專利名稱：類固醇衍生物在治療血管緊張素Ⅱ相關(guān)性疾病如心血管性和增生性疾病中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包括曲洛司坦(trilostane)或相關(guān)化合物為活性成分的藥物組合物在治療血管緊張素II相關(guān)性疾病，尤其是血管緊張素II相關(guān)性心血管疾病中的應(yīng)用。
調(diào)節(jié)血管緊張素II體內(nèi)水平是預(yù)防心血管疾病和減輕其影響的重要因素。血管緊張素II在體內(nèi)起到了幾種作用，這些作用中的一些直接導(dǎo)致了心血管疾??；其他的一些導(dǎo)致產(chǎn)生各種激素，例如鹽皮質(zhì)激素(具體的例子如醛固酮)，這些激素又導(dǎo)致了疾病。本發(fā)明涉及采用調(diào)節(jié)體內(nèi)血管緊張素II受體作用的曲洛司坦或相關(guān)化合物來治療心血管疾病。
心血管功能受到由體內(nèi)各器官釋放到體循環(huán)中，且相互聯(lián)系和相互作用的激素所構(gòu)成的復(fù)雜系統(tǒng)所影響。腎素-血管緊張素-醛固酮(RAAS)系統(tǒng)是所涉及的主要激素群之一。
在該系統(tǒng)中，腎臟分泌蛋白水解酶腎素，該蛋白水解酶腎素作用于血管緊張素原這一血漿蛋白，分離出被稱為血管緊張素I的一種含有10個氨基酸的片段。在被稱為血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)，即血管分泌的一種肽酶的作用下，血管緊張素I發(fā)生分解，產(chǎn)生含有8個氨基酸的血管緊張素II。血管緊張素II(Ang II)具有許多作用，包括收縮小動脈血管壁；封閉毛細血管床；刺激小動脈血管壁中的平滑肌細胞生長從而收縮和刺激腎部小管以重吸收鈉離子；以及刺激腎上腺皮層釋放醛固酮。
醛固酮使腎臟回收更多的鈉并因此也回收水，增加了心跳的力量，并且也刺激垂體釋放抗利尿激素(ADH，即精氨酸抗利尿激素)。
除了系統(tǒng)作用之外，現(xiàn)在認為這些激素也會在某些器官的組織中產(chǎn)生，并且具有以系統(tǒng)水平而進行的局部作用。盡管局部的腎素-血管緊張素系統(tǒng)被描述為機能獨特的系統(tǒng)，近期的研究已經(jīng)表明這些局部腎素-血管緊張素系統(tǒng)的機能亢進和心血管機能障礙之間存在聯(lián)系。例如，一些研究表明人類心臟的腎素-血管緊張素系統(tǒng)在心臟病的情況下可能會被激活。而且，編碼腎素-血管緊張素系統(tǒng)的基因呈現(xiàn)多態(tài)性似乎與高血壓和左心室肥大有關(guān)(ClinExp Hypertens 1995 Apr；17(3)441-68)。
局部心血管的腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)的存在經(jīng)常被用于解釋RAS抑制劑治療心血管疾病的長期有益療效。然而，可能是由于并非所有的RAS組分都能在原位合成，因此局部血管緊張素II的形成可能并不依賴于循環(huán)的RAS。局部血管緊張素在心臟和管壁上的形成確實發(fā)生了，但至少在正常情況下，這可能是依賴于從循環(huán)中吸收腎臟腎素。通過改變腎素受體和/或腎素結(jié)合蛋白的數(shù)目、ACE水平、代謝酶的數(shù)量以及血管緊張素受體密度，組織可調(diào)節(jié)其局部的血管緊張素濃度。因此，腎素與心臟血管膜的結(jié)合可以是從血漿吸收腎素的機制的一部分。
在心力衰竭中，反應(yīng)性間質(zhì)纖維化的形成與醛固酮有關(guān)，而反應(yīng)性間質(zhì)纖維化是導(dǎo)致左心室重塑的一種不良調(diào)節(jié)。一項近期的研究(Endocrinology2002 Dec；143(12)4828-36)描述了醛固酮對大鼠模型心肌損傷的作用。血管緊張素造成了對心臟的損傷，包括動脈纖維蛋白樣壞死，血管周圍炎癥(主要是巨噬細胞)，以及病灶性梗阻。血管病變與炎性遞質(zhì)環(huán)氧合酶2(COX-2)和冠狀動脈介質(zhì)中的骨橋蛋白的表達有關(guān)。采用依普利酮(eplerenone)(一種新型醛固酮阻斷劑)進行治療，在很大程度上減輕了心肌損傷以及COX-2和骨橋蛋白的表達。該研究推斷醛固酮在Ang II-誘導(dǎo)的心臟血管炎癥中起到主要作用，暗示COX-2和骨橋蛋白是損傷的潛在遞質(zhì)。在依普利酮對患有慢性心力衰竭的療效的研究中，揭露了有些類似的發(fā)現(xiàn)(Circulation 2002 Dec 3；106(23)2967-72)。該研究中，由冠狀動脈內(nèi)微栓塞造成狗發(fā)生心力衰竭，當左心室(LV)射血分數(shù)(EF)為30％～40％時停止冠狀動脈內(nèi)微栓塞。在對照組的狗中，LV舒張末期和收縮末期的容量明顯增大。相反，采用依普利酮治療3個月，舒張末期容量、收縮末期容量以及EF都保持不變。LV舒張末期的血管壁壓在對照組的狗中發(fā)生明顯增加，而在依普利酮治療的狗中卻發(fā)生下降。與對照組相比，依普利酮與心肌細胞截面積減小28％，反應(yīng)性間質(zhì)纖維化的體積分數(shù)減少37％，以及替代性纖維化的體積分數(shù)減少34％有關(guān)。該研究推斷，采用依普利酮進行長期治療防止了漸進性LV官能障礙，減輕了狗體中伴隨心力衰竭的LV重塑。
ACE抑制劑，除了具有已被證明的治療高血壓的作用之外，還可用于治療心力衰竭。臨床試驗已經(jīng)表明這些藥劑具有改善心臟功能的作用，此外還能減少心力衰竭造成的死亡。人們認為ACE抑制劑治療心力衰竭的一種治療機理是循環(huán)的血管緊張素II和醛固酮發(fā)生減少。然而，腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)在心力衰竭治療期間并未受到一致的抑制。這一作用被稱為“血管緊張素II的再活化”，這可能預(yù)示著臨床情況惡化。在被稱為CONSENSUS I試驗的一種大規(guī)模臨床試驗中，死亡率與血管緊張素II和醛固酮之間存在關(guān)聯(lián)性。而且，在血管緊張素II受到較好抑制的情況下，死亡率較低。因此，已表明(Eur J Heart Fail 1999 Dec；1(4)401-6)盡管在充分治療的情況下，神經(jīng)激素升高仍可能與不良預(yù)后有關(guān)。
在隨機螺內(nèi)酯評價研究(Randomized Aldactone Evaluation Study，RALES)中，安體舒通(spironolactone)，一種醛固酮受體拮抗劑，明顯地降低了患有嚴重充血性心力衰竭(CHF)的病人的死亡率。安體舒通與ACE抑制劑共同給藥，其作用是使ACE抑制劑增效(JAm Coll Cardiol 2002 Nov6；40(9)1596-601)。
曲洛司坦，(4a，5a-17β)-4，5-環(huán)氧-3，17-二羥基雄甾-2-烯-2-腈，在英國專利說明書No.1,123,770以及美國專利說明書No.3,296,295中有所描述。
GB 2,130,588涉及一種制造曲洛司坦和相關(guān)化合物的改進方法。該方法能將化合物微粉化而成為等體積球體的平均直徑為5-12mm的顆粒，至少95％的顆粒的粒度小于50mm。粒度的特異性更高，則利于改進曲洛司坦的生物利用度以及控制形成的活性代謝物數(shù)量，從而改進了臨床應(yīng)答并降低了易變性。
本申請的發(fā)明人令人驚奇地發(fā)現(xiàn)了曲洛司坦和相關(guān)化合物抑制血管緊張素II對血管平滑肌細胞的增生作用，而不必降低血漿中鹽皮質(zhì)激素，如醛固酮的水平，從而能治療與這些激素相關(guān)的增生性疾病。抑制血管緊張素II對血管平滑肌細胞的增生作用，而不必降低血漿中鹽皮質(zhì)激素如醛固酮的水平的這一作用被認為是通過降低血管緊張素II受體的敏感性而引起的。對血管緊張素II受體的敏感性降低，其原因可以例如是細胞內(nèi)信號，如鈣信號的產(chǎn)生受到削弱，以及血管緊張素II 1型(AT1)受體的表達減少了。
曲洛司坦已經(jīng)被用于目標是抑制治療腎上腺類固醇分泌的治療中。腎上腺類固醇的例子包括皮質(zhì)醇(cortisol)，醛固酮和皮質(zhì)酮(corticosterone)。實踐中，對于腎上腺機能正常的病人，只有在曲洛司坦的劑量水平很高，高至相當于8到10mg/kg/天的情況下，循環(huán)的腎上腺類固醇才會減少，而8到10mg/kg/天的劑量正是最常采用的療法(Beardwell等.1985，ClinEndocrinol(Oxf)，23，413-21；Engelhardt和Weber 1994，J Steroid Biochem MolBiol，40，261-7)。這些數(shù)據(jù)在全體健康的大鼠中可以重現(xiàn)，其中以劑量為8mg/kg/天的曲洛司坦向大鼠給藥，降低了循環(huán)血漿中醛固酮的濃度(

圖1a)。這一結(jié)果可通過檢測治療前后循環(huán)的腎上腺類固醇水平并評價腎上腺類固醇水平是否降低來證明?？赏ㄟ^收集循環(huán)的靜脈血液來檢測血漿中循環(huán)的腎上腺類固醇水平。血漿是通過離心分離獲得的，而血漿類固醇(如人類皮質(zhì)醇和醛固酮，大鼠的皮質(zhì)酮和醛固酮)的檢測則是采用常規(guī)的放射性免疫測定法進行的。適宜用的皮質(zhì)酮放射性免疫測定試劑盒可購自AmershamBiosciences UK Limited。適宜用的醛固酮放射性免疫測定試劑盒可購自Diagnostic Products Corporation。
本申請的發(fā)明人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)較低濃度(如4mg/kg/天)不會降低循環(huán)血漿中醛固酮的濃度(圖1b)。4mg/kg/天和8mg/kg/天這兩個劑量都不會影響循環(huán)的皮質(zhì)酮的水平，如果要影響循環(huán)的皮質(zhì)酮的水平，則要求更高劑量。
因此，在一種實施方式中，本發(fā)明涉及采用使循環(huán)腎上腺類固醇濃度不受影響這一水平的有效量的曲洛司坦和相關(guān)化合物來治療血管緊張素II相關(guān)性疾病。
這一療法帶來的一個優(yōu)點是避免了過量曲洛司坦治療造成的副作用，即低皮質(zhì)醇癥和低醛固酮癥，也避免了采用與糖皮質(zhì)激素如氫化可的松(皮質(zhì)醇)、地塞米松或倍他米松的聯(lián)合用藥。
因此，本發(fā)明提供了通式(I)的化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯在制備用于治療人類或動物血管緊張素II相關(guān)性疾病的藥物中的應(yīng)用，
其中，R1，R2，R5，R6可相同也可不同，分別獨立地選自氫或C1-4烷基；R3是氫，C1-4烷基，C2-4烯基或C2-4炔基；R4是羥基，C1-4烷酰氧基，式(II)或(III)的基團， 其中R7是(CH2)n，n是0-4的整數(shù)，R8是氫，C1-4烷基，羥基或NH2，而R9和R10可相同也可不同，分別獨立地為氫或C1-4烷基；或者，R3和R4一起形成羰基(oxo)，乙二氧基或丙二氧基；通式(I)的化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯在制造用于治療人類和動物血管緊張素II相關(guān)性心血管疾病的藥物中的應(yīng)用， 其中，R1，R2，R5，R6可相同也可不同，分別獨立地為氫或C1-4烷基；R3是氫，C1-4烷基，C2-4烯基或C2-4炔基；R4是羥基，C1-4烷酰氧基，式(II)或(III)的基團 其中R7為(CH2)n，n為0-4的整數(shù)，R8為氫，C1-4烷基，羥基或NH2，而R9和R10可相同也可不同，分別獨立地為氫或C1-4烷基；或R3和R4一起形成羰基(oxo)，乙二氧基或丙二氧基；
如上定義的通式(I)化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯在制造用于治療人類和動物血管緊張素II相關(guān)性疾病的藥物中的應(yīng)用，其中，所述的治療是與下列藥物中的一種或多種的聯(lián)合用藥而進行的-血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑；-血管緊張素II受體阻斷劑；-醛固酮抑制劑或降低醛固酮水平或阻止醛固酮作用的藥劑；或-類固醇生成抑制劑；以及通式(I)化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯在制造用于治療人類和動物血管緊張素II相關(guān)性疾病的藥物中的應(yīng)用，其中，所述的治療是與下列藥物中的一種或多種的聯(lián)合用藥而進行的-血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑；-血管緊張素II受體阻斷劑；或-醛固酮抑制劑或降低醛固酮水平或阻止醛固酮作用的藥劑。
在一種優(yōu)選方式中，本發(fā)明涉及如上定義的通式(I)化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯在制造藥物中的應(yīng)用，其中，所述的藥物的給藥量為0.5-4mg/kg/天。
本發(fā)明進一步提供了一種藥物，其包括(a)如上定義的通式(I)化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯；以及(b)下列藥物中的一種或多種-血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑；-血管緊張素II受體阻斷劑；-醛固酮抑制劑或降低醛固酮水平或阻止醛固酮作用的藥劑；或-類固醇生成抑制劑；一種藥物，其包括(a)如上定義的通式(I)化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯；以及(b)下列藥物中的一種或多種-血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑；
-血管緊張素II受體阻斷劑；或-醛固酮抑制劑或降低醛固酮水平或阻止醛固酮作用的藥劑；一種治療血管緊張素II相關(guān)性疾病的方法，該方法是通過給予所述疾病的患者施用治療所述疾病的有效量的上述通式(1)化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯而實現(xiàn)的；一種治療血管緊張素II相關(guān)性心血管疾病的方法，該方法是通過給予所述疾病的患者施用治療所述疾病的有效量的上述通式(1)化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯而實現(xiàn)的；一種治療血管緊張素II相關(guān)性疾病的方法，該方法是通過給予所述疾病的患者施用治療所述疾病的有效量的上述通式(1)化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯以及治療所述疾病的有效量的一種或多種下列藥物而實現(xiàn)的-血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑；-血管緊張素II受體阻斷劑；-醛固酮抑制劑或降低醛固酮水平或阻止醛固酮作用的藥劑；或-類固醇生成抑制劑；以及一種治療血管緊張素II相關(guān)性心血管疾病的方法，該方法是通過給予所述疾病的患者施用治療所述疾病的有效量的上述通式(1)化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯以及治療所述疾病的有效量的一種或多種下列藥物而實現(xiàn)的-血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑；-血管緊張素II受體阻斷劑；或-醛固酮抑制劑或降低醛固酮水平或阻止醛固酮作用的藥劑。
典型地，本發(fā)明中治療上述血管緊張素II相關(guān)性疾病的方法包括采用通式(I)化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯以無毒且有效治療所述疾病的給藥量向所述疾病患者給藥。
如本文所采用的，C1-4烷基基團或部分是指含有1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，如甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基和叔丁基。典型地，所述的烷基是非取代的。通常，C1-4烷基基團或部分是直鏈烷基，如甲基，乙基，正丙基和正丁基。優(yōu)選地，C1-4烷基基團或部分是甲基。
C2-4烯基是含有2-4個碳原子的烯烴基團。C2-4烯基的例子有乙烯基，正丙烯基，異丙烯基，正丁烯基，異丁烯基，仲丁烯基以及叔丁烯基。典型地，烯基基團僅含有一個雙鍵。所述的烯基基團通常是非取代的。
C2-4炔基是含有2-4個碳原子的直鏈或支鏈炔烴基團。C2-4炔基的例子有乙炔基，正丙炔基或正丁炔基。典型地，炔基只含有一個叁鍵。所述的炔基通常是非取代的。
C1-4烷酰氧基典型地是式RaC(O)O-表示的基團，其中Ra是氫或C1-3烷基，如甲基，乙基，正丙基或異丙基。典型地，所述C1-3烷基是非取代的。優(yōu)選的C1-3烷基是直鏈烷基，如甲基，乙基或正丙基。
通式(I)化合物的3-烯醇C1-4鏈烷酸酯具有通式(Ia)所示的結(jié)構(gòu) 其中，R1-R6的定義如上，而Rb則是氫或C1-3烷基，如甲基，乙基，正丙基或異丙基。典型地，所述的C1-3烷基是非取代的。優(yōu)選地，C1-3烷基是直鏈烷基，如甲基，乙基或正丙基。
通式(I)定義的曲洛司坦和相關(guān)化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯都可用于本發(fā)明。
通式(I)的優(yōu)選化合物是其中R1為氫或甲基，R2是氫或甲基，以及R5和R6為甲基的那些化合物。更優(yōu)選R4為羥基或R3和R4一起形成羰基的化合物。這類優(yōu)選化合物的例子有曲洛司坦(R1，R2和R3為氫，R4為羥基，以及R5和R6為甲基)，酮曲洛司坦(ketotrilostane)(R1和R2為氫，R3和R4一起形成羰基，而R5和R6為甲基)以及環(huán)氧司坦(epostane)(R1，R3，R5和R6為甲基，R2為氫，而R4為羥基)。
本發(fā)明的化合物可用于制造治療人類和動物血管緊張素II相關(guān)性疾病的藥物。典型地，本發(fā)明的化合物可用于制造治療人類和動物血管緊張素II相關(guān)性心血管疾病的藥物?？杀恢委煹募膊“ǖ幌抻谂c增生性和纖維化性改變有關(guān)的心力衰竭，如充血性心力衰竭，心肌梗塞后(post myocardialinfarction)，心肌癥，糖尿病，腎衰竭，代謝綜合癥(X綜合癥)以及高醛固酮癥(如原發(fā)性，繼發(fā)性和第三期高醛固酮癥)以及身體組織或血液中的血管緊張素II水平發(fā)生增長的其它疾病或病狀?？杀恢委煹难芫o張素II相關(guān)性心血管疾病的另一個例子是心律不齊。心律不齊以及采用卡托普利(Captopril)和洛沙坦(Losartan)對心律不齊進行的治療在Ozer等，2002 Pharmacol Res 45257-63中有所討論。典型地，血管緊張素II相關(guān)性心血管疾病是充血性心力衰竭，心肌梗塞后，心肌癥，糖尿病，腎衰竭或代謝綜合癥(X綜合癥)。更典型地，血管緊張素II相關(guān)性心血管疾病是心肌梗塞后。
優(yōu)選地，被治療的血管緊張素II相關(guān)性疾病是增生性疾病。典型地，增生性疾病是表現(xiàn)出平滑肌細胞增生的疾病。典型的增生性疾病是心血管增生性疾病。更典型地，增生性疾病是血管緊張素II調(diào)節(jié)的平滑肌細胞增生和/或平滑肌細胞遷移的心血管增生性疾病。被治療的增生性疾病的優(yōu)選例子包括外周動脈疾病，腦血管疾病，心臟纖維化，心肌病，糖尿病性視網(wǎng)膜病，糖尿病性壞疽，糖尿病性腎病，硬皮病，哮喘，動脈瘤以及動脈粥樣化，尤其是除了動脈粥樣化之外的疾病。
更優(yōu)選地，被治療的增生性疾病是心臟纖維化。進一步優(yōu)選的是梗塞形成之后發(fā)生的心臟纖維化。在梗塞形成之后發(fā)生的心臟纖維化中，梗塞的大小以及嗜中性粒細胞入侵依賴于血管緊張素II。梗塞形成之后發(fā)生的心臟纖維化在Sun等，1994 Cardiovasc Res 281423-32和Waltman等，1995，J CardFail 1293-302(梗塞的大小和嗜中性粒細胞入侵)，以及Wang等，CardiovascRes 5525-37和Martinez等2003 Arch Med Res 34357-61(卡托普利和洛沙坦在梗塞形成之后發(fā)生的心臟纖維化中的應(yīng)用)中有所討論。
典型地，被治療的患者患有與腎上腺類固醇的水平增加無關(guān)的血管緊張素II相關(guān)性疾病，或不能通過抑制腎上腺類固醇的分泌而治療的血管緊張素II相關(guān)性疾病。
此類化合物優(yōu)選以顆粒形式使用。尤其是，理想的化合物由等體積球體的平均直徑為12μm或更小的顆粒組成，且其中至少80，85，90，95％或更多，優(yōu)選98％或更多，99％或更多，或99.5％或更多的顆粒的顆粒直徑小于50μm，優(yōu)選小于40μm，小于30μm或小于20μm，例如為0.1μm到10，20，30，40或50μm，從1μm到10，20，30，40或50μm，或者從10μm到20，30，40或50μm。這些顆粒優(yōu)選的等體積球體的平均直徑為5-12μm，或者至多為5μm，例如為0.1-5μm，或為1-5μm。進一步優(yōu)選，通式(I)化合物的特大粒徑的累積百分比對粒徑所做的特征曲線的標準偏差是1.5-2.5μm，優(yōu)選為1.75-2.25μm，更優(yōu)選為約2μm，如為1.9-2.1μm。
治療是以藥物形式進行，該藥物優(yōu)選包括單位劑量的25mg-1000mg，例如為25-50mg，50-100mg，100-200mg，200-300mg，300-400mg，400-500mg，500-600mg，600-700mg，700-800mg，800-900mg或900-1000mg的本發(fā)明化合物。典型單位劑量的另一些例子包括0.25mg-1000mg，如0.5-25mg，1-5mg，5-10mg，10-15mg，15-20mg，或20-25mg。
上述單位劑量可以以規(guī)則的間隔時間進行給藥，例如，單位劑量給藥可以每月一次，每周一次，每天一次或每天幾次地進行。這種治療總共延續(xù)的時間可以為1天到幾周、幾個月或幾年，例如為患者的整個生命期間。
進一步優(yōu)選上述的曲洛司坦或相關(guān)化合物的給藥量為0.5-4mg/kg/天。最優(yōu)選地，曲洛司坦或相關(guān)化合物的給藥量為1-3mg/kg/天，例如為1-1.5mg/kg/天，1.5-2mg/kg/天，2-2.5mg/kg/天或2.5-3mg/kg/天。
通式(I)的化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯可以藥學(xué)上可接受的鹽的形式存在。如本文中所采用的，藥學(xué)上可接受的鹽是與藥學(xué)上可接受的酸或堿反應(yīng)制得的鹽。藥學(xué)上可接受的酸包括無機酸，如鹽酸，硫酸，磷酸，焦磷酸，氫溴酸或硝酸，也包括有機酸，如檸檬酸，富馬酸，馬來酸，蘋果酸，抗壞血酸，琥珀酸，酒石酸，苯甲酸，乙酸，甲磺酸，乙磺酸，苯磺酸或?qū)妆交撬帷Ｋ帉W(xué)上可接受的堿包括堿金屬(如鈉或鉀)和堿土金屬(如鈣或鎂)的氫氧化物，還包括有機堿如烷基胺，芳烷基胺或雜環(huán)胺。
該藥物可通過靜脈內(nèi)，肌內(nèi)或皮下途徑給藥，或者作為軟膏、霜劑或洗液進行外用。優(yōu)選的給藥途徑是口服，例如作為片劑，膠囊劑或液體分散劑口服。
在曲洛司坦和其它通式(I)的化合物和其酯以單純形式進行給藥時，它們通常與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑相配制。例如，固態(tài)的口服劑型可以含有伴隨活性化合物的稀釋劑，如乳糖，葡萄糖，蔗糖，纖維素，玉米淀粉或馬鈴薯淀粉；潤滑劑，如二氧化硅，滑石粉，硬脂酸，硬脂酸鎂或鈣，和/或聚乙二醇；粘結(jié)劑，如淀粉，阿拉伯膠，白明膠，甲基纖維素，羧甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；崩解劑，如淀粉，褐藻酸，藻酸鹽或羧甲淀粉鈉；發(fā)泡混合物；染料；甜味劑；潤濕劑，如卵磷脂，聚山梨醇酯，十二烷基磺酸鹽；以及藥物制劑中采用的通常為無毒的藥理學(xué)惰性物質(zhì)。這類藥物制劑可以公知的方式制造，如采用混合，制粒，壓片，包糖衣，或包膜的方法制造。
用于口服給藥的液體分散劑可以是糖漿，乳液和懸浮液。糖漿中可含有的載體例如為蔗糖，或蔗糖和甘油和/或甘露醇和/或山梨糖醇。懸浮液和乳液中可含有的載體例如為天然樹膠，瓊脂，藻酸鈉，果膠，甲基纖維素，羧甲基纖維素，或聚乙烯醇。
用于肌肉注射的懸浮液或溶液可含有伴隨活性化合物的藥學(xué)上可接受的載體，如無菌水，橄欖油，油酸乙酯，二元醇(如丙二醇)，如果需要，還可含有適量的利多卡因鹽酸鹽。用于注射或輸注的溶液可含有的載體例如為無菌水，或優(yōu)選被制為無菌的含水等滲溶液。
治療可單獨進行，也可與一種或多種下列化合物的進一步治療相結(jié)合血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑；血管緊張素II受體阻斷劑；或者醛固酮抑制劑或降低醛固酮水平或阻止醛固酮作用的藥劑。醛固酮抑制劑或降低醛固酮水平的藥劑可以是，也可以不是ACE抑制劑。聯(lián)合治療中采用的合適ACE抑制劑的例子包括但不限于卡托普利，依那普利(Enalopril)和賴諾普利(Lisinopril)。合適的醛固酮抑制劑或降低醛固酮水平的藥劑包括但不限于安體舒通，洛沙坦和依普利酮。其中，安體舒通和依普利酮是醛固酮抑制劑，并且充當醛固酮受體拮抗劑。洛沙坦充當作用于1型(AT1)受體的血管緊張素II受體阻斷劑，并且對降低醛固酮濃度也有部分生理學(xué)作用。
另一個血管緊張素II 1型受體阻斷劑是坎地沙坦(Candasartan)?？膳c如上定義的曲洛司坦或相關(guān)化合物聯(lián)合使用的化合物的另一個例子是類固醇生成抑制劑，例如氨魯米特(aminoglutethimide)和美替拉酮(metyrapone)。
優(yōu)選地，治療可單獨進行，或與一種或多種選自下列藥物的進一步治療相結(jié)合卡托普利，依那普利，賴諾普利，安體舒通，依普利酮，洛沙坦，坎地沙坦，氨魯米特和美替拉酮。更優(yōu)選地，治療單獨進行，或與洛沙坦的進一步治療相結(jié)合。
該治療和進一步的治療可同時、分開或相繼進行，且在分開或相繼進行的情況下采用任意治療順序。該治療和進一步的治療可以以單一的聯(lián)合藥物形式進行，該藥物優(yōu)選包括單位劑量的所述進一步的化合物(其含量為本領(lǐng)域公知的治療心血管疾病的有效量)，以及單位劑量的通式(I)化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯(其含量如上所述)。該藥物的給藥可以按照上述的一種給藥方式進行?；蛘?，這兩種治療可以分開進行或相繼進行，如作為兩種不同的藥物，采用相同的或不同的給藥方式向同一部位或不同部位給藥。
實施例采用介質(zhì)組織培養(yǎng)分離塊方法從大鼠胸部和腹部動脈(RASMC)以及牛的大動脈(BASMC)分離出大動脈平滑肌細胞(ASMCs)，并進行幾代培養(yǎng)。
小心解剖殺死的大鼠，從大鼠體獲得胸部和腹部的大動脈段。在麻醉的條件下從小牛體獲得大動脈段。將大動脈段放置到裝有組織培養(yǎng)介質(zhì)的凹載玻片中，然后在解剖顯微鏡下去除各動脈段的動脈外膜和外層部分。將剩余的組織內(nèi)層部分和內(nèi)膜轉(zhuǎn)移到單獨的解剖盤中，用新鮮的培養(yǎng)介質(zhì)清洗幾次。然后，將各動脈段切成約1mm2，放置于25cm2的組織培養(yǎng)瓶中。松散地蓋上組織培養(yǎng)瓶，將其置于潮濕的CO2培育箱中。2小時以后，將補充了100單位/ml青霉素、100mg/ml鏈霉素、4pmol/l L-谷氨酰胺和20％ PBS的4mlRPMI-1640培養(yǎng)介質(zhì)小心地加入到組織培養(yǎng)瓶中而不移動組織。1周后，用新鮮介質(zhì)填充樣品。在大約2周的期間內(nèi)，來自分離塊的細胞發(fā)生了一定的融合。然后用PBS沖洗細胞，隨后用含有0.125％胰島素和0.02％ EDTA的PBS溶液在37℃下處理1-2分鐘，從而進行胰蛋白酶化。用移液管將得到的懸浮液移到裝有10ml培養(yǎng)介質(zhì)的75cm2組織培養(yǎng)瓶中，按照上述方法進行溫育。
采用3到5代的細胞進行試驗。
實施例1吸收到大鼠大動脈平滑肌細胞(RASMC)中的3H-甲基胸腺嘧啶用不含血清(SFM)而含有Ang II(10-7M)，還含有或不含各種濃度的曲洛司坦的介質(zhì)對靜止的RASMC(0.3×105/ml/孔)進行48小時溫育。結(jié)果示于表1中。在Ang II處理組中，促進了3H-甲基胸腺嘧啶被吸收到RASMC中。由Ang II引起的氚吸收受到濃度為10-6和10-5的曲洛司坦的抑制，但不受濃度為10-9，10-8以及10-7M的曲洛司坦的抑制。
表1
數(shù)值是平均值±S.E.M；N＝3/組；ANNOVAP＜0.001；研究者的t-檢驗-對照和血管緊張素刺激的樣品的比較，P＜0.01，血管緊張素刺激的樣品與添加了濃度為10-6或10-5M的曲洛司坦的樣品的比較，P＜0.05。
(dpm每分鐘的衰減)實施例2對大鼠大動脈平滑肌細胞(RASMC)計數(shù)用含有Ang II(10-7M)并含有或不含各種濃度的曲洛司坦的20％ FBSRPMI-1640介質(zhì)溫育RASMC(0.5×105/ml/孔)48小時。結(jié)果示于表2中。與對照組相比，用Ang II 10-7M處理的組中，RASMC的數(shù)量發(fā)生明顯增加。Ang II刺激細胞數(shù)目增長這一作用受到濃度為10-6和10-5的曲洛司坦的抑制，但不受濃度為10-9，10-8以及10-7M的曲洛司坦的抑制。
表2
數(shù)值是平均值±S.E.M；N＝3/組；ANNOVAP＜0.001；研究者的t-檢驗-對照和血管緊張素刺激的樣品的比較，P＜0.01，血管緊張素刺激的樣品與添加了濃度為10-6或10-5M的曲洛司坦的樣品的比較，P＜0.05。
實施例3采用與實施例1中相同的氚化胸腺嘧啶吸收方法，在存在或缺乏曲洛司坦的情況下檢測洛沙坦對受血管緊張素II-刺激的細胞增生的作用。洛沙坦明顯消除了血管緊張素II的刺激作用，且僅存在洛沙坦的組與對照組并無區(qū)別。另外添加的曲洛司坦進一步將細胞增生減少至低于對照組的值(*P＜0.05，**P＜0.01)。結(jié)果示于圖2中。
實施例4用存在于棉籽油中的1ml乙醇和曲洛司坦(4mg/kg/天)處理雄性Wistar大鼠(～500g)，共5天。對照組的動物僅接受溶煤處理。然后用0.1ml(500u)肝素以IP方式處理動物，然后通過打暈方式殺死動物，使其頸部脫位。從頸部血管收集血液并進行離心分離，將獲得的血漿儲藏在-20℃下，直到要求進行類固醇分析。采用商購的試劑盒(Diagnostic Systems Laboratories Inc.，Webster，Texas，USA)分析皮質(zhì)酮和醛固酮的濃度。結(jié)果示于圖3中。圖中示出了對照組動物和接受曲洛司坦處理的動物的皮質(zhì)酮(圖3(a))和醛固酮(圖3(b))的循環(huán)濃度。對照組和曲洛司坦組的數(shù)值之間的區(qū)別并不明顯。
采用已制定的方法建立來自曲洛司坦處理組和對照組動物的RASMC的原代培養(yǎng)物。為進行[Ca2+]i測定，用1μM fura-2于37℃下，在改進的Krebs-Ringer碳酸氫鹽溶液(3.6mM K+，1.2mM Ca2+，0.5mM Mg2+，5mMHepes和20mM HCO-)這一介質(zhì)中填充細胞達30分鐘。為了同時測定fura-2的熒光，將覆蓋在蓋玻片上的細胞固定在置于改性Krebs-Ringer碳酸氫鹽溶液中的倒置顯微鏡(Zeiss)的鏡臺上。激發(fā)波長為340和380nm，在51nm下檢測發(fā)射。由激發(fā)波長340和380nm下的熒光強度比計算[Ca2+]i。檢測對照組和曲洛司坦處理組動物的細胞區(qū)域，～10個細胞/區(qū)域。結(jié)果示于表3和圖3(c)和(d)，圖中的箭頭表示施用血管緊張素II的時間。采用10nmol/L血管緊張素II刺激對照組動物(圖3(c))和曲洛司坦處理組動物(圖3(d))的血管平滑肌細胞，獲得特征鈣信號。
表3曲洛司坦處理的平滑肌細胞(TTSMC)和對照組細胞(NSMC)中響應(yīng)血管緊張素II(1nmol/L)產(chǎn)生鈣信號的閾值濃度
+＝鈣響應(yīng)，-＝無響應(yīng)實施例5.
在存在或缺乏醛固酮10-8mol/L的情況下溫育48小時而得到的RASMC中，采用RT-PCR和實時定量的RT-PCR檢測AT1受體mRNA的表達。采用Brilliant SYBR Green QRT-PCR Master Mix Kit，即基于累積熒光的實時檢測的一步法試劑盒(Mx300P，Stratagene，Amsterdam)進行實時RT-PCR。結(jié)果是平均值，SEM太小而不能被示出。**＝P＜0.01。結(jié)果示于圖4中。血管緊張素II本身減少了編碼血管緊張素II 1型受體(AT1)的基因的mRNA轉(zhuǎn)錄，添加曲洛司坦，則更進一步地減少了編碼血管緊張素II 1型受體(AT1)的基因的mRNA轉(zhuǎn)錄。
權(quán)利要求
1.通式(I)的化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯在制備用于治療人類或動物血管緊張素II相關(guān)性疾病的藥物中的應(yīng)用 其中，R1，R2，R5，R6可相同也可不同，分別獨立地選自氫或C1-4烷基；R3是氫，C1-4烷基，C2-4烯基或C2-4炔基；R4是羥基，C1-4烷酰氧基，式(II)或(III)的基團， 其中R7是(CH2)n，n是0-4的整數(shù)，R8是氫，C1-4烷基，羥基或NH2，而R9和R10可相同也可不同，分別獨立地為氫或C1-4烷基；或者，R3和R4一起形成羰基(oxo)，乙二氧基或丙二氧基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中，通式(I)中的R1為氫或甲基，和/或R2為氫或甲基，和/或R4為羥基或R3和R4一起形成羰基(oxo)，和/或R5和R6為甲基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中，通式(I)的化合物是曲洛司坦，酮曲洛司坦或環(huán)氧司坦。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任意一項的應(yīng)用，其中，所述血管緊張素II相關(guān)性疾病是心血管疾病。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的應(yīng)用，其中，所述心血管疾病是充血性心力衰竭，心肌梗塞后，心肌癥，糖尿病，腎衰竭，代謝綜合癥(X綜合癥)或心律不齊。
6.根據(jù)權(quán)利要求4的應(yīng)用，其中，所述心血管疾病是心肌梗塞后。
7.根據(jù)前述任意一項權(quán)利要求的應(yīng)用，其中，所述藥物的給藥量為0.5-4mg/kg/天。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項的應(yīng)用，其中，所述血管緊張素II相關(guān)性疾病是增生性疾病。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的應(yīng)用，其中，所述增生性疾病是外周動脈疾病，腦血管疾病，動脈粥樣化，心臟纖維化，心肌病，糖尿病性視網(wǎng)膜病，糖尿病性壞疽，糖尿病性腎病，硬皮病，動脈瘤，哮喘或動脈粥樣化。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9的應(yīng)用，其中，所述增生性疾病是心臟纖維化。
11.根據(jù)權(quán)利要求8-10中任意一項的應(yīng)用，其中，所述增生性疾病是梗塞形成之后發(fā)生的心臟纖維化。
12.根據(jù)前述任意一項權(quán)利要求的應(yīng)用，其中，所述藥物的給藥量為0.5-4mg/kg/天。
13.根據(jù)前述任意一項權(quán)利要求的應(yīng)用，其中，所述藥物包括顆粒形式的權(quán)利要求1-3所述的通式(I)化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的應(yīng)用，其中，所述顆粒形式化合物的顆粒的等體積球體的平均直徑為至多12μm，且95％或更多的顆粒的粒度為至多50μm。
15.根據(jù)權(quán)利要求13或14的應(yīng)用，其中，所述顆粒的等體積球體的平均直徑為5-12μm。
16.根據(jù)權(quán)利要求13-15中任意一項的應(yīng)用，其中，所述顆粒的等體積球體的平均直徑為至多5μm。
17.根據(jù)權(quán)利要求13-16中任意一項的應(yīng)用，其中，所述顆粒形式的化合物的比表面面積為大于等于2m2g-1或大于等于5m2g-1。
18.根據(jù)前述任意一項權(quán)利要求的應(yīng)用，其中，所述藥物作為片劑，膠囊劑或液體分散劑而進行口服給藥。
19.根據(jù)前述任意一項權(quán)利要求的應(yīng)用，其中，所述藥物包括單位劑量為0.25mg-1000mg的權(quán)利要求1-3所述的通式(I)化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的應(yīng)用，其中，所述單位劑量為0.5mg-25mg。
21.根據(jù)權(quán)利要求19的應(yīng)用，其中，所述單位劑量為25-1000mg。
22.根據(jù)前述任意一項權(quán)利要求的應(yīng)用，其中，所述采用通式(I)化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯對血管緊張素II相關(guān)性心血管疾病的治療與一種或多種下列藥物的進一步治療相結(jié)合-血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑；-血管緊張素II受體阻斷劑；-醛固酮抑制劑或降低醛固酮水平或阻止醛固酮作用的藥劑；或-類固醇生成抑制劑。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的應(yīng)用，其中，所述醛固酮抑制劑或降低醛固酮水平的藥劑是ACE抑制劑。
24.根據(jù)權(quán)利要求22或23的應(yīng)用，其中，所述ACE抑制劑是卡托普利，依那普利或賴諾普利。
25.根據(jù)權(quán)利要求22的應(yīng)用，其中，所述醛固酮抑制劑或阻止醛固酮作用的藥劑是安體舒通或依普利酮。
26.根據(jù)權(quán)利要求22的應(yīng)用，其中，所述血管緊張素II受體阻斷劑是洛沙坦或坎地沙坦。
27.根據(jù)權(quán)利要求22的應(yīng)用，其中，所述類固醇生成抑制劑是氨魯米特或美替拉酮。
28.一種藥物，其包括(a)權(quán)利要求1-3和13-17所述的通式(I)化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯；以及(b)權(quán)利要求22-27中任意之一所述的一種或多種下列藥物-ACE抑制劑；-血管緊張素II受體阻斷劑；-醛固酮抑制劑或降低醛固酮水平或阻止醛固酮作用的藥劑；或-類固醇生成抑制劑，(a)和(b)在治療權(quán)利要求4-6或8-11中任意一項所述的血管緊張素II相關(guān)性疾病的過程中同時、分開或相繼使用。
29.一種治療血管緊張素II相關(guān)性疾病的方法，該方法為給予患有所述疾病的患者施用治療所述疾病有效量的權(quán)利要求1-3或13-17任意一項所述的通式(I)化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯。
30.一種治療血管緊張素II相關(guān)性疾病的方法，該方法為給予患有所述疾病的患者施用治療所述疾病有效量的權(quán)利要求1-3或13-17任意一項所述的通式(I)化合物或其3-烯醇C1-4鏈烷酸酯，以及治療所述疾病有效量的一種或多種下列藥物-血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑；-血管緊張素II受體阻斷劑；-醛固酮抑制劑或降低醛固酮水平或阻止醛固酮作用的藥劑；或-類固醇生成抑制劑。
31.根據(jù)權(quán)利要求29或30的方法，其中，所述血管緊張素II相關(guān)性疾病是權(quán)利要求4-6或8-11所述的疾病。
全文摘要
通式(I)的化合物或其3－烯醇C
文檔編號A61P35/00GK1791414SQ200480009923
公開日2006年6月21日 申請日期2004年4月16日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月16日
發(fā)明者喬治·馬吉茨, 加文·保羅·文森 申請人:喬治·馬吉茨, 加文·保羅·文森