專利名稱：：合成辣椒素的制備和純化的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及合成法制備的辣椒素的制備和純化方法。
背景技術(shù)：
：辣椒素是源于茄科屬(solanaceaefamily)(辣椒)植物的刺激性物質(zhì)，由于對被認為是指示痛苦的小直徑傳入神經(jīng)纖維C-纖維和A-δ纖維的選擇性作用，其長期以來被用作試驗工具。根據(jù)在動物中的研究，辣椒素看來是通過打開可滲透鈣和鈉的陽離子通道而引起了C-纖維膜的除極化(depolarization)。最近，一種用于辣椒素作用的受體已被克隆。辣椒素可很容易地通過用乙醇萃取辣椒灌木或五彩辣椒(capsicumannum)的果實而獲得。辣椒素的化學(xué)名稱為N-(4-羥基-3-甲氧基芐基)-8-甲基壬-反式-6-烯酰胺(enamide)。辣椒素實際上不溶于水，但是可任意溶解于醇、醚、苯和氯仿中。在治療上，辣椒素已被用作局部止痛劑?？梢詮腟teveWeiss&Co.，315East68thStreet，NewYork，NY10021以辣椒素USP購得辣椒素，也可以通過已公開的方法合成制備。參見Michalska等人的″SynthesisandLocalAnestheticPropertiesofN-substituted3，4-DimethoxyphenethylamineDerivatives″，DissPharm.Pharmacol.，第24卷(1972)第17-25頁(化學(xué)文摘CA7719271a)，其公開了各自還原為仲胺的戊基和N-己基-3，4-二甲氧基苯基乙酰胺。辣椒素(USP)含有通常對應(yīng)于63％純辣椒素的不少于110％的總辣椒素生物堿。USP辣椒素是反式辣椒素(55-60％)，并且還含有母體二氫辣椒素和降二氫辣椒素。雖然詳細的機理還不知道，但是辣椒素的媒介作用包括(i)在外圍組織中活化傷害感受器；(ii)使外部傷害感受器最終失敏為一種或多種刺激物形態(tài)；(iii)使敏感的A-δ和C-纖維傳入體的細胞衰退；(iv)活化神經(jīng)元蛋白酶；(v)阻斷軸突傳輸；以及(vi)在不影響非傷害感受器纖維數(shù)值的情況下降低傷害感受器纖維的絕對數(shù)值。用于合成辣椒素及其類似物的方法已有報道，例如，Crombie等的″AmidesofVegetableOriginPartVISynthesisofCapsaicin，″JournaloftheChemicalSociety，第1025-1027頁(1955)描述了明確的辣椒素、辣椒中的有效要素N-(4-羥基-3-甲氧基芐基)-8-甲基壬-反式-6-烯酰胺的合成。在1985年1月15日授權(quán)LaHann等人的USP4,493,848中描述了N-[(取代的苯基)甲基]-順式-單飽和的鏈烯酰胺組合物以及合成該用于注射用藥、口服和局部用藥的組合物的方法。在1992年3月10日授權(quán)Chen等人的USP5,094,782描述了從合成辣椒素(壬?；闾m胺)和琥珀酐合成壬?；闾m胺琥珀酸酯。另外，其它參考文獻報道了利用維悌希(witting)反應(yīng)作為引入雙鍵的關(guān)鍵步驟。然而，維悌希反應(yīng)總是有助于順式烯烴產(chǎn)物。這樣，需要包括分級重結(jié)晶的另外步驟來將順式產(chǎn)物異構(gòu)化并且分離為反式產(chǎn)物。用于合成辣椒素的備選方法利用克萊森酯重排作為選擇性地形成烯烴(鏈烯)雙鍵反式異構(gòu)體的手段。雖然因為不形成順式產(chǎn)品而優(yōu)于維悌希反應(yīng)，但是使用克萊森酯重排產(chǎn)生了其中碳鏈太短的初級產(chǎn)物。這樣，在與芐胺偶合形成最終產(chǎn)物前的克萊森步驟后，必須使所述鏈變長。提供用于合成辣椒素的反式異構(gòu)體的方法是有利的，以便提供反式異構(gòu)體的全合成，不需要現(xiàn)有技術(shù)中所描述的辣椒素合成所需的另外步驟。還有，提供純化通過本文所描述方法制備的合成辣椒素的方法是有利的。本發(fā)明部分地涉及反式幾何形狀是從合成反應(yīng)開始就確定、并貫穿在簡單的四步驟方法中進行的事實。此外，本發(fā)明部分地涉及合成法制備的反式辣椒素可以以99.0％或更高的純度純化的事實。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個目的是提供一種用于全合成辣椒素或辣椒素類化合物的反式異構(gòu)體的方法。本發(fā)明的另一個目的是提供一種用于純化本發(fā)明的辣椒素或辣椒素類化合物的方法。與上面的目的和其它目的相一致，在本發(fā)明的某些優(yōu)選的實施方案中，提供了根據(jù)四步驟方法合成辣椒素反式異構(gòu)體的方法。在某些其它的實施方案中，提供了制備反式辣椒素的方法，其包括a)用鹵戊酸和/或ω-鹵代鏈烷酸烷基化3-甲基丁炔，以獲得8-甲基-6-壬炔酸和/或具有下面的化學(xué)式的炔酸類似物(其中n＝4-8)b)還原所述的8-甲基-6-壬炔酸以獲得反式-8-甲基-壬烯酸；c)活化所述8-甲基-壬烯酸以獲得?；?；和d)用所述酰基氯?；?-羥基-3-甲氧基芐胺鹽酸化物以獲得反式辣椒素。在某些其它的實施方案中，提供了制備反式辣椒素的方法，其中步驟a)包括以下步驟i)混合無水四氫呋喃(THF)和六甲基磷酰胺(HMPA)并且將該混合物冷卻到約-78℃至約-75℃；ii)向步驟i)的混合物中加入3-甲基丁炔，接下來在-78℃至約-65℃的溫度下滴加堿以獲得第二混合物；iii)將第二混合物加溫到約-30℃并攪拌(優(yōu)選約30分鐘)；和iv)在約-30℃的溫度下滴加鹵戊酸的無水四氫呋喃溶液，該鹵戊酸的添加量足以將所述的3-甲基丁炔轉(zhuǎn)化成8-甲基-6-壬炔酸，然后逐漸加溫到室溫并攪拌(優(yōu)選一整夜)，以獲得反應(yīng)混合物。在某些實施方案中，提供了獲得步驟a)的粗中間產(chǎn)物的方法，其進一步包括以下步驟i)向反應(yīng)混合物中加入鹽酸(HCl)(優(yōu)選3M的HCL)，并用乙酸乙酯萃取該反應(yīng)混合物；和ii)用鹽水洗滌所萃取的反應(yīng)混合物以制得粗產(chǎn)物。在本發(fā)明的另一個實施方案中，提供了純化步驟a)粗中間產(chǎn)物的方法，其包括以下步驟i)通過柱色譜法使用硅膠純化粗產(chǎn)物，并采用乙酸乙酯/己烷的混合物洗脫所述粗產(chǎn)物；和ii)在真空下除去溶劑以提供步驟a)的中間產(chǎn)物。在某些其它的實施方案中，提供了制備反式辣椒素的方法，其中步驟b)包括以下步驟i)將所述的8-甲基-6-壬炔酸溶解于無水四氫呋喃和叔丁醇(t-BuOH)的混合物中以獲得溶液，并將該溶液冷卻到約-55℃至約-40℃；ii)向該溶液中冷凝氨(NH3)以使溫度達到-50℃至約-40℃；iii)在約-45℃至約-30℃的溫度下一片片地加入鈉滴并攪拌足夠長的時間以溶解所述的鈉(優(yōu)選約30分鐘至約2小時)，和iv)加入氯化銨(NH4Cl)，加溫到室溫并使NH3蒸發(fā)一整夜以獲得反應(yīng)混合物。在某些其它的實施方案中，提供了制備反式辣椒素的方法，其中步驟b)的反應(yīng)步驟iii)進一步包括在約-65℃至約-45℃的溫度下一片片地加入鋰并攪拌足夠長的時間以溶解所述的鋰(優(yōu)選約30分鐘至約2小時)。在某些其它的實施方案中，提供了制備反式辣椒素的方法，其中步驟b)進一步包括以下步驟i)攪拌所述的反應(yīng)混合物一整夜以蒸發(fā)氨；ii)加入另外的無水四氫呋喃和氯化銨，攪拌所述混合物足夠長的時間以中和過量的鋰(優(yōu)選30分鐘)；iii)一部分一部分地加入冰水；iv)用乙酸乙酯萃取所述的混合物，用鹽水洗滌并通過無水硫酸鈉干燥；和v)過濾并且在真空下除去溶劑，以制備步驟b)的中間產(chǎn)物。在某些實施方案中，提供了用于獲得步驟b)的粗中間產(chǎn)物的方法，其進一步包括以下步驟i)向反應(yīng)混合物中加入水；ii)用HCl(優(yōu)選6NHCL)將該反應(yīng)混合物酸化到pH為約2至約3；iii)用乙酸乙酯萃取該反應(yīng)混合物，用鹽水洗滌并通過無水硫酸鈉(Na2SO4)干燥；和v)過濾并且在真空下除去溶劑，以獲得步驟b)的粗中間產(chǎn)物。在本發(fā)明的另一個實施方案中，提供了純化步驟b)的粗中間產(chǎn)物的方法，該方法包括以下步驟i)通過快速(flash)柱色譜法使用硅膠純化該產(chǎn)物，并用乙酸乙酯/己烷的混合物洗脫，以獲得步驟b)的中間產(chǎn)物。在某些其它的實施方案中，提供了制備反式辣椒素的方法，其中步驟c)包括以下步驟i)在室溫下向8-甲基-6-壬烯酸中滴加亞硫酰鹵以形成溶液；ii)在約50℃至約75℃下加熱該溶液足夠長的時間以將所述的8-甲基-6-壬烯酸轉(zhuǎn)化為?；u(優(yōu)選約1小時)；和iii)在真空下在約40℃至約45℃下除去過量的亞硫酰鹵以獲得步驟c)的中間產(chǎn)物。在某些其它的實施方案中，提供了制備反式辣椒素的方法，其中步驟d)進一步包括以下步驟i)混合4-羥基-3-甲氧基芐胺鹽酸化物和二甲基甲酰胺(DMF)；ii)在室溫下向步驟i)的混合物中一部分一部分地加入含水氫氧化鈉(優(yōu)選5NNaOH)并且攪拌(優(yōu)選約30分鐘)；iii)在約0℃至約10℃的溫度下滴加無水醚中的?；u足夠長的時間，以將?；u轉(zhuǎn)變成酰胺(優(yōu)選約20分鐘至約1小時)；和其后iv)逐漸將該混合物加溫到室溫并攪拌(優(yōu)選一整夜)。在某些實施方案中，提供了獲得步驟d)的粗制反式辣椒素的方法，其進一步包括以下步驟i)向該混合物中加入水，并且用乙酸乙酯萃取該混合物以獲得乙酸乙酯的萃取物；ii)用HCl(優(yōu)選1NHLC)洗滌所述萃取物，其后，用碳酸氫鈉(NaHCO3)洗滌；iii)用鹽水洗滌該溶液，并通過無水硫酸鈉(Na2SO4)干燥；和iv)過濾并在真空下除去溶劑以獲得粗產(chǎn)物。在本發(fā)明的另一個實施方案中，提供了純化步驟d)中的粗制反式辣椒素的方法，其包括以下步驟通過柱色譜法使用硅膠純化粗產(chǎn)物，并且用乙酸乙酯/己烷的混合物洗脫，以獲得粗制的反式辣椒素產(chǎn)品。在某些其它的實施方案中，提供了另外的純化反式辣椒素產(chǎn)品的方法，其包括以下步驟i)將粗制反式辣椒素產(chǎn)品溶解于乙醚/己烷的混合物中，并將該混合物加熱到約40℃至約45℃；ii)將混合物冷卻到室溫，同時攪拌約2小時；和iii)過濾該混合物以提供純化過的反式辣椒素產(chǎn)品。在某些其它的實施方案中，提供了通過高性能液體色譜(HPLC)、用半制備的HPLC純化辣椒素的方法。在本發(fā)明的某些實施方案中，進一步涉及純化本發(fā)明的粗制反式辣椒素產(chǎn)品的方法，或進一步純化先前純化過的本發(fā)明反式辣椒素產(chǎn)品的方法。優(yōu)選該純化提供純度為約97％或更高、優(yōu)選約98％或更高，更優(yōu)選約99％或更高的超純的反式辣椒素產(chǎn)品。這樣的純化在本文中也被稱為“半成品純化”或辣椒素的半制備品純化。依據(jù)本發(fā)明的辣椒素半成品的純化使用半制備的HPLC進行。在某些優(yōu)選實施方案中，該辣椒素在通過半制備的HPLC進一步純化前被預(yù)先純化。在某些實施方案中，本發(fā)明還涉及依據(jù)本發(fā)明而制備的超純的辣椒素產(chǎn)品，其中所述辣椒素產(chǎn)品含有純度超過約97％、優(yōu)選超過約98％、更優(yōu)選超過約99％的辣椒素。在某些其它的實施方案中，提供了用于在人或動物需要緩解疼痛的部位緩解疼痛、主要由反式辣椒素組成的辣椒素組合物。優(yōu)選該辣椒素組合物包括本發(fā)明的超純辣椒素以及用于給藥(例如，通過注射或滲透)的合適媒介物。在某些其它的實施方案中，提供了包括反式辣椒素或反式辣椒素類化合物的組合物，以用于各種與疼痛相關(guān)病癥的治療，例如，傷害性疼痛(穿過完整的神經(jīng)元通道的疼痛)、神經(jīng)性疼痛(由對神經(jīng)結(jié)構(gòu)的傷害所引起的疼痛)、來自神經(jīng)損傷的疼痛(神經(jīng)瘤和連續(xù)神經(jīng)瘤)、來自神經(jīng)痛的疼痛(源于神經(jīng)疾病和/或神經(jīng)炎癥的疼痛)、來自肌痛的疼痛(源自肌肉疾病和/或炎癥的疼痛)、與疼痛觸發(fā)點有關(guān)的疼痛、來自軟組織中的瘤的疼痛、與神經(jīng)傳遞介質(zhì)失調(diào)綜合癥(與在正常神經(jīng)中的信號傳輸相關(guān)聯(lián)的神經(jīng)傳遞介質(zhì)分子在數(shù)量/質(zhì)量上的破壞)以及與整形外科失調(diào)有關(guān)的疼痛，例如腳、膝、臀、脊骨、肩、肘、手、頭和頸的病癥。優(yōu)選所述反式辣椒素或反式辣椒素類化合物是超純的。為了使此處描述的發(fā)明被更加完全地理解，提供了以下定義此處使用的術(shù)語“反式辣椒素”既包含由本發(fā)明的方法制備的辣椒素的反式異構(gòu)體，又包括辣椒素類化合物的反式異構(gòu)體。此處使用的術(shù)語“辣椒素的受體”包括在此處詳細描述的香草精類(vanilloid)受體亞型-1(VR1)，但不意味著局限于VR1，并且通常特別可以指受體亞型VR1和VR2。具體實施例方式此處所公開的方法可用于合成反式辣椒素或反式辣椒素類化合物。在本發(fā)明的某些其它實施方案中，反式辣椒素通過以下的化學(xué)反應(yīng)合成在合成反式辣椒素的第一步驟中，優(yōu)選通過烷基化反應(yīng)合成第一中間體。在一個優(yōu)選的實施方案中，所合成的第一中間體優(yōu)選是8-甲基-6-壬炔酸。8-甲基-6-壬炔酸是通過用鹵戊酸如溴戊酸、氯戊酸、氟戊酸、碘戊酸、砹戊酸、1-甲磺酰氧基戊酸和1-甲苯磺酰氧基戊酸烷基化3-甲基-丁炔而合成的。優(yōu)選所述烷基化反應(yīng)是在合適的堿如正丁基鋰的存在下、通過加入溶劑例如六甲基磷酰胺和四氫呋喃而驅(qū)動的。在本發(fā)明的某些其它的實施方案中，在烷基化反應(yīng)步驟期間可以使用其它的堿例如仲丁基鋰(sec-BuLi)、叔丁基鋰(t-BuLi)、二異丙基氨基鋰(LDA)、氫化鈉(NaH)、氨基鈉(NaNH2)、氨基鋰(LiNH2)、甲基鋰(MeLi)、甲基溴化鎂(MeMgBr)、乙基溴化鎂(EtMgBr)、鹵化烷基或芳基鎂及它們的混合物替代丁基鋰。在某些其它的實施方案中，六甲基磷酰胺可以被1，2-二甲基-3，4，5，6-四氫-(1H)嘧啶酮替代。在某些其它的實施方案中，在烷基化反應(yīng)步驟中可以優(yōu)選使用另外的溶劑，例如醚。來自第一步驟合成中的粗產(chǎn)物優(yōu)選通過柱色譜法純化。在某些其它的實施方案中，第一步驟的中間體可以通過酸-堿萃取來純化。在某些其它的實施方案中，第一步驟的中間體可以通過真空蒸餾法或真空分餾法或低溫結(jié)晶法來純化。在合成反式辣椒素的第二步驟中，優(yōu)選通過還原所述第一中間體來合成第二中間體。在一個優(yōu)選的實施方案中，所合成的第二中間體優(yōu)選是8-甲基-6-壬烯酸。優(yōu)選所述還原反應(yīng)由鋰、叔丁醇、NH3/THF推動。然而，在某些其它的實施方案中，優(yōu)選在所述還原反應(yīng)中可使用二異丁基鋁氫化物(DIBAL-H)、液氨中的鈉、具有較低烷基的胺的鋰，以得到所需的產(chǎn)物。所需產(chǎn)物的百分收率可根據(jù)選擇用于完成還原步驟的試劑而改變。在某些其它的實施方案中，叔丁醇可以由其它烷基醇例如仲丁基醇(sec-BuOH)、乙醇(EtOH)所代替。在合成反式辣椒素的第三步驟中，優(yōu)選通過用亞硫酰鹵如亞硫酰氯活化第二中間體來合成第三中間體。在一個優(yōu)選的實施方案中，所合成的第三中間體優(yōu)選是?；u，例如具有下列化學(xué)式的?；绕渲蠷2是選自以下組中氯、溴、?；溥?imidazolide)、碳二亞胺及其它的分裂基團(cleavinggroup)，例如混合酯類。在某些其它的優(yōu)選實施方案中，可以優(yōu)選使用草酰氯、五氯化磷、三氯化磷和硫酰氯來代替亞硫酰鹵。在某些其它的實施方案中，羧酸的活化可以通過用氯甲酸異丁酯、?；溥蚝吞级啺沸纬苫旌硝韺崿F(xiàn)。在某些其它的實施方案中，活化可以通過1，3-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、1-乙基-3-(3′-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸化物(EDCI)、DCC和1-羥基苯并三唑(HOBt)或1-羥基-7-氮雜苯并三唑(HOAt)的組合、EDCI和HOAt或HOBt的組合、或者羰基二咪唑(CDI)、硫代羰基咪唑來代替亞硫酰鹵實現(xiàn)。在合成反式辣椒素的第四步驟中，最后的反式辣椒素產(chǎn)品是通過用?；u?；S胺衍生物合成的。在一個優(yōu)選的實施方案中，該芐胺衍生物是4-羥基-3-甲氧基芐胺鹽酸鹽。在某些實施方案中，該4-羥基-3-甲氧基芐胺HCl鹽可以由4-羥基-3-甲氧基芐胺與酰基氯反應(yīng)來代替。在某些實施方案中，?；u的?；磻?yīng)是通過在二甲基甲酰胺(DMF)和乙醚(EtzO)中由含水氫氧化鈉(NaOH)驅(qū)動的。在其它的優(yōu)選實施方案中，優(yōu)選可以使用其它的堿，如氫氧化鉀(KOH)、氫氧化鋰(LiOH)、碳酸鈉、碳酸鉀、烷基胺例如三乙胺、Hunig堿、4-二甲基氨基吡啶(DMAP)和吡啶來代替氫氧化鈉。在某些其它的實施方案中，優(yōu)選可以使用其它溶劑如四氫呋喃、1，2-二甲氧基乙烷(DME)、乙腈、甲基乙基酮(MEK)、二氯甲烷和氯仿來代替二甲基甲酰胺/醚。在某些實施方案中，第五和最后的步驟通過重結(jié)晶來純化最后的(粗)反式辣椒素產(chǎn)品。優(yōu)選地，重結(jié)晶包括凈化所述的反式辣椒素產(chǎn)品，其包括以下步驟(i)將粗制反式辣椒素產(chǎn)品溶解于醚/己烷混合物中，并將該混合物加熱到約40℃-約45℃；ii)在攪拌的同時將該混合物冷卻到室溫；和iii)過濾該混合物以提供純化的反式辣椒素產(chǎn)品。作為替換，最后的(粗)反式辣椒素產(chǎn)品可以通過使用硅膠的柱色譜法純化，并通過例如醋酸乙酯/己烷的混合物洗脫以獲得純化的反式辣椒素產(chǎn)品。另外，或者作為上述的第五和最后步驟的備選方案，最后的反式辣椒素產(chǎn)品通過半制備的HPLC純化，以提供純度為約97％或更高、優(yōu)選98％或更高、更優(yōu)選約99％或更高的超純的反式辣椒素。在某些實施方案中，該半制備的HPLC系統(tǒng)是例如吸附色譜系統(tǒng)、離子交換色譜系統(tǒng)、尺寸排阻色譜等等。優(yōu)選所述HPLC系統(tǒng)為吸附色譜系統(tǒng)，如反相色譜系統(tǒng)。在某些實施方案中，本發(fā)明最后的純化步驟包括通過使用等度洗脫(例如，等濃度流動相)或梯度洗脫(例如，梯度流動相)來進行半制備的HPLC。在等度洗脫中，使用具有恒定組成的流動相洗脫化合物(例如辣椒素和雜質(zhì))。在開始反應(yīng)的時候化合物通過柱子移動，其中每種化合物以不同的速度移動，從而導(dǎo)致化合物分離。在梯度洗脫中，該化合物可以隨著流動相組成的改變而通過增加有機溶劑的濃度和/或強度而洗脫。用于本發(fā)明中的流動相通常包括例如，乙腈、二噁烷、乙醇、異丙醇、己烷、EtOAc、甲醇、四氫呋喃、水及它們的組合等等。最優(yōu)選該流動相包括甲醇。依照本發(fā)明使用的半制備HPLC柱包括但不限于，例如SymmetryC18、CogentHPSC18、ZorbaxSB-C18StableBond、HichromC18、Genesis300C18、OmniSphereC18、HxSilC18等。在某些優(yōu)選的實施方案中，通過本發(fā)明方法制備的反式辣椒素具有約97％或更高、約98％或更高、或者約99％或更高的純度。在某些實施方案中，本發(fā)明進一步涉及含有約97％或更高、約98％或更高、或者約99％或更高純度的辣椒素的反式辣椒素化合物。這種辣椒素在本文中也被稱為超純辣椒素。在某些實施方案中，本發(fā)明進一步涉及雜質(zhì)含量為約3％或更低、約2％或更低、或者約1％或更低的超純辣椒素的反式辣椒素化合物。由本發(fā)明的方法制備的反式辣椒素優(yōu)選適合于制備可以向人或動物的分散部位給藥以治療疼痛的可注射或可滲透的組合物。除另有規(guī)定外，本文中所使用的術(shù)語“反式辣椒素”和“反式辣椒素類化合物”包括在相同的藥理學(xué)部位的辣椒素和辣椒素類化合物的反式異構(gòu)體，例如，作為辣椒素的香草精類受體亞型-1。具有相似生理學(xué)性能的辣椒素類化合物，例如，通過打開可以滲透鈣和鈉的陽離子通道而除極化的觸發(fā)C纖維膜是已知的。例如，1989年3月14日授予Brand(Procter&GambleCo.)的USP4,812,446描述了其它辣椒素類化合物以及它們的制備方法。1984年1月3日授予LaHann的USP4,424,205引證了辣椒素類的類似物。Ton等人在Brit.J.Pharm.10175-182(1955)中討論了辣椒素及其類似物的藥理學(xué)作用。在通過本發(fā)明的方法合成辣椒素類化合物的地方，該反式辣椒素類化合物優(yōu)選可以提供與本領(lǐng)域已知的反式辣椒素相同的生理學(xué)性能。合適的反式辣椒素類化合物優(yōu)選包括，但不限于高辣素、丁子香酚、姜黃色素、anandamide、胡椒堿、次胡椒酰胺、胡椒亭、piperoleinA、piperoleinB、piperanine以及它們的任意組合或混合物。由于反式異構(gòu)體是公認的VR-1機理的媒介物，通過本發(fā)明方法合成的反式辣椒素和反式辣椒素類化合物特別適合用于治療可以通過活化該香草精類受體而緩解失調(diào)或疼痛。本發(fā)明的合成方法導(dǎo)致了主要由反式辣椒素組成的辣椒素產(chǎn)品。根據(jù)本發(fā)明制備的辣椒素產(chǎn)品包含少于1％的順式辣椒素。香草精部分構(gòu)成了反式辣椒素和反式辣椒素類化合物的主要結(jié)構(gòu)成分，因此，建議的這些反式化合物的反應(yīng)部位被更廣泛地稱為香草精類受體(Szallasi1994Gen.Pharmac.25223-243)。相反，雖然辣椒素的順式異構(gòu)體通過很多機理具有活性，然而，VR-1仍被認為不包括該試劑的主要影響。VR-1是經(jīng)由香草精類如辣椒素和樹脂毒素(resiniferatoxin)活化的Ca2+可滲透的非選擇性陽離子通道。以哺乳動物細胞表示的時候人的香草精類受體是在超過42℃的溫度下及pH低于5.5下由辣椒素活化的。所有這些受動器的活化可以通過辣椒素對抗劑capsazepine的作用被部分或全部地封鎖。VR-1是沿著具有somataI背根和三叉神經(jīng)中樞的主要感覺神經(jīng)元的整個長度而發(fā)現(xiàn)的。這些神經(jīng)元具有小至中等大小的直徑并且形成無髓鞘的C纖維。具有C-纖維的VR-1正神經(jīng)元能夠被分成兩個亞類肽能的和非肽能的。在香草精敏感神經(jīng)元中發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)肽中，物質(zhì)P和CGRP是被最好地表征的。非肽能的辣椒素敏感神經(jīng)元特性地具有P2X3嘌呤受體以及嘌呤受體和香草精類受體間的交叉失敏。多節(jié)的神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元的子集也包含VR-1。可以相信VR-1對于各種有害的刺激，包括熱、酸和一些植物毒素起到了受體共享的作用。另外，在發(fā)炎的過程中，由活化的免疫細胞釋放的內(nèi)生物質(zhì)還可以瞄準(zhǔn)VR-1目標(biāo)，除了傷害性感受外，它的活化還導(dǎo)致了CGRP-調(diào)解的(CGRP-mediated)局部血管舒張。在胃腸道中，可以相信該機理在粘液(mucousal)保護中具有主要作用。相比而言，VR-1在主要神經(jīng)元的中樞末端，即，脊髓的背角和該受體的內(nèi)生激活物的作用是未知的。香草精類如反式辣椒素對敏感末梢神經(jīng)具有兩階段作用，即初始興奮性階段(顯示為疼痛和/或神經(jīng)性發(fā)炎)，接下來是通常被稱為失敏的持續(xù)的難以控制的狀態(tài)(Szallasi2000TrendsNeurosci.25491-497)。本發(fā)明的反式辣椒素組合物能夠通過在特定的部位提供疼痛緩解，而用來治療各種與疼痛相關(guān)的病癥。將要治療的病癥的實施例包括但不限于，本發(fā)明的組合物和方法可以被用來處理各種與疼痛相關(guān)的病癥。將要處理的病癥的實施例包括但不限于傷害性疼痛(穿過完整的神經(jīng)元通道的疼痛)、神經(jīng)性疼痛(由對神經(jīng)結(jié)構(gòu)的傷害所引起的疼痛)、來自神經(jīng)損傷的疼痛(神經(jīng)瘤和連續(xù)神經(jīng)瘤)、來自神經(jīng)痛的疼痛(源于神經(jīng)疾病和/或神經(jīng)炎癥的疼痛)、來自肌痛的疼痛(源自肌肉疾病和/或炎癥的疼痛)、與疼痛觸發(fā)點有關(guān)的疼痛、來自軟組織中的瘤的疼痛、與神經(jīng)傳遞介質(zhì)失調(diào)綜合癥(與在正常神經(jīng)中的信號傳輸相關(guān)聯(lián)的神經(jīng)傳遞介質(zhì)分子在數(shù)量/質(zhì)量上的破壞)以及與整形外科失調(diào)有關(guān)的疼痛，例如腳、膝、臀、脊骨、肩、肘、手、頭和頸的病癥。在某些實施方案中，本發(fā)明進一步涉及包括依據(jù)本發(fā)明制備的辣椒素(例如，超純的辣椒素)的藥物組合物。優(yōu)選地該組合物包括依據(jù)本發(fā)明制備的辣椒素(例如，超純的辣椒素)及適合于給人或動物給藥的媒介物。優(yōu)選地該辣椒素被結(jié)合到所述媒介物中。更優(yōu)選該媒介物適合于對人或動物滲透或注射給藥。在某些實施方案中，辣椒素被溶解于通常適合用于制備可注射或可滲透溶液的其它媒介物，例如油、丙二醇或其它溶劑中。合適的藥理學(xué)可接受的媒介物優(yōu)選包括水性媒介物、非水性媒介物、抗微生物劑、等張劑、緩沖劑、抗氧劑、懸浮和分散劑、乳化劑、多價螯合劑或螯合劑以及它們的任意組合或混合物。水性媒介物的實例優(yōu)選包括氯化鈉注射液、細菌抑止性氯化鈉注射液、林格氏注射液、等張葡萄糖注射液、無菌注射用水、細菌抑止性無菌注射用水、葡萄糖乳酸鹽林格氏注射液以及它們的任意組合或混合物。非水性非腸道的注射用藥媒介物優(yōu)選包括植物來源的非揮發(fā)性油、棉花子油、玉米油、芝麻油、花生油以及它們的任意組合或混合物?？山邮艿钠渌幚韺W(xué)媒介物還優(yōu)選地包括用于可與水混溶的媒介物乙醇、聚乙二醇、甘油和丙二醇以及用于調(diào)解pH的氫氧化鈉、鹽酸、檸檬酸或乳酸，及它們的任意組合或混合物。可以使用上述媒介物的任意組合。優(yōu)選用于本發(fā)明的媒介物包括約20％的PEG300、約10mM組氨酸和約5％在水中的蔗糖，以用于注射。作為備選地或另外地，以下一種或多種試劑還可以包含在本發(fā)明的組合物中用于所述組合物的抗微生物劑，包括抑止細菌或抑止真菌的濃縮物，優(yōu)選包括苯酚、甲酚、汞制劑、苯甲醇、氯丁醇、乙基和丙基對羥苯甲酸酯、乙基汞硫代水楊酸鈉、苯甲烷氯化銨(benzalkoniumchloride)、苯甲乙氧氯化銨(benzethoniumchloride)及它們的混合物；用于本發(fā)明組合物的等張劑優(yōu)選包括氯化鈉、葡萄糖及它們的任意組合或混合物；用于本發(fā)明的組合物的緩沖劑優(yōu)選包括醋酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽及它們的任意組合或混合物；用于本發(fā)明的組合物的抗氧劑優(yōu)選包括抗壞血酸、硫酸氫鈉及它們的任意組合或者混合物；用于本發(fā)明的組合物的懸浮和分散劑優(yōu)選包括羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮及它們的任意組合或混合物；用于本發(fā)明的組合物的乳化劑優(yōu)選包括多乙氧基醚(吐溫80)。用于本發(fā)明的金屬粒子多價螯合劑或螯合劑優(yōu)選包括乙二胺四乙酸。優(yōu)選地，當(dāng)單一劑量的辣椒素被單獨地給藥或在沒有局部麻醉下給藥時，則該劑量的辣椒素可以優(yōu)選與用于注射或滲透的藥理學(xué)可接受的媒介物組合。依據(jù)所選擇的藥理學(xué)可接受的媒介物，在某些實施方案中，單一劑量的辣椒素可以以用于注射或滲透的水溶液或懸浮液給藥。下面的實施例舉例說明了本發(fā)明的各個方面。無論如何，它們也不應(yīng)該被視為是以任何方式限定權(quán)利要求。步驟1用溴戊酸烷基化3-甲基-丁炔合成反式辣椒素的第一步驟涉及通過用鹵戊酸如溴戊酸烷基化3-甲基-丁炔合成第一中間體如(8-甲基-6-壬炔酸)。第一中間體成分是在實驗室中通過如下的實施例I(a)-(e)成功地合成的實施例I(a)8-甲基-6-壬炔酸是在兩個分開的反應(yīng)(反應(yīng)1和反應(yīng)2)中通過向裝有溫度計、磁力攪拌器和通氮氣/排氮氣下50ml的三口RB燒瓶中加入無水四氫呋喃(15ml)和六甲基磷酰胺(3.8ml)而制備的。將混合物冷卻到約-78℃至約-75℃。然后加入甲基丁炔(1g)，接下來在約-78至℃約-65℃的溫度下滴加2.5M的正丁基鋰(Rxn1＝1當(dāng)量并且Rxn2＝2當(dāng)量)。將兩個反應(yīng)中的混合物都逐漸加溫到約-30℃，并在該溫度下攪拌約30分鐘。在約-30℃下在約10至約15分鐘內(nèi)滴加5-溴戊酸(1.33g，在3ml的THF中)溶液。然后，將反應(yīng)1和反應(yīng)2的混合物逐漸加溫到室溫，并攪拌一整夜。然后將該反應(yīng)混合物(rxn1和2)加溫。將約50ml的3MHCl加入到反應(yīng)1的溶液和反應(yīng)2的溶液中。然后用乙酸乙酯(2×100ml)萃取所述溶液并且用鹽水洗滌。該萃取物從反應(yīng)I中產(chǎn)生了約1.1g粗產(chǎn)物，從反應(yīng)2中產(chǎn)生了約0.8g粗產(chǎn)物。通過柱色譜法使用約50g硅膠純化反應(yīng)1的粗產(chǎn)物，并且用2∶1的己烷/乙酸乙酯的混合物洗脫。將收集物混合。在真空下除去溶劑以生產(chǎn)出步驟1的中間體產(chǎn)物(8-甲基-6-壬炔酸)。所產(chǎn)生的中間體產(chǎn)物是淺黃色的油。所產(chǎn)生的中間體重量為約0.55g(產(chǎn)率＝46％)。實施例I(b)8-甲基-6-壬炔酸是通過在氮氣下向裝有機械攪拌器、附加漏斗和溫度計的500ml三口BR燒瓶中加入六甲基磷酰胺(30ml)和無水四氫呋喃(120ml)來制備的。將混合物冷卻到約-78℃至約-70℃。然后在約-75℃加入3-甲基-丁炔7.9gm(11.8ml)，接下來在約20分鐘內(nèi)滴加2.5M的正丁基鋰(46ml)。將混合物加溫到約-30℃同時攪拌約45分鐘。在約-30℃-約25℃下在約20分鐘內(nèi)滴加溴戊酸(10.4g，在約20ml無水THF中)溶液。然后將該混合物逐漸加溫至室溫并且攪拌一整夜。反應(yīng)混合物的TLC顯示出沒有原料存在。將3M的HCl(100ml)和水(100ml)加入到該混合物中。溫度升高至約3℃。然后用乙酸乙酯(3×200ml)萃取該混合物。將萃取物組合并用鹽水洗滌。通過無水硫酸鈉干燥有機層，過濾并且在約35℃真空下除去溶劑，以產(chǎn)生步驟1的粗制的最后產(chǎn)物，該產(chǎn)物是淺橙色/黃色的油。通過柱色譜法用硅膠(約250g)純化該粗制的最后產(chǎn)物并且用1∶2的乙酸乙酯/己烷混合物洗脫?；旌显撌占铮⒃谡婵障鲁ト軇?，得到淺黃色油的步驟2的中間體。其重量為約6.7g(71％產(chǎn)率)。實施例I(c)在通氮氣/排氮氣下將六甲基磷酰胺(60ml)和無水四氫呋喃(240ml；含有250ppm的BHT阻聚劑)加入到裝有機械攪拌器、附加漏斗和溫度計的1L的3口BR燒瓶中。冷卻溶液到-70℃。將15.7gm(23.6ml)的3-甲基-丁炔加入到該溶液中。接下來，在低于約-50℃下在約25分鐘內(nèi)滴加2.5M正丁基鋰(92ml)。然后將該溶液逐漸加溫到-30℃并且攪拌50分鐘。在約-30℃至約-25℃下在約30分鐘內(nèi)滴加5-溴戊酸(20.8g)在無水四氫呋喃(40ml)中的溶液。將該混合物逐漸加溫至室溫并且攪拌一整夜。反應(yīng)混合物的TLC表明了更純凈的反應(yīng)。將反應(yīng)混合物冷卻到5℃至10℃。將3MHCl(100ml)和水(150ml)加入到該溶液中。用乙酸乙酯(3×200ml)萃取所形成的混合物。乙酸乙酯萃取物的TLC顯示兩次乙酸乙酯萃取就足夠了。將兩種乙酸乙酯萃取物混合，用鹽水(350ml)洗滌并通過無水Na2SO4干燥并過濾。在真空下除去溶劑以產(chǎn)生約25.8g的中間體產(chǎn)物。通過柱色譜法使用約300g硅膠純化該粗制的中間體產(chǎn)物，并且用1∶2的乙酸乙酯/己烷的混合物洗脫?；旌虾兴璁a(chǎn)物的收集物。在真空下除去溶劑，得到了約15g中間體(89％產(chǎn)率)。所述中間體是淺黃色的油。實施例I(d)在通氮氣/排氮氣下將無水四氫呋喃(200ml)和六甲基磷酰胺(46ml)加入裝有機械攪拌器、附加漏斗和溫度計的1L的三口BR燒瓶中。冷卻溶液到-70℃。加入3-甲基-丁炔(18.1ml)，產(chǎn)生了清澈的溶液。在-70℃下在約25分鐘內(nèi)滴加己烷(90.7ml)中的2.5M正丁基鋰。將該溶液逐漸加溫到-30℃，并在約-25℃至約40℃下攪拌1小時。在-30℃下約10分鐘內(nèi)滴加5-溴戊酸(16g，在40ml無水THF中)中。將混合物逐漸加溫至室溫，并在氮氣下攪拌一整夜。反應(yīng)混合物的TLC表明反應(yīng)完成了。將反應(yīng)混合物冷卻到約10℃，并且用3NHCl(80ml)酸化反應(yīng)混合物以使pH為約3。加入水(200ml)。用乙酸乙酯(2×300ml)萃取該溶液。將有機層混合并用鹽水(200ml)洗滌，通過無水Na2SO4干燥并過濾。在約35℃真空下除去溶劑，得到淺黃色的油(重量18.7g)。通過柱色譜法使用硅膠(約350g)純化該產(chǎn)物，并用1∶2的乙酸乙酯/己烷的混合物洗脫。混合含有所需產(chǎn)物的收集物。在真空下干燥整晚后，在真空下除去溶劑得到了淺黃色的油(wt.＝14.5g)。實施例I(e)將四氫呋喃(240ml，由BHT阻聚)和六甲基磷酰胺(60ml)在氮氣覆蓋下加入裝有機械攪拌器、附加漏斗和溫度計的1L的三口BR燒瓶中。將該混合物冷卻到-70℃。然后加入3-甲基-丁炔(15.6g)，接下來在低于-50℃的內(nèi)部溫度下滴加正丁基鋰(92ml)。然后在1hr的時間內(nèi)將該混合物逐漸加溫到-30℃。在保持內(nèi)部溫度低于-30℃的同時加入5-溴戊酸(20.7g)在四氫呋喃(40ml)中的溶液。將該混合物逐漸加溫到室溫并攪拌一整夜。在該階段的反應(yīng)混合物的TLC顯示，全部的溴戊酸已消耗且反應(yīng)完成。將反應(yīng)混合物冷卻到5-10℃，然后加入3MHCl(100ml)和水(150ml)，以使內(nèi)部溫度不升過15℃。然后用乙酸乙酯(2×200ml)萃取并通過硫酸鈉干燥該有機層，和在真空下濃縮，得到了步驟1的粗制的中間體產(chǎn)物。通過快速層析法使用10∶1的硅膠/基底純化該粗中間體產(chǎn)物，并用1∶2的乙酸乙酯/己烷的混合物洗脫?；旌纤霎a(chǎn)物級分并濃縮以提供步驟1的中間體產(chǎn)物(8-甲基-6-壬炔酸)，然后在真空下將該中間體產(chǎn)物干燥到恒重。所生產(chǎn)的中間體產(chǎn)物是淺黃色的油。所得中間體的重量為15g(產(chǎn)率＝89％)。步驟1的中間體產(chǎn)物的光譜數(shù)據(jù)如下1HNMR(CDCl3)δ2.56-2.48(m，1H)、2.38(t，2H)、2.18(dt，2H)、1.75(brq，2H)、1.53(brq，2H)、1.13(d，6H)；MS167(M’-1)；GC100％。實施例I(f)在氬氣通入/排出下將無水THF(5L，被250ppm的BHT阻聚)和HMPA(1.3L)加入到裝有機械攪拌器、溫度計、附加漏斗和的22L的四口圓底燒瓶中。將所形成的混合物冷卻到-60℃，并且加入3-甲基-1-丁炔(509mL)。然后在不超過-60℃的溫度下加入正丁基鋰(2.5M，502ml)。將反應(yīng)混合物逐漸加溫到不超過-30℃并且保持約一小時。將無水THF(900mL，含有250ppm的BHT)的5-溴戊酸(450g)溶液通過附加漏斗在不超過-30℃的溫度下加入。將該反應(yīng)混合物逐漸加熱到室溫并攪拌一整夜。通過TLC監(jiān)視該反應(yīng)。用冰浴將反應(yīng)混合物冷卻到≤10℃，并且在≤30℃下用水(10L)一部分一部分地驟冷。使用冷的6NHCl酸化該含水層至pH為約2-3，用乙酸乙酯萃取兩次(10L，6L)?；旌弦宜嵋阴サ妮腿∥锊⑶矣名}水(10L)洗滌。在通過無水Na2SO4干燥后，過濾該乙酸乙酯溶液，并在約45℃真空下濃縮至干燥，得到了粗產(chǎn)物。使用正常相位的Biotage色譜、用乙酸乙酯/己烷(1∶2)作為洗脫液純化該粗產(chǎn)物。混合含有所需產(chǎn)物的收集物，并在真空下除去溶劑，產(chǎn)生了237g(77％產(chǎn)率)淺黃色油的產(chǎn)物。實施例I(g)將8-甲基-6-壬炔酸(1.4g)溶解于MTBE(10ml)中。堿化該溶液至pH為10-11、并用MTBE萃取兩次(2×8ml)。使用冷的6NHCl將水性層酸化至pH為約2-3，并且用MTBE萃取(2×8ml)?；旌螹TBE的萃取物并用鹽水(4ml)洗滌。用無水Na2SO4干燥該有機層，過濾并在真空下濃縮至干燥，得到了產(chǎn)物。步驟28-甲基-6-壬炔酸的還原合成反式辣椒素的第二步驟涉及通過還原8-甲基-6-壬炔酸來合成第二中間體(8-甲基-6-壬烯酸)。8-甲基-6-壬炔酸是在實驗室里通過以下實施例II(a)-(g)成功地還原的實施例II(a)在通氮氣/排氮氣下在裝有溫度計、磁力攪拌器和冷凝器的250ml三口RB燒瓶中，將8-甲基-6-壬炔酸溶解在無水四氫呋喃(30ml)和叔丁醇(0.42ml)中。將溶液冷卻到-40℃。在約-40℃至約-50℃下將氨冷凝到燒瓶中。一片一片地加入鈉。加入鈉片使溶液變成深藍色。在約-40℃至約-45℃下攪拌該溶液約30分鐘。加入NH4Cl(1.7g)(約32mmol)，并且將該混合物逐漸加溫到室溫。使氨蒸發(fā)一整夜。反應(yīng)混合物的TLC顯示約30％至約40％產(chǎn)物產(chǎn)率。對該反應(yīng)混合物進行研究(worked-up)。加入冷水(100ml)并將溫度從約18℃增加至約24℃。然后用6NHCl酸化該溶液至pH為約3。用乙酸乙酯(2×80ml)萃取溶液。將乙酸乙酯層混合，用鹽水洗滌，通過無水Na2SO4干燥并過濾。在真空下除去溶劑。得到了淺黃色油的中間體產(chǎn)物。實施例II(b)在通氮氣/排氮氣下將8-甲基-6-壬炔酸、無水四氫呋喃和叔丁醇加入到在裝有磁力攪拌器、丙酮-干冰冷凝器和溫度計的250ml三口RB燒瓶中。將溶液冷卻到約-50℃。在-40℃下將氨冷凝到反應(yīng)燒瓶中。約10分鐘內(nèi)一片一片地加入鈉的薄片。將該溶液加溫到約-33℃并攪拌約2小時。反應(yīng)混合物的TLC表明約30％至約40％產(chǎn)物產(chǎn)率。加入另外的鈉(約0.3g)。逐漸蒸發(fā)NH3。將反應(yīng)混合物逐漸加溫到室溫并攪拌一整夜。加入NH4Cl(1g)并攪拌該溶液約30分鐘。然后用水驟冷并用乙酸乙酯(2×60ml)萃取。將乙酸乙酯萃取物混合并用鹽水洗滌，通過無水Na2SO4干燥并過濾，在真空下除去溶劑。得到了淺黃色油的中間體產(chǎn)物。實施例II(c)在通氮氣/排氮氣下將8-甲基-6-壬炔酸加入到裝有機械攪拌器、冷凝器和溫度計的250ml三口RB燒瓶中。將溶液冷卻到約-40℃。向該燒瓶中加入冷凝的氨，攪拌混合物直至得到了溶液。一片一片地加入鈉直到獲得了藍色的混合物。加入NH4Cl并攪拌所得混合物一整夜以蒸發(fā)NH3。加入水(100ml)和乙酸乙酯(60ml)。然后用6NHCl酸化該溶液至其pH為約3。將有機層分離并且用乙酸乙酯(60ml)萃取含水層。將乙酸乙酯層混合，用鹽水洗滌并通過無水Na2SO4干燥。實施例II(d)用無水四氫呋喃(200ml，不含阻聚劑)和無水叔丁醇(7ml)稀釋8-甲基-6-壬炔酸(10g；約10ml)。將該混合物冷卻到約-50℃。將氨(約300-400ml)冷凝到該混合物中。在30分鐘內(nèi)一片一片地加入鋰(3-4g)。在加入鋰30分鐘后反應(yīng)混合物的TLC表明不存在原料。然后在氬氣下攪拌該反應(yīng)混合物一整夜以除去NH3蒸發(fā)物。進一步的TLC表明存在一些副產(chǎn)物。加入無水四氫呋喃(約200ml)，接下來加入NH4Cl(約30g)。攪拌混合物30分鐘。將冰水(約400ml)一部分一部分地加入到該混合物中。然后用乙酸乙酯(3×300ml)萃取該混合物。反應(yīng)混合物的TLC表明兩次萃取就足夠了。將開始的兩種萃取物混合，用鹽水(200ml)洗滌，通過無水Na2SO4干燥并且過濾。然后在約35℃真空下除去溶劑，這樣產(chǎn)生了約7.8g的黃色油的中間體產(chǎn)物。實施例II(e)在氬氣通入/排出下將8-甲基-6-壬炔酸(4g)、無水四氫呋喃(120ml，不含阻聚劑)和叔丁醇(2.8ml)加入到裝有冷凝器、溫度計和磁力攪拌器的1L三口RB燒瓶中。將該溶液冷卻到約-55℃至約-45℃。將NH3(約150-200ml)冷凝到反應(yīng)燒瓶中。在-60℃至約-45℃下一片一片地加入鋰(0.1-0.15g/ea.)，并且攪拌該混合物直至在加入下一片鋰之前深藍色消失。在加入0.4g鋰之后的TLC顯示約40％至約50％的轉(zhuǎn)化率。然后加入另外的鋰(0.75g)，并通過TLC觀察結(jié)束。將該反應(yīng)混合物另外攪拌一小時(溫度-45℃至-42℃)。在約-45℃至約-42℃下一部分一部分地加入NH4Cl(2g)。逐漸將混合物加溫到室溫。該反應(yīng)混合物的TLC表明純凈(clean)的產(chǎn)物。將該反應(yīng)混合物冷卻到約5℃并且用冰水(200ml)驟冷。將溫度升高到約25℃。然后用6NHCl(在25℃下一部分一部分地加入約50ml)酸化溶液至其pH為約2-約3。然后用乙酸乙酯(2×300ml)萃取該混合物。將乙酸乙酯層混合，用鹽水(200ml)洗滌，通過無水Na2SO4干燥并過濾。在約30℃真空下濃縮干燥的混合物，得到了淺黃色油的中間體產(chǎn)物(wt.＝3.8g)。通過快速柱色譜法使用硅膠(約100至約110g)純化該中間體產(chǎn)物，并且用1∶3的乙酸乙酯/己烷的混合物洗脫。將含有所需產(chǎn)物的收集物混合。在真空下除去溶劑，得到了淺黃色的中間體產(chǎn)物(wt.＝3.7g)。實施例II(f)在氬氣通入/排出下將8-甲基-6-壬炔酸(4g)、無水四氫呋喃(120ml，不含阻聚劑)和叔丁醇(2.8ml)加入到裝有冷凝器、溫度計和磁力攪拌器的1L三口RB燒瓶中。將該溶液冷卻到約-55℃至約-45℃。將NH3(約150-200ml)冷凝到燒瓶中。在約-65℃至約-50℃下約1小時40分鐘內(nèi)加入鋰(約4-5g)。然后在-35℃下攪拌所形成的混合物約30分鐘并且通過TLC監(jiān)控，直至觀察到原料的消失。用NH4Cl(約20g)一部分一部分地對該溶液驟冷直到藍色消退。逐漸將該混合加溫到室溫并且攪拌一整夜。一部分一部分地加入冰水(約400ml)并且用6NHCl(約150ml)酸化所形成的溶液使其pH達到約2-約3。用乙酸乙酯(2×400ml)萃取該混合物。用鹽水(300ml)洗滌該萃取物，通過無水Na2SO4干燥，過濾并且在真空下濃縮，得到淺黃色的油(wt.＝14.2g)。用柱色譜法使用硅膠(約300-350g)純化，并且用1∶2的乙酸乙酯/己烷的混合物洗脫該粗產(chǎn)物。混合該收集物并且在真空下除去溶劑，在真空下干燥該產(chǎn)物以得到12.2g(86％產(chǎn)率)的中間體產(chǎn)物。實施例II(g)在氬氣下將四氫呋喃(200ml，不含阻聚劑)、酸(14g)和叔丁醇(7.7g)加入到裝有機械攪拌器、附加漏斗和溫度計的1L三口RB燒瓶中。用干冰/丙酮浴將所形成的溶液冷卻到-50℃。將氨(約200ml)冷凝到反應(yīng)混合物中。然后一部分一部分地向該燒瓶中加入鋰直到藍色持久。在低于-35℃下攪拌該反應(yīng)混合物并通過TLC監(jiān)控，直至觀察到原料的完全轉(zhuǎn)化。通過在-40℃加入20g氯化銨來驟冷該反應(yīng)。氣相色譜確認了僅僅合成了反式(E)異構(gòu)體。在加溫到室溫并且在10hr的時間內(nèi)蒸發(fā)氨之后，加入冰水(400ml)，然后用6NHCl酸化該混合物至pH為2-3。然后用乙酸乙酯(2×400ml)萃取該混合物。對混合的有機物用鹽水(300ml)洗滌并通過硫酸鈉(100g)干燥，過濾并且在真空下濃縮，得到第二中間體產(chǎn)物。該第二中間體產(chǎn)物是淺黃色的油，在硅膠柱上用快速色譜對其純化，得到12.2g的純反式8-甲基-6-壬烯酸的黃色油(86％產(chǎn)率)。第二中間體產(chǎn)物的光譜數(shù)據(jù)如下1HNMR(CDCl3)δ5.43-5.29(m，2H)、2.35(t，2H)、2.22(m，1H)、2.02(m，2H)、1.65(m，2H)，1.41(m，2H)，0.95(d，6H)。MS169(M--1)。實施例II(h)在氬氣下將8-甲基-6-壬炔酸(225g)、無水四氫呋喃(2.7L，不含阻聚劑)和叔丁醇(154ml)加入到裝有冷凝器、溫度計和機械攪拌器的22L的四口RB燒瓶中。將該混合物冷卻到約-55℃至約-45℃。將氨(約4L)冷凝到燒瓶中。在不超過-33℃的溫度下一部分一部分地加入鋰(約30-35g)，在保持深藍色下攪拌不少于30分鐘。一部分一部分地加入NH4Cl(143g)。逐漸將所形成的混合物加溫到室溫并且使氨蒸發(fā)。一部分一部分地加入冰水(3L)。使用6NHCl將所形成的混合物酸化到pH≤3，并且用乙酸乙酯(2×4.5L)萃取該混合物。將有機層混合，用鹽水(5L)洗滌，通過硫酸鈉干燥并過濾。在真空下除去溶劑得到粗產(chǎn)物。通過Biotage柱色譜法(乙酸乙酯/己烷1∶3)純化該粗產(chǎn)物，得到了214g(94％)淺黃色油的產(chǎn)物。氣相色譜確認了反式/順式(E/Z)的比率為約94∶3至約94∶5。步驟38-甲基-6-壬烯酸的活化合成反式辣椒素的第三步驟涉及通過活化8-甲基-6-壬烯酸來合成第三中間體(?；u)。8-甲基-6-壬烯酸在實驗室中通過以下實施例III(a)-(c)被成功地轉(zhuǎn)化為成?；u。實施例III(a)將8-甲基-6-壬烯酸加入到裝有冷凝器、附加漏斗、溫度計和磁力攪拌器的50ml的三口RB燒瓶中。在室溫下約25分鐘內(nèi)滴加亞硫酰氯(SOCl2)3.9ml。然后用水浴在約50℃至約60℃下加熱該溶液約1小時。在約40℃至約45℃真空下除去過量的亞硫酰氯，得到了約3g第三中間體產(chǎn)物(?；龋粶\棕黃色的油)。實施例III(b)將8-甲基-6-壬烯酸(12g)加入到裝有磁力攪拌器、附加漏斗、冷凝器和溫度計的100ml的三口RB燒瓶中。在室溫、氮氣下30分鐘內(nèi)滴加亞硫酰氯(15.5ml)。然后加熱該溶液約1小時以使溫度從約50℃達到約60℃，或產(chǎn)生棕色溶液的約74℃。在約40℃至約42℃下真空中除去過量的亞硫酰氯，得到約13.4g棕色的油。然后在40℃真空下干燥該中間體產(chǎn)物1小時。實施例III(c)將8-甲基-6-壬烯酸(12g)加入到裝有磁力攪拌器、附加漏斗、冷凝器和溫度計的100ml的三口RB燒瓶中。然后在30分鐘的時間內(nèi)滴加亞硫酰氯(25.2ml)。隨后在1hr的時間內(nèi)將該反應(yīng)混合物加熱到約65-74℃。在真空下除去過量的亞硫酰氯，得到粗制的?；犬a(chǎn)物。然后將該粗制?；犬a(chǎn)物用于第四合成步驟中，而不進一步純化以產(chǎn)生反式辣椒素。實施例III(d)用亞硫酰氯(419g)處理8-甲基-6-壬烯酸(200g)。然后在約70℃下加熱反應(yīng)混合物約1hr。在真空下除去多余的亞硫酰氯，得到249g粗產(chǎn)物。然后將粗制的?；犬a(chǎn)物用于第四合成步驟中，不進行進一步純化。步驟4將芐胺衍生物偶聯(lián)到?；u合成反式辣椒素的第四個步驟涉及通過偶聯(lián)芐胺衍生物到?；u上來合成反式辣椒素的最終產(chǎn)物。芐胺衍生物是在實驗室里通過以下實施例IV(a)-(c)而成功地偶聯(lián)到?；u上的。實施例IV(a)在氮氣下將4-羥基-3-甲氧基芐胺HCl鹽(3.35g)和二甲基甲酰胺(10ml)加入到裝有附加漏斗、溫度計和磁力攪拌器的100ml的三口RB燒瓶中。在室溫下一部分一部分地加入5NNaOH(7ml)。在35℃下攪拌該混合物30分鐘。然后將該混合物冷卻到約0℃至約5℃。在約0℃至約5℃或10℃下20分鐘內(nèi)滴加入無水乙醚(30ml)中的?；?在步驟3中生產(chǎn)的)。加入另外的5ml無水二甲基甲酰胺。逐漸將該混合物加溫到室溫并且在氮氣下攪拌一整夜。加入水(150ml)。用乙酸乙酯(1×100ml和1×50ml)萃取該混合物。用1NHCl(2×60ml)、接下來用飽和NaHCO3(2×100ml)和鹽水洗滌乙酸乙酯的萃取物。然后通過無水Na2SO4干燥該萃取物并且過濾。在約35℃至約40℃真空下除去溶劑，得到稠的淺橙色/粉紅色的殘留物(wt.＝3.4g)。通過柱色譜法使用約150-約160g的硅膠純化該粗產(chǎn)物，并且用1∶1的乙酸乙酯/己烷的混合物洗脫。混合來自柱型純化的收集物，在約40℃真空下濃縮，并在真空下干燥，得到了3.1g需要的白色固體產(chǎn)物。實施例IV(b)在氮氣下將4-羥基-3-甲氧基芐胺鹽酸鹽(13.4g)和二甲基甲酰胺(40ml)加入到裝有機械攪拌器、附加漏斗和溫度計的500ml的三口RB燒瓶中。將該混合物冷卻到約10℃。用冰水浴一部分一部分地加入5N的NaOH(28ml)。在約20℃下攪拌該溶液30分鐘，然后冷卻到5℃。在5℃下約1小時內(nèi)滴加無水乙醚中的酰基氯(120ml)(溫度被升高到約7℃)。逐漸將該溶液加溫到室溫并且攪拌一整夜。加入水(400ml)，然后用乙酸乙酯(1×400ml和2×200ml)萃取所形成的混合物。萃取物的TLC表明兩次乙酸乙酯萃取就足夠了。用1NHCl(2×200ml和1×100ml)洗滌該乙酸乙酯萃取物。然后用飽和NaHCO3(2×200ml和200ml)、鹽水洗滌有機層，通過無水Na2SO4干燥并且過濾。在真空下除去溶劑并且用醚(×2)共同蒸發(fā)該殘留物，產(chǎn)生了約21g淺棕色粘稠的殘留物粗產(chǎn)物(wt.＝20.2g)。在真空下干燥該殘留物(wt.＝20.2g)一整夜。通過柱色譜法使用約600g硅膠純化所述產(chǎn)物，并且用i)2∶3的乙酸乙酯/己烷的混合物(2L)；ii)1∶1的乙酸乙酯/己烷的混合物(3L)和iii)3∶2的乙酸乙酯/己烷的混合物(3L)洗脫以獲得粗制的化合物。混合收集物，在約40℃真空下除去溶劑。用醚(x2)共蒸發(fā)該產(chǎn)物，并且在真空下干燥一整夜，得到了需要的白色固體產(chǎn)物(wt.＝14.1g，65％產(chǎn)率)。HPLC96％純度。還將復(fù)合(overlap)的收集物混合并在真空下除去溶劑，得到2.4g較低純度的產(chǎn)物。而且還分離和表征酯的副產(chǎn)物(1.4g)。在本發(fā)明的其它實施方案中，在加入NaHCO3后通過用2N的NaOH處理的粗產(chǎn)物純化在試管規(guī)模上進行檢測?？梢园l(fā)現(xiàn)產(chǎn)生的鹽可溶解于乙酸乙酯中。此外發(fā)現(xiàn)，當(dāng)向反應(yīng)混合物中加入?；鹊臅r侯，控制反應(yīng)溫度(約5-10℃)是更好的。實施例IV(c)在氮氣下將4-羥基-3-甲氧芐胺鹽酸鹽(13.4g)和二甲基甲酰胺(40ml)加入到裝有機械攪拌器、附加漏斗和溫度計的500ml的三口RB燒瓶中。將溶液冷卻到約10℃并滴加5N的氫氧化鈉28ml以使內(nèi)部溫度保持在20℃以下。在20℃攪拌該溶液30分鐘，然后冷卻到5℃。一旦冷卻下來，在1小時的時間內(nèi)加入?；?13.3g)在乙醚(120ml)中的溶液，同時保持內(nèi)部溫度為3-7℃。然后在20℃攪拌該反應(yīng)混合物12小時。用水(400ml)和乙酸乙酯(2×200ml)洗滌反應(yīng)混合物。用1N的HCl(2×200ml)、飽和碳酸氫鈉(2×200ml)和飽和氯化鈉(200ml)洗滌混合的有機物然，后通過硫酸鈉干燥。在真空下除去溶劑，產(chǎn)生了粉紅色的固體，通過快速色譜法使用硅膠和乙酸乙酯/己烷的混合物(2∶3至3∶2)純化。將純級分混合，重量為相應(yīng)于65％產(chǎn)率的14.1g(HPLC＝96％范圍％純度)。在某些其它的實施方案中，由于粗產(chǎn)物是直接結(jié)晶處理的，所以可以在第四步驟中優(yōu)選地避免快速色譜法，由此得到了高純度和高回收率的產(chǎn)物。使用乙醚/己烷(1∶2，150ml)在40-45℃下對通過上面所描述的方法獲得的反式辣椒素重結(jié)晶。在2小時的時間段內(nèi)將該混合物冷卻到室溫。過濾白色的沉淀物并將其干燥到恒重(重量＝12.7g(產(chǎn)率＝91％))。反式辣椒素產(chǎn)品的光譜數(shù)據(jù)如下1HNMR(CDCl3)δ6.86-6.75(m，3H)、5.82(brs，2H)、5.35-5.32(m，2H)、4.34-4.32(d，2H)、3.86(s，3H)、2.22-2.17(m，3H)、2.00-1.95(m，2H)、1.75-1.65(m，2H)、1.45-1.35(m，2H)、0.95(d，6H)；MS＝306(M+1)。C18H27NO3的分析；C，70.79；H，8.91；N，4.59；發(fā)現(xiàn)C，70.94、H，8.94、N，4.75。合成的反式辣椒素的HPLC純度(面積％)為98％。實施例IV(d)在氬氣下將4-羥基-3-甲氧基芐胺鹽酸鹽(245g)和二甲基甲酰胺(700ml)加入到裝有機械攪拌器、附加漏斗和溫度計的12L的四口RB燒瓶中。然后將該懸浮體冷卻到10℃，并在低于20℃的溫度下滴加5N的氫氧化鈉(494ml)。將該溶液冷卻到約10℃且攪拌30分鐘，然后冷卻到約5℃。在約5℃下滴加酰基氯(249g)在乙醚(1.7L)中的溶液。逐漸將反應(yīng)混合物加溫到室溫并且攪拌一整夜。將該反應(yīng)混合物在1NHCl(5L)和乙酸乙酯(5L)中分開。分開水性層并用乙酸乙酯(5L)萃取?；旌嫌袡C層，用1N的HCl(5L)、飽和的碳酸氫鈉(3×5L)和鹽水(5L)洗滌，然后通過硫酸鈉干燥并且過濾。在真空下除去溶劑以得到粗產(chǎn)物。通過從乙醚/己烷(1∶2)兩次重結(jié)晶而對該粗產(chǎn)物進行純化，得到237g(66％產(chǎn)率)所需的產(chǎn)物。HPLC確認了反式/順式(E/Z)的比率為約98∶0.9。通過重結(jié)晶純化辣椒素實施例V(a)將粗辣椒素(1g；HPLC91％)溶解于1∶2乙醚/己烷的混合物(15ml)中。將該混合物加熱到約40℃至約42℃以溶解該固體。在攪拌的同時將該混合物逐漸冷卻到室溫。得到了米色的顆粒。在室溫下攪拌該懸浮體約2小時。過濾固體，得到米色的固體(wt.＝0.74g)。實施例V(b)在約40℃至約45℃將辣椒素(14g)溶解于1∶2乙醚/己烷的混合物(150ml)中。將溶液逐漸冷卻到室溫。形成了白色的沉淀物。然后在室溫下攪拌該混合物約2小時。過濾懸浮體，用1∶2乙醚/己烷的混合物洗滌并且在室溫真空下干燥約2小時，以提供白色固體(wt.＝12.7g；91％回收率)。實施例V(c)將乙醚/己烷(1∶2，2.5L)加入到粗辣椒素(337g)中。將所形成的混合物冷卻到約10℃并攪拌約2小時。過濾固體，用乙醚/己烷(1∶2)洗滌并且以相似的方式從乙醚/己烷(1∶2)中再次重結(jié)晶，得到237gHPLC純度為98％、E/Z比率為98∶0.9的所需的辣椒素。辣椒素的半制備純化實施例VI(a)在實施例VI(a)中通過HPLC純化10g辣椒素。該等張條件是在10ml/分鐘的流動速率下甲醇/水(57∶43)。所使用的柱子是WatersSymmetryPrepC18(300×19mm，7μ)，序號T22981A04。A.HPLC方法中所用的材料如下1.裝置帶UV檢測器的GilsonHPLC系統(tǒng)GilsonUV/Vis檢測器型號#119序號109H7D083GilsonDynamic攪拌器型號#811C序號369H7T264Gilson界面型號#506序號369J7PA383Gilson液體處理器型號#215序號259G7272GilsonValvemate型號#610序號339H7A1092.化學(xué)品甲醇批號43080313，EMScience，HPLC級水批號43010，EMScience，HPLC級乙腈批號42165226，EMScience，HPLC級TEA批號CE619，BurdickandJacksonTFA批號X07476JTBakerB.用于HPLC方法的試驗步驟如下1.試樣的制備用1mLHPLC級甲醇溶解500mg純度為95.4％的辣椒素試樣。所制備的用于純化的試樣的濃度為約500mg/mL。2.用于純化的HPLC的條件純化使用的SymmetryPrepC18300×19mm-7微米如下流動相57％甲醇/43％水流動速率10.0mL/min運行時間100分鐘注射量400μL波長281nm3.用于分析的HPLC條件使用SynergiHydroRP，80A，250×4.6mm和4微米的柱進行如下純度檢驗流動相梯度A水+0.1％TEA+0.1％TFAB乙腈時間％A％B01000105248305248400100500100流動速率1ml/min運行時間50分鐘注射體積10μL波長281nmC.結(jié)果該半制備純化方法被證實是非常成功的。辣椒素的最終純度為99.86％?；厥樟思s7.29g辣椒素。當(dāng)使用1g原料進行可行性研究的時候，所處理的粗制原料的實際量為約9克?？偟幕厥章适羌s81％。實施例VI(b)在實施例VI(b)中用反相半制備HPLC方法進一步純化辣椒素。A.該HPLC方法中所用的材料如下1.HPLC體系和溶劑a.帶UV檢測器的HitachiHPLC系統(tǒng)Intelligent泵型號L-7100序號1158-047二極管陣列檢測器型號L-7455序號1005-030自動取樣器型號L-7255序號1128-005界面D-7000序號1127-021脫氣裝置(ERC)N/A序號102899N0880b.HPLC柱(Waters)分析柱SymmetryC18，250×4.6mm5μ序號W20801D041半制備的柱SymmetryC18，300×29mm7μ序號T20101N07c.HPLC溶劑(EMScience)MeOHHPLC級，批號42213232H2OHPLC級，批號42347B.用于HPLC方法的試驗步驟如下1.為純化而開發(fā)的HPLC方法為進一步純化進行廣泛分析性HPLC方法的開發(fā)。所評價的普通HPLC條件總結(jié)如下流動速率1.0mg/ml檢測器UV＝281nm溫度RT試樣濃度2mg/ml在ACN/H2O(1∶1)中所使用的HPLC柱和流動相總結(jié)在下面的表中在所開發(fā)的所有的方法當(dāng)中，用水中的等張52％MeOH的SymmetryC18(250×4.6mm，5μ)是優(yōu)選的。降二氫辣椒素(雜質(zhì))的停留時間是60.1分鐘，而辣椒素洗脫為69.1分鐘。由于只可以從市場上購得30cm長的半制備的HPLC柱，所以稍微改變該方法的流動相以適應(yīng)變化。2.通過半制備的HPLC純化含有1.7％雜質(zhì)的辣椒素a.試樣的制備將具有1.7％雜質(zhì)的粗辣椒素溶解于約20mL的HPLC級MeOH中。b.HPLC條件柱SymmetryC18(300×19mm，7μ)流動相A＝H2O；B＝MeOH洗脫等張57-58％MeOH溫度RT流動速率9.5ml/min注射體積400-450μl檢測器281nm(UV)C.結(jié)果通過評價粗辣椒素的色譜圖，發(fā)現(xiàn)雖然也觀察到了微量的后洗脫雜質(zhì)，但是降二氫辣椒素是主要雜質(zhì)。由于降二氫辣椒素和辣椒素都是在不早于60分鐘洗脫，因此使用復(fù)合注射手段來將純化周期縮短到45分鐘，從而也減少了溶劑損耗。在純化的過程中，收集級分并且通過分析HPLC來分析確認純度在99.0％以上。集中所有的純化級分并且通過在55-60℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)來使其干燥。該純化方法被證明是成功的。處理了最終純度超過99.9％的9.85克辣椒素。純化的總回收率是80％。實施例VII對比例最初，提出用于合成反式辣椒素的四步驟方法，該方法包括a)形成二價陰離子；b)烷基化該二價陰離子；c)還原該二價陰離子；以及d)偶聯(lián)到芐胺衍生物以獲得反式辣椒素。該四步驟方法如下在第一步檢測中，嘗試首先使用2-碘丙烷作為烷基化試劑，并且使用LDA、NaH和LiNH2作為堿來形成烯烴陰離子。僅僅回收了開始的6-庚炔酸。這些結(jié)果提示從異丙基碘(E2)中脫除HI是特有的，而不是所希望的親核取代形成所需的異丙基炔。用2-溴丙烷和甲磺酸異丙酯作為烷基化試劑及用NaH和正丁基鋰/AlCl3作為堿進一步檢測6-庚炔酸的烷基化。在這些條件下沒有觀察到希望的產(chǎn)物。在其它的烷基化檢測中，檢測了二價陰離子的形成。具體而言，用LDA(3當(dāng)量)在相似于前面的異丙基鹵化物反應(yīng)的條件下處理6-庚炔酸(2g)。然后用芐基溴處理該反應(yīng)混合物。確認了產(chǎn)物的形成。然而，在另外的方法中，檢測了6-庚炔酸的羧酸基原酸酯保護和接下來的該炔官能的烷基化。分別用正丁基鋰和乙基氯化鎂作為堿、用300mg6-庚炔酸的原酸酯、用芐基溴的烷基化作為模型反應(yīng)。使用正丁基鋰堿生產(chǎn)的產(chǎn)物/原料化合物的比率為7∶2。使用乙基氯化鎂生產(chǎn)了少量的產(chǎn)物/原料比率為1∶2的產(chǎn)物。在另外的檢測中，分別使用釤碘化釤(SmI2)和乙基溴化鎂在300mg的規(guī)模內(nèi)用異丙基碘化物烷基化原酸酯的格利雅、釤媒介的烷基化。從每個反應(yīng)中都沒有觀察到產(chǎn)物形成。在另外的檢測中，通過維悌希反應(yīng)和接下來的異構(gòu)化作用合成反式8-甲基-6-壬烯酸。通過用乙醚/己烷(1∶3)結(jié)晶純化粗制的辣椒素(1.4g粘油，約84％的反式和12％的順式異構(gòu)體)，得到了0.4g米色固體。HPLC顯示了91.5％的純度以及91.5/6.7的反式/順式比率。該順式異構(gòu)體顯示了較低的結(jié)晶，而從稠的殘留物中得到了混合物(0.3g)。在另外的檢測中，檢測了在格利雅條件下用異丙基溴烷基化6-庚炔酸的原酸酯，但是沒有生成希望的產(chǎn)物。在前面的說明書中，參照具體的示范性實施方案和它們的實施例描述了本發(fā)明。然而，很顯然在不偏離本發(fā)明的更寬的精神和范圍下，可以如下面的權(quán)利要求中所列出的那樣進行各種修改和變動。相應(yīng)地，說明書和附圖應(yīng)該被認為是解釋性的而不是限制性的。權(quán)利要求1.一種用于制備反式辣椒素的方法，其包括a)用鹵戊酸烷基化3-甲基丁炔以得到8-甲基-6-壬炔酸；b)還原所述8-甲基-6-壬炔酸以得到反式8-甲基-6-壬烯酸；c)活化所述8-甲基-6-壬烯酸以得到?；u或者活化的酸的衍生物；和d)用所述?；u酰化4-羥基-3-甲氧基芐胺鹽酸化物以得到反式辣椒素。2.權(quán)利要求1的方法，其中步驟a)包括用ω-鹵代鏈烷酸烷基化3-甲基丁炔以得到ω-炔酸類似物。3.權(quán)利要求1的方法，其中步驟a)包括以下步驟i)混合無水四氫呋喃和六甲基磷酰胺，并且將所述混合物冷卻到約-78℃至約-60℃；ii)向步驟i)的所述混合物中加入3-甲基丁炔，接下來在約-78℃至約-65℃的溫度下滴加堿以得到第二混合物；iii)在攪拌同時將所述的第二混合物加溫到約-30℃；和iv)在約-30℃的溫度下滴加鹵戊酸的無水四氫呋喃溶液，所述的鹵戊酸以足以將所述3-甲基丁炔轉(zhuǎn)化成所述8-甲基-6-壬炔酸的量加入，然后逐漸地加溫到室溫并攪拌，得到反應(yīng)混合物。4.權(quán)利要求2的方法，其進一步包括i)向所述反應(yīng)混合物中加入鹽酸，并且用乙酸乙酯萃取所述的反應(yīng)混合物；和ii)用鹽水洗滌所述經(jīng)萃取的反應(yīng)混合物以產(chǎn)生粗產(chǎn)物。5.權(quán)利要求3的方法，其進一步包括i)純化所述粗產(chǎn)物；和ii)在真空下除去溶劑，提供步驟a)的中間體產(chǎn)物。6.權(quán)利要求5的方法，其中所述粗產(chǎn)物是通過柱色譜法純化的。7.權(quán)利要求5的方法，其中所述粗產(chǎn)物是通過酸-堿萃取純化的。8.權(quán)利要求5的方法，其中所述粗產(chǎn)物是通過真空蒸餾純化的。9.權(quán)利要求5的方法，其中所述步驟a)的中間產(chǎn)物是8-甲基-6-壬炔酸。10.權(quán)利要求3的方法，其中所述鹵戊酸是選自以下組中溴戊酸、氯戊酸、氟戊酸、碘戊酸和砹戊酸、1-甲磺酰氧基戊酸、1-甲苯磺酰氧基戊酸。11.權(quán)利要求10的方法，其中所述鹵戊酸是溴戊酸。12.權(quán)利要求3的方法，其中1，2-二甲基-3，4，5，6-四氫-(1H)嘧啶酮替代步驟i)中的六甲基磷酰胺。13.權(quán)利要求4的方法，其中所述的堿選自以下組中正丁基鋰、仲丁基鋰、叔丁基鋰、二(異丙基)氨基鋰、氫化鈉、氨基鈉、氨基鋰、甲基鋰、甲基溴化鎂、乙基溴化鎂、烷基或芳基鹵化鎂或它們的混合物。14.權(quán)利要求13的方法，其中所述的堿是正丁基鋰。15.權(quán)利要求1的方法，其中步驟b)包括以下步驟i)將所述8-甲基-6-壬炔酸溶解于無水四氫呋喃和叔丁醇的混合物中以得到溶液，冷卻所述溶液到約-55℃至約-40℃；ii)向所述溶液中冷凝氨至溫度為-50℃至約-33℃；iii)在約-45℃至約-30℃的溫度下一片一片地加入鈉，并攪拌足夠長的時間以溶解所述的鈉，和iv)加入氯化銨，加溫到室溫并使氨蒸發(fā)，得到反應(yīng)混合物。16.權(quán)利要求15的方法，其中在步驟iii)后加入額外的鋰。17.權(quán)利要求15的方法，其中步驟iii)包括在約-65℃至約-45℃的溫度下加入鋰，并攪拌足夠長的時間以溶解所述的鋰。18.權(quán)利要求15的方法，其進一步包括i)向所述反應(yīng)混合物中加入水；ii)用鹽酸將所述反應(yīng)混合物酸化到pH為約2至約3；iii)用乙酸乙酯萃取所述反應(yīng)混合物，用鹽水洗滌并通過無水硫酸鈉干燥；和iv)過濾并且在真空下除去溶劑，得到步驟b)的中間體產(chǎn)物。19.權(quán)利要求18的方法，其中所述步驟b)的中間體產(chǎn)物是反式-8-甲基-壬烯酸。20.權(quán)利要求17的方法，其中省略步驟ii)。21.權(quán)利要求15的方法，其中用低級烷基胺取代步驟ii)的所述氨。22.權(quán)利要求15的方法，其中鈉替代了步驟iii)中的所述鋰。23.權(quán)利要求15的方法，其中仲丁醇(sec-BuOH)、乙醇(EtOH)或其它的烷基醇替換所述步驟i)的叔丁醇。24.權(quán)利要求15的方法，其中鋰和液氨或鈉和液氨代替所述鋰、所述四氫呋喃和所述液氨。25.權(quán)利要求17的方法，其進一步包括以下步驟i)攪拌所述反應(yīng)混合物一整夜以蒸發(fā)所述氨；ii)加入額外的無水四氫呋喃和氯化銨，攪拌所述的混合物足夠長的時間以中和過量的鋰；iii)一部分一部分地加入冰水；iv)用乙酸乙酯萃取所述混合物，用鹽水洗滌并通過無水硫酸鈉干燥；和v)過濾并在真空下除去溶劑，產(chǎn)生步驟b)的中間體產(chǎn)物。26.權(quán)利要求17的方法，其進一步包括以下步驟i)冷卻反應(yīng)混合物并用冰水驟冷；ii)用一部分一部分加入的鹽酸將所述反應(yīng)混合物酸化至pH為約2至約3；iii)用乙酸乙酯萃取所述反應(yīng)混合物，用鹽水洗滌并通過無水硫酸鈉干燥；iv)過濾并在約30℃的溫度下在真空中濃縮，得到粗產(chǎn)物。27.權(quán)利要求26的方法，其進一步包括通過快速柱色譜法純化所述產(chǎn)物而得到步驟b)的中間體產(chǎn)物。28.權(quán)利要求26的方法，其進一步包括通過真空蒸餾純化所述粗產(chǎn)物的步驟。29.權(quán)利要求1的方法，其中步驟c)包括以下步驟i)在室溫下向所述8-甲基-6-壬烯酸中滴加亞硫酰鹵以形成溶液；ii)在約50℃至約75℃下加熱所述溶液足夠長的時間，將所述8-甲基-6-壬烯酸轉(zhuǎn)化為?；u；和iii)在真空下除去過量的亞硫酰鹵，得到步驟c)的中間體產(chǎn)物。30.權(quán)利要求29的方法，其中所述亞硫酰鹵化物是亞硫酰溴。31.權(quán)利要求29的方法，其中所述的亞硫酰鹵化物是亞硫酰氯。32.權(quán)利要求29的方法，其中所述步驟c)的中間體產(chǎn)物是?；u。33.權(quán)利要求32的方法，其中所述?；u是?；?。34.權(quán)利要求32的方法，其中所述?；u是?；取?5.權(quán)利要求32的方法，其中所述?；u是經(jīng)活化的羧酸。36.權(quán)利要求35的方法，其中所述經(jīng)活化的羧酸是酰基咪唑。37.權(quán)利要求35的方法，其中所述經(jīng)活化的羧酸是碳二亞胺。38.權(quán)利要求1的方法，其中步驟d)包括以下步驟i)混合4-羥基-3-甲氧基芐胺鹽酸化物和二甲基甲酰胺；ii)在室溫下向步驟i)的所述混合物中一部分一部分地加入含水氫氧化鈉并攪拌，得到反應(yīng)混合物；iii)在約0℃至約10℃的溫度下加入?；u的無水乙醚溶液足夠長的時間，使所述?；u轉(zhuǎn)變成酰胺；和其后iv)逐漸將所述混合物加溫到室溫并且攪拌。39.權(quán)利要求38的方法，其進一步包括以下步驟i)向所述混合物中加入水并且用乙酸乙酯萃取所述混合物，得到乙酸乙酯萃取物；ii)用鹽酸洗滌所述萃取物，其后用碳酸氫鈉洗滌；iii)用鹽水洗滌所述溶液，并通過無水硫酸鈉干燥；iv)過濾并且在真空下除去溶劑，得到粗制反式辣椒素產(chǎn)品。40.權(quán)利要求39的方法，其進一步包括以下步驟i)通過柱色譜法純化所述粗產(chǎn)物，得到反式辣椒素產(chǎn)品。41.權(quán)利要求38的方法，其中氫氧化鉀、氫氧化鋰、碳酸鈉、碳酸鉀或烷基胺代替步驟ii)中所述的含水氫氧化鈉。42.權(quán)利要求38的方法，其中4-羥基-3-甲氧基芐胺代替步驟i)中所述的4-羥基-3-甲氧基芐胺鹽酸化物。43.權(quán)利要求41的方法，其中所述烷基胺選自以下組中三乙胺、Hunig堿、4-二甲基氨基吡啶和吡啶。44.權(quán)利要求38的方法，其中四氫呋喃、2-二甲氧基乙烷、乙腈、二氯甲烷、氯仿或甲基乙基酮代替步驟i)中的所述二甲基甲酰胺。45.一種純化權(quán)利要求35中的反式辣椒素產(chǎn)品的方法，其包括以下步驟i)將所述粗制反式辣椒素產(chǎn)品溶解于乙醚/己烷的混合物中，并且加熱所述混合物到約40℃至約45℃；ii)將所述混合物冷卻到室溫或室溫以下；和iii)過濾所述混合物以提供經(jīng)純化的反式辣椒素產(chǎn)品。46.權(quán)利要求45的方法，其中步驟iii)包括過濾所述混合物，所述混合物用乙醚/己烷的混合物洗滌，并在真空下干燥以得到經(jīng)純化的反式辣椒素產(chǎn)品。47.權(quán)利要求1的方法，其進一步包括使用半制備的HPLC純化所述反式辣椒素。48.權(quán)利要求39的方法，其進一步包括使用半制備的HPLC純化所述粗制反式辣椒素產(chǎn)品。49.權(quán)利要求40的方法，其進一步包括使用半制備的HPLC純化所述的反式辣椒素產(chǎn)品。50.權(quán)利要求47的方法，其中使用半制備HPLC的純化提供了含有約97％或更高純度辣椒素的所要求的超純化反式辣椒素。51.權(quán)利要求47的方法，其中使用半制備HPLC的純化提供了含有約98％或更高純度辣椒素的所要求的超純化反式辣椒素。52.權(quán)利要求47的方法，其中使用半制備HPLC的純化提供了含有約99％或更高純度辣椒素的所要求的超純化反式辣椒素。53.通過權(quán)利要求47的方法制備的反式辣椒素產(chǎn)品。54.一種用于在人體或動物需要的部位緩解疼痛的辣椒素組合物，其主要由純反式辣椒素構(gòu)成。55.權(quán)利要求54的組合物，其中所述反式辣椒素用于治療傷害性疼痛、神經(jīng)性疼痛、來自神經(jīng)損傷的疼痛、來自神經(jīng)痛的疼痛、來自肌痛的疼痛、與疼痛的觸發(fā)點有關(guān)的疼痛、來自軟組織中的瘤的疼痛、與神經(jīng)傳遞素介質(zhì)失調(diào)綜合病癥以及與整形外科失調(diào)有關(guān)的疼痛。56.權(quán)利要求54的組合物，其中所述反式辣椒素用于治療選自以下組中的整形外科失調(diào)腳、膝、臀、脊骨、肩、肘、手、頭和頸的病癥。57.權(quán)利要求54的組合物，其中所述純反式辣椒素是以可以注射的制劑提供的。58.一種反式辣椒素化合物，其包含約97％或更高的反式辣椒素。59.一種反式辣椒素化合物，其包含約98％或更高的反式辣椒素。60.一種反式辣椒素化合物，其包含約99％或更高的反式辣椒素。61.一種包括超純化反式辣椒素化合物的藥物組合物，其包含約97％或更高的反式辣椒素、約98％或更高的反式辣椒素或約99％或更高的反式辣椒素以及適合滲透或注射的媒介物。62.權(quán)利要求61的藥物組合物，其中所述媒介物包括約20％的PEG300、約10mM的組氨酸和約5％的蔗糖水溶液，以用于注射。全文摘要本發(fā)明通過利用從合成反應(yīng)開始確定反式構(gòu)型，并在整個合成過程中都帶有所述反式構(gòu)型的方法，提供了一種合成辣椒素和/或辣椒素類化合物的反式異構(gòu)體的方法。文檔編號A61K31/165GK1852707SQ200480015966公開日2006年10月25日申請日期2004年4月8日優(yōu)先權(quán)日2003年4月8日發(fā)明者莎倫·麥基爾文,陳偉,普雷姆詹德蘭·H.·拉米亞,羅納德·伯奇,理查德·B.·卡特,蒂莫西·A.·安德森申請人:阿爾高克斯制藥公司