于相同抗-IGF-IR抗體中的一種、來源于比如人抗體這樣的一或多種不同的抗體、或來源于人源化抗體。
術(shù)語“表位”包括任何能與免疫球蛋白或T細胞受體特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)決定簇。表位決定簇通常由比如氨基酸或糖側(cè)鏈這樣的分子的具有化學(xué)活性的表面組群(groupings)組成，且通常具有特異性的三維結(jié)構(gòu)特征、以及特異性電荷特征。當解離常數(shù)≤1μM、優(yōu)選≤100nM且最優(yōu)選≤10nM時，抗體和抗原被稱作特異性結(jié)合。
用于多肽時，術(shù)語“基本同一”意指，當兩條肽序列用例如GAP或BESTFIT程序以默認缺口權(quán)量進行最佳比對時，具有至少75％或80％序列同一性，優(yōu)選至少90％或95％序列同一性，甚至更優(yōu)選至少98％或99％序列同一性。優(yōu)選地，不一致的殘基位置由于保守氨基酸替代而不同。“保守氨基酸替代”是，一個氨基酸殘基被另一個帶有具相似化學(xué)特性(例如，電荷或疏水性)的側(cè)鏈(R基團)的氨基酸殘基替代。通常，保守氨基酸替代本質(zhì)上不改變蛋白質(zhì)的功能。當兩條或多條氨基酸序列由于保守替代而相互不同時，為針對該替代的保守性質(zhì)進行校正可以上調(diào)序列同一性百分數(shù)或相似程度。做這一調(diào)正的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。參見，例如Pearson，Methods Mol.Biol.24307-31(1994)，引入本文作為參考文獻。帶有具相似化學(xué)特性的側(cè)鏈的氨基酸組的例子包括1)脂肪族側(cè)鏈甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸；2)脂肪族-羥基側(cè)鏈絲氨酸和蘇氨酸；3)含酰胺的側(cè)鏈天冬酰胺和谷氨酰胺；4)芳香族側(cè)鏈苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；5)堿性側(cè)鏈賴氨酸、精氨酸、和組氨酸；和6)含硫側(cè)鏈為半胱氨酸和甲硫氨酸。優(yōu)選的保守氨基酸替代組是纈氨酸-亮氨酸-異亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、賴氨酸-精氨酸、丙氨酸-纈氨酸、谷氨酸-天冬氨酸、和天冬酰胺-谷氨酰胺。
本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以容易地制備抗體或免疫球蛋白分子的片段或類似物。片段或類似物的優(yōu)選氨基-和羧基-末端存在于功能結(jié)構(gòu)域的邊界附近。通過將核苷酸和/或氨基酸序列數(shù)據(jù)與公共或私人序列數(shù)據(jù)庫進行比較，可以鑒定出結(jié)構(gòu)域和功能域。優(yōu)選地，利用計算機比較方法來鑒定出現(xiàn)在其它結(jié)構(gòu)和/或功能已知的蛋白質(zhì)中的序列基序或預(yù)測的蛋白質(zhì)構(gòu)象結(jié)構(gòu)域。鑒定折疊成已知三維結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)序列的方法是已知的。Bowie等人，Science 253164(1991)。因此，前述例子證實，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以識別可用于定義本發(fā)明的結(jié)構(gòu)域和功能域的序列基序和結(jié)構(gòu)構(gòu)象。
優(yōu)選的氨基酸替代是(1)降低對蛋白酶的易感性的替代，(2)降低對氧化作用的易感性的替代，(3)改變形成蛋白質(zhì)復(fù)合物的結(jié)合親和力的替代，(4)改變結(jié)合親和力的替代，和(4)賦予或改變這樣的類似物的其它物理化學(xué)或功能特性的替代。類似物可包括除天然存在的肽序列之外的各種序列突變。例如，可在天然存在的序列中制造單個或多個氨基酸替代(優(yōu)選保守氨基酸替代)(優(yōu)選在多肽中形成分子間接觸的結(jié)構(gòu)域外的區(qū)段中進行替代)。保守氨基酸替代不應(yīng)當在本質(zhì)上改變親本序列的結(jié)構(gòu)特征(例如，替代氨基酸不應(yīng)當傾向于破壞出現(xiàn)在親本序列中的螺旋，或破壞表現(xiàn)親本序列特征的其它類型的二級結(jié)構(gòu))。
術(shù)語患者包括人和獸醫(yī)對象。
人抗體避免了與具有小鼠或大鼠可變區(qū)和/或恒定區(qū)的抗體相關(guān)的某些問題。因此，在一種實施方式中，本發(fā)明提供人源化的抗-IGF-IR抗體。更優(yōu)選的是完全人抗-人IGF-IR抗體。預(yù)計，完全的人抗-IGF-IR抗體將使小鼠或小鼠-衍生的單克隆抗體所固有的免疫原性和變應(yīng)性應(yīng)答最小化，并由此提高所施用抗體的效力和安全性。使用完全人抗體預(yù)計可以為治療慢性和復(fù)發(fā)性人類疾病，比如炎癥和癌癥，提供實質(zhì)性益處，因為這些治療可能需要重復(fù)施用抗體。在另一種實施方式中，本發(fā)明提供一種不與補體結(jié)合的抗-IGF-IR抗體。
在本發(fā)明的另一方面，抗-IGF-IR抗體以高親和力與IGF-IR結(jié)合。在一種實施方式中，抗-IGF-IR抗體結(jié)合IGF-IR的Kd為1×10-8M或更低。在一種更優(yōu)選的實施方式中，抗體結(jié)合IGF-IR的Kd為I×10-9M或更低。在一種甚至更優(yōu)選的實施方式中，抗體結(jié)合IGF-IR的Kd為5×10-10M或更低。在另一種優(yōu)選實施方式中，抗體結(jié)合IGF-IR的Kd為1×10-10M或更低。在另一種優(yōu)選實施方式中，抗體結(jié)合IGF-IR的Kd基本與選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3、或6.1.1的抗體的Kd相同。在另一種優(yōu)選實施方式中，抗體結(jié)合IGF-IR的Kd基本與含有一或多個來自抗體2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3、或6.1.1的CDR的抗體的Kd相同。
本發(fā)明還利用與人抗-IGF-IR抗體結(jié)合相同的抗原或表位的抗-IGF-IR抗體。此外，本發(fā)明還可以利用與人抗-IGF-IR抗體交叉競爭的抗-IGF-IR抗體。在一種優(yōu)選實施方式中，人抗-IGF-IR抗體是2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3、或6.1.1。在另一種優(yōu)選實施方式中，人抗-IGF-IR含有一或多個來源于選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3、或6.1.1的抗體的CDR。
本發(fā)明還可以利用含有由人κ基因編碼的可變序列的抗-IGF-IR抗體來實施。在一種優(yōu)選實施方式中，該可變序列由VκA27、A30或者O12基因家族編碼。在一種優(yōu)選實施方式中，該可變序列由人VκA30基固家族編碼。在一種更優(yōu)選的實施方式中，相對于種系VκA27、A30或O12，輕鏈含有不超過十個氨基酸替代，優(yōu)選不超過六個氨基酸替代，和更優(yōu)選不超過三個氨基酸替代。在一種優(yōu)選實施方式中，該氨基酸替代為保守替代。
在一種優(yōu)選實施方式中，相對于種系氨基酸序列，抗-IGF-IR抗體的VL與抗體2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3、或6.1.1的任何一或多個VL包含相同的氨基酸替代。
在另一種優(yōu)選實施方式中，輕鏈含有與2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3、或6.1.1的VL氨基酸序列相同的氨基酸序列。在另一種高度優(yōu)選的實施方式中，輕鏈含有與2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3、或6.1.1的輕鏈CDR區(qū)相同的氨基酸序列。在另一種優(yōu)選實施方式中，輕鏈含有來自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3、或6.1.1的至少一個輕鏈CDR區(qū)的氨基酸序列。
本發(fā)明還可利用含有人重鏈或衍生自人重鏈的序列的抗-IGF-IR抗體或其部分來實施。在一種實施方式中，重鏈氨基酸序列衍生自人VHDP-35、DP-47、DP-70、DP-71或VIV-4/4.35基因家族。在一種優(yōu)選實施方式中，重鏈氨基酸序列衍生自人VHDP-47基因家族。在一種更優(yōu)選的實施方式中，相對于種系VHDP-35、DP-47、DP-70、DP-71或VIV-4/4.35，重鏈含有不超過八個氨基酸改變，更優(yōu)選不超過六個氨基酸改變，甚至更優(yōu)選不超過三個氨基酸改變。
在一種優(yōu)選實施方式中，相對于種系氨基酸序列，抗-IGF-IR抗體的VH與抗體2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3、或6.1.1的任何一個或多個VH包含相同的氨基酸替代。在另一種實施方式中，在與抗體2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3、或6.1.1的任何一個或多個VH中發(fā)現(xiàn)的替代相同的位置制造氨基酸替代，但制造的是保守氨基酸替代而非使用相同的氨基酸進行替代。
在另一種優(yōu)選實施方式中，重鏈含有與2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3、或6.1.1的VH的氨基酸序列相同的氨基酸序列。在另一種高度優(yōu)選的實施方式中，重鏈含有與2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3、或6.1.1的重鏈CDR區(qū)相同的氨基酸序列。在另一種優(yōu)選實施方式中，重鏈含有來自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3、或6.1.1的至少一個重鏈CDR區(qū)的氨基酸序列。在另一種優(yōu)選實施方式中，重鏈含有來自不同重鏈的CDR的氨基酸序列。在一種更優(yōu)選的實施方式中，來自不同重鏈的CDR獲自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3、或6.1.1。
在另一種實施方式中，本發(fā)明使用抑制IGF-I與IGF-IR的結(jié)合或IGF-II與IGF-IR的結(jié)合的抗-IGF-IR抗體。在一種優(yōu)選實施方式中，IGF-IR是人的。在另一種優(yōu)選實施方式中，抗-IGF-IR抗體是人抗體。在另一種實施方式中，抗體或其部分抑制IGF-IR和IGF-I間的結(jié)合，IC50不超過100nM。在一種優(yōu)選實施方式中，IC50不超過10nM。在一種更優(yōu)選的實施方式中，IC50不超過5nM?？梢杂帽绢I(lǐng)域已知的任何一種方法測定IC50。典型地，可以用ELISA或RIA測定IC50。在一種優(yōu)選實施方式中，用RIA測定IC50。
在另一種實施方式中，本發(fā)明使用防止IGF-IR在IGF-I存在下活化的抗-IGF-IR抗體。在本發(fā)明的另一方面，該抗體導(dǎo)致用該抗體處理的細胞IGF-IR下調(diào)。在一種優(yōu)選實施方式中，該抗體選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、或6.1.1，或含有其重鏈、輕鏈或抗原結(jié)合區(qū)。
可以通過用IGF-IR抗原免疫含有一些或全部人免疫球蛋白基因座位的非人動物來制備人抗體。在一種優(yōu)選實施方式中，該非人動物是XENOMOUSETM，它是一種含有人免疫球蛋白基因座位大片段、且小鼠抗體生產(chǎn)缺乏的工程化小鼠株系。參見，例如Green等人，NatureGenetics 713-21(1994)和美國專利5,916,771、5,939,598、5,985,615、5,998,209、6,075,181、6,091,001、6,114,598和6,130,364。亦參見1991年7月25日公開的WO 91/10741、1994年2月3日公開的WO 94/02602、1996年10月31日公開的WO 96/34096和WO 96/33735、1998年4月23日公開的WO 98/16654、1998年6月11日公開的WO 98/24893、1998年11月12日公開的WO 98/50433、1999年9月10日公開的WO 99/45031、1999年10月21日公開的WO99/53049、2000年2月24日公開的WO 00 09560和2000年6月28日公開的WO 00/037504。XENOMOUSETM生產(chǎn)一種類似于成人的完全人抗體集合，并產(chǎn)生抗原特異性人Mabs。通過導(dǎo)入人重鏈座位和κ輕鏈座位兆堿基大小的種系構(gòu)型YAC片段，第二代XENOMOUSETM包含人抗體集合的大約80％。參見Mendez等人，Nature Genetics 15146-156(1997)，Green和Jakobovits J.Exp.Med.188483-495(1998)，其公開文本引入本文作參考。
為刺激免疫應(yīng)答，IGF-IR抗原可以與佐劑一起施用。這樣的佐劑包括完全或不完全弗氏(Freund′s)佐劑、RIBI(胞壁酰二肽)或ISCOM(免疫刺激性復(fù)合物)。這樣的佐劑可以通過使多肽隔離在局部沉淀中從而保護其免于快速分散，或者它們可能包含刺激宿主分泌對于巨噬細胞或免疫系統(tǒng)其它組分而言趨化性的物質(zhì)。優(yōu)選地，如果施用多肽，則免疫方案將包括在數(shù)周內(nèi)兩次或多次施用多肽。
編碼輕鏈可變區(qū)的核酸分子可以來源于A30、A27或O12Vκ基因。在一種優(yōu)選實施方式中，輕鏈來源于A30Vκ基因。在一種更優(yōu)選的實施方式中，編碼輕鏈的核酸分子包含不超過十個相對于種系A(chǔ)30Vκ基因的氨基酸改變，優(yōu)選不超過六個氨基酸改變，和甚至更優(yōu)選不超過三個氨基酸改變。
在一種實施方式中，與突變前的抗-IGF-IR抗體相比，抗體在突變的抗-IGF-IR抗體的VH或VL區(qū)中包含不超過十個氨基酸改變。在一種更優(yōu)選的實施方式中，在突變的抗-IGF-IR抗體的VH或VL區(qū)域中含有不超過五個氨基酸改變，更優(yōu)選不超過三個氨基酸改變。在另一種實施方式中，恒定結(jié)構(gòu)域含有不超過十五個氨基酸改變，更優(yōu)選不超過十個氨基酸改變，甚至更優(yōu)選不超過五個氨基酸改變。
SEQ ID NO2、6、10、14、18和22給出六個抗-IGF-IRκ輕鏈的可變區(qū)氨基酸序列。SEQ ID NO4、8、12、16、20和24給出六個抗-IGF-IR重鏈的可變區(qū)氨基酸序列。SEQ ID NO25描述編碼抗-IGF-IR抗體2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3、和6.1.1輕鏈恒定區(qū)的核酸序列，SEQ ID NO26描述氨基酸序列。SEQ IDNO27描述編碼抗-IGF-IR抗體2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2、4.17.3、和6.1.1重鏈恒定區(qū)的核酸序列，SEQ ID NO28描述氨基酸序列。SEQ ID NO30、32、34、36和44分別提供種系重鏈DP-35、DP-47、DP-70、DP-71和VIV-4的氨基酸序列。SEQ ID NO33提供種系重鏈DP-70的核苷酸序列。SEQ ID NO38、40和42提供三個種系κ輕鏈的氨基酸序列，從這三個種系κ輕鏈衍生出所述六個抗-IGF-IRκ輕鏈。
在另一種優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明涉及抗-IGF-IR在預(yù)防衰老中的用途。
在另一種實施方式中，本發(fā)明涉及用于治療需要活化IGF-IR的哺乳動物的藥物組合物，其中的藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明活化性抗體和藥學(xué)可接受載體。含有活化性抗體的藥物組合物可用于治療缺乏足夠IGF-I或IGF-II的動物。
可以將抗-IGF-IR抗體摻入適于向?qū)ο笫┯玫乃幬锝M合物中。典型地，該藥物組合物含有抗體和藥學(xué)可接受載體。如同本文所使用的，“藥學(xué)可接受載體”包括任何及所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗細菌或抗真菌試劑、等滲劑和吸收延緩劑、以及生理相容的類似物。藥學(xué)可接受載體的例子包括水、鹽水、磷酸緩沖鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇或其類似、及其組合中的一或多種。在許多情況下，優(yōu)選在組合物中包括等滲劑，例如，糖類，比如甘露醇、山梨醇這樣的多元醇，或氯化鈉。藥學(xué)可接受物質(zhì)，比如濕潤劑，或少量輔料，比如濕潤劑或乳化劑、提高抗體或抗體部分的保存期或有效性的防腐劑或緩沖液。
該藥物組合物可以有多種形式。這些形式包括，例如，液體、半固體或固體劑量形式，比如液體溶液(例如，可注射的和能輸注的溶液)、分散劑或懸液、片劑、丸劑、粉劑、脂質(zhì)體和栓劑。優(yōu)選形式依賴于目的給藥方式和治療用途。典型的優(yōu)選組合物是可注射的或能輸注的溶液，比如類似于用其它抗體對人進行被動免疫所使用的組合物。優(yōu)選的給藥方式是非腸胃方式(例如，靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、肌內(nèi))。在一種優(yōu)選實施方式中，通過靜脈內(nèi)輸注或注射施用抗體。在另一種優(yōu)選實施方式中，通過肌內(nèi)或皮下注射施用抗體。
治療組合物典型地必須是無菌的，而且在制造及保存條件下是穩(wěn)定的。該組合物可以配制成溶液、微乳劑、分散體、脂質(zhì)體、或其它適于高藥物濃度的有序結(jié)構(gòu)。通過將所需量的抗-IGF-IR抗體根據(jù)需要和以上列舉的一種成分或多種成分的組合摻入適當溶劑中，并隨后進行過濾滅菌，可以制備無菌可注射溶液。通常，通過將活性化合物混合進無菌載體來制備分散體，該無菌載體包含基本分散介質(zhì)和所需的來自上述列舉成分的其它成分。對于用于制備可注射溶液的無菌粉末，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和冷凍干燥，通過干燥從上述無菌過濾溶液產(chǎn)生含有活性成分和任何附加目的成分的粉末。可以通過，例如，使用卵磷脂這樣的包衣、保持分散體的目的顆粒大小、和使用表面活性劑，來保持溶液適宜的流動性。使組合物中包含延緩吸收的試劑，例如單硬脂酸鹽和明膠，可以延長對可注射組合物的吸收。
可以通過本領(lǐng)域已知的各種方法施用抗體，盡管對于許多治療用途，優(yōu)選的給藥途徑/方式是腹膜內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或輸注。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的，給藥途徑和/或方式將根據(jù)所需的結(jié)果而不同。在一種實施方式中，抗體可以以單次劑量或多次劑量施用。
在特定實施方式中，活性化合物可以用保護該化合物免于快速釋放的載體來制備，比如，釋放受控制的劑型，包括植入物、透皮貼片、和微囊化運輸系統(tǒng)。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，比如乙烯乙酸乙烯基酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原蛋白、和聚原酸酯。許多制備此類制劑的方法已獲得專利，并為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知。參見，例如Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems，J.R Robinson，ed.，Marcel Dekker，Inc.，紐約，1978年。
在特定實施方式中，抗體可以口服給藥，例如，與惰性稀釋劑或可被吸收的可食用載體一同口服。還可以將該化合物(如果需要的話，和其它成分)封在硬或軟殼明膠膠囊中、壓成片劑、或直接混合在服用者的食物里。對于口服治療性給藥，可以將化合物與賦形劑混合并制成可吞咽的片劑、含片、錠劑、膠囊、酏劑、懸液、糖漿、糯米紙囊劑、及類似。以除了非腸道途徑給藥之外的方式來施用本發(fā)明的化合物，可能必須用材料包被該化合物、或者與該化合物共同施用以防止其失活。
組合物中還可以含有補充的活性化合物。在特定實施方式中，抗-IGF-IR抗體與一或多種附加的治療劑，比如止吐藥、癌癥疫苗、止痛劑、抗血管劑、和抗增殖劑，共同配制和/或共同給藥。
該藥物組合物可以包括“治療有效量的”或“預(yù)防有效量的”本發(fā)明抗體或抗體部分。“治療有效量”是指，以必要的劑量和時間，有效實現(xiàn)所需治療結(jié)果的量。治療有效量的抗體或抗體部分可根據(jù)比如疾病狀態(tài)、年齡、性別、和個體的體重這樣的因素、以及抗體或抗體部分在個體引發(fā)目的應(yīng)答的能力而變化。治療有效量也是指抗體或抗體部分的治療有益效果超過其任何毒性或有害效應(yīng)的劑量?！邦A(yù)防有效量”是指，以必要的劑量和時間，有效實現(xiàn)所需預(yù)防結(jié)果的量。典型地，因為在疾病前或疾病早期階段施用預(yù)防劑量，所以預(yù)防有效量小于治療有效量。
可以調(diào)整劑量方案以獲得最優(yōu)的目的反應(yīng)(例如，治療或預(yù)防反應(yīng))。例如，可以一次性施以大劑量，一段時間內(nèi)分幾次劑量給藥，或根據(jù)治療狀況的緊急需要來適當減少或提高劑量。含有抗體、或含有包括抗體及一或多種附加治療劑的組合療法的藥物組合物可以配制成單次或多次劑量。尤其有利的是，將非腸道組合物配制成便于給藥、且劑量均一的劑量單位形式。本文中所用的劑量單位形式是指，對于被治療的哺乳動物對象來說適合的單劑量的物理獨立單位；各單位包含根據(jù)與所需的藥物載體一同產(chǎn)生目的治療效應(yīng)而計算出的預(yù)先確定量的活性化合物。本發(fā)明的劑量單位形式的說明書根據(jù)以下來規(guī)定并直接依賴于(a)活性化合物的獨特性質(zhì)和所要達到的特定治療或預(yù)防效應(yīng)，和(b)本領(lǐng)域中為個體中治療敏感性而對于配制這樣一種化合物的固有限制。一種特別有用的劑型是20mM檸檬酸鈉緩沖液，pH5.5、140mM NaCl、和0.2mg/ml聚山梨醇酯(polysorbate)80中含5mg/ml抗-IGF-IR抗體。
本發(fā)明抗體或抗體部分的治療或預(yù)防有效量的一個非限制性的示例性范圍是0.1-100mg/kg，更優(yōu)選0.5-50mg/kg，更優(yōu)選1-20mg/kg，和甚至更優(yōu)選1-10mg/kg。要注意，劑量值可能根據(jù)所欲減輕的癥狀的類型和嚴重程度而變化。還應(yīng)理解，對于任何特定對象，應(yīng)當根據(jù)個體的需求、和施用或指導(dǎo)施用該組合物的人的專業(yè)判斷隨時間對特定劑量方案作出調(diào)整，而且本文中所給出的劑量范圍僅僅是示例性的，它們并不限制本發(fā)明所請求保護的組合物的范圍和使用。在一種實施方式中，抗體或其抗體部分的治療或預(yù)防有效量與一或多種其它治療劑一同給藥。
本發(fā)明方法中所使用的抗體可以被標記。這可以通過摻入可檢測標記來實現(xiàn)，例如，摻入放射性標記的氨基酸或?qū)⒍嚯母街诳梢酝ㄟ^標記抗生物素蛋白(例如，包含可以通過光學(xué)或比色法檢測的熒光標記或酶活性的鏈霉抗生物素蛋白)來檢測的生物素基部分。特定情況中，該標簽或標記還可以是治療性的。多肽和糖蛋白的各種標記方法是本領(lǐng)域已知的，且可利用。用于標記多肽的標記的例子包括但不限于以下物質(zhì)放射性同位素或放射性核素(例如，3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)、熒光標記(例如，F(xiàn)ITC、羅丹明、lanthanidephosphors)、酶標記(例如，辣根過氧化物酶、β-半乳糖苷酶、螢光素酶、堿性磷酸酶)、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)、生物素基團、預(yù)先確定的由二級報告基團識別的多肽表位(例如，亮氨酸拉鏈對序列、二級抗體的結(jié)合位點、金屬結(jié)合結(jié)構(gòu)域、表位標簽)。在一些實施方式中，利用不同長度的間隔臂來結(jié)合標記，以減少潛在的空間障礙。
本發(fā)明使用的抗體優(yōu)選來源于表達人免疫球蛋白基因的細胞。利用轉(zhuǎn)基因小鼠來生產(chǎn)這樣的“人”抗體是本領(lǐng)域已知的。Mendez等人，Nature Genetics 15146-156(1997)、Green和Jakobovits J.Exp.Med.188483-495(1998)、和U.S.專利申請序列號08/759,620(1996年12月3日申請)中描述了一種這樣的方法。美國專利申請07/466,008(1990年1月12日申請)、07/610,515(1990年11月8日)、07/919,297(1992年7月24日)、07/922,649(1992年7月30日)、08/031,801(1993年3月15日申請)、08/112,848(1993年8月27日)、08/234,145(1994年4月28日申請)、08/376,279(1995年1月20日申請)、08/430,938(1995年4月27日申請)、08/464,584(1995年6月5日申請)、08/464,582(1995年6月5日申請)、08/463,191(1995年6月5日申請)、08/462,837(1995年6月5日申請)、08/486,853(1995年6月5日申請)、08/486,857(1995年6月5日申請)、08/486,859(1995年6月5日申請)、08/462,513(1995年6月5日申請)、08/724,752(1996年10月2日申請)、和08/759,620(1996年12月3日申請)也描述了利用這樣的小鼠來獲得人抗體。亦參見Mendez等人，Nature Genetics 15146-156(1997)，以及Green和Jakobovits J.Exp.Med.188483-495(1998)。亦參見歐洲專利EP 0 463 151(1996年6月12日授權(quán)公開)、國際專利申請WO 94/02602(1994年2月3日公開)、國際專利申請WO 96/34096(1996年10月31日公開)、和WO 98/24893(1998年6月11日公開)。
如上所述，本發(fā)明包括抗體片段(包括在本文對“抗體”的定義中)的用途?？梢岳美绲鞍酌富蚧瘜W(xué)切割切割完整蛋白質(zhì)來制備抗體片段，比如Fv、F(ab′)2和Fab。作為備選方案，還可以設(shè)計截斷基因。例如，編碼F(ab′)2片段一部分的嵌合基因包括編碼H鏈鉸鏈區(qū)和CH1結(jié)構(gòu)域的DNA序列、后面接著翻譯終止密碼子，以產(chǎn)生截斷的分子。
在一種方法中，可以利用編碼重鏈和輕鏈J區(qū)域的共有序列來設(shè)計用作引物的寡核苷酸以將可用于隨后V區(qū)域區(qū)段與人C區(qū)域區(qū)段相連的限制性位點導(dǎo)入J區(qū)域。可以利用位點定向誘變在與人序列中類似的位置設(shè)置限制性位點，這樣修飾C區(qū)域cDNA。
用于獲得本發(fā)明中所使用的抗體的表達載體包括質(zhì)粒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、粘粒、YAC、來源于EBV的游離體，及類似物。便利的載體通常是這樣一種載體，它編碼功能完整人CH或CL免疫球蛋白序列、并帶有通過遺傳工程導(dǎo)入的適宜限制性位點以使得可以容易地插入和表達任何VH或VL序列。在這樣的載體中，拼接通常發(fā)生在所插入的J區(qū)域中的拼接供體位點和人C區(qū)域之前的拼接受體位點之間，也發(fā)生在存在于人CH外顯子中的拼接區(qū)域。多聚腺苷酸化和轉(zhuǎn)錄終止出現(xiàn)在位于編碼區(qū)下游的天然染色體位點。所得的嵌合抗體可以與任何強啟動子相連接，包括逆轉(zhuǎn)錄病毒LTRs，例如SV-40早期啟動子、(Okayama等人，Mol.Cell.Bio.3280(1983))、Rous肉瘤病毒LTR(Gorman等人，P.N.A.s.796777(1982))、和莫洛尼鼠白血病病毒LTR(Grosschedl等人，Cell 41885(1985))；天然Ig啟動子，等等。
被生產(chǎn)出來用于在本發(fā)明中使用的抗體不需要最初就具有特定的所需同種型。相反，所產(chǎn)生的抗體可以具有任何同種型并且可以之后用常規(guī)技術(shù)進行同種型轉(zhuǎn)換。這些包括直接重組技術(shù)(參見，例如，美國專利申請4,816,397)，和細胞-細胞融合技術(shù)(參見，例如，美國專利申請08/730,639(1996年10月11日申請)。
如上述，對于各種不同的治療目的，本發(fā)明的抗體的效應(yīng)物功能可以通過同種型轉(zhuǎn)換成IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD、IgA、IgE、或IgM而被改變。此外，通過利用，例如，雙特異性抗體(bispecifics)、免疫毒素、或放射性標記，可以避免殺死細胞時對補體的依賴性。
可以產(chǎn)生包含下述的雙特異性抗體(i)兩個抗體一個具有對IGF-IR的特異性，另一個對第二分子有特異性，(ii)單個抗體，其一條鏈特異于IGF-IR，第二條鏈特異于第二分子，或(iii)特異于IGF-IR的單鏈抗體和另一分子。這樣的雙特異性抗體可以用熟知的技術(shù)制備，例如，F(xiàn)anger等人，Immunol Methods 472-81(1994)，Wright和Harris，見上述，和Traunecker等人，Int.J.Cancer(Suppl.)751-52(1992)。
用于本發(fā)明的抗體還包括“kappabodies”(III等人，“Design andconstruction of a hybrid immunoglobulin domain with propertiesof both heavy and light chain variable regions”Protein Eng 10949-57(1997))、“minibodies”(Martin等人，“The affinity-selection of a minibody polypeptide inhibitor of humaninterleukin-6”EMBO J 135303-9(1994))、“diabodies”(Holliger等人，“‘Diabodies’small bivalent and bispecific antibodyfragments″PNAS USA 906444-6448(1993))、和“janusins”(Traunecker等人，“Bispecific single chain molecules(Janusins)target cytotoxic lymphocytes on HIV infected cells”EMBO J 103655-3659(1991)和Traunecker等人，“Janusinnew moleculardesign for bispecific reagents”Int J Cancer Suppl 751-52(1992))。
所使用的抗體可以通過常規(guī)技術(shù)進行修飾以用作免疫毒素。參見，例如，Vitetta Immunol Today 14252(1993)。亦參見美國專利申請5,194,594。還可以用已知技術(shù)制備放射性標記的抗體。參見，例如，Junghans等人，Cancer Chemotherapy and Biotherapy 655-686(第二版，Chafner和Longo，eds.，Lippincott Raven(1996))。亦參見美國專利4,681,581、4,735,210、5,101,827、5,102,990(RE35,500)、5,648,471、和5,697,902。
可用于實施本發(fā)明的特定抗體包括WO 02/053596中所述的那些抗體，WO 02/053596進一步描述了抗體2.12.1、2.13.2、2.14.3、3.1.1、4.9.2和4.17.3。如同在該公開申請中所公開的，生產(chǎn)這些抗體的雜交瘤于2000年12月12日保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)，10801 University Boulevard，Manassas，VA 20110-2209，保藏編號如下雜交瘤保藏編號2.12.1PTA-27922.13.2PTA-27882.14.3PTA-27903.1.1 PTA-27914.9.2 PTA-27894.17.3PTA-2793
這些抗體是完全人的IgG2或者IgG4重鏈，帶有人κ輕鏈。尤其是，本發(fā)明涉及使用具有這些抗體的氨基酸序列的抗體。
本發(fā)明所使用的抗體優(yōu)選具有非常高的親和力，典型地通過固相或液相測定時，其Kd為約10-9至約10-11M。
可以在除雜交瘤細胞系之外的細胞系中表達本發(fā)明中使用的抗體。特定抗體的cDNA或基因組克隆的編碼序列可用于轉(zhuǎn)化適宜的哺乳動物和非哺乳動物宿主細胞?？梢杂帽绢I(lǐng)域已知的任何一種將多核苷酸導(dǎo)入宿主細胞的方法來完成轉(zhuǎn)化，這些方法包括，例如將多核苷酸包裝進病毒(或包裝進病毒載體)并用該病毒(或載體)轉(zhuǎn)導(dǎo)宿主細胞，或利用本領(lǐng)域已知的轉(zhuǎn)染方法來完成轉(zhuǎn)化，例如美國專利4,399,216、4,912,040、4,740,461、和4,959,455中例舉的轉(zhuǎn)染方法。將異源多核苷酸導(dǎo)入哺乳動物細胞的方法是本領(lǐng)域已知的，包括但不限于，葡聚糖介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、磷酸鈣沉淀、1，5-二甲基-1，5-二氮十一亞甲基聚甲溴化物介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、原生質(zhì)體融合、電穿孔、粒子轟擊、多核苷酸包封入脂質(zhì)體、肽綴合物、dendrimers、和直接將DNA微注射入核。
可以獲得的作為表達宿主的哺乳動物細胞系是本領(lǐng)域已知的，包括可以從美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)獲得的細胞系，包括但不限于中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、NSO0、HeLa細胞、幼倉鼠腎(BHK)細胞、猴腎細胞(COS)、和人肝細胞瘤細胞(例如，Hep G2)。也可以使用非哺乳動物細胞，包括細菌、酵母、昆蟲、和植物細胞。為了防止由于非人糖基化而導(dǎo)致免疫原性、藥物動力學(xué)、和/或效應(yīng)物功能改變，優(yōu)選對抗體CH2結(jié)構(gòu)域進行位點定向誘變以消除糖基化。谷氨酰胺合酶系統(tǒng)的表達的論述全部或部分與歐洲專利216846、256055、和323997、以及歐洲專利申請89303964.4有關(guān)。
還可以通過產(chǎn)生目的免疫球蛋白重鏈和輕鏈序列的轉(zhuǎn)基因哺乳動物或植物、并從中生產(chǎn)可回收形式的抗體，來制備用于本發(fā)明的抗體?？梢栽谏窖?、奶?；蚱渌溉閯游锏娜橹猩a(chǎn)并回收轉(zhuǎn)基因抗體。參見，例如，美國專利5,827,690、5,756,687、5,750,172、和5,741,957。
帶或不帶附加試劑的抗體，可以給藥一次，但是更優(yōu)選給藥多次。抗體給藥可以從每天三次到六個月一次。可以按計劃給藥，比如，每天三次、每天兩次、每天一次、每兩天一次、每三天一次、每周一次、每兩周一次、每月一次、每兩個月一次、每三個月一次、和每六個月一次?？梢酝ㄟ^口服、黏膜、口腔、鼻內(nèi)、吸入、靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、非腸道途徑、腫瘤內(nèi)或局部途徑給藥。
在特定實施方式中，抗體可以以氣溶膠或可吸入形式給藥。溶解或懸浮于液體中的呈精細粉碎固體顆粒形式的干燥氣溶膠也可用于實施本發(fā)明?？梢允褂美缭?986年11月25日公開的美國專利4,624,251、1972年11月21日公開的美國專利3,703,173、1971年2月9日公開的美國專利3,561,444、和1971年1月13日公開的美國專利4,635,627中所述的噴霧器以氣溶膠噴霧形式施用本發(fā)明的藥物劑型。
Hubbard，R.C.等人，(Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)86680-684，1989)公開了，為治療α抗-胰蛋白酶缺陷，通過肺上皮表面英文句號來施用相對較大的α.sub.1-抗胰蛋白酶(AAt)。以氣溶膠形式對綿羊施用了AAt，45,000道爾頓分子量的單鏈多肽，其作為嗜中性粒細胞彈性蛋白酶的抑制劑起作用。氣霧化的AAt在哺乳動物組織中保持了完全的功能和完整性，并根據(jù)肺、淋巴和血液組織中存在的AAt證實，其經(jīng)肺泡上皮細胞擴散。
可以在遠離腫瘤的位置施用抗體。還可以經(jīng)由微泵來持續(xù)施用抗體?？贵w可以施用一次、至少兩次或至少施用一段時間直到疾病被治療、減輕或治愈。通常，如果抗體使腫瘤或癌癥停止生長或減小其重量或體積，則只要腫瘤存在就將施用抗體。抗體通常作為上述藥物組合物的一部分來施用。抗體劑量通常在0.1-100mg/kg、更優(yōu)選0.5-50mg/kg、更優(yōu)選1-20mg/kg、和甚至更優(yōu)選1-10mg/kg的范圍內(nèi)?？贵w的血清濃度可以通過本領(lǐng)域已知的方法測定。還可以為預(yù)防疾病而施用抗體，以防止癌癥或腫瘤出現(xiàn)。這對于具有“高正常”水平的IGF-I患者特別有用，因為這些患者已經(jīng)顯示出較高的形成常見癌癥的危險性。參見Rosen等人，見上述。
抗體與附加治療劑共同施用(聯(lián)合療法)包括施用含有抗-IGF-IR抗體和附加治療劑的藥物組合物，和施用兩或多種分離的藥物組合物，一種含有抗-IGF-IR抗體，另一種或多種含有附加治療劑。此外，盡管共同給藥和聯(lián)合療法通常意指抗體和治療劑彼此同時施用，但它還包括這樣的情況，其中抗體和附加治療劑在不同的時間給藥。例如，抗體可以每三天給藥一次，而附加治療劑可以每天一次施用。作為備選方案，抗體可以在用附加治療劑治療疾病之前或之后施用。類似地，抗-IGF-IR抗體的施用可以在其它療法，比如放射療法、化學(xué)療法、光力學(xué)療法、手術(shù)或其它免疫療法，之前或之后進行。
本說明書中所引用的所有出版物和專利申請作為參考引入本文，如同各獨立的出版物或?qū)＠暾執(zhí)貏e地、獨立地被指明作為參考引入。盡管為了清楚地理解，上述發(fā)明已經(jīng)通過舉例說明和例子在一定程度上進行了詳細說明，但是根據(jù)本發(fā)明的教導(dǎo)，在不背離所附權(quán)利要求的精神和范圍的情況下而對其作出某些改變和修飾對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯然的。
實施例I本發(fā)明的抗體對IGF-IR的體內(nèi)效應(yīng)我們根據(jù)(V.A.Pollack等人，“Inhibition of epidermal growthfactor receptor-associated tyrosine phosphorylation in humancarcinomas with CP-358，774Dynamics of receptor inhibitionin situ and antitumor effects in athymic mice”，J.Pharmacol.Exp.Ther.291739-748(1999))公開的方法在無胸腺小鼠中誘導(dǎo)了腫瘤。簡言之，我們用0.2ml Matrigel制劑將IGF-IR-轉(zhuǎn)染的NIH-3T3細胞(5×106)皮下注射進3-4周齡的無胸腺(nu/nu)小鼠。然后，我們在形成確認的(即，約400mm3)腫瘤后用本發(fā)明的抗體經(jīng)腹腔內(nèi)對小鼠進行注射。
24小時后，我們提取了腫瘤，將其勻漿，并測定IGF-IR水平。為確定IGF-IR水平，我們將SC-713抗體稀釋于Blocking(封閉)緩沖液，直至終濃度為4μg/ml，并向用Reacti-Bind山羊抗-兔(GAR)包被的板(Pierce)內(nèi)各孔中添加100μl。于室溫下將板振蕩孵育1小時，然后用洗滌緩沖液將板洗滌五次。之后，對如上所述制備的腫瘤樣品稱重，將其在裂解緩沖液(1ml/100mg)中勻漿。用裂解緩沖液將12.5μl腫瘤提取物稀釋至終體積100μl，并將其添加道96孔板的各孔中。室溫下將板振蕩孵育1-2小時，然后用洗滌緩沖液洗板五次。我們?nèi)缓笙蚋骺字刑砑恿?00μl溶于Blocking緩沖液的生物素化抗-IGF-IR抗體，并于室溫下振蕩孵育30分鐘。然后用洗滌緩沖液將板洗滌五次。我們通過向每孔添加100μl稀釋于Blocking緩沖液的鏈霉抗生素蛋白-HRP使得用抗-IGF-IR抗體探測的板顯影，室溫下振蕩孵育30分鐘。我們通過向各孔中添加100μl TMB微孔底物使板顯色，再用100μl 0.9M H2SO4終止顯色。然后我們通過測定D450nm將信號定量。將信號對總蛋白質(zhì)標準化。
我們觀察到，通過IGF-IR磷酸酪氨酸(磷酸化的IGF-IR)和總IGF-IR蛋白(附圖4)二者的降低測定到的，用本發(fā)明的抗體，尤其是2.13.2和4.9.2，進行腹腔內(nèi)注射，導(dǎo)致對IGF-IR活性的抑制。此外，這一抑制對所注射的抗體劑量敏感(附圖4)。這些數(shù)據(jù)證明，本發(fā)明的抗體能以類似于我們在體外觀察到的方式在體內(nèi)靶向IGF-IR。
實施例II對3T3/IGF-IR細胞腫瘤生長的抑制我們測試了，本發(fā)明的抗-IGF-IR抗體是否會抑制腫瘤生長。我們?nèi)缟纤?實施例I)誘導(dǎo)了腫瘤，并且當形成確認的、明顯的腫瘤(即，6-9天內(nèi)250mm3)時，我們通過腹腔內(nèi)注射用單次0.20ml劑量的抗體處理小鼠。根據(jù)Geran等人“Protocols for screeningchemical agents and natural products against animal tumors andother biological systems”，Cancer Chemother.Rep.31-104建立的方法，我們在每第三天用游標卡尺跨兩個直徑測量了腫瘤的大小，并用公式(長×[寬]2)/2計算了體積。
當我們用本發(fā)明的抗體進行這一分析時，我們發(fā)現(xiàn)，用單獨的抗體2.13.2進行單次治療抑制了IGF-IR-轉(zhuǎn)染的NIH-3T3細胞-誘導(dǎo)的腫瘤(附圖5)的生長。
附圖詳述附圖1A-1C顯示來自六個人抗-IGF-IR抗體的輕鏈可變區(qū)核苷酸序列彼此間的比對以及與種系序列的比對。附圖1A顯示抗體2.12.1(SEQ ID NO1)、2.13.2(SEQ ID NO5)、2.14.3(SEQ ID NO9)、和4.9.2(SEQID NO13)的輕鏈(VL)可變區(qū)核苷酸序列相互間的比對以及與種系VκA30序列(SEQ ID NO39)的比對。附圖1B顯示抗體4.17.3(SEQ ID NO17)的VL核苷酸序列與種系VκO12序列(SEQ ID NO41)的比對。附圖1C顯示抗體6.1.1(SEQ ID NO21)的VL核苷酸序列與種系VκA27序列(SEQ ID NO37)的比對。這些比對還顯示了來自各抗體VL的CDR區(qū)域。附圖1A-1C的共有序列分別示于SEQ ID NO53-55。
附圖2A-2D顯示來自六個人抗-IGF-IR抗體的重鏈可變區(qū)核苷酸序列相互間的比對以及與種系序列的比對。附圖2A顯示抗體2.12.1(SEQ ID NO3)的VH核苷酸序列與種系VH DP-35序列(SEQ ID NO29)的比對。附圖2B顯示抗體2.14.3(SEQ ID NO11)的VH核苷酸序列與種系VIV-4/4.35序列(SEQ ID NO43)的比對。附圖2C-1和2C-2顯示抗體2.13.2(SEQ ID NO7)、4.9.2(SEQ ID NO15)和6.1.1(SEQ ID NO23)的VH核苷酸序列相互間的比對以及與種系VH DP-47序列(SEQ ID NO31)的比對。附圖2D顯示抗體4.17.3(SEQ ID NO19)的VH核苷酸序列與種系VH DP-71序列(SEQ ID NO35)的比對。該比對還顯示這些抗體的CDR區(qū)域。附圖2A-2D的共有序列分別示于SEQ ID NO56-59。
附圖3A顯示，與種系序列相比，2.13.2和2.12.1重鏈和輕鏈的不同區(qū)域內(nèi)的突變數(shù)量。附圖3A-D顯示抗體2.13.2和2.12.1的重鏈和輕鏈氨基酸序列與它們所來源的種系序列間的比對。附圖3B顯示抗體2.13.2(SEQ ID NO45)重鏈氨基酸序列與種系序列DP-47(3-23)/D6-19/JH6氨基酸序列(SEQ ID NO46)的比對。附圖3C顯示抗體2.13.2(SEQ ID NO47)輕鏈氨基酸序列與種系序列A30/Jk2氨基酸序列(SEQ ID NO48)的比對。附圖3D顯示抗體2.12.1(SEQ ID NO49)重鏈氨基酸序列與種系序列DP-35(3-11)/D3-3/JH6氨基酸序列(SEQ ID NO50)的比對。附圖3E抗體2.12.1(SEQ ID NO51)輕鏈氨基酸序列與種系序列A30/Jk1氨基酸序列(SEQ ID NO52)的比對。對于附圖3B-E，信號序列以斜體表示，CDR以下劃線表示，恒定區(qū)為粗體，構(gòu)架區(qū)(FR)突變在該氨基酸殘基上方用加號(“+”)突出顯示，CDR突變用星號在該氨基酸殘基上方突出顯示。
附圖4顯示，抗-IGF-IR抗體2.13.2和4.9.2減少3T3-IGF-IR腫瘤中的IGF-IR磷酸酪氨酸信號。
附圖5顯示，抗-IGF-IR抗體2.13.2抑制體內(nèi)3T3-IGF-IR腫瘤生長。
序列表<110>Cohen，Bruce D.
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130 135 140Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Ash Ser145 150 155 160Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Cys Ala165 170<210>5<211>322<212>DNA<213>人<400>5gacatccaga tgacccagtt tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatcccgtt tgcacagagg ggtcccatca 180aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240gaagattttg caacttatta ctgtttacaa cataatagtt acccgtgcag ttttggccag 300gggaccaagc tggagatcaa ac 322<210>6<211>107<212>PRT<213>人<400>6Asp Ile Gln Met Thr Gln Phe Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 15Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp20 25 30Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile35 40 45Tyr Ala Ala Ser Arg Leu His Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Cys85 90 95Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys100 105<210>7<211>375<212>DNA<213>人<400>7
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caagggacca aggtggaaat caaac 325<210>56<211>376<212>DNA<213>人工序列<400>56caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60tcctgtgcag cctctggatt cacyttcagt gactactaya tgagctggat ccgccaggct 120ccagggaagg ggctggartg ggtttcatac attagtagta gtggtagtac cakakactac 180gcagactctg tgaagggccc attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgy gagagatgga 300gtggaaacta ctttttacta ctactactac ggtatggacg tctggggcca agggaccacg 360gtcaccgtct cctcag 376<210>57<211>358<212>DNA<213>人工序列<400>57caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt arttactact ggagctggat ccggcagccc 120gccgggaagg gactggagtg gattgggcgt atctatacca gtgggagcmc caactacaac 180ccctccctca agagtcgagt caccatgtca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240aagctgarct ctgtgaccgc cgcggacacg gccgtgtatt actgtgcggt aacgattttt 300ggagtggtta ttatctttga ctactggggc cagrganccc tggtcaccgt ctcctcag 358<210>58<211>418<212>DNA<213>人工序列<400>58caggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60tcctgtrcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgarctgggt ccgccaggct 120ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagst attastggka gtggtggtab yacatwctac 180gcagactccg tgaagggccc gttcaccatc tccagagaca attccargam cacgctgtat 240ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatctk 300ggctrsksyg actyttacta ctactactac ggtatggacg tctggggcca agggacyacg 360gtgattatga gttggttcga cccctggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcag 418<210>59<211>364<212>DNA<213>人工序列<400>59caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttactact ggagytggat ccggcagccc 120ccagggaagg gactggagtg gattgggtat atctattaca gtgggagcac caactacaac 180ccctccctca agagtcgact caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aagctgagyt ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgccag gacgtatagc 300agttcgttct actactacgg tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360tcag 364<210>60<211>15<212>PRT<213>人工序列<400>60Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser1 5 10 15
序列表<110>Cohen，Bruce D.
Bedian，VaheObrocea，MihailGomez-Navarro，JesusCusmano，John D.
Wang，Huifen F.
Page，Kelly L.
Guyot，Deborah J.
<120>抗胰島素樣生長因子I受體抗體的用途<130>PC25232A<140>
<141>
<160>60<170>PatentIn Ver.2.1<210>1<211>291<212>DNA<213>人<400>1tgcatctgta ggagacagag tcaccttcac ttgccgggca agtcaggaca ttagacgtga 60tttaggctgg tatcagcaga aaccagggaa agctcctaag cgcctgatct atgctgcatc 120ccgtttacaa agtggggtcc catcaaggtt cagcggcagt ggatctggga cagaattcac 180tctcacaatc agcagcctgc agcctgaaga ttttgcaact tattactgtc tacagcataa 240taattatcct cggacgttcg gccaagggac cgaggtggaa atcatacgaa c 291<210>2<211>136<212>PRT<213>人<400>2Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Phe Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp1 5 10 15Ile Arg Arg Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro20 25 30
Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser35 40 45Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser50 55 60Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn65 70 75 80Asn Tyr Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Glu Val Glu Ile Ile Arg85 90 95Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln100 105 110Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyrl15 120 125Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp130 135<210>3<211>352<212>DNA<213>人<400>3gggaggcttg gtcaagcctg gaggtccctg agactctcct gtgcagcctc tggattcact 60ttcagtgact actatatgag ctggatccgc caggctccag ggaaggggct ggaatgggtt 120tcatacatta gtagtagtgg tagtaccaga gactacgcag actctgtgaa gggccgattc 180accatctcca gggacaacgc caagaactca ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc 240gaggacacgg ccgtgtatta ctgtgtgaga gatggagtgg aaactacttt ttactactac 300tactacggta tggacgtctg gggccaaggg accacggtca ccgtctcctc ag 352<210>4<211>174<212>PRT<213>人<400>4Gly Arg Leu Gly Gln Ala Trp Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala1 5 10 15Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala20 25 30
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser35 40 45Thr Arg Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg50 55 60Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala65 70 75 80Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Asp Gly Val Glu Thr Thr85 90 95Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr100 105 110Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu115 120 125Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys130 135 140Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser145 150 155 160Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Cys Ala165 170<210>5<211>322<212>DNA<213>人<400>5gacatccaga tgacccagtt tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatcccgtt tgcacagagg ggtcccatca 180aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240gaagattttg caacttatta ctgtttacaa cataatagtt acccgtgcag ttttggccag 300gggaccaagc tggagatcaa ac 322<210>6<211>107<212>PRT<213>人<400>6
Asp Ile Gln Met Thr Gln Phe Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 15Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp20 25 30Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile35 40 45Tyr Ala Ala Ser Arg Leu His Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Cys85 90 95Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys100 105<210>7<211>375<212>DNA<213>人<400>7aggtgcagct gttggagtct gggggaggct tggtacagcc tggggggtcc ctgagactct 60cctgtacagc ctctggattc acctttagca gctatgccat gaactgggtc cgccaggctc 120cagggaaggg gctggagtgg gtctcagcta ttagtggtag tggtggtacc acattctacg 180cagactccgt gaagggccgg ttcaccatct ccagagacaa ttccaggacc acgctgtatc 240tgcaaatgaa cagcctgaga gccgaggaca cggccgtata ttactgtgcg aaagatcttg 300gctggtccga ctcttactac tactactacg gtatggacgt ctggggccaa gggaccacgg 360tcaccgtctc ctcag 375<210>8<211>124<212>PRT<213>人<400>8Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser1 5 10 15Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala20 25 30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser35 40 45Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Thr Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys50 55 60Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Thr Thr Leu Tyr Leu65 70 75 80Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala85 90 95Lys Asp Leu Gly Trp Ser Asp Ser Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp100 105 110Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser115 120<210>9<211>302<212>DNA<213>人<400>9tcctccctgt ctgcatctgt aggagacaga gtcaccttca cttgccgggc aagtcaggac 60attagacgtg atttaggctg gtatcagcag aaaccaggga aagctcctaa gcgcctgatc 120tatgctgcat cccgtttaca aagtggggtc ccatcaaggt tcagcggcag tggatctggg 180acagaattca ctctcacaat cagcagcctg cagcctgaag attttgcaac ttattactgt 240ctacagcata ataattatcc tcggacgttc ggccaaggga ccgaggtgga aatcatacga 300ac302<210>10<211>100<212>PRT<213>人<400>10Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Phe Thr Cys Arg1 5 10 15Ala Ser Gln Asp Ile Arg Arg Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro20 25 30Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Arg Leu Gln Ser35 40 45
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr50 55 60Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys65 70 75 80Leu Gln His Asn Asn Tyr Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Glu Val85 90 95Glu Ile Ile Arg100<210>11<211>338<212>DNA<213>人<400>11gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc acctgcactg tctctggtgg 60ctccatcagt aattactact ggagctggat ccggcagccc gccgggaagg gactggagtg 120gattgggcgt atctatacca gtgggagccc caactacaac ccctccctca agagtcgagt 180caccatgtca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg aagctgaact ctgtgaccgc 240cgcggacacg gccgtgtatt actgtgcggt aacgattttt ggagtggtta ttatctttga 300ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcag 338<210>12<211>112<212>PRT<213>人<400>12Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr1 5 10 15Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln20 25 30Pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Thr Ser Gly35 40 45Ser Pro Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val50 55 60Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala65 70 75 80
Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Val Thr Ile Phe Gly Val Val85 90 95Ile Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser100 105 110<210>13<211>322<212>DNA<213>人<400>13gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga agtgatttag gctggtttca gcagaaacca 120gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccaaat tacaccgtgg ggtcccatca 180aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagccg cctgcagcct 240gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt accctctcac tttcggcgga 300gggaccaagg tggagatcaa ac 322<210>14<211>107<212>PRT<213>人<400>14Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 15Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Ser Asp20 25 30Leu Gly Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile35 40 45Tyr Ala Ala Ser Lys Leu His Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Gln Pro65 70 75 80Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Leu85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys100 105<210>15<211>376<212>DNA<213>人<400>15gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtat cacatactac 180gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatctg 300ggctacggtg acttttacta ctactactac ggtatggacg tctggggcca agggaccacg 360gtcaccgtct cctcag 376<210>16<211>125<212>PRT<213>人<400>16Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15Sar Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Sar Gly Phe Thr Phe Sar Ser Tyr20 25 30Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Sar Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95Ala Lys Asp Leu Gly Tyr Gly Asp Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met100 105 110Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125<210>17<211>279<212>DNA<213>人<400>17caggagacag agtcaccatc acttgccggg caagtcagag cattagtacc tttttaaatt 60ggtatcagca gaaaccaggg aaagccccta aactcctgat ccatgttgca tccagtttac 120aaggtggggt cccatcaagg ttcagtggca gtggatctgg gacagatttc actctcacca 180tcagcagtct gcaacctgaa gattttgcaa cttactactg tcaacagagt tacaatgccc 240cactcacttt cggcggaggg accaaggtgg agatcaaac279<210>18<211>92<212>PRT<213>人<400>18Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr1 5 10 15Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu20 25 30Ile His Val Ala Ser Ser Leu Gln Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser35 40 45Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln50 55 60Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Asn Ala Pro65 70 75 80Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys85 90<210>19<211>341<212>DNA<213>人<400>19cccaggactg gtgaagcctt cggagaccct gtccctcacc tgcactgtct ctggtggctc 60
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Tyr Tyr Cys Val Arg Asp Gly Val Glu Thr Thr Phe Tyr Tyr Tyr Tyr115 120 125Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser130 135 140Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg145 150 155 160Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr165 170 175Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser180 185 190Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser195 200 205Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr210 215 220Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys225 230 235 240Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro245 250 255Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp260 265 270Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp275 280 285Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly290 295 300Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn305 310 315 320Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp325 330 335Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro340 345 350Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu355 360 365
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Tyr Tyr Cys Ala Arg Val Leu Arg Phe Leu Glu Trp Leu Leu Tyr Tyr115 120 125Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr130 135 140Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro145 150 155 160Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val165 170 175Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala180 185 190Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly195 200 205Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly210 215 220Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys225 230 235 240Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys245 250 255Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys260 265 270Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val275 280 285Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr290 295 300Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu305 310 315 320Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His325 330 335Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys340 345 350Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln355 360 365
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<213>人工序列<400>54gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgyaggaga cagagtcacc 60atcacttgcc gggcaagtca gagcattagy asctwtttaa attggtatca gcagaaacca 120gggaaagccc ctaarctcct gatcyatgyt gcatccagtt trcaargtgg ggtcccatca 180aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacartr ccccayychc tttcggcgga 300gggaccaagg tggagatcaa ac 322<210>55<211>325<212>DNA<213>人工序列<400>55gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60ctctcctgya gggccagtca gagtgttmgc rgcagstact tagcctggta ccagcagaaa 120cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240cctgaagatt ttgcagtgtw ttactgtcag cagtatggta gytcacctcs nacgttcggc 300caagggacca aggtggaaat caaac 325<210>56<211>376<212>DNA<213>人工序列<400>56caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60tcctgtgcag cctctggatt cacyttcagt gactactaya tgagctggat ccgccaggct 120ccagggaagg ggctggartg ggtttcatac attagtagta gtggtagtac cakakactac 180gcagactctg tgaagggccc attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgy gagagatgga 300gtggaaacta ctttttacta ctactactac ggtatggacg tctggggcca agggaccacg 360gtcaccgtct cctcag 376<210>57<211>358<212>DNA<213>人工序列<400>57caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt arttactact ggagctggat ccggcagccc 120
gccgggaagg gactggagtg gattgggcgt atctatacca gtgggagcmc caactacaac 180ccctccctca agagtcgagt caccatgtca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240aagctgarct ctgtgaccgc cgcggacacg gccgtgtatt actgtgcggt aacgattttt 300ggagtggtta ttatctttga ctactggggc cagrganccc tggtcaccgt ctcctcag 358<210>58<211>418<212>DNA<213>人工序列<400>58caggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60tcctgtrcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgarctgggt ccgccaggct 120ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagst attastggka gtggtggtab yacatwctac 180gcagactccg tgaagggccc gttcaccatc tccagagaca attccargam cacgctgtat 240ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatctk 300ggctrsksyg actyttacta ctactactac ggtatggacg tctggggcca agggacyacg 360gtgattatga gttggttcga cccctggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcag 418<210>59<211>364<212>DNA<213>人工序列<400>59caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttactact ggagytggat ccggcagccc 120ccagggaagg gactggagtg gattgggtat atctattaca gtgggagcac caactacaac 180ccctccctca agagtcgact caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240aagctgagyt ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgccag gacgtatagc 300agttcgttct actactacgg tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360tcag 364<210>60<211>15<212>PRT<213>人工序列<400>60Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser1 5 10 1權(quán)利要求
1.治療或預(yù)防疾病的方法，其中所述疾病選自哺乳動物的多發(fā)性骨髓瘤、液體腫瘤、肝癌、胸腺疾病、T-細胞介導(dǎo)的自體免疫疾病、內(nèi)分泌學(xué)疾病、缺血、和神經(jīng)變性疾病，該方法包括向所述哺乳動物施用對治療所述疾病有效的量的人抗-IGF-IR抗體。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述液體腫瘤選自急性淋巴細胞白血病(ALL)或慢性mllogenic白血病(CML)；其中所述肝癌選自肝細胞瘤、肝細胞癌、膽管癌、血管肉瘤(angiosarcomas)、血管肉瘤(hemangiosarcomas)、或肝胚細胞瘤；其中所述胸腺疾病選自胸腺瘤或甲狀腺炎；其中所述T-細胞介導(dǎo)的自體免疫疾病選自多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、格雷夫斯病、橋本甲狀腺炎、重癥肌無力、自身免疫性甲狀腺炎、或Bechet’s病；其中所述內(nèi)分泌學(xué)疾病選自II型糖尿病、甲狀腺功能亢進、甲狀腺機能減退、甲狀腺炎、腎上腺皮質(zhì)功能亢進和腎上腺皮質(zhì)機能減退；其中所述缺血為post-cardiac缺血；其中所述神經(jīng)變性疾病選自早老性癡呆。
3.權(quán)利要求1的方法，包括與選自皮質(zhì)類固醇、止吐藥、癌癥疫苗、止痛劑、抗血管劑、和抗增殖劑的試劑聯(lián)合向所述哺乳動物施用所述抗體。
4.權(quán)利要求1的方法，包括聯(lián)合施用所述抗體和疫苗，其中所述疫苗選自基于GM-CSF DNA和細胞的疫苗、樹突細胞疫苗、重組病毒疫苗、熱休克蛋白(HSP)疫苗、同種異體或自體腫瘤疫苗。
5.權(quán)利要求1的方法，包括聯(lián)合施用所述抗體和止痛劑，其中所述止痛劑選自布洛芬、萘普生、三水楊酸膽堿鎂、或鹽酸羥考酮。
6.權(quán)利要求1的方法，包括聯(lián)合施用所述抗體和抗血管劑，其中所述抗血管劑選自bevacizumab或rhuMAb-VEGF。
7.權(quán)利要求1的方法，包括聯(lián)合施用所述抗體和抗增殖劑，其中所述抗增殖劑選自法尼基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶抑制劑、αvβ3抑制劑、αvβ5抑制劑、p53抑制劑、和PDGFR抑制劑。
8.權(quán)利要求1的方法，其中結(jié)合IGF-IR的抗體具有以下特性對人IGF-IR的結(jié)合親和力的Kd為8×10-9或更低；抑制人IGF-IR和IGF-1間結(jié)合的IC50小于100nM；及含有包含人FR1、FR2、和FR3氨基酸序列的重鏈氨基酸序列，人FR1、FR2、和FR3氨基酸序列對應(yīng)于VH DP-35、VIV-4/4.35、VH DP-47、或VH DP-71基因的FR1、FR2、和FR3氨基酸序列、或其中的保守替代或體細胞突變，其中FR序列與CDR1、CDR2、和CDR3序列相連，且其中抗體在其輕鏈中還含有來自A27、A30、或012基因的CDR區(qū)域。
9.權(quán)利要求1的方法，其中所述抗體與具有選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、4.9.2、4.17.3、和6.1.1的抗體的重鏈和輕鏈氨基酸序列的抗體競爭和IGF-IR的結(jié)合。
10.權(quán)利要求1的方法，其中所述抗體含有包含選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、4.9.2、4.17.3、和6.1.1的抗體的CDR-1、CDR-2、和CDR-3氨基酸序列或相對于所述CDR序列而言具有改變的序列的重鏈和包含選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、4.9.2、4.17.3、和6.1.1的抗體的CDR-1、CDR-2、和CDR-3氨基酸序列或相對于所述CDR序列而言具有改變的序列的輕鏈，其中，所述改變選自保守改變、非保守替代、添加和缺失，其中所述保守改變選自其它非極性殘基對非極性殘基的替換、其它極性不帶電殘基對極性帶電殘基的替換、其它極性帶電殘基對極性帶電殘基的替換、和結(jié)構(gòu)相似殘基的替代，其中所述非保守替代選自極性帶電殘基對極性不帶電殘基的替代、和非極性殘基對極性殘基的替代。
11.權(quán)利要求11的方法，其中所述抗體含有包含選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、4.9.2、4.17.3、或6.1.1的抗體的CDR-1、CDR-2、和CDR-3氨基酸序列的重鏈和包含選自2.12.1、2.13.2、2.14.3、4.9.2、4.17.3、或6.1.1的抗體的CDR-1、CDR-2、和CDR-3氨基酸序列的輕鏈。
12.權(quán)利要求1的方法，其中所述抗體選自含有衍生自人基因DP-47的重鏈氨基酸序列和衍生自人基因A30的輕鏈氨基酸序列的抗體。
13.一種用于治療或預(yù)防哺乳動物疾病的藥物組合物，它包括對治療所述疾病有效的量的人抗-IGF-IR抗體和藥學(xué)可接受載體，其中所述疾病選自多發(fā)性骨髓瘤、液體腫瘤、肝癌、胸腺疾病、T-細胞介導(dǎo)的自體免疫疾病、內(nèi)分泌學(xué)疾病、缺血、和神經(jīng)變性疾病。
14.一定量人抗-IGF-IR抗體用于制備治療或預(yù)防哺乳動物疾病的組合物的用途，其中所述量對治療所述疾病有效，其中所述疾病選自多發(fā)性骨髓瘤、液體腫瘤、肝癌、胸腺疾病、T-細胞介導(dǎo)的自體免疫疾病、內(nèi)分泌學(xué)疾病、缺血、和神經(jīng)變性疾病。
15.治療或預(yù)防哺乳動物衰老的方法，包括向所述哺乳動物施用在所述治療或預(yù)防中有效的量的抗-IGF-IR抗體。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療方法，它包括治療對象施用抗－IGF－IR抗體、尤其是人抗－IGF－IR抗體，優(yōu)選結(jié)合施用另一種治療劑，用于治療某些疾病。本發(fā)明還涉及含有這些抗體的藥物組合物和利用這些抗體及其組合物進行治療的方法。
文檔編號A61P9/10GK1753693SQ200480004190
公開日2006年3月29日 申請日期2004年2月3日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月13日
發(fā)明者B·D·科恩, V·貝戴安, H·F·王, M·奧布羅恰, J·戈麥斯-納瓦羅, J·D·卡斯馬諾, D·J·蓋約特, K·L·佩奇 申請人:輝瑞產(chǎn)品公司