專利名稱：包含蛋白質(zhì)和/或多肽以及膠體顆粒的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于提高多種蛋白質(zhì)和多肽的半壽期、療效和穩(wěn)定性的藥物制劑。
背景技術(shù)：
甲型血友病是最常見的遺傳性血凝固障礙病之一。作為血凝固系統(tǒng)的一種或一種以上的功能障礙的結(jié)果，甲型血友病患者易于頻繁地出血。血友病的一個(gè)原因是血液中因子VIII(FVIII)的不足。該疾病可以用因子VIII濃縮物進(jìn)行治療。然而，由于在約15％的患者中存在因子VIII中和抗體(所謂的抑制物)，由此使采用因子VIII濃縮物來(lái)治療是幾乎不可能的。
在文獻(xiàn)中已經(jīng)公開了兩種基本方法以保護(hù)因子VIII免受抑制物的作用而失活。
Hemker在WO/80/01456中公開了適于口服的藥物組合物，該藥物組合物包含有摻入由磷脂形成的0.5-1.0微米的脂質(zhì)體中的FVIII。磷脂具有凈電荷，并且將FVIII摻入至脂質(zhì)體層之間。據(jù)稱在50小時(shí)期間，F(xiàn)VIII在血漿中的水平保持高于正常值的約5％。
Horikoshi在US 4,348,384中聲稱制備了如Hemker描述的組合物，但并沒有得到滿意的結(jié)果。因此，Horikoshi將蛋白酶抑制劑連同F(xiàn)VIII一起摻入脂質(zhì)體中，以保護(hù)其免于蛋白水解。在6小時(shí)內(nèi)，得到了3％的FVIII的正常血漿水平。
Woodle在US 5,013,556中公開了用于經(jīng)由血流輸送多種藥物的脂質(zhì)體組合物。該脂質(zhì)體包含1摩爾％～20摩爾％的用聚烷基醚衍生化的兩親性脂質(zhì)。這里該藥物化合物也包埋在脂質(zhì)體中。這些脂質(zhì)體組合物是可商購(gòu)的，名稱為Stealth囊泡(SUV′s，由磷脂和與磷脂共價(jià)結(jié)合的聚乙二醇(PEG)組成的單層小脂質(zhì)體)。
該方法帶來(lái)的另一問題是直徑較大的脂質(zhì)體具有較短的半壽期。因此，脂質(zhì)體必須在高壓下縮小尺寸，這會(huì)影響蛋白質(zhì)活性，對(duì)于凝血因子V和VIII即是如此。
在另一種方法中，Barrowcliffe，T.W.等人在(1983)J.Lab.Clin.Med.10134-43中教導(dǎo)了將FVIII與從人和/或動(dòng)物腦中提取的磷脂混合，這在在體外為FVIII提供了有效的保護(hù)。在該方法中，磷脂與FVIII結(jié)合而不包埋FVIII。Kemball-Cook，G.和Barrowcliffe，T.W.在(1992)Thromb.Res.6757-71中教導(dǎo)了帶負(fù)電荷的磷脂表面是FVIII結(jié)合所必需的。已發(fā)現(xiàn)帶負(fù)電的磷脂酰絲氨酸和磷脂酸在與FVIII結(jié)合中活性非常高，而磷脂酰膽堿是無(wú)活性的。然而，帶負(fù)電荷的磷脂是有毒的，而且來(lái)源于腦組織的磷脂可能攜帶有病原體。
EP 689,428公開了包含脂質(zhì)體的脂質(zhì)體組合物，所述脂質(zhì)體具有親水性聚合物鏈的外表層。在效應(yīng)物偶聯(lián)之前，通過(guò)脂質(zhì)錨的激活，將多肽或多糖效應(yīng)分子共價(jià)結(jié)合于聚合物鏈的遠(yuǎn)端。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供包含用于治療的蛋白質(zhì)或多肽的藥物組合物。
本發(fā)明的另一目的在于提供在血流中具有延長(zhǎng)的半壽期這種形式的蛋白質(zhì)或多肽。
本發(fā)明的又一目的在于提供對(duì)患有血液凝固障礙病癥，特別是血友病的患者進(jìn)行治療的方法。
在本發(fā)明的一個(gè)方面中，提供了用于腸胃外給藥的藥物組合物，該藥物組合物包含治療有效量的蛋白質(zhì)或多肽以及膠體顆粒，所述顆粒包含用生物相容性親水聚合物衍生化的、約1摩爾％～20摩爾％的兩親性脂質(zhì)，其中所述蛋白質(zhì)或多肽選自(a)能在外部結(jié)合所述膠體顆粒的蛋白質(zhì)或多肽；(b)能結(jié)合聚烷基醚、聚乳酸和聚乙醇酸家族的聚合物的蛋白質(zhì)或多肽；或(c)包含共有序列S/T-X-L/I/V-I/V/Q/S-S/T-X-X-E的蛋白質(zhì)或多肽，其中X是任意氨基酸，且S、T、L、I、V、E以及Q具有它們的標(biāo)準(zhǔn)含義。蛋白質(zhì)或多肽不是包埋于所述的膠體顆粒中。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，膠體顆粒是基本上中性的，聚合物是基本上不帶凈電荷的。在本文中，術(shù)語(yǔ)“基本上中性”和“基本上不帶凈電荷”是指既不帶正電荷也不帶負(fù)電荷。然而，在零的實(shí)驗(yàn)誤差內(nèi)所測(cè)得的非常低的電荷也包括在以上術(shù)語(yǔ)的含義中。
本發(fā)明基于令人驚奇并意想不到的發(fā)現(xiàn)含有用生物相容性親水聚合物衍生化的兩親性脂質(zhì)的脂質(zhì)體可用于結(jié)合蛋白質(zhì)或多肽、增強(qiáng)它們的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)(半壽期和曲線下的面積)以及保護(hù)它們不受血流中抑制物的影響。由于所用的兩親性脂質(zhì)是人工合成和無(wú)毒的，所以本發(fā)明顯著優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)的組合物，并因此可用于體內(nèi)治療。此外，由于脂質(zhì)體不包埋蛋白質(zhì)或多肽，所以可以使用小尺寸的脂質(zhì)體，而由于小尺寸的脂質(zhì)體不能被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)除去并且所制備的蛋白質(zhì)或多肽的活性不會(huì)被減弱(體外發(fā)現(xiàn)的所有活性以及體內(nèi)注射后的早期活性)，所以它們?cè)隗w內(nèi)具有較長(zhǎng)的半壽期。與EP 689,428中公開的組合物不同，如將在以下更加詳細(xì)地描述那樣，所述蛋白質(zhì)或多肽在脂質(zhì)體的外表面與聚合物鏈非共價(jià)相互作用，并且沒有進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)以激活聚合物鏈。
術(shù)語(yǔ)“能在外部結(jié)合所述膠體顆粒的蛋白質(zhì)或多肽”包括諸如凝血因子VIIa(FVIIa)、凝血因子V(FV)、凝血因子IX(FIX)和凝血因子X(FX)、粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、γ干擾素和胰高血糖素樣肽1(GLP-1)、γ干擾素和胰高血糖素樣肽1(GLP-1)以及由4個(gè)氨基酸(L-ala、L-glu、L-lys和L-tyr)重復(fù)組成的共聚物(克帕松(Copaxone)，Teva，以色列)。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，可憑經(jīng)驗(yàn)確定這些蛋白質(zhì)的同一性。
正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，本發(fā)明的藥物組合物可用于治療多種病癥。例如，包含克帕松的組合物可用于保護(hù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)細(xì)胞免受谷氨酸毒性的影響并治療由谷氨酸毒性導(dǎo)致或加重的損傷或病癥。如美國(guó)申請(qǐng)專利20020037848中所描述，該組合物也可用于治療多發(fā)性硬化癥、糖尿病性神經(jīng)病變、老年性癡呆、阿爾茨海默氏病、帕金森氏癥、面神經(jīng)(Bell′s)麻痹、青光眼、亨廷頓氏舞蹈病、肌萎縮性側(cè)索硬化、癲癇持續(xù)狀態(tài)、非動(dòng)脈炎性視神經(jīng)病變，或維生素缺乏癥。
術(shù)語(yǔ)“能結(jié)合聚烷基醚、聚乳酸和聚乙醇酸家族的聚合物的蛋白質(zhì)或多肽”包括通過(guò)任何非共價(jià)機(jī)理，例如離子相互作用、疏水性相互作用、氫鍵和范德華引力(Arakawa，T.和Timasheff，S.N.(1985)Biochemistry246756-6762；Lee，J.C.和Lee，L.L.Y(1981)J.Biol.Chem.226625-631)，能結(jié)合聚烷基醚、聚乳酸和聚乙醇酸家族的聚合物或其衍生物的蛋白質(zhì)和多肽。該聚合物的優(yōu)選實(shí)例是聚乙二醇(PEG)。
術(shù)語(yǔ)“治療有效量”可以理解為導(dǎo)致蛋白質(zhì)或多肽水平在血流中具有所需療效的蛋白質(zhì)或多肽的量。所述的量可通過(guò)施用包含不同量的蛋白質(zhì)或多肽的組合物以及施用后在不同時(shí)間測(cè)量血液中的水平而用實(shí)驗(yàn)確定。
用于制備膠體顆粒的兩親性脂質(zhì)可從天然的或人造的來(lái)源獲得。最優(yōu)選的脂質(zhì)包括磷脂，例如磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺，和氨基甲酸酯(carbamate)連接的例如二硬酯酰氨基丙二醇(DS)的不帶電的脂聚合物。生物相容性親水聚合物的作用是在空間上穩(wěn)定SUVs，從而防止體外囊泡的融合，并使得囊泡避免體內(nèi)RES的吸附。聚合物的分子量?jī)?yōu)選為約500道爾頓至約5000道爾頓，最優(yōu)選為約2000道爾頓。
膠體顆粒的平均粒徑優(yōu)選為約0.03微米至約0.4微米，最優(yōu)選為約0.1微米。這將增加它們的體內(nèi)循環(huán)時(shí)間以及避免受到RES的吸附。兩親性脂質(zhì)包括大約0.5摩爾％至約20摩爾％的顆粒，優(yōu)選大約1％～6％，最優(yōu)選3％。
各種已知的偶聯(lián)反應(yīng)可用于制備形成囊泡的脂質(zhì)，該脂質(zhì)是用親水性聚合物衍生化的。例如，聚合物(如PEG)可通過(guò)氰尿酰氯基團(tuán)衍生化成諸如磷脂酰乙醇胺(PE)的脂質(zhì)?；蛘?，加帽的PEG可通過(guò)羰基二咪唑偶聯(lián)劑得以活化，以形成活化的咪唑化合物。氨基甲酸酯連接的化合物可通過(guò)以下方法制備將MPEG(甲氧基PEG)的末端羥基與對(duì)硝基苯基氯甲酸酯反應(yīng)，以生產(chǎn)對(duì)硝基苯基碳酸酯。然后將該產(chǎn)物與1-氨基-2，3-丙二醇反應(yīng)以生成氨基甲酸酯中間物。將二醇的羥基?；陨山K產(chǎn)物。如WO 01/05873所述，利用甘油代替1-氨基-2，3-丙二醇進(jìn)行類似的合成，可用于生產(chǎn)碳酸酯連接的產(chǎn)物。其它反應(yīng)也是熟知并在例如上述的US 5,013,556進(jìn)行了描述，其內(nèi)容在此引用作為參考。
本發(fā)明的組合物通過(guò)注射得以施用，優(yōu)選(iv)靜脈注射、(sc)皮下注射或(im)肌肉注射。由于注射時(shí)脂質(zhì)體組合物引起的副作用，現(xiàn)有技術(shù)的組合物僅僅供口服使用。但是，本發(fā)明的組合物顯而易見由于尺寸小和有毒的磷脂較少，所以進(jìn)行注射是無(wú)毒性的。已在大鼠中進(jìn)行了PEG化的脂質(zhì)體和FIII的毒理學(xué)研究一在500單位/Kg的劑量下未發(fā)現(xiàn)毒性。注射直到0.5g/Kg體重的量的本發(fā)明的膠體顆粒，沒有可察覺的中毒癥狀。盡管本發(fā)明中使用的游離形式的蛋白質(zhì)和多肽在血管系統(tǒng)中具有較短的半壽期，但是將它們?cè)诒景l(fā)明的組合物中進(jìn)行施用預(yù)計(jì)可以將它們的半壽期提高至少1.5倍。可預(yù)見本發(fā)明的組合物在“根據(jù)需求施用”和患者的預(yù)防性治療中是有效的。
在本發(fā)明的另一個(gè)方面，發(fā)現(xiàn)有8個(gè)氨基酸的共有序列，該共有序列位于與本發(fā)明的脂質(zhì)體結(jié)合的蛋白質(zhì)的內(nèi)部，但在不結(jié)合脂質(zhì)體的蛋白質(zhì)中則沒有。該共有序列是S/T-X-L/I/V-I/V/Q/S-S/T-X-X-E，其中X可以是任意氨基酸，且S、T、L、I、V、E以及Q具有它們的標(biāo)準(zhǔn)含義。
在本發(fā)明的另一個(gè)方面，發(fā)現(xiàn)與注射蛋白質(zhì)分開進(jìn)行PEG化的脂質(zhì)體的注射可提高蛋白質(zhì)的半壽期并延長(zhǎng)療效。
在本發(fā)明的另一方面，藥物組合物中添加有膽固醇。


為了理解本發(fā)明并了解如何在實(shí)踐中實(shí)施，現(xiàn)參考附圖僅通過(guò)非限制性實(shí)施例來(lái)描述優(yōu)選的實(shí)施方案，其中圖1顯示了PEG化的脂質(zhì)體對(duì)固定化的FVIII的實(shí)時(shí)相互作用。a.PEG化的脂質(zhì)體結(jié)合固定化的rFVIII，但對(duì)照POPC脂質(zhì)體(PC)以及POPC∶DSPE脂質(zhì)體(PC∶PE)不結(jié)合固定化的rFVIII。b.PEG化的脂質(zhì)體結(jié)合固定化的rFVIII(FVIII)但不結(jié)合固定化的HSA。c.在缺乏或存在已產(chǎn)生抗FVIII抗體(20Bethesda單位/ml的效價(jià))的甲型血友病患者的稀釋的(×100)血清(抑制物)時(shí)，PEG化的脂質(zhì)體結(jié)合固定化的rFVIII。反應(yīng)以共振單位(RU)顯示。對(duì)a～c中的反應(yīng)進(jìn)行對(duì)HSA包被的孔道的非特異結(jié)合的校正，該非特異結(jié)合低于PEG化的脂質(zhì)體對(duì)固定化的FVIII包被的孔道的實(shí)時(shí)相互作用達(dá)到5％。
圖2.PEG化的脂質(zhì)體對(duì)固定化的FIX的實(shí)時(shí)相互作用。a.PEG化的脂質(zhì)體結(jié)合固定化的FIX但不結(jié)合固定化的HSA。b.PEG化的脂質(zhì)體結(jié)合固定化的FIX，但對(duì)照POPC脂質(zhì)體不結(jié)合固定化的FIX。反應(yīng)以共振單位(RU)表示。對(duì)反應(yīng)進(jìn)行對(duì)HSA包被的孔道的非特異結(jié)合的校正，相對(duì)于對(duì)FIX包被的孔道的結(jié)合，該非特異結(jié)合低于PEG化的脂質(zhì)體對(duì)固定化的FIX的實(shí)時(shí)相互作用的5％。
圖3.PEG化的脂質(zhì)體對(duì)固定化的G-CSF的實(shí)時(shí)相互作用。a.PEG化的脂質(zhì)體結(jié)合固定化的G-CSF但不結(jié)合固定化的HSA。b.PEG化的脂質(zhì)體結(jié)合固定化的G-CSF，但對(duì)照POPC脂質(zhì)體不結(jié)合固定化的G-CSF。反應(yīng)以共振單位(RU)表示。對(duì)反應(yīng)進(jìn)行對(duì)HSA包被的孔道的非特異結(jié)合的校正，相對(duì)于的G-CSF包被的孔道的結(jié)合，所述非特異性結(jié)合低于PEG化的脂質(zhì)體對(duì)固定化的G-CSF的實(shí)時(shí)相互作用的5％。
圖4.PEG化的脂質(zhì)體對(duì)固定化的GM-CSF的實(shí)時(shí)相互作用。a.PEG化的脂質(zhì)體結(jié)合固定化的GM-CSF但不結(jié)合固定化的HSA。b.PEG化的脂質(zhì)體結(jié)合固定化的GM-CSF，但對(duì)照POPC脂質(zhì)體不結(jié)合固定化的GM-CSF。反應(yīng)以共振單位(RU)表示。對(duì)反應(yīng)進(jìn)行對(duì)HSA包被的孔道的非特異結(jié)合的校正，相對(duì)于對(duì)G-CSF包被的孔道的結(jié)合，所述非特異性結(jié)合低于PEG化的脂質(zhì)體對(duì)固定化的GM-CSF的實(shí)時(shí)相互作用的5％。
圖5.PEG化的脂質(zhì)體對(duì)固定化的γ干擾素的實(shí)時(shí)相互作用。a.PEG化的脂質(zhì)體結(jié)合固定化的γ干擾素但不結(jié)合固定化的HSA。b.PEG化的脂質(zhì)體結(jié)合固定化的γ干擾素，但對(duì)照POPC脂質(zhì)體不結(jié)合固定化的γ干擾素。反應(yīng)以共振單位(RU)表示。對(duì)反應(yīng)進(jìn)行對(duì)HSA包被的孔道的非特異結(jié)合的校正，相對(duì)于對(duì)γ干擾素包被的孔道的結(jié)合，所述非特異結(jié)合低于PEG化的脂質(zhì)體對(duì)固定化的γ干擾素的實(shí)時(shí)相互作用的5％。
圖6.PEG化的脂質(zhì)體對(duì)固定化的GLP-1的實(shí)時(shí)相互作用。a.PEG化的脂質(zhì)體結(jié)合固定化的GLP-1但不結(jié)合固定化的HSA。b.PEG化的脂質(zhì)體結(jié)合固定化的GLP-1，但對(duì)照POPC脂質(zhì)體不結(jié)合固定化的GLP-1。反應(yīng)以共振單位(RU)表示。對(duì)反應(yīng)進(jìn)行對(duì)HSA包被的孔道的非特異結(jié)合的校正，相對(duì)于對(duì)GLP-1包被的孔道的結(jié)合，所述非特異結(jié)合低于PEG化的脂質(zhì)體對(duì)固定化的GLP-1的實(shí)時(shí)相互作用的5％。
圖7.在缺乏或存在稀釋的(×10)兔多克隆抗人FIX抗體(Sigma)(抗體)時(shí)，PEG化的脂質(zhì)體結(jié)合固定化的FIX。
圖8.用于結(jié)合PEG化的脂質(zhì)體的共有序列和FVIII結(jié)合位點(diǎn)。a.在各種蛋白質(zhì)中結(jié)合PEG化的脂質(zhì)體的共有序列。保守氨基酸用紅色標(biāo)記而非保守氨基酸用藍(lán)色標(biāo)記。b.人FVIII的結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)。從它的一級(jí)結(jié)構(gòu)推導(dǎo)出的人FVIII的不連續(xù)結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)。黑色方框代表脂質(zhì)體結(jié)合位點(diǎn)。用T顯示的紅色箭頭代表凝血酶激活位點(diǎn)。c.PEG化的脂質(zhì)體或POPC脂質(zhì)體(PC)與衍生自FVIII序列(1783～1796位氨基酸)的肽的結(jié)合，所述肽固定在CM5傳感器芯片上。反應(yīng)以共振單位(RU)表示。
圖9.PEG化的脂質(zhì)體對(duì)固定化的克帕松的實(shí)時(shí)相互作用。a.PEG化的脂質(zhì)體結(jié)合固定化的克帕松但不結(jié)合固定化的HSA。b.PEG化的脂質(zhì)體結(jié)合固定化的克帕松，但對(duì)照POPC脂質(zhì)體不結(jié)合固定化的克帕松。反應(yīng)以共振單位(RU)表示。對(duì)反應(yīng)進(jìn)行對(duì)HSA包被的孔道的非特異結(jié)合的校正，相對(duì)于對(duì)克帕松包被的孔道的結(jié)合，所述非特異性結(jié)合低于PEG化的脂質(zhì)體對(duì)固定化的克帕松的實(shí)時(shí)相互作用的5％。
圖10.尾部切除后的血友病小鼠的存活情況。Kaplan-Meierb圖表示使用FVIII(Kogenate-FS，Bayer)或FVIII和PEG化的脂質(zhì)體(1小時(shí)后注射)注射血友病小鼠。T檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析表明各組之間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異(P＜0.05)。
圖11.PEG化的脂質(zhì)體對(duì)固定化的FVIII的實(shí)時(shí)相互作用，所述的脂質(zhì)體是由POPC∶DSPE-PEG 2000(來(lái)自Genzyme Pharmaceuticals的脂質(zhì)，Liestal，瑞士)分別以97∶3的摩爾比組成的PEG化的脂質(zhì)體，以及是由POPC∶DS-c-PEG 2000(來(lái)自Genzyme Pharmaceuticals的脂質(zhì)，Liestal，瑞士)分別以97∶3的摩爾比組成的PEG化的脂質(zhì)體。
具體實(shí)施例方式
1.實(shí)施例1～81.1材料和方法脂質(zhì)體的制備。脂質(zhì)體由棕櫚酰-油酰磷脂?；?膽堿(POPC)和二硬脂酰磷脂酰-乙醇胺甲基聚乙二醇2000(DSPE-PEG 2000)(GenzymePharmaceuticals，Liesatal，瑞士)(摩爾比分別為97∶3)組成，和由POPC和二硬脂酰磷脂酰-乙醇胺(DSPE)(Aventi Polar Lipids，Alabaster AL，美國(guó))(摩爾比分別為97∶3)組成，并按如下進(jìn)行制備將脂質(zhì)溶于叔丁醇(Reidel-de Haen，Seelze，德國(guó))直至10％w/v(重量/體積)，冷凍并使溶液凍干。將得到的脂質(zhì)干粉重懸于50mM的檸檬酸鈉緩沖液(pH 7.0)直至2％～13％(w/v)，以形成脂質(zhì)體。使用LiposoFastTM-100擠壓設(shè)備(Aventin Inc.，Ottawa，加拿大)，使脂質(zhì)體通過(guò)1.2μm、0.2μm和0.05μm大小的聚碳酸酯過(guò)濾器(Poetics Corp.，Livermore CA，美國(guó))進(jìn)行過(guò)濾，以形成大小為80nm～110nm的脂質(zhì)體。然后使脂質(zhì)體溶液穿過(guò)0.2μm的醋酸纖維素?zé)o菌過(guò)濾器(SterivexTM，Millipore Corporation，Bedford MA，美國(guó))，并在2℃～8℃儲(chǔ)存。
實(shí)時(shí)相互作用——表面等離振子共振分析。使用BiacoreTM2000生物傳感儀器(Biacore AB，Uppsala，瑞典)進(jìn)行結(jié)合研究。根據(jù)供應(yīng)商描述，將下列蛋白質(zhì)通過(guò)胺偶聯(lián)試劑盒以1500RU(約1.5ng/mm2)固定于CM5-傳感器芯片(Biacore AB，Uppsala，瑞典)上FVIII(Kogenate-FS，Bayer，Berkley CA，美國(guó))、FIX(Benefix，Genetics Institute，Cambridge MA，美國(guó))、G-CSF、GM-CSF、IFN-γ(γ干擾素)、紅細(xì)胞生成素、人生長(zhǎng)激素、α干擾素2a、α干擾素2b(ProSpec-Tany TechnoGene Ltd，Nes Ziona，以色列)、GLP-1、胰島素(Sigma)、克帕松(Teva Pharm，以色列)、IgG以及HSA(Omrix，Tel-Aviv，以色列)。25℃時(shí)，使用終濃度為0.2mM～2mM的PEG化的脂質(zhì)體或?qū)φ罩|(zhì)體，在50mM檸檬酸鈉緩沖液(pH 7.0)中，以10μl/分鐘的流速用4分鐘進(jìn)行SPR分析。用1mM的NaOH以10μl/分鐘的流速將芯片洗滌1分鐘進(jìn)行傳感器芯片表面的再生。用BIA評(píng)價(jià)軟件(Biacore AB，Uppsala，瑞典)來(lái)分析SPR數(shù)據(jù)的締合常數(shù)、離解常數(shù)、親合常數(shù)。
多重比對(duì)——使用MUSCA軟件(http//cbcsrv.watson.ibm.com)進(jìn)行多重序列比對(duì)。下列Swiss-Prot數(shù)據(jù)庫(kù)登錄號(hào)碼可用于多重比對(duì)人(h)FVIII(P00451)、人FIX(P00740)、人G-CSF(P09919)、人GM-CSF(P04141)、人IFN-γ(P01579)以及人GLP-1(P01275)。
1.2結(jié)果蛋白質(zhì)/肽對(duì)PEG化的脂質(zhì)體的結(jié)合我們通過(guò)表面等離振子共振(SPR)測(cè)量法使用Biacore儀器(Biacoe，Uppsala，瑞典)來(lái)分析蛋白質(zhì)和肽對(duì)PEG化的脂質(zhì)體的結(jié)合。我們將蛋白質(zhì)/肽固定于CM5傳感器芯片(Biacoe，Uppsala，瑞典)上，然后注射入相同大小(80nm～110nm)和濃度的PEG化的脂質(zhì)體或?qū)φ罩|(zhì)體，并測(cè)量和分析蛋白質(zhì)/肽對(duì)流動(dòng)的攝入脂質(zhì)體的結(jié)合。
PEG化的脂質(zhì)體由結(jié)合于FVIII的POPC和DSPE-PEG2000組成(圖1a)。由于由POPC和POPC∶DSPE組成的兩種類型的對(duì)照脂質(zhì)體不結(jié)合于FVIII(圖1a)，所以結(jié)合依賴于附著于DSPE脂質(zhì)的PEG聚合物。此外，結(jié)合是FVIII特異性的，因?yàn)镻EG化的脂質(zhì)體不結(jié)合于人血清白蛋白(HSA)(圖1b)。使用兩個(gè)位點(diǎn)結(jié)合的模型，對(duì)代表性曲線的結(jié)合分析(圖1a)表明PEG化的脂質(zhì)體結(jié)合于FVIII上的兩個(gè)位點(diǎn)，其中締合速率常數(shù)(Kon)分別為3.83×105M-1S-1和3.37×106M-1S-1，解離速率常數(shù)(Koff)分別為1.72×10-3S-1和6.6×10-3S-1，以及親合常數(shù)(Kd)值分別為1.96nM和4.5nM。
多克隆抗人因子VIII抗體[產(chǎn)生抗FVIII抗體(抑制物)的患者的血清]與PEG化的脂質(zhì)體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合這兩個(gè)位點(diǎn)(圖1c)。對(duì)照實(shí)驗(yàn)表明人總免疫球蛋白G(IgG)不與FVIII競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合PEG化的脂質(zhì)體(數(shù)據(jù)未顯示)。這表明PEG化的脂質(zhì)體與抗人因子VIII抗體特異性結(jié)合相同的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域。
使用另外幾個(gè)純化的重組蛋白質(zhì)進(jìn)行SPR測(cè)量。發(fā)現(xiàn)下列蛋白質(zhì)結(jié)合PEG化的脂質(zhì)體因子IX(FIX)、粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、γ干擾素和胰高血糖素樣肽1(GLP-1)(圖2-6)。此外，我們發(fā)現(xiàn)下列蛋白質(zhì)不結(jié)合PEG化的脂質(zhì)體HSA、IgG、胰島素、α干擾素2a、α干擾素2b、人生長(zhǎng)激素和紅細(xì)胞生成素。
此外，多克隆抗人因子IX抗體(Sigma)與PEG化的脂質(zhì)體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合兩個(gè)位點(diǎn)(圖7)。這表明PEG化的脂質(zhì)體與抗人因子IX抗體特異性結(jié)合相同的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域。
氨基酸序列分析表明8個(gè)氨基酸(S/T-X-L/I/V-I/V/Q/S-S/T-X-X-E)的共有序列位于結(jié)合PEG化的脂質(zhì)體的蛋白質(zhì)內(nèi)部(圖8a)，但在不結(jié)合PEG化的脂質(zhì)體的蛋白質(zhì)內(nèi)部則不存在。為檢驗(yàn)共有序列和FVIII上所鑒定的結(jié)合位點(diǎn)，我們合成了衍生于FVIII的1783～1796位氨基酸的肽，并測(cè)量其對(duì)PEG化的脂質(zhì)體的結(jié)合。該肽結(jié)合PEG化的脂質(zhì)體，并具有2.25nM的Kd(圖8c)，其類似于先前發(fā)現(xiàn)的FVIII和PEG化的脂質(zhì)體的Kd值(表1)，但該肽不結(jié)合對(duì)照POPC脂質(zhì)體。
表1顯示了多種蛋白質(zhì)和肽的Kon、Koff以及Kd值的匯總表。
然而，克帕松(Teva，以色列)是由4種氨基酸(L-ala、L-glu、L-lys和L-tyr)重復(fù)隨機(jī)合成的共聚物，其并不含有共有序列，但也可結(jié)合PEG化的脂質(zhì)體(圖9)。
表1蛋白質(zhì)/肽對(duì)PEG化的脂質(zhì)體的結(jié)合的動(dòng)力學(xué)參數(shù)。

如“材料和方法”中所述，評(píng)估多種蛋白質(zhì)和肽對(duì)PEG脂質(zhì)體的締合作用和解離作用。對(duì)于FVIII、FIX、G-CSF、GM-CSF、INF-γ(γ干擾素)，所測(cè)試的PEG脂質(zhì)體濃度是18.355nM；對(duì)于GLP-1，所測(cè)試的PEG脂質(zhì)體濃度為183.55pM。通過(guò)BIA評(píng)估軟件，分析所有蛋白質(zhì)的所得數(shù)據(jù)以計(jì)算締合速率常數(shù)(kon)、解離速率常數(shù)(koff)以及親合常數(shù)(Kd)。
2.實(shí)施例9～102.1材料和方法PEG化的脂質(zhì)體FIX以及PEG化的脂質(zhì)體和G-CSF的配制。具有FIX(Octanine，Octapharma)或G-CSF(ProSpec-Tany TechnoGene Ltd，NesZiona，以色列)的PEG化的脂質(zhì)體可以通過(guò)將所述蛋白質(zhì)與脂質(zhì)體溶液一起溶解(1ml脂質(zhì)體溶液/200單位的FIX，以及1ml脂質(zhì)體溶液/10μg的G-CSF)而進(jìn)行配制。在室溫(20℃～25℃)將小瓶在以33轉(zhuǎn)/分鐘、16mm的振幅旋轉(zhuǎn)的SRTl旋轉(zhuǎn)式混合器(Stuart Scientific，Redhill，英國(guó))中溫育10分鐘(G-CSF)或60分鐘(FIX)。
在小鼠中脂質(zhì)體配制的G-CSF和游離的G-CSF的藥物動(dòng)力學(xué)。對(duì)兩組C57黑鼠進(jìn)行皮下(s.c.)注射a)用PEG化的脂質(zhì)體(10μg/ml)配制的50μl的G-CSF；b)溶于50mM檸檬酸鈉緩沖液(10μg/ml)的50μl的G-CSF。注射后在不同時(shí)間將小鼠從后眼窩竇取血并放入含有檸檬酸鈉(20mM終濃度)的微型離心管中，并在4℃通過(guò)2,700×g離心10分鐘來(lái)分離血漿。根據(jù)制造商的說(shuō)明書，通過(guò)ELISA(G-CSF DouSet ELISA試劑盒，R&D)測(cè)量小鼠血漿中的G-CSF濃度。
血友病小鼠中PegLip-FIX和游離的FIX的藥物動(dòng)力學(xué)。將50μl的以下物質(zhì)IV(靜脈注射)到三組C57BL小鼠的尾靜脈中a)200單位/ml的PegLip-FIX；b)未配制的FIX；c)緩沖液。注射后在不同時(shí)間將小鼠從后眼窩竇取血并放入含有檸檬酸鈉(20mM終濃度)的微型離心管中，并在4℃通過(guò)2,700×g離心10分鐘來(lái)分離血漿。根據(jù)制造商的說(shuō)明書，通過(guò)一期凝血測(cè)定法(使用Stago試劑和ST4凝固儀)測(cè)量小鼠血漿中的FIX活性。由于C57BL小鼠在其血漿中具有內(nèi)源性FIX活性，所以在處理組中從各個(gè)時(shí)間點(diǎn)所測(cè)量的活性中減去該內(nèi)源性活性(如在對(duì)照小鼠中測(cè)量的)。
藥物動(dòng)力學(xué)分析通過(guò)計(jì)算機(jī)軟件(RSTRIP，MicroMath Inc.)分析藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)(半壽期和AUC)。
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析Student′s t檢驗(yàn)。
2.2結(jié)果小鼠中脂質(zhì)體配制的蛋白質(zhì)的藥物動(dòng)力學(xué)測(cè)量小鼠中游離的與脂質(zhì)體配制的FIX和G-CSF的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。表2-3中所示的結(jié)果表明用PEG化的脂質(zhì)體配制的蛋白質(zhì)的半壽期和曲線下的面積大于游離的蛋白質(zhì)的半壽期和曲線下的面積。
表2將脂質(zhì)體配制的G-CSF(PegLip-G-CSF)或游離的G-CSF皮下注射到小鼠中后的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)

G-CSF用50mM檸檬酸鈉緩沖液pH 7重建或用PEG化的脂質(zhì)體配制，并皮下注射(50μl)到小鼠中(每組6只小鼠)。通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)測(cè)量血漿中的人G-CSF濃度(pg/ml)。計(jì)算每只小鼠的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。數(shù)值以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。對(duì)PegLip-G-CSF和G-CSF的半壽期進(jìn)行Student′st檢驗(yàn)，P＜0.002。
表3將因子IX或PEG化的脂質(zhì)體配制的因子IX(PegLip-FIX)靜脈注射到小鼠中后的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)

計(jì)算每只小鼠的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。數(shù)值以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。對(duì)PegLip-FIX和FIX的半壽期進(jìn)行Student′s t檢驗(yàn)，P＜0.15。
3.實(shí)施例113.1在體內(nèi)用PEG化的脂質(zhì)體配制的FVIII在血友病小鼠中的藥物動(dòng)力學(xué)和生物活性測(cè)量血友病小鼠中的因子VIII的藥物動(dòng)力學(xué)和生物活性，所述因子VIII在注射未配制的因子VIII 1小時(shí)之后，通過(guò)注射脂質(zhì)體而用PEG化的脂質(zhì)體在體內(nèi)進(jìn)行配制。對(duì)血友病小鼠注射a)游離的(未配制的)FVIII；b)游離的FVIII，并且1小時(shí)后再注射PEG化的脂質(zhì)體。注射后在多個(gè)時(shí)間對(duì)小鼠放血，并通過(guò)凝血法測(cè)量FVIII活性。為了檢驗(yàn)脂質(zhì)體配制的FVIII在抑制出血方面的體內(nèi)功效，以及將其與游離的FVIII的功效進(jìn)行比較，在注射后幾個(gè)時(shí)間切去被注射小鼠的尾部，并測(cè)量被注射小鼠的存活情況。
表4和圖10所示的結(jié)果表明用PEG化的脂質(zhì)體在體內(nèi)配制的凝血因子VIII的半壽期和曲線下的面積，高于游離的FVIII的值。因此，注射FVIII并于1小時(shí)后注射脂質(zhì)體的小鼠存活率明顯更高。
表4對(duì)血友病小鼠注射FVIII后或注射FVIII 1小時(shí)后注射PEG化的脂質(zhì)體后，因子VIII的活性(IU/ml)和藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)

用水使重組的FVIII(Kogenate-FS，Bayer)重建，并將其注射(40μl)到血友病小鼠(每組10只小鼠)的尾靜脈中。1小時(shí)后，將PEG化的脂質(zhì)體(9％脂質(zhì)，w/v)靜脈注射(40μl)到其中一組小鼠中。通過(guò)一期凝血法測(cè)量混合血漿樣品在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的FVIII活性。藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)(半壽期和AUC)通過(guò)計(jì)算機(jī)程序(RSTRIP，MicroMath Inc.)進(jìn)行分析。
4.實(shí)施例12通過(guò)實(shí)時(shí)相互作用分析法，將FVIII對(duì)由POPC和氨基甲酸酯連接的不帶電荷的脂聚合物組成的脂質(zhì)體的結(jié)合，與FVIII對(duì)由POPC和DSPE-PEG組成的脂質(zhì)體的結(jié)合進(jìn)行比較。以下顯示了氨基甲酸酯連接的不帶電荷的脂聚合物mPEG二硬酯酰氨基丙二醇(DS-c-PEG)和1，2-二硬酯酰-sn-甘油基-3-磷脂酰乙醇胺-N-甲氧基聚乙二醇(DSPE-PEG)的示意性結(jié)構(gòu)圖。

結(jié)果如圖11所示，并表明兩種類型的脂質(zhì)體可以與FVIII相互作用。
5.實(shí)施例13凝血因子VIIa通常用于治療具有抑制物的血友病患者以及用于抑制創(chuàng)傷性出血(如，戰(zhàn)爭(zhēng)傷害、車禍)。在大鼠中測(cè)量了用PEG化的脂質(zhì)體配制的因子VIIa的藥物動(dòng)力學(xué)。對(duì)Sprague Dawley(SD)大鼠(180g)注射36μg/只大鼠的游離的(未配制的)FVIIa(Nova Nordisk)或用PEG化的脂質(zhì)體配制的FVIIa。注射后在不同時(shí)間對(duì)大鼠放血，并通過(guò)凝血測(cè)定法(Stago)測(cè)量FVIIa活性。表5和表6所示的結(jié)果表明，用PEG化的脂質(zhì)體在體內(nèi)配制的因子VIIa的半壽期和曲線下的面積，高于游離的FVIIa半壽期和曲線下的面積。
表5將FVIIa或用PEG化的脂質(zhì)體配制的FVIIa注射入大鼠后，凝血因子VIIa的活性(IU/ml)和藥物動(dòng)力學(xué)

表6將FVIIa或用PEG化的脂質(zhì)體配制的FVIIa注射到大鼠中后(混合樣品)，因子VIIa的活性(IU/ml)和藥物動(dòng)力學(xué)

權(quán)利要求
1.一種用于腸胃外給藥的藥物組合物，該藥物組合物包含治療有效量的蛋白質(zhì)或多肽以及膠體顆粒，所述顆粒包含用生物相容性親水聚合物衍生化的、約1摩爾％～20摩爾％的兩親性脂質(zhì)，其中所述蛋白質(zhì)或多肽選自(a)能在外部結(jié)合所述膠體顆粒的蛋白質(zhì)或多肽；(b)能結(jié)合聚烷基醚、聚乳酸和聚乙醇酸家族的聚合物的蛋白質(zhì)的多肽；或(c)包含共有序列S/T-X-L/I/V-I/V/Q/S-S/T-X-X-E的蛋白質(zhì)或多肽，其中X可以是任意氨基酸，且S、T、L、I、V、E以及Q具有它們的標(biāo)準(zhǔn)含義；其中所述蛋白質(zhì)或多肽不是因子VIII(FVIII)，以及其中所述蛋白質(zhì)或多肽不是包埋于所述膠體顆粒中。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述的膠體顆粒是基本上中性的，所述的聚合物基本上不帶凈電荷。
3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述的膠體顆粒具有約0.03微米至約0.4微米的平均粒徑。
4.如權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其中所述的膠體顆粒具有約0.1微米的平均粒徑。
5.如權(quán)利要求1～4任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述的兩親性脂質(zhì)是來(lái)自天然或人造來(lái)源的磷脂。
6.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其中所述的兩親性脂質(zhì)是磷脂酰乙醇胺(PE)。
7.如權(quán)利要求1～4任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述的兩親性脂質(zhì)是氨基甲酸酯連接的不帶電荷的脂聚合物。
8.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其中所述的兩親性脂質(zhì)是二硬酯酰氨基丙二醇(DS)。
9.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述的膠體顆粒還包含從天然或人造來(lái)源獲得的第二兩親性脂質(zhì)。
10.如權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其中所述的第二兩親性脂質(zhì)是磷脂酰膽堿。
11.如權(quán)利要求9所述的藥物組合物，該藥物組合物中添加有膽固醇。
12.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述的生物相容性親水聚合物選自聚烷基醚、聚乳酸以及聚乙醇酸家族。
13.如權(quán)利要求12所述的藥物組合物，其中所述的生物相容性親水聚合物是聚乙二醇。
14.如權(quán)利要求13所述的藥物組合物，其中所述的聚乙二醇具有約500道爾頓至約5000道爾頓的分子量。
15.如權(quán)利要求14所述的藥物組合物，其中所述聚乙二醇具有約2000道爾頓的分子量。
16.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述的蛋白質(zhì)或多肽選自凝血酶原、因子VIIa、因子X、因子V、因子IX(FIX)、粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、γ干擾素、胰高血糖素樣肽1(GLP-1)或克帕松。
17.如權(quán)利要求16所述的藥物組合物，其中所述的多肽是克帕松，并且所述的組合物用于治療選自以下的疾病多發(fā)性硬化癥、糖尿病性神經(jīng)病變、老年性癡呆、阿爾茨海默氏病、帕金森氏癥、面神經(jīng)(Bell′s)麻痹、青光眼、亨廷頓氏舞蹈病、肌萎縮性側(cè)索硬化、癲癇持續(xù)狀態(tài)、非動(dòng)脈炎性視神經(jīng)病變或維生素缺乏癥。
18.如權(quán)利要求16所述的藥物組合物，其中所述的多肽是因子VIIa，并且所述的組合物用于治療具有抑制物的血友病患者以及用于治療創(chuàng)傷性出血。
19.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述的蛋白質(zhì)或多肽包含氨基酸共有序列S/T-X-L/I/V-I/V/Q/S-S/T-X-X-E，其中X是任意的氨基酸。
20.治療血友病患者的方法，該方法包括對(duì)患者施用用于腸胃外給藥的藥物組合物，該藥物組合物包含有效治療血友病的治療有效量的蛋白質(zhì)或多肽以及膠體顆粒，所述顆粒包含用生物相容性親水聚合物衍生化的、約1摩爾％～20摩爾％的兩親性脂質(zhì)，其中所述蛋白質(zhì)或多肽選自(a)能在外部結(jié)合所述膠體顆粒的蛋白質(zhì)或多肽；或(b)能結(jié)合聚烷基醚、聚乳酸和聚乙醇酸家族的聚合物的蛋白質(zhì)的多肽；或(c)包含共有序列S/T-X-L/I/V-I/V/Q/S-S/T-X-X-E的蛋白質(zhì)或多肽，其中X可以是任意氨基酸，且S、T、L、I、V、E以及Q具有它們的標(biāo)準(zhǔn)含義；其中所述蛋白質(zhì)或多肽不是因子VIII(FVIII)，以及其中所述蛋白質(zhì)或多肽不是包埋于所述膠體顆粒中。
21.如權(quán)利要求20的方法，其中所述的患者已經(jīng)產(chǎn)生了針對(duì)所述蛋白質(zhì)或多肽的抑制物抗體。
22.膠體顆粒在制備用于治療血友病患者的腸胃外給藥的藥物組合物中的用途，該藥物組合物包含治療有效量的蛋白質(zhì)或多肽以及膠體顆粒，所述顆粒包含用生物相容性親水聚合物衍生化的、約1摩爾％～20摩爾％的兩親性脂質(zhì)，其中所述蛋白質(zhì)或多肽選自(a)能在外部結(jié)合所述膠體顆粒的蛋白質(zhì)或多肽；或(b)能結(jié)合聚烷基醚、聚乳酸和聚乙醇酸家族的聚合物的蛋白質(zhì)的多肽；或(c)包含共有序列S/T-X-L/I/V-I/V/Q/S-S/T-X-X-E的蛋白質(zhì)或多肽，其中X可以是任意氨基酸，且S、T、L、I、V、E以及Q具有它們的標(biāo)準(zhǔn)含義；其中所述蛋白質(zhì)或多肽不是凝血因子VIII(FVIII)，以及其中所述蛋白質(zhì)或多肽不是包埋于所述膠體顆粒中。
23.如權(quán)利要求22所述的用途，其中所述的患者已經(jīng)產(chǎn)生了針對(duì)所述蛋白質(zhì)或多肽的抑制物抗體。
24.膠體顆粒在制備用于腸胃外給藥的藥物組合物中的用途，所述藥物組合物包含治療有效量的蛋白質(zhì)或多肽以及膠體顆粒，所述顆粒包含用生物相容性親水聚合物衍生化的、約1摩爾％～20摩爾％的兩親性脂質(zhì)，其中所述蛋白質(zhì)或多肽選自(a)能在外部結(jié)合所述膠體顆粒的蛋白質(zhì)或多肽；或(b)能結(jié)合聚烷基醚、聚乳酸和聚乙醇酸家族的聚合物的蛋白質(zhì)的多肽；或(c)包含共有序列S/T-X-L/I/V-I/V/Q/S-S/T-X-X-E的蛋白質(zhì)或多肽，其中X可以是任意氨基酸，且S、T、L、I、V、E以及Q具有它們的標(biāo)準(zhǔn)含義；其中所述的蛋白質(zhì)或多肽不是因子VIII(FVIII)，以及其中所述蛋白質(zhì)或多肽不是包埋于所述膠體顆粒中。
25.治療患有疾病的患者的方法，該方法包括對(duì)所述患者施用用于腸胃外給藥的藥物組合物，該藥物組合物包含有效治療疾病的治療有效量的蛋白質(zhì)或多肽以及膠體顆粒，所述顆粒包含用生物相容性親水聚合物衍生化的、約1摩爾％～20摩爾％的兩親性脂質(zhì)，其中所述蛋白質(zhì)或多肽選自(a)能在外部結(jié)合所述膠體顆粒的蛋白質(zhì)或多肽；或(b)能結(jié)合聚烷基醚、聚乳酸和聚乙醇酸家族的聚合物的蛋白質(zhì)的多肽；或(c)包含共有序列S/T-X-L/I/V-I/V/Q/S-S/T-X-X-E的蛋白質(zhì)或多肽，其中X可以是任意氨基酸，且S、T、L、I、V、E以及Q具有它們的標(biāo)準(zhǔn)含義；其中分開施用所述的膠體顆粒和所述的蛋白質(zhì)或多肽，以及其中所述蛋白質(zhì)或多肽不是包埋于所述的膠體顆粒中。
26.如權(quán)利要求25的方法，其中所述的蛋白質(zhì)或多肽不是因子VIII(FVIII)。
27.如權(quán)利要求25的方法，其中所述的膠體顆粒是脂質(zhì)體，所述的蛋白質(zhì)或多肽是因子VIII(FVIII)。
全文摘要
一種用于腸胃外給藥的藥物組合物，該藥物組合物包含治療有效量的蛋白質(zhì)或多肽以及膠體顆粒。所述顆粒包含用生物相容性親水聚合物衍生化的、約1摩爾％～20摩爾％的兩親性脂質(zhì)。所述蛋白質(zhì)或多肽選自(a)能在外部結(jié)合所述膠體顆粒的蛋白質(zhì)或多肽；(b)能結(jié)合聚烷基醚、聚乳酸和聚乙醇酸家族的聚合物的蛋白質(zhì)或多肽；和(c)包含共有序列S/T－X/I/V－I/V/Q/S－S/T－X－X－X－E的蛋白質(zhì)或多肽，其中X可以是任意氨基酸，且S、T、L、I、V、E以及Q具有它們的標(biāo)準(zhǔn)含義。所述蛋白質(zhì)或多肽不是因子VIII(FVIII)，并且不是包埋于所述膠體顆粒中。
文檔編號(hào)A61P25/28GK1774281SQ200480010099
公開日2006年5月17日 申請(qǐng)日期2004年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月15日
發(fā)明者摩西·巴魯, 萊亞·卡梅爾-戈倫 申請(qǐng)人:奧珀百思控股公司