專利名稱：用于預(yù)防和/或治療膿毒癥的腸內(nèi)組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種包含蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的用于預(yù)防和/或治療內(nèi)毒素血癥、膿毒癥或菌血癥的腸內(nèi)組合物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
膿毒癥為相對大量的微生物或其碎片進(jìn)入機(jī)體時出現(xiàn)的一種疾病。其特征為它是一種與病原微生物或其毒素在血液中的出現(xiàn)和存留相關(guān)的系統(tǒng)性疾病。如果細(xì)菌的碎片即細(xì)菌內(nèi)毒素在血液中出現(xiàn)，這種癥狀也被稱為內(nèi)毒素血癥或內(nèi)毒素性休克。當(dāng)進(jìn)入血液的微生物可存活時，這種癥狀也被稱為菌血癥。內(nèi)毒素或脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞外膜的成分。脂磷壁酸質(zhì)(LTA)和肽聚糖(PG)為革蘭氏陽性菌外膜成分，其同樣能引起膿毒癥。腸，尤其結(jié)腸不僅是LPS和革蘭氏陰性菌如通常的大腸桿菌的聚集處(reservoir)，并且也是LTA、PG和革蘭氏陽性菌的聚集處。LPS以及LTA與PG能通過從腸的直接易位或通過革蘭氏陰性和/或革蘭氏陽性菌的易位而穿過腸壁進(jìn)入體循環(huán)。
對于健康人而言，革蘭氏陰性和/或陽性菌及LPS和/或LTA在腸中存在沒有特殊問題。然而，對于例如由局部缺血、手術(shù)、慢性炎癥、放療、外傷、使用某些藥物如非甾體抗炎藥或化療藥物導(dǎo)致的腸道屏障功能受損的人或動物，垂危患者如受到密切監(jiān)護(hù)的患者或被侵襲性病原體感染的患者來說，LPS、LTA、革蘭氏陽性菌和/或革蘭氏陰性菌能夠穿過腸壁而進(jìn)入體循環(huán)。一旦這些細(xì)菌進(jìn)入該系統(tǒng)，LPS和/或LTA就被釋放出來，這主要是由于吞噬系統(tǒng)的高度活性(或由細(xì)菌釋放)。該感染過程也可經(jīng)由肺(或感染期間)或經(jīng)由身體外圍部分(如由事故引起的外傷之后或在生褥瘡期間、在某些妊娠失調(diào)的后期(HELLP綜合癥)或輸血期間)而發(fā)生。
如果LPS和/或LTA不能被適當(dāng)?shù)刂泻?，則LPS和/或LTA在體內(nèi)的釋放可導(dǎo)致急性期反應(yīng)和膿毒癥。這種中和不當(dāng)可存在于通常在營養(yǎng)不良、禁食、外科手術(shù)、局部缺血癥狀、嚴(yán)重?zé)齻?、慢性感染、癌癥治療、肝或脾功能受損后，以及在垂危患者及在嚴(yán)重外科手術(shù)后必須直接恢復(fù)的患者中常見的免疫功能受損的動物/人中。
急性期反應(yīng)可通過測定血液中C反應(yīng)蛋白水平來確定。C反應(yīng)蛋白是一種人類急性期蛋白及先天性免疫系統(tǒng)的重要成分。C反應(yīng)蛋白能激活補(bǔ)體的經(jīng)典途徑，該途徑為C反應(yīng)蛋白提供宿主防御的主要機(jī)制之一。最近已經(jīng)確認(rèn)C反應(yīng)蛋白通過結(jié)合Fcγ受體從而與免疫系統(tǒng)的細(xì)胞相互作用。因此在先天性和獲得性免疫之間架起了一座橋梁，并提供及早、有效的抗菌反應(yīng)。此外，由于它保護(hù)脂多糖和細(xì)胞因子免受破壞性炎癥反應(yīng)的危害，因此可以預(yù)防細(xì)菌產(chǎn)物的致命副作用。如Januszkiewicz等于Clin.Nutr.2001，20(2)，181-182中所記載，膿毒癥的危險性可通過測定免疫系統(tǒng)細(xì)胞如T淋巴細(xì)胞中的蛋白質(zhì)的體內(nèi)合成來確定。
膿毒癥可導(dǎo)致多種器官衰竭或甚至是死亡。因此，找到一種治療、特別是預(yù)防膿毒癥的方法非常重要?，F(xiàn)有技術(shù)中已提出若干方法來緩解癥狀或預(yù)防或治療膿毒癥。
WO-A-98/32428中提供一種方法，其中記載了為減輕和/或預(yù)防由內(nèi)毒素引起的損傷及死亡，在腸內(nèi)營養(yǎng)(enteral feeding)中使用膽堿。給藥量為每天1.5到20g。膽堿以酒石酸膽堿的形式給藥。
另一種方法中應(yīng)用磷脂，如US 5,434,183中所述，其中記載了包含ω-3脂肪酸DHA和EPA的磷脂與植物油和/或海產(chǎn)品油(marine oil)相結(jié)合在治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和膿毒癥中的抗炎和/或免疫抑制作用。這使得可獲得非常低的血清膽固醇和血清甘油三酯水平。
WO-A-96/04916中記載了含有至少一種磷脂以及膽烷酸(cholanoicacid)或膽烷酸鹽的不含蛋白質(zhì)和肽的、用于預(yù)防和治療內(nèi)毒素相關(guān)病癥的靜脈內(nèi)注射制劑。可任選地加入中性脂質(zhì)。
JP-A-05320043記載由磷脂尤其是磷脂酰膽堿、膽固醇以及飽和脂肪酸尤其是肉豆蔻酸組成的脂多糖清除劑。這些成分被轉(zhuǎn)化成可用于靜脈內(nèi)給藥溶液中的脂質(zhì)體，以預(yù)防或治療局部缺血或局部缺血后的組織損傷。膽固醇及磷脂酰膽堿以及肉豆蔻酸的適宜濃度比例為5-10∶5-10∶1-5。
US 4,474,773中也記載磷脂、甘油三酯以及膽固醇聯(lián)合給藥用于治療免疫系統(tǒng)失調(diào)以及其它病癥，其中依照US 4,474,773的給藥可有利地為靜脈內(nèi)給藥。
現(xiàn)有技術(shù)中治療膿毒癥的這些組合物的缺點(diǎn)為劑型復(fù)雜，如脂質(zhì)體。另一缺點(diǎn)為預(yù)期的非腸道給藥對患者帶來更大的風(fēng)險。因此需要一種相對簡單、有效、安全的制劑來預(yù)防及治療膿毒癥。
公開日期為2003年2月6日的WO-A-03/009704中記載磷脂、甘油三酯和膽固醇作為腸內(nèi)營養(yǎng)來預(yù)防和/治療膿毒癥，其中提及膽固醇的濃度至少為組合物重量的0.5％，并且提供磷脂與甘油三酯比例為0.32至0.80的例子。膽固醇通常與動脈的損害有關(guān)，并且據(jù)認(rèn)為它在產(chǎn)品中的存在可降低消費(fèi)者對它們的接受度。
在DE-A-19.644.518中記載比例為0.25-0.67的磷脂和甘油三酯的混合物，該混合物可被用作腸內(nèi)營養(yǎng)。作為脂質(zhì)的來源，此處需要花生四烯酸和/或二十二碳六烯酸，而多不飽和脂肪酸通常是不穩(wěn)定的。
WO-A-90/15609中記載磷脂、尤其是僅包含ω-6脂肪酸的基本純的磷脂酰膽堿在抵抗細(xì)菌感染中的應(yīng)用，但是未提及內(nèi)毒素血癥和膿毒癥。該抗菌作用旨在通過巨噬細(xì)胞來殺死細(xì)菌，該殺滅作用導(dǎo)致內(nèi)毒素的大量釋放，這不利于預(yù)防膿毒癥。
現(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)通過包含蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的腸內(nèi)組合物可有效預(yù)防和/或治療膿毒癥、菌血癥和/或內(nèi)毒素血癥，其中脂質(zhì)部分含有特定比例的磷脂和甘油三酯。
本發(fā)明基于以下發(fā)現(xiàn)，LPS和/或LTA在循環(huán)中通過結(jié)合入脂蛋白如LDL(低密度脂蛋白)、VLDL(極低密度脂蛋白)、乳糜微粒和HDL(高密度脂蛋白)，尤其是乳糜微粒來解毒。本發(fā)明的發(fā)明人相信乳糜微粒在吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)親脂性物質(zhì)中起重要作用，這些親脂物質(zhì)通常為如食物成分和可通過腸道進(jìn)入機(jī)體但也可在身體各個部位于消除死亡的細(xì)菌細(xì)胞殘余物時形成的毒素(如LPS和/或LTA)。乳糜微粒在與腸相關(guān)的淋巴組織(GALT)中釋放并吸收細(xì)菌溶解后在腸上皮細(xì)胞尤其是淋巴結(jié)中釋放的LPS和/或LTA。乳糜微粒從淋巴結(jié)經(jīng)胸導(dǎo)管轉(zhuǎn)運(yùn)至左靜脈角，其將乳糜微粒與其它脂蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)到心臟，然后將它們轉(zhuǎn)運(yùn)到網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(尤其是脾)和肝臟(肝巨嗜細(xì)胞)。因此，乳糜微粒也可用作肝臟中脂溶性物質(zhì)的傳遞載體，從而防止由于吸收不良而出現(xiàn)的損耗。
不僅在血漿，而且尤其在GALT中，例如在腸道長度相當(dāng)大的部分中以及延長的時期內(nèi)，保持乳靡微粒的自然水平確保在身體的若干部位如腸或肺中釋放的大部分LPS和/或LTA可被中和，并充分減少局部出現(xiàn)高水平LPS和/或LTA的危險。
鑒于這些發(fā)現(xiàn)，因此根據(jù)本發(fā)明有必要以蛋白質(zhì)和包含磷脂和甘油三酯的脂質(zhì)的組合作為腸內(nèi)組合物給藥，而不是按照現(xiàn)有技術(shù)作為靜脈內(nèi)組合物給藥。蛋白質(zhì)和所述脂質(zhì)的組合在腸內(nèi)消化，由于所述產(chǎn)品被消化得相當(dāng)慢從而確保乳靡微粒在GALT中于較長時間內(nèi)相對恒定地釋放。此外，磷脂和甘油三酯的組合如脂質(zhì)體制劑具有所使用的成分不需要特殊的預(yù)處理的優(yōu)點(diǎn)，這可產(chǎn)生成本相當(dāng)?shù)偷挠行Мa(chǎn)品。此外，所述組合物的腸內(nèi)給藥簡單并且安全。
如以上所闡述，與提供磷脂、甘油三酯和膽固醇靜脈給藥的US4,474,773相比，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)腸內(nèi)給藥有利于乳靡微粒在GALT中的形成，因此可有效預(yù)防和/或治療膿毒癥。就此而言，據(jù)信US 4,474,773中的教導(dǎo)對該預(yù)防和/或治療是有害的。實(shí)際上，US 4,474,773通過增加淋巴細(xì)胞的生成而刺激免疫系統(tǒng)。然而，這種刺激將面臨產(chǎn)生細(xì)胞因子的問題，其成分牽涉到可形成膿毒癥的促炎癥反應(yīng)(pro-inflammatory response)(Intensive Care Med.2000；26Suppl.1S 124-8，Immunomodulatory therapyin sepsis，Kox WJ等)。這進(jìn)一步由Inflamm.Res.1998May；47(5)201-10，″The inflammatory basis of trauma/shock associated multiple organ failure″，Yao YM等所證實(shí)，其中記載免疫系統(tǒng)的激活可產(chǎn)生最終將導(dǎo)致持續(xù)性炎癥及多種組織損傷的全身性炎癥。因此，盡管按照US 4,474,773的教導(dǎo)可刺激免疫系統(tǒng)，但這對膿毒癥的治療和/或預(yù)防是有害的。
Wang X.D.等在Scand.J.Gastroenterol 19941117-1121中記載，磷脂的腸內(nèi)給藥可顯著降低90％肝臟切除的大鼠中細(xì)菌易位的發(fā)生率。他們記載，在某些情況下的細(xì)菌易位可引起膿毒癥或菌血癥。其繼而推斷，細(xì)菌易位的減少可能是磷脂滋養(yǎng)腸粘膜并維持腸屏障或作為粘膜表面活性劑防止腸屏障功能的結(jié)果。然而，這篇文章沒有提及乳糜微粒，更不用說它們與膿毒癥的預(yù)防或治療的關(guān)系。
在WO-A-01/19356——或與其對應(yīng)的EP-A-1.090.636——中還提供另外一種方法，其中指示將中鏈甘油三酯與脂質(zhì)的組合經(jīng)腸內(nèi)給藥以預(yù)防膿毒癥，并舉例說明磷脂與甘油三酯的比例小于1。但仍未發(fā)現(xiàn)中鏈甘油三酯在LPS的中和或乳糜微粒的形成方面有效。
根據(jù)WO-A-03/009704、DE-A-19.644.518和WO-A-0l/19356，在包含磷脂和甘油三酯的用于預(yù)防膿毒癥的組合物中，這些成分的比例為可實(shí)現(xiàn)組合物中甘油三酯相對于磷脂過量。這些產(chǎn)品沒有如在磷脂與甘油三酯比例如本發(fā)明之高的產(chǎn)品中所觀察到的不穩(wěn)定的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個方面提供包含蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的組合物在制備通過腸內(nèi)給藥用于治療和/或預(yù)防內(nèi)毒素血癥、膿毒癥或菌血癥的營養(yǎng)組合物中的應(yīng)用，所述脂質(zhì)包含磷脂和甘油三酯，且磷脂和甘油三酯的重量比大于1.0，其中所述組合物包含小于0.5重量％的膽固醇或其前體。
本發(fā)明另一個方面提供包含以下成分的腸內(nèi)組合物
a)至少1重量％的蛋白質(zhì)和/或肽，以及b)至少3.5重量％的脂質(zhì)，該脂質(zhì)包含磷脂和甘油三酯，且磷脂與甘油三酯的重量比大于1.0，且其中所述組合物包含小于0.5重量％的膽固醇或其前體。
磷脂與甘油三酯比例大于1的組合物可以下列方法使其穩(wěn)定i)使用某些磷脂的組合；ii)有機(jī)酸的存在；和/或iii)在制備過程中控制pH。此外，已發(fā)現(xiàn)當(dāng)本發(fā)明的組合物中存在的膽固醇低于0.5重量％時，組合物的穩(wěn)定性可進(jìn)一步提高。
具體實(shí)施例方式
脂質(zhì)為本發(fā)明的必需成分。代表性地，本發(fā)明組合物中脂質(zhì)存在的量至少為組合物重量的3.5％，優(yōu)選為至少組合物重量的4％，更優(yōu)選為至少組合物重量的6％。優(yōu)選地，所述脂質(zhì)存在的最高水平為組合物重量的50％，更優(yōu)選地，最高水平為組合物重量的20％。
用于本發(fā)明目的的必需脂質(zhì)為磷脂。用于此處的磷脂選自磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸、其原料及其混合物。
作為磷脂的原料，可以應(yīng)用溶血磷脂、富含特定磷脂或含相對純的(合成的)磷脂的制品。盡管消耗合成的磷脂甚至是溶血磷脂以后在體內(nèi)形成乳糜微粒，但優(yōu)選使用天然原料，尤其是大豆卵磷酯和卵卵磷酯(egglecithin)。實(shí)際上，這些對消費(fèi)者來說經(jīng)濟(jì)且易接受，但同樣發(fā)現(xiàn)它們在最終產(chǎn)品中比較穩(wěn)定。
優(yōu)選地，磷脂是作為磷脂的混合物來給藥，尤其是包含磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油和磷脂酸中的一種或更多種。更優(yōu)選地，該組合物至少包含磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺。
天然原料通常包含磷脂混合物。因此，此處用作磷脂的天然原料的大豆卵磷脂基于總磷脂含量優(yōu)選含有20至40重量％的磷脂酰膽堿以及20至33重量％的磷脂酰乙醇胺。荷負(fù)電的磷脂的量，即磷脂酸和/或磷脂酰絲氨酸和/或磷脂酰肌醇和/或磷脂酰甘油在大豆卵磷酯中存在的總量為10至50重量％。
此處用作磷脂天然原料的卵磷酯提取物包含73-82重量％的磷脂酰膽堿和15-22重量％的磷脂酰乙醇胺。在卵磷酯中存在的荷負(fù)電的磷脂的量小于2重量％。
代表性地，以組合物的脂質(zhì)部分的重量計(jì)，用于本發(fā)明目的磷脂存在的量為23％至95％，優(yōu)選為50％至95％，更優(yōu)選為大于50％。盡管如此，如今也已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明組合物中的脂質(zhì)部分存在高水平的磷脂時可進(jìn)一步改善對膿毒癥的預(yù)防和/或治療。因此，優(yōu)選地磷脂以該組合物的脂質(zhì)部分的45％至78％、更優(yōu)選地為50％至69％的水平而應(yīng)用或存在；磷脂部分優(yōu)選地由磷脂和甘油三酯的組合來代表。
尤其是在磷脂含量高時，為提高本發(fā)明組合物的穩(wěn)定性，磷脂組合物為當(dāng)存在磷脂酰膽堿時，其量小于或等于在組合物中存在的磷脂的總量的72％，優(yōu)選為小于50％，更優(yōu)選為小于35重量％，最優(yōu)選為小于組合物中存在的磷脂的總量的25重量％。當(dāng)存在時，磷脂酰乙醇胺的重量百分比優(yōu)選為低于組合物中存在的磷脂總量的70％，更優(yōu)選為低于50％。當(dāng)存在時，荷負(fù)電的磷脂的重量百分比，即磷脂酸和/或磷脂酰絲氨酸和/或磷脂酰肌醇和/或磷脂酰甘油的總量優(yōu)選為大于5％，更優(yōu)選為大于7％，最優(yōu)選為大于10％。
因此，為了本發(fā)明的目的，鑒于它們的磷脂含量，特別是磷脂酰膽堿的高含量及荷負(fù)電的磷脂的低含量，優(yōu)選為不使用純卵卵磷脂作為磷脂的唯一來源，而使用純卵卵磷脂與下列任何成分或其混合物的混合物大豆卵磷脂或大豆磷脂或其它來源的卵磷脂或磷脂，從而獲得比卵卵磷脂中所發(fā)現(xiàn)的更少量的磷脂酰乙醇胺與磷脂酰膽堿以及更高量的荷負(fù)電的磷脂。
在磷脂中的脂肪酸尤其包含少于30％的二十二碳六烯酸和/或二十碳五烯酸。本發(fā)明的磷脂尤其選自由長鏈脂肪酸脂酯化的甘油。長鏈脂肪酸是指含至少18個碳原子的脂肪酸。相對于磷脂中脂肪酸的總量，以摩爾計(jì)長鏈脂肪酸的量應(yīng)該至少為50％，優(yōu)選為多于60％，最優(yōu)選為多于70％。優(yōu)選的長鏈脂肪酸為十八碳四烯算、棕櫚酸、油酸、α-亞麻酸、亞油酸、γ-亞麻酸、結(jié)合亞油酸、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸和花生四烯酸。在磷脂部分中的肉豆蔻酸的量優(yōu)選為小于40％，更優(yōu)選為小于25重量％。通常包含長度為6到12個碳原子的中鏈脂肪酸由于它們在中和LPS方面的性能低從而在此處不宜用作主要成分。因此，磷脂部分優(yōu)選包含至少50重量％、更優(yōu)選為多于70重量％、最優(yōu)選為多于75重量％的長鏈脂肪酰基。
磷脂是以每單位劑量每公斤體重0.008-2.0克、優(yōu)選為0.01-2.0克、更優(yōu)選為多于0.035克的量給藥。對于人類，假設(shè)體重為70公斤，則每單位劑量約為0.6至140g，優(yōu)選為約0.7-140g，更優(yōu)選為每單位劑量多于2.5g。磷脂以至少每24小時一次、優(yōu)選為每2-12小時、更優(yōu)選為每3-8小時或甚至以持續(xù)的劑量給藥。除非另有說明，否則當(dāng)非持續(xù)給藥時每24小時的劑量范圍為2至12、優(yōu)選為2至7，就此而言，日劑量為每公斤體重0.008-2.0克，優(yōu)選為0.01-2.0克，更優(yōu)選為多于0.035克。當(dāng)持續(xù)給藥時，24小時的持續(xù)給藥量構(gòu)成單一劑量。
當(dāng)使用短期管飼時，本發(fā)明尤其適于使用。因此，對于腸內(nèi)營養(yǎng)組合物整體而言，并考慮到2000千卡的消耗量，用于短期管飼的磷脂的每日劑量為12-140g，優(yōu)選為12-100g，更優(yōu)選為12-75g，甚至更優(yōu)選為16-75g，并且最優(yōu)選為30-75g。對于短期管飼，尤其優(yōu)選為每日16-60g磷脂。因此，典型的管飼每2000千卡包含12-140g、優(yōu)選為12-100g、更優(yōu)選為12-75g、甚至更優(yōu)選為16-75g，并且最優(yōu)選為30-75g磷脂。特別優(yōu)選為每2000千卡16-60g。
當(dāng)該組合物用作增補(bǔ)劑時，并考慮到200-600ml的消耗量以及約10％的脂質(zhì)含量，對于增補(bǔ)劑來說磷脂的每日劑量優(yōu)選為2.3-56g，更優(yōu)選為5-50g。當(dāng)該組合物用作增補(bǔ)劑時，且考慮到消耗量為200-600ml以及脂質(zhì)含量約為5％，對于增補(bǔ)劑來說磷脂的每日劑量優(yōu)選為2.3-28g，更優(yōu)選為5-25g。
用于本發(fā)明目的的另一種必需的脂質(zhì)為甘油三酯。本發(fā)明的甘油三酯尤其選自由長鏈脂肪酸酯化的甘油。長鏈脂肪酸意味著至少具有18個碳原子的脂肪酸。為了明顯觀察到乳糜微粒在體內(nèi)的形成，相對于甘油三酯中脂肪酸的總量，以摩爾計(jì)長鏈脂肪酸的量應(yīng)該至少為50％，優(yōu)選為多于60％，最優(yōu)選為多于70％。優(yōu)選的長鏈脂肪酸為十八碳四烯酸、油酸、α-亞麻酸、亞油酸、γ-亞麻酸、結(jié)合亞油酸、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸和花生四烯酸。更優(yōu)選地，應(yīng)用多不飽和脂肪酸可產(chǎn)生更有效的乳糜微粒，即產(chǎn)生更適合清除LPS和/或LTA的乳糜微粒。甘油三酯部分的肉豆蔻酸的量優(yōu)選為小于40％，更優(yōu)選為小于25重量％。通常包括鏈長度范圍為6到12個碳原子的中鏈脂肪酸，由于它們在中和LPS及乳靡微粒形成方面的性能低從而在此處不宜用作甘油三酯的主要成分。因此，甘油三酯部分優(yōu)選包含至少50重量％、更優(yōu)選為多于70重量％、最優(yōu)選為多于75％的長鏈脂肪甘油三酯。甘油三酯中的脂肪酸尤其包含少于30％的二十二碳六烯酸和/或二十碳五烯酸。
優(yōu)選地，在磷脂和甘油三酯部分中α-亞麻酸的量不超過總的食物組合物能量的4.5％，而亞油酸的量不超過總組合物能量的10％。
甘油三酯的實(shí)例為植物油如大豆油、菜籽油、玉米油、橄欖油、向日葵油、芝麻油、紅花油、麥芽油、花生油、月見草油，來自動物的油如蛋黃油(egg oil)或其組合物，還有海產(chǎn)品油，如任選與一種或多種植物油混合的魚油和海藻油也可適用。
通常，用于本發(fā)明目的的甘油三酯在本發(fā)明組合物的脂質(zhì)部分以至少7重量％-少于77重量％的量存在。此外，當(dāng)磷脂存在于高含量的脂質(zhì)部分時，優(yōu)選在本發(fā)明組合物的脂質(zhì)部分應(yīng)用7重量％至50重量％水平的甘油三酯。
甘油三酯的每日劑量為0.01至1.5g/kg體重。這使得向一位體重為70kg的病人以約0.7至105g、優(yōu)選為約0.7至90g的甘油三酯給藥。這是以分劑量(每24小時1至12，優(yōu)選為2至7次劑量)或以持續(xù)劑量(作為1個劑量)給藥。給藥方案及甘油三酯的量經(jīng)選擇使每單位劑量為0.01至1.5g/千克體重。
磷脂和甘油三磷酸酯的每日劑量經(jīng)選擇從而可使脂蛋白從低水平恢復(fù)到飲食良好的健康人中所觀察到的水平，或者甚至與健康人相比較，在短期內(nèi)提高到120％或甚至是150％以上，和/或用于提高血液中磷脂/脂蛋白的比例。甘油三酯的每日劑量優(yōu)選為從0.01至1.5g/kg體重。實(shí)際上，據(jù)信具有高重量比例的磷脂為優(yōu)選。含有大量磷脂的乳糜微粒(和其它脂蛋白)在中和內(nèi)毒素方面具有較高的能力。此外，大量的磷脂有助于甘油三酯的吸收。
本發(fā)明組合物的成分以其天然形式或作為單獨(dú)成分存在。這意味著本發(fā)明并未設(shè)想采用脂質(zhì)體。
在本發(fā)明的組合物中，磷脂與甘油三酯的重量比例大于1，更優(yōu)選為大于1.5，甚至更優(yōu)選為大于2。
作為本發(fā)明的磷脂和甘油三酯的組合的原料，可以使用卵類如蛋黃油或蛋粉形式的蛋。卵類尤其是其脂質(zhì)部分已包含所需的成分。根據(jù)該組合物的最終用途以及所使用的脂質(zhì)提取物的類型，所有或某些成分(磷脂和甘油三酯)需要進(jìn)行補(bǔ)充以落在所示的范圍內(nèi)，從而使患者的膳食含有適量的這些成分。如果應(yīng)用飼料里含有特殊脂質(zhì)混合物的動物的卵類則尤其有利，這些卵含有含量更高的α-亞麻酸，結(jié)合油酸及二十二碳六烯酸。如上所述，純卵卵磷脂與下列任意成分或其混合物相混合大豆卵磷脂或大豆磷脂或其它來源的卵磷脂或磷脂，從而獲得比卵卵磷酯中所發(fā)現(xiàn)的更低量的磷脂酰乙醇胺與磷脂酰膽堿以及更高量的荷負(fù)電的磷脂。
本發(fā)明另一種必需成分為蛋白質(zhì)。在脂質(zhì)組合中加入蛋白質(zhì)能形成完全營養(yǎng)組合物(complete nutrition composition)。完全營養(yǎng)組合物的給藥對病人或重癥監(jiān)護(hù)的病人而言非常必要，因?yàn)槠淠茉谝环N組合物中傳遞所有必需常量營養(yǎng)物以及微量營養(yǎng)物。優(yōu)選地，該蛋白質(zhì)選自乳蛋白、乳清蛋白、酪蛋白、大豆蛋白、卵蛋白以及這些蛋白的混合物。該蛋白質(zhì)可以是完整蛋白的形式或者可以(部分)被水解。其它蛋白質(zhì)如小麥、豌豆和燕麥蛋白、其水解產(chǎn)物或其混合物也可使用。此外，如果需要，蛋白質(zhì)原料可以包括游離氨基酸。
蛋白質(zhì)可以有利地由卵類提供。實(shí)際上，除包含本發(fā)明的適當(dāng)成分外，卵類還具有包含有益的蛋白質(zhì)的優(yōu)勢。卵類的蛋白質(zhì)部分含有可與細(xì)菌相互作用的免疫球蛋白。免疫球蛋白尤其是IgY以及本發(fā)明成分在腸內(nèi)的存在，提供了一種非常有效的系統(tǒng)以防止細(xì)菌穿過腸壁而易位。
這些免疫球蛋白尤其是IgY優(yōu)選為適于與那些對于導(dǎo)致膿毒癥形成最大的威脅的菌株特異性地結(jié)合。根據(jù)本領(lǐng)域熟知的方法，這些免疫球蛋白可在鳥體內(nèi)被誘導(dǎo)并轉(zhuǎn)移到卵中。因此尤其適用于本發(fā)明的產(chǎn)品為超免疫化的卵(hyperimmunised egg)，它可以在輕微的巴氏消毒后應(yīng)用，這樣能保持免疫球蛋白主要處于未變性和活性的狀態(tài)下。
優(yōu)選地，至少30重量％的蛋白質(zhì)材料由分子重量至少為0.3kDa、更優(yōu)選至少0.5kDa、最優(yōu)選為至少1kDa、甚至最優(yōu)選為至少2kDa的蛋白質(zhì)和/或肽組成。已發(fā)現(xiàn)這些蛋白質(zhì)尤其利于在本發(fā)明中應(yīng)用。此外，使用更高分子量如分子量高于10kDa的蛋白質(zhì)可產(chǎn)生更為穩(wěn)定的產(chǎn)品。
該組合物優(yōu)選為含有每日每公斤體重至少0.02g、優(yōu)選為0.07至2.5g、更優(yōu)選為0.08至2.0g的蛋白質(zhì)。對于人類而言，假設(shè)體重為70公斤，則每天至少1.4g、優(yōu)選為4.9至175g、更優(yōu)選為5.6至140g的蛋白質(zhì)。每單位劑量中蛋白質(zhì)的量至少為每公斤體重0.02g、優(yōu)選為0.07至2.5g、更優(yōu)選為0.08至2.0g。
當(dāng)所用的蛋白質(zhì)源自超免疫的鳥(hyperimmunised birds)卵時，IgY的每日給藥劑量則優(yōu)選為0.2至120mg。此外，由于當(dāng)與本發(fā)明的組合物聯(lián)合應(yīng)用時，發(fā)現(xiàn)IgY可有效地增加對細(xì)菌易位的抑制，IgY的每日給藥劑量更優(yōu)選為在0.2至800mg的范圍內(nèi)，最優(yōu)選為10到600mg。該成分的劑量優(yōu)選為每劑每公斤體重0.1mg至10mg。對于人類，假設(shè)體重為70kg，則每單位劑量為7-700mg。
可根據(jù)需要治療的患者的重量來確定劑量。每日劑量可通過劑量與每天服用該劑量的次數(shù)相乘來計(jì)算。劑量方案應(yīng)適當(dāng)調(diào)節(jié)使之保持淋巴中高水平的乳靡微粒，如通過每2-12小時重復(fù)給藥，優(yōu)選為3-8小時或甚至持續(xù)給藥。對于一組病人建議在腸內(nèi)管飼。
本發(fā)明優(yōu)選的特點(diǎn)為組合物中基本不含膽固醇或其前體。事實(shí)上，已發(fā)現(xiàn)膽固醇的存在可顯著減少或消除而不影響LPS的中和和/或乳靡微粒的形成。顯著減少膽固醇水平或甚至消除的另一優(yōu)點(diǎn)為消費(fèi)者對該產(chǎn)品的感知。由于膽固醇通常與動脈血管的損傷有關(guān)，并可進(jìn)一步惡化患者的病情，因此該產(chǎn)品被認(rèn)為對消費(fèi)者更健康。
膽固醇的前體是指膽固醇酯，如那些存在于天然提取物(卵)和合成來源如與有機(jī)酸所成的酯，如膽固醇醋酸酯、膽固醇半琥珀酸酯、膽固醇正丁酸酯、膽固醇油酸酯或膽固醇與磷脂所成的酯。
優(yōu)選地，“基本不含膽固醇或其前體”是指組合物中含有小于0.5重量％的膽固醇或其前體，優(yōu)選為小于0.2重量％，更優(yōu)選為不含膽固醇及其前體。
還發(fā)現(xiàn)當(dāng)膽固醇僅以很低的量存在或甚至不存在時，尤其當(dāng)應(yīng)用大豆卵磷酯時可獲得組合物的穩(wěn)定性以及乳靡微粒的產(chǎn)生方面的最佳反應(yīng)。包含卵卵磷酯的組合物有時具有生成不利的組合物乳狀液的趨勢。已發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用這種極低的膽固醇水平并與源于大豆的磷脂結(jié)合或甚至在如此處所述的包含磷脂和甘油三酯的組合物中不含膽固醇或其前體，可以解決該難題并同時仍提供有效的乳靡微粒生成。
當(dāng)存在時，膽固醇或折算為膽固醇的膽固醇的等同物的劑量優(yōu)選為每劑每公斤體重少于2mg，因此對于人類每單位劑量小于0.14g，優(yōu)選為小于0.1g。
為了進(jìn)一步提高組合物的穩(wěn)定性，該腸內(nèi)組合物還可包含有機(jī)酸如檸檬酸、蘋果酸、乳酸、它們的鹽或其混合物。此處所用的優(yōu)選的有機(jī)酸為多元酸(polydentate acid)如檸檬酸、其鹽或其混合物。當(dāng)存在時，這些有機(jī)酸在組合物中的濃度為組合物重量的至少0.5％，更優(yōu)選為高于0.6％，最優(yōu)選為多于0.8％直至2％，更優(yōu)選為直至1.5％?；诮M合物的干重計(jì)，有機(jī)酸的量在多于2.5重量％、優(yōu)選為多于3重量％、更優(yōu)選為多于4重量％、最高至10重量％的范圍內(nèi)。
該腸內(nèi)組合物還可進(jìn)一步含有乳酸菌、乳酸菌產(chǎn)物、益生素、額外的L-谷氨酰胺和/或L-精氨酸、抗氧化劑、纖維、糖類、多糖、維生素、礦物質(zhì)如可以促進(jìn)脂溶性物質(zhì)吸收的鋅、以及通常存在于腸內(nèi)營養(yǎng)中的其它成分。
當(dāng)存在時，糖類可為任意適合的糖或糖類混合物。例如，糖類可以是葡萄糖、蔗糖、麥芽糖糊精、改性淀粉、直鏈淀粉、木薯淀粉、玉米淀粉、玉米糖漿、或果糖、或它們的混合物。如需要低的重量克分子滲透壓濃度則優(yōu)選為麥芽糖糊精。
該組合物可包含脂溶性物質(zhì)。尤其選自維生素K(甲基萘醌類)、泛醌類、類胡蘿卜素如維生素A、特定的脂肪酸如結(jié)合型亞油酸、硫辛酸和維生素D。在本發(fā)明的脂質(zhì)混合物中包含一種或更多種這些成分可有效減少膿毒癥的流行、減少急性期反應(yīng)并改善手術(shù)或外傷后的恢復(fù)。
當(dāng)它們與本發(fā)明的脂質(zhì)混合物以及任選的鋅鹽一起包含在腸內(nèi)產(chǎn)品中時，比現(xiàn)有技術(shù)中更少量的這些脂溶性物質(zhì)可有效。
還優(yōu)選在制備過程中以每劑量10-100、優(yōu)選為20-50mg/kg體重的量并入小檗堿或小檗屬植物或Coccinia fenestratum的提取物。
本發(fā)明的腸內(nèi)組合物優(yōu)選用于預(yù)防和/或治療膿毒癥、菌血癥和/或內(nèi)毒素血癥(內(nèi)毒素性休克)以及推遲急性期反應(yīng)。該組合物尤其適用于以下病人的治療經(jīng)歷大手術(shù)的病人、患危重疾病的病人、患炎性腸病(IBD)的病人、患HELLP綜合征的病人、大體而言細(xì)菌易位和患膿毒癥危險性增大的病人，更具體而言為那些重傷、燒傷、尤其是由細(xì)菌、褥瘡、在放療/化療期間引起或并發(fā)的肺炎的病人或免疫系統(tǒng)受損的病人如未成熟兒或患有老年性疾病的人、或患膽管阻塞的人。
就手術(shù)而言，據(jù)信內(nèi)毒素血癥的危險性與病人需要在術(shù)前及術(shù)后禁食僅攝取少量食物的事實(shí)相關(guān)。因此，乳靡微粒的正常量減少，這使它們更容易受到LPS的傷害。通常這些病人可服用本發(fā)明的組合物直至術(shù)前3小時及術(shù)后不久，同時本發(fā)明還設(shè)想在術(shù)前更短的時間內(nèi)使用該組合物的選擇。在這種情況下，組合物中的總脂質(zhì)水平通常在每劑5至70克、優(yōu)選為10至50g范圍內(nèi)。該劑量可通過口服增補(bǔ)劑供給，優(yōu)選為液體如相對小體積如100到700、優(yōu)選為150到600ml的牛奶基飲料。
該組合物還可被允許攝取有限體積的人服用，如患有神經(jīng)性厭食癥的人或處于諸如癌癥或AIDS的疾病晚期的病人，以及許多老年病人。這種情況下，該組合物中甘油三酯水平將在0.7至30、優(yōu)選為2至15g/劑的范圍內(nèi)以相對小的體積給藥。
大體而言，本發(fā)明組合物也可用于治療易受感染的哺乳動物，如由于不規(guī)則的喂飼方式而易受感染的例如牛和豬，尤其是斷奶的豬，其中感染會導(dǎo)致肉質(zhì)降低。運(yùn)輸過程中的緊張也可導(dǎo)致動物中的細(xì)菌易位。
本發(fā)明的腸內(nèi)組合物可口服或管飼，優(yōu)選為管飼。該管可以為鼻食管(nasooesophagial)、鼻胃管(nasogastric)或鼻空腸管(nasojejunal)，還可預(yù)期胃造口術(shù)或空腸造口術(shù)(jejustomy)。經(jīng)口營養(yǎng)可以是液體形式或作為膠囊或粉末的完全營養(yǎng)或食品增補(bǔ)劑。優(yōu)選的液體形式為分散劑。由于上文所述原因，靜脈組合物被排除在本發(fā)明之外。
因此本發(fā)明還提供一種腸內(nèi)食物，其每劑含有8-180g、優(yōu)選為8-140g、更優(yōu)選為8-120g、甚至更優(yōu)選為12-120g以及最優(yōu)選為12-80g的包含磷脂和甘油三酯組合的脂質(zhì)；3-120g、優(yōu)選為3-100g、更優(yōu)選為12-100g并最優(yōu)選為30-90g的蛋白質(zhì)部分；以及任選的1.2-400g、優(yōu)選為5-200g的糖類部分。
制作這種腸內(nèi)組合物優(yōu)選的方法包括獨(dú)立地混合脂質(zhì)成分和其它組合物成分。pH優(yōu)選調(diào)節(jié)至約7.0-7.2。之后該脂質(zhì)成分優(yōu)選在高剪切力下與混合物合并。然后將該混合物用巴氏法滅菌并均質(zhì)化(優(yōu)選在550bar和50bar下進(jìn)行)。一旦均質(zhì)化，在于20℃下測量時將混合物的pH調(diào)節(jié)至6至8的范圍內(nèi)。事實(shí)上，已發(fā)現(xiàn)在巴氏法滅菌期間將pH調(diào)節(jié)到6至8的范圍內(nèi)并優(yōu)選為pH 6.2有利于得到具有最佳穩(wěn)定性的組合物。調(diào)節(jié)pH的優(yōu)選試劑為檸檬酸鹽和檸檬酸的混合物(重量比1∶1)。然而，此處也可使用其它能夠結(jié)合二價陽離子的調(diào)節(jié)劑。pH一經(jīng)調(diào)節(jié)，就對混合物滅菌。
因此，在一個優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供制備上述定義的組合物的方法，其中該方法包括下列步驟a)將非脂質(zhì)成分混合在一起并調(diào)節(jié)pH至中性，pH范圍為6到8；b)通過混合將脂質(zhì)成分與步驟a)中所得的混合物合并；c)用巴氏法對步驟b)中所得的混合物進(jìn)行滅菌并通過以基于組合物干重計(jì)至少2.5重量％的量加入優(yōu)選為檸檬酸、檸檬酸鹽或其混合物的有機(jī)酸將pH調(diào)節(jié)到6-8的范圍內(nèi)；以及d)對混合物進(jìn)行滅菌。
礦物質(zhì)和維生素的加入可以通過以下方法來實(shí)現(xiàn)分別對組合物其它組成部分以及礦物質(zhì)及維生素成分滅菌，然后將經(jīng)滅菌的礦物質(zhì)與維生素并入經(jīng)滅菌的組合物中，或者根據(jù)上述方法加入礦物質(zhì)和維生素以及其它組分，在組合物進(jìn)行滅菌時對礦物質(zhì)和維生素滅菌。
腸內(nèi)營養(yǎng)的實(shí)例為能夠向如接受心臟外科手術(shù)的患者經(jīng)管給予的營養(yǎng)物，在蛋白質(zhì)、油、糖類、纖維素類(fibrous)以及其它通常存在于完全腸內(nèi)營養(yǎng)中的成分都存在的情況下，其包括0.5％-7％(w/v)、優(yōu)選為1-5％(w/v)、更優(yōu)選為1-4％(w/v)的磷脂。該營養(yǎng)給予在手術(shù)前24小時開始，根據(jù)患者狀況可以通過吸吮喂飼(sip-feeding)或管飼(tube-feeding)，并且可在手術(shù)后的24-72小時內(nèi)經(jīng)管繼續(xù)給予。管飼也可直接進(jìn)入十二指腸或空腸，從而有利于保持空腹以避免在手術(shù)期間進(jìn)行抽吸。以本發(fā)明組合物進(jìn)行持續(xù)治療為本發(fā)明重要并優(yōu)選的方面。事實(shí)上，持續(xù)治療即從手術(shù)前開始，如果持續(xù)則繼續(xù)4到5天，可提供乳靡微粒的持續(xù)生成，從而提供對尤其是那些引起膿毒癥的微生物感染的更佳且持久的抵抗作用。
本發(fā)明的含有脂質(zhì)混合物的膠囊或粉末食品增補(bǔ)劑可用于患有炎性腸病的人。該增補(bǔ)劑還可包含纖維、低聚糖、維生素尤其是如上所述的脂溶性維生素、益生素、抗氧化劑、草藥或植物提取物、蛋白質(zhì)或肽等。向好轉(zhuǎn)的病人給予增補(bǔ)劑以預(yù)防炎癥復(fù)發(fā)或若復(fù)發(fā)以減輕炎癥。
磷脂濃度為1-7％(w/v)、優(yōu)選為1-6％(w/v)、甚至更優(yōu)選為1-5％(w/v)的液體吸吮營養(yǎng)(sip feeding)例如可給予患有梗阻性黃疸即將進(jìn)行手術(shù)的病人。蛋白質(zhì)和脂肪存在，也可存在多糖和微量營養(yǎng)物。在手術(shù)前24-12小時給予該營養(yǎng)物，在手術(shù)后24到72小時內(nèi)盡快繼續(xù)給藥。
本發(fā)明的組合物也適用于新生兒和未成年兒童及動物。
下列為闡述本發(fā)明的非限制性實(shí)施例。
實(shí)施例在這些實(shí)施例中，應(yīng)用到下述縮寫

在以下實(shí)施例中出現(xiàn)的甘油三酯1中的脂肪酸的組成為7-10％的飽和脂肪酸、60-65％的單不飽和及28-31％的多不飽和脂肪酸。在甘油三酯1中n3及n6脂肪酸的重量比為5∶1。在甘油三酯2中，飽和、單不飽和及多不飽和脂肪酸的量分別為約71、18和61，且n3∶n6的比例為7.7。甘油三酯1-2為長鏈脂肪酸甘油三酯。
實(shí)施例1管飼營養(yǎng)物，其每100ml包含能量125千卡蛋白質(zhì)1 7.5g糖類1 14.5g脂質(zhì)4.2g包括磷脂2.1g甘油三酯1 0.66g甘油三酯2 1.44g維生素、礦物質(zhì)及痕量元素以及在管飼營養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域熟知的其它成分，如在管飼營養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域已知量的Na、K、Cl、Ca、Mg、Fe、Se、Cu、P、Zn、I、Vit A、D、C、E、B6、B12、K、葉酸、泛酸、煙酸、生物素、核黃酸、葉酸、膽堿、肌醇、L-肉堿(carnithine)也包含在上述以及實(shí)施例2-6中的組合物中。
實(shí)施例2管飼營養(yǎng)，其每100ml包含能量100千卡蛋白質(zhì)2 4.0g糖類2 12.3g脂質(zhì)3.9g.包含磷脂2.0g甘油三酯1 0.63g甘油三酯2 1.27g纖維1g
實(shí)施例3作為增補(bǔ)劑的液體營養(yǎng)(吸吮喂飼)，其每100ml包含能量100千卡蛋白質(zhì)2 4g糖類3 8.8g脂質(zhì)5.4g包括磷脂3.6g甘油三酯1 1.19g甘油三酯2 0.61g實(shí)施例4作為增補(bǔ)劑的液體營養(yǎng)(吸吮喂飼)，其每100ml包含能量130千卡蛋白質(zhì)2 2.8g糖類3 13.3g脂質(zhì)7.3g包括磷脂5.0g甘油三酯2 2.3g實(shí)施例5散劑形式的口服營養(yǎng)增補(bǔ)劑。根據(jù)各自的能量/液體需要進(jìn)行稀釋。每100g散劑的組成為能量460千卡蛋白質(zhì)2 18.6g甘油三酯4 52.3g脂質(zhì)18.1g包括磷脂10.8g比例甘油三酯13.38g甘油三酯23.92g實(shí)施例6用于管飼的營養(yǎng)，其每100ml包含能量125千卡蛋白質(zhì)1 7.5g糖類2 12.3g脂質(zhì)6.67g包括磷脂4.58g甘油三酯2 2.09g纖維(任選) 1.5g實(shí)施例7動物該研究的草案由荷蘭馬斯特里希特大學(xué)的動物管理委員會批準(zhǔn)。將重量在301-410克(平均342克)的從Charles River(馬斯特里希特，荷蘭)購買的健康雄性Sprague-Dawley大鼠在控制溫度(20-22℃)和濕度(50％)的條件下飼養(yǎng)。在實(shí)驗(yàn)開始之前，水和食物隨意攝取。
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)動物分為六組(每組n＝8)。對照大鼠(C)禁食18小時并在t＝24h處死以評估禁食效果。假休克(SS)大鼠禁食18小時并在t＝0進(jìn)行股動脈插管術(shù)，但不誘導(dǎo)休克。失血性休克組在步驟(HS-S)開始之前禁食18小時，或者用低脂肪液體腸餐(enteral diet)(HS-LF)、高脂肪高甘油三酯液體腸餐(HS-HT)、或高脂肪高磷脂液體腸餐(HS-HP)在失血性休克誘導(dǎo)前18h(3ml)、2h(0.75ml)以及45min(0.75m)及在休克后3h(0.75ml)和6h(0.75ml)通過口服強(qiáng)飼法腸內(nèi)喂飼。血液及組織樣本在休克發(fā)作后24小時取得。在低脂肪餐中脂肪的量與標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動物食物為等熱量的(16.0能量％)。高脂肪液體腸餐與低脂肪食物的能量和含氮量相等，但含有52.2能量％的脂肪。各種所述餐的組成在表2中給出。
在另一試驗(yàn)中，高磷脂及高甘油三酯餐在接受失血性休克的大鼠中進(jìn)行測試。兩個試驗(yàn)相結(jié)合，從而HS-TG和HS-PL組包含16只動物。
表2喂飼大鼠的食物組合物(每100ml)

失血性休克步驟大鼠腹腔內(nèi)注射戊巴比妥鈉(40mg/kg)進(jìn)行麻醉。剃掉左股動脈周圍的皮膚的毛發(fā)并用聚維酮碘溶液消毒。動物被仰臥安置并允許自然呼吸。在手術(shù)期間及貫穿實(shí)驗(yàn)始終，用通過連接到直腸探針上的熱分析器控制的紅外加熱燈(Hugo Sachs Elektronik，March-Hugstetten，德國)將體溫控制在37℃。使用無菌技術(shù)剖開股動脈、用含有肝素化鹽(10IU/ml)的聚乙烯管(PE-10)進(jìn)行插管。持續(xù)測定動脈血壓(Uniflowtm，外用血壓傳感器；BaxterTM，Utrecht，荷蘭)且記錄為平均動脈壓(MAP)。心率(HR)由瞬間壓力信號持續(xù)評估。為了維持動脈導(dǎo)管暢通(patent)，經(jīng)常用生理鹽水(3ml/h)經(jīng)過Uniflowtm系統(tǒng)進(jìn)行灌注，而未應(yīng)用肝素。
在適應(yīng)環(huán)境30分鐘后，將大鼠以2.1ml/100克體重的量(代表大約循環(huán)體積的30-40％)及1ml/分鐘的速率抽血造成出血。在休克誘導(dǎo)后50分鐘，摘除導(dǎo)管進(jìn)行股動脈結(jié)扎。
出血后六小時，允許自由進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)餐。假休克組的大鼠麻醉后，左股動脈進(jìn)行插管。假休克大鼠和出血休克組進(jìn)行相同的監(jiān)測，但未抽血。
休克誘導(dǎo)后24小時，將大鼠用戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉(60mg/kg)。剃除腹部周圍皮膚的毛發(fā)并用聚維酮碘消毒。經(jīng)過中線切割打開腹部，取出血樣，腸系膜淋巴結(jié)、脾的中央部分及肝的IV段在無菌的條件下摘除用于進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查。
細(xì)菌易位在無菌條件下，將腸系膜淋巴結(jié)(MLN)、脾中央部分及肝的一部分收集于事先已稱量的2ml巰基乙酸鹽肉湯試管中(Becton Dickinson(BBL)Microbiology Europe，Maylan，法國)。稱量后，將組織樣本用無菌研磨棒(Potter S，B.Braun Melsungen，Melsungen，德國)進(jìn)行均質(zhì)化。隨后，將500μl轉(zhuǎn)移至下述瓊脂板補(bǔ)充5體積％綿羊血的哥倫比亞III血液瓊脂(BBL)(復(fù)制板)、Chocolate PolyviteX瓊脂(BioMérieux，MarcyL’Etoile，法國)，及補(bǔ)充5體積％綿羊血的Schaedler Kanamycin-Vancomycin瓊脂(BBL)。將各等分試樣散播于瓊脂的整個表面。將所有的瓊脂板在5％CO2-富集的氣氛或厭氧氣氛下(Shaedler瓊脂板)溫育48小時。溫育后，對哥倫比亞綿羊血液瓊脂板上的菌落計(jì)數(shù)。為了測定每克組織的菌落形成單位(CFU)的數(shù)量，計(jì)算所有需氧板上的菌落數(shù)，并接下來校準(zhǔn)至基礎(chǔ)組織的重量。
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析假設(shè)磷脂優(yōu)于甘油三酯，用單側(cè)曼-惠特尼U檢驗(yàn)來進(jìn)行兩組間的比較。對于易位發(fā)生率用單側(cè)Fisher’s精確檢驗(yàn)，使用50cfu/克組織的截止值。50或更低的值被認(rèn)為易位沒有發(fā)生，高于50被認(rèn)為有細(xì)菌易位發(fā)生。P≤0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)論表3所示為易位的細(xì)菌數(shù)結(jié)果，其中列出平均值和范圍(括號內(nèi))。
表3從單側(cè)曼-惠特尼U檢驗(yàn)得到的易位的細(xì)菌數(shù)，平均值(范圍) 與HS-LF相比，*p＜0.05和**p＜0.01與HS-S相比，#p＜0.05和##p＜0.01與HS-TG相比，§p＝0.07與HS-TG相比，
在第一次試驗(yàn)中，接受失血性休克的禁食大鼠(HS-S)和接受失血性休克的用等熱量的低脂餐喂飼的大鼠(HS-LF)與對照禁食大鼠(C)，或接受假休克(SS)的禁食大鼠相比，顯示出顯著的高細(xì)菌易位數(shù)。接受高脂餐的大鼠和接受失血性休克的其它相比顯示出顯著低的細(xì)菌易位。在第一個實(shí)驗(yàn)中，喂飼高濃度磷脂(HS-HP)的組與用高濃度甘油三酯(HS-HT)喂飼的組相比較顯示出較低的易位細(xì)菌數(shù)趨勢(p＝0.07)。在進(jìn)行第二次試驗(yàn)后將這些組擴(kuò)大至n＝16，HS-HT和HS-HP組之間的差異顯著(p＝0.05)，HS-HP組具有較低的易位。
易位發(fā)生率表4顯示了細(xì)菌易位發(fā)生率的結(jié)果。與禁食或低脂餐的經(jīng)受失血性休克的大鼠相比較，禁食對照大鼠(C)和假休克大鼠(SS)顯示較低的易位發(fā)生率。高脂餐對細(xì)菌易位的發(fā)生率具有積極的作用。在這些高脂餐中，與高濃度甘油三酯的膳食(HS-HT)相比較，觀察到具有高磷脂濃度(HS-HP)的高脂餐對細(xì)菌易位發(fā)生率具有顯著的作用。
在這些實(shí)驗(yàn)中得到的結(jié)果證明，高脂餐能夠在發(fā)生率水平和細(xì)菌易位數(shù)水平上抑制由手術(shù)和出血引起的細(xì)菌易位。接受測試的兩種高脂餐顯示，具有高的磷脂與甘油三酯比例的膳食與只含有甘油三酯的高脂餐相比具有顯著的更好的保護(hù)作用。細(xì)菌易位發(fā)生率的減少和細(xì)菌易位數(shù)的減少減少了對菌血癥的改變，并減少了LPS和LTA的流入，因此減少了內(nèi)毒素血癥和膿毒癥的發(fā)生機(jī)會。
表4從單側(cè)Fisher’s精確檢驗(yàn)得到的易位發(fā)生率

權(quán)利要求
1.包含蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的組合物在制備通過腸內(nèi)給藥用于治療和/或預(yù)防內(nèi)毒素血癥、膿毒癥或菌血癥的營養(yǎng)組合物中的應(yīng)用，所述脂質(zhì)包含磷脂和甘油三酯且磷脂與甘油三酯的重量比大于1，其中該組合物包含小于0.5重量％的膽固醇或其前體。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中磷脂以每日每公斤體重0.008到2.0克的劑量給藥。
3.如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其中甘油三酯以每日每公斤體重0.01到1.5g的劑量給藥。
4.如前述權(quán)利要求之一所述的應(yīng)用，其中膿毒癥、內(nèi)毒素血癥和/或菌血癥是與大手術(shù)、危重疾病、炎性腸病(IBD)、HELLP綜合征、大體而言細(xì)菌易位和患膿毒癥危險性增大，更具體而言為重傷、燒傷、尤其是由細(xì)菌、褥瘡、在放療/化療期間引起或并發(fā)的肺炎、免疫系統(tǒng)受損或膽管阻塞有關(guān)。
5.如前述權(quán)利要求之一所述的應(yīng)用，其是用于治療不允許攝取大體積的患者，尤其是患有神經(jīng)性厭食癥、癌癥或AIDS的病人及老年人。
6.如前述權(quán)利要求之一所述的應(yīng)用，其是用于新生兒的治療。
7.如權(quán)利要求1至3之一所述的應(yīng)用，其是用于屠宰前的家畜或斷奶的豬的治療。
8.一種腸內(nèi)組合物，其包含a)至少1重量％的蛋白質(zhì)和/或肽，以及b)至少3.5重量％的脂質(zhì)，該脂質(zhì)部分包含磷脂和甘油三酯，且磷脂與甘油三酯的重量比大于1，其中該組合物包含小于0.5重量％的膽固醇或其前體。
9.如權(quán)利要求8所述的腸內(nèi)組合物，其中所述磷脂的量為組合物脂質(zhì)部分的50％-95重量％。
10.如權(quán)利要求8或9所述的腸內(nèi)組合物，其中所述磷脂為磷脂混合物的形式，優(yōu)選含有磷脂酰膽堿，以及磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油和磷脂酸中的一種或多種。
11.如權(quán)利要求8至10之一所述的腸內(nèi)組合物，其中磷脂部分含有當(dāng)存在時其量小于或等于存在于組合物中的磷脂總量的72重量％的一定量的磷脂酰膽堿，當(dāng)存在時其量小于存在于組合物中的磷脂總量的70重量％的一定量的磷脂酰乙醇胺，當(dāng)存在時其量大于在組合物中存在的磷脂總量的5重量％的一定量的荷負(fù)電的磷脂。
12.如權(quán)利要求8至11之一所述的腸內(nèi)組合物，其中所述甘油三酯含有至少50重量％、優(yōu)選為多于60％、最優(yōu)選為多于75％的長鏈脂肪酸，尤其是長鏈多不飽和脂肪酸。
13.如權(quán)利要求8至12之一所述的腸內(nèi)組合物，其中所述甘油三酯選自植物油、海產(chǎn)品油及其混合物，優(yōu)選為選自大豆油、玉米油、菜籽油、橄欖油、向日葵油、芝麻油、紅花油、麥芽油、花生油、月見草油、來自動物的油如蛋黃油、魚油和海藻油以及它們的組合物。
14.如權(quán)利要求8至13之一所述的腸內(nèi)組合物，其中磷脂與甘油三酯的重量比大于1.5，優(yōu)選為大于2。
15.如權(quán)利要求8至14之一所述的腸內(nèi)組合物，其中所述組合物含有小于0.5重量％的膽固醇或其前體，優(yōu)選為小于0.2重量％并更優(yōu)選為不含膽固醇及其前體。
16.如權(quán)利要求8至15之一所述的腸內(nèi)組合物，其中所述蛋白質(zhì)材料包含至少30重量％的分子量至少為0.3kDa的蛋白質(zhì)和/或肽組分。
17.如權(quán)利要求8至16之一所述的腸內(nèi)組合物，其中所述組合物包含卵或卵部分。
18.如權(quán)利要求8至17之一所述的腸內(nèi)組合物，其中所述組合物還包含免疫球蛋白，優(yōu)選為IgY。
19.如權(quán)利要求8至18之一所述的腸內(nèi)組合物，其中所述組合物含有大豆卵磷脂。
20.如權(quán)利要求8至19之一所述的腸內(nèi)組合物，其中所述組合物為管飼物。
21.如權(quán)利要求8至20之一所述的腸內(nèi)組合物，其中所述組合物基本不含膽固醇或其前體。
22.如權(quán)利要求8至21之一所述的腸內(nèi)組合物，其中所述組合物還包含一種或更多種脂溶性物質(zhì)，其優(yōu)選選自維生素K(甲基萘醌類)、泛醌類、類胡蘿卜素如維生素A、特定的脂肪酸如結(jié)合型亞油酸、硫辛酸、維生素D及其混合物。
23.如權(quán)利要求8至22之一所述的腸內(nèi)組合物，其中所述組合物還包含一種或更多種有機(jī)酸，優(yōu)選為選自檸檬酸、蘋果酸、乳酸、其鹽以及其混合物。
24.制備如權(quán)利要求8至23之一所定義的組合物的方法，其包括下列步驟a)將非脂質(zhì)成分混合在一起并調(diào)節(jié)pH至6到8范圍內(nèi)；b)通過混合將脂質(zhì)成分與步驟a)中所得的混合物合并；c)用巴氏法對步驟b)中所得的混合物進(jìn)行滅菌并通過以基于組合物干重計(jì)至少2.5重量％的量加入優(yōu)選為檸檬酸、檸檬酸鹽或其混合物的有機(jī)酸將pH調(diào)節(jié)到6-8的范圍內(nèi)；以及d)對混合物進(jìn)行滅菌。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含蛋白質(zhì)以及脂質(zhì)的腸內(nèi)組合物及其在預(yù)防和/或治療膿毒癥中的應(yīng)用；其中脂質(zhì)部分尤其富含磷脂。
文檔編號A61K36/28GK1802102SQ200480009320
公開日2006年7月12日 申請日期2004年2月5日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月5日
發(fā)明者杰爾斯科·斯皮爾曼斯, 阿德里安努斯·約翰努斯·馬里亞·弗里塞馬, 安妮塔·科琳娜·歐根妮·弗羅格登希爾, 威廉·安德里斯·布于爾曼, 約翰內(nèi)斯·威廉默斯·馬里亞·格雷韋, 贊德里·霍夫曼, 英格·基維特, 羅伯特·約翰·約瑟夫·哈格曼 申請人:努特里奇亞有限公司