專利名稱:羥基-聯(lián)苯-甲醛肟衍生物及其作為雌激素藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及新的4′-羥基-聯(lián)苯-甲醛肟衍生物,其作為雌激素藥物的應(yīng)用和其制備方法。
背景技術(shù):
雌激素在哺乳動物組織內(nèi)的多向性作用已經(jīng)被報導(dǎo)過,現(xiàn)在了解雌激素作用于許多器官系統(tǒng)[Mendelsohn和Karas,新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志(New England Journal of Medicine)3401801-1811(1999),Epperson等,身心醫(yī)學(xué)(Psychosomatic Medicine)61676-697(1999),Crandall,婦女健康和性基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志(Journal ofWomens Health & Gender Based Medicine)81155-1166(1999),Monk和Brodaty,癡呆和老年血認知障礙(Dementia & GeriatricCognitive Disorders)111-10(2000),Hum和Macrae,腦血流和代謝雜志(Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism)20631-652(2000),Calvin,Maturitas 34195-210(2000),F(xiàn)inking等,Zeitschrift fur Kardiologie 89442-453(2000),Brincat,Maturitas 35107-117(2000),Al-Azzawi,研究生醫(yī)學(xué)雜志(Postgraduate Medical Journal)77292-304(2001)]。雌激素可以以數(shù)種方式對組織施加影響??赡艿兀畛浞置枋鎏卣鞯淖饔脵C理是其與雌激素受體之間的相互作用導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄改變。雌激素受體是配體激活的轉(zhuǎn)錄因子且屬于核激素受體超家族。該家族的其他成員包括孕酮,雄激素,糖皮質(zhì)激素和鹽皮質(zhì)激素受體。在與配體結(jié)合時,這些受體二聚化且可以通過直接與DNA上的特定序列(稱作響應(yīng)因子)結(jié)合或者通過與其他轉(zhuǎn)錄因子(例如AP1)相互作用、,隨后直接結(jié)合特定DNA序列而激活基因轉(zhuǎn)錄[Moggs和Orphanides,EMBO報告2775-781(2001),Hall等,生物化學(xué)雜志(Journal of BiologicalChemistry)27636869-36872(2001),McDonnell,分子調(diào)節(jié)的原理(Principles Of Molecular Regulation)p351-361(2000)]。一類的″共調(diào)節(jié)″蛋白質(zhì)也可以與配體結(jié)合的受體相互作用且進一步調(diào)制其轉(zhuǎn)錄活性[McKenna等.,內(nèi)分泌綜述(Endocrine Reviews)20321-344(1999)]。目前已經(jīng)證實,雌激素受體可以通過配體依賴性和非依賴性兩種方式抑制NFKB-介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄[Quaedackers等,內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinology)1421156-1166(2001),Bhat等,類固醇生物化學(xué)和分子生物學(xué)雜志(Journal of Steroid Biochemistry & MolecularBiology)67233-240(1998),Pelzer等,生物活性和生物物理研究通訊(Biochemical & Biophysical Research Communications)2861153-7(2001)]。
雌激素受體還可以被磷酸化作用激活。這種磷酸化作用是由生長因素如EGF介導(dǎo)的且在配體不存在條件下引起基因轉(zhuǎn)錄的改變[Moggs和Orphanides,EMBO報告2775-781(2001),Hall等.,生物化學(xué)雜志(Journal of Biological Chemistry)27636869-36872(2001)]。
沒有被充分刻畫特征的雌激素可影響細胞的方式被稱作膜。這種受體的存在是有爭議的,但已經(jīng)有適當(dāng)文獻稱雌激素可以引起由細胞的極快非基因組響應(yīng)。負責(zé)轉(zhuǎn)導(dǎo)這些效應(yīng)的分子完整性還未被確定的分離出來,但有證據(jù)顯示至少與雌激素受體的核形成有關(guān)[Levin,實用生理學(xué)雜志(Journal of Applied Physiology)911860-1867(2001),Levin,內(nèi)分泌和代謝的趨勢(Trends in Endocrinology& Metabolism)10374-377(1999)]。
目前為止已經(jīng)發(fā)現(xiàn)兩種雌激素受體。第一種雌激素受體在約15年前被克隆且現(xiàn)在稱作ERα[Green等,自然(Nature)320134-9(1986)]。第二種是在相對近期發(fā)現(xiàn)的并稱作ERβ[Kuiper等.,美國國家科學(xué)院匯編(Proceedings of the National Academy ofSciences of the United States of America)935925-5930(1996)]。有關(guān)ERβ的早期工作集中在確定其對不同配體的親和力上,并且事實上,集中于發(fā)現(xiàn)與ERα的某些差異上。在嚙齒動物中已經(jīng)很好描繪出ERβ的組織分布但與ERα不一致。組織例如小鼠和大鼠子宮主要表達ERα,而小鼠和大鼠肺主要表達ERβ[Couse等,內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinology)1384613-4621(1997),Kuiper等,內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinology)138863-870(1997)]。甚至在一些情況中,ERα和ERβ的分別可以被劃分。譬如,在小鼠卵巢中,ERβ高度表達在粒膜細胞內(nèi)而ERα局限在鞘和基質(zhì)細胞中[Sar和Welsch,內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinology)140963-971(1999),F(xiàn)itzpatrick等,內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinology)1402581-2591(1999)]。然而,有實例是其中所述受體共同表達,并且有體外研究的證據(jù)顯示ERα和ERβ可以形成雜二聚體[Cowley等,生物化學(xué)雜志(Journal of BiologicalChemistry)27219858-19862(1997)]。
大多數(shù)有效內(nèi)源性雌激素為17β-雌二醇。已經(jīng)公開了大量模擬或阻斷17β-雌二醇活性的化合物。被概括具有與17β-雌二醇具有相同生物效應(yīng)的化合物被稱作″雌激素受體激動劑″。那些當(dāng)與17β-雌二醇組合時阻斷17β-雌二醇作用的化合物被稱作″雌激素受體拮抗劑″。在實際中,雌激素受體激動劑和雌激素受體拮抗劑活性之間存在交叉區(qū)并且某些化合物在某些組織內(nèi)充當(dāng)雌激素受體激動劑而在其他組織內(nèi)充當(dāng)雌激素受體拮抗劑。這些具有混和活性的化合物稱作選擇性雌激素受體調(diào)制劑(SERMS)并且時治療上有用的藥物(例如EVISTA)[McDonnell,社會婦科調(diào)查雜志(Journal of the Societyfor Gynecologic Inyestigation)7S10-S15(2000),Goldstein等,人類生殖更新(Human Reproduction Update)6212-224(2000)]。同一化合物為何具有細胞特異性作用的準(zhǔn)確原因還不清楚,但受體構(gòu)型和/或共調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的環(huán)境中的差異已經(jīng)被提及過。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有時雌激素受體在與配體結(jié)合時采取不同的構(gòu)型。然而,這些變化的結(jié)果和微妙之處僅僅在最近才被揭示。ERα和ERβ的三維結(jié)構(gòu)已經(jīng)通過用多種配體共接近來解決并且清楚顯示螺旋12在雌激素受體拮抗劑的存在下復(fù)位,它在空間位阻上阻礙受體共酵解蛋白質(zhì)相互作用所需的蛋白質(zhì)序列[Pike等,Embo 184608-4618(1999),Shiau等.,Cell 95927-937(1998)]。此外,噬菌體顯示的技術(shù)已經(jīng)被用來鑒定在不同配體存在下與雌激素受體相互作用的肽[Paige等.,Proceedings of the National Academy of Sciences of theUnited States of America 963999-4004(1999)]。譬如,鑒定出一種肽,它可以辨別與完全雌激素受體激動劑17β-雌二醇和二乙基己烯雌酚結(jié)合的ERα。一種不同的肽被證實區(qū)分結(jié)合ERα和ERβ的氯米芬。這些數(shù)據(jù)表明,各配體潛在地使受體處于獨特和不可預(yù)知的似乎具有不同生物活性的構(gòu)型。
如上所述,雌激素作用于全部的生物過程。此外,當(dāng)性別差異被提出時(例如發(fā)病頻率、對刺激的反應(yīng)等),可以解釋為與雄性和雌性之間雌激素水平的差異有關(guān)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及下式的化合物 其中R1和R2各自獨立地是H,鹵素,CN,選擇性取代的苯基或選擇性取代的低級烷基;R3,R4,R5和R6分別獨立地是H,OH,鹵素,CN,選擇性取代的苯基,選擇性取代的低級烷基或選擇性取代的低級烷氧基;R8分別獨立地是,H,-C(O)R9,或選擇性取代的低級烷基;和R9是選擇性取代的低級烷基;或其藥學(xué)可接受鹽或其前藥。
在一優(yōu)選實施方式中,R8是H。
另一方面,本發(fā)明涉及下式的化合物
另一方面,本發(fā)明涉及下式的化合物 再一方面,本發(fā)明涉及下式的化合物 其中
R1是OH或選擇性取代的低級烷氧基;和R5,R6和R7分別獨立地是H,OH,鹵素,CN,苯基,低級烷基,低級烷氧基,該苯基,低級烷基,和低級烷氧基被選擇性取代;或其藥學(xué)可接受鹽或其前藥。
本發(fā)明的另一方面涉及藥物組合物,其中含有一種或多種本發(fā)明的化合物和藥學(xué)可接受載體。
另一方面,本發(fā)明涉及本發(fā)明的化合物在治療或預(yù)防疾病例如炎性腸病中的應(yīng)用。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及新的4′-羥基-聯(lián)苯-甲醛肟衍生物。這些適宜用作雌激素藥物的化合物適用于治療和預(yù)防疾病例如炎性腸病(包括克羅恩氏病和結(jié)腸炎)。一方面,本發(fā)明涉及下式的化合物 其中R1和R2分別獨立地是H,鹵素,CN,選擇性取代的苯基或選擇性取代的低級烷基;R3,R4,R5和R6分別獨立地是H,OH,鹵素,CN,選擇性取代的苯基,選擇性取代的低級烷基或選擇性取代的低級烷氧基;R8分別獨立地是H,-C(O)R9或選擇性取代的低級烷基;和R9是選擇性取代的低級烷基;或其藥學(xué)可接受鹽或其前藥。
在一優(yōu)選實施方式中,R8是H。
本發(fā)明的化合物可以是 在某些方面,R3,R5和R6分別獨立地是H,Cl,F(xiàn),甲基或甲氧基和R2是H,Cl,F(xiàn),或甲基。
另一方面,本發(fā)明涉及下式的化合物 在一些方面,R3,R5和R6分別獨立地是H,Cl,F(xiàn),甲基或甲氧基和R2是H,Cl,F(xiàn)或甲基。
在另一方面,本發(fā)明涉及下式的化合物
其中R1是OH或選擇性取代的低級烷氧基;和R5,R6和R7分別獨立地是H,OH,鹵素,CN,選擇性取代的苯基,選擇性取代的低級烷基,選擇性取代的低級烷氧基;或其藥學(xué)可接受鹽或其前藥。在某些實施方式中,R5,R6和R7分別獨立地是H,Me,Cl,F(xiàn)或甲氧基。
當(dāng)本發(fā)明的化合物含有堿性部分時可以由有機和無機酸形成藥學(xué)可接受鹽,例如,乙酸、丙酸、乳酸、檸檬酸、酒石酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、丙二酸、杏仁酸、蘋果酸、鄰苯二甲酸、鹽酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、萘磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟腦磺酸,和類似的已知酸。當(dāng)本發(fā)明的化合物含有酸性部分時,還可以由有機和無機堿形成鹽,例如堿金屬鹽(例如,鈉,鋰或鉀),堿土金屬鹽,銨鹽,含有1-6個碳原子的烷基銨鹽和各烷基含有1-6個碳原子的二烷基銨鹽,和各烷基含有1-6個碳原子的三烷基銨鹽。
在此單獨或者作為另一基團的一部分使用的術(shù)語″烷基″,是指取代或未取代的脂族烴鏈并且包括,但不限于,含有1-12個碳原子,優(yōu)選1-6個碳原子的直鏈和支鏈,除非另外說明。例如,甲基,乙基,丙基,異丙基,丁基,異丁基和叔丁基屬于術(shù)語″烷基″?!逋榛宥x中尤其包括選擇性取代的脂族烴鏈。
定義中使用的碳原子數(shù)是指碳主鏈和碳支鏈,但不包括取代基的碳原子,例如烷氧基取代基等。
在此單獨或者作為另一基團的一部分使用的術(shù)語″鏈烯基″,是指取代或未取代的脂族烴鏈并且包括,但不限于,具有2-8個碳原子且含有至少一個雙鍵的直鏈和支鏈。優(yōu)選地,鏈烯基部分具有1或2雙鍵。所述鏈烯基部分可以存在E或Z構(gòu)型且本發(fā)明的化合物包括兩種構(gòu)型。特別屬于定義″鏈烯基″定義中的是那些選擇性取代的脂族烴鏈。與鏈烯基相連的雜原子,例如O,S或N-R1,不應(yīng)與結(jié)合雙鍵的碳原子相連。
在此單獨或者作為另一基團的一部分使用的術(shù)語″苯基″,是指取代或未取代苯基。
選擇性取代的烷基、鏈烯基和苯基可以被一個或多個取代基取代。適當(dāng)?shù)倪x擇性取代基可以獨立地選自硝基,氰基,-N(R11)(R12),鹵素,羥基,羧基,烷基,鏈烯基,鏈炔基,環(huán)烷基,芳基,雜芳基,烷氧基,芳氧基,雜芳氧基,烷基烷氧基,烷氧基羰基,烷氧基烷氧基,全氟烷基,全氟烷氧基,芳基烷基,烷基芳基,羥基烷基,烷氧基烷基,烷硫基,-S(O)2-N(R11)(R12),-C(=O)-N(R11)(R12),(R11)(R12)N-烷基,(R11)(R12)N-烷氧基烷基,(R11)(R12)N-烷基芳氧基烷基,-S(O)s-芳基(其中s=0-2)或-S(O)s-雜芳基(其中s=0-2)。在本發(fā)明的某些實施方式中,對于烷基、鏈烯基、鏈炔基和環(huán)烷基所優(yōu)選的取代基包括硝基,氰基,-N(R11)(R12),鹵素,羥基,芳基,雜芳基,烷氧基,烷氧基烷基和烷氧基羰基。在本發(fā)明的某些實施方式中,對于芳基和雜芳基所優(yōu)選的取代基包括-N(R11)(R12),烷基,鹵素,全氟烷基,全氟烷氧基,芳基烷基和烷基芳基。
當(dāng)烷基或鏈烯基部分被取代時,例如,它們可能通常被一-、二-、三-或全取代。鹵素取代基的實例包括1-溴乙烯基,1-氟乙烯基,1,2-二氟乙烯基,2,2-二氟乙烯基,1,2,2-三氟乙烯基,1,2-二溴乙烷,1,2-二氟乙烷,1-氟-2-溴乙烷,CF2CF3,CF2CF2CF3等。
術(shù)語鹵素包括溴、氯、氟和碘。
術(shù)語″低級烷基″是指具有1-6個碳原子的烷基,在某些實施方式中優(yōu)選1-3個碳原子。
在此使用的術(shù)語″低級烷氧基″是指基團R-O-,其中R是1-6個碳原子的烷基,在一些實施方式中優(yōu)選1-3個碳原子。
按照本發(fā)明,本發(fā)明概括的提供化合物或物質(zhì)中的術(shù)語″提供″,或者是指直接施用所述的化合物或物質(zhì),或者施用在體內(nèi)形成等效量的所述化合物或物質(zhì)的前藥、衍生物或類似物。
在至少部分由雌激素缺乏或過量介導(dǎo)的病癥、障礙或疾病的治療或抑制中,或者可以理由雌激素藥物治療或抑制的病癥、障礙或疾病中,本發(fā)明的化合物可以是雌激素受體調(diào)制劑。本發(fā)明的化合物特別適用于治療那些產(chǎn)生的內(nèi)源性雌激素大大減少的絕經(jīng)前、絕經(jīng)或絕經(jīng)后的患者。絕經(jīng)通常被定義為晚期自然月經(jīng)周期并且其特征在于卵巢功能的停止,導(dǎo)致血液中循環(huán)雌激素的大量減少。在此,月經(jīng)還包括雌激素生成減少的狀況,其可能是手術(shù)、化學(xué)引起的,或者由導(dǎo)致卵巢功能的提前減少或停止的疾病狀態(tài)引起的。
所以,本發(fā)明的化合物有效治療或抑制骨質(zhì)疏松癥或抑制骨骼脫礦質(zhì)化,它們可能導(dǎo)致個體中的新骨骼組織的形成與舊組織吸收之間的失衡,造成骨骼的凈損失。這種骨骼缺失發(fā)生在一定范圍的個體中,特別是絕經(jīng)后婦女、經(jīng)歷兩側(cè)卵巢切除術(shù)的婦女、那些正在或已經(jīng)接受長期皮質(zhì)類固醇療法的婦女、那些患有生殖腺發(fā)育不全的,和那些患有綜合癥的。在患有骨折、缺損性骨結(jié)構(gòu)的個體中和那些接受骨骼相關(guān)性手術(shù)和/或修復(fù)術(shù)植入的個體中,這些化合物也可以達到骨骼(包括牙齒和口腔骨)替代的特別要求。除了上述那些問題以外,這些化合物可以用來治療或抑制骨關(guān)節(jié)炎,低血鈣,Paget氏病,骨軟化,骨質(zhì)缺乏,多發(fā)性骨髓瘤和其他形式的對骨組織具有損害性作用的癌癥。
本發(fā)明的化合物還有效治療或抑制良性或惡性的異常組織生長,包括前列腺肥大,子宮平滑肌瘤,乳腺癌,子宮內(nèi)膜異位,子宮內(nèi)膜癌,多囊性卵巢綜合癥,子宮內(nèi)膜息肉,良性乳腺疾病,腺肌瘤,卵巢癌,黑素瘤,前列腺癌,結(jié)腸癌,CNS癌,例如神經(jīng)膠質(zhì)瘤或astioblastomia。
本發(fā)明的化合物是心肺保護性的,它們有效降低膽固醇、甘油三脂、Lp(a)和LDL水平;抑制或治療高膽固醇血癥、高血脂、心血管疾病、動脈粥樣硬化、外周血管疾病、再狹窄和血管痙攣;并且抑制血管壁損傷在細胞活動作用下導(dǎo)致發(fā)展為免疫介導(dǎo)的血管損傷。當(dāng)用雌激素類治療絕經(jīng)后患者時,這些心血管保護性質(zhì)對于抑制骨質(zhì)疏松癥并且在雌激素療法被指示使用的男性中都非常重要。
本發(fā)明的化合物也是抗氧劑,并且因此適用于治療或抑制自由基誘發(fā)的疾病狀態(tài)。其中抗氧劑療法被指定批準(zhǔn)的特定情況是癌癥,中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙,阿爾茨海默氏病,骨骼疾病,衰老,炎性疾病,外周血管疾病,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,自身免疫性疾病,呼吸窘迫,肺氣腫,再灌注損傷的預(yù)防,病毒性肝炎,慢性活動性肝炎,鈍挫性結(jié)核,牛皮癬,系統(tǒng)性紅斑狼瘡,成人呼吸窘迫綜合癥,桌上神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷和休克。
本發(fā)明的化合物還有效地產(chǎn)生認知增強作用并且有效治療或抑制老年性癡呆,阿爾茨海默氏病,認知減退,神經(jīng)變性疾病,具有神經(jīng)保護作用或認知增強作用。
本發(fā)明的化合物也有效治療或抑制炎性腸病,潰瘍性直腸炎,克羅恩氏病和結(jié)腸炎;和絕經(jīng)有關(guān)的病癥,例如血管舒縮癥狀如熱潮紅類,陰道或外陰萎縮,萎縮性陰道炎,陰道干燥,瘙癢,交媾困難,排尿困難,排尿頻繁,尿失禁,尿道感染,血管舒縮癥狀,包括熱潮紅,肌痛,關(guān)節(jié)痛,失眠,過敏等;男性脫發(fā);皮膚萎縮;痤瘡;II型糖尿?。还δ懿涣夹宰訉m出血;和不育癥。
本發(fā)明的化合物適合于那些閉經(jīng)具有有益作用的疾病狀態(tài),例如白血病,子宮內(nèi)膜切除,慢性腎臟或肝臟疾病或凝血疾病或障礙。
本發(fā)明的化合物可以用作避孕藥物,特別當(dāng)與孕激素聯(lián)合使用時。
當(dāng)為了治療或抑制特定的疾病狀態(tài)或障礙給藥時,應(yīng)理解有效劑量可以根據(jù)所用的具體化合物、給藥方式、病癥和被治療病癥的嚴重性,以及與被治療個體有關(guān)的多種生理因素而變化。本發(fā)明的化合物的有效給藥可以以約0.1mg/天-約1,000mg/天的口服劑量施用。優(yōu)選地,給藥應(yīng)是約10mg/天-約600mg/天,更優(yōu)選約50mg/天-約600mg/天,以單一劑量或以兩個或多個細分劑量。設(shè)計的日劑量應(yīng)視給藥的途徑而變化。
所述的劑量可以以有效地使所述活性化合物定向進入到接受者的血液內(nèi)的方式給藥,包括經(jīng)口服、經(jīng)植入、經(jīng)非腸道(包括靜脈內(nèi),腹膜內(nèi)和皮下注射)、經(jīng)直腸、經(jīng)鼻內(nèi)、經(jīng)鞘內(nèi)和透皮給藥。
含有本發(fā)明的活性化合物的口服制劑可以包括任何常用口服劑型,包括片劑、膠囊、頰形式、糖錠劑、錠劑和口服液體、混懸液或溶液。膠囊可以含有活性化合物與惰性填充劑和/或稀釋劑的混和物,例如藥學(xué)可接受淀粉(例如玉米、土豆或木薯淀粉)、糖、人工甜味劑、粉狀纖維素,如晶體或微晶纖維素,面粉,明膠,樹膠等。適用的片劑劑型可以通過常規(guī)壓縮、濕法制粒和干法制粒法制備并采用藥學(xué)可接受稀釋劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、表面改性劑(包括表面活性劑),助懸劑或穩(wěn)定劑,包括,但不限于,硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石粉、十二烷基硫酸鈉、微晶纖維素、羧甲基纖維素鈣、聚乙烯吡咯烷酮、明膠、藻酸、阿拉伯膠、黃原膠、檸檬酸鈉、復(fù)合硅酸鹽、碳酸鈣、甘氨酸、糊精、蔗糖、山梨糖醇、磷酸二鈣、乳糖、高嶺土、甘露糖醇、氯化鈉、滑石粉、干燥淀粉和糖粉。優(yōu)選的表面改性試劑包括肺離子和陰離子表面改性試劑。表面改性試劑的代表實例包括,但不限于,泊咯沙姆(poloxamer)188,苯扎氯銨,硬脂酸鈣,鯨蠟硬脂醇,cetomacrogol乳化蠟,脫水山梨糖醇酯,膠體二氧化硅,磷酸鹽,十二烷基硫酸鈉,硅酸鎂鋁,和三乙醇胺本發(fā)明的口服制劑可以采用標(biāo)準(zhǔn)延遲或定時釋放制劑以改變活性化合物的吸收。口服制劑還可以由施用水或果汁中的活性成分組成,根據(jù)需要其中含有適當(dāng)?shù)脑鋈軇┗蛉榛瘎?br>
在某些情況中可能希望直接給予氣霧劑形式的所述化合物到呼吸道內(nèi)。
本發(fā)明的化合物還可以經(jīng)非腸道或腹膜內(nèi)給藥。這些作為游離堿或藥學(xué)可接受鹽的活性化合物的溶液或混懸液可以在水中與表面活性劑例如羥基-丙基纖維素混和制成。分散體液可以在甘油、液體聚乙二醇或其在油中的混和物中制成。在常規(guī)儲存和使用條件下,這些制劑含有防止微生物生長的防腐劑。
適合注射使用的藥學(xué)劑型包括滅菌水溶液或分散體和用于即時制備滅菌可注射溶液或分散體的滅菌粉末。在所有情況中,該劑型必須被滅菌且須流動達到具有易注射性的程度。在制造和儲存的條件下必須穩(wěn)定并且必須對微生物如細菌和真菌的肟染具有防腐作用。載體可以是溶劑或分散介質(zhì),包括,例如,水、乙醇、多元醇(例如,甘油,丙二醇和液體聚乙二醇),其適當(dāng)混和物和植物油。
鑒于本文的目的,透皮給藥被理解為包括所有穿過機體表面和機體通道(包括上皮和粘膜組織)的內(nèi)襯層的給藥。這樣的給藥可以利用本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)可接受鹽以洗劑、霜劑、泡沫劑、貼劑、混懸劑、溶液劑和栓劑(直腸和陰道)給藥。
透皮給藥可以采用透皮貼劑來完成,所述貼劑含有活性化合物和對該活性化合物呈惰性的載體,載體對皮膚無毒,并且能夠使藥物經(jīng)皮膚傳輸進入血液達到系統(tǒng)吸收。在載體可以是任何種類的泡沫劑,例如霜劑和軟膏、硬膏劑、凝膠劑和封閉裝置。霜劑和軟膏可以是粘性液體或水包油或油包水型的半固體乳劑。硬膏劑也適宜,該硬膏劑包括吸附性粉末分散在含活性成分的石油或親水性石油中。許多閉合裝置可以用來釋放活性成分到血液中,例如半滲透膜覆蓋含有活性成分和可有可無的載體的儲庫,或者含有活性成分的基質(zhì)。其他閉合裝置是文獻中公開過的。
栓劑可以由傳統(tǒng)材料制成,包括可可脂,加入或不加入蠟,以便改變栓劑的熔點和甘油??扇苡谒乃▌┗|(zhì),例如不同分子量的聚乙二醇,也可以使用。
制備本發(fā)明的化合物中所用的試劑或者可以商購,或者可以通過文獻所述的標(biāo)準(zhǔn)方法制備。
本發(fā)明的數(shù)個代表性實施例的制備在下列路線1-11中描述。
路線1
路線2
路線7
路線9 路線10
路線11 實施例14-叔丁基-二甲基甲硅烷基苯基硼酸方法A.N2下向(4-溴-苯氧基)-叔丁基-二甲基硅烷(20mL,23.48g,0.082moles)在四氫呋喃(200mL)中的溶液內(nèi)在-78℃下緩慢加入正丁基鋰(39.2mL的2.5M己烷溶液,0.098moles)同時攪拌數(shù)分鐘。將該溶液攪拌1小時并且在-78℃下用注射器加入三異丙基硼酸酯(66.2mL,54.0g,0.29moles)。-78℃下攪拌該溶液1小時,隨后升至室溫過夜。將該反應(yīng)冷卻至0℃且向反應(yīng)混合物中加入水(20mL)和2NHCl(20mL)。隨后全部混和物與2N HCl(360mL)一起攪拌10分鐘。該混合物用乙酸乙酯(3×250mL)萃取。合并的有機層被濃縮至約50mL的體積。用冷己烷誘發(fā)結(jié)晶,通過過濾收集固體產(chǎn)物且在真空下干燥得到14.5g(70%)的標(biāo)題化合物,其為白色固體1H NMR(DMSO-d6)δ0.19(6H,s),0.94(9H,s),6.80(2H,d,J=8.4Hz),7.69(2H,d,J=8.36Hz),7.87(2H,s)。
實施例24′-羥基-3-甲基[1,1′-聯(lián)苯]-4-甲腈方法B.將4-溴-2-甲基芐腈(1.8g,9.18mmol)、4-叔丁基-二甲基甲硅烷基苯基硼酸(3.0g,11.9mmol)、碳酸鈉(13.8mL的2M水溶液,27.5mmol)、四(三苯基膦)鈀(0.53g,0.46mmol)和乙二醇二甲醚(70mL)的化合物加熱回流過夜。使該混合物冷卻至室溫且傾入水中,隨后用乙酸乙酯(3x)萃取,用鹽水洗滌,硫酸鈉干燥,過濾和蒸發(fā)溶劑。通過硅膠色譜純化(15%-25%乙酸乙酯-己烷)得到1.81g(94%)的標(biāo)題化合物,全文黃色固體mp177-178℃;1H NMR(DMSO-d6)δ2.52(3H,s),6.88(2H,d,J=8.50Hz),7.60(3H,d,J=8.49Hz),7.71(1H,s),7.77(2H,d,J=8.12Hz),9.79(1H,s);IR 2220cm-1;MS(ESI)m/z 208(M-H)-。
分析C14H11NO計算值C80.36,H5.30,N6.69實測值C79.91,H5.27,N6.57.
實施例34′-羥基-3-甲基[1,1′-聯(lián)苯]-4-甲醛使4′-羥基-3-甲基[1,1’-聯(lián)苯]-4-甲腈(500mg,2.39mmol)在干燥甲苯中的溶液冷卻至-78℃且一次性加入全部二異丁基氫化鋁(4.0mL的1.5M的甲苯溶液,5.98mmol)。使該反應(yīng)混合物在3.5小時內(nèi)升至室溫。0℃下加入甲醇(1.2mL),隨后加入水(1.2mL),該混合物在室溫攪拌20分鐘。加入1NHCl溶液同時攪拌直至pH<7。該混合物用乙酸乙酯(3x)萃取,用鹽水洗滌,硫酸鈉干燥,過濾和蒸發(fā)溶劑。通過癸基色譜純化(15%-25%乙酸乙酯-己烷)得到459mg(91%)的標(biāo)題化合物,其為白色固體mp 161-162℃;1H NMR(DMSO-d6)δ2.67(3H,s),6.88(2H,d,J=8.41Hz),7.59-7.65(4H,m),7.85(1H,d,J=8.03Hz),9.78(1H,s),10.22(1H,s);IR 1680cm-1;MS(ESI)m/z 211(M-H)-。
分析C14H12O2計算值C79.23,H5.70實測值C78.79,H5.90.
實施例44′-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛該標(biāo)題化合物是通過4-溴苯甲醛(730mg,3.97mmol)與4-叔丁基-二甲基甲硅烷基苯基硼酸(1.3g,5.16mmol)按照方法B反應(yīng)制備,得到600mg(48%)的白色晶體1H NMR(DMSO-d6)δ0.24(6H,s),1.01(9H,s),6.94(2H,d,J=8.54Hz),7.53(2H,d,J=8.56Hz),7.72(2H,d,J=8.19Hz),7.93(2H,d,8.20Hz),10.04(1H,s)。
實施例54′-羥基[1,1′-聯(lián)苯]-4-甲醛4′-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛(320mg,1.03mmol)、無水KF(120mg,2.06mmol)和48%含水HBr(35ul,0.31mmol)在6mL干燥DMF中的混和物在室溫和N2下攪拌1小時。TLC指示起始原料存在,因此向反應(yīng)中加入更多的48%含水HBr(35uL,0.31mmol)并且連續(xù)攪拌該混合物1.5小時。冷卻下將該混合物傾入1N HCl水溶液(30mL)。該含水混和物用EtOAc(3x)萃取。合并的萃取液用飽和NaCl溶液洗滌,并且用Na2SO4干燥。減壓下蒸發(fā)溶劑,產(chǎn)物(100%)直接用于下步。1H NMR(DMSO-d6)δ6.89(2H,d,J=8.43Hz),7.63(2H,d,J=8.46Hz),7.83(2H,d,J=8.16Hz),7.94(2H,d,J=8.02Hz),9.79(1H,s),10.01(1H,s)。
實施例6三氟-甲磺酸3-氯-4-甲?;?苯基酯方法D.0℃下向2-氯-4-羥基苯甲醛(1.31g,8.4mmol)和吡啶(1.1mL,13.4mmol)在80mL二氯甲烷中的溶液內(nèi)加入三氟甲磺酸酐(1.84mL,3.08g,10.9mmol)。使該溶液緩慢升至室溫且攪拌2.5小時。使該溶液冷卻至0℃且與冰水一起攪拌以分解過量的酸酐。通過加入飽和碳酸氫鈉溶液使該混合物呈微堿性。分離所得層且水層用二氯甲烷(3×100mL)萃取。合并的有機層用鹽水洗滌,硫酸鈉干燥,過濾和真空下除去溶劑得到橙色油,通過硅膠色譜純化(5%乙酸乙酯-己烷)得到1.83g(76%)的標(biāo)題化合物,其為澄清、無色油1HNMR(DMSO-d6)δ7.73(1H,dd,J=2.35Hz,J=8.64Hz),8.04-8.07(2H,m),10.30(1H,s)。
實施例7三氟-甲磺酸2-氟-4-甲?;?苯基酯本標(biāo)題化合物通過3-氟-4-羥基苯甲醛(1.2g,8.56mmol)與三氟甲磺酸酐(1.87mL,3.14g,11.1mmol)按照方法D反應(yīng)得到黃色油,其直接用于下步無需純化1H NMR(CDCl3)δ7.53-7.58(1H,m),7.77-7.85(2H,m),10.01(1H,d,J=1.45Hz)。
實施例84′-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-3-氯-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛本標(biāo)題化合物通過三氟-甲磺酸3-氯-4-甲?;?苯基酯(1.78g,6.18mmol)與4-叔丁基-二甲基甲硅烷基苯基硼酸(2.03g,8.03mmol)按照方法B反應(yīng)得到0.92g(43%)的白色固體mp38-39℃;1HNMR(DMDO-d6).δ0.23(6H,s),0.97(9H,s),6.98(2H,d,J=8.79Hz),7.74(2H,d,J=8.79Hz),7.81(1H,d,J=7.81Hz),7.89(1H,d,J=1.95Hz),7.91(1H,d,J=7.81Hz),10.34(1H,s);MS(ESI)m/z 231/233(M-H)-(脫保護產(chǎn)物離子)。
分析C19H23ClO2Si計算值C65.78,H6.68實測值C65.59,H6.60.
實施例9和10三氟-甲磺酸2-氟-4-甲?;?苯基酯(2.1g,7.72mmol)與4-叔丁基-二甲基甲硅烷基苯基硼酸(2.14g,8.49mmol)按照方法B反應(yīng)制備下列兩種化合物4′-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-氟-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛1.62g(63%)的蠟質(zhì)黃色固體1H NMR(丙酮-d6)δ0.28(6H,s),1.02(9H,s),7.02-7.06(2H,m),7.57-7.60(2H,m),7.71-7.78(2H,m),7.85(1H,dd,J=7.91Hz,J=1.51Hz),10.07(1H,d,J=1.73Hz);13C NMR(丙酮-d6)δ-4.29,18.80,26.00,116.82(d,J=23.90Hz),121.15,126.69(d,J=3.25Hz),128.42(d,1.21Hz),131.30(d,J=3.48Hz),132.20(d,J=3.44Hz),135.27(d,J=13.61),138.09(d,J=6.64Hz),157.23,160.68(d,J=248.56Hz),191.51;IR 1692cm-1;MS(ESI)m/z 331(M+H)+,372(M+H+ACN)+。
分析C19H23FO2Si計算值C69.06H7.02實測值C69.71H7.34.
2-氟-4′-羥基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛0.32g(19%)的黃色固體mp 149-150℃;1H NMR(丙酮-d6).δ7.08-7.13(2H,m),7.62-7.67(2H,m),7.80-7.91(2H,m),7.94(1H,dd,J=7.92Hz,J=1.58Hz),8.93(1H,s),10.16(1H,d,J=1.73Hz);IR 1669cm-1;MS(ESI)m/z 215(M-H)-1。
分析C13H9FO2計算值C72.22,H4.20實測值C71.38,H4.12.
實施例114′-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-3-氯[1,1′聯(lián)苯]-4-甲醛肟本標(biāo)題化合物通過4′-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-3-氯-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛(405mg,1.17mmol)與羥胺鹽酸鹽(154mg,2.22mmol)按照方法C反應(yīng)得到黃色油,它無需純化用于下步MS(ESI)m/z362/364(M+H)+。
實施例124′-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-氟-[1,1’-聯(lián)苯]-4-甲醛肟本標(biāo)題化合物通過4′-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-氟-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛(450mg,1.36mmol)與羥胺鹽酸鹽(190mg,2.73mmol)按照方法C反應(yīng)得到白色固體,它無需純化用于下步MS(ESI)m/z 344(M-H)-,346(M+H)+。
實施例13
3-氟-4′-甲氧基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛本標(biāo)題化合物通過4-溴-2-氟-苯甲醛(3g,14.8mmol)與4-甲氧基苯基硼酸(2.70g,17.8mmol)按照方法B反應(yīng)得到3.2g(94%)的白色固體mp85-86℃;1H NMR(DMSO-d6)δ3.83(3H,s).7.06-7.09(2H,m),7.70-7.75(2H,m),7.79-7.82(2H,m),7.88(1H,t,J=7.96Hz),10.22(1H,s);IR 1681cm-1;MS(ESI)m/z 231(M+H)+。
分析C14H11FO2計算值C73.03,H4.82實測值C72.99,H4.73實施例143-氟-4′-羥基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛方法F.0℃下向3-氟-4′-甲氧基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛(0.986g,4.29mmol)在二氯甲烷(35mL)中的混和物內(nèi)緩慢加入三溴化硼(10.7mL的1N二氯甲烷溶液,10.7mmol)。使該混合物緩慢升至室溫且攪拌過夜。將水(4mL)注射導(dǎo)混和物內(nèi)同時在冰水浴內(nèi)攪拌。將所得混和物傾入水中且用乙酸乙酯(3x)萃取。合并的有機層用鹽水洗滌,硫酸鈉干燥,過濾,蒸發(fā)溶劑且通過硅膠色譜純化(15%-30%乙酸乙酯-己烷)得到150mg(16%)的標(biāo)題化合物,其為白色固體。通過反相制備HPLC得到分析樣本mp 164-166℃;1H NMR(丙酮-d6)δ76.98-7.01(2H,m),7.56(1H,dd,J=12.49Hz,J=1.64Hz),7.63-7.66(1H,m),7.67-7.70(2H,m),7.89(1H,t,J=7.85Hz),8.88(1H,bs),10.31(1H,s);MS(ESI)m/z 215(M-H)-。
分析C13H9FO2計算值C72.22,H4.20實測值C71.83,H4.04實施例15三氟-甲磺酸2-氯-4-甲?;?苯基酯本標(biāo)題化合物通過3-氯-4-羥基苯甲醛(5g,31.9mmol)與三氟甲磺酸酐(7.0mL,11.7g,41.5mmol)按照方法D反應(yīng)得到9.15g(100%)黃色油,其直接用于下步無需純化1H NMRδ7.92(1H,d,J=8.48Hz),8.07(1H,dd,J=8.51Hz,J=1.93Hz),8.30(1H,d,J=1.92Hz),10.04(1H,s)。
實施例162-氯-4′-甲氧基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛本標(biāo)題化合物通過三氟-甲磺酸2-氯-4-甲?;?苯基酯(5g,17.4mmol)與4-甲氧基苯基硼酸(3.44g,22.6mmol)按照方法B反應(yīng)得到3.83g(89%)的白色固體mp85-87℃;1H NMR(DMSO-d6)δ3.82(3H,s),7.07(2H,d,J=8.83Hz),7.46(2H,d,J=8.45Hz),7.63(1H,d,J=7.87Hz),7.92(1H,dd,J=7.87Hz,J=1.56Hz),8.07(1H,d,J=1.49Hz);13C NMR(DMSO-d6)δ55.14,113.72,127.80,129.72,130.42,130.82,132.15,132.21,136.11,144.90,159.33,191.73;IR 1692cm-1;MS(EI)/z 246/248M+。
分析C14H11ClO2計算值C68.16H4.49實測值C67.76H4.36實施例172′-氯-4′-(二溴甲基)-1,1’-聯(lián)苯-4-醇本標(biāo)題化合物通過2-氯-4′-甲氧基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛(800mg,3.25mmol)與三溴化硼(8.1mL的1N二氯甲烷溶液,8.13mmol)按照方法F反應(yīng)得到600mg(50%)的黃色固體mp107-108℃;1HNMR(DMSO-d6)δ6.86(2H,d,J=8.52Hz),7.29(2H,d,J=8.50Hz),7.43(1H,s),7.45(1H,d,J=8.12Hz),7.64(1H,dd,J=8.07Hz,J=1.83Hz),7.74(1H,d,J=1.79Hz),9.71(1H,bs);13CNMR(DMSO-d6)840.66,114.94,125.66,127.34,128.14,130.39,130.87,131.80,140.95,142.14,157.36;MS(ESI)m/z373/375/377/379(M-H)-。
分析C13H9Br2ClO計算值C41.48,H2.41實測值C41.64,H2.14
實施例18三氟-甲磺酸4-甲?;?3-甲氧基-苯基酯本標(biāo)題化合物通過4-羥基-2-甲氧基苯甲醛(3g,19.7mmol)與三氟甲磺酸酐(4.3mL,7.2g,25.6mmol)按照方法D反應(yīng)得到褐色漿,它無需純化用于下步1H NMRδ3.97(3H,s),7.21(1H,dd,J=8.64Hz,J=2.17Hz),7.47(1H,d,J=2.24Hz),7.87(1H,d,J=8.64Hz),10.31(1H,s)。
實施例19三氟-甲磺酸4-甲?;?2-甲基-苯基酯本標(biāo)題化合物通過4-羥基-3-甲基苯甲醛(2.5g,18.4mmol)與三氟甲磺酸酐(4.0mL,6.75g,23.9mmol)按照方法D反應(yīng)得到褐色油,其直接用于下步無需純化。
實施例204′-羥基-3-甲氧基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛本標(biāo)題化合物通過三氟-甲磺酸4-甲?;?3-甲氧基-苯基酯(11.0mmol)與4-叔丁基-二甲基甲硅烷基苯基-硼酸(3.50g,13.86mmol)按照方法B反應(yīng)得到880mg(35%,共2步)的黃色固體mp 159-161℃;1H NMR(DMDO-d6)δ4.01(3H,s),6.89(2H,d,J=8.62Hz),7.31(1H,d,J=8.16Hz),7.36(1H,d,J=1.15Hz),7.66(2H,d,J=8.63Hz),7.72(1H,d,J=8.09Hz),9.80(1H,s),10.34(1H,s);mp159-161℃;IR 1660cm-1;MS(ESI)m/z 227(M-H)-,229(M+H)+。
分析C14H12O3計算值C73.67,H5.30實測值C73.44,H4.99.
實施例214′-羥基-2-甲基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛本標(biāo)題化合物通過三氟-甲磺酸4-甲?;?2-甲基-苯基酯(9.3mmol)與4-叔丁基-二甲基甲硅烷基苯基硼酸(2.35g,9.3mmol)按照方法B反應(yīng)得到1.12mg(57%,共2步)的黃色固體mp 94-96℃;1HNMR(DMSO-d6)δ2.33(3H,s),6.86(2H,d,J=8.55Hz),7.22(2H,d,J=8.51Hz),7.39(1H,d,J=7.81Hz),7.61(1H,d,J=7.82Hz),7.81(1H,s),9.65(1H,s),10.00(1H,s);IR 1670cari;MS(ESI)m/z 211(M-H)-,213(M+H)+。
分析C14H12O2計算值C79.23 H5.70實測值C77.49 H5.67實施例223-氟-4-甲氧基苯基硼酸本標(biāo)題化合物通過4-溴-2-氟苯甲醚(10g,0.049moles)與正丁基鋰(23.4mL的2.5M己烷溶液,0.059moles),隨后與三異丙基硼酸酯(45.2mL,36.9g,0.196moles)按照方法A反應(yīng)得到7.1g(85.2%)的白色固體MS(ESI)m/z 169(M-H)-。
實施例233-氯-3′-氟-4′-甲氧基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛本標(biāo)題化合物通過三氟-甲磺酸3-氯-4-甲?;?苯基酯(2.8g,9.62mmol)與3-氟-4-甲氧基苯基硼酸(1.8g,10.6mmol)按照方法B反應(yīng)得到1.87g(74%,共2步)of白色固體mp 116-118℃;1HNMR(DMSO-d6)δ3.91(3H,s),7.30(1H,t,J=8.79Hz),7.66-7.68(1H,m),7.79(1H,dd,J=12.91Hz,J=2.47Hz),7.85-7.87(1H,m),7.91(1H,d,J=8.24Hz),7.96(1H,d,J=1.65Hz),10.34(1H,s);IR 1688cm-1;MS(ESI)m/z 265/267(M+H)+。
分析C14H10ClFO2計算值C63.53,H3.81實測值C63.29,H3.63.
實施例243-氯-3′-氟-4′-羥基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛本標(biāo)題化合物通過3-氯-3′-氟-4′-甲氧基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛(990mg,3.75mmol)與三溴化硼(11.25mL的1N二氯甲烷溶液,11.25mmol)按照方法F反應(yīng)得到940mg(100%)的黃色固體。該化合物無需純化用于下步。分析樣本通過HPLC純化得到mp 206-208℃;1HNMR(DMSO-d6)δ7.06(1H,t,J=8.79Hz),7.51-7.53(1H,m),7.71(1H,dd,J=2.47Hz,J=12.63Hz),7.81-7.83(1H,m),7.89(1H,d,J=7.96Hz),7.91(1H,d,J=1.66Hz),10.329(1H,s),10.330(1H,s);IR 1667cm-1;MS(ESI)m/z 249/251(M-H)-。
分析C13H8ClFO2計算值C62.29,H3.22實測值C61.97,H3.21.
實施例253-氯-3′,5′-二氟-4′-羥基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛本標(biāo)題化合物通過三氟-甲磺酸3-氯-4-甲?;?苯基酯(1g,3.5mmol)與3,5-二氟-4-叔丁基二甲基甲硅烷基-硼酸(1.1g,3.8mmol)按照方法B反應(yīng)得到0.56g(60%)黃色固體mp233-235℃;1HNMR(DMSO-d6)δ7.64(2H,d,J=7.85Hz),7.85-7.91(2H,m),7.98(1H,s),10.33(1H,s),10.70(1H,bs);IR 1665cm-1;MS(ESI)m/z(267/269)(M-H)-。
分析C13H7ClF2O2計算值C58.12,H2.63實測值C57.79,H2.72.
實施例26和27三氟-甲磺酸3-氯-4-甲?;?苯基酯(3.78g,13.12mmol)與4-甲氧基-2-甲基苯基硼酸(2.61g,15.7mmol)按照方法B反應(yīng)得到兩種化合物3-氯-4′-甲氧基-2′-甲基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛2.18g(64%)白色固體mp77-79℃;1H NMR(DMSO-d6)δ2.26(3H,s),3.79(3H,s),6.88(1H,dd,J=8.41Hz,J=2.66Hz),6.93(1H,d,J=2.50Hz),7.23(1H,J=8.40Hz),7.50(1H,dd,J=7.93Hz,J=1.32Hz),7.58(1H,d,J=1.53Hz),7.91(1H,d,J=7.57Hz),10.36(1H,s);IR 1682cm-1;MS(ESI)m/z261/263(M+H)+。
分析C15H13ClO2計算值C69.10,H5.03實測值C69.13,H4.73.
4,4″-二甲氧基-2,2″-二甲基-1,1′3′,1″-三聯(lián)苯基-4′-甲醛0.56g(12%)無色;1H NMR(DMSO-d6)δ2.10(3H,s),2.29(3H,s),3.78(3H,s),3.80(3H,s),6.85-6.88(2H,m),6.91(1H,d,J=2.38Hz),6.95(1H,d,J=2.38Hz),7.18(1H,d,J=8.32Hz),7.24-7.25(2H,m),7.52(1H,dd,J=7.74Hz,J=1.78Hz),7.95(1H,d,J=8.33Hz),9.68(1H,s);IR 1679cm~1;MS(ESI)fnlz347(M+H)+。
分析C23H22O3計算值C79.74,H6.40實測值C79.25,H6.05.
實施例283-氯-4′-羥基-2′-甲基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛3-氯-4′-甲氧基-2′-甲基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛(1.0g,3.84mmol)和吡啶HCl(6g)在密封管內(nèi)在195℃下加熱同時攪拌1小時。該反應(yīng)混合物冷卻至室溫且與2N HCl溶液和乙酸乙酯攪拌。分離有機層且水層用乙酸乙酯(x2)萃取。合并的有機層用鹽水洗滌,硫酸鈉干燥,過濾和蒸發(fā)溶劑得到(1g)深綠色固體。該產(chǎn)物無需進一步純化就可以使用。分析樣本通過HPLC純化得到白色固體;mp125-127℃;1H NMR(DMSO-d6)δ2.21(3H,s),6.68-6.72(2H,m),7.11(1H,d,J=8.15Hz),7.47(1H,d,J=7.89Hz),7.55(1H,d,J=1.48Hz),7.89(1H,d,J=7.98Hz),9.62(1H,s),10.2=35(1H,s);MS(ESI)m/z245/247(M-H)-,247/249(M+H)+。
分析C14H11ClO2計算值C68.16,H4.49實測值C67.63,H4.43.
實施例294′-羥基-3-甲基[1,1′-聯(lián)苯]-4-甲醛肟4′-羥基-3-甲基[1,1’-聯(lián)苯]-4-甲醛(310mg,1.46mmol)、羥胺鹽酸鹽(203mg,2.92mmol)和吡啶(236ul,2.92mmol)在15mL絕對甲醇中的混和物回流2.5小時。減壓下除去溶劑且將該混合物溶解在乙酸乙酯和水中,用乙酸乙酯(x3)萃取,用鹽水洗滌,硫酸鈉干燥,和過濾。蒸發(fā)溶劑且通過重結(jié)晶純化(乙酸乙酯,丙酮和己烷)得到177mg(53%)的標(biāo)題化合物,其為黃色固體mp 195-197℃;1HNMR(DMSO-d6)δ2.43(3H,s),6.84(2H,d,J=8.48Hz),7.42-7.45(2H,m),7.52(2H,d,J=8.51Hz),7.66(1H,d,J=8.00Hz),8.32(1H,s),9.60(1H,s),11.25(1H,s);13C NMR(DMSO-d6)δ19.62,115.60,123.40,126.60,127.56,127.99,129.05,130.03,136.34,140.43,146.80,157.24;MS(ESI)m/z 226(M-H)-,228(M+H)+。
分析C14H13NO2計算值C73.99,H5.77,N6.16實測值C73.81,H5.75,N6.04.
實施例304′-羥基[1,1′-聯(lián)苯]-4-甲醛肟本標(biāo)題化合物通過4′-羥基[1,1’-聯(lián)苯]-4-甲醛(1.03mmol)與羥胺鹽酸鹽(140mg,2mmol)按照方法C反應(yīng)得到193mg(79%,共2步)的黃色固體mp207-210℃;1H NMR(DMSO-d6)δ6.85(2H,d,J=8.37Hz),7.53(2H,d,J=8.39Hz),7.62(4H,s),8.15(1H,s),9.62(1H,s),11.21(1H,s);MS(ESI)m/z 212(M-H)-。
分析C13H11NO2計算值C73.23,H5.20,N6.57實測值C72.78,H5.41,N6.38.
實施例313-氯-4′-羥基[1,1′-聯(lián)苯]-4-甲醛肟方法E將四丁基氟化銨(1.29mL的1.0M四氫呋喃溶液,1.29mmol)加入到4′-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-3-氯[1,1’-聯(lián)苯]-4-甲醛肟(1.17mmol)在10mL四氫呋喃中的溶液內(nèi)。該混合物在室溫下攪拌10分鐘,隨后傾入乙酸乙酯和水。分離得到的層且水層用乙酸乙酯(3x)萃取。合并的有機層用鹽水洗滌,硫酸鈉干燥,過濾和真空下除去溶劑。通過硅膠色譜純化(20%-30%乙酸乙酯-己烷)得到0.186mg(64%)的標(biāo)題化合物,其為黃色固體mp 187-189℃;1HNMR(DMSO-d6)δ6.86(2H,d,J=8.55Hz),7.56-7.63(3H,m),7.71(1H,d,J=1.60Hz),7.84(1H,d,J=8.26Hz),8.36(1H,s),9.75(1H,s),11.66(1H,s);MS(ESI)m/z 246(M-H)-,248(M+H)+。
分析C13H10ClNO2計算值C63.04,H4.07,N5.66實測值C62.96,H4.10,N5.42.
實施例322-氟-4′-羥基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛肟本標(biāo)題化合物通過4′-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-氟-[1,1′聯(lián)苯]-4-甲醛肟(1.02mmol)與四丁基氟化銨(1.12mL的1.0M四氫呋喃溶液,1.12mmol)按照方法E反應(yīng)得到198mg(84%)的白色固體mp178-180℃;1H NMR(DMSO-d6)δ6.84-6.89(2H,m),7.39-5.54(5H,m),8.17(1H,s),9.71(1H,s),11.43(1H,s);MS(ESI)m/z 230(M-H)-,232(M+H)+。
分析C13H10FNO2計算值C67.53,H4.36,N6.06實測值C67.13,H4.11,N6.00.
實施例333-氟-4′-羥基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛肟本標(biāo)題化合物通過3-氟-4′-羥基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛(154mg,0.713mmol)與羥胺鹽酸鹽(99mg,1.43mmol)按照方法C反應(yīng)得到156mg(95%)的黃色固體mp181-183℃;1H NMR(DMSO-d6)δ6.84-6.87(2H,m),7.48-7.53(2H,m),7.57-7.60(2H,m),7.76(1H,t,J=8.14Hz),8.22(1H,s),9.74(1H,s),11.56(1H,s);MS(ESI)m/z230(M-H)-,232(M+H)+.
分析C13H10FNO2計算值C67.53,H4.36,N6.06實測值C68.10,H4.28,N6.01.
實施例342-氯-4′-羥基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛肟本標(biāo)題化合物通過2′-氯-4′-(二溴甲基)-1,1′-聯(lián)苯-4-酚(270mg,0.722mmol)與羥胺鹽酸鹽(185mg,2.66mmol)按照方法C反應(yīng)得到160mg(90%)的白色固體mp178-179℃;1H NMR(DMSO-d6)δ6.85(2H,d,J=8.54Hz),7.28(2H,d,J=8.51Hz),7.39(1H,d,J=7.98Hz),7.60(1H,dd,J=7.65Hz,J=1.42Hz),7.72(1H,d,J=1.34Hz),8.18(1H,s),9.67(1H,s),11.45(1H,s);MS(ESI)m/z 246/248(M-H)-。
分析C13H10ClNO2計算值C63.04,H4.07,N5.66實測值C63.07,H3.99,N5.67.
實施例354′-羥基-3-甲氧基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛肟本標(biāo)題化合物通過4′-羥基-3-甲氧基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛(225mg,0.986mmol)與羥胺鹽酸鹽(137mg,1.97mmol)按照方法C反應(yīng)得到210mg(88%)的黃色固體mp 228-230℃;1H NMR(DMSO-d6)δ3.91(3H,s),6.85(2H,d,J=8.29Hz),7.18(1H,d,J=8.08Hz),7.21(1H,s),7.56(2H,d,J=8.59Hz),7.68(1H,d,J=7.98Hz),8.28(1H,s),9.63(1H,s),11.19(1H,s);MS(ESI)m/z 242(M-H)-,244(M+H)+。
分析C14H13NO3計算值C69.12,H5.39,N5.76實測值C68.87,H5.29,N5.64.
實施例36
4′-羥基-2-甲基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛肟本標(biāo)題化合物通過4′-羥基-2-甲基1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛(350mg,1.65mmol)與羥胺鹽酸鹽(230mg,3.30mmol)按照方法C反應(yīng)得到360mg(96%)的白色固體mp169-171℃;1H NMR(DMSO-d6)δ2.25(3H,s),6.82(2H,d,J=8.52Hz),7.16(2H,d,J=8.45Hz),7.18(1H,d,J=7.84Hz),7.44(1H,d,J=7.93Hz),7.47(1H,s),8.11(1H,s),9.52(1H,s),11.19(1H,s);MS(ESI)m/z 226(M-H)-,228(M+H)+。
分析C14H13NO2計算值C73.99,H5.77,N6.16實測值C73.72,H5.63,N6.37.
實施例373-氯-3′-氟-4′-羥基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛肟本標(biāo)題化合物通過3-氯-3′-氟-4′-羥基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛(1.52mmol)與羥胺鹽酸鹽(233mg,3.34mmol)按照方法C反應(yīng)得到260mg(66%)的黃色固體mp198-200℃;1H NMR(DMSO-d6)δ7.03(1H,t,J=8.79Hz),7.41-7.43(1H,m),7.60(1H,dd,J=12.91Hz,J=2.20Hz),7.64-7.66(1H,m),7.77(1H,d,J=1.92Hz),7.84(1H,d,J=8.24Hz),8.36(1H,s),10.16(1H,bs),11.68(1H,bs);MS(ESI)m/z 264/266(M-H)-,266/268(M+H)+。
分析C13H9ClFNO2計算值C58.77,H3.41,N5.27實測值C58.67,H3.65,N4.99.
實施例383-氯-3′,5′-二氟-4′-羥基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛肟本標(biāo)題化合物通過3-氯-3′,5′-二氟-4′-羥基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛(200mg,0.746mmol)與羥胺鹽酸鹽(156mg,2.24mmol)按照方法C反應(yīng)得到100mg(47%)的白色固體mp216-219℃;1H NMR(DMSO-d6)δ7.54(2H,d,J=8.51Hz),7.70(1H,d,J=7.97Hz),7.84-7.86(2H,m),8.37(1H,s),10.52(1H,s),11.74(1H,s);MS(ESI)m/z282/284(M-H)-,284/286(M+H)+。
分析C13H8ClF2NO2計算值C55.05,H2.84,N4.94實測值C54.96,H3.02,N4.75.
實施例393-氯-4′-羥基-2′-甲基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛肟本標(biāo)題化合物通過3-氯-4′-羥基-2′-甲基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛(500mg,2.03mmol)與羥胺鹽酸鹽(425mg,6.10mmol)在無水四氫呋喃(50mL)和甲醇(20mL)中按照方法C反應(yīng)得到350mg(57%共2步)的白色固體mp169-171℃;1H NMR(DMSO-d6)δ2.19(3H,s),6.65-6.70(2H,m),7.06(1H,d,J=8.14Hz),7.31(1H,d,J=8.05Hz),7.41(1H,d,J=1.40Hz),7.83(1H,d,J=8.08Hz),8.38(1H,s),9.51(1H,s),11.69(1H,s);MS(ESI)m/z 260/262(M-H)-,262/264(M+H)+。
分析C14H12ClNO2計算值C64.25;H4.62;N5.35實測值C63.87;H4.43;N5.31實施例40(2,6-二氯-4-甲氧基-苯基)-甲醇3,5-二氯苯甲醚(16.;39g,92.59mmol)、HCl(250mL的濃溶液)和硫酸(2.5mL的濃溶液)在60℃下攪拌過夜。使該混合物冷卻至室溫且除去有機層。水層用二氯甲烷(2×100mL)萃取。合并的有機層用水洗滌且通過蒸發(fā)除去溶劑。向殘余油中加入NaOH(180mL的1N溶液)和二惡烷(85mL)。將該混合物攪拌回流3小時且冷卻至室溫。除去有機層且水層用二氯甲烷(3×100mL)萃取。合并的有機層用水洗滌,用鹽水洗滌,硫酸鈉干燥和過濾。殘余物在硅膠上純化(90%己烷-10%乙酸乙酯)得到5.82g(30%)的標(biāo)題化合物,其為白色固體mp71-72℃;IHNMR(CDCl3)81.88(1H,s),3.73(3H,s),4.81(2H,s),6.81(2H,s);MS(EI)m/z206/208/210(M+)。
分析C8H8Cl2O2計算值C46.41 H3.89
實測值C46.38 H3.69.
實施例412,6-二氯-4-甲氧基-苯甲醛將(2,6-二氯-4-甲氧基-苯基)-甲醇(5.69g,27.49mmol)和MnO2(15g)在苯(100mL)中的混懸液利用迪安-斯達克榻分水器攪拌回流過夜。將該混懸液冷卻至室溫,經(jīng)硅藻土過濾并且通過蒸發(fā)除去溶劑得到4.69g(83%)的粗白色固體。通過由甲醇重結(jié)晶得到分析樣本,獲得白色針狀晶體mp104-106℃;1H NMR(DMSO-d6)δ3.90(3H,s),7.21(2H,s),10.29(1H,s);MS(EI)m/z 204/206/218(M+)。
分析C8H6Cl2O2計算值C46.86 H2.
實測值C46.67 H2.89.
實施例422,6-二氯-4-羥基-苯甲醛向2,6-二氯-4-甲氧基-苯甲醛(3.44g,16.8mmol)在二氯甲烷(120mL)中的溶液內(nèi)0℃下緩慢加入三溴化硼(42mL的1N二氯甲烷溶液,42mmol)。使該反應(yīng)升至室溫且攪拌過夜,并且用飽和碳酸氫鈉溶液(250mL)猝滅。所得混和物用乙酸乙酯(3×200mL)萃取。合并的有機層用水洗滌,用鹽水洗滌,硫酸鈉干燥和過濾。通過蒸發(fā)除去溶劑和殘余物在硅膠上純化(70%己烷s-30%乙酸乙酯)得到2.19g(68%)粉色固體。用乙酸乙酯-己烷研制得到標(biāo)題化合物的分析樣本,其為白色固體mp214-217℃;1H NMR(DMSO-d6)δ6.95(2H,s),10.26(1H,s),11.44(1H,s);MS(EI)m/z 189.8/191.8/193.8(M+)。
分析C7H4ClO2計算值C44.02 H2.11實測值C44.08 H2.07.
實施例433,5-二氯-4-甲?;?苯基三氟甲磺酸酯本標(biāo)題化合物通過2,6-二氯-4-羥基-苯甲醛(2.35g,12.3mmol)與三氟甲磺酸酐(4.51g,16.0mmol)按照方法E反應(yīng)得到3.45g(87%)的澄清黃色油。該油的TLC分析表示放置后似乎分解為起始的酚。
1H NMR(DMSO-d6)δ8.03(2H,s),10.31(1H,s)。
實施例443,5-二氯-4′羥基-聯(lián)苯-4-甲醛本標(biāo)題化合物通過與3,5-二氯-4-甲?;?苯基三氟甲磺酸酯(0.73g,2.26mmol)與4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基苯基硼酸(0.80g,3.2mmol)按照方法C反應(yīng)得到0.30g(50%)的黃色固體mp178-180℃;1H NMR(DMSO-d6)δ6.88(2H,d,J=8.84Hz),7.72(2H,d,J=8.71Hz),7.84(2H,s),9.95(1H,s),10.38(1H,s);MS(EI)m/z266.0/268.0/270.0(M+)。
分析C13H8Cl2O20.5H2O計算值C56.55 H3.29實測值C56.36 H2.90.
實施例452,3-二氯-4-甲氧基苯甲醛向2,3-二氯苯甲醚(10.00g,56.6mmol)在無水二氯甲烷(45ml)中的溶液內(nèi)快速加入TiCl4(10.5ml,96.1mmol)。此后緩慢加入α,α′-二氯甲基甲基醚(5.1ml,56.6mmol)且使內(nèi)溫保持在15℃-20℃之間。將該混和物在室溫攪拌5小時,緩慢傾入碎冰中,用二氯甲烷(3x)萃取,用飽和碳酸氫鈉洗滌直至pH=7為止,此后用鹽水洗滌。有機層用無水硫酸鈉干燥,濃縮得到11.34g(98%)of白色固體。通過反相制備HPLC獲得分析樣本mp112-113℃;1H NMR(CDCl3)δ4.01(3H,s),6.97(1H,d,J=8.77Hz),7.90(1H,d,J=8.82Hz),10.36(1H,s);MS(ESI)m/z 205/207/209(M+H)+。
分析C8H6Cl2O2計算值C46.86 H2.95;實測值C46.92 H2.70.
實施例46
2,3-二氯-4-羥基苯甲醛本標(biāo)題化合物通過2,3-二氯-4-甲氧基苯甲醛(10g,49mmol)與三溴化硼(147ml的1N CH2Cl2溶液,147mmol)按照方法D反應(yīng)得到11.3g深灰色固體,通過1H-NMR簡單其主要是所述的產(chǎn)物。用.含30%CHCl3的己烷研制得到3.6g的灰色固體,其為純產(chǎn)物。通過反相制備HPLC得到分析樣本,其為白色固體mp176-178℃;1H NMR(DMSO-d6)δ7.10(1H,d,J=8.68Hz),7.74(1H,d,J=8.67Hz),10.16(1H,s),11.95(1H,s);MS(ESI)m/z 189/191/193(M-H)-,193/191/195(M+H)+。
分析C7H4Cl2O2計算值C44.02 H2.11實測值C43.87 H1.67.
實施例47三氟-甲磺酸2,3-二氯-4-甲?;?苯基酯本標(biāo)題化合物通過2,3-二氯-4-羥基苯甲醛(2.50g,13.2mmol)與三氟甲磺酸酐(2.88ml,4.80g,17.1mmol)按照實施例43反應(yīng)得到3.69g(82%)的褐色晶體,其直接用于下步無需純化。通過硅膠色譜得到分析樣本,其為白色固體(5%乙酸乙酯-己烷)mp44-45℃;1HNMR(DMSO-d6)δ7.88(1H,d,J=8.74Hz),8.02(1H,d,J=8.81Hz),10.28(1H,s);MS(EI)m/z 322/324/326(M)+。
分析C8H3Cl2F3O4S計算值C29.74 H0.94;實測值C30.19 H0.86.
實施例48-50三氟-甲磺酸2,3-二氯-4-甲?;?苯基酯(1.39g,4.33mmol)與硼酸21(1.20g,4.76mmol)按照方法B反應(yīng)生成下列三種化合物2,3-二氯-4′-羥基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛(48)310mg(27%)的白色固體mp 172-174℃;1H NMR(DMSO-d6)δ6.86-6.91(2H,m),7.32-7.35(2H,m),7.53(1H,dd,J=7.94Hz,J=0.45Hz),7.85(1H,d,J=8.01Hz),9.85(1H,s),10.35(1H,s);MS(ESI)m/z 265/267/269(M-H)-。
分析C13H8Cl2O2計算值C58.46 H3.02;實測值C57.75 H2.82.
2-氯-4′-羥基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛(49)。
90mg(9%)的白色固體mp114-116℃;1H NMR(DMSO-d6)δ6.85-6.90(2H,m),7.32-7.36(2H,m),7.61(1H,d,J=7.87Hz),7.89(1H,dd,J=7.90Hz,J=1.55Hz),8.05(1H,d,J=1.52Hz),9.79(1H,s),10.02(1H,s);MS(ESI)mlz 231/233(M-H)-,233/235(M+H)+。
分析C13H9ClO2計算值C67.11 H3.90實測值C67.44 H3.872′-二氯-4,4″-二羥基-1,1′3′,1″-三聯(lián)苯-4′-甲醛(50)。
130mg(9%)的米色固體mp223-223℃;1H NMR(DMSO-d6)δ6.85-6.88(2H,m),6.88-6.91(2H,m),7.17-7.20(2H,m),7.31-7.35(2H,m),7.52(1H,dd,J=7.96Hz,J=0.89Hz),7.84(1H,d,J=8.07Hz),9.55(1H,d,J=0.77Hz),9.73(1H,s),9.74(1H,s);MS(ESI)m/z 323/325(M-H)-,325/327(M+H)+。
分析C19H13ClO3計算值C70.27 H4.03實測值C69.80 H3.88實施例512,3-二氯-3′-氟-4′-甲氧基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛本標(biāo)題化合物通過三氟-甲磺酸2,3-二氯-4-甲?;?苯基酯(1.90g,5.90mmol)與21(1.30g,7.67mmol)按照方法B反應(yīng)得到0.84g(47%)的白色固體mp160-164℃;1H NMR(DMDO-d6)δ3.90(3H,m),7.28-7.30(2H,m),7.41-7.43(1H,m),7.57(1H,d,J=8.30Hz),7.87(1H,d,J=7.81Hz),10.35(1H,s);MS(EI)僅298/300/302(M)+。
分析C14H8Cl2FO2計算值C56.21 H3.03實測值C57.55 H2.97.
實施例52和532,3-二氯-3′-氟-4′-甲氧基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛(0.72g,2.42mmol)與三溴化硼(7.25ml的1N CH2Cl2反應(yīng),7.25mmol)按照方法E反應(yīng)生成下列兩種化合物2′,3′-二氯-4′-(二溴甲基)-3-氟-1,1′-聯(lián)苯-4-o1(52)。
130mg(13%)的灰色稠漿1H NMR(DMSO-d6)δ7.04(1H,t,J=8.54Hz),7.11(1H,dd,J=8.41Hz,J=1.97Hz),7.32(1H,dd,J=12.18Hz,J=1.94Hz),7.51(1H,d,J=8.27Hz),7.54(1H,s),7.95(1H,d,J=8.23Hz),10.23(1H,s);MS(ESI)m/z 425/427/429(M-H)-。
分析C13H7Br2Cl2FO計算值C36.40 H1.65實測值C37.60 H1.69.
2,3-二氯-3′-氟-4′-羥基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛(53)。
140mg(20%)的白色固體mp170-171℃;1H NMR(DMSO-d6)δ7.07(1H,t,J=8.60Hz),7.15(1H,dd,J=8.40Hz,J=1.79Hz),7.35(1H,dd,J=12.15Hz,J=1.87Hz),7.56(1H,d,J=7.97Hz),7.86(1H,d,J=8.09Hz),10.31(1H,s),10.35(1H,s);MS(ESI)m/z 283/285/287(M-H)-。
分析C13H7Cl2FO2計算值C54.77 H2.47實測值C54.93 H2.18.
實施例543,5-二氯-4′-羥基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛肟本標(biāo)題化合物通過3,5-二氯-4′-羥基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛(170mg,0.637mmol)與羥胺鹽酸鹽(89mg,1.27mmol)按照方法F反應(yīng)得到160mg(89%)的白色固體mp183-186℃;1H NMR(DMSO-d6)δ6.86(2H,d,J=8.79Hz),7.63(2H,d,J=8.79Hz),7.76(2H,s),8.25(1H,s),9.81(1H,s),11.78(1H,s);MS(ESI)m/z 280/282/284(M-H)-,282/284/286(M+H)+。
實施例553,5-二氯-3′-氟-4′-羥基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛肟本標(biāo)題化合物通過3,5-二氯-3′-氟-4′-羥基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛(290mg,mmol)與羥胺鹽酸鹽(140mg,1.27mmol)按照方法F反應(yīng)得到260mg(85%)的白色固體mp185-190℃;1H NMR(DMSO-d6)δ7.03(1H,t,J=8.86Hz),7.46-7.49(1H,m),7.68(1H,dd,J=12.74Hz,J=2.26Hz),7.82(2H,s),8.25(1H,s),10.24(1H,s),11.80(1H,s);MS(ESI)m/z 298/300/302(M-H)-,300/302/304(M+H)+。
分析C13H8Cl2FNO20.2H2O計算值C51.41 H2.79 N4.61實測值C51.70 H2.75 N4.21.
實施例562,3-二氯-4′-羥基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛肟本標(biāo)題化合物通過48(140mg,0.526mmol)與羥胺鹽酸鹽(110mg,1.58mmol)按照方法F反應(yīng)得到148mg(100%)的米色固體mp208-210℃;1H NMR(DMSO-d6)δ6.84-6.87(2H,m),7.26-7.29(2H,m),7.36(1H,d,J=7.94Hz).7.80(1H,d,J=8.20Hz),8.41(1H,s),9.72(1H,s),11.83(1H,s);MS(ESI)m/z280/282/284(M-H)-,282/284/286(M+H)+。
分析C13H8Cl2NO2計算值C55.35 H3.22 N4.96實測值C55.78 H3.59 N4.44.
實施例5752(85mg,0.20mmol)與羥胺鹽酸鹽(376mg,5.39mmol)和吡啶(0.43ml,5.34mmol)按照方法C反應(yīng)8天生成下列兩種化合物2,3-二氯-3′-氟-4′-羥基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛肟(57)。
17.6mg(30%)的白色固體mp225-227℃;1H NMR(DMSO-d6)δ7.04(1H,t,J=8.54Hz),7.10(1H,dd,J=8.35Hz,J=1.88Hz),7.28(1H,dd,J=12.22Hz,J=2.01Hz),7.39(1H,d,J=8.14Hz),7.81(1H,d,J=8.15Hz),8.41(1H,s),10.18(1H,s),11.87(1H,s);MS(ESI)n/z 298/300/302(M-H)-,300/302/304(M+H)+。
分析C13H8Cl2FNO20.09TFA計算值C51.00 H2.63 N4.51實測值C50.97 H2.37 N4.33.
2,3-二氯-3′-氟-4′-羥基-1,1’-聯(lián)苯-4-羧酸甲酯16.9mg(27%)的白色固體mp152-154℃;1H NMR(DMSO-d6)δ3.90(3H,s),7.05(1H,t,J=8.54Hz),7.11(1H,dd,J=8.41H,J=1.55Hz),7.31(1H,dd,J=12.16Hz,J=1.68Hz),7.47(1H,d,J=8.02Hz),7.76(1H,d,J=8.64Hz);MS(ESI)m/z 313/315/317(M+H)+。
分析C14H9Cl2FO3計算值C53.36 H2.88實測值C51.94 H2.54.
實施例58表1.4′-羥基-聯(lián)苯-甲醛肟衍生物
在標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實驗方法中獲得的結(jié)果證實,本發(fā)明的化合物是雌激素化合物,一些化合物對于ER具有強烈的優(yōu)選親和力β受體。本發(fā)明的化合物從對ERβ具有比對ERα高的優(yōu)選親和力直至對兩種的受體具有等同的親和力。所以,本發(fā)明的化合物將至少部分基于其受體親和力選擇性能力跨越一個活性范圍。此外,由于各種新的受體配體復(fù)合物是獨特的,因而其與多種共調(diào)節(jié)蛋白的相互作用也是獨特的,本發(fā)明的化合物將依賴它們所處的細胞背景表現(xiàn)處不同的調(diào)控行為。譬如,在某些細胞類型中,化合物可以充當(dāng)雌激素激動劑,而在其他組織內(nèi)充當(dāng)拮抗劑。具有這樣活性的化合物有時被稱作SERMs(選擇性雌激素受體調(diào)制劑)。然而,與許多雌激素不同,多種SERMs不會子宮濕重的增加。這些化合物在子宮內(nèi)是抗雌激素的并且可以完全拮抗雌激素激動劑在子宮組織中的營養(yǎng)作用。然而,這些化合物在骨骼、心血管和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中成為雌激素激動劑。由于這些化合物的組織選擇性本質(zhì),它們有效治療或預(yù)防哺乳動物的與雌激素缺乏(在某些組織如骨骼或心血管中)或雌激素的過量(在子宮或乳腺中)引起或有關(guān)的疾病狀態(tài)或綜合癥。
除上述細胞特異性調(diào)控作用以外,本發(fā)明的化合物還具有成為一種受體型的激動劑而對另一種受體型是拮抗劑的潛在性。譬如,已經(jīng)證實所述的化合物可以是ERβ的拮抗劑,同時是ERα的激動劑(Meyers,Marvin J.;Sun,Jun;Carlson,Kathryn E.;Katzenellenbogen,BenitaS.;Katzenellenbogen,John A..R Med.Chez.(1999),42(13),2456-2468)。此類ERSAA(雌激素受體選擇性激動劑拮抗劑)的活性用于在藥理學(xué)上區(qū)分這個系列的化合物的雌激素活性。
標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實驗方法很容易用來測定指定試驗化合物的活性性能。下列實施例簡單概括了數(shù)種代表性試驗方法。用于SERMs標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)實驗方法公開在美國專利4,418,068和5,998,402。
實施例59大鼠子宮營養(yǎng)/抗子宮營養(yǎng)試驗方法所述化合物的雌激素和抗雌激素性質(zhì)可以在未成熟大鼠子宮營養(yǎng)實驗(4天)中測定,該實驗早于由L.J.Black和R.L.Goode公開在LifeSciences,26,1453(1980)中。未成熟Sprague Dawley大鼠(雌性,18天齡)分6組測試。動物通過每天ip注射10uG化合物、100uG化合物(100uG化合物+1uG17β-雌二醇)進行處理以檢查抗雌激素性,和1uG 17β-雌二醇,并且用50%DMSO/50%鹽水作為注射載體。在第4天,通過CO2窒息法處死動物并取出子宮和抽提過量脂質(zhì),除去所有流體并測定濕重。將一個洞角的小切片提交給組織學(xué)分析,并且剩余物用來分離全RNA,從而評估補體成分3基因表達。
實施例606周卵巢切除的大鼠試驗方法-骨骼和心臟保護作用從Taconic Farm獲得手術(shù)后1天的卵巢切除的(ovx)或假性卵巢切除的(sham ovx)的雌性Sprague Dawley CD大鼠(體重范圍240-275g)。將它們室內(nèi)圈養(yǎng)在3或4大鼠/籠中,室內(nèi)時間表為12/12(光照/黑暗)并且隨意供給食物(Purina 5K96C大鼠飼料)和水。所有研究中動物在到達后第1天開始進行處理且每周給藥7天共6周。各研究中一組的年齡匹配假性手術(shù)的大鼠不接受任何處理,它們用作完整、雌激素飽滿的對照組。
所有處理是在含1%吐溫80的普通鹽水中配制為預(yù)定的濃度,使該處理體積為0.1mL/100g體重。將17β-雌二醇溶解在玉米油(20μg/mL)中并且皮下給藥,0.1mL/只大鼠。所有劑量以三周間隔根據(jù)組的平均體重測量進行調(diào)整。
處理開始后5周和研究結(jié)束前1周時,評估各大鼠的骨礦物質(zhì)密度(BMD)。用XCT-960M(pQCT;Stratec Medizintechnik,Pforzheim,Germany)評估麻醉大鼠中脛骨近端的總和小梁密度。按照下列方法進行測量掃描之前15分鐘時,腹膜內(nèi)注射45mg/kg氯胺酮、8.5mg/kg噻拉嗪和1.5mg/kg乙酰丙嗪麻醉大鼠。
使右后爪穿過直徑為25mm的聚碳酸酯管并且將踝關(guān)節(jié)以90°和膝關(guān)節(jié)以180°輕扣在丙烯酸框架上。該聚碳酸酯管被固定島滑動平臺上,使其保持在與pQCT的穿孔垂直。調(diào)整該平臺使股骨的遠端和脛骨的近端處于掃描區(qū)域內(nèi)。進行長度為10mm和線分辨率為0.2mm進行二維跟蹤視圖。
在監(jiān)測器上顯示跟蹤視圖之后,定位在脛骨的近端。從距離該點3.4mm處開始pQCT掃描。pQCT掃描為1mm厚,具有0.140mm大小的voxel(三維象素),并且由穿過切片的145個投影組成。
該pQCT掃描完成厚,圖像顯示在監(jiān)測器上。描繪包括脛骨但排除股骨的感興趣區(qū)域。利用反復(fù)算法自動除去軟組織。剩余骨骼的密度(總密度)以mg/cm3報告。以同心螺旋方式剝離骨骼的外部55%的皮。剩余骨骼的密度(小梁密度)以mg/cm3報告。BMD評估以后,大鼠用二氧化碳窒息法處死且收集血液用于膽固醇測定。除去子宮且測定重量。用單向方差分析和Dunnet試驗比較統(tǒng)計。
實施例61MCF-7/ERE抗增殖試驗方法試驗化合物的儲備液(通常為0.1M)是在DMSO中制備且隨后用DMSO稀釋10-100倍以制成1或10mM的工作溶液。把該DMSO儲備液儲存在4℃(0.1M)或-20℃(<0.1M)中。用生長培養(yǎng)基使MCF-7細胞在1周內(nèi)傳代2次[D-MEM/F-12培養(yǎng)基,其中含有10%(v/v)熱滅活胎牛血清,1%(v/v)青霉素-鏈霉素,和2mM glutaMax-1]。該細胞保持在置于5%CO2/95%加濕空氣恒溫箱內(nèi)的排氣燒瓶內(nèi)和37℃下。處理之前1天,將該細胞與生長培養(yǎng)基一起以25,000/孔鋪板在96孔平板且在37℃下溫育過夜。
該細胞在37℃下C以50μl/孔的腺病毒5-ERE-tk-熒蟲素酶在試驗培養(yǎng)基[無酚紅D-MEM/F-12培養(yǎng)基,其中含有10%(v/v)熱滅活炭提胎牛血清,1%(v/v)青霉素-鏈霉素,2mM glutaMax-1,1mM丙酮酸鈉]中的1∶10稀釋液感染2小時。隨后孔用150uλ的試驗培養(yǎng)基洗滌1次。最后,該細胞在37℃下以8孔/處理和150uλ/孔的載體(<0.1%v/v DMSO)或在試驗培養(yǎng)基中稀釋≥1000倍的化合物處理24小時。
試驗化合物的初步篩選是以單一劑量的1μM完成,其單獨(激動模式)或與0.1nM 17β-雌二醇(EC8O;拮抗模式)組合進行。各96孔平板還包括一個載體對照組(0.1%v/v DMSO)和一個激動劑對照組(或0.1或1nM17β-雌二醇)。劑量-反應(yīng)試驗是采取激動模式和/或拮抗模式以從10-14至10-5M的對數(shù)(log)增量進行。根據(jù)這些劑量-反應(yīng)曲線,分別得到EC50和IC50值。各處理組值的最后孔含有5ui的3×10-5M ICI-182,780(10-6M終濃度)作為ER激動劑對照。
處理之后,該細胞在搖動器上用25μl/孔的1X細胞培養(yǎng)溶解試劑(Promega Corporation)溶解15分鐘。把該細胞溶解產(chǎn)物(20μl)轉(zhuǎn)移到96孔發(fā)光計平板上,并且和在MicroLumat LB 96 P發(fā)光計(EG & GBerthold)中用100μl/孔的熒蟲素酶底物(Promega Corporation)測定熒蟲素酶活性。在注射底物之前,對各孔進行1秒背景測量。注射底物后,1秒延遲后測定10秒的熒蟲素酶活性。將該數(shù)據(jù)從發(fā)光計中轉(zhuǎn)移到Macintosh個人電腦中且用JMP軟件(SAS Institute)分析;該程序減去從各孔的熒蟲素酶測量讀取的背景,并且隨后測定各處理的平均和標(biāo)準(zhǔn)偏差。
熒蟲素酶數(shù)據(jù)通過對數(shù)轉(zhuǎn)換,并且用Huber M-估計器向下-加權(quán)(down-weight)外偏轉(zhuǎn)換的觀察。JMP軟件用來根據(jù)單向ANOVA(Dunnett試驗)分析轉(zhuǎn)換和加權(quán)數(shù)據(jù)?;衔锾幚砼c激動模式重的載體對照結(jié)果對比,或者與拮抗模式中的陽性激動劑對照結(jié)果(0.1nM 17β-雌二醇)對比。對于初始單劑量試驗,如果化合物處理結(jié)果明顯不同于適當(dāng)?shù)膶φ?p<0.05),則結(jié)果報告為相對于17β-雌二醇對照計的百分比[即,((化合物-載體對照)/(17β-雌二醇對照-載體對照))×100]。JMP軟件還用于從非線性劑量-反應(yīng)曲線測定EC50和/或IC50值。
實施例62LDL氧化作用的抑制-抗氧化活性豬主動脈得自屠宰場,洗滌,轉(zhuǎn)運到冷凍的PBS中,并且收獲主動脈內(nèi)皮細胞。為了收獲該細胞,束結(jié)出主動脈的脈間管且夾住主動脈的一端。將新鮮的、滅菌過濾的0.2%膠原酶(Sigma TypeI)置于脈管中并且將脈管的另一端夾住形成封閉體系。主動脈在37℃下溫育15-20分鐘,此后收集膠原酶溶液且在2000xg下離心5分鐘。將各沉淀團懸浮在7mL的內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基中,該培養(yǎng)基由無酚紅DMEM/Ham′s F12培養(yǎng)基補加炭提FBS(5%),NuSerum(5%),L-谷酰胺(4mM),青霉素-鏈霉素(1000U/ml,100,μg/ml)和慶大霉素(75μg/ml)組成,接種在100mm培養(yǎng)皿中且在37℃和5%CO2下溫育。20分鐘后,該細胞用PBS洗滌且加入新鮮培養(yǎng)基,在24小時時重復(fù)該操作。細胞在約1周后融合。內(nèi)皮細胞按慣例每周加入2次,并且當(dāng)融合時,用胰蛋白酶作用且以1∶7比例接種。使12.5μg/mL LDL的細胞介導(dǎo)氧化作用是在所述化合物的存在下在37℃下進行(5μM)4小時用于評估。結(jié)果表示為通過TBARS(硫代巴比妥酸反應(yīng)物質(zhì))方法測定的對氧化過程的抑制百分率,該方法用來分析游離的醛類化合物(Yagi K.,Biochem Med 15212-216(1976))。
實施例63D12下丘腦細胞試驗方法D12大鼠下丘腦細胞從RCF17母體細胞系次級克隆并冷凍儲存。它們一般在DMEM∶F12(1∶1)、glutaMAX-1(2mM)、青霉素(100U/ml)-鏈霉素(100mg/ml)和10%胎牛血清(FBS)中生長。將該細胞平板在含有2-10%炭提FBS的無酚紅培養(yǎng)基(DMEM∶F12,glutaMAX,青霉素-鏈霉素)以次級融合密度(1-4×106細胞/150mm皿)鋪板。24小時后向該細胞在再次加入含有2%抽提血清的培養(yǎng)基。對于激動活性的試驗,細胞用10nM 17β-雌二醇或不同劑量的試驗化合物(1mM或1μM-1mM的范圍)處理。對于拮抗活性的試驗,該細胞用0.1nM 17β-雌二醇在存在或不存在不同劑量(100μM-1mM)的試驗化合物條件下處理。對照皿也用DMSO處理作為陰性對照。加入激素后48小時,進行細胞溶解和結(jié)合試驗方法。
各結(jié)合試驗方法,將100-150mg蛋白質(zhì)與10nM3H-R5020+100倍過量的R5020在150ml體積中溫育。在96孔平板中制備一式三份反應(yīng)(三個反應(yīng)存在R5020,三個反應(yīng)不存在R5020)。首先加入蛋白質(zhì)提取物,隨后加入3H-R5020或3H-R5020+100x未標(biāo)記R5020。該反應(yīng)在室溫下進行1-2小時。通過加入100ml在TE pH7.4中的冷5%炭(Norit SX-4)、0.5%葡聚糖69K(Pharmacia)終止該反應(yīng)。室溫下5分鐘后,結(jié)合和未結(jié)合的配體通過離心分離(5分鐘,1000RCF,4℃)。除去上清液(-150ml)且轉(zhuǎn)移到閃爍瓶內(nèi)。此后加入閃爍液(Beckman Ready Protein+),在閃爍計數(shù)器中計數(shù)樣本1分鐘。
實施例64CNS視前區(qū)中的孕酮受體將六十(60)天齡雌性Sprague-Dawley大鼠切除卵巢。將動物圈養(yǎng)在動物養(yǎng)護設(shè)備中同時采取12小時光照、12小時黑暗的光周期并且動物隨意獲得自來水和鼠科飼料。
將卵巢切除的動物隨后分組,這些組被注射載體(50%DMSO,40%PBS,10%乙醇載體)、17β-雌二醇(200ng/kg)或被試驗的化合物。其他動物在注射17β-雌二醇之前1小時注射試驗化合物。以評估這種化合物的拮抗性質(zhì)。s.c.注射后6小時,用致死劑量的CO2處死動物且收集和冷凍它們的腦部。
在-16℃的低溫恒溫箱上切取從動物收集的組織并收集在硅烷涂層的玻片。封固切片的玻片隨后在保持42℃的玻片加熱器上干燥并儲存在-80℃的去濕玻片箱內(nèi)。加工之前,令去濕玻片箱緩慢升至室溫(-20℃下12-16小時;4℃下2小時;室溫下1小時)從而消除玻片上的凝聚形成,并且由此減少組織和RNA降解。干燥玻片負載在金屬固定架上,此后在4%低聚甲醛(pH9.0)中后固定5分鐘并按照上述方法處理。
使含有大鼠PRcDNA 9的815bp片段(配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域)的質(zhì)粒線性化并用來產(chǎn)生S 35-UTP標(biāo)記探針,它與一部分的大鼠PRmRNA互補。加工的固定切片的玻片與20ml的雜交混和物雜交,該雜交混和物含有核探針(4-6×106DPM/玻片)和50%甲酰胺并在55℃加濕房內(nèi)溫育過夜。清晨,將玻片置于浸漬在2×SSC(0.15MNaCl,0.015M檸檬酸鈉;pH7.0)/10mM DTT中的金屬框架上。將框架全部轉(zhuǎn)移到大容器中并用2×SSC/10mM DTT在RT下洗滌15分鐘同時輕輕攪拌。此后玻片在Rnase緩沖液37℃下洗滌30分鐘,37℃下用RNase A(2mg/ml)處理30分鐘,并且在室溫下1×SSC洗滌15分鐘。此后,玻片在65℃下0.1×SSC中洗滌(2×30分鐘)以便除去非特異性標(biāo)記,室溫下0.1×SSC漂洗15分鐘和用梯度系列的醇醋酸銨(70%,95%,和100%)脫水。將空氣干燥的玻片置于X射線膜對面達3天,隨后照像處理。將來自所有動物的玻片一起進行雜交,洗滌,暴露和照像處理以消除試驗中條件變化導(dǎo)致的差異。
實施例65大鼠熱潮紅-CNS效應(yīng)手術(shù)后得到卵巢切除的雌性、60天齡的Sprague-Dawley大鼠。手術(shù)至少在第一次處理之前8天實施。將動物在12小時光照/黑暗周期下分別圈養(yǎng)且隨意給予標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料和水。
每個研究中包括兩個對照組。劑量是基于mg/kg平均組體重在含10%DMSO的芝麻油(sc研究)中或在含1.0%吐溫80的鹽水(po研究)中制備。以0.01-10mg/kg平均組體重范圍的劑量給動物施用試驗化合物。各試驗中包括載體和乙炔雌二醇(EE)對照(0.1mg/kg,sc或0.3mg/kg,po)對照組。當(dāng)測試化合物的拮抗活性時,sc研究或po研究中EE分別以0.1或0.3mg/kg聯(lián)合給藥。施用該試驗化合物最多至測定尾皮膚溫度的當(dāng)天。
4天研究的累積周期之后,動物每天用感興趣的化合物處理1次。存在10只動物/處理組。化合物的施用或者通過向頸背中sc注射0.1ml或口服(po)0.5ml體積。處理第3天,皮下植入嗎啡小丸(75mg硫酸嗎啡)。處理的第5天,植入1或2各附加嗎啡小丸。第8天,給約半數(shù)的動物注射氯胺酮(80mg/kg,肌肉內(nèi))并且將與MacLab數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)(API Insturments,Milord,MA)連接的熱偶極輕扣在距尾根約1英寸的尾部。該系統(tǒng)允許連續(xù)測量尾部皮膚溫度。測量15分鐘基線溫度,此后sc施用納洛酮(1.0mg/kg)(0.2ml)以阻斷嗎啡的作用并在此后1小時時測定尾部皮膚溫度。第9天,給剩余的動物安裝裝置并按照相似方法分析。
實施例66隔離大鼠主動脈環(huán)的血管舒縮功能將Sprage-Dawley大鼠(240-260g)分為4組1.正常非卵巢切除(完整)的組2.卵巢切除(ovex)、載體處理的組
3.卵巢切除的17β-雌二醇處理(1mg/kg/天)的組4.用試驗化合物處理的卵巢切除的動物(即,1mg/kg/天)動物是在處理之前約3周被切除卵巢。各動物通過胃飼管接受1mg/kg/天的懸浮在含1%吐溫-80的蒸餾去離子水中的硫酸17β-硫酸雌二醇或試驗化合物。載體處理的動物接受適當(dāng)體積的藥物處理組中所用的載體。
通過吸入CO2處死和驅(qū)血法處死動物。迅速取出其胸廓主動脈且置于37℃生理溶液中,該溶液含有下列組合物(mM)NaCl(54.7),KCl(5.0),NaHCO3(25.0),MgCl22H2O(2.5),D-葡萄糖(11.8)和CaCl2(0.2),該溶液中吹入氣體CO2-O2,95%/5%,最終pH為7.4。除去外表面的外膜并將血管切為2-3mm寬的環(huán)。將環(huán)懸浮在10mL組織浴內(nèi)并且一端連接在浴池的底部,而另一端連接應(yīng)力傳感器將1克的休止張力置于所述的環(huán)。使環(huán)平衡1小時,獲得信號并分析。
平衡之后,暴露環(huán)以增加苯福林的濃度(10-8-10-4M)并且記錄張力。隨后用新鮮緩沖液漂洗浴池3次。沖刷后,向該組織浴中加入200mML-NAME且平衡30分鐘。此后重復(fù)苯福林濃度反應(yīng)曲線。
實施例67八臂徑向迷宮-認知增強作用使用達到時重量為200-250g的雄性Sprague-Dawley、CD大鼠(Charles River,Kingston,NY)。1周內(nèi),圈養(yǎng)大鼠,每籠4只,隨意獲取標(biāo)準(zhǔn)實驗飼料和水?;\養(yǎng)在集中室內(nèi),該室保持在22℃且具有12小時光照/黑暗周期且光照在6:00 AM時開始。習(xí)慣該設(shè)施后,將動物單獨籠養(yǎng)且保持在85%的自由進食重量。一旦達到穩(wěn)定重量,令大鼠適應(yīng)8臂徑向迷宮。
迷宮的結(jié)構(gòu)是改自Peele和Baron(Pharmacology,Biochemistry,和Behavior,29143-150,1988)。該迷宮高度升至75.5cm且由圓形區(qū)域組成,該圓形區(qū)域周圍是自中心徑向外延的8個臂,徑向臂彼此等距離。各個臂是長58cm×高13cm。每次任務(wù)開始之前用透明有機玻璃圓柱體隔擋以將動物圈在迷宮的中央部分。迷宮的每個臂安裝有三套與數(shù)據(jù)采集單元接口的光電池,該數(shù)據(jù)采集單元隨后與計算機相連。光電場用來追蹤大鼠在迷宮中的運動。丸粒喂食器位于各輻臂末端處飼料杯上方,在指定任務(wù)中輻臂的外部光電場杯第一次被激活時分發(fā)兩個45mg的巧克力粒。迷宮位于實驗室中并且黑白幾何張貼在各墻壁上以起到視覺提示的作用。在所有訓(xùn)練和試驗過程中,可聽見白噪音(~70db)。
訓(xùn)練過程由5個階段組成,各階段每天任務(wù)持續(xù)5或10分鐘。在將大鼠置于迷宮的中央部分時和取出圓柱體開始任務(wù)時的之間插入10秒的延遲。在第1階段中,將限制食物對的大鼠置于迷宮上10分鐘并且將45mg巧克力食物粒撒在迷宮的全部8個臂。第II階段,將各大鼠分別置于迷宮上長達10分鐘的周期,并且將食物粒自中間的光電池撒播到各徑臂的食物杯。第III階段中,將各大鼠置于迷宮上長達10分鐘的周期,并且將食物粒僅僅定位在各徑臂的食物杯中和四周。第IV階段中,允許各大鼠在10分鐘內(nèi)從各徑臂收集2個食物粒。重復(fù)進入到徑臂內(nèi)被視為錯誤。以這種方式每天訓(xùn)練大鼠直至它們獲得判斷表現(xiàn)并且在連續(xù)3天的訓(xùn)練中全部錯誤小于或等于2。全部習(xí)慣和訓(xùn)練時間約為3周。
試驗化合物在磷酸鹽緩沖鹽水中制備并給予1ml/kg的體積。東莨菪堿HBr(0.3mg/kg s.c.)充當(dāng)損害試劑,導(dǎo)致錯誤率增高(記憶的喪失)。在指定試驗的當(dāng)天在首次迷宮暴露之前30分鐘,試驗化合物經(jīng)腹膜內(nèi)與東莨菪堿同時給藥。
為了評估試驗化合物,設(shè)計一個重復(fù)測量的8×8平衡拉丁方,從而用最少量的動物獲得高的試驗效率。進行8次試驗任務(wù),每周2次,并且各任務(wù)中隨機化8個處理組(載體,東莨菪堿,3個劑量的試驗化合物與東莨菪堿組合)。各處理按照其他每個處理時間相同。所以,每次處理的殘余作用可以進行評價并從直接處理效應(yīng)中去除。根據(jù)ANOVA,采用調(diào)整方式的Dunnett雙側(cè)試驗進行多重比較。
在首次暴露過程中的5分鐘內(nèi)無法完成4次正確選擇的動物,或者在第2次暴露結(jié)束時無法完成共8次選擇的動物,被視為″超時″該任務(wù)。任何給予一個以上劑量的試驗化合物后″超時″的動物被排除在分析之外。
實施例68神經(jīng)保護作用對初級皮質(zhì)神經(jīng)元培養(yǎng)物中細胞的時間依賴性死亡的抑制利用Monyer等1989,Brain Research 483347-354所述方法的改進方案從0-1天齡的大鼠腦部制備初級皮質(zhì)神經(jīng)元。使分散的腦部組織在DMEM/10%PDHS(妊娠供體馬血清)中生長3天且隨后用阿糖胞苷(ARC)處理2天除去肟染神經(jīng)膠質(zhì)細胞。第5天,除去ARC培養(yǎng)物并置于DMEM/10%PDHS中。使用之前進一步將神經(jīng)元細胞培養(yǎng)4-7天。
對照初級神經(jīng)元培養(yǎng)物證實,培養(yǎng)物中第12-18天之間存在進行性細胞死亡。在第9天將試驗化合物加入到保持在DMEM和10%PDHS中的6種培養(yǎng)物中和保持其余培養(yǎng)物作為對照中之后,在第12和16天時對12種培養(yǎng)物進行乳酸脫氫酶(LD)水平的評估。利用Wroblewski等1955,Proc.Soc.Exp.Biol.Med.90210-213所述方法的改進方案測試LD。LD是胞質(zhì)酶,它在臨床和基礎(chǔ)研究中一般用于測定組織生存力。培養(yǎng)基LD的增加直接與細胞死亡有關(guān)。
對由低血糖引發(fā)的細胞毒性的神經(jīng)保護作用將得自ATCC的C6神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞鋪板在含有FBS的RPMI培養(yǎng)基中并且在FALCON 25cm2組織培養(yǎng)瓶中的濃度為1×10<6>細胞/ml。低血糖發(fā)作之前4小時,拋棄維持培養(yǎng)基,單層在適當(dāng)培養(yǎng)基中洗滌2次且隨后在37℃下在無血清或無血清加試驗化合物的條件下培養(yǎng)4小時。在添加適當(dāng)葡萄糖處理之前用Kreb′s Ringer磷酸鹽緩沖液洗滌2次。RPMI培養(yǎng)基含有2mg葡萄糖/ml,燒瓶分為6組,每組分別接受100%葡萄糖(2mg/ml),80%葡萄糖(1.6mg/ml),60%葡萄糖(1.2mg/ml)或0%葡萄糖(緩沖液)或補充試驗化合物。將所有燒瓶保溫20小時且隨后用臺盼藍評估總的、活的和死亡的細胞數(shù)目。
對抗興奮毒性氨基酸的神經(jīng)保護作用將5個含有SK-N-SH成神經(jīng)細胞瘤細胞的培養(yǎng)皿用試驗化合物處理,并且5個培養(yǎng)皿用RPMI培養(yǎng)基處理。4小時后,所有細胞用NMDA(500mu M)處理5分鐘。隨后測定總的活細胞和死亡細胞。
對抗氧-葡萄糖喪失的神經(jīng)保護作用分析固縮核測定細胞凋亡皮質(zhì)神經(jīng)炎是從E18大鼠胎兒制備且鋪板在8孔室玻片上,該玻片用聚-D-賴氨酸(10ng/ml)和血清預(yù)涂層,鋪板密度為100,000細胞/孔。將細胞鋪板在含有10%FCS的高葡萄糖DMEM中并保持在37℃和10%CO2/90%空氣的恒溫箱中。次日,用補充B27的含高葡萄糖DMEM的培養(yǎng)基更新除去血清,且使細胞保持在恒溫箱內(nèi),無需進一步更換培養(yǎng)基直至試驗當(dāng)天。第6天,將玻片分為2組;對照組和OGD組。對照組中的細胞接受含葡萄糖和定做B27的DMEM(無抗氧劑)。OGD組中的細胞接受含定做B27的非葡萄糖DMEM,使其在真空下脫氣15分鐘。在氣密室內(nèi)向細胞吹入90%N2/10%CO210分鐘且在37℃下培養(yǎng)6小時。6小時后,對照和OGD細胞均接受在含葡萄糖的DMEM和定做B27中含載體(DMSO)或試驗化合物的培養(yǎng)基的更換。使細胞返回到37℃的含氧量正常的恒溫箱內(nèi)。24小時后,4℃下把細胞在4%PFA中固定10分鐘且用Topro(熒光核結(jié)合染料)染色。用激光掃描細胞計數(shù)器通過測定固縮核來評價細胞凋亡。
LDH釋放的測定作為細胞死亡的指征皮質(zhì)神經(jīng)炎是從E18大鼠胎兒制備且鋪板在48孔培養(yǎng)平板上,該平板用聚-D-賴氨酸(10ng/ml)和血清預(yù)涂層,鋪板的密度為150,000細胞/孔。將細胞鋪板在含有10%FCS的高葡萄糖DMEM中并保持在37℃和10%CO2/90%空氣的恒溫箱中。次日,用補充B27的含高葡萄糖DMEM的培養(yǎng)基更新除去血清。第6天,將細胞分為2組;對照組和OGD組。對照組中的細胞接受含葡萄糖和定做B27的DMEM(無抗氧劑)。OGD組中的細胞接受含定做B27的非葡萄糖DMEM,將其在真空下脫氣15分鐘。在氣密室內(nèi)向細胞吹入90%N2/10%CO210分鐘且在37℃下培養(yǎng)6小時。6小時后,對照和OGD細胞均接受在含葡萄糖的DMEM和定做B27中含載體(DMSO)或試驗化合物的培養(yǎng)基的更換。使細胞返回到37℃的含氧量正常的恒溫箱內(nèi)。24小時后,通過測定細胞向細胞培養(yǎng)基中釋放的LDH(乳酸脫氫酶)來評價細胞死亡。對于LDH試驗,將一等份的501培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到96孔平板中。加入140μl 1M磷酸鉀緩沖液(pH7.5)和100μl 0.2mg/ml NADH之后,把平板置于黑暗中室溫下20分鐘。通過加入10μl的丙酮酸鈉引發(fā)該反應(yīng)。340nM下在Thermomax平板讀數(shù)器(Molecular Devices)中立刻讀取平板。每6秒記錄吸光度共5分鐘,吸光度是NADH的一個指數(shù)并且表示NADH消失率的斜率用來計算LDH活性。
LDH活性(U/ml)=(AA/min)(TCF)(20)(0.0833)/(.78)其中0.0833=比例常數(shù)
0.78=儀器光程長度(cm)實施例69HLA大鼠試驗方法-Crohn病和炎性腸道疾病雄性HLA-B27大鼠得自Taconic且不受限制地獲得食物(PMI Labdiet 5001)和水。研究開始時,大鼠為22-26周齡。
每天給大鼠皮下一個下面所列的制劑共7天。每組中有5只大鼠且末次劑量在安樂死之前2小時給予。
·載體(50%DMSO/50%Dulbecco氏PBS)·17α-乙炔基-17β-雌二醇(10μg/kg)·試驗化合物每天觀察糞便質(zhì)量并按照下列等級分級腹瀉=3;軟便=2;正常糞便=1。在試驗過程結(jié)束時,收集血清并儲存在-70℃。準(zhǔn)備一部分的結(jié)腸用于組織學(xué)分析并且其他節(jié)段用于分析髓過氧化物酶活性。
采用下面的方法測定髓過氧化物酶活性。收獲接觸組織并快速冷凍在液氮中。使用全結(jié)腸的代表性樣本以確保樣本之間的一致性。將組織儲存在-80℃下直至使用為止。此后,稱量組織的重量(約500mg)并在1∶15 w/v的5mM H2KPO4(pH6)洗滌緩沖液中勻漿。該組織在20,000xg和2-8℃下在Sorvall RC 5B離心45分鐘使其沉降。隨后棄去上清液。把組織重新懸浮并在2.5ml(1∶5 w/v)的50mM H2KPO4和10mM EDTA和0.5%Hex溴化銨中勻漿以協(xié)助溶解細胞內(nèi)MPO。將組織冷凍在液氮中,在37℃水浴中融化并超聲15秒以確保膜溶解。該過程被重復(fù)3次。隨后將樣本在冰上保持20分鐘且在12,000xg和2-8℃下離心15分鐘。按照這些步驟分析上清液。
試驗混和物是通過向反應(yīng)管中加入2.9ml的50mM H2KPO4和0.167含0.0005%H2O2的O-聯(lián)茴香胺/ml制成。當(dāng)過氧化氫降解時,O-聯(lián)茴香胺被氧化且在460nm下以濃度依賴方式吸收。加熱該混和物25℃。將100(100)μL的組織上清液加入到該反應(yīng)管內(nèi),在25℃下培養(yǎng)1分鐘,此后取1ml轉(zhuǎn)移到一次性塑料比色杯內(nèi)。460nm下相對于空白每2分鐘反應(yīng)時間測定OD,該空白樣含有2.9ml反應(yīng)化合物和100μl的0.5%溴化銨溶液。
通過對比吸光度@460和由純化人MPO 31.1單位/瓶繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線定量分析酶活性。將MPO重構(gòu)并用含10mM EDTA和0.5%Hex溴化銨的50mM H2KPO4連續(xù)稀釋至四個已知濃度。相對于該曲線對比樣本的吸光度以判斷活性。
組織學(xué)分析按照下列方法進行。將結(jié)腸組織浸漬在10%中性緩沖福爾馬林中。將各結(jié)腸標(biāo)本分為4個評估樣本。福爾馬林固定的組織在真空滲濾處理器中加工以便石蠟包埋。將樣本切片為5μm且隨后用蘇木精和曙紅(H & E)染色,以便采用Boughton-Smith后改進的等級進行盲法組織學(xué)評估。分級完畢之后,揭曉樣本,并且將數(shù)據(jù)制表且通過多重平均比較模型化的ANOVA線性進行分析。
在此引用的所有專利、文獻和其他文章在此全文引入作為參考。
權(quán)利要求
1.下式的化合物或其藥學(xué)可接受鹽或其前藥 其中R1和R2分別獨立地是H,鹵素,CN,選擇性取代的苯基,或選擇性取代的低級烷基;R3,R4,R5和R6分別獨立地是H,OH,鹵素,CN,選擇性取代的苯基,選擇性取代的低級烷基或選擇性取代的低級烷氧基;R8分別獨立地是H,-C(O)R9或選擇性取代的低級烷基;和R9是選擇性取代的低級烷基。
2.權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)可接受鹽或其前藥,其中R8是H。
3.權(quán)利要求1或2的化合物或其藥學(xué)可接受鹽或其前藥,其中R1和R2分別獨立地是H,鹵素,CN,未取代的苯基或未取代的低級烷基。
4.權(quán)利要求2或3的化合物或其藥學(xué)可接受鹽或其前藥,其中該化合物是下式的化合物
5.權(quán)利要求2的化合物或其藥學(xué)可接受鹽或其前藥,其中該化合物是下式的化合物
6.權(quán)利要求2-5任一項的化合物或其藥學(xué)可接受鹽或其前藥,其中R3、R5和R6分別獨立地是H,Cl,F(xiàn),甲基或甲氧基并且R2是H,Cl,F(xiàn)或甲基。
7.權(quán)利要求2的化合物或其藥學(xué)可接受鹽或其前藥,該化合物是(a)4′-羥基-3-甲基[1,1′-聯(lián)苯]-4-甲醛肟;(b)4′-羥基[1,1′-聯(lián)苯]-4-甲醛肟;(c)3-氯-4′-羥基[1,1′-聯(lián)苯]-4-甲醛肟;(d)2-氟-4′-羥基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛肟;(e)3-氟-4′-羥基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛肟;(f)2-氯-4′-羥基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛肟;(g)3-氯-4′-羥基-2′-甲基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛肟;(h)4′-羥基-2-甲基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛肟;(i)3-氯-3′-氟-4′-羥基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛肟;(j)3-氯-3′,5′-氟-4′-羥基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛肟;(k)3,5-二氯-4′-羥基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛肟;(l)3,5-二氯-3′-氟-4′-羥基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛肟;(m)2,3-二氯-4′-羥基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛肟;(n)2,3-二氯-3′-氟-4′-羥基-1,1’-聯(lián)苯-4-甲醛肟;或任何這些化合物的藥學(xué)上可接受鹽。
8.下式的化合物或其藥學(xué)可接受鹽或其前藥 其中R1是OH或選擇性取代的低級烷氧基;和R5,R6和R7分別獨立地是H,OH,鹵素,CN,苯基,低級烷基,低級烷氧基,所述的苯基、低級烷基和低級烷氧基被選擇性地取代。
9.權(quán)利要求8的化合物或其藥學(xué)可接受鹽或其前藥,其中R5,R6,和R7分別獨立地是,H,Me,Cl,F(xiàn),或甲氧基。
10.權(quán)利要求的化合物或其藥學(xué)可接受鹽或其前藥,其中該化合物是4′-羥基-3-甲氧基-1,1′-聯(lián)苯-4-甲醛肟。
11.一種藥物組合物,含有a)權(quán)利要求1-10任一項定義的化合物或其藥學(xué)可接受鹽或其前藥和b)藥學(xué)載體。
12.一種抑制需要其的哺乳動物中的骨質(zhì)疏松癥的方法,包括給該哺乳動物提供有效量的權(quán)利要求1-10任一項的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
13.一種抑制需要其的哺乳動物中的骨質(zhì)疏松癥、血鈣過低、血鈣過高、Paget氏病、骨軟化、骨質(zhì)缺乏、多發(fā)性骨髓瘤或?qū)墙M織具有有害作用的其他形式的癌癥的方法,包括向該哺乳動物提供有效量的權(quán)利要求1-10任一項的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
14.一種在需要其的哺乳動物中抑制良性或惡性異常組織生長的方法,包括向該哺乳動物提供有效量的權(quán)利要求1-10任一項的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
15.權(quán)利要求14的方法,其中該異常組織生長是前列腺肥大,子宮平滑肌瘤,乳腺癌,子宮內(nèi)膜異位,子宮內(nèi)膜癌,多囊性卵巢綜合癥,子宮內(nèi)膜息肉,良性乳腺疾病,子宮內(nèi)膜異位,卵巢癌,黑素瘤,前列腺癌,結(jié)腸癌和CNS癌。
16.一種在需要其的哺乳動物中降低膽固醇、甘油三酯、Lp(a)或LDL水平;或抑制高膽固醇血癥、高血脂、心血管疾病、動脈粥樣硬化、外周血管疾病、再狹窄或血管痙攣;或抑制血管壁免受導(dǎo)致免疫介導(dǎo)的血管損傷的細胞活動損害的方法,包括向該哺乳動物提供有效量的權(quán)利要求1-10任一項的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
17.一種在哺乳動物中抑制自由基誘發(fā)的疾病狀態(tài)的方法,包括向該哺乳動物提供有效量的權(quán)利要求1-10任一項的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
18.一種在需要其的哺乳動物中提供認知增強作用或神經(jīng)保護作用;或治療或抑制老年性癡呆、阿爾茨海默氏病、認知衰退或神經(jīng)變性障礙的方法,包括向該哺乳動物提供有效量的權(quán)利要求1-10任一項的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
19.一種在需要其的哺乳動物中抑制炎性腸病、潰瘍性直腸炎、克羅恩氏病、結(jié)腸炎、熱潮紅類、陰道或外陰萎縮、萎縮性陰道炎、陰道干燥、瘙癢、交媾困難、排尿困難、排尿頻繁、尿失禁、尿道感染、血管舒縮癥狀、男性脫發(fā)、皮膚萎縮、痤瘡、II型糖尿病、功能不良性子宮出血和不育癥的方法,包括向該哺乳動物提供有效量的權(quán)利要求1-10任一項的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
20.一種在需要其的哺乳動物中抑制白血病,子宮內(nèi)膜切除,慢性腎臟或肝臟疾病或凝血疾病或障礙的方法,包括向該哺乳動物提供有效量的權(quán)利要求1-10任一項的化合物或其藥學(xué)可接受鹽。
21.權(quán)利要求1-10任一項的化合物或其藥學(xué)可接受鹽或其前藥作為藥物的應(yīng)用。
22.權(quán)利要求1-10任一項的化合物在制備用于抑制需要其的哺乳動物中的骨質(zhì)疏松癥;抑制骨關(guān)節(jié)炎、血鈣過低、血鈣過高、Paget氏病、骨軟化、骨質(zhì)缺乏、多發(fā)性骨髓瘤或?qū)墙M織具有有害作用的其他形式的癌癥;抑制良性或惡性異常組織生長;降低膽固醇、甘油三酯、Lp(a)或LDL水平;或抑制高膽固醇血癥、高血脂、心血管疾病、動脈粥樣硬化、外周血管疾病、再狹窄或血管痙攣;或抑制血管壁免受導(dǎo)致免疫介導(dǎo)的血管損傷的細胞活動損害;抑制自由基誘導(dǎo)的疾病狀態(tài);提供認知增強t或神經(jīng)保護作用;或治療或抑制老年性癡呆、阿爾茨海默氏病、認知衰退或神經(jīng)變性障礙;抑制炎性腸病、潰瘍性直腸炎、克羅恩氏病、結(jié)腸炎、熱潮紅類、陰道或外陰萎縮、萎縮性陰道炎、陰道干燥、瘙癢、交媾困難、排尿困難、排尿頻繁、尿失禁、尿道感染、血管舒縮癥狀、男性脫發(fā)、皮膚萎縮、痤瘡、II型糖尿病、功能不良性子宮出血和不育癥或者抑制白血病,子宮內(nèi)膜切除,慢性腎臟或肝臟疾病或凝血疾病或障礙的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供具有式(I)的結(jié)構(gòu)的雌激素受體調(diào)制劑其中R
文檔編號A61P5/00GK1784379SQ200480011901
公開日2006年6月7日 申請日期2004年4月30日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月2日
發(fā)明者R·E·楊肖, 楊翠堅 申請人:惠氏公司