專利名稱：作為紅細(xì)胞生成刺激劑的中鏈長脂肪酸類、甘油酯類和類似物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及貧血的治療方法。包括與使用化療和放療相關(guān)的治療貧血的方法以及治療因慢性腎衰竭導(dǎo)致的貧血的方法或使用AZT(齊多夫定)治療HIV-感染的患者。本發(fā)明還涉及減輕藥物毒性和增強(qiáng)藥物功效。本發(fā)明特別涉及中鏈長脂肪酸類作為祖紅細(xì)胞，特別是紅系爆發(fā)集落形成單位(紅細(xì)胞)細(xì)胞或BFU-E細(xì)胞產(chǎn)生的刺激劑的應(yīng)用，所述的中鏈長脂肪酸類諸如為癸酸、辛酸或其鹽或甘油三酯類或其單酸甘油酯類或二脂酰甘油酯類或其它類似物。
背景技術(shù)：
化療指的是應(yīng)用細(xì)胞毒性劑根除癌細(xì)胞和腫瘤，所述的細(xì)胞毒性劑諸如，但不限于環(huán)磷酰胺、多柔比星、柔紅霉素、長春堿、長春新堿、博來霉素、依托泊苷、托泊替康、伊立替康、泰索帝、泰素、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、吉西他濱、順鉑、卡鉑或苯丁酸氮芥。然而，這些活性劑是非特異性的且特別在高劑量下，它們對正常和快速分裂的細(xì)胞具有毒性。這通常在進(jìn)行化療和放療的患者中產(chǎn)生各種副作用。骨髓抑制，即在骨髓中血細(xì)胞產(chǎn)生嚴(yán)重減少是一種這類副作用。其特征在于貧血、白細(xì)胞減少、中性粒細(xì)胞減少、粒細(xì)胞缺乏和血小板減少。嚴(yán)重的慢性中性白細(xì)胞減少的特征還在于循環(huán)的中性白細(xì)胞數(shù)量選擇性減少和對細(xì)菌感染的易感性增加。
使用化療藥治療癌癥的實(shí)質(zhì)在于將細(xì)胞毒性機(jī)制與相對宿主細(xì)胞呈高度增殖的腫瘤細(xì)胞的選擇性機(jī)制結(jié)合。然而，罕有化療藥具有這類選擇性。化療藥的細(xì)胞毒性限制了對癌癥患者的給藥劑量、影響其治療周期并嚴(yán)重危害其生命質(zhì)量。
盡管其它正常組織也受到不良影響，但是骨髓對諸如化療或放療這類增殖特異性治療特別敏感。急性和慢性骨髓毒性是癌癥化療的常見副作用，它導(dǎo)致血細(xì)胞計數(shù)下降和貧血、白細(xì)胞減少、中性白細(xì)胞減少、粒細(xì)胞缺乏和血小板減少。這類作用的一個原因在于由細(xì)胞毒性劑或放療對這些細(xì)胞的殺傷作用和多成熟髓室排空誘導(dǎo)的反饋?zhàn)饔脵C(jī)制引起的干細(xì)胞分化導(dǎo)致的復(fù)制造血細(xì)胞(例如多能干細(xì)胞和其它先祖細(xì)胞)數(shù)量減少。第二個原因在于還涉及直接(突變)和間接(干細(xì)胞群老化)作用的干細(xì)胞的自我更新能力下降(Tubiana，M.等《放療與腫瘤學(xué)》(Radiotherapy and Oncology)291-17，1993)。因此，癌癥治療通常導(dǎo)致紅細(xì)胞或體循環(huán)中的紅細(xì)胞減少。
紅細(xì)胞為含有血紅蛋白且主要用于氧的運(yùn)輸?shù)臒o核雙凹形盤樣細(xì)胞。血紅蛋白是含有用于氧的四個結(jié)合位點(diǎn)的四肽。貧血指的是存在當(dāng)特征在于紅細(xì)胞比容測定的紅細(xì)胞數(shù)量、血紅蛋白量或血液中紅細(xì)胞壓積的低于正常值時的情況。將紅細(xì)胞比容或″紅細(xì)胞容積″看作貧血的特別可靠的指標(biāo)。一般來說，在正常成年人中，女性和男性(在海平面上)的紅細(xì)胞計數(shù)(百萬/mm3)、血紅蛋白(g/100ml)和紅細(xì)胞比容或紅細(xì)胞壓積(ml/100ml)的平均值為4.8±0.6和5.4±0.9、14.0±2.0和16.0±2.0以及42.0±5.0和47.0±5.0，正如《Harrison內(nèi)科學(xué)原理》(Harrison′s Principles of Internal Medicine)第8版，Appendix-表A-5，McGraw Hill(1977)中所述。在正常人中，紅細(xì)胞由骨髓產(chǎn)生且釋放在循環(huán)中，其中它們可以存活約120天。它們隨后被單核細(xì)胞-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)除去。
貧血是不同疾病和疾患的癥狀。因此，可以根據(jù)病因?qū)W對貧血分類。例如，再生障礙性貧血的特征在于缺乏紅細(xì)胞再生且對治療有抗性。在這類患者中，存在骨髓樣細(xì)胞、紅細(xì)胞系和血小板生成干細(xì)胞群明顯下降，導(dǎo)致各類血細(xì)胞減少。溶血性貧血因紅細(xì)胞存活期縮短和骨髓不能補(bǔ)償其生存期減少所致。它可能是遺傳性的或可能因化療、感染或自身免疫過程所致。缺鐵性貧血指的是特征在于低鐵儲存或沒有鐵儲存、低血清鐵濃度、低血紅蛋白濃度或紅細(xì)胞比容等的貧血形式。鐵缺乏是最常見的貧血原因。最常見影響成年人的惡性貧血因胃粘膜無法分泌足夠的內(nèi)因子而導(dǎo)致維生素B12吸收不良所致。鐮狀細(xì)胞性貧血因遺傳上確定的血紅蛋白合成缺陷所致。其特征在于血液中存在鐮形的紅細(xì)胞。上述情況僅是對醫(yī)學(xué)而言已知的許多不同貧血中的典型。然而，在本發(fā)明的上下文中，特別關(guān)注解決與治療癌癥中使用化療或放療相關(guān)的貧血。
按照《今日生物世界》(BioWorld Today)(第4頁；2002年7月23日)中公開的陳述，今年在美國有約120萬癌癥患者進(jìn)行細(xì)胞毒性化療且他們中約800,000或67％發(fā)生貧血。另外，貧血還與需要定期透析或腎移植才能存活的患者的腎病晚期有關(guān)。這屬于慢性腎衰竭或存在漸進(jìn)且通常為不可逆的腎功能衰退的臨床情況范圍。
紅細(xì)胞生成素(EPO)是腎臟中產(chǎn)生的分子量為34,000的糖蛋白。EPO刺激骨髓中定型的紅細(xì)胞系造血祖細(xì)胞的分裂和分化(BFU-E細(xì)胞)并維持細(xì)胞存活力(抑制BFU-E和CFU-E細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡)。EPO的生物作用是受體介導(dǎo)的。在不同動物中氨基酸的同一性在人EPO與猴子EPO之間為92％且在人EPO與小鼠EPO之間為80％。EPO生物合成的主要刺激為組織低氧。然而，正如從上述觀察到的，EPO具有治療某些貧血的顯著治療潛能。例如EPO可以用于治療因內(nèi)源性EPO產(chǎn)生減少導(dǎo)致的貧血，所述的內(nèi)源性EPO產(chǎn)生減少可能因腎損傷或腎臟無功能所致(例如如上所述的慢性腎衰竭)。另一方面，EPO可以用于治療因骨髓損傷和隨后的祖紅細(xì)胞細(xì)胞(例如BFU-E細(xì)胞)增殖下降所致的貧血，所述的祖紅細(xì)胞細(xì)胞(例如BFU-E細(xì)胞)增殖下降可能因使用細(xì)胞毒性化療或放療治療癌癥患者所致(也如上所述)。各種形式的重組EPO可以從市售得到。它們在用于其制備的表達(dá)系統(tǒng)及其位點(diǎn)和蛋白質(zhì)糖基化程度方面不同。α型紅細(xì)胞生成素在CHO細(xì)胞中得到表達(dá)且購自商品名Procrit、Epogen或Eprex。如EPO，α型紅細(xì)胞生成素在天冬酰胺(Asn)殘基上帶有三個N-連接的糖基化位點(diǎn)Asn 19、Asn 33和Asn 78。β型紅細(xì)胞生成素在三個位點(diǎn)上N-糖基化，而ω型紅細(xì)胞生成素在Asn 24、Asn 28、Asn 83上N-糖基化且部分在絲氨酸(Ser 126)上O-糖基化。近來，已經(jīng)證實(shí)過度糖基化形式的EPO含有五個N-連接的糖基化位點(diǎn)。它是購自Aranespe商品名的α型紅細(xì)胞生成素的緩慢或延長釋放形式。這種蛋白質(zhì)因其血清半衰期延長約3-倍而與天然形式相比表現(xiàn)出增強(qiáng)的生物活性。然而，這些糖基化蛋白質(zhì)的應(yīng)用是昂貴的和受限的，因?yàn)楸仨毻ㄟ^重組技術(shù)生產(chǎn)它們。如果對患者″化學(xué)保護(hù)″以防止免疫抑制，那么這類治療后的改善治療是不必要的。因此，對減輕因化療和放療誘發(fā)的骨髓抑制狀態(tài)的不理想副作用的新組合物和方法存在需求。
發(fā)明概述本發(fā)明通過提供刺激哺乳動物，包括人體內(nèi)的造血系統(tǒng)的新方法滿足了對化學(xué)保護(hù)劑的需求。本發(fā)明還提供了治療化療和放療引起的骨髓抑制作用和刺激造血系統(tǒng)可以具有治療價值，但不限于貧血的任意其它情況的新方法。
按照該方法，可以對哺乳動物，特別是人給予顯著減少化療和放療副作用的有效量的組合物，該組合物包括在藥物上可接受載體中的癸酸、辛酸或金屬鹽(鈉、鉀、鈣、鎂)或其甘油三酯類或其單酸甘油酯或二脂酰甘油酯類或烷基酯類或其它類似物。
因此，本發(fā)明的一個目的是提供使用癸酸、辛酸或金屬鹽(鈉、鉀、鈣、鎂)或其甘油三酯類或其單酸甘油酯或二脂酰甘油酯類或烷基酯類或其它類似物的組合物，它們用于生產(chǎn)作為單一活性劑或作為兩種或多種活性劑與和/或不與其它和化療劑或誘導(dǎo)骨髓抑制狀態(tài)的這類藥物組合的化學(xué)保護(hù)藥物組合物。
本發(fā)明的另一個目的涉及癸酸、辛酸或鈉鹽或其甘油三酯類或其單酸甘油酯或二脂酰甘油酯類或相關(guān)化合物作為血細(xì)胞生成刺激因子的應(yīng)用。
此外，本發(fā)明包括含有癸酸、辛酸或鈉鹽或其甘油三酯類或其單酸甘油酯或二脂酰甘油酯類或其它類似物的組合物和這類化合物在治療骨髓抑制和隨后的貧血和免疫抑制中的應(yīng)用。
本發(fā)明的一個目的在于提供對哺乳動物，包括人提供有效化學(xué)保護(hù)作用的方法。
本發(fā)明的另一個目的在于提供有效增加化療和放療在哺乳動物，包括人中的功效的方法。
本發(fā)明的另一個目的在于提供使用更常用劑量乃至為獲得更好治療有益性而增加化療組合物劑量，同時避免副作用增加的方法。
本發(fā)明的另一個目的在于提供有效減輕或消除哺乳動物，包括人中化療誘發(fā)的貧血的方法。
本發(fā)明的另一個目的在于提供治療因慢性腎衰竭導(dǎo)致的貧血，尤其是患有晚期腎病的患者中的貧血的方法。
本發(fā)明的另一個目的在于提供治療因其它醫(yī)療過程，諸如矯形外科或使用諸如AZT這類其它藥物導(dǎo)致的貧血的方法。
最后，本發(fā)明的另一個目的在于提供使對接受者的不良作用降至最低或沒有不良作用的方法。
在綜述了如下公開實(shí)施方案的詳細(xì)描述和待批權(quán)利要求后，本發(fā)明的這些和其它目的、特征和優(yōu)點(diǎn)顯而易見。
發(fā)明詳述高劑量化療和放療破壞了骨髓中的造血細(xì)胞?；颊唠S之發(fā)生紅細(xì)胞、血小板和中性白細(xì)胞嚴(yán)重耗盡。貧血導(dǎo)致疲勞、缺乏精力和呼吸急促。血小板減少導(dǎo)致凝血時間延長和出血障礙。中性白細(xì)胞減少使患者處于感染增加的危險中。骨髓抑制是癌癥治療中的劑量限定因素。
本發(fā)明涉及恢復(fù)患者造血系統(tǒng)的方法。目前用于該目的的方法利用了細(xì)胞因子或糖蛋白生長因子。例如，紅細(xì)胞生成素可以用于刺激反應(yīng)性骨髓紅細(xì)胞系增殖和成熟。如果合適，批準(zhǔn)在人體中使用紅細(xì)胞生成素用于治療貧血例如因不能產(chǎn)生足量紅細(xì)胞導(dǎo)致的貧血。然而，存在限制紅細(xì)胞生成素應(yīng)用的局限。實(shí)際上，這些局限中的許多對重組糖蛋白細(xì)胞因子的醫(yī)學(xué)應(yīng)用而言是常見的-可用性、毒性和功效，尤其是長期應(yīng)用。例如，用重組人紅細(xì)胞生成素治療的某些患者對糖蛋白發(fā)生免疫反應(yīng)，導(dǎo)致純紅細(xì)胞發(fā)育不良。當(dāng)后者發(fā)生時，對重組蛋白發(fā)生的抗體也攻擊患者等同或內(nèi)源性蛋白?；颊唠S之發(fā)生比藥物治療前更為惡化的貧血。
可以通過使用帶有碳鏈長為8(C8，辛酸或辛酸)或10(C10，癸酸或癸酸)的脂肪酸酯化甘油制備中鏈甘油三酯(類)(MCT)。MCT通常為C8和C10脂肪酸甘油酯類的混合物；然而，MCT還可含有少量(各自2±1％)的C6(己酸或己酸)和C12(正十二烷酸或月桂酸)甘油酯類。另一方面，長鏈甘油三酯(類)(LCT)由具有大于12個原子的碳鏈長度的脂肪酸酯化的甘油組成。存在于LCT中的典型脂肪酸類包括棕櫚酸(C16)和硬脂酸(C18)。不同于MCT，LCT是膳食脂肪的主要成分。實(shí)際上，MCT和LCT具有顯著不同的生物特性。MCT與LCT之間存在的某些生理差異描述在《Harrison內(nèi)科學(xué)原理》(Harrison′s Principles ofInternal Medicine)第8版，1520-1521(1977)；第15版，1668-1669(2001)中。例如，與LCT相反，MCT不需要通過胰脂肪酶水解，這是因?yàn)樗鼈儽荒c上皮細(xì)胞吸收。
MCT及其成分中鏈脂肪酸類是用于食品和藥物工業(yè)的無毒性物質(zhì)。例如Traul，K.A.等(《食品與化學(xué)毒理學(xué)》(Food and ChemicalToxicology)3879-98，2000)描述了MCT已經(jīng)用于逐步增加的大量食品和營養(yǎng)品應(yīng)用，因?yàn)樗鼈兛梢蕴峁┏^LCT的許多優(yōu)勢。MCT還主要用作各種人和獸藥制劑和化妝品中的乳化劑。他們涉及了大量支持MCT安全性的毒理學(xué)研究。例如，他們注意到已經(jīng)在臨床試驗(yàn)中證實(shí)了MCT的人膳食消耗安全性至多達(dá)1g/kg的水平。C8和C10脂肪酸類具有相似的安全性和應(yīng)用。例如，在The Mersk Index，第11版，266(1989)中，報導(dǎo)了辛酸具有的LD50(口服，大鼠)＝10.08g/kg，它基本上無毒性。實(shí)際上，按照聯(lián)邦管理法規(guī)(CFR)第184部分，美國食品與藥品管理局(FDA)已經(jīng)批準(zhǔn)了辛酸的GRAS(一般認(rèn)為是安全的)確認(rèn)。類似地，按照第172部分(CFR)，將游離脂肪酸類(例如癸酸、辛酸)及其金屬鹽看作用于食品的安全添加劑。正如Dimitrijevic，D.等注意到的(《制藥學(xué)和藥理學(xué)雜志》(Journal of Pharmacy andPharmacology)53149-154，2001)，在日本和瑞典批準(zhǔn)癸酸(鈉鹽)在人體應(yīng)用中作為直腸藥物產(chǎn)品的吸收促進(jìn)劑。美國專利US 4,602,040(1986)中描述了MCT作為藥物賦形劑的應(yīng)用。更近來，PCT公開號WO01/97799中描述了中鏈脂肪酸類，特別是辛酸和癸酸作為抗菌劑的應(yīng)用。
然而，直到本文公開的令人意外的發(fā)現(xiàn)為止，尚不了解中鏈脂肪酸類，諸如癸酸、辛酸或金屬鹽或其單酸甘油酯、二脂酰甘油酯類或甘油三酯類(MCT)或相關(guān)化合物在刺激從紅細(xì)胞系造血祖細(xì)胞產(chǎn)生紅細(xì)胞或紅細(xì)胞生成中的有效性。正如本文所述的，MCT可以包括C8(辛酸)和C10(癸酸)脂肪酸的甘油三酯類，它們構(gòu)成了至少98％的涉及刺激造血作用和紅細(xì)胞生成的活性。前一種活性描述在我們的PCT公開號WO 02/83120中，而在上述文獻(xiàn)中并未描述刺激紅細(xì)胞生成和治療貧血。實(shí)際上，這一發(fā)現(xiàn)是完全令人意外的，因?yàn)槲墨I(xiàn)中幾乎沒有報導(dǎo)有關(guān)低于糖蛋白的分子量或小分子能夠刺激紅細(xì)胞生成。Wrighton，N.C.等描述了紅細(xì)胞生成素模擬肽(EMP)的合成二聚化形式(《天然生物技術(shù)》(Nature Biotechnology)151261-1265，1997)。盡管明顯小于紅細(xì)胞生成素，但是EMP是在每種單體中含有20個氨基酸的多肽。更重要的是，EMP的活性明顯低于紅細(xì)胞生成素。更近來，PCT公開號WO 02/19963中描述了合成的紅細(xì)胞生成蛋白(SEP)作為具有紅細(xì)胞生成素樣生物活性的合成穩(wěn)定多肽。報導(dǎo)的SEP的優(yōu)點(diǎn)在于它是通過化學(xué)合成而非通過相對更昂貴的重組技術(shù)制備的穩(wěn)定的相對長半衰期的分子。通過引入乙二醇單元(例如PEG)獲得穩(wěn)定且由此可以將附加水平的復(fù)雜性引入SEP制劑?？傊F(xiàn)有技術(shù)中教導(dǎo)了刺激紅細(xì)胞產(chǎn)生需要應(yīng)用較大的多肽或蛋白質(zhì)分子。
本發(fā)明涉及中鏈脂肪酸類或其金屬鹽或甘油三酯類或其單酸甘油酯、二脂酰甘油酯類或其它類似物或MCT組合物作為紅細(xì)胞生成活化或生長因子，且它具體地說作為祖紅細(xì)胞細(xì)胞產(chǎn)生刺激劑的應(yīng)用。當(dāng)用于化療和放療時，在治療前、過程中和/或之后給予中鏈脂肪酸類或其金屬鹽或甘油三酯類或其單酸甘油酯或二脂酰甘油酯或其它類似物或MCT以縮短貧血期限并加速造血系統(tǒng)補(bǔ)充。此外，能夠在使用化療和放療的多點(diǎn)處(例如在治療前使用脂肪酸和之后使用MCT)使用中鏈脂肪酸類與其金屬鹽或甘油三酯類或其單酸甘油酯或二脂酰甘油酯或其它類似物和/或MCT的組合。另一方面，能夠在使用化療和放療之前、過程中和/或之后同時給予該組合。在因EPO產(chǎn)生減少導(dǎo)致的嚴(yán)重貧血中，中鏈脂肪酸類或其金屬鹽或甘油三酯類或其單酸甘油酯或二脂酰甘油酯或其它類似物或MCT用作治療劑。還可以在骨髓移植后使用中鏈脂肪酸類或其金屬鹽或甘油三酯類或其單酸甘油酯或二脂酰甘油酯或其它類似物或MCT以便刺激骨髓干細(xì)胞，由此縮短從貧血中恢復(fù)的時間期限。
本文所用的″中鏈脂肪酸類，諸如癸酸或辛酸或其金屬鹽或甘油三酯類或其單酸甘油酯類或二脂酰甘油酯類或其它類似物或MCT組合物″指的是包括所述活性組分和一種或多種藥物上可接受的載體的組合物。
本文所用的術(shù)語″藥物上可接受的載體″指的是不會干擾中鏈脂肪酸類，諸如癸酸或辛酸或其金屬鹽或甘油三酯類其單酸甘油酯類或二脂酰甘油酯類或其它類似物或MCT組合物的生理作用且對哺乳動物，包括人無毒性的物質(zhì)。
可以使用癸酸或辛酸或其鹽或甘油三酯類或其單酸甘油酯類或二脂酰甘油酯類或其它類似物或MCT和藥物上可接受的載體通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法配制本發(fā)明的癸酸或辛酸或其鹽或甘油三酯類或其單酸甘油酯類或二脂酰甘油酯類或其它類似物或MCT組合物(MerckIndex，Merck & Co.，Rahway，NJ)。這些組合物包括，但不限于固體、液體、油、乳劑、凝膠、氣溶膠、吸入劑、膠囊、丸劑、貼劑和栓劑。
所有方法均包括是使活性組分與構(gòu)成一種或多種輔助組分的載體混合的步驟。
本文所用的術(shù)語″化療″指的是使用細(xì)胞毒性劑殺傷增殖細(xì)胞的過程。術(shù)語″化療過程中″指的是給予細(xì)胞毒性劑的作用持續(xù)的期限。另一方面，術(shù)語″化療后″用以包括給予細(xì)胞毒性劑后給予組合物的所有情況而與給予的細(xì)胞毒性劑的作用持久性無關(guān)。
當(dāng)將本發(fā)明的方法應(yīng)用于化療時，可以在化療前、過程中或之后(即給予細(xì)胞毒性劑前、過程中或之后)給予癸酸或辛酸或其鹽或甘油三酯類或其單酸甘油酯類或二脂酰甘油酯類或其它類似物或MCT組合物。
所謂″細(xì)胞毒性劑″是指殺傷顯著增殖的細(xì)胞的活性劑，所述顯著增殖的細(xì)胞例如為腫瘤細(xì)胞、病毒感染的細(xì)胞或造血細(xì)胞?？梢杂糜趯?shí)施本發(fā)明的細(xì)胞毒性劑的實(shí)例包括，但不限于環(huán)磷酰胺、多柔比星、柔紅霉素、長春堿、長春新堿、博來霉素、依托泊苷、托泊替康、伊立替康、泰索帝、泰素、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、吉西他濱、順鉑、卡鉑或苯丁酸氮芥和任意上述化合物的激動劑。細(xì)胞毒性劑還可以為抗病毒藥例如AZT(即3′-疊氮基-3′-脫氧胸苷)或3TC/拉米夫定(即3-硫胞苷)。
本文所用的術(shù)語″化學(xué)保護(hù)″指的是為防止哺乳動物發(fā)生因使用化療劑治療哺乳動物產(chǎn)生的毒性作用的保護(hù)作用。最常見的是，化療劑是細(xì)胞毒性劑，其治療作用因干擾或抑制DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄或隨后的蛋白質(zhì)翻譯的某些方面的能力而產(chǎn)生。因此，化學(xué)保護(hù)劑指的是對哺乳動物給予的防止哺乳動物發(fā)生因使用化療劑治療哺乳動物產(chǎn)生的毒性作用或有利于動物恢復(fù)的任意化合物。
可以診斷貧血且其嚴(yán)重程度可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定。術(shù)語″貧血″可以指當(dāng)發(fā)生紅細(xì)胞數(shù)量、血紅蛋白量或紅細(xì)胞壓積低于正常值的減少時存在的情況。這類臨床標(biāo)準(zhǔn)可變。不受限制，貧血可以是循環(huán)紅細(xì)胞量減少的結(jié)果。還可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定治療功效?？梢蕴峁┲螛?biāo)效應(yīng)。
在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的藥物組合物為任意合適的用于治療貧血的口服、舌下、直腸、局部給藥或吸入(鼻腔噴霧)、肌內(nèi)、真皮內(nèi)、皮下或靜脈內(nèi)給藥的組合物形式。
可以理解用于治療所需的本發(fā)明組合物的量將根據(jù)給藥途徑、所治療疾病的性質(zhì)、患者年齡和情況的不同而改變且最終由參與的臨床醫(yī)師決定。所需劑量通常可以以單劑量或作為在合適的間隔采用的分次劑量提供，例如根據(jù)需要每天兩次、三次或三次以上以進(jìn)行或開始治療。術(shù)語″治療(treatment)″或″治療(treating)″包括對哺乳動物中存在的疾病或疾患的任意療法和預(yù)防所述疾病或疾患(例如貧血)。包括(a)預(yù)防可能易感疾病但尚未診斷為患有該病的患者發(fā)生疾病或疾患；(b)抑制或阻止疾病或疾患發(fā)展；和(c)通過使一種或多種癥狀消退或改善緩解疾病或疾患。
盡管為用于治療，可以將中鏈脂肪酸類或其金屬鹽或甘油三酯類其單酸甘油酯類或二脂酰甘油酯類或其它類似物或MCT作為原料給藥，但是優(yōu)選將所述的活性藥物組分制成藥物制劑或組合物。通過混入任意常用的賦形劑制成無毒性組合物，諸如，但不限于甘露糖醇、乳糖、海藻糖、淀粉、硬脂酸鎂、滑石粉、纖維素、羧甲基纖維素、葡萄糖、明膠、蔗糖、甘油、碳酸鎂、檸檬酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉和甘氨酸。
在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，活性組分給藥量使得在血液中的濃度(游離和/或與血清清蛋白結(jié)合的)大于1μm。在其它實(shí)施方案中，在血液中的濃度可以大于1mM。在本發(fā)明另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，有必要達(dá)到足夠的活性藥物組分局部濃度以獲得在靶組織(例如骨髓)中的生物或醫(yī)療顯著作用。至少在靶組織上需要相對高濃度的活性藥物組分，因?yàn)楸匦枋贡景l(fā)明癸酸或辛酸或其鹽或甘油三酯類或其單酸甘油酯類或二脂酰甘油酯類或其它類似物或MCT組合物形成膠束或聚集物結(jié)構(gòu)以引起生物反應(yīng)。單劑量可以由約1g-約10g(及其任意中間范圍)的活性組分總量組成。
在另一個實(shí)施方案中，所述的藥物組合物可以為適合于腸內(nèi)、粘膜(包括舌下、肺和直腸)或非腸道(包括肌內(nèi)、真皮內(nèi)、皮下和靜脈內(nèi))給藥的形式。如果合適，可以將制劑便利地制成分散劑量單位且可以通過任意制藥領(lǐng)域眾所周知的方法制備。所有方法均包括將活性藥物組分與液體載體或固體載體細(xì)粉或它們兩者緊密混合且然后如果必要使形成所需形式的步驟。如果需要，可以使用適合于使活性藥物組分緩釋的上述制劑。本領(lǐng)域眾所周知的緩釋制劑包括使用脂質(zhì)體、生物相容性聚合物、快速濃注或連續(xù)輸注。
還可以將中鏈脂肪酸類或其金屬鹽或甘油三酯類其單酸甘油酯類或二脂酰甘油酯類或其它類似物或MCT與其它治療活性劑，諸如細(xì)胞毒性抗癌藥或其它抗癌藥(免疫調(diào)制或調(diào)節(jié)藥或治療疫苗或抗血管生成藥等)或免疫抑制藥(包括消炎藥)聯(lián)用?？梢砸来位蛲瑫r在單獨(dú)或組合的藥物制劑中給予這類組合中的各個成分?？梢詫⑸鲜錾婕暗倪@種組合呈藥物制劑的所用形式且由此本發(fā)明的另一個方面包括了含有上述定義的組合及其藥物上可接受的載體的藥物制劑。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例下面進(jìn)一步解釋本發(fā)明的實(shí)施，但不用來限定本發(fā)明。
實(shí)施例1化學(xué)保護(hù)研究MCT對免疫細(xì)胞增殖或保護(hù)的體內(nèi)誘導(dǎo)通過用在第0天時靜脈內(nèi)給予200mg/kg環(huán)磷酰胺(CY)或80mg/kg 5-氟尿嘧啶(5-FU)治療使6-8周齡的雌性C57BL/6小鼠免疫抑制。為了檢驗(yàn)MCT或其它化合物的免疫保護(hù)作用，在使用所述化合物的第0天的前3天、前2天和1前1天時經(jīng)口服預(yù)治療小鼠。在第5天時通過心臟穿刺和脫頸椎處死小鼠。然后記錄股骨(作為骨髓細(xì)胞來源)的總體病理觀察結(jié)果。
表1表示了在有化合物存在或沒有化合物存在下在環(huán)磷酰胺免疫抑制動物中獲得的股骨總體病理觀察結(jié)果。結(jié)果證實(shí)正常小鼠的股骨具有鮮紅的顏色，表明定向造血干細(xì)胞及其子代的增殖狀態(tài)。當(dāng)使用環(huán)磷酰胺治療時，骨髓的造血細(xì)胞貧耗且具有透明的″白色″外觀，表明來源于骨髓的定向造血干細(xì)胞增殖受到抑制。然而，在細(xì)胞毒性誘導(dǎo)的免疫抑制情況下，添加MCT、辛酸甘油酯、癸酸甘油酯、癸酸或癸酸鈉使環(huán)磷酰胺的作用逆轉(zhuǎn)。這使股骨產(chǎn)生紅色外觀，表明定向造血干細(xì)胞，特別是紅細(xì)胞群擴(kuò)充。當(dāng)用5-氟尿嘧啶(5-FU)誘導(dǎo)免疫抑制時，觀察到了相同結(jié)果。
表1環(huán)磷酰胺(CY)、CY+MCT、CY+辛酸甘油酯、CY+癸酸甘油酯、CY+癸酸和CY+癸酸鈉對來自股骨的骨髓外觀的作用總體病理觀察結(jié)果。

實(shí)施例2化學(xué)保護(hù)研究免疫細(xì)胞增殖或保護(hù)的體內(nèi)誘導(dǎo)癸酸甘油酯、癸酸和癸酸鈉的比較按照實(shí)施例1中所述的方案進(jìn)行癸酸甘油酯、癸酸和癸酸鈉對體內(nèi)免疫細(xì)胞增殖或保護(hù)的誘導(dǎo)的作用。在處死動物后，將組織在PBS緩沖液中攪碎并用血細(xì)胞計數(shù)器對細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。
通過在環(huán)磷酰胺治療小鼠中使用癸酸甘油酯、癸酸或癸酸鈉口服預(yù)治療觀察到脾紅細(xì)胞計數(shù)顯著增加(附

圖1)。此外，與未免疫抑制的動物(對照組)相比，某些治療的動物在脾紅細(xì)胞計數(shù)方面恢復(fù)到了″基線水平″。
實(shí)施例3化學(xué)保護(hù)研究免疫細(xì)胞增殖或保護(hù)的體內(nèi)誘導(dǎo)癸酸鈉的口服和靜脈內(nèi)劑量反應(yīng)按照實(shí)施例1中所述的方案進(jìn)行口服和靜脈內(nèi)給予癸酸鈉對體內(nèi)免疫細(xì)胞增殖或保護(hù)的誘導(dǎo)的作用。在處死動物后，將組織在PBS緩沖液中攪碎并用血細(xì)胞計數(shù)器對細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。通過在環(huán)磷酰胺治療小鼠中使用癸酸鈉口服和靜脈內(nèi)給藥預(yù)治療觀察到脾紅細(xì)胞增殖計數(shù)顯著增加(附圖2)。此外，靜脈內(nèi)給予癸酸鈉使脾紅細(xì)胞計數(shù)增加到了對照組小鼠(未免疫抑制)的″基線水平″。
實(shí)施例4化學(xué)保護(hù)研究紅細(xì)胞增殖或再生的體內(nèi)誘導(dǎo)與GM-CSF比較按照實(shí)施例1中所述的方案進(jìn)行口服和靜脈內(nèi)給予癸酸鈉和GM-CSF對體內(nèi)免疫細(xì)胞增殖或保護(hù)的誘導(dǎo)的作用。在處死動物后，將組織在PBS緩沖液中攪碎并用血細(xì)胞計數(shù)器對細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。通過在環(huán)磷酰胺治療小鼠中使用癸酸鈉和GM-CSF(高濃度，1μg/kg)觀察到骨髓紅細(xì)胞計數(shù)顯著增加(附圖3)。此外，當(dāng)與GM-CSF聯(lián)用時，發(fā)生骨髓紅細(xì)胞計數(shù)累積性增加。
另外，當(dāng)單獨(dú)使用癸酸鈉時，它能夠誘導(dǎo)如附圖4中所示的外周血細(xì)胞數(shù)量顯著增加。
實(shí)施例5貧血模型癸酸鈉對骨髓集落形成單位(CFU)增殖/分化或保護(hù)的離體誘導(dǎo)為了檢驗(yàn)癸酸鈉在貧血模型中的免疫保護(hù)或免疫恢復(fù)作用，使用化合物在前3天、前2天和前1天經(jīng)靜脈內(nèi)預(yù)治療BALB/c小鼠。通過用在第0天對6-8周齡雌性BALB/c小鼠經(jīng)腹膜內(nèi)給予60mg/kg苯肼來誘發(fā)貧血。在第6天時通過心臟穿刺和脫頸椎處死小鼠。然后從股骨中獲取骨髓細(xì)胞。用PBS沖洗和洗滌細(xì)胞?；诨罴?xì)胞計數(shù)，以5×105個細(xì)胞/ml的濃度將細(xì)胞重新懸浮于補(bǔ)充了2％FBS的IMDM培養(yǎng)基中。將來自這些細(xì)胞的兩個一式兩份的3×104個細(xì)胞/平皿平板接種在Methocult培養(yǎng)基中，使得可以進(jìn)行集落形成單位(CFU)形成試驗(yàn)。在2-3天培養(yǎng)后記錄CFU-E和BFU-E。14-16天培養(yǎng)后記錄CFU-GM和CFU-GEMM。
正如附圖5中解釋的，癸酸鈉增加了正常小鼠的CFU-E和CFU-GEMM數(shù)量。在苯肼誘發(fā)的貧血小鼠中，癸酸鈉誘導(dǎo)CFU-E、CFU-GM和CFU-GEMM顯著增加。
實(shí)施例6癸酸甘油酯和辛酸甘油酯增加體外人骨髓細(xì)胞的增殖骨髓細(xì)胞獲自癌癥患者的胸骨。用PBS洗滌細(xì)胞并以2×106個細(xì)胞/ml的濃度重新懸浮。將細(xì)胞在37℃下和有或沒有癸酸甘油酯或辛酸甘油酯存在下的RPMI/FBS培養(yǎng)基中培養(yǎng)48-72小時。溫育后，用1μCi的[3H]-胸苷將細(xì)胞脈沖6小時。用Tomtec收集平板并用Microbeta β-計數(shù)器計數(shù)。DNA中摻入[3H]-胸苷是細(xì)胞增殖中的直接指示。
附圖6表示癸酸甘油酯對骨髓增殖的作用的典型實(shí)驗(yàn)。與對照組相比癸酸甘油酯將骨髓增殖增加了3-4倍。此外，當(dāng)與紅細(xì)胞生成素(EPO)聯(lián)用時，分別在48和72小時時出現(xiàn)骨髓增殖的累積或協(xié)同增加。
附圖7表示辛酸甘油酯對骨髓增殖作用的典型實(shí)驗(yàn)。與對照組相比辛酸甘油酯將骨髓增殖增加了2倍。此外，當(dāng)與紅細(xì)胞生成素(EPO)聯(lián)用時，出現(xiàn)骨髓增殖的協(xié)同增加。
實(shí)施例7癸酸甘油酯增加體外人骨髓BFU-E(祖紅細(xì)胞細(xì)胞)集落形成和CFU-GEMM增殖骨髓細(xì)胞獲自不同癌癥患者的胸骨。用PBS洗滌細(xì)胞并以2×106個細(xì)胞/ml的濃度重新懸浮。將細(xì)胞在37℃下和有或沒有癸酸甘油酯存在下的RPMI/FBS或Myelocult(干細(xì)胞技術(shù)，Vancouver)/FBS培養(yǎng)基中培養(yǎng)5天。溫育后，收集、洗滌并計數(shù)細(xì)胞。基于活細(xì)胞計數(shù)將細(xì)胞以5×105個細(xì)胞/ml的濃度重新懸浮于補(bǔ)充了2％FBS的IMDM培養(yǎng)基中。將來自這些細(xì)胞的四個一式兩份的2.5×104個細(xì)胞/平皿平板接種在Methocult培養(yǎng)基中，使得可以進(jìn)行集落形成單位(CFU)形成試驗(yàn)。在14-16天培養(yǎng)后記錄CFU-GM、CFU-GEMM和BFU-E。
表2和3表示癸酸甘油酯對RPMI/FBS培養(yǎng)基中骨髓細(xì)胞集落形成的作用的兩次實(shí)驗(yàn)。癸酸甘油酯的存在增加了CFU-GEMM數(shù)量(達(dá)3倍)和BFU-E集落形成(達(dá)13倍)。后一種細(xì)胞是紅細(xì)胞的先祖細(xì)胞。
表4和5表示證實(shí)癸酸甘油酯對Myelocult/FBS培養(yǎng)基中骨髓集落形成的作用的兩次實(shí)驗(yàn)，所述的Myelocult/FBS培養(yǎng)基是更富集的培養(yǎng)基(補(bǔ)充了其它生長因子)。癸酸甘油酯的存在增加了CFU-GEMM數(shù)量(達(dá)2倍)和BFU-E集落形成(達(dá)6倍)，它們是紅細(xì)胞的先祖細(xì)胞。
表2癸酸甘油酯對體外在RPMI/FBS培養(yǎng)基中培養(yǎng)的人定向造血干細(xì)胞(CFU形成)的作用

表3癸酸甘油酯對體外在RPMI/FBS培養(yǎng)基中培養(yǎng)的人定向造血干細(xì)胞(CFU形成)的作用

表4癸酸甘油酯對體外在Myelocult/FBS培養(yǎng)基中培養(yǎng)的人定向造血干細(xì)胞(CFU形成)的作用

表5癸酸甘油酯對體外在Myelocult/FBS培養(yǎng)基中培養(yǎng)的人定向造血干細(xì)胞(CFU形成)的作用

*CFC＝瓊脂集落生成細(xì)胞
權(quán)利要求
1.包括通式I、II、IIa、III和IIIa的化合物或其組合的組合物在制備用于刺激紅細(xì)胞生成的藥物中的應(yīng)用 R1-CO-OR2II(R1-CO-O)kMIIaR1-Z-SO2-OR2III(R1-Z-SO2-O)kMIIIa其中R1各自獨(dú)立為C7-11烷基；A和B獨(dú)立為H或CO-R1；R2為H或C1-4烷基；M為金屬一價陽離子(k＝1)或二價陽離子(k＝2)；Y為O或NH；且Z為O、NH、CH2O或鍵。
2.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中所述的組合物包括至少兩種通式I的化合物，它們?yōu)橹墟湼视腿ヮ?MCT)，其中R1各自為直鏈或支鏈飽和或不飽和C7或C9烷基。
3.權(quán)利要求2的應(yīng)用，其中所述的混合物包括帶有R1各自為CH3(CH2)8-的第一種MCT。
4.權(quán)利要求2或權(quán)利要求3的應(yīng)用，其中所述的組合物進(jìn)一步包括各自為0.1％-3％的第三種通式I的化合物，其中R1各自為CH3(CH2)4-；和第四種通式I的化合物，其中R1各自為CH3(CH2)10-。
5.權(quán)利要求2的應(yīng)用，其中所述的混合物包括由如下結(jié)構(gòu)式所述的C8和C10脂肪酸甘油三酯類的四種幾何異構(gòu)體
6.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中所述的組合物包括通式II的化合物，它帶有的R2為氫且為中鏈脂肪酸。
7.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中所述的組合物包括通式III的化合物，它帶有的R2為氫。
8.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中所述的組合物包括通式IIa的化合物且其中M為選自鈣、鎂、鉀和鈉的金屬抗衡離子。
9.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中所述的組合物包括通式IIIa的化合物且其中M為選自鈣、鎂、鉀和鈉的金屬抗衡離子。
10.任意上述權(quán)利要求的應(yīng)用，其中所述的組合物包括辛酸或癸酸.
11.任意上述權(quán)利要求的應(yīng)用，其中所述的組合物包括辛酸鈉或癸酸鈉。
12.任意上述權(quán)利要求的應(yīng)用，其中所述的組合物包括辛酸鈉或癸酸鈣。
13.任意上述權(quán)利要求的應(yīng)用，其中所述的組合物包括辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯。
14.任意上述權(quán)利要求的應(yīng)用，其中至少一種化合物的存在量使得它在血液中的濃度大于1μM。
15.任意上述權(quán)利要求的應(yīng)用，其中所述的組合物進(jìn)一步包括人紅細(xì)胞生成素。
16.任意上述權(quán)利要求的應(yīng)用，用于治療因化療導(dǎo)致的貧血。
17.任意權(quán)利要求1-15中的應(yīng)用，用于治療因放療導(dǎo)致的貧血。
18.任意權(quán)利要求1-15中的應(yīng)用，用于治療慢性貧血。
19.任意權(quán)利要求1-15中的應(yīng)用，用于治療暫時性貧血。
20.任意權(quán)利要求1-15中的應(yīng)用，用于治療因慢性腎衰竭導(dǎo)致的貧血。
21.任意權(quán)利要求1-15中的應(yīng)用，用于治療因晚期腎疾病導(dǎo)致的貧血。
22.任意權(quán)利要求1-15中的應(yīng)用，用于治療藥物誘發(fā)的貧血。
23.任意權(quán)利要求1-15中的應(yīng)用，用于治療因醫(yī)療或外科手術(shù)導(dǎo)致的貧血。
24.任意權(quán)利要求1-15中的應(yīng)用，用于增加哺乳動物體內(nèi)的紅細(xì)胞產(chǎn)生。
25.任意權(quán)利要求1-15中的應(yīng)用，用于增加哺乳動物體內(nèi)的血紅蛋白產(chǎn)生。
26.任意權(quán)利要求1-15中的應(yīng)用，用于增加哺乳動物紅細(xì)胞比容。
27.任意權(quán)利要求1-15中的應(yīng)用，用于增加哺乳動物體內(nèi)的紅細(xì)胞系造血祖細(xì)胞產(chǎn)生。
28.任意權(quán)利要求1-15中所述的組合物，用于治療應(yīng)用。
29.包括如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)定義的任意通式I、II、IIa、III和IIIa中的至少一種化合物和人紅細(xì)胞生成素的產(chǎn)品，作為用于療法中分別、同時或依次應(yīng)用的聯(lián)用制劑。
全文摘要
包括通式I、II、IIa、III和IIIa任一項(xiàng)的化合物或其組合的組合物在制備用于刺激紅細(xì)胞生成的藥物中的應(yīng)用，其中R
文檔編號A61K31/20GK1753665SQ200480004978
公開日2006年3月29日 申請日期2004年2月6日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月7日
發(fā)明者C·賓尼, L·加農(nóng), P·勞倫, B·扎克利 申請人:普羅米蒂克生物科學(xué)公司