專(zhuān)利名稱(chēng)：預(yù)防泌尿生殖道感染的包含透明質(zhì)酸的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含透明質(zhì)酸化合物的組合物在預(yù)防病原體粘附于陰道組織中的用途。
背景技術(shù)：
由于陰道具有顯著的酸性、平衡的生態(tài)系統(tǒng)和厚的保護(hù)性上皮，所以它完全可以抵抗感染。但是，許多損害可以影響陰道防御系統(tǒng)，從而導(dǎo)致陰道感染的易感性增加。例如，絕經(jīng)期和性腺機(jī)能減退的女性低雌激素水平會(huì)影響陰道上皮的厚度?？股貢?huì)改變陰道的微生物學(xué)。性交時(shí)精液和月經(jīng)期血液會(huì)增加陰道的pH。壓力、疲勞、慢性疾病例如糖尿病和人類(lèi)免疫缺陷疾病(HIV)不僅影響免疫系統(tǒng)，而且影響陰道pH值。這些因素可以摧毀陰道平衡的微環(huán)境而增加陰道被多種生物體感染的危險(xiǎn)。
病原菌例如大腸桿菌(Escherichia coli)定居至陰道是上行性泌尿道感染(UTIs)的重要一步，這一過(guò)程會(huì)發(fā)生在約10％-20％女性一生當(dāng)中的某個(gè)時(shí)候，而每年的治療支出為50億美元。因?yàn)榇萍に睾谋M的絕經(jīng)期后女性的陰道粘膜變薄且這些女性的陰道環(huán)境pH增加，所以她們是獲得泌尿道感染的最高危人群。陰道和泌尿道感染在首次發(fā)作后的復(fù)發(fā)都很常見(jiàn)。因此，預(yù)防首次感染對(duì)于避免反復(fù)的泌尿生殖道感染很重要。
如果不治療，陰道感染會(huì)增加性傳播疾病的危險(xiǎn)并且引起諸如泌尿道感染、盆腔炎性疾病和早產(chǎn)的并發(fā)癥。近來(lái)，控制這類(lèi)感染主要依賴于使用抗生素。但是，為了預(yù)防感染而過(guò)度使用抗生素可能有害，不僅因?yàn)樵黾恿水a(chǎn)生抗生素耐藥微生物的危險(xiǎn)，而且還因?yàn)椴患訁^(qū)別的殺滅泌尿生殖道內(nèi)有益的細(xì)菌會(huì)使其更容易被其它病原體感染。由此，越來(lái)越多觀點(diǎn)認(rèn)為包含抗生素的組合物不應(yīng)常規(guī)用來(lái)治療泌尿生殖道感染。
因此，需要尋找不使用會(huì)擾亂泌尿生殖道天然平衡的抗生素或要求嚴(yán)格的化學(xué)制劑的組合物和方法來(lái)預(yù)防泌尿生殖道感染。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及治療和抑制泌尿生殖道內(nèi)感染，例如陰道和泌尿道感染的組合物和方法。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含有效量的透明質(zhì)酸和能用于泌尿生殖道區(qū)域的藥學(xué)上可接受的賦形劑的組合物，其中該組合物可以抑制大腸桿菌或白色念珠菌(Candida albicans)粘附于哺乳動(dòng)物上皮細(xì)胞。
本發(fā)明還涉及治療哺乳動(dòng)物泌尿生殖道感染的方法，該方法包括將有效量的透明質(zhì)酸和能用于泌尿生殖道區(qū)域的藥學(xué)上可接受的賦形劑給藥至哺乳動(dòng)物泌尿生殖道，其中該組合物可以抑制大腸桿菌或白色念珠菌粘附于哺乳動(dòng)物上皮細(xì)胞。
在一些實(shí)施方案中，透明質(zhì)酸化合物的結(jié)構(gòu)通常如式I所示 其中n是約2至100,000的整數(shù)，n值可以不同。
而且，在許多實(shí)施方案中，一些透明質(zhì)酸的單個(gè)糖單元可具有很多取代基置換在透明質(zhì)酸制劑中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)的羥基(-OH)、羧酸根(-COO-)以及亞甲基羥基(-CH2-OH)取代基。一般說(shuō)來(lái)，透明質(zhì)酸化合物的確切類(lèi)型和化合物的大小可以變化以達(dá)到最佳的上皮細(xì)胞覆蓋和防護(hù)微生物感染。透明質(zhì)酸和其它聚合物的共聚物也在考慮之內(nèi)。例如，透明質(zhì)酸和其它糖類(lèi)聚合物的共聚物，和/或非糖類(lèi)聚合物例如聚(乙二醇)可以應(yīng)用于本發(fā)明的組合物和方法中。
本發(fā)明還提供將發(fā)明的組合物給藥至哺乳動(dòng)物陰道的注射器樣施藥器和棉塞本發(fā)明的組合物、方法和產(chǎn)品能治療的病原體包括細(xì)菌、酵母、真菌、滴蟲(chóng)(trichomonia)及其它寄生蟲(chóng)。本發(fā)明的化合物的有效量可以不同，但在一些實(shí)施方案中有效量的范圍可以是約從0.01毫克至500毫克。
附圖簡(jiǎn)述

圖1是說(shuō)明透明質(zhì)酸(HLA)預(yù)防大腸桿菌粘附于A431細(xì)胞的直方圖。分別用對(duì)照(PBS)、1mg/ml HLA或5mg/ml HLA處理細(xì)菌結(jié)合于A431細(xì)胞的培養(yǎng)物，采用2小時(shí)后540nm處的光密度作為結(jié)合的細(xì)菌數(shù)量的測(cè)量值。數(shù)據(jù)表示均數(shù)±SEM。每組N＝5。符號(hào)*表示與對(duì)照組相比有顯著差異(p＜0.05)。
圖2說(shuō)明透明質(zhì)酸(HLA)無(wú)論在1mg/ml還是在5mg/ml的劑量都不抑制大腸桿菌生長(zhǎng)。該圖繪制了大腸桿菌分別在PBS(對(duì)照)、1mg/ml HLA或5mg/ml HLA存在下培養(yǎng)時(shí)在540nm處的光密度作為時(shí)間函數(shù)的曲線圖。
圖3是說(shuō)明透明質(zhì)酸(HLA)預(yù)防白色念珠菌粘附于A431細(xì)胞的直方圖。分別用對(duì)照(PBS)、1mg/ml HLA或5mg/ml HLA處理A431細(xì)胞，然后使細(xì)胞暴露于白色念珠菌。數(shù)據(jù)表示每個(gè)培養(yǎng)孔內(nèi)酵母粘附于A431細(xì)胞的數(shù)量(均數(shù)±SEM)。*表示與對(duì)照組相比有顯著降低(p＜0.05)。
圖4顯示PBS處理的A431細(xì)胞的酵母菌落數(shù)量(左邊平板，對(duì)照)和透明質(zhì)酸處理的A431細(xì)胞的酵母菌落數(shù)量(右邊平板)。如圖所示，當(dāng)A431細(xì)胞用透明質(zhì)酸處理后出現(xiàn)的酵母菌落較少(右邊平板)。
圖5是一種注射器樣施藥器的示意圖，它可用于將透明質(zhì)酸組合物傳遞至哺乳動(dòng)物的陰道。該注射器樣施藥器由針筒20和帶有活塞頭40的活塞30組成。注射器樣施藥器還可以在活塞頭40的遠(yuǎn)端有一個(gè)密封阻擋層(barrier seal)60和位于活塞30和密封阻擋層60之間的空腔50?？涨?0包含有效量的透明質(zhì)酸化合物或其鹽。密封阻擋層60封閉了施藥器，使其在航運(yùn)和裝卸過(guò)程中保證組合物包含在施藥器內(nèi)。密封阻擋層60可以由使用者取下，或者可在使用者擠壓活塞時(shí)破裂。在使用時(shí)，將施藥器插入陰道并擠壓活塞30。這一作用力會(huì)將組合物推出施藥器并進(jìn)入陰道。
圖6是一種棉塞的示意圖，它可用于將透明質(zhì)酸組合物傳遞至哺乳動(dòng)物的陰道。該棉塞由含有透明質(zhì)酸化合物的管形物質(zhì)110和一根線120或其它用于取回或使棉塞在陰道內(nèi)定位的附屬物組成。
發(fā)明詳述泌尿生殖道感染通常是由于位于泌尿生殖道的微生物系統(tǒng)的類(lèi)型失衡引起，例如，某一類(lèi)型的細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)的陰道可被該類(lèi)細(xì)菌感染也更容易被其它類(lèi)型細(xì)菌、真菌及其它寄生蟲(chóng)感染。泌尿生殖道感染的發(fā)病機(jī)理中最初并且重要的一步是病原體粘附于泌尿生殖道(例如陰道)的上皮。本發(fā)明提供通過(guò)使用便宜的、容易獲得的活性化合物來(lái)抑制病原體粘附至泌尿生殖道上皮的組合物和方法。這些組合物和方法避免了對(duì)使用者的健康和生殖的影響尚未明了的強(qiáng)烈的化學(xué)物和非天然的物質(zhì)。使用這些組合物和方法改善了泌尿生殖道的微環(huán)境，減少出現(xiàn)在泌尿生殖道的病原體的數(shù)量并且預(yù)防過(guò)量病原體生長(zhǎng)及粘附于泌尿生殖道組織。
透明質(zhì)酸化合物透明質(zhì)酸(HLA)，也稱(chēng)為透明質(zhì)烷(hyaluronan)，是大量存在于滑膜液和細(xì)胞外基質(zhì)的天然多糖(Luo等，in Atala&Lanza eds.，組織工程方法(Methods in Tissue Engineering)，539-553頁(yè)，Academic Press，2002)。細(xì)胞外基質(zhì)的結(jié)構(gòu)和組織需要透明質(zhì)酸。透明質(zhì)酸因?yàn)榫哂袠O好的生物相容性及其它特性，已經(jīng)在醫(yī)學(xué)上得到多種應(yīng)用例如組織工程、藥物傳遞、外科手術(shù)及化妝品。
天然透明質(zhì)酸通常由200-10,000個(gè)重復(fù)的(β-1，4-)-連接的D-葡萄糖醛酸和(β-1，3-)-N-乙?；?D-葡萄糖胺的二糖單元組成。在一些實(shí)施方案中，透明質(zhì)酸化合物或其鹽的結(jié)構(gòu)通常如式I所示 其中n是約2-100,000的整數(shù)。這種透明質(zhì)酸化合物的鹽類(lèi)包括任何生理學(xué)上可接受的以現(xiàn)有技術(shù)可獲得的鹽。實(shí)例包括透明質(zhì)酸的鈉鹽、鈣鹽或鉀鹽。
雖然從天然來(lái)源分離的透明質(zhì)酸的分子量通常范圍是約從1×105至5×106道爾頓，但是本發(fā)明組合物所用的透明質(zhì)酸可以具有非常廣泛的分子量。例如，分子量可以約從1×103道爾頓至1×108道爾頓不等。因此，n值可以不同。例如，可以使用具有少至約2到6個(gè)單位(n＝約2到6)，少至約2到10個(gè)單位(n＝約2到10)，少至約3到20個(gè)單位(n＝約3到20)，少至約3到30個(gè)單位(n＝約3到30)，或者少至約4到100個(gè)單位(n＝約4到100)的透明質(zhì)酸化合物。本發(fā)明所用的透明質(zhì)酸化合物的二糖單元數(shù)量(n)的上限也可以不同。例如，可以使用具有多至約100到200個(gè)單位(n＝約100到200)，多至約100到500個(gè)單位(n＝約100到500)，多至約300到1000個(gè)單位(n＝約300到1000)，多至約300到10,000個(gè)單位(n＝約300到10,000)，或者多至約400到100,000個(gè)單位(n＝約400到100,000)的透明質(zhì)酸化合物。不同長(zhǎng)度的透明質(zhì)酸化合物的混合物也可以應(yīng)用于本發(fā)明的組合物和方法中。所以，可以調(diào)節(jié)本發(fā)明所用的透明質(zhì)酸化合物的長(zhǎng)度，以獲得對(duì)泌尿生殖道的最佳覆蓋或者使易于對(duì)哺乳動(dòng)物給藥的組合物的制備更加容易。
此外，在許多實(shí)施方案中，一些透明質(zhì)酸的個(gè)別糖單元可以有很多取代基置換在透明質(zhì)酸制劑中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)的羥基(-OH)、羧酸根(-COO-)、亞甲基羥基(-CH2-OH)以及N-乙?；?-NH-CO-CH3)取代基。例如，低級(jí)烷基部分可以置換本發(fā)明所用的透明質(zhì)酸化合物的羥基(-OH)、羧基(-COOH)和亞甲基羥基(-CH2-OH)取代基上的任何氫原子。氨基或低級(jí)烷基氨基基團(tuán)可以置換本發(fā)明所用的透明質(zhì)酸化合物的羥基(-OH)、羧基(-COOH)和亞甲基羥基(-CH2-OH)取代基上的任何OH基團(tuán)。硫酸根(-SO4-)可以置換本發(fā)明所用的透明質(zhì)酸化合物的羥基(-OH)、羧基(-COOH)和亞甲基羥基(-CH2-OH)取代基上的任何OH基團(tuán)。因此，可以代替式I所示的取代基或者除了式I所示的取代基之外的取代基還包括硫酸根(-SO4-)、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷酰氧基，和/或低級(jí)烷酰氨基烷基。其它修飾糖單元的實(shí)例和產(chǎn)生這樣的修飾糖單元的方法見(jiàn)Luo等，天然聚合物的修飾透明質(zhì)酸(Modification ofNatural PolymersHyaluronic Acid)，in Atala和Lanza，eds.，組織工程方法(Methods in Tissue Engineering)，539-553頁(yè)，Academic Pres，SanDiego(2002)。
在此處使用時(shí)，低級(jí)烷基意指(C1-C6)烷基。這樣的(C1-C6)烷基可以是甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、戊基、3-戊基或己基。優(yōu)選的低級(jí)烷基基團(tuán)是包括甲基、乙基、丙基、異丙基等的(C1-C3)烷基。低級(jí)烷氧基通常意指(C1-C6)烷氧基；例如，這樣的(C1-C6)烷氧基可以是例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、戊氧基、3-戊氧基或己氧基。低級(jí)羥基烷基是指附屬于低級(jí)烷基或低級(jí)亞烷基基團(tuán)的羥基基團(tuán)(例如-CH2-CH2-OH)。低級(jí)烷酰氧基是指(C2-C6)烷酰氧基，例如，乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、異丁酰氧基、戊酰氧基或己酰氧基。低級(jí)(C1-C6)烷酰氨基可以是，例如，乙酰氨基、丙酰氨基、丁酰氨基、異丁酰氨基、戊酰氨基或己酰氨基。
在有些實(shí)施方案中，透明質(zhì)酸化合物的一個(gè)或多個(gè)糖單元可以被不同類(lèi)型的糖單元置換。例如，用于本發(fā)明的組合物或方法的透明質(zhì)酸化合物可以具有一個(gè)或多個(gè)葡萄糖、葡萄糖醛酸、甘露糖、甘露糖醛酸、半乳糖、半乳糖醛酸、古洛糖、古洛糖醛酸、巖藻糖、木糖、N-乙酰神經(jīng)氨酸、N-乙酰葡萄糖胺或其它糖單元。交替的糖單元的數(shù)量因在本發(fā)明中所用的透明質(zhì)酸化合物的不同而不同。例如，不同的透明質(zhì)酸化合物可以有約0％至50％的交替的糖單元。在其它實(shí)施方案中，不同的透明質(zhì)酸化合物可以有約0％至40％，或約30％，或約20％，或約10％的交替的糖單元。具有不同取代基和糖單元的透明質(zhì)酸化合物的混合物也可以用于本發(fā)明的組合物和方法中。因此，雖然用于本發(fā)明的透明質(zhì)酸化合物可以有類(lèi)似如式I所描述的那樣的二糖單元，但是只要透明質(zhì)酸制劑能抑制病原體的結(jié)合，那么在制劑中存在的取代基和糖單元類(lèi)型的某些變化是可以接受的。因而，本發(fā)明的透明質(zhì)酸化合物可以具有不同取代基和糖單元，因而具有不同的長(zhǎng)度。
在其它的實(shí)施方案中，透明質(zhì)酸和其它聚合物的共聚物可以應(yīng)用于本發(fā)明的組合物和方法中。在一些實(shí)施方案中，聚合物是非多糖聚合物?？梢耘c透明質(zhì)酸一起使用的聚合物實(shí)例包括聚(乙二醇)/聚(環(huán)氧乙烷)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯基砒咯烷酮)和聚(2-羥乙基異丁烯酸酯)。這樣的聚合物可以與透明質(zhì)酸以共價(jià)鍵結(jié)合或者與透明質(zhì)酸簡(jiǎn)單結(jié)合形成混合的組合物。
根據(jù)本發(fā)明，透明質(zhì)酸化合物、共聚物及其鹽，與哺乳動(dòng)物泌尿生殖道細(xì)胞結(jié)合，因而抑制或預(yù)防病原體接觸人類(lèi)細(xì)胞/組織。術(shù)語(yǔ)“哺乳動(dòng)物”用于此處是指動(dòng)物，一般說(shuō)來(lái)，是指溫血?jiǎng)游?。哺乳?dòng)物包括牛、水牛、綿羊、山羊、豬、馬、狗、貓、兔、大鼠、小鼠及人。還包括其它家畜、家養(yǎng)的動(dòng)物和被俘獲的動(dòng)物。
透明質(zhì)酸化合物、共聚物或其鹽預(yù)防泌尿生殖道感染的有效量是指抑制病原體與哺乳動(dòng)物上皮細(xì)胞締合(例如結(jié)合)的數(shù)量。為了達(dá)到預(yù)期的抑制作用，該組合物可以以，例如，至少約0.001μg至約100至200mg，約0.01μg至約75至100mg，約0.1μg至約50至75mg或約1.0μg至約30至50mg的一個(gè)或多個(gè)透明質(zhì)酸化合物的劑量單次或分次給藥，即使其它劑量可能會(huì)帶來(lái)有益的效果。在某些實(shí)施方案中，劑量范圍可以從約1mg至約50mg不等。
本發(fā)明的組合物的日劑量也可以不同。這樣的日劑量的范圍可以為，例如，從約0.001mg/日至約500mg/日，從約0.01mg/日至約250mg/日，從約0.1mg/日至約120mg/日，從約0.1mg/日至約100mg/日，從約0.1mg/日至約75mg/日，從約0.1mg/日至約50mg/日的一個(gè)或多個(gè)透明質(zhì)酸化合物。
給藥量將取決于多種因素而變化，這些因素包括，但不僅限于，疾病、體重、身體狀況、健康、哺乳動(dòng)物年齡及預(yù)期達(dá)到預(yù)防感染或是治療感染的目的。臨床醫(yī)師通過(guò)使用動(dòng)物模型或其它本領(lǐng)域現(xiàn)有的測(cè)試系統(tǒng)可以很容易地確定這樣的因素。
人類(lèi)細(xì)胞表面存在數(shù)種透明質(zhì)酸的受體，例如CD44和RHAMM受體。見(jiàn)PCT申請(qǐng)WO 02/24223；Goodison等，J.Clin.PatholMol.Pathol(臨床病理學(xué)分子病理學(xué)雜志)，1999，52，189-196；Lesley等，Journal of Biological Chemistry(生物化學(xué)雜志)，2000，275，26967-26975；Lee&Spicer，Current Opinion in Cell Biology(細(xì)胞生物學(xué)的最新觀點(diǎn))，2000，12，581-586；Sackman&Bruisma，ChemPHysChem，2002，3，262-269。CD44受體是細(xì)胞表面粘附蛋白遍在表達(dá)家族。通常不表達(dá)CD44的細(xì)胞有其它類(lèi)似的受體。例如，淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞有可以結(jié)合透明質(zhì)酸的LYVE蛋白。
雖然本發(fā)明的透明質(zhì)酸化合物可以結(jié)合到這樣的受體上，但是本發(fā)明的組合物和方法的功效不必依賴這種結(jié)合。例如，雖然本發(fā)明的透明質(zhì)酸化合物預(yù)防大腸桿菌和白色念珠菌細(xì)胞粘附于哺乳動(dòng)物上皮細(xì)胞，但相信既不是大腸桿菌也不是白色念珠菌通過(guò)CD44受體結(jié)合到哺乳動(dòng)物上皮細(xì)胞上。因此，相信透明質(zhì)酸化合物預(yù)防病原體粘附的機(jī)制不是依賴于阻斷特別用于病原體附著的人類(lèi)細(xì)胞受體。作為替代，透明質(zhì)酸及其衍生物通?？梢哉掣接诩?xì)胞表面，形成一個(gè)自然屏障，從而預(yù)防病原體結(jié)合至細(xì)胞表面。
病原體病原體粘附于宿主組織細(xì)胞的一種機(jī)制是蛋白-糖的相互作用。例如，白色念珠菌對(duì)女性生殖道細(xì)胞的粘附包括真菌細(xì)胞表面的蛋白和上皮表面含巖藻糖的糖苷結(jié)合。泌尿道病原體大腸桿菌對(duì)泌尿道的粘附包括細(xì)菌的PapG粘附素及FimH粘附素與上皮細(xì)胞表面的糖殘基(例如，來(lái)自哺乳動(dòng)物細(xì)胞表面的糖脂的Gal(α1，4)Gal和甘露糖殘基)結(jié)合。沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis)對(duì)生殖道的粘附包括衣原體表面多糖(包含7-9個(gè)甘露糖殘基)與宿主細(xì)胞表面的甘露糖結(jié)合蛋白的結(jié)合。牛支原體(Mycoplasma bovis)對(duì)生殖道及泌尿道的粘附包括細(xì)菌表面蛋白和宿主細(xì)胞表面的唾液酸殘基的結(jié)合。腐生性葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)對(duì)泌尿道的感染包括細(xì)菌表面凝集素和宿主細(xì)胞表面的GalNac殘基的結(jié)合。細(xì)菌對(duì)宿主組織粘附的另一機(jī)制是通過(guò)非特異性結(jié)合，例如，在細(xì)菌和宿主細(xì)胞的多糖蛋白復(fù)合物層之間形成氫鍵及二價(jià)陽(yáng)離子介導(dǎo)的連接。好的抑制病原體粘附系統(tǒng)不僅預(yù)防病原體對(duì)陰道和泌尿道細(xì)胞表面的特異性結(jié)合，而且還預(yù)防非特異性結(jié)合。
根據(jù)本發(fā)明，任何病原體的粘附都可以被本發(fā)明的組合物及方法抑制。這樣的病原體可以是真菌、細(xì)菌、滴蟲(chóng)或其它寄生蟲(chóng)。念珠菌、細(xì)菌、衣原體(chlamydia)、滴蟲(chóng)對(duì)泌尿生殖道的粘附及淋病可以被抑制。
生殖道念珠菌病，通常被認(rèn)為是酵母感染，是由白色念珠菌引起的生殖道感染。遭受酵母感染痛苦的女性通常發(fā)展為外陰異常敏感、外陰搔癢及陰道分泌物增加，陰道壁覆蓋有白色干酪樣物質(zhì)，外陰紅腫。本發(fā)明的組合物及方法可以抑制白色念珠菌感染。
本發(fā)明的組合物及方法也可以抑制由細(xì)菌例如大腸桿菌、陰道加德菌(Gardnerella vaginalis)、牛支原體、人支原體(Mycoplasmahominus)、淋病奈瑟氏菌(Neisseria gonorrhoeae)、腐生性葡萄球菌等引起的細(xì)菌感染。
衣原體感染是由沙眼衣原體引起的性傳播的非淋病性感染。這些感染包括非淋病性尿道炎、粘液膿性宮頸炎及非特異性生殖道感染。典型地，受侵襲的個(gè)體出現(xiàn)陰道分泌物增加、排尿困難及有黃色、粘液膿性分泌物的宮頸炎。本發(fā)明的組合物及方法也可以抑制由沙眼衣原體引起的感染。
滴蟲(chóng)病由一種有鞭毛的厭氧性原生動(dòng)物陰道毛滴蟲(chóng)(Trichomonsvaginalis)引起。滴蟲(chóng)病伴隨有與外陰和大腿刺激、搔癢及疼痛相關(guān)的大量、黃綠色、泡沫狀陰道分泌物。陰道壁及宮頸表面可見(jiàn)點(diǎn)狀紅斑。本發(fā)明的組合物及方法也可以抑制由陰道毛滴蟲(chóng)引起的感染。
給藥給予本發(fā)明的組合物可以用于預(yù)防、治療和/或衛(wèi)生學(xué)等用途。這樣的給藥通常是局部的，特別用于泌尿生殖道上皮表面，尤其是泌尿生殖道粘膜表面。能用本發(fā)明的組合物及方法治療的泌尿生殖道上皮表面包括直腸的、尿道的、輸尿管的、陰道的、宮頸的、子宮等。在一些實(shí)施方案中，上皮表面是陰道的。
依據(jù)本發(fā)明的治療劑的給藥可以是單一劑量、多重劑量、持續(xù)或間斷給藥等方式，這取決于例如接受者的生理狀況、給藥目的是治療性還是預(yù)防性的及熟練的醫(yī)師所知的其它因素。為了預(yù)防泌尿生殖道疾病，本發(fā)明的組合物基本上在一段不確定的時(shí)間內(nèi)可以是持續(xù)給藥的，例如，在一生中規(guī)則的間歇期?？蛇x擇地，本發(fā)明的組合物可以在一段預(yù)先選擇好的時(shí)間內(nèi)或者以一系列間隔劑量持續(xù)給藥。通?？紤]局部給藥。
通過(guò)將活性成分混合至合適的濃度來(lái)制備組合物?？梢匀芜x地加入由本領(lǐng)域技術(shù)人員選擇的其它活性或非活性劑。一個(gè)單位劑量包含的某一活性劑的絕對(duì)重量可以有很大的變動(dòng)范圍。
本發(fā)明的組合物可以以產(chǎn)品或載體的形式給藥至泌尿生殖道，例如插入物(insert)、注射器樣施藥器、片劑、栓劑、陰道環(huán)、粉劑/滑石粉或其它固體、溶液、液體、噴霧劑、氣霧劑、灌洗液、軟膏劑、棉塞、泡沫劑、霜?jiǎng)⒛z劑、糊劑、微型膠囊劑、陰道海綿、陰道環(huán)、控制釋放制劑、持續(xù)釋放制劑或生物粘附凝膠劑(例如，粘膜粘附熱膠凝組合物(例如，見(jiàn)美國(guó)申請(qǐng)?zhí)?0/135805，于2002年4月30日提交，其通過(guò)引用結(jié)合到本文中)。
為了陰道內(nèi)給藥，治療劑可以配制成本領(lǐng)域所知的劑型以利直接應(yīng)用在陰道區(qū)域。有條件應(yīng)用于陰道的主要形式有，例如，霜?jiǎng)⑷閯?、凝膠劑、分散劑或微乳劑，或多或少增稠的洗劑、浸透的紗布?jí)|、軟膏劑、氣霧劑制劑(例如噴霧劑或泡沫劑)、霜?jiǎng)?、洗劑、糊劑、膠凍劑、噴霧劑及氣霧劑?？蛇x擇地，該組合物可以配制成粘附聚合物的一部分，例如聚丙烯酸脂或丙烯酸酯/乙酸乙烯基酯共聚物。
軟膏劑和霜?jiǎng)┛梢裕?，通過(guò)用加有合適的增稠的和/或膠凝劑的水或油性基質(zhì)來(lái)制備。洗劑可以用水或油性基質(zhì)制備而且通常還包含一個(gè)或多種乳化劑、穩(wěn)定劑、分散劑、懸浮劑、增稠劑或著色劑。液體噴霧劑通過(guò)加壓包，例如，通過(guò)特殊形狀的密封包方便地傳送?；钚越M合物也可以通過(guò)離子電滲療法傳遞，例如，如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,140,122、4,383,529或4,051,842種所公開(kāi)的方法。陰道配方制劑中的本發(fā)明的預(yù)防藥物重量的百分比取決于多種因素，但通常是制劑總重量的約0.01％至98％，而典型地是約0.1至90％重量。
本發(fā)明的藥物制劑可以包括作為任選成分的藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、增溶劑或乳化劑及本領(lǐng)域可以獲得的類(lèi)型的鹽。這樣的物質(zhì)的實(shí)例包括生理鹽水溶液例如生理緩沖鹽水溶液及水。在本發(fā)明藥物制劑中有用的載體和/或稀釋劑的具體的非限制性實(shí)例包括水及生理上可接受的緩沖鹽溶液例如pH約為4.5至5.5的磷酸鹽緩沖生理鹽水溶液。
而且，無(wú)論是用于所描述的疾病或是某些其它疾病，活性成分也可以與其它治療劑，例如，抗微生物劑、鎮(zhèn)痛劑、抗炎劑、維生素(例如，維生素B、C或E)、庫(kù)拉索蘆薈等聯(lián)合使用。
本發(fā)明還涉及一種控制或預(yù)防微生物感染的包裝好的藥用組合物例如藥劑盒或其它容器。該藥劑盒或容器裝有治療有效量的用于預(yù)防、控制或抑制微生物感染的藥用組合物及使用該藥用組合物以預(yù)防、控制或抑制微生物感染的使用說(shuō)明書(shū)。該藥用組合物包括能預(yù)防、控制或抑制陰道感染的治療有效量的本發(fā)明組合物。
此外，本發(fā)明提供一種能以控制方式釋放透明質(zhì)酸化合物的陰道插入物。這樣一種陰道插入物可以是能生物降解的或不能生物降解的。陰道插入物以適當(dāng)?shù)乃俾侍峁┏掷m(xù)釋放的活性成分來(lái)達(dá)到所需程度的抑制病原體粘附的作用。
在一些實(shí)施方案中，活性成分可以用油性基質(zhì)或軟膏配制從而形成陰道插入物。這類(lèi)制劑包含活性成分及以碳?xì)浠衔餅榛A(chǔ)的包含溶解的和/或懸浮的制菌劑/防腐劑和緩沖系統(tǒng)的半固體。這些基質(zhì)中的凡士林組分可以是從應(yīng)用了加入異丁烯、膠體二氧化硅或硬脂酸鹽的液狀石蠟(mineral oil)到固體石蠟的任何粘度的石蠟油。白色和黃色石蠟油就是這樣的系統(tǒng)的實(shí)例。這類(lèi)基質(zhì)可以通過(guò)將高度熔化的蠟經(jīng)融合作用摻入流體液狀石蠟或者通過(guò)在高溫下將聚乙烯加入液體石蠟而制成。聚硅氧烷(也稱(chēng)為硅酮)適用于這些基質(zhì)而且典型的粘度范圍是約0.5至106厘沲。優(yōu)選粘附于聚硅氧烷的有機(jī)實(shí)體是各自具有1至8個(gè)碳的低分子量的碳?xì)浠衔锊糠?，例如低?jí)烷基、低級(jí)鏈烯基、苯基和烷基取代的苯基及苯基(低級(jí))烷基，例如苯甲基。在這樣的部分中，每個(gè)低級(jí)烷基或鏈烯基基團(tuán)優(yōu)選地包含1至3個(gè)碳，例如二甲基硅硅氧烷聚合物。
吸收基質(zhì)可以與這樣的油性系統(tǒng)使用。除活性成分外，還可使用能乳化大量水的附加成分。可以形成油包水(w/o)的乳劑，其特征是外相是油狀的。防腐劑/制菌劑，例如對(duì)羥基苯甲酸酯、緩沖系統(tǒng)等可以與活性成分一起作為乳化水溶液加入這些基質(zhì)中。不同的添加劑可以作為乳化劑方便地單一或聯(lián)合使用，而它們包括但不僅限于膽固醇、羊毛脂(其包含膽固醇和膽固醇酯及其它乳化劑)、羊毛脂衍生物、蜂蠟、脂肪醇、羊毛蠟醇、低HLB(疏水物/疏脂物平衡)乳化劑及各種離子與非離子表面活性劑。
油包水(W/O)乳劑基質(zhì)可以應(yīng)用于發(fā)明的泌尿生殖道組合物及插入物。這些制劑可作為包括液體或霜?jiǎng)┑囊话阄栈|(zhì)的擴(kuò)充物(expansion)。它們可以通過(guò)將活性成分和油相成分的混合物、制菌劑/防腐劑及溶解或懸浮于其中的緩沖鹽并向其中加入水形成油包水乳劑來(lái)制備。
水包油(O/W)乳劑基質(zhì)也可以應(yīng)用于本發(fā)明的陰道組合物及插入物。這些系統(tǒng)是半固體乳劑、微乳劑或泡沫乳劑系統(tǒng)。通常這樣一種系統(tǒng)外觀呈“乳白色”。典型地，內(nèi)部的油相占組合物百分比的約10％至40％油重量而外相可能包含80％或更多的水。油相可能包含，但不限于，長(zhǎng)鏈醇(十六烷基醇、十八烷醇)、長(zhǎng)鏈酯(肉豆蔻酸酯、十六烷酸酯、硬脂酸酯)、長(zhǎng)鏈酸(棕櫚酸、硬脂酸)、植物和動(dòng)物油及各種各樣的蠟。它們可以用陰離子、陽(yáng)離子、非離子或兩性表面活性劑制備，或者特別用非離子表面活性劑的組合來(lái)制備。雖然以下實(shí)例是這些系統(tǒng)的示范，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解，本領(lǐng)域技術(shù)人員可對(duì)特殊成分進(jìn)行替代和添加或省略。
包含活性成分的泌尿生殖道插入物及栓劑可以是，例如，在體溫時(shí)具有熔化性質(zhì)的油狀物，或者是溶解在泌尿生殖道(例如陰道)液體中的聚乙二醇-基質(zhì)組合物。栓劑的附加基質(zhì)是甘油或甘油甘油酸酯化的明膠。
活性成分也可以用膠凝劑制備的緩沖凝膠來(lái)配制泌尿生殖道(例如陰道)插入物。這些膠凝劑的一些實(shí)例有纖維質(zhì)(cellulosics)、陽(yáng)離子聚合物、聚氧烷(polyoxyalkylenes)及羧基乙烯基聚合物。本發(fā)明制劑中使用的纖維質(zhì)包括，例如，甲基纖維素、羧甲基纖維素、羥乙基纖維素及羥丙基纖維素。本發(fā)明制劑中使用的陽(yáng)離子聚合物包括“聚季銨翁鹽-10(Polyquaternium-10”，一種羥乙基纖維素與三甲基銨取代的環(huán)氧化物反應(yīng)生成的聚季銨鹽等。本發(fā)明使用的聚氧烷包括羊毛脂的聚氧乙烯-聚氧丙烯酯及其衍生物。本發(fā)明制中使用的羧基乙烯基聚合物包括交聯(lián)丙烯酸聚合物，例如，購(gòu)買(mǎi)自O(shè)hio州Akron市B.F.Goodrich公司的指定為CARBOPOLTM的那些聚合物。
通過(guò)加入定時(shí)釋放的添加劑，例如本領(lǐng)域可獲得的聚合物結(jié)構(gòu)、基質(zhì)，可實(shí)現(xiàn)控制或持續(xù)釋放。例如，本發(fā)明的組合物也可以通過(guò)使用熱熔化擠壓產(chǎn)品，例如生物粘附熱熔化擠壓薄膜(例如，見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,375,963，其通過(guò)引用結(jié)合到本文中)來(lái)給藥。所述制劑可以包含交聯(lián)聚羧酸聚合物制劑，通常描述于授與Robinson的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,615,697(下文簡(jiǎn)稱(chēng)為“’697專(zhuān)利”)中，該文獻(xiàn)通過(guò)引用結(jié)合到本文中。一般說(shuō)來(lái)，這樣的制劑內(nèi)約80％的聚合物的單體包含至少一個(gè)羧基功能團(tuán)。交聯(lián)劑應(yīng)當(dāng)以相當(dāng)以提供足夠的粘附的量存在，以便使該系統(tǒng)能在有效時(shí)間內(nèi)保持粘附于靶上皮表面來(lái)實(shí)現(xiàn)透明質(zhì)酸的預(yù)期釋放。
泌尿生殖道插入物包含聚合物的混合物或包衣，使得活性劑在一段延長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)以恒定的速率釋放。在一些實(shí)施方案中，，泌尿生殖道(例如陰道)插入物包含水溶性細(xì)孔形成劑，例如可以與不溶于水的聚合物混合的聚乙烯二醇(PEG)來(lái)增加插入物的耐用性及延長(zhǎng)活性成分的釋放。這樣的水溶性細(xì)孔形成劑可以是聚乙二醇、聚丙二醇、糖(乳糖、蔗糖、葡萄糖等)的混合物或聚合物、鹽、poluoxamers s、羥丙基纖維素、聚乙烯醇及其它水溶性食物級(jí)和其它賦形劑。
當(dāng)PEG用作細(xì)孔形成劑時(shí)，PEG的分子量范圍從約200至20,000，或者，從約400至8,000。例如，使用分子量約為540至8,000的PEG。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PEG的分子量約為1,000至8,000。本發(fā)明的制劑中用于包衣的PEG的分子量取決于PEG形成包衣薄膜的能力，該包衣薄膜是非粘性的、有足夠的強(qiáng)度及產(chǎn)生出足夠的細(xì)孔大小，以便在體外或體內(nèi)都能在預(yù)期時(shí)間段內(nèi)控制活性成分的釋放。
細(xì)孔形成劑以有效調(diào)節(jié)透明質(zhì)酸化合物按所需速率釋放的量用于發(fā)明的制劑中。優(yōu)選地，有效量的細(xì)孔形成劑提供活性劑的長(zhǎng)期傳遞，從而增加持續(xù)釋放的插入物或植入物的有效期。細(xì)孔形成劑的有效量取決于所需速率和釋放持續(xù)時(shí)間和在包衣過(guò)程中形成持續(xù)的微孔薄膜的能力。為了能夠釋放更長(zhǎng)的時(shí)間，可使用更高分子量的PEG。例如，當(dāng)PEG 8000的使用濃度在10至50％時(shí)，可以提供時(shí)間超過(guò)100天的釋放，優(yōu)選使用從20至45％且最優(yōu)選使用從30至45％的濃度。在此PEG濃度用每單位干燥重量主要成分(basis)的％重量表示并代表在干燥后包衣薄膜中PEG的濃度。同樣地，包衣薄膜的厚度從5至50μm，優(yōu)選10至30μm且最優(yōu)選從15至25μm。
根據(jù)體外及體內(nèi)的研究，活性劑的溶解率和加入到包衣薄膜的細(xì)孔形成劑的量之間存在很好的相關(guān)性。根據(jù)所需釋放的長(zhǎng)度，PEG濃度范圍可以按需要調(diào)整。例如，包衣的插入物在體內(nèi)的持續(xù)時(shí)間可以從活性劑在120小時(shí)時(shí)間點(diǎn)的體外溶出率簡(jiǎn)單預(yù)測(cè)出來(lái)。
本發(fā)明的泌尿生殖道(例如陰道)插入物也可以包含水溶性聚合物。這樣的聚合物的實(shí)例有乙基纖維素、丙烯酸樹(shù)脂、異丁烯酸和丙烯酸乙酯的共聚物、聚乳酸、PLGA、聚氨基甲酸酯、聚乙烯乙酸乙烯酯共聚物、聚苯乙烯-丁二烯共聚物及硅酮橡膠或它們的混合物。例如，可以使用以商品名Aquacoat(乙基纖維素水分散體)ECD30和Eugragit(丙烯酸樹(shù)脂)RS30和NE30(注冊(cè)商標(biāo)Rhom Tech，Inc.)售出的聚合物。
適合用于本發(fā)明的聚合物為能夠在噴霧和干燥過(guò)程中用細(xì)孔形成劑形成連續(xù)的包衣薄膜的聚合物。在植入期間控制由這樣一種聚合物制備的薄膜的速率是非常穩(wěn)定的。薄膜應(yīng)當(dāng)具備足夠的強(qiáng)度才經(jīng)受得住撕拉和內(nèi)部滲透壓，并且具有在植入的整個(gè)有效期間不膨脹和水化的穩(wěn)定性。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的包衣制劑通常是對(duì)含有壓縮成固體的活性成分的顆粒狀物、生物可降解的插入物進(jìn)行包衣，然后給藥來(lái)抑制感染。
也可以使用聚合物制劑來(lái)提供控制釋放或持續(xù)釋放。可以通過(guò)改變聚合物內(nèi)交聯(lián)劑的量調(diào)整這樣一種聚合物制劑來(lái)控制透明質(zhì)酸的釋放率。合適的交聯(lián)劑包括二乙烯基乙二醇(divinyl glycol)、二乙烯基苯、N，N-二烯丙基丙烯酰胺、3，4-二羥基-1，5-己二烯、2，5-二甲基-1，5-己二烯及類(lèi)似的物質(zhì)。
用于這樣的制劑中的聚合物的實(shí)例之一是聚卡波非(polycarbophil)，U.S.P.，其可購(gòu)自O(shè)hio州Cleveland市的B.F.Goodrich特制聚合物，商品名為NOVEONTM-AA1。美國(guó)藥典，1995版，UnitedStates Pharmacopeial Convention，Inc.(美國(guó)藥典協(xié)會(huì)，Inc.)，Rockville，Md.，1240-41頁(yè)，指出聚卡波非是一種與二乙烯乙二醇交聯(lián)的聚丙烯酸。
可以用于這樣的藥物傳遞系統(tǒng)制劑的其它有用的生物粘附聚合物在美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,615,697中提及。例如，這些聚合物包括與3，4-二羥基-1，5-己二烯交聯(lián)的聚丙烯酸聚合物，及與二乙烯基苯交聯(lián)的聚異丁烯酸聚合物。典型地，這些聚合物不以它們的鹽形式使用，因?yàn)檫@樣會(huì)降低它們的生物粘附能力。這樣的生物粘附聚合物可以利用引發(fā)劑例如苯甲?；^(guò)氧化物、偶氮二異丁腈等通過(guò)常規(guī)的自由基聚合技術(shù)制備?！?97專(zhuān)利提供了有用的生物粘附劑示例性制劑。
對(duì)于陰道給藥，所述制劑優(yōu)選地保持至少約8至48小時(shí)粘附于上皮表面。通過(guò)經(jīng)不同的時(shí)間段測(cè)試來(lái)自使用透明質(zhì)酸的陰道的樣本可以在臨床上測(cè)量這樣的結(jié)果。這樣的生物粘附可以通過(guò)使用占聚合物約0.1至6.0重量百分比的交聯(lián)劑用生物粘附聚合物來(lái)獲得，一些實(shí)施方案中，交聯(lián)劑用生物粘附聚合物占約1.0至2.0重量百分比，以達(dá)到合適的生物粘附水平。生物粘附也可以通過(guò)可購(gòu)買(mǎi)得到的測(cè)量膠粘強(qiáng)度的表面張力計(jì)來(lái)測(cè)量。
所述制劑可以為凝膠劑、霜?jiǎng)?、片劑、丸劑、膠囊劑、栓劑、薄膜的形式或任何其它可耐受粘液且不容易被沖洗掉的藥學(xué)上可接受的形式。不同的制劑在美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,615,697中有更詳細(xì)的描述，其通過(guò)引用結(jié)合到本文中。
對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)顯而易見(jiàn)的是，可以改變制劑的組分來(lái)影響制劑的某些特性。例如，可以通過(guò)改變透明質(zhì)酸濃度或加入聚合物或凝膠成形劑來(lái)改變粘度。在一些實(shí)施方案中，可以包括不同濃度的生物粘附聚合物來(lái)提供更強(qiáng)的或更弱的生物粘附。利用pH敏感的生物粘附劑，以便在特定pH值時(shí)有更大的釋放(例如更高的pH值預(yù)示感染)。生物粘附組合物的一個(gè)有用方面是即使在月經(jīng)期也能有效給藥。特殊的生物粘附特性預(yù)防該組合物被稀釋或沖洗掉，從而提高本制劑的效用。
本發(fā)明的液體組合物可以從吸收材料給藥，例如棉塞或海綿，或作為噴霧劑/氣霧劑(使用泵型或氣霧噴霧器應(yīng)用于受累區(qū)域)。已加入本發(fā)明的陰道內(nèi)組合物的棉塞的用途是有益的，因?yàn)榧词顾赡鼙辉陆?jīng)血液或其它陰道分泌物持續(xù)地帶走，該組合物也能緩慢及持續(xù)地釋放。
將組合物以溶液的形式提供，開(kāi)始時(shí)可能是以濃縮的液體形式提供，或者作為可溶解的粉劑、片劑或在使用前需要加水、鹽水或其它適合的稀釋劑的類(lèi)似形式，以使該組合物能作為陰道灌洗液給藥。
本發(fā)明的固體組合物可以通過(guò)任何方式應(yīng)用，包括使用施藥器或由病人自行插入。例如，可以使用施藥器，例如應(yīng)用于陰道產(chǎn)物的可獲得的擠壓型或活塞型施藥器可以將霜?jiǎng)?、洗劑、栓劑、泡沫劑、糊劑、軟膏劑、凝膠劑、片劑或棉塞應(yīng)用于陰道。組合物作為栓劑給藥是有利的，因?yàn)樗峁┝吮憷?、方便?yīng)用、增加安全性和/或干凈。組合物作為具有較低的表面張力的霜?jiǎng)┙o藥是有利的，因?yàn)樗峁┯兄诮M合物滲透進(jìn)陰道隱窩和宮頸的均勻的濕化作用，因而可用作濕潤(rùn)劑。
此外，為了傳遞系統(tǒng)最大的或預(yù)期的功效或?yàn)榱嘶颊叩氖孢m，可以將添加劑與制劑混合。這樣的添加劑包括，例如，潤(rùn)滑劑、增塑劑、防腐劑、凝膠成形劑、片劑成形劑、丸劑成形劑、栓劑成形劑、薄膜成形劑、霜?jiǎng)┏尚蝿⒈澜鈩?、包衣劑、粘合劑、賦形劑、著色劑、味道和/或氣味控制劑、保濕劑、粘度控制劑、pH調(diào)節(jié)劑及類(lèi)似的物質(zhì)。
一種需要的實(shí)施方案提供了在注射器樣施藥器(也稱(chēng)為泵型或注射器樣施藥器(見(jiàn)圖5))中的本發(fā)明組合物。例如，包含有透明質(zhì)酸的組合物可以被放置于注射器樣施藥器針筒20內(nèi)的空腔50中。空腔遠(yuǎn)端用密封阻擋層60封閉而近端用活塞頭40封閉。密封阻擋層60封閉了施藥器并且在航運(yùn)和裝卸過(guò)程中使組合物保存在施藥器內(nèi)。然而，密封阻擋層60可以由使用者取下或者在使用者擠壓活塞30時(shí)會(huì)破裂。使用時(shí)，將施藥器插入陰道并且擠壓活塞30。這一作用力會(huì)將組合物推出施藥器并進(jìn)入陰道。
另一個(gè)需要的實(shí)施方案提供了與棉塞結(jié)合的本發(fā)明組合物(圖6)。例如，將透明質(zhì)酸應(yīng)用于棉塞物質(zhì)110作為一種溶液，然后用纖維干燥。或者，透明質(zhì)酸可以與持續(xù)釋放的物質(zhì)(例如聚合物)和/或載體混合，然后成形為棉塞樣制品(例如圖6所示)以應(yīng)用至陰道部位?？衫靡桓€(120；圖6)或其它方便附著及取回的裝置，以便容易取處棉塞。施藥器及棉塞以消毒的方式制備，或者包裝后消毒。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供了包含粘膜粘附材料例如羧甲基纖維素(任選與熱膠凝粘膜粘附劑混合)的水性凝膠，該凝膠與透明質(zhì)酸混合從而形成發(fā)明的組合物。一個(gè)附加的實(shí)施方案提供了透明質(zhì)酸聚合微粒的膠囊化。一旦回到原位(in situ)，聚合物就溶解并且釋放透明質(zhì)酸。在這種情況下，透明質(zhì)酸的釋放可以通過(guò)微?？刂?，以提供所需產(chǎn)物的延長(zhǎng)生成(例如，持續(xù)釋放)。傳遞介質(zhì)不限于在陰道內(nèi)使用，還可以用于需要傳遞透明質(zhì)酸的廣泛的生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用。此處所述的傳遞介質(zhì)的適當(dāng)修飾在本領(lǐng)域技術(shù)人員的技能范圍內(nèi)。
此外，組合物和/或傳遞此類(lèi)可以包含附加的能改善陰道環(huán)境的有益物資。例如，用作載體或用于膠囊化或用于持續(xù)釋放的聚合物可以按水解方法降解為酸或產(chǎn)酸的種類(lèi)。一種這樣的聚合物是帶有聚已內(nèi)酯(polycaprolactone)側(cè)鏈的聚(乙烯醇)主鏈，其經(jīng)分解后產(chǎn)生聚[乙烯(聚己酸酯)]。聚己內(nèi)酯經(jīng)水解降解為己酸。這種酸有助于降低pH并且控制有害細(xì)菌生長(zhǎng)，從而幫助恢復(fù)陰道系統(tǒng)的平衡。此外，這種材料可熔化處理并且能夠形成一種控制透明質(zhì)酸傳遞的系統(tǒng)。另外，聚乙二醇單十二醚(Laureth-4)的過(guò)氧化物(例如，聚乙二醇單十二醚-4末端過(guò)氧化物)可以釋放聚乙二醇單十二醚-4和過(guò)氧化物(例如過(guò)氧化氫)。聚乙二醇單十二醚-4減少金黃色葡萄球菌(S.aureus)產(chǎn)生TSS-1而過(guò)氧化物可以抑制不良的厭氧菌和陰道加德菌，從而減少陰道菌群重建過(guò)程中的毒性產(chǎn)物。
實(shí)施例進(jìn)一步本說(shuō)明發(fā)明的某些方面并且不以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1透明質(zhì)酸對(duì)大腸桿菌粘附于上皮細(xì)胞的作用本實(shí)施例說(shuō)明大腸桿菌減少了對(duì)含有透明質(zhì)酸的基質(zhì)的粘附。大腸桿菌導(dǎo)致80％的泌尿道感染。大腸桿菌在陰道的定居通常與上行性泌尿道感染的發(fā)展相關(guān)，這種感染會(huì)發(fā)生在10％-20％女性一生當(dāng)中的某個(gè)時(shí)候，而每年的治療支出費(fèi)用為30億美元。而且，大腸桿菌在陰道的定居，和B群鏈球菌一樣，也是新生兒腦膜炎的主要病因。因?yàn)殛幍篮兔谀虻栏腥驹谑状伟l(fā)作后的復(fù)發(fā)都很常見(jiàn)，所以預(yù)防這樣的感染很重要。
材料和方法用培養(yǎng)的A431細(xì)胞作為陰道上皮模型。A431細(xì)胞從美國(guó)細(xì)胞類(lèi)型培養(yǎng)中心獲得，目錄#CRL-1555。使單層A431細(xì)胞在24孔組織培養(yǎng)板上生長(zhǎng)直至其融合。
將帶有P家族菌毛的大腸桿菌，ATCC 53505在胰蛋白酶解酪蛋白大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)中培養(yǎng)過(guò)夜。將磷酸鹽緩沖液(PBS，對(duì)照)或濃度為1mg/ml或5mg/ml透明質(zhì)酸(Sigma目錄#H1876)的PBS溶液加入A431細(xì)胞層中，容積為1.2ml/孔。在37℃培養(yǎng)30分鐘后，從孔內(nèi)取出0.7ml溶液并加入0.5ml細(xì)菌懸浮液。應(yīng)用的細(xì)菌懸浮液在540nm的光密度是1.0。60分鐘后，除去每孔中的上清液并用PBS充分沖洗各孔以除去所有未結(jié)合的細(xì)菌。然后加入胰蛋白酶解酪蛋白大豆肉湯培養(yǎng)基至孔內(nèi)，將整個(gè)系統(tǒng)在37℃振蕩培養(yǎng)2小時(shí)。檢測(cè)細(xì)菌懸浮液在540nm的光密度以測(cè)定細(xì)菌濃度。
所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±SEM表示并且用單因素方差分析(ANOVA)及Tukey-Kramer多重比較檢驗(yàn)來(lái)分析。p＜0.05水平時(shí)考慮差異有顯著性。
結(jié)果圖1說(shuō)明大腸桿菌粘附測(cè)試的結(jié)果。濃度為5mg/ml的透明質(zhì)酸明顯抑制粘附于A431細(xì)胞的大腸桿菌的數(shù)量。濃度為1mg/ml的透明質(zhì)酸對(duì)大腸桿菌粘附的作用較小。這一結(jié)果重復(fù)兩次并且每次獲得的作用相似。
實(shí)施例2透明質(zhì)酸對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)的作用本實(shí)施例說(shuō)明大腸桿菌對(duì)A431細(xì)胞粘附的減少并不是因?yàn)橥该髻|(zhì)酸對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)的抑制作用。
材料和方法為了測(cè)試透明質(zhì)酸是否能影響細(xì)胞生長(zhǎng)，將大腸桿菌，ATCC53505細(xì)胞在胰蛋白酶解酪蛋白大豆肉湯中培養(yǎng)過(guò)夜。然后將培養(yǎng)基稀釋至光密度為0.1并將透明質(zhì)酸(1mg/ml或5mg/ml)的PBS液與大腸桿菌懸浮液培養(yǎng)。還要制備包含用PBS處理的大腸桿菌懸浮液的對(duì)照。在37℃將測(cè)試的和對(duì)照的細(xì)胞振蕩培養(yǎng)并且測(cè)量加入透明質(zhì)酸或PBS后1、2及3小時(shí)細(xì)菌懸浮液在540nm的光密度。
所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±SEM表示并且用單因素方差分析(ANOVA)及Tukey-Kramer多重比較檢驗(yàn)來(lái)分析。p＜0.05水平時(shí)考慮差異有顯著性。
結(jié)果透明質(zhì)酸對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)作用的結(jié)果如圖2所示。正如圖2所說(shuō)明的，無(wú)論哪種透明質(zhì)酸溶液對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)都沒(méi)有任何作用。暴露于PBS(對(duì)照)的大腸桿菌在實(shí)驗(yàn)條件下生長(zhǎng)良好。這些對(duì)照細(xì)胞的生長(zhǎng)與暴露于1mg/ml或5mg/ml透明質(zhì)酸的細(xì)胞的生長(zhǎng)相似。這些數(shù)據(jù)表明在實(shí)施例1及圖1中所顯示的對(duì)大腸桿菌粘附于A431細(xì)胞的抑制不是因?yàn)橐种屏思?xì)菌細(xì)胞生長(zhǎng)。
實(shí)施例3透明質(zhì)酸對(duì)白色念珠菌粘附于A431細(xì)胞的作用本實(shí)施例說(shuō)明透明質(zhì)酸抑制白色念珠菌對(duì)哺乳動(dòng)物上皮細(xì)胞的粘附。白色念珠菌是引起陰道炎最常見(jiàn)的病原體。因此，使用透明質(zhì)酸可以抑制白色念珠菌在哺乳動(dòng)物陰道的定居。
材料和方法白色念珠菌，ATCC 10231，開(kāi)始時(shí)是蛋白胨/葡萄糖培養(yǎng)基內(nèi)冰凍的珠，實(shí)驗(yàn)前將其在37℃振蕩培養(yǎng)3天。使單層A431細(xì)胞，、ATCCCRL-1555在24孔組織培養(yǎng)板上生長(zhǎng)直至其融合。將濃度為1mg/ml的PBS或5mg/ml的PBS加入孔內(nèi)(1.2ml/孔)，培養(yǎng)板在35℃培養(yǎng)30分鐘。還要制備融合A431細(xì)胞的對(duì)照培養(yǎng)板，即接受了1.2ml/孔PBS而沒(méi)有透明質(zhì)酸。培養(yǎng)30分鐘后，從孔內(nèi)取出0.7ml溶液并加入0.5ml酵母懸浮液(1×106cfu/ml)。培養(yǎng)2小時(shí)后，除去孔內(nèi)的上清液并用PBS充分沖洗各孔以除去所有未結(jié)合的酵母。然后，每孔中加入0.2ml0.25％胰蛋白酶/EDTA，將培養(yǎng)板在35℃培養(yǎng)15分鐘。在培養(yǎng)基內(nèi)加入1ml 10％胎兒小牛血清終止胰蛋白酶消化。將胰蛋白酶消化的細(xì)胞/酵母懸浮液離心并再次懸浮在1ml培養(yǎng)基中。將白色念珠菌/A431細(xì)胞懸浮液的系列稀釋液加入Sabouraud右旋糖瓊脂培養(yǎng)板中并且在35℃培養(yǎng)過(guò)夜。讀取每板的菌落數(shù)并計(jì)算每板粘附于細(xì)胞的酵母數(shù)。
所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±SEM表達(dá)并且用單因素方差分析(ANOVA)及Tukey-Kramer多重比較檢驗(yàn)來(lái)分析。p＜0.05考慮差異有顯著性。
結(jié)果圖3概括了獲得的關(guān)于透明質(zhì)酸對(duì)白色念珠菌粘附A431細(xì)胞的作用的數(shù)據(jù)。如圖3所示，5mg/ml透明質(zhì)酸的存在明顯抑制了粘附A431細(xì)胞的白色念珠菌數(shù)量，但是在較小濃度1mg/ml透明質(zhì)酸時(shí)，這種作用不是那么明顯。重復(fù)本實(shí)驗(yàn)獲得的結(jié)果是相似的。圖4進(jìn)一步說(shuō)明這種作用，顯示來(lái)自PBS處理的A431細(xì)胞(對(duì)照)的酵母菌落數(shù)量明顯多于來(lái)自透明質(zhì)酸處理的A431細(xì)胞的酵母菌落數(shù)量。
所以此處提供的結(jié)果表明透明質(zhì)酸有效地抑制白色念珠菌和大腸桿菌對(duì)A431細(xì)胞的粘附。這種細(xì)胞系已經(jīng)被廣泛地用作體外人類(lèi)上皮細(xì)胞模型。透明質(zhì)酸對(duì)細(xì)菌/細(xì)胞粘附的抑制作用不是由抑制細(xì)菌生長(zhǎng)引起。
參考文獻(xiàn)1.PR Murray，KS Rosenthal，GS Kobayashi和MA Pfaller，MedicalMicrobiology(醫(yī)學(xué)微生物學(xué))(第4版),Mosby，St.Louis，2002。
2.AA Salyers和DD Whitt，Bacterial Pathogenesis(細(xì)菌的致病機(jī)制)(第二版)，ASM Press，Washington DC，2002。
3.MW Hornef，MJ Wick，M Shen和S Normark，Bacterial strategies forovercoming host innate and adaptive immune response(克服宿主先天性及適應(yīng)性免疫應(yīng)答的細(xì)菌策略)，Nature Immunology(自然免疫學(xué))，2002，3，1033-1040。
4.WL Chafein，JL Lopez-Ribot，M Casanova，D Gozalbo和JP Martinez，Cell wall and secreted protein of Candida albicansidentification，function and expression(白色念珠菌的細(xì)胞壁和分泌蛋白鑒定、功能及表達(dá))，Microbiology and Molecular Biology Reviews(微生物學(xué)和分子生物學(xué)綜述)，1998，62，130-180。
5.D Petrin，K Delgaty，R Bhatt和G Garber，Clinical and microbiologicalaspects of Trichomonas vaginalis(陰道毛滴蟲(chóng)的臨床及微生物學(xué)方面)，Clinical Microbiology Reviews(臨床微生物學(xué)綜)，1998，11，300-317。
6.MW Cunningham，Pathogenesis of group A Streptococcal infections(A群鏈球菌的致病機(jī)制)，Clinical Microbiology Review(臨床微生物學(xué)綜述)，2000，13，470-511。
7.I Muhldorfer，W Ziebuhr和J Kacker，Escherichia coli in urinary tractinfections(泌尿道感染的大腸桿菌)，in M Sussman edited MolecularMedical Microbiology(在M Sussman編輯的分子醫(yī)學(xué)微生物)，第81章，Academic Press，San Diego，2001。
8.S Mobastery和EF Azucena Jr.，Bacteria antibiotic resistance(細(xì)菌的抗生素耐藥性)，in Encyclopedia of Life Sciences(生命科學(xué)百科全書(shū))，Nature Publishing Group，2002。
9.C Walsh，Molecular mechanisms that confer antibacterial drugresistance(比較抗菌藥物耐藥性的分子機(jī)制)，Nature，2000，406，775-781。
10.M Shnayerson，The killer bug(病菌殺手)，F(xiàn)ortune(工業(yè)版)，2002，146(6)，149-156。
11.SJ Hultgren，CH Jones和S Normark，Bacterial adhesins and theirassembly(細(xì)菌粘附素及其集落)，in FC Neidhardt(主編)，Escherichia coli and Salmonella(大腸桿菌和沙門(mén)氏菌)，2730-2756頁(yè)，ASM Press，1996。
12.H Connell，W Agace，M Hedlund，P Klemm，M.Shembri和CSvanborg，F(xiàn)imbriae-mediated adherence induces mucosalinflammation and bacterial clearance(菌毛介導(dǎo)的粘附引發(fā)粘膜的炎癥和細(xì)菌的清除)，in Khane和Ofek edited Toward Anti-adhesionTherapy for Microial Diseases(在Khane和Ofek編輯的對(duì)細(xì)菌引起的疾病的抗粘附治療)，73-80頁(yè)，Plenum Press，1996。
13.N Sharon，Bacterial lectins，cell-cell recognition and infection diseases(細(xì)菌凝集素，細(xì)胞-細(xì)胞識(shí)別和感染疾病)，F(xiàn)EBS Lett.，1987，217，145-157。
14.I Ofek和N Sharon，Adhesins as lectins；specificity and role ininfection(作為凝集素的粘附素在感染中的特異性和作用)，CurrentTopics in Microbiology and Immunology(微生物學(xué)和免疫學(xué)的最新主題)，1990，151，91-113。
15.M Mammen，SK Choi和GM Whitesides，Polyvalent interactions inbiological systemsimplications for design and use of multivalentligands and inhibitors(生物學(xué)系統(tǒng)的多價(jià)反應(yīng)對(duì)設(shè)計(jì)和使用多價(jià)配基和抑制劑的影響)，Angew.Chen.Intl.Ed.，1998，37，2754-2794。
16.D Zopf和S Roth，Oligosaccharide anti-infective agents(寡糖抗感染劑)，Lancet，1996，347，1017-1021。
17.A Varki，Biological roles of oligosaccharidesall of the theoties arecorrect(寡糖的生物學(xué)作用所有理論都正確)，Glycobiology，1993，3，97-130。
18.RG Carson，A Hung，KM S chiling和SR Wu，Oral hygienecompositions containing glyceroglycolipids as antiplaques compounds(包含有以甘油糖脂作為抗斑化合物的口服保健組合物)，美國(guó)專(zhuān)利5,409,902，1991年12月31日提交.)
19.A Gaffar，R Gibbsons和S Tylewska，Glycoconjugate inhibition ofStreptococcus pyrogens adhesion(鏈球菌熱原體粘附的配糖體抑制)，美國(guó)專(zhuān)利5,401,723，1992年12月2日提交。
20.DA Zopf，OM Simon，S Roth，EJ McGuire和DH Langer，Method forinhibiting H.Pylori infection in mammalian tissue(抑制幽門(mén)螺旋桿菌感染哺乳動(dòng)物組織的方法)，美國(guó)專(zhuān)利5,883,079，1998年5月12日提交。
21.A Gaffar，RJ Gibbsons和S Tylewksa，Oligosaccharide inhibition ofStreptococcus pyrogens adhesion(鏈球菌熱原體粘附的寡糖抑制作用)，美國(guó)專(zhuān)利5,002,759，1989年7月25日提交。
22.PA Mardh和S Svensson，Therapeutic treatment employingoligosaccharides(應(yīng)用寡糖的治療處理)，美國(guó)專(zhuān)利4,665,060，1983年3月22日提交。
23.GP Kallenius，KA Lunblad，NR Mollby，SB Svesson和J Winberg，美國(guó)專(zhuān)利4,762,824，1986年8月1日提交。
24.Y Luo，KR Kirker和GD Prestwich，Modification of natural polymershyaluronic acid(天然聚合物的修飾透明質(zhì)酸)，in Atala和Lanzaeds.，Methods in Tissue Engineering(組織工程方法)，539-553頁(yè)，Academic Press，2002。
25.MR Wessels和C Cywes，Prevention and treatment of streptococcaland staphylococca infection(鏈球菌和葡萄球菌感染的預(yù)防和治療)，PCT申請(qǐng)WO 02/24223，2001年9月21日提交。
26.S Goodison，V Urquidi和D Tarin，CD44 cell adhesion molecules(CD44細(xì)胞粘附分子)，J.Clin.PatholMol.Pathol.(臨床病理分子病理期刊)，1999，52，189-196。
27.J Lesley，VC Hascall，M Tammi和R Hyman，Hyaluronan binding tocell surface CD44(結(jié)合到細(xì)胞表面CD44的透明質(zhì)烷)，Journal ofBiological Chemistry(生物化學(xué)期刊)，2000，275，26967-26975。
28.JY Lee和AP Spicer，Hyaluronana multifunctional，megaDalton，stealth molecule(透明質(zhì)烷一種多功能、兆道爾頓、隱秘分子)，Current Opinion in Cell Biology(細(xì)胞生物學(xué)的最新觀點(diǎn))，2000，12，581-586。
29.E Sackman和RF Bruisma，Cell adhesion as wetting transition？(細(xì)胞粘附作為濕化轉(zhuǎn)換？)，ChemPhysChem，2002，3，262-269。
30.Y Cho和HY Choi.Opportunistic fungal infection among cancerpatients.A ten year autopsy study(癌癥病人中的機(jī)會(huì)性真菌感染，一項(xiàng)十年尸檢研究).Am.J.Clin.Pathol.1991，72617-621。
31.G.Reid.Probiotics for urogenital health(泌尿生殖道健康的前生命學(xué)).Nutr Clin Care，2002，5(1)，3-8。
32.YH An和RJ Friedman，Concise review of mechanisms of bacterialadhesion to biomaterial surfaces(細(xì)菌粘附至生物材料表面機(jī)制的簡(jiǎn)要綜述)，J.Biomed.Mater.Res(Appl.Biomater.)(生物醫(yī)學(xué)材料研究期刊(生物材料增刊))，1998，43，338-348。
33.Schoor RA，Anderson B，Klumpp DJ，Schaeffer.Secretory IGAdifferentially promotes adherence of type 1-pilliated Escherichia coli toimmortalized vaginal epithelial celllines(分泌性IGA區(qū)別地促進(jìn)1型-菌毛大腸桿菌對(duì)永生的陰道上皮細(xì)胞列的粘附).Urology2001；57556-561所有公開(kāi)和專(zhuān)利都通過(guò)引用結(jié)合到本文中，正如各自被引用而結(jié)合一樣。發(fā)明不僅限于所顯示和描述的確切細(xì)節(jié)，因?yàn)閼?yīng)該理解，可進(jìn)行許多改變和修飾，同時(shí)保持在本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種包含有效量的透明質(zhì)酸化合物或其鹽，和載體的組合物，其中所述組合物可以抑制大腸桿菌或白色念珠菌對(duì)哺乳動(dòng)物上皮細(xì)胞的粘附。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述組合物預(yù)防哺乳動(dòng)物泌尿生殖道中病原體的感染。
3.權(quán)利要求2的組合物，其中所述病原體是細(xì)菌、真菌或滴蟲(chóng)病原體。
4.權(quán)利要求2的組合物，其中所述病原體是白色念珠菌。
5.權(quán)利要求2的組合物，其中所述病原體是大腸桿菌。
6.權(quán)利要求1的組合物，其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽包含(β-1，4-)-連接的D-葡萄糖醛酸和(β-1，3-)-N-乙?；?D-葡萄糖胺。
7.權(quán)利要求1的組合物，其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽包含一個(gè)或多個(gè)葡萄糖、葡萄糖醛酸、甘露糖、甘露糖醛酸、半乳糖、半乳糖醛酸、古洛糖、古洛糖醛酸、巖藻糖、木糖、N-乙酰神經(jīng)氨酸或N-乙酰葡萄糖胺糖單元。
8.權(quán)利要求1的組合物，其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽與非多糖聚合物混合或與其共價(jià)連接。
9.權(quán)利要求8的組合物，其中所述非多糖聚合物是聚(乙二醇)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯吡咯烷酮)或聚(2-羥乙基異丁烯酸酯)。
10.權(quán)利要求1的組合物，其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽包含重復(fù)的式I的二糖單元 其中n是約2至約100,000的整數(shù)。
11.權(quán)利要求10的組合物，其中低級(jí)烷基置換了一個(gè)或多個(gè)式I的二糖單元中的羥基(-OH)、羧基(-COOH)和亞甲基羥基(-CH2-OH)取代基上的任何氫原子。
12.權(quán)利要求10的組合物，其中氨基、硫酸根或低級(jí)烷基氨基基團(tuán)置換了一個(gè)或多個(gè)式I的二糖單元中的羥基(-OH)、羧基(-COOH)和亞甲基羥基(-CH2-OH)取代基上的任何OH基團(tuán)。
13.權(quán)利要求1的組合物，其中所述有效量包含約0.01毫克至約500毫克透明質(zhì)酸化合物或其鹽。
14.一種包括帶活塞的針筒、活塞遠(yuǎn)端的密封阻擋層和針筒內(nèi)位于活塞和密封阻擋層之間的空腔的注射器樣施藥器，其中所述空腔包含有效量的透明質(zhì)酸化合物或其鹽，其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽可抑制大腸桿菌或白色念珠菌對(duì)哺乳動(dòng)物上皮細(xì)胞的粘附。
15.權(quán)利要求14的注射器樣施藥器，其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽抑制哺乳動(dòng)物泌尿生殖道病原體的感染。
16.權(quán)利要求14的注射器樣施藥器，其中所述病原體是細(xì)菌、真菌或滴蟲(chóng)病原體。
17.權(quán)利要求14的注射器樣施藥器，其中所述病原體是白色念珠菌。
18.權(quán)利要求14的注射器樣施藥器，其中所述病原體是大腸桿菌。
19.權(quán)利要求14的注射器樣施藥器，其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽包含(β-1，4-)-連接的D-葡萄糖醛酸和(β-1，3-)-N-乙?；?D-葡萄糖胺。
20.權(quán)利要求14的注射器樣施藥器，其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽包含一個(gè)或多個(gè)葡萄糖、葡萄糖醛酸、甘露糖、甘露糖醛酸、半乳糖、半乳糖醛酸、古洛糖、古洛糖醛酸、巖藻糖、木糖、N-乙酰神經(jīng)氨酸或N-乙酰葡萄糖胺糖單元。
21.權(quán)利要求14的注射器樣施藥器，其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽與非多糖聚合物混合或與其共價(jià)連接。
22.權(quán)利要求21的注射器樣施藥器，其中所述非多糖聚合物是聚(乙二醇)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯吡咯烷酮)或聚(2-羥乙基異丁烯酸酯)。
23.權(quán)利要求14的注射器樣施藥器，其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽包含重復(fù)的式I二糖單元 其中n是約2至100,000的整數(shù)。
24.權(quán)利要求23的注射器樣施藥器，其中低級(jí)烷基置換了一個(gè)或多個(gè)式I的二糖單元中的羥基(-OH)、羧基(-COOH)和亞甲基羥基(-CH2-OH)取代基上的任何氫原子。
25.權(quán)利要求23的注射器樣施藥器，其中氨基、硫酸根或低級(jí)烷基氨基基團(tuán)置換了一個(gè)或多個(gè)式I的二糖單元中的羥基(-OH)、羧基(-COOH)和亞甲基羥基(-CH2-OH)取代基上的任何OH基團(tuán)。
26.權(quán)利要求14的注射器樣施藥器，其中所述有效量包含約0.01毫克至500毫克透明質(zhì)酸。
27.一種包含適合于插入哺乳動(dòng)物陰道的管狀載體的棉塞，其中所述載體包含有效量的透明質(zhì)酸化合物或其鹽，并且其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽能抑制大腸桿菌或白色念珠菌對(duì)哺乳動(dòng)物上皮細(xì)胞的粘附。
28.權(quán)利要求27的棉塞，其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽預(yù)防哺乳動(dòng)物的泌尿生殖道中病原體的感染。
29.權(quán)利要求28的棉塞，其中所述病原體是細(xì)菌、真菌或滴蟲(chóng)病原體。
30.權(quán)利要求28的棉塞，其中所述病原體是白色念珠菌。
31.權(quán)利要求28的棉塞，其中所述病原體是大腸桿菌。
32.權(quán)利要求27的棉塞，其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽包含(β-1，4-)-連接的D-葡萄糖醛酸和(β-1，3-)-N-乙?；?D-葡萄糖胺。
33.權(quán)利要求27的棉塞，其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽包含一個(gè)或多個(gè)葡萄糖、葡萄糖醛酸、甘露糖、甘露糖醛酸、半乳糖、半乳糖醛酸、古洛糖、古洛糖醛酸、巖藻糖、木糖、N-乙酰神經(jīng)氨酸或N-乙酰葡萄糖胺糖單元。
34.權(quán)利要求27的棉塞，其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽與非多糖聚合物混合或與其共價(jià)連接。
35.權(quán)利要求34的棉塞，其中所述非多糖聚合物是聚(乙二醇)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯吡咯烷酮)或聚(2-羥乙基異丁烯酸酯)。
36.權(quán)利要求27的棉塞，其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽包含重復(fù)的式I二糖單元 其中n是約2至100,000的整數(shù)。
37.權(quán)利要求36的棉塞，其中低級(jí)烷基置換了一個(gè)或多個(gè)式I的二糖單元中的羥基(-OH)、羧基(-COOH)和亞甲基羥基(-CH2-OH)取代基上的任何氫原子。
38.權(quán)利要求36的棉塞，其中氨基、硫酸根或低級(jí)烷基氨基基團(tuán)置換了一個(gè)或多個(gè)式I的二糖單元中的羥基(-OH)、羧基(-COOH)和亞甲基羥基(-CH2-OH)取代基上的任何OH基團(tuán)。
39.權(quán)利要求27的棉塞，其中所述有效量包含約0.01毫克至500毫克透明質(zhì)酸化合物或其鹽。
40.一種預(yù)防哺乳動(dòng)物的泌尿生殖道感染的方法，該方法包括將有效量的透明質(zhì)酸化合物或其鹽給藥至哺乳動(dòng)物的泌尿生殖道，其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽能抑制大腸桿菌或白色念珠菌對(duì)哺乳動(dòng)物上皮細(xì)胞的粘附。
41.權(quán)利要求40的方法，其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽預(yù)防哺乳動(dòng)物的泌尿生殖道中病原體的感染。
42.權(quán)利要求41的方法，其中所述病原體是細(xì)菌、真菌或滴蟲(chóng)病原體。
43.權(quán)利要求41的方法，其中所述病原體是白色念珠菌。
44.權(quán)利要求41的方法，其中所述病原體是大腸桿菌。
45.權(quán)利要求40的方法，其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽包含(β-1，4-)-連接的D-葡萄糖醛酸和(β-1，3-)-N-乙?；?D-葡萄糖胺。
46.權(quán)利要求40的方法，其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽包含一個(gè)或多個(gè)葡萄糖、葡萄糖醛酸、甘露糖、甘露糖醛酸、半乳糖、半乳糖醛酸、古洛糖、古洛糖醛酸、巖藻糖、木糖、N-乙酰神經(jīng)氨酸或N-乙酰葡萄糖胺糖單元。
47.權(quán)利要求40的方法，其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽與非多糖聚合物混合或與其共價(jià)連接。
48.權(quán)利要求47的方法，其中所述非多糖聚合物是聚(乙二醇)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯吡咯烷酮)或聚(2-羥乙基異丁烯酸酯)。
49.權(quán)利要求40的方法，其中所述透明質(zhì)酸化合物或其鹽包含重復(fù)的式I二糖單元 其中n是約2至100,000的整數(shù)。
50.權(quán)利要求49的方法，其中低級(jí)烷基置換了一個(gè)或多個(gè)式I的二糖單元中的羥基(-OH)、羧基(-COOH)和亞甲基羥基(-CH2-OH)取代基上的任何氫原子。
51.權(quán)利要求49的方法，其中氨基、硫酸根或低級(jí)烷基氨基基團(tuán)置換了一個(gè)或多個(gè)式I的二糖單元中的羥基(-OH)、羧基(-COOH)和亞甲基羥基(-CH2-OH)取代基上的任何OH基團(tuán)。
52.權(quán)利要求40的方法，其中所述有效量包含約0.01毫克至500毫克透明質(zhì)酸化合物或其鹽。
全文摘要
本發(fā)明提供用于預(yù)防不同病原體引起的泌尿生殖道感染的透明質(zhì)酸化合物及其衍生物，也提供治療和預(yù)防泌尿生殖道感染的組合物、產(chǎn)品及方法。
文檔編號(hào)A61P31/04GK1758919SQ200480006738
公開(kāi)日2006年4月12日 申請(qǐng)日期2004年3月19日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月28日
發(fā)明者楊淑萍, 黃延賓, I·F·沃特 申請(qǐng)人:金伯利-克拉克環(huán)球有限公司