專利名稱：Pten抑制劑或maxi－k通道開放劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的PTEN抑制劑或一種新的Maxi-K通道開放劑(opener)。更具體而言，涉及一種PTEN抑制劑或新的Maxi-K通道開放劑，其包含作為活性成分的通式(I)四唑基烷氧基-二氫喹諾酮化合物，或其鹽 其中R為環(huán)烷基，A為低級亞烷基，并且喹諾酮核的3-和4-位之間的鍵為單鍵或雙鍵。
背景技術(shù)：
PTEN(磷酸酶和在10號染色體上刪除的張力蛋白同系物)是在1997年作為腫瘤抑制基因被分離出的，從此已從各個方面分析了其生理功能。據(jù)1998年的報道PTEN基因產(chǎn)物具有出新的磷酸酶活性，即，它能使作為脂質(zhì)第二信使的磷脂酰肌醇的3，4，5-三磷酸酯(PIP3)底物在其D3位置上脫去磷酸(參照Beitner-Johnson D，Millhorn DE，J.Biol.Chem.，273pp.13375-13378，1998)。
考慮到PTEN的功能，希望對PTEN的抑制作用將可有效促進正常細胞、腦細胞、心肌細胞和皮膚的存活率，并可進一步有效抑制革蘭氏陰性膿毒癥和細胞遷移及細胞侵染。
此外，已知鉀通道的開放誘發(fā)細胞內(nèi)的鉀離子流出細胞，從而導致細胞內(nèi)電位呈負性，使鉀通道為電壓依從性并受細胞內(nèi)鈣濃度及細胞內(nèi)ATP的控制。Maxi-K通道是一類高電導鈣敏感的鉀通道，Maxi-K通道的活性受到細胞內(nèi)鈣濃度和膜電位等的控制。Maxi-K通道廣泛分布在活體例如神經(jīng)元、心肌細胞、平滑肌細胞中，Maxi-K通道的開放誘導細胞超極化。同樣已知可將Maxi-K通道的開放用于治療神經(jīng)神經(jīng)元障礙，例如，作為藥物諸如(1)抗驚厥劑，(2)用于治療局部腦水腫和神經(jīng)運動性損傷、認知障礙、外傷性腦損傷、帕金森病、癲癇、偏頭痛及阿耳茨海默病的神經(jīng)保護藥物，(3)用于控制疼痛的藥物，(4)用于治療急性尿失禁、腸能動性增強、子宮收縮性、焦慮和抑郁的藥物。
發(fā)明公開在對PTEN的研究過程中，本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，如上所述的通式(I)四唑基烷氧基-二氫喹諾酮化合物或其鹽，尤其是6-[4-(1-環(huán)己基-1H-四唑-5-基)丁氧基]-3，4-二氫-喹諾酮或其鹽，已知其具有血小板凝集抑制活性和血管舒張活性、顯示出抑制PTEN的活性，并由此可用作PTEN抑制劑，于是完成了本發(fā)明。
進一步地，在對Maxi-K通道的功能性分析研究期間，本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，如上所述的通式(I)四唑基烷氧基-二氫喹諾酮化合物或其鹽，尤其是6-[4-(1-環(huán)己基-1H-四唑-5-基)丁氧基]-3，4-二氫喹諾酮或其鹽，已知其具有血小板凝集抑制活性和血管舒張活性、顯示出開放Maxi-K通道的活性，并由此可用作Maxi-K通道開放劑，于是完成了本發(fā)明。
附圖的簡要說明

圖1顯示了西洛他唑(6-[4-(1-環(huán)己基-1H-四唑-5-基)丁氧基]-3，4-二氫-喹諾酮的商品名)對TNF-α(50ng/ml)-激發(fā)的增高的PTEN的磷酸化水平的抑制。
圖2顯示了藥物對在SK-N-SH細胞中開放鈣激活的K+電流的作用，圖2A顯示了西洛他唑(6-[4-(1-環(huán)己基-1H-四唑-5-基)丁氧基]-3，4-二氫喹諾酮的商品名)的作用，圖2B顯示了西洛他唑和/或格列本脲(縮寫為“GBC”，是可購得的抗糖尿病劑，暗示著不存在對ATP-敏感性K+通道的開放)的作用，圖2C顯示了西洛他唑和/或iberiotoxin(縮寫為“Ibtx”，稱為作為Maxi-K+通道阻滯劑，暗示著開放Maxi-K+通道)的作用。
圖3顯示了對照組和接受西洛他唑治療組的小鼠大腦中通過ELISA測量的總淀粉樣-β濃度(A-β40和A-β42水平)。
圖4顯示了得自用于測試本發(fā)明化合物對阿耳茨海默疾病作用的Y-迷宮行為范例的試驗結(jié)果的總結(jié)。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供了一種新的PTEN抑制劑或新的Maxi-K通道開放劑，其包含作為活性成分的通式(I)四唑基烷氧基-喹諾酮化合物或其鹽。本發(fā)明進一步提供了一種抑制PTEN的方法和一種開放Maxi-K通道的方法，其包括對有此治療需求的患者施用四唑基烷氧基-喹諾酮化合物(I)或其鹽，并進一步提供了四唑基烷氧基-喹諾酮化合物(I)或其鹽用于抑制PTEN并用于開放Maxi-K通道的用途。
通式(I)化合物或其鹽具有出色的PTEN抑制作用，由此本發(fā)明的PTEN抑制劑包含作為活性成分的通式(I)化合物或其鹽，其可被用作提高正常細胞、腦細胞、心肌細胞和皮膚存活率，并可進一步在不產(chǎn)生由對PTEN的抑制作用導致的任何副作用的條件下抑制革蘭氏陰性膿毒癥及細胞遷移和細胞侵染的藥物。
此外，通式(I)的化合物或其鹽具有出色的開放高電導鈣激活的K+通道(Maxi-K通道)的作用，由此包含作為活性成分的通式(I)化合物或其鹽的本發(fā)明Maxi-K通道開放劑可用作用于治療神經(jīng)元障礙的藥物，例如，抗驚厥劑、神經(jīng)保護劑，治療局部腦水腫和神經(jīng)運動性損傷、認知障礙、創(chuàng)傷性腦損傷、帕金森病、癲癇、偏頭痛及阿耳茨海默病、疼痛、急性尿失禁、腸能動性增強、子宮收縮性、焦慮和抑郁的藥物。
JP-63-20235中公開了通式(I)四唑基烷氧基-二氫喹諾酮化合物及其制備方法。
在通式(I)中，“環(huán)烷基”包括C3-8環(huán)烷基，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基等，但優(yōu)選環(huán)己基?！暗图墎喭榛卑–1-6亞烷基，例如亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基等，但優(yōu)選亞丁基。
尤其優(yōu)選的化合物為6-[4-(1-環(huán)己基-1H-四唑-5-基)丁氧基]-3，4-二氫-喹諾酮，其已被作為血管舒張劑以西洛他唑為商品名出售。
可以散裝或優(yōu)選以含有常規(guī)藥用載體或稀釋劑的制藥制劑形式使用本發(fā)明通式(I)的化合物。劑型不局限于特定形式，而可為任何常規(guī)劑型，例如，用于口腔內(nèi)給藥的制劑，例如，片劑、膠囊、顆粒劑、各種適于口腔內(nèi)給藥的液體制劑，或用于腸胃外給藥的制劑，例如，注射劑、栓劑。劑量不局限于特定范圍，但是通常在對成人每天100-400mg(50kg體重)，一次給藥或分成一次或幾次給藥。優(yōu)選以每劑量單位50-100mg的量將活性成分包含在制劑中。
用于注射的制劑通常被制成滅菌，并進一步優(yōu)選被制成與血液等滲的液體制劑、乳劑、或混懸液的形式。通常通過應用常規(guī)藥用稀釋劑、例如水、乙醇、丙二醇、氧乙基化異硬脂醇、polyoxylated異硬脂醇、聚氧乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯制備這些液體、乳劑或混懸液形式的制劑?？蓪⑦@些制劑與以足夠產(chǎn)生等滲的量的等滲劑例如氯化鈉、葡萄糖、丙三醇混合，并可進一步與常規(guī)穩(wěn)定劑、緩沖劑、麻醉劑、及可選地與著色劑、防腐劑、芳香物質(zhì)、調(diào)味劑、甜味劑、及其他藥物混合。
可通過常規(guī)方法制備諸如用于口腔給藥的片劑、膠囊、液體的制劑?？赏ㄟ^與常規(guī)藥用載體例如，明膠、淀粉、乳糖、硬脂酸鎂、滑石粉、阿拉伯膠等混合制備片劑?？赏ㄟ^與惰性藥用填充劑或稀釋劑混合并將其填充入明膠膠囊或軟膠囊制備膠囊?？赏ㄟ^將活性化合物與甜味劑(例如蔗糖)、防腐劑(例如尼泊金甲酯、尼泊金丙酯)、著色劑、調(diào)味劑等混合制備口服液體制劑例如糖漿或酏劑。還可通過常規(guī)方法，例如通過將本發(fā)明的化合物(I)溶于滅菌的含水載體中，優(yōu)選水或鹽水溶液制備用于腸胃外給藥的制劑。通過將約50-100mg的活性化合物(I)溶于水和一種有機溶劑中并進一步溶于具有300-5000分子量，優(yōu)選混有諸如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮和聚乙烯醇的潤滑劑的聚乙二醇中制備適于腸胃外給藥的液體制劑。可優(yōu)選進一步將上述液體制劑與一種消毒劑(例如苯甲醇、苯酚、硫柳汞)、殺真菌劑，并進一步任選地與等滲劑(例如蔗糖、氯化鈉)、局部麻醉劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑等混合。由于要保持穩(wěn)定性，可將用于腸胃外給藥的制劑填充入膠囊，然后通過常規(guī)凍干技術(shù)除去含水介質(zhì)，并在使用時通過溶于含水介質(zhì)恢復成液體制劑。
本發(fā)明的最佳實施方式通過以下制備實施例及上述化合物對由TNF-α激發(fā)的PTEN磷酸化的增加或?qū)axi-K+通道開放的抑制效應的試驗說明本發(fā)明，但本發(fā)明不應被解釋為限于這些。
制備1制備注射制劑組分用量6-[4-(1-環(huán)己基-1，2，3，4-四唑-5-基)丁氧基]-3，4-二氫喹諾酮5g聚乙二醇(分子量4000) 0.3g氯化鈉 0.9g聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯 0.4g偏亞硫酸氫鈉 0.1g尼泊金甲酯 0.18g尼泊金丙酯 0.02g注射用蒸餾水 10.0ml在80℃攪拌下將上述尼泊金、偏亞硫酸氫鈉和氯化鈉溶于一半量的上述蒸餾水中。將混合物冷卻至40℃，再將活性化合物，及進一步的聚乙二醇和聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯溶于此。向該混合物中加入剩余的注射用蒸餾水，通過用濾紙過濾滅菌從而獲得所需的注射制劑。
制備2片劑的制備組分用量6-[4-(1-環(huán)己基-1，2，3，4-四唑-5-基)丁氧基]-3，4-二氫喹諾酮100g乳糖(日本藥典) 40g玉蜀黍淀粉(日本藥典) 40g微晶纖維素(日本藥典) 20g羥丙基纖維素(日本藥典) 4g硬脂酸鎂(日本藥典) 2g充分混合本發(fā)明的上述化合物、乳糖、玉蜀黍淀粉和晶狀纖維素，然后用羥丙基纖維素的5％含水溶液將該混合物制粒，將顆粒混合物過200目的篩從而小心干燥顆粒，然后用常規(guī)方法將這些顆粒壓片以獲得片劑(1000片)。
藥理試驗測驗了本發(fā)明的代表化合物西洛他唑?qū)NF-α-激發(fā)的增高的PTEN磷酸化水平的抑制效應。
此外，還測驗了本發(fā)明的代表化合物西洛他唑及一些可商購得的Maxi-K通道開放劑或阻滯劑對Maxi-K通道開放的作用。
試驗1西洛他唑?qū)NF-α-激發(fā)的PTEN磷酸化水平增加的效果材料細胞培養(yǎng)在伊格爾(氏)最低必需培養(yǎng)基(MEM)中用2mM左旋谷氨酰胺和含10％熱滅活胎牛血清的1.0mM丙酮酸鈉培養(yǎng)SK-N-SH(KCLB 30011，人大腦成神經(jīng)細胞瘤)細胞。在37℃ 5％CO2中使細胞生長至融合，以不高于passage 20用于試驗。
TNF-α溶液的制備將TNF-α(Upstate，Biotechnology，Inc.，Lake Placid，NY)溶于用磷酸鹽緩沖的鹽水中制成10μg/ml的儲液。
方法Western蛋白印跡分析在用TNF-α進行刺激之前3小時用1％FBS和西洛他唑處理接受融合細胞的MEM介質(zhì)，然后將其暴露于TNF-α1小時。
將細胞溶解在含有50mM Tris-Cl(pH 8.0)，150mM NaCl，0.02％疊氮化鈉，100μg/ml苯甲磺酰氟，1μg/ml抑肽酶和1％聚乙二醇辛基苯基醚(Triton)×-100的溶菌緩沖液中。接著以12,000rpm離心分離，將50μg的總蛋白裝入8或10％SDS-PAGE凝膠中，然后將其轉(zhuǎn)移到硝基纖維素膜(Amersham Pharmacia Biotech，Piscataway，NJ)。然后用標示抗體培養(yǎng)阻滯膜，并按Supersignal West Dura ExtendedDuration Substrate Kit(Pierce，Rockford，IL)的介紹用免疫化學發(fā)光試劑使免疫反應譜帶顯像。用GS-710校準顯像光密度計(Bio-RadLaboratories，Hercules，CA)定量譜帶的顯像。以相對密度表示結(jié)果?？筆TEN、磷酸-PTEN(Ser 380/Thr 382/383)多克隆抗體源自細胞信號技術(shù)(Beverly，MA)。
統(tǒng)計分析以平均值±SEM表示結(jié)果。通過Student’s t-試驗測定組之間的統(tǒng)計學差異。p＜0.05被認為是顯著的。
結(jié)果Western蛋白質(zhì)印跡和密度計分析顯示在隨圖1中。
可從圖1中看出，西洛他唑(1、10和100μM)濃度依賴性地抑制了TNF-α(50ng/ml)-激發(fā)的增加的PTEN磷酸化水平。
從上述試驗結(jié)果可清楚地表明，西洛他唑顯示出了有效的抑制PTEN磷酸化的活性。
試驗2材料細胞培養(yǎng)在伊格爾(氏)最低必需培養(yǎng)基(MEM)中用2mM左旋谷氨酰胺和含10％熱滅活胎牛血清的1.0mM丙酮酸鈉培養(yǎng)SK-N-SH(KCLB 30011，人大腦成神經(jīng)細胞瘤)細胞。在37℃ 5％CO2中使細胞生長至融合，以不高于passage 20用于試驗。
測試藥物(1)西洛他唑(本發(fā)明的一個化合物，6-[4-(1-環(huán)己基-1H-四唑-5-基)丁氧基]-3，4-二氫-喹諾酮的商品名)。
(2)格列本脲(縮寫為“GBC”，通用名降糖靈，化學名5-氯-N-[2-[4-[[[(環(huán)己基-氨基)羰基]氨基]磺?；鵠苯基]乙基]-2-甲氧基-苯甲酰胺，是可購得的抗糖尿病劑，一種ATP-敏感的K+通道阻滯劑)。
(3)Iberiotoxin(縮寫為“Ibtx”，是已知的Maxi-K+通道阻滯劑)。
方法全細胞K+電流的記錄試驗在置于以1ml/分鐘的流速連續(xù)灌流的倒置顯微鏡(Nikon model TE300，東京，日本)的平臺上的小浴槽(0.5ml)中進行。利用膜片鉗技術(shù)的全細胞構(gòu)型，在室溫下(20-22℃)用Axopatch-200B膜片鉗放大器(Axon Instruments，F(xiàn)oster city，CA)記錄K+電流。在0.5-5kHz處進行圖形保真過濾后在1-10kHz處抽取電流樣品。通過pClamp 6.0.3軟件(Axon Instruments，F(xiàn)oster City，CA)控制數(shù)據(jù)獲取和指令電位。為了確保電壓鉗質(zhì)量，要將電極電阻保持在低于3MΩ。用在標準浴溶液中的電極將接頭電位調(diào)為零。通過抽吸形成Gigaohm封，建立全細胞構(gòu)型后，通過在50kHz處記錄從-80mV起對稱的10mV電壓鉗階引起的電容瞬變以計算細胞電容。用于全細胞記錄的常規(guī)浴溶液為NaCl 130mM，KCl 5mM，MgCl21.2mM，CaCl21.8mM，HEPES 10mM，葡萄糖5.2mM并用NaOH將pH值調(diào)至7.4。向吸量管中裝滿KCl 140mM，MgCl20.5mM，CaCl20.1mM，亞乙基雙(氧代次氮基)四乙酸(EGTA)0.09mM，HEPES 10mM，葡萄糖10mM并用KOH將pH值調(diào)至7.4。
建立了全細胞記錄并收集了控制記錄約5分鐘直至通過去極化誘導的電流穩(wěn)定后，將西洛他唑置于浴槽中。在這些試驗中，施用格列本脲或iberiotoxin后，將格列本脲或iberiotoxin，西洛他唑置于浴槽中。
結(jié)果測試結(jié)果顯示在附圖2中，其中圖2A顯示了西洛他唑的效果，圖2B顯示了西洛他唑和/或格列本脲(“GBC”，意味著對Maxi-K+通道的開放)的效果，和圖2C顯示了西洛他唑和/或iberiotoxin(“Ibtx”，Maxi-K+通道阻滯劑)的效果。
從圖2中可看出，西洛他唑顯著增強了電流，但在另一方面，其可逆地被加入浴槽的iberiotoxin(100nM)阻斷了，但沒有被格列本脲(10μM)可逆地阻斷。即使在同時存在格列本脲時西洛他唑也增加了Maxi-K通道介導的電流，然而格列本脲單獨不能增加Maxi-K通道介導的電流。當向細胞中一起加入西洛他唑和iberiotoxin-Maxi-K通道阻斷劑時，電流的增強比單獨用iberiotoxin時低很多。
試驗31.化合物的制備載體對照；0.5％羧甲基纖維素。每天兩次(n＝10)西洛他唑；100mg/kg，每天兩次(n＝10)用瑪瑙研缽研磨少量粉末(西洛他唑)。加入兩或三滴0.5％羧甲基纖維素(CMC)并充分研磨。加入4-5ml 0.5％CMC并將混懸的西洛他唑移回至光保護性玻璃瓶中。
每周以1000mg/50ml的濃度測試化合物制劑，并在4℃下避光保存。
化合物的施用施用前，通過超聲發(fā)生器對測試化合物的原料瓶進行超聲處理然后充分混合。
通過口入灌胃法(gavage)每天兩次作為每組分配施用化合物。
賦形劑對照(0.5％羧甲基纖維素CMC；1kg/5ml)每天兩次灌胃。測試化合物(西洛他唑；100mg/kg/5ml)每天兩次灌胃。
2.觀察、檢測和測量方法a.將動物(8周大，表達突變的人APPK670N，M6711/Line Tg2576的半合轉(zhuǎn)基因小鼠)隨機分成兩組雙轉(zhuǎn)基因APP/PS1小鼠(控制組和西洛他唑組，總數(shù)＝20只)。對每只小鼠每天兩次通過灌胃給藥6周，如以下表中所示

b.研究起始或結(jié)束時測定小鼠的基因型。
c.在完成in-life階段試驗前對小鼠進行Y-迷宮行為范例試驗(paradigm)。
d.當小鼠14周大時將其處死。
e.處死時，收集1ml的血液以進行西洛他唑血液濃度測量，并用鹽水給APP/PS1小鼠灌注。將大腦直切成對半，固定一半大腦半球，冷凍另一半球。
f.均化冷凍的大腦半球并通過ELISA分析總淀粉狀蛋白-β濃度。
測量對照組和西洛他唑治療組小鼠大腦中的總A-β40和總A-β42水平。結(jié)果顯示在附圖3中。
3.步驟以下過程概括了進行“Y-迷宮中自發(fā)更替”試驗所需的步驟。小鼠具有探索它們所處環(huán)境本能傾向。成功的探索依賴于避免近期已去過，并且在那里食物已耗盡或缺乏的地方的能力(自發(fā)更替”)。該Y-迷宮是基于行為性的試驗，不涉及給予獎勵。小鼠用缺乏抵抗力的“工作記憶”功能無法在它們的工作記憶中保留有關(guān)剛?cè)ミ^地方的信息，因此它們表現(xiàn)出降低了的自發(fā)更替。
已公布的結(jié)果顯示在某些轉(zhuǎn)基因小鼠品系，例如APP/PS1小鼠中自發(fā)更替降低與探索增強。
西洛他唑具有抗血小板和血管擴張作用，其對ASO有適應癥，并可預防續(xù)發(fā)性腦梗塞。
西洛他唑的這些作用可歸因于降低了淀粉狀蛋白-β蛋白的沉積，并改善了阿耳茨海默癡呆的行為。
i.將待測試小鼠放在測試房間中。避免將一次將太多小鼠(超過3籠)帶入測試區(qū)，因為這可能影響它們的行為。(任選地，僅當沒有對動物做不同標志時，例如通過應答器或清楚可見的紋身時才進行)。用無毒有色記號筆按一下順序?qū)λ鼈兊奈舶瓦M行標志1紅2綠3藍4黑ii.用錄像機記錄這些試驗。這樣可產(chǎn)生永久記錄并可使研究人員當出現(xiàn)任何問題時重臨試驗。
iii.從尾巴根部將第一只待測小鼠從其所住的籠中取出，稱量。將重量記錄在Y-迷宮數(shù)據(jù)電子表格中。將該小鼠放回籠中。(或者，在開始試驗前，例如在前一天，可以對小鼠進行稱重。)iv.在開始測試前將小鼠無干擾地放在一旁1小時，從而使它們能夠適應房間的環(huán)境。還需留意其他問題，從而確保不要使籠毗鄰一個具體分支(arm)，因為例如氣味可能影響小鼠進入單個分支中。因此，使籠放在遠離儀器或保證籠圍繞房間作均勻分布。(例如，可一次放入3籠，每個鄰近一個分支)。技術(shù)人員應出現(xiàn)在試驗房間中，但是一定不要打擾小鼠。
v.測試開始前，用異丙醇擦拭Y-迷宮內(nèi)部。
vi.輕輕拿放小鼠，從尾巴拿起并放在手臂上，注意不要使小鼠頭部向下首次跳入迷宮。將小鼠分別置于Y-迷宮的中心，使所有3個分支(分支A、分支B和分支C)都有可能被探索8分鐘時間。
vii.在Y-迷宮數(shù)據(jù)單打印輸出內(nèi)容上記錄所有入口。如果小鼠完全進入分支A，就在所進入分支(ARM ENTERED)領(lǐng)域中輸入“A”等。如果小鼠徹底探索了該分支，就在同一排的觀測結(jié)果(OBSERVATIONS)中輸入“end”，每次小鼠直立(舉起前腿坐在其后腿上)就記錄“R”，或如果其倚靠(前腿觸墻“扒墻探望”)為“L”，如果小鼠僵直(保持靜止不動5秒或更久)就計為“F”。如果該小鼠在分支A中來回走動，在同一排的觀測結(jié)果(OBSERVATION)中輸入另一個“bf”。詳細輸入任何其他觀測結(jié)果。如果沒有足夠時間寫入觀測結(jié)果就跳過它們。如果該小鼠返回中心，就重新開始一行。如果該小鼠返回分支A，就在新的一行中輸入“A”，分支B就計為“B”，或分支C就計為“C”。
viii.8分鐘后，從尾部撤走小鼠并將它們放回其所在的籠中。并在Y-迷宮電子表格中記錄boli的數(shù)量及小鼠是否排尿。用異丙醇擦拭Y-迷宮內(nèi)部。用刷子清掃角落，清理墻壁和地面。確保Y-迷宮干凈并沒有任何可能被先前的小鼠帶進迷宮的氣味，墊草或食物。確保在用醇清潔后Y-迷宮是干的確保在迷宮內(nèi)沒有留下清理物質(zhì)(例如紙巾)。
ix.對所有待測小鼠重復以上步驟。
x.測試后，將數(shù)據(jù)從硬拷貝轉(zhuǎn)換為Excel電子表格。
從Y-迷宮行為范例試驗中獲得的結(jié)果總結(jié)在附圖4中。
xi.數(shù)據(jù)分析如果在沒有折返的情況下探望了所有三個分支(ABC，ACB，BAC，BCA，CAB或CBA)則被定義為更替。分別分析每個分支進入(ARM ENTRY)并測定小鼠是否完成了一個更替。ABCABC順序有四個更替，第一個以C結(jié)束，下一個以A結(jié)束，然后是B，再是C。順序ABCBAC僅有三個更替，第一個以C結(jié)束，第二個以A結(jié)束，第三個為C。％更替是(觀測到的更替數(shù)目)/(可能的更替的數(shù)目)。如果n個分支被訪問過，可能的最高更替數(shù)目為n-2。如果動物隨便走動，那么22％更替是可以預期的(3*2*1/3*3*3)?？傮w(Global)活性反映在對不同分支訪問的總數(shù)中。因此活性(ACTIVITY)為(進入的分支總數(shù))/(觀測的分鐘數(shù))。
因此，本發(fā)明的四唑基烷氧基-二氫喹諾酮化合物(I)或其鹽可有效開放Maxi-K通道，并可用于治療神經(jīng)元疾病，尤其用于治療阿耳茨海默病。
工業(yè)實用性本發(fā)明提供了一種包含作為活性成分的四唑基烷氧基-二氫喹諾酮化合物(I)或其鹽的組合物，其具有優(yōu)秀的PEN抑制作用并可用作提高正常細胞、腦細胞、心肌細胞和皮膚的存活率的藥物，并可進一步在不引起由對PTEN的抑制作用導致的任何副作用的條件下用于抑制革蘭氏陰性膿毒癥和細胞遷移和細胞侵染。本發(fā)明的組合物進一步可被用作高電導Ca+-激活型K+通道(Maxi-K通道)的開放劑，并由此作為治療神經(jīng)元疾病的藥物，例如，抗驚厥劑、神經(jīng)保護劑、治療局部腦水腫和神經(jīng)運動性損傷、認知障礙、創(chuàng)傷性腦損傷、帕金森病、癲癇、偏頭痛及阿耳茨海默病等的藥物。
權(quán)利要求
1.一種PTEN抑制劑，其包含作為活性成分的通式(I)四唑基烷氧基-二氫喹諾酮化合物或其鹽 其中R為環(huán)烷基，A為低級亞烷基，并且喹諾酮核的3-和4-位之間的鍵為單鍵或雙鍵。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的PTEN抑制劑，其中的活性成分為6-[4-(1-環(huán)己基-1H-四唑-5-基)丁氧基]-3，4-二氫喹諾酮或其鹽。
3.一種用于抑制PTEN的藥用組合物，其包含與常規(guī)可藥用載體或稀釋劑相混合的作為活性成分的如權(quán)利要求1中所述的四唑基烷氧基-二氫喹諾酮化合物(I)或其鹽。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的藥用組合物，其中活性成分為6-[4-(1-環(huán)己基-1H-四唑-5-基)丁氧基]-3，4-二氫喹諾酮或其鹽。
5.一種抑制PTEN的方法，其中包括對有此治療需求的患者施用有效量的如權(quán)利要求1中所述的四唑基烷氧基-二氫喹諾酮化合物(I)或其鹽。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中活性成分為6-[4-(1-環(huán)己基-1H-四唑-5-基)丁氧基]-3，4-二氫喹諾酮或其鹽。
7.如權(quán)利要求1中所述的四唑基烷氧基-二氫喹諾酮化合物(I)或其鹽在制備用于抑制PTEN藥物中的用途。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中的活性成分為6-[4-(1-環(huán)己基-1H-四唑-5-基)丁氧基]-3，4-二氫喹諾酮或其鹽。
9.一種Maxi-K通道開放劑，其包含作為活性成分的通式(I)四唑基烷氧基-二氫喹諾酮化合物或其鹽 其中R為環(huán)烷基，A為低級亞烷基，并且喹諾酮核的3-和4-位之間的鍵為單鍵或雙鍵。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的Maxi-K通道開放劑，其中的活性成分為6-[4-(1-環(huán)己基-1H-四唑-5-基)丁氧基]-3，4-二氫喹諾酮或其鹽。
11.一種用于開放Maxi-K通道的藥用組合物，其包含與常規(guī)可藥用載體或稀釋劑相混合的作為活性成分的如權(quán)利要求9中所述的通式(I)四唑基烷氧基-二氫喹諾酮化合物或其鹽。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的藥用組合物，其中的活性成分為6-[4-(1-環(huán)己基-1H-四唑-5-基)丁氧基]-3，4-二氫喹諾酮或其鹽。
13.根據(jù)權(quán)利要求11或12的藥用組合物，其被用于治療神經(jīng)元疾病。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的藥用組合物，其中的神經(jīng)元疾病為阿耳茨海默病。
15.一種開放Maxi-K通道的方法，其包含對有此治療需求的患者施用有效量的如權(quán)利要求9中所述的四唑基烷氧基-二氫喹諾酮化合物(I)或其鹽。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中的活性成分為6-[4-(1-環(huán)己基-1H-四唑-5-基)丁氧基]-3，4-二氫喹諾酮或其鹽。
17.根據(jù)權(quán)利要求15或16的方法，其被用于治療神經(jīng)元疾病。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中的神經(jīng)元疾病為阿耳茨海默病。
19.如權(quán)利要求9中所述的四唑基烷氧基-二氫喹諾酮化合物(I)或其鹽在制備用于開放Maxi-K通道的藥物中的用途。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的用途，其中的活性成分為6-[4-(1-環(huán)己基-1H-四唑-5-基)丁氧基]-3，4-二氫喹諾酮或其鹽。
21.根據(jù)權(quán)利要求19或20的用途，其被用于制備用于治療神經(jīng)元疾病的藥物。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的用途，其中的神經(jīng)元疾病為阿耳茨海默病。
全文摘要
一種新的PTEN開放劑或一種新的大型電導Ca
文檔編號A61K31/4709GK1780623SQ200480011140
公開日2006年5月31日 申請日期2004年2月24日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月25日
發(fā)明者洪起煥 申請人:大塚制藥株式會社