專利名稱：sgk基因家族用于診斷和治療白內(nèi)障和青光眼的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及hsgk1蛋白或hsgk3蛋白的功能抑制劑或者h(yuǎn)sgk1基因或hsgk3基因的負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)劑用于制備治療和/或預(yù)防白內(nèi)障、青光眼或糖尿病性神經(jīng)病變的藥物的用途。
在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及包含根據(jù)Acc No.NM_005627的hsgk1序列或其片段，或者包含根據(jù)登記號(hào)AF169035的hsgk3序列或其片段的單鏈或雙鏈核酸用于診斷發(fā)展白內(nèi)障、青光眼和/或糖尿病性神經(jīng)病變的傾向的用途，以及診斷發(fā)展白內(nèi)障、青光眼和/或糖尿病性神經(jīng)病變的傾向的試劑盒，該試劑盒包括上述核酸。
此外，本發(fā)明涉及從許多測(cè)試物質(zhì)中鑒定和表征治療活性物質(zhì)的不同篩選方法，該治療活性物質(zhì)用于治療和/或預(yù)防選自白內(nèi)障、青光眼和糖尿病性神經(jīng)病變中的至少一種疾病。
血清和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)型激酶hsgk1最初是以糖皮質(zhì)激素敏感性基因形式克隆的[Webster et al.Characterization of sgk，anovel member of the serine/threonine protein kinase gene familywhich is transcriptionally induced by glucocorticoids and serum.Mol Cell Biol 1993；132031-2040]。
后來的調(diào)查揭示hsgk1處于很多刺激物的影響之下[Lang F，Cohen P Regulation and physiological roles of serum-andglucocorticoid-induced protein kinase isoforms.Science STKE.2001 Nov 13；2001(108)RE17]，例如，尤其是鹽皮質(zhì)激素的影響[Chenet al.Epithelial sodium channel regulated by aldosterone-induced protein sgk.Proc Natl Acad Sci USA 1999；962514-2519，Náray-Fejes-Tóth et al.sgk is an aldosterone-induced kinasein the renal collecting duct.Effects on epithelial Na+channels.J Biol Chem 1999；27416973-16978；Shigaev et al.Regulation ofsgk by aldosterone and its effects on the epithelial Na(+)channel.Am J Physiol 2000；278F613-F619；Brenan FE，F(xiàn)uller PJ.Rapid upregulation of serum and glucocorticoid-regulatedkinase(sgk)gene expression by corticosteroids in vivo.MolCell Endocrinol.2000；30；166129-36；Cowling RT，Birnboim HC.Expression of serum-and glucocorticoid-regulated kinase(sgk)mRNA is up-regulated by GM-CSF and other proinflammatorymediators in human granulocytes.J Leukoc Biol.2000；67240-248]。
胰島素樣生長因子IGF1、胰島素和氧化應(yīng)力通過磷酸肌醇-3-激酶(PI3激酶)和磷酸肌醇依賴性激酶PDK1，經(jīng)由信號(hào)級(jí)聯(lián)來刺激hsgk1[Park et al.Serum and glucocorticoid-inducible kinase(SGK)is a target of the PI 3-kinase-stimulatdsignaling pathway，EMBOJ 1999；183024-3033；Kobayashi et al.Characterization of thestructure and regulation of two novel isoforms of serum-andglucocorticoid-induced protein kinase.Biochem.J.1999；344189-197]。PDK1對(duì)hsgk1的活化包括在422位絲氨酸處的磷酸化。這個(gè)絲氨酸向天冬氨酸的突變(S422DSGK1)產(chǎn)生了具有組成型活性的激酶[Kobayashi T，Cohen PActivation of serum-andglucocorticoid-regulated protein kinase by agonists thatactivate phosphatidylinositide 3-kinase is mediated by3-phosphoinositide-dependent protein kinase-1(PDK1)and PDK2.Biochem J.1999；339319-328]。
早期的研究顯示，hsgk1是腎上皮Na+通道的有力刺激物[De laRosa et al.The serum and glucocorticoid kinase sgk increasesthe abundance of epithelial sodium channels in the plasmamembrane of Xenopus oocytes.J Biol Chem 1999；27437834-37839；Bhmer et al.The Shrinkage-activated Na+Conductance of RatHepatocytes and its Possible Correlation to rENaC.Cell PhysBiochem.2000；10187-194；Lang et al.Deranged transcriptionalregulation of cell volume sensitive kinase hSGK in diabeticnephropathy.Proc Natl Acad Sci USA 2000；978157-8162]。由于在不表達(dá)上皮Na+通道ENaC的很多組織中發(fā)現(xiàn)了hsgk1，因此hsgk1的作用應(yīng)該不只限于調(diào)節(jié)Na+通道[Klingel et al.Expression of thecell volume regulated kinase h-sgk in pancreatic tissue.Am JPhysiol(Gastroint.Liver-Physiol.)2000；279G998-G1002；Waldegger et al.Cloning and characterization of a putativehuman serine/threonine protein kinase transcriptionallymodified during anisotonic and isotonic alterations of cellvolume.Proc Natl Acad Sci USA 1997；944440-4445；Waldegger etal.h-sgk Serine-Threonine protein kinase gene as earlytranscriptional target of TGF-β in human intestine.Gastroenterology 1999；1161081-1088]。
由于hsgk1很可能以還有待于闡明的方式調(diào)節(jié)很多其它信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑或這些途徑的組分這一事實(shí)，hsgk1和它的人同系物應(yīng)該具有診斷很多疾病的重要潛力。尤其是，由DE 197 08 173 A1明顯可知，hsgk1可以用于診斷很多疾病，如高鈉血癥、低鈉血癥、糖尿病、腎功能不全、分解代謝過度、肝性腦病和微生物或病毒感染，其中細(xì)胞容積的改變起重要的病理生理作用。
WO 00/62781報(bào)道了hsgk1活化內(nèi)皮Na+通道，導(dǎo)致腎Na+再吸收增加。由于腎Na+再吸收的這種增加伴隨有高血壓，因此這個(gè)文件中推測(cè)hsgk1表達(dá)的增加將導(dǎo)致高血壓，而hsgk1表達(dá)的降低將最終導(dǎo)致低血壓。
DE 100 421 37也報(bào)道了人同系物hsgk2和hsgk3的過表達(dá)或活動(dòng)過強(qiáng)與ENaC過度活化、由此導(dǎo)致的腎Na+再吸收增加和由此發(fā)展的高血壓之間的類似關(guān)系。此外，這個(gè)文件已經(jīng)探討了激酶hsgk2和hsgk3對(duì)于動(dòng)脈高壓的診斷潛力。
WO02/074987A2公開了hsgk1基因中各個(gè)核苷酸的兩個(gè)不同多態(tài)性(單核苷酸多態(tài)性(SNP))的存在和高血壓的遺傳決定的傾向性之間的關(guān)系。這些多態(tài)性是hsgk1基因中內(nèi)含子6中的多態(tài)性(T→C)和外顯子8中的多態(tài)性(C→T)。
因?yàn)閟gk1在很多組織中表達(dá)，并且因?yàn)閟gk1大概具有很多仍然未知的底物，所以人們預(yù)期sgk家族的人同系物、尤其是hsgk1基因(NM 005627)、hsgk2基因和hsgk3基因(AF169035)的作用和其它疾病的發(fā)展之間將有進(jìn)一步的相關(guān)性。牽涉sgk1的這些其它特殊疾病的揭露將可以產(chǎn)生含有sgk家族人同系物基因的多態(tài)性區(qū)域(該區(qū)域影響相應(yīng)sgk蛋白的功能或表達(dá))的核酸，該核酸用于診斷這些其它疾病的傾向。
因此本發(fā)明的目的是找到sgk家族人同系物的功能和新疾病之間的更多相關(guān)性，并因此提供含有sgk家族人同系物基因的多態(tài)性區(qū)域的核酸用于診斷用途的新可能性。
這個(gè)目的是通過hsgk1和hsgk3強(qiáng)烈刺激葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut1的驚奇發(fā)現(xiàn)而實(shí)現(xiàn)的(見

圖1)。特別是，葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut1調(diào)節(jié)眼睛的各種細(xì)胞對(duì)葡萄糖的吸收，尤其是[Busik et al.Glucose-induced activation of glucose uptake in cells from theinner and outer blood-retinal barrier.Invest Ophthalmol VisSci.2002；432356-63；TakataK，Ka Sahara T，Kasahara M，EzakiO，Hirano H.Ultracytochemical localization of theerythrocyte/HepG2-type glucose transporter (GLUT1)in theciliary body and iris of the rat eye.Invest Ophthalmol Vis Sc.1991；321659-66]。水跟隨葡萄糖滲透，意思指Glut1活性增加將引起細(xì)胞腫脹。因此，Glut1活性增加可以引起白內(nèi)障的發(fā)展[Gong et al.Development of cataractous macrophthalmia in mice expressingan active MEK1 in the lens.Invest Ophthalmol Vis Sci.2001；42539-48]。除此之外，已經(jīng)表明Glut1的過表達(dá)會(huì)促進(jìn)結(jié)締組織蛋白的形成和沉積[Ayo et al.Increased extracellular matrixsynthesis and mRNA in mesangial cells grown in high-glucosemedium.Am J Physiol.1991；260F185-191；Heilig et al.Overexpression of glucose transporters in rat mesangial cellscultured in a normal glucose milieu mimics the diabeticphenotype.J Clin Invest.1995；961802-1814]。這種結(jié)締組織蛋白的沉積妨礙了眼部液體的流失，導(dǎo)致眼內(nèi)壓力增加，并因此導(dǎo)致視網(wǎng)膜的損害[Fingert et al.Evaluation of the myocilin(MYOC)glaucoma gene in monkey and human steroid-induced ocularhypertension.Invest Ophthalmol Vis Sci.2001；42(1)145-52，Ueda et al.Distribution of myocilin and extracellular matrixcomponents in the juxtacanalicular tissue of human eyes.InvestOphthalmol Vis Sci.2002；431068-76]。刺激SGK1表達(dá)的糖皮質(zhì)激素(參見上面)確實(shí)同時(shí)引起青光眼的發(fā)展[Fingert et al.2001]。然而，以前從未推測(cè)hsgk1是病因。
上述失調(diào)將在與hsgk1活性增加有關(guān)的任何情況下發(fā)生，也就是說在上述任何激素過量存在的情況下將發(fā)生。與血壓增加有關(guān)的hsgk1基因的特殊多態(tài)性[Busjahn et al.Serum-andglucocorticoid-regulated kinase(SGK1)gene and blood pressure.Hypertension 40(3)256-260，2002]可以同時(shí)引起白內(nèi)障和青光眼發(fā)生率的增加。該基因的相同改變也應(yīng)該與過早出現(xiàn)的白內(nèi)障和/或青光眼有關(guān)。
本發(fā)現(xiàn)揭示了葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut1調(diào)節(jié)中的一種全新機(jī)制。因此hsgk1活性的增加應(yīng)該會(huì)引起細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝入增加。血清[Webster et al.1993]、糖皮質(zhì)激素[Brenan & Fuller 2000，Websteret al.1993]、鹽皮質(zhì)激素[Chen et al.1999，Naray-Fejes-Toth etal.1999，Shigaev et al.2000，Brennan and Fuller 2000，Cowlingand Birnboim 2000]、促性腺激素[Alliston et al.Folliclestimulating hormone-regulated expression of serum/glucocorticoid-inducible kinase in rat ovarian granulosa cellsa functional role for the Spl family in promoter activity.MolEndocrinol.1997；111934-1949；Alliston et al.Expression andlocalization of serum/glucocorticoid-induced kinase in the ratovaryrelation to follicular growth and differentiation.Endocrinology.2000；141385-395；Gonzalez-Robayna et al.Follicle-Stimulating hormone(FSH)stimulates phosphorylationand activation of protein kinase B(PKB/Akt)and serum andglucocorticoid-Induced kinase (Sgk)evidence for Akinase-independent signaling by FSH in granulosa cells.MolEndocrinol.2000；141283-1300，Richards et al.Ovarian celldifferentiationa cascade of multiple hormones，cellularsignals，and regulated genes.Recent Prog Horm Res.1995；50223-254]和很多細(xì)胞因子[Lang & Cohen 2001]，尤其是TGF-β[Fillon S.et al.Expression of the Serine/Threonine kinasehSGK1 in chronic viral hepatitis.Cell Physiol Biochem2002；1247-54；Lang et al.2000，Waldegger et al.1999，WrntgesS et al.Excessive transcription of the human serum andglucocorticoid dependent kinase hSGK1 in lung fibrosis.CellPhysiol Biochem 2002，12135-142]會(huì)刺激hsgk1的轉(zhuǎn)錄。除此之外，細(xì)胞皺縮也會(huì)增加hsgk1的轉(zhuǎn)錄，如已經(jīng)引用的Waldegger et al.1997論文所示。葡萄糖濃度的增加，如糖尿病中顯示的，會(huì)通過細(xì)胞皺縮和/或通過TGF-β形成的增加來刺激hsgk1的表達(dá)[Lang et al.2000]。所表達(dá)的hsgk1是通過胰島素樣生長因子IGF1、胰島素或氧化應(yīng)力來活化的[Kobayashi & Cohen 1999，Park et al.1999，Kobayashi et al.1999]。
根據(jù)本發(fā)明的發(fā)現(xiàn)，hsgk1的表達(dá)增加會(huì)提高葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut-1的活性。結(jié)果，更多葡萄糖被吸收進(jìn)細(xì)胞中，隨后的通過滲透進(jìn)入的水引起細(xì)胞腫脹。這樣水摻入角膜和晶狀體的程度增加，這樣，由于透明度降低，將引起白內(nèi)障[Gong et al..2001]。
此外，青光眼也可以以類似方式發(fā)展，此外也可由干結(jié)締組織的摻入而發(fā)展[Fingert et al.2001]。
也懷疑細(xì)胞腫脹是糖尿病性神經(jīng)病變的原因[Burg et al.，Sorbitol，osmoregulation，and the complications of diabetes.J Clin Invest 1988；81635-40]。然而，不僅僅在糖尿病的情況下，而且在糖皮質(zhì)激素的影響下或在顯示遺傳決定的hsgk1活性過強(qiáng)的患者中，預(yù)計(jì)Glut1活性增加[Busjahn et al.，Serum-andglucocorticoid-regulated kinase(SGK1)gene and blood pressure.Hypertension 40(3)256-260，2002]。糖皮質(zhì)激素確實(shí)會(huì)引起青光眼[Fingert et al.2001]。以前并不清楚與糖皮質(zhì)激素給藥有關(guān)的青光眼發(fā)展的機(jī)制。尤其是，以前并不清楚hsgk1在這個(gè)機(jī)制中起作用、因此適合用作診斷和治療青光眼的靶蛋白。
因此，根據(jù)本發(fā)明的觀察意外地證明了hsgk1和hsgk3會(huì)增加非上皮葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)以及增加上皮Na+通道。結(jié)果，hsgk1和hsgk3顯示全新的病理生理性重要性，因而具有重要的診斷和治療/預(yù)防效果。
因此本發(fā)明涉及hsgk1蛋白或hsgk3蛋白的功能抑制劑或者h(yuǎn)sgk1基因或hsgk3基因的負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)劑用于降低細(xì)胞腫脹的用途。
此外，本發(fā)明涉及hsgk1蛋白或hsgk3蛋白的功能抑制劑或者h(yuǎn)sgk1基因或hsgk3基因的負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)劑用于制備治療和/或預(yù)防白內(nèi)障、青光眼或糖尿病性神經(jīng)病變的藥物的用途。
hsgk1蛋白或hsgk3蛋白的功能抑制劑可以是抑制hsgk1蛋白或hsgk3蛋白的正常生理活性的任何性質(zhì)的化學(xué)物質(zhì)。優(yōu)選該hsgk1蛋白或hsgk3蛋白的功能抑制劑是低分子量化學(xué)物質(zhì)(“小分子”)或蛋白質(zhì)或肽。hsgk1蛋白或hsgk3蛋白的功能抑制劑尤其可以是這些酶的拮抗劑，其阻斷hsgk1蛋白或hsgk3蛋白的底物結(jié)合位點(diǎn)，但同時(shí)不受hsgk1或hsgk3的任何催化轉(zhuǎn)化影響。優(yōu)選地，在這種情況下合適的拮抗劑是在結(jié)構(gòu)上類似于hsgk1蛋白或hsgk3蛋白的天然底物的那些分子，也就是說，尤其是在結(jié)構(gòu)上類似于可磷酸化的氨基酸絲氨酸和蘇氨酸的那些分子。
星孢素和白屈菜赤堿是兩種已知的hsgk1功能抑制劑。因此在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，星孢素或白屈菜赤堿用作hsgk1或hsgk3的功能抑制劑，用于治療和/或預(yù)防疾病白內(nèi)障、青光眼和糖尿病性神經(jīng)病變中的至少一種疾病。
hsgk1基因或hsgk3基因的負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)劑定義為在轉(zhuǎn)錄水平活化hsgk1基因或hsgk3基因表達(dá)的物質(zhì)。
除實(shí)際的活性物質(zhì)即hsgk1或hsgk3的功能抑制劑或者h(yuǎn)sgk1或hsgk3的負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)劑之外，根據(jù)本發(fā)明的用于治療和/或預(yù)防白內(nèi)障、青光眼或糖尿病性神經(jīng)病變的藥物還可以包含穩(wěn)定劑和/或載體物質(zhì)，如淀粉、乳糖、硬脂酸、脂肪、蠟、醇類，或其它添加劑，如防腐劑、顏料或調(diào)味劑。
可以以任何方式施用藥物，特別是以片劑、粒劑或膠囊或作為溶液形式口服。其它特別合適的施用形式涉及以軟膏、酊劑或噴霧直接施用(例如在皮膚或眼睛上)或任何注射類型形式(例如皮下或靜脈內(nèi))或輸注。
此外，本發(fā)明涉及包含根據(jù)登記號(hào)NM_005627的hsgk1序列或其一個(gè)片段的單鏈或雙鏈核酸用于診斷發(fā)展白內(nèi)障、青光眼和/或糖尿病性神經(jīng)病變的傾向性的用途。在這一點(diǎn)上，該單鏈或雙鏈核酸中可以包含的hsgk1片段的長度是至少10個(gè)核苷酸/堿基對(duì)，優(yōu)選長度至少15個(gè)核苷酸/堿基對(duì)，特別是長度至少20個(gè)核苷酸/堿基對(duì)。
在這一點(diǎn)上，優(yōu)選該單鏈或雙鏈核酸包含hsgk1基因的至少一個(gè)多態(tài)性核苷酸，尤其是hsgk1基因的單核苷酸多態(tài)性(SNP)。
在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述單鏈或雙鏈核酸包含hsgk1基因的下列SNPs中的至少一個(gè)-在hsgk1基因內(nèi)含子2中732/733位置處的G插入，-在hsgk1基因內(nèi)含子6中2071位置處的T/C置換(WO02/074987 A2)，-在hsgk1基因外顯子8中2617位置處的T/C置換(WO02/074987 A2)。
優(yōu)選地，可通過下列方法將上述單鏈或雙鏈核酸用于檢測(cè)患者基因組DNA或cDNA中hsgk1基因的上述SNPs-通過使用上述核酸對(duì)基因組DNA或cDNA直接測(cè)序，-通過將基因組DNA或cDNA與上述核酸特異性雜交，-通過PCR寡核苷酸延伸試驗(yàn)或通過連接試驗(yàn)。
在這一點(diǎn)上，優(yōu)選患者的基因組DNA或cDNA是從取自患者的身體樣品中分離的，尤其是從唾液、血液、組織或細(xì)胞中分離的。
推測(cè)表達(dá)的hsgk1基因的活性取決于患者的hsgk1基因中該多態(tài)性的形式，因此含有這些多態(tài)性中至少一種的核酸尤其很適于診斷發(fā)展白內(nèi)障、青光眼和/或糖尿病性神經(jīng)病變的傾向性。
此外，本發(fā)明涉及包含根據(jù)登記號(hào)AF169035的hsgk3序列或其一個(gè)片段的單鏈或雙鏈核酸用于診斷發(fā)展白內(nèi)障、青光眼和/或糖尿病性神經(jīng)病變的傾向性的用途。在這一點(diǎn)上，所述單鏈或雙鏈核酸可以包含的hsgk3片段的長度是至少10個(gè)核苷酸/堿基對(duì)，優(yōu)選長度至少15個(gè)核苷酸/堿基對(duì)，特別是長度至少20個(gè)核苷酸/堿基對(duì)。
在這一點(diǎn)上，優(yōu)選所述單鏈或雙鏈核酸包含hsgk3基因的至少一個(gè)多態(tài)性核苷酸，尤其是hsgk3基因的單核苷酸多態(tài)性(SNP)。
除上述的單鏈或雙鏈核酸之外，針對(duì)sgk家族人同系物的底物，尤其是針對(duì)hsgk1和hsgk3的底物的抗體也適于診斷發(fā)展白內(nèi)障、青光眼和糖尿病性神經(jīng)病變中的至少一種疾病的傾向性。優(yōu)選這些診斷抗體針對(duì)的是sgk家族人同系物(尤其是hsgk1和hsgk3)的表位，其中含有磷酸化形式或未磷酸化形式的底物磷酸化位點(diǎn)。
例如，由于hsgk1基因的個(gè)體遺傳組成造成的hsgk1蛋白過表達(dá)可以引起hsgk底物的轉(zhuǎn)變?cè)黾樱磆sgk1對(duì)底物的酶促磷酸化增加。同時(shí)，hsgk1蛋白的過表達(dá)將引起葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut1的刺激，最終導(dǎo)致眼睛細(xì)胞內(nèi)葡萄糖的高水平攝入，繼而通過滲透作用引起水的高水平攝入，結(jié)果最終導(dǎo)致發(fā)展白內(nèi)障、青光眼和糖尿病性神經(jīng)病變的傾向性。因此，通過針對(duì)含有磷酸化形式或未磷酸化形式之hsgk1磷酸化位點(diǎn)的感興趣底物區(qū)域的抗體而檢測(cè)更頻繁的hsgk1底物磷酸化可代表診斷發(fā)展白內(nèi)障、青光眼和糖尿病性神經(jīng)病變的傾向性的方法。
在優(yōu)選實(shí)施方案中，泛素蛋白連接酶Nedd4-2(登記號(hào)BAA23711)被用作sgk家族人同系物的底物。這個(gè)泛素蛋白連接酶是被sgk家族的人同系物特異性磷酸化的蛋白[Debonneville et al.，Phosphorylation of Nedd4-2 by Sgk1 regulates epithelial Na(+)channel cell surface expression.EMBO J.，2001；207052-7059；Snyder et al.，Serum and glucocorticoid-regulated kinasemodulates Nedd4-2-mediated inhibition of the epithelial Na(+)channel.J.Biol.Chem.，2002，2775-8]。hsgk1的磷酸化位點(diǎn)具有共有序列(RXRXXS/T)，其中R是精氨酸，S是絲氨酸，T是蘇氨酸，X是任何任意氨基酸。在Nedd4-22(登記號(hào)BAA23711)中，存在上述共有序列匹配的兩個(gè)hsgk1潛在磷酸化位點(diǎn)，即在382位氨基酸處的絲氨酸和在468位氨基酸處的絲氨酸。
因此，優(yōu)選用于診斷發(fā)展白內(nèi)障、青光眼和糖尿病性神經(jīng)病變中至少一種疾病的傾向性的上述抗體針對(duì)的是底物Nedd4-2，特別優(yōu)選針對(duì)的是具有hsgk1潛在磷酸化位點(diǎn)序列、即共有序列(RXRXXS/T)的Nedd4-2蛋白的區(qū)域。特別是，這些抗體針對(duì)的是Nedd4-2蛋白區(qū)域，該區(qū)域包含兩個(gè)潛在磷酸化位點(diǎn)中的至少一個(gè)，即382位氨基酸處的絲氨酸和/或468位氨基酸處的絲氨酸。
此外，本發(fā)明涉及診斷白內(nèi)障、青光眼和糖尿病性神經(jīng)病變之一的試劑盒，該試劑盒包含至少一種下列成分-針對(duì)hsgk1或hsgk3的抗體，-能夠在嚴(yán)格條件下與登記號(hào)NM_005627的hsgk1基因或登記號(hào)AF169035的hsgk3基因雜交的單鏈或雙鏈核酸；尤其是包含hsgk1基因或hsgk3基因的多態(tài)性核苷酸、特別是“SNPs”的那些單鏈或雙鏈核酸，-針對(duì)sgk家族人同系物的底物的抗體；優(yōu)選針對(duì)磷酸化或未磷酸化形式的該底物的磷酸化位點(diǎn)的抗體；尤其是針對(duì)磷酸化或未磷酸化形式的Nedd4或Nedd4-2磷酸化位點(diǎn)的抗體。
本發(fā)明還涉及從許多測(cè)試物質(zhì)中鑒定和表征治療活性物質(zhì)的篩選方法，該治療活性物質(zhì)用于治療和/或預(yù)防選自包括白內(nèi)障、青光眼和糖尿病性神經(jīng)病變的組中的至少一種疾病，所述方法包括下列步驟a)在細(xì)胞中異源性地共表達(dá)i)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut1和ii)hsgk1和/或hsgk3b)在每種情況下，在至少一種測(cè)試物質(zhì)存在的情形下，培養(yǎng)A1至AX至少一種細(xì)胞等分試樣，其中每種情況下所述至少一種測(cè)試物質(zhì)根據(jù)細(xì)胞等分試樣的下標(biāo)1至X而不同，并在缺乏任何測(cè)試物質(zhì)的情況下培養(yǎng)對(duì)照細(xì)胞等分試樣B，
c)與對(duì)照細(xì)胞等分試樣B中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut1的活性相比較，測(cè)定細(xì)胞等分試樣A1至AX中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut1的活性。
物質(zhì)文庫，優(yōu)選小分子文庫，或蛋白文庫等等，均可以用作所述“多種測(cè)試物質(zhì)”。
在a)步驟中，使用標(biāo)準(zhǔn)方法，如電穿孔法、CaPO4沉淀法、脂質(zhì)轉(zhuǎn)染法等等，用合適的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染合適的細(xì)胞，優(yōu)選哺乳動(dòng)物細(xì)胞或細(xì)胞系，尤其是人細(xì)胞或細(xì)胞系，該表達(dá)載體含有表達(dá)Glut1和hsgk1和/或hsgk3的合適表達(dá)盒。該表達(dá)盒含有處于合適啟動(dòng)子控制下的相關(guān)靶基因(Glut1、hsgk1或hsgk3)的基因組DNA或cDNA，所述啟動(dòng)子在感興趣的細(xì)胞類型中有活性，并能夠以合適的量表達(dá)靶基因。該表達(dá)載體可以另外含有選擇標(biāo)記。
然后，在能夠使靶基因i)和ii)被表達(dá)的條件下培養(yǎng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。
在b)步驟中，來自a)的轉(zhuǎn)染細(xì)胞被分成不同的細(xì)胞等分試樣A1至AX以及對(duì)照細(xì)胞等分試樣B。在每種情況下，在至少一種測(cè)試物質(zhì)存在時(shí)培養(yǎng)細(xì)胞等分試樣A1至AX。每種情況下添加到細(xì)胞等分試樣A1至AX的測(cè)試物質(zhì)彼此不同(依各細(xì)胞等分試樣A1至AX的下標(biāo)1至X而定)。另一方面，在缺乏任何測(cè)試物質(zhì)的情形下培養(yǎng)對(duì)照細(xì)胞等分試樣B。
在c)步驟中，與對(duì)照細(xì)胞等分試樣B中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut1的活性相比較，定量測(cè)定細(xì)胞等分試樣A1至AX中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut1的活性。能夠在功能上抑制hsgk1或hskg3或者降低它們的表達(dá)的測(cè)試物質(zhì)應(yīng)該已被加入到其中Glut1的活性經(jīng)測(cè)定比對(duì)照細(xì)胞等分試樣B中測(cè)定的活性明顯較低的細(xì)胞等分試樣A1至AX中。這種物質(zhì)可能適于治療白內(nèi)障、青光眼和糖尿病性神經(jīng)病變中的至少一種疾病。
在可供選擇的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的用于從許多測(cè)試物質(zhì)中鑒定和表征治療活性物質(zhì)的篩選方法包括下列步驟，其中所述治療活性物質(zhì)可用于治療和/或預(yù)防選自包括白內(nèi)障、青光眼和糖尿病性神經(jīng)病變的組中的至少一種疾病d)在細(xì)胞的至少一個(gè)等分試樣A1至AX中異源性地共表達(dá)i)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut1和ii)hsgk1和/或hsgk3，并且在細(xì)胞的至少一個(gè)等分試樣B1至BX中異源性地表達(dá)i)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut1，e)在每種情況下，在存在至少一種測(cè)試物質(zhì)的情形下培養(yǎng)A1至AX和B1至BX細(xì)胞等分試樣，其中每種情況下所述至少一種測(cè)試物質(zhì)依細(xì)胞等分試樣的下標(biāo)1至X而不同，f)進(jìn)行細(xì)胞等分試樣A1至AX和細(xì)胞等分試樣B1至BX中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut1的活性的比較性測(cè)定。
上面關(guān)于a)至c)各個(gè)程序步驟給出的說明以相應(yīng)方式適合于根據(jù)本發(fā)明的可供選擇的篩選方法中的d)至f)程序步驟。
通過下圖1更詳細(xì)解釋本發(fā)明。
圖1的縱座標(biāo)A上繪制了2-脫氧葡萄糖的攝入(以pmol/1/10分鐘/卵母細(xì)胞)(算術(shù)平均數(shù)±SEM)。給Xenopus laevis卵母細(xì)胞注射Glut-1 cRNA(有或沒有SGK1、SGK2、SGK3或蛋白激酶B(PKB)cRNA)(見實(shí)施例1)。
圖1顯示了與自身表達(dá)Glut1的卵母細(xì)胞相比較，除Glut1之外還表達(dá)hsgk1或hsgk3的卵母細(xì)胞中發(fā)生的2-脫氧葡萄糖攝入的增加。因此，這證明了hsgk1和hsgk3的功能有效地刺激了葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut1的活性。在表達(dá)hsgk2或PKBmut而不是hsgk1或hsgk3的卵母細(xì)胞的情況下，沒有看到類似結(jié)果。
通過下列實(shí)施例1更詳細(xì)解釋本發(fā)明。
實(shí)施例1在Xenopus laevis卵母細(xì)胞中的表達(dá)和雙電極電壓鉗體外合成正常SGK1 cRNA[Waldegger S，Barth P，Raber G，LangFCloning and characterization of a putative humanserine/threonine protein kinase transcriptionally modifiedduring anisotonic and isotonicalterations of cell volume.ProcNatl Acad Sci USA 1997；944440-4445]和組成型活性SGK1(S422DSGK1)cRNA[Kobayashi & Cohen 1999]，以及正常Glut1 cRNA[IserovichP，Wang D，Ma L，Yang H，Zuniga FA，Pascual JM，Kuang K，De VivoDC，F(xiàn)ischbarg J.Changes in glucose transport and waterpermeability resulting from the T310I pathogenic mutation inGlut1 are consistent with two transport channels per monomer.J Biol Chem.2002；27730991-7]。已經(jīng)詳細(xì)描述了Xenopus laevis卵巢的解剖和卵母細(xì)胞的收集與處理[Wagner CA，F(xiàn)riedrich B，Setiawan I，Lang F，Brer SThe use of Xenopus laevis oocytesfor the functional characterization of heterologouslyexpressed membrane proteins.Cell Physiol Biochem2000；101-12]。給卵母細(xì)胞注射5ng人Glut1、7.5ng人S422DSGK1和/或5ng蟾蜍(Xenopus)Nedd4-2。給對(duì)照卵母細(xì)胞注射水。注射各個(gè)cRNAs后2天，在室溫下測(cè)定放射性標(biāo)記的葡萄糖的攝入。對(duì)照浴液含有96mM NaCl、2mM KCl、1.8mM CaCl2、1mM MgCl2和5mM HEPES，pH 7.4。所有物質(zhì)以所給濃度使用。用HCl或NaOH使最終溶液滴定至pH 7.4。
計(jì)算以算術(shù)平均值±SEM的形式給出數(shù)據(jù)；n是被檢測(cè)的卵母細(xì)胞數(shù)。對(duì)至少三個(gè)不同組的卵母細(xì)胞進(jìn)行所有實(shí)驗(yàn)。使用Student’s t檢驗(yàn)來檢驗(yàn)結(jié)果的顯著性差異。僅P＜0.05的結(jié)果被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。
序列表<110>Prof.Dr.Lang，F(xiàn)lorian<120>sgk基因家族用于診斷和治療白內(nèi)障和青光眼的用途<130>L62135<140>DE 103 05 212.7<141>2003-02-07<160>3<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>5719<212>DNA<213>人hsgk1基因，NM_005627<220>
<221>變異<222>(732)..(733)<223>在內(nèi)含子2中位置732/733處插入額外的G(SNP)<220>
<221>變異<222>(2071)..(2071)<223>在內(nèi)含子6中位置2071處的T/C交換(SNP)<220>
<221>變異<222>(2617)..(2617)<223>在外顯子8中位置2617處的C/T交換(SNP)<400>1ggccgagcgc gcggcctggc gcacgatacg ccgagccggt ctttgagcgc taacgtcttt 60ctgtctcccc gcggtggtga tgacggtgaa aactgaggct gctaagggca ccctcactta120ctccaggatg aggggcatgg tggcaattct catcggtgag tgcaggaatc ttgcgggact180
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acaggccggg cgcggtggct cacgcctgta atcccagcac tttgggaggc tgaggcgggc 2160agatcacctg aggtcaggag ttggagacca gcctgaccaa catggacaaa ccccgtctct 2220actaaaaata caaaattggc agggtgtggt ggcacatgcc tataatccca gctacttggg 2280aggctaaggc aggagaatcg cttgaacccg ggaggcggag gttgcagtga gccgagatcg 2340caccattgca ctcctgcctg ggcaacaaga gtgaaactcc atctccaaaa a2391<210>3<211>995<212>PRT<213>人，Nedd 4-2蛋白，BAA23711<400>3Pro Gly Gly Trp Leu Arg Arg Ala Leu Pro Gly Arg Glu Arg Leu Gln1 5 10 15Ser Pro Val His Ala Val Pro Pro Gln His Gly Thr Ser His Ser Arg20 25 30Leu Leu Val Thr Trp Pro Gly Ala Gly Arg Asp Gln Asp Phe Ser Ser35 40 45Pro Pro Leu Leu Leu Leu Gly Glu Thr Asp His Leu His Leu Asp Leu50 55 60Pro Leu Ser Pro Leu Pro Thr Ser Asp Glu Leu Phe Leu Pro Gly Ile65 70 75 80Cys Asp Pro Tyr Val Lys Leu Ser Leu Tyr ValAla Asp Glu Asn Arg85 90 95Glu Leu Ala Leu Val Gln Thr Lys Thr Ile Lys Lys Thr Leu Asn Pro100 105 110
Lys Trp Asn Glu Glu Phe Tyr Phe Arg Val Asn Pro Ser Asn His Arg115 120 125Leu Leu Phe Glu Val Phe Asp Glu Asn Arg Leu Thr Arg Asp Asp Phe130 135 140Leu Gly Gln Val Asp Val Pro Leu Ser His Leu Pro Thr Glu Asp Pro145 150 155 160Thr Met Glu Arg Pro Tyr Thr Phe Lys Asp Phe Leu Leu Arg Pro Arg165 170 175Ser His Lys Ser Arg Val Lys Gly Phe Leu Arg Leu Lys Met Ala Tyr180 185 190Met Pro Lys Asn Gly Gly Gln Asp Glu Glu Asn Ser Asp Gln Arg Asp195 200 205Asp Met Glu His Gly Trp Glu Val Val Asp Ser Asn Asp Ser Ala Ser210 215 220Gln His Gln Glu Glu Leu Pro Pro Pro Pro Leu Pro Pro Gly Trp Glu225 230 235 240Glu Lys Val Asp Asn Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Val Asn His Asn Asn245 250 255Arg Thr Thr Gln Trp His Arg Pro Ser Leu Met Asp Val Ser Ser Glu260 265 270Ser Asp Asn Asn Ile Arg Gln Ile Asn Gln Glu Ala Ala His Arg Arg275 280 285
Phe Arg Ser Arg Arg His Ile Ser Glu Asp Leu Glu Pro Glu Pro Ser290 295 300Glu Gly Gly Asp Val Pro Glu Pro Trp Glu Thr Ile Ser Glu Glu Val305 310 315 320Asn Ile Ala Gly Asp Ser Leu Gly Leu Ala Leu Pro Pro Pro Pro Ala325 330 335Ser Pro Gly Ser Arg Thr Ser Pro Gln Glu Leu Ser Glu Glu Leu Ser340 345 350Arg Arg Leu Gln Ile Thr Pro Asp Ser Asn Gly Glu Gln Phe Ser Ser355 360 365Leu Ile Gln Arg Glu Pro Ser Ser Arg Leu Arg Ser Cys Ser Val Thr370 375 380Asp Ala Val Ala Glu Gln Gly His Leu Pro Pro Pro Ser Val Ala Tyr385 390 395 400Val His Thr Thr Pro Gly Leu Pro Ser Gly Trp Glu Glu Arg Lys Asp405 410 415Ala Lys Gly Arg Thr Tyr Tyr Val Asn His Asn Asn Arg Thr Thr Thr420 425 430Trp Thr Arg Pro Ile Met Gln Leu Ala Glu Asp Gly Ala Ser Gly Ser435 440 445Ala Thr Asn Ser Asn Asn His Leu Ile Glu Pro Gln Ile Arg Arg Pro450 455 460
Arg Ser Leu Ser Ser Pro Thr Val Thr Leu Ser Ala Pro Leu Glu Gly465 470 475 480Ala Lys Asp Ser Pro Val Arg Arg Ala Val Lys Asp Thr Leu Ser Asn485 490 495Pro Gln Ser Pro Gln Pro Ser Pro Tyr Asn Ser Pro Lys Pro Gln His500 505 510Lys Val Thr Gln Ser Phe Leu Pro Pro Gly Trp Glu Met Arg Ile Ala515 520 525Pro Asn Gly Arg Pro Phe Phe Ile Asp His Asn Thr Lys Thr Thr Thr530 535 540Trp Glu Asp Pro Arg Leu Lys Phe Pro Val His Met Arg Ser Lys Thr545 550 555 560Ser Leu Asn Pro Asn Asp Leu Gly Pro Leu Pro Pro Gly Trp Glu Glu565 570 575Arg Ile His Leu Asp Gly Arg Thr Phe Tyr Ile Asp His Asn Ser Lys580 585 590Ile Thr Gln Trp Glu Asp Pro Arg Leu Gln Asn Pro Ala Ile Thr Gly595 600 605Pro Ala Val Pro Tyr Ser Arg Glu Phe Lys Gln Lys Tyr Asp Tyr Phe610 615 620Arg Lys Lys Leu Lys Lys Pro Ala Asp Ile Pro Asn Arg Phe Glu Met625 630 635 640
Lys Leu His Arg Asn Asn Ile Phe Glu Glu Ser Tyr Arg Arg Ile Met645 650 655Ser Val Lys Arg Pro Asp Val Leu Lys Ala Arg Leu Trp Ile Glu Phe660 665 670Glu Ser Glu Lys Gly Leu Asp Tyr Gly Gly Val Ala Arg Glu Trp Phe675 680 685Phe Leu Leu Ser Lys Glu Met Phe Asn Pro Tyr Tyr Gly Leu Phe Glu690 695 700Tyr Ser Ala Thr Asp Asn Tyr Thr Leu Gln Ile Asn Pro Asn Ser Gly705 710 715 720Leu Cys Asn Glu Asp His Leu Ser Tyr Phe Thr Phe Ile Gly Arg Val725 730 735Ala Gly Leu Ala Val Phe His Gly Lys Leu Leu Asp Gly Phe Phe Ile740 745 750Arg Pro Phe Tyr Lys Met Met Leu Gly Lys Gln Ile Thr Leu Asn Asp755 760 765Met Glu Ser Val Asp Ser Glu Tyr Tyr Asn Ser Leu Lys Trp Ile Leu770 775 780Glu Asn Asp Pro Thr Glu Leu Asp Leu Met Phe Cys Ile Asp Glu Glu785 790 795 800Asn Phe Gly Gln Thr Tyr Gln Val Asp Leu Lys Pro Asn Gly Ser Glu805 810 815
Ile Met Val Thr Asn Glu Asn Lys Arg Glu Tyr Ile Asp Leu Val Ile820 825 830Gln Trp Arg Phe Val Asn Arg Val Gln Lys Gln Met Asn Ala Phe Leu835 840 845Glu Gly Phe Thr Glu Leu Leu Pro Ile Asp Leu Ile Lys Ile Phe Asp850 855 860Glu Asn Glu Leu Glu Leu Leu Met Cys Gly Leu Gly Asp Val Asp Val865 870 875 880Asn Asp Trp Arg Gln His Ser Ile Tyr Lys Asn Gly Tyr Cys Pro Asn885 890 895His Pro Val Ile Gln Trp Phe Trp Lys Ala Val Leu Leu Met Asp Ala900 905 910Glu Lys Arg Ile Arg Leu Leu Gln Phe Val Thr Gly Thr Ser Arg Val915 920 925Pro Met Asn Gly Phe Ala Glu Leu Tyr Gly Ser Asn Gly Pro Gln Leu930 935 940Phe Thr Ile Glu Gln Trp Gly Ser Pro Glu Lys Leu Pro Arg Ala His945 950 955 960Thr Cys Phe Asn Arg Leu Asp Leu Pro Pro Tyr Glu Thr Phe Glu Asp965 970 975Leu Arg Glu Lys Leu Leu Met Ala Val Glu Asn Ala Gln Gly Phe Glu980 985 990
Gly Val Asp99權(quán)利要求
1.hsgk1蛋白或hsgk3蛋白的功能抑制劑或者h(yuǎn)sgk1基因或hsgk3基因的負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)劑用于降低細(xì)胞腫脹的用途。
2.hsgk1蛋白或hsgk3蛋白的功能抑制劑或者h(yuǎn)sgk1基因或hsgk3基因的負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)劑用于制備治療和/或預(yù)防白內(nèi)障、青光眼或糖尿病性神經(jīng)病變的藥物的用途。
3.如權(quán)利要求1或2的用途，其特征在于hsgk1蛋白或hsgk3蛋白的功能抑制劑是星孢素或白屈菜赤堿。
4.一種包含hsgk1蛋白或hsgk3蛋白的功能抑制劑或者h(yuǎn)sgk1基因或hsgk3基因的負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)劑的藥物，其用于治療和/或預(yù)防白內(nèi)障、青光眼或糖尿病性神經(jīng)病變的藥物。
5.包含根據(jù)Acc No.NM_005627的hsgk1序列或其一個(gè)片段的單鏈或雙鏈核酸用于診斷發(fā)展白內(nèi)障、青光眼和/或糖尿病性神經(jīng)病變的傾向性的用途。
6.如權(quán)利要求5的用途，其特征在于所述單鏈或雙鏈核酸包含hsgk1基因的至少一個(gè)多態(tài)性核苷酸，尤其是hsgk1基因的“SNP”。
7.如權(quán)利要求6的用途，其特征在于所述hsgk1基因的SNP選自下述SNPs組中在hsgk1基因內(nèi)含子2的732/733位置處的G插入，在hsgk1基因內(nèi)含子6的2071位置處的T/C置換和在hsgk1基因外顯子8中2617位置處的T/C置換。
8.包含根據(jù)Acc No.AF169035的hsgk3序列或其一個(gè)片段的單鏈或雙鏈核酸用于診斷發(fā)展白內(nèi)障、青光眼和/或糖尿病性神經(jīng)病變的傾向性的用途。
9.如權(quán)利要求8的用途，其特征在于所述單鏈或雙鏈核酸包含hsgk3基因的至少一個(gè)多態(tài)性核苷酸，尤其是hsgk3基因的“SNP”。
10.針對(duì)sgk家族人同系物的底物的抗體用于診斷發(fā)展白內(nèi)障、青光眼和糖尿病性神經(jīng)病變中的至少一種疾病的傾向性的用途，該抗體針對(duì)的是含有磷酸化形式或未磷酸化形式的磷酸化位點(diǎn)的人同系物表位。
11.如權(quán)利要求10的用途，其特征在于所述sgk家族人同系物的底物是Acc No.BAA23711的Nedd4-2。
12.一種用于診斷白內(nèi)障、青光眼和糖尿病性神經(jīng)病變之一的試劑盒，其中包含針對(duì)hsgk1或hsgk3的抗體，或者包含在嚴(yán)格條件下能夠與根據(jù)Acc No.NM_005627的hsgk1基因或根據(jù)Acc No.AF169035的hsgk3基因相雜交的核酸，或者組合性地包含這些抗體和核酸。
13.如權(quán)利要求12的試劑盒，其特征在于，在嚴(yán)格條件下，所述核酸能夠與根據(jù)Acc No.NM_005627的hsgk1基因或根據(jù)Acc No.AF169035的hsgk3基因的DNA區(qū)域相雜交，所述DNA區(qū)域包含hsgk1基因或hsgk3基因的多態(tài)性核苷酸，尤其是“SNPs”。
14.一種從許多測(cè)試物質(zhì)中鑒定和表征治療活性物質(zhì)的篩選方法，該治療活性物質(zhì)用于治療和/或預(yù)防選自包括白內(nèi)障、青光眼和糖尿病性神經(jīng)病變的組中的至少一種疾病，其中所述方法包括下列步驟a)在細(xì)胞中異源性地共表達(dá)i)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut1和ii)hsgk1和/或hsgk3b)在每種情況下，在存在至少一種測(cè)試物質(zhì)的情形下，培養(yǎng)A1至AX至少一種細(xì)胞等分試樣，其中每種情況下的所述至少一種測(cè)試物質(zhì)依細(xì)胞等分試樣的下標(biāo)1至X而不同，并在缺乏任何測(cè)試物質(zhì)的情況下培養(yǎng)對(duì)照細(xì)胞等分試樣B，c)與對(duì)照細(xì)胞等分試樣B中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut1的活性相比較，測(cè)定細(xì)胞等分試樣A1至AX中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut1的活性。
15.一種從許多測(cè)試物質(zhì)中鑒定和表征治療活性物質(zhì)的篩選方法，該治療活性物質(zhì)用于治療和/或預(yù)防選自包括白內(nèi)障、青光眼和糖尿病性神經(jīng)病變的組中的至少一種疾病，所述方法包括下列步驟d)在細(xì)胞的至少一個(gè)等分試樣A1至AX中異源性地共表達(dá)i)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut1和ii)hsgk1和/或hsgk3，和在細(xì)胞的至少一個(gè)等分試樣B1至BX中異源性地共表達(dá)i)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut1e)在每種情況下，在存在至少一種測(cè)試物質(zhì)的情形下培養(yǎng)A1至AX和B1至BX的細(xì)胞等分試樣，其中每種情況下的所述至少一種測(cè)試物質(zhì)依細(xì)胞等分試樣的下標(biāo)1至X而不同，f)在細(xì)胞等分試樣A1至AX和細(xì)胞等分試樣B1至BX中進(jìn)行葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Glut1活性的比較性測(cè)定。
全文摘要
本發(fā)明涉及hsgk1蛋白或hsgk3蛋白的功能抑制劑或者h(yuǎn)sgk1基因或hsgk3基因的負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)劑在制備治療和/或預(yù)防白內(nèi)障、青光眼或糖尿病性神經(jīng)病變的藥物中的用途。本發(fā)明的另一方面涉及包含AccNo.NM_005627的hsgk1序列或其片段、或者包含Acc No.AF169035的hsgk3序列或其片段的單鏈或雙鏈核酸用于診斷形成白內(nèi)障、青光眼和/或糖尿病性神經(jīng)病變的傾向的用途，以及診斷形成白內(nèi)障、青光眼和/或糖尿病性神經(jīng)病變傾向的試劑盒，其中包含上述核酸。本發(fā)明還涉及從許多測(cè)試物質(zhì)中鑒定和表征治療活性物質(zhì)的各種篩選方法，所述治療活性物質(zhì)用于治療和/或預(yù)防選自白內(nèi)障、青光眼或糖尿病性神經(jīng)病變的至少一種疾病。
文檔編號(hào)A61K31/713GK1771039SQ200480007034
公開日2006年5月10日 申請(qǐng)日期2004年2月5日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月7日
發(fā)明者弗洛里安·朗, 安德拉斯·巴斯亞恩 申請(qǐng)人:弗洛里安·朗