專利名稱：2,4－二(三氟乙氧基)吡啶化合物以及含有該化合物的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及口服對?；鵆oA膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶(ACAT)具有強抑制作用、對高脂血癥、各種動脈硬化癥等有預防及治療作用的2，4-二(三氟乙氧基)吡啶化合物以及含有該化合物的藥物及其制造中間體。
背景技術(shù)：
酰基CoA膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(ACAT)是促進由膽固醇合成膽固醇酯的酶，是對膽固醇的代謝和在消化道內(nèi)的吸收具有重要作用的酶。雖然目前作為抗高血脂癥藥物、抗動脈硬化藥物的大多數(shù)ACAT抑制劑是作用于小腸和肝臟的ACAT酶來促進血中膽固醇的降低的，但是它有引發(fā)腸道出血、腸管障礙、腹瀉和肝損傷的副作用的問題。
最近的研究表明，通過抑制在形成動脈硬化病灶中起重要作用的巨噬細胞的泡沫化，可期待動脈硬化病灶自身的萎縮。即在粥樣動脈硬化的病灶中觀察到泡沫化的巨噬細胞(膽固醇酯作為脂肪滴在細胞內(nèi)儲存)，該巨噬細胞的泡沫化與病變的進展密切相關(guān)。另外，在動脈硬化的病變部位，血管壁中存在的ACAT活性亢進，由于膽固醇酯儲存在血管壁中，因此血管壁的ACAT活性和動脈硬化癥密切相關(guān)(非專利文獻1)。
因此，由血管壁中的ACAT抑制劑引起的對膽固醇酯化的抑制，與游離膽固醇向血管壁的細胞內(nèi)的儲存相關(guān)，由于被儲存的游離膽固醇通過高密度脂蛋白(HDL)從細胞內(nèi)游離出來轉(zhuǎn)送至肝臟(由HDL形成的逆轉(zhuǎn)運)被代謝，因此可期待動脈硬化病變部位的膽固醇酯的儲存被抑制(非專利文獻2)。這樣抑制血管壁中存在的ACAT的ACAT抑制劑被認為具有直接的抗動脈硬化作用。
首先，本發(fā)明者認為選擇性地抑制血管壁中存在的ACAT，就可以成為比抑制巨噬細胞泡沫化的藥物副作用更小的動脈硬化癥的預防·治療劑，經(jīng)過認真的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，下面的通式(A)
(式中，Ar是可具有取代基的芳香基， 是表示可具有取代基的苯、吡啶、環(huán)己烷或者萘的2價殘基，X表示NH、氧原子或者硫原子，Y表示硫原子，Z表示單鍵等，1表示0～15的整數(shù)，m表示2或3的整數(shù)，n表示1～3的整數(shù))表示的化合物、其鹽或者它們的溶劑化物作為高脂血癥以及動脈硬化癥的預防·治療劑有用，是可選擇性抑制血管中存在的ACAT的化合物(專利文獻1)。
非專利文獻1Exp.Mol.Pathol.，44，329-339(1986)非專利文獻1Biochim.Biophys.Acta.200115，1530(1)111-122專利文獻1國際公開第98/54153號小冊子發(fā)明的揭示發(fā)明要解決的課題專利文獻1記載的化合物中，確認了下式(B)所示的化合物及其鹽具有高水溶性和強ACAT抑制作用，對各種動物模型均具有顯著的藥效。但是，以化合物(B)為代表的專利文獻1中記載的化合物，雖然以在動物實驗中的ACAT抑制作用為根據(jù)的藥效均優(yōu)良，然而在使用人肝臟微粒體的體外試驗中，發(fā)現(xiàn)代謝迅速，原型的殘存率低。這些事實表明人體中這些化合物的血濃度還是未知的。今年，從藥物相互作用的觀點來看，由于抗代謝性越高的化合物可成為安全性更高的藥物，因此希望出現(xiàn)在人肝臟微粒體中具有更高抗代謝性的化合物。
但是，化合物(B)具有多個一般在有機體內(nèi)易受代謝的官能基，由于這些官能基被認為對藥理活性的表現(xiàn)具有重要作用，因此維持ACAT抑制作用且提高代謝穩(wěn)定性的難度是非常大的。
解決課題的方法因此，本發(fā)明者為發(fā)現(xiàn)能改善對人肝臟微粒體的抗代謝性、口服吸收良好、且可得到高血濃度的化合物而進行了各種研究，結(jié)果意外發(fā)現(xiàn)下式(1)所示的2，4-二(三氟乙氧基)吡啶化合物與化合物(B)相比雖然水溶性較低，但是卻顯示了較高的血濃度(Cmax)和較大的血濃度時間曲線下面積(AUC)，以及良好的口服吸收性。另外，由于其還顯示了優(yōu)良的ACAT抑制活性，因此是作為高脂血癥以及動脈硬化癥的預防·治療劑有用的化合物，從而完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明提供了下述通式(1) (式中，X1表示氟原子或氫原子)所示的2，4-二(三氟乙氧基)吡啶化合物或其鹽及其制造方法。
另外，本發(fā)明提供了下述通式(2) (式中，X1表示氟原子或氫原子)所示的哌嗪化合物或其鹽。
另外，本發(fā)明提供了下述通式(4)
(式中，R1表示氫原子、氯乙?；逡阴；虻庖阴；?所示的吡啶化合物或其鹽。
另外，本發(fā)明提供了2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基-3-硝基吡啶。
另外，本發(fā)明提供了N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]-2-[4-(2-羥乙基)哌嗪-1-基]乙酰胺。
另外，本發(fā)明提供了由上述通式(1)所示化合物或其鹽為有效成分的藥物。
另外，本發(fā)明提供了上述通式(1)所示化合物或其鹽在藥物制備中的應用。
本發(fā)明還提供了動脈硬化癥的處置方法，該方法的特征在于，將有效量的上述通式(1)所示的化合物或鹽給藥。
發(fā)明的效果本發(fā)明化合物(1)選擇性地抑制血管壁中存在的ACAT，具有優(yōu)良的人肝臟微粒體代謝穩(wěn)定性，顯示良好的口服吸收性，作為高脂血癥以及動脈硬化癥的預防或者治療藥有用。
附圖的簡單說明[

圖1]是顯示化合物(1a)、(1b)以及化合物(B)鹽酸鹽對人肝臟微粒體代謝的穩(wěn)定性的圖。
實施發(fā)明的最佳方式本發(fā)明化合物(1)在結(jié)構(gòu)上的特征是，在苯并咪唑環(huán)上具有1個或2個氟原子，并且在吡啶環(huán)上具有2個2，2，2-三氟乙氧基。這種特殊的化學結(jié)構(gòu)在專利文獻1中完全沒有記載。
本發(fā)明包含以下兩種化合物以及它們的鹽。
作為本發(fā)明化合物(1)的鹽，可例舉鹽酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽等無機酸鹽，以及甲磺酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、枸櫞酸鹽、丁酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、抗壞血酸鹽、蘋果酸鹽、扁桃酸鹽、水楊酸鹽、泛酸鹽、鞣酸鹽、乙二磺酸鹽、苯磺酸鹽、p-甲苯磺酸鹽、谷氨酸鹽、天冬氨酸鹽、三氟醋酸鹽、雙羥萘酸鹽、葡糖酸鹽等有機酸鹽。
另外，本發(fā)明化合物(1)或其鹽也可以是溶劑化物的狀態(tài)。溶劑化物是加成了在制造、精制等時用到的溶劑、例如水、醇等的化合物，只要是對ACAT抑制作用等沒有不良影響的物質(zhì)，就沒有特別的限制。作為溶劑化物較好為水合物。
本發(fā)明化合物(1)例如可通過以下制造方法制得。
(式中，R表示保護基團，Y表示烷基或芳磺?；?，X1表示氫原子或氟原子，X2表示氯原子、溴原子或碘原子)即，使2，4-二氯-6-甲基-3-硝基吡啶(5)與2，2，2-三氟乙醇反應得到化合物(6)，還原該硝基得到化合物(7)，再通過使其與鹵代乙酸或其反應性衍生物反應得到化合物(3)。
另一方面，使保護氨基的哌嗪乙醇類(8)磺?；玫交衔?9)，使該化合物(9)與硫醇衍生物(10a)反應得到化合物(11)。再于磷化物存在下，使化合物(8)與硫醇衍生物(10a)或(10b)反應也可得到化合物(11)。通過使該化合物(11)的保護基(R)脫離可得到化合物(2)。
使以上得到的化合物(2)與化合物(3)反應可得到本發(fā)明化合物(1)。
因此，上述化合物(2)、下述化合物(4)以及上述化合物(2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基-3-硝基吡啶(6))作為本發(fā)明化合物(1)的制造中間體有用。
(式中、R1表示氫原子、氯乙?；?、溴乙?；虻庖阴；?以下將逐個說明上述各反應工序。
2，4-二氯-6-甲基-3-硝基吡啶(5)與2，2，2-三氟乙醇的反應是在作為溶劑的2，2，2-三氟乙醇中或2，2，2-三氟乙醇和二甲基甲酰胺(DMF)、四氫呋喃(THF)、二甲亞砜(DMSO)等的混合溶劑中，在碳酸鉀、碳酸鈉等碳酸堿金屬，氫氧化鉀、氫氧化鈉等氫氧化堿金屬或氫化鈉、氫化鉀、氫化鋰等氫化堿金屬等堿存在下，在室溫到回流溫度下維持5小時～24小時，較好的是在回流溫度下維持15～20小時而進行。
化合物(6)的還原較好為，1)由連二亞硫酸鈉、硫化鈉、硫化氫鈉、硫化氫等含硫還原劑引起的反應，2)由鋅、鐵、氯化亞錫等金屬還原劑引起的還原反應，或3)氫氣氛下的催化還原反應。由含硫還原劑引起的反應，例如可通過在異丙醇、乙醇、THF等溶劑中溶解化合物(6)，在80℃添加含硫還原劑的水溶液反應10分鐘～2小時來進行。由金屬還原劑引起的反應，例如可通過在乙醇、異丙醇等醇溶劑、醋酸以及它們的含水溶劑中溶解化合物(6)，在0～100℃反應30分鐘至24小時來進行。反應可根據(jù)必要添加鹽酸、硫酸等酸。另外，催化還原反應通過在二噁烷、醋酸、甲醇、乙醇、異丙醇等單一或混合溶劑中溶解化合物(6)，在拉奈鎳、鈀碳、氫氧化鈀、鈀黑等催化劑存在下，于氫氣氛下，在0～50℃反應30分鐘～12小時，較好為在室溫下反應30分鐘～3小時來進行。
作為與化合物(7)反應的鹵代乙酸，可例舉氯乙酸、溴乙酸、碘乙酸。作為鹵代乙酸的反應性衍生物，可例舉鹵代乙酰鹵、鹵代乙酸酐等。較好為使化合物(7)和鹵代乙酰鹵反應?；衔?7)和鹵代乙酰鹵的反應，可通過例如在二氯甲烷、氯仿、醋酸乙酯、乙腈、甲苯等溶劑中，在N，N-二甲替苯胺、三乙胺、吡啶、4-二甲基氨基吡啶、4-吡咯烷吡啶等堿的存在下，于0～50℃反應10分鐘～5小時，較好為在0℃反應10～60分鐘而進行。
由哌嗪乙醇類(8)到化合物(11)的合成可采用利用烷基或芳磺?；磻穆肪€a和利用磷化物引起反應的路線b。
路線a中，哌嗪乙醇類(8)的烷基或芳磺?；磻峭ㄟ^在DMF、THF、醋酸乙酯、乙腈等溶劑中，于三乙胺、吡啶、N，N-二異丙基乙胺、N，N-二甲替苯胺、4-二甲基氨基吡啶等堿的存在下，使用甲磺酰氯、苯磺酰氯、p-甲苯磺酰氯等磺酰氯作為烷基或芳磺酰化劑，在0～50℃反應30分鐘～3小時反應來進行。
在此，作為哌嗪乙醇類(8)的氨基的保護基(R)可使用在肽合成中所用的各種保護基。作為較好的保護基可例舉芐氧基羰基、2，2，2-三氯乙氧基羰基、叔丁氧基羰基等烷氧基羰基以及甲?；?。
化合物(9)和化合物(10a)的反應通過在DMF、DMSO、乙腈等溶劑中，于碳酸鉀、碳酸鈉等堿以及18-冠醚-6等催化劑的存在下，在室溫～100℃反應1～5小時，較好為在50～80℃反應1～2小時來進行。
路線b是通過在磷化物存在下，使哌嗪乙醇類(8)和硫醇衍生物(10a)或(10b)反應來進行。
作為磷化物，可例舉在光延反應中所用的膦試劑，該膦試劑和偶氮系試劑或馬來酸二甲酯、N，N，N’，N’-四甲基富馬酰胺等丁二酸試劑形成的磷試劑，鏻內(nèi)鎓鹽試劑等。
作為該路線b的較好方式，可例舉1)在膦試劑和偶氮系試劑或馬來酸二甲酯、N，N，N’，N’-四甲基富馬酰胺等丁二酸試劑存在下，使硫醇衍生物(10a)反應的方法(A法)；2)在鏻內(nèi)鎓鹽試劑存在下，使硫醇衍生物(10a)反應的方法(B法)；3)在膦試劑的存在下，使硫醇衍生物(10b)反應的方法(C法)。
<A法>
A法可通過在反應溶劑中溶解化合物(8)、硫醇衍生物(10a)以及膦試劑，在其中添加偶氮系試劑或丁二酸試劑，在氬氣或氮氣氛下，于0℃～100℃，較好為室溫～80℃反應2小時～24小時來進行。
作為本反應中所用的膦試劑，可例舉三甲基膦、三乙基膦、三丙基膦、三異丙基膦、三丁基膦、三異丁基膦、三環(huán)已基膦等三烷基膦以及三苯膦、二苯膦基聚苯乙烯等三芳基膦，其中較好為三甲基膦、三丁基膦、三苯膦。
作為偶氮系試劑，可例舉偶氮二羧酸二乙酯(DEAD)、1，1’-偶氮二(N，N-二甲基甲酰胺)(TMAD)、1，1’-(偶氮二羰基)二哌啶(ADDP)、1，1’-偶氮二(N，N-二異丙基甲酰胺)(TIPA)、1，6-二甲基-1，5，7-六氫-1，4，6，7-四腫-2，5-二酮(1，6-dimethyl-1，5，7-hexahydro-1，4，6，7-tetrazocin-2，5-dione，DHTD)等，特好為偶氮二羧酸二乙酯。
作為反應溶劑可使用DMF、THF、二噁烷、乙腈、硝基甲烷、丙酮、醋酸乙酯、苯、氯苯、甲苯、氯仿、二氯甲烷等，其中較好為DMF、THF、二噁烷、乙腈。特好為DMF、THF。
<B法>
B法可通過在反應溶劑中溶解化合物(8)、硫醇衍生物(10a)以及鏻內(nèi)鎓鹽試劑，在氬氣或氮氣氛下，于室溫～120℃較好為80℃～100℃反應2小時～12小時來進行。
作為本反應中所用的鏻內(nèi)鎓鹽試劑，可例舉烷?；鶃喖谆榛ⅰ⑼轷；鶃喖谆蓟?、烷氧基羰基亞甲基三烷基正膦、烷氧基羰基亞甲基三芳基正膦、氰基亞甲基三烷基正膦、氰基亞甲基三芳基正膦等。在此，作為三烷基可例舉三甲基、三乙基、三丙基、三異丙基、三丁基、三異丁基、三環(huán)己基等，作為三芳基可例舉三苯基、二苯基聚乙烯等。
另外，本反應也可以使用通過在反應溶劑中添加化合物(8)、硫醇衍生物(10a)、堿以及鹵化鏻試劑，在反應系中生成鏻內(nèi)鎓鹽試劑的方法。
作為在該情況下使用的鹵化鏻試劑，可例舉鹵化(氰基甲基)三烷基鏻、鹵化(氰基甲基)三芳基鏻、鹵化(烷基羰基甲基)三烷基鏻、鹵化(烷基羰基甲基)三芳基鏻、鹵化(烷氧基羰基甲基)三烷基鏻、鹵化(烷氧基羰基甲基)三芳基鏻等。
上述鹵化鏻試劑中，鹵化(氰基甲基)三烷基鏻、鹵化(氰基甲基)三芳基鏻可通過使相應的鹵代乙腈和相應的三烷基膦或三芳基膦反應而調(diào)制(テトラヘドロン、57卷、5451-5454頁、2001年)，其它的鹵化鏻試劑可通過使相應的烷?；u代甲基、烷氧基羰基鹵代甲基與相應的三烷基膦或三芳基膦同樣進行反應而調(diào)制。
作為在此所用的三烷基膦以及三芳基膦，可例舉與A法所示相同的物質(zhì)，其中較好為三甲基膦、三丁基膦、三苯基膦，特好為三甲基膦。
作為上述烷?；u代甲基的烷?；?，較好為甲酰基、乙酰基、丙?；⒍□；?，其中較好為乙酰基、丙?；?，作為烷氧基羰基鹵代甲基的烷氧基，可例舉甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等，其中較好為甲氧基、乙氧基、丁氧基。
另外，作為鹵原子較好為氯、溴、碘。
作為堿可例舉三乙胺、N，N-二異丙基乙胺、1，4-二氮雜二環(huán)[2，2，2]辛烷(DABCO)、1，8-二氮雜二環(huán)[5，4，0]十-碳-7-烯(DBU)、1，5-二氮雜二環(huán)[4，3，0]九碳-5-烯(DBU)等有機堿，碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸銫、碳酸鋰、二異丙基胺基鋰、六甲基硅氮化鉀(potassium hexamethyldisilazide)等無機堿，其中較好為N，N-二異丙基乙胺、碳酸鉀、二異丙基胺基鋰、六甲基硅氮化鉀，特好為N，N-二異丙基乙胺、碳酸鉀。
作為反應溶劑，較好為二噁烷、THF、甲苯、苯、DMF、DMSO、乙腈、丙腈等，特好為丙腈。
<C法>
C法通過在與A法相同的反應溶劑中溶解化合物(8)、硫醇衍生物(10b)以及膦試劑，在氬氣或氮氣氛下，于室溫～100℃較好為60℃～100℃反應2小時～48小時來進行。
本反應中所用的膦試劑是與A法所示相同的三烷基膦以及三芳基膦，具體可例舉三甲基膦、三乙基膦、三丙基膦、三異丙基膦、三丁基膦、三異丁基膦、三環(huán)己基膦、三苯基膦、二苯膦基聚苯乙烯等，其中較好為三甲基膦、三丁基膦、三苯基膦，特好為三甲基膦、三苯基膦。
另外，硫醇衍生物(10a)可通過上述專利文獻1中記載的方法或以此為基礎(chǔ)的方法而制造。硫醇衍生物(10b)可由該硫醇衍生物(10a)容易地制得。
化合物(11)的脫保護反應可通過與保護基相對應的已知方法，例如加水分解、還原反應等來進行。
以上所得的化合物(2)和化合物(3)的反應通過于碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸氫鉀、碳酸氫鈉等堿的存在下，在單一的DMF、THF、乙腈或它們的含水溶劑中，于室溫～50℃反應5小時～30小時，較好為在室溫下反應10～20小時來進行。
另外，本發(fā)明化合物(1)也可通過下述反應式所示的方法制得，即，使1-(2-羥乙基)哌嗪(12)和鹵代乙酰胺化合物(3)反應得到化合物(13)，再于磷化合物存在下使化合物(13)與硫醇衍生物(10a)或(10b)反應而得。
(式中、X1與上述相同)
化合物(12)和化合物(3)的反應是以由化合物(2)合成化合物(1)的方法為基準進行的。
化合物(13)與硫醇衍生物(10a)或(10b)的反應是以化合物(8)和硫醇衍生物(10a)或(10b)的反應為基準進行的。
因此，上述化合物(N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]-2-[4-(2-羥乙基)哌嗪-1-基]乙酰胺(13))作為本發(fā)明化合物(1)的制造中間體有用。
所得的本發(fā)明化合物(1)的分離精制方法可通過適宜組合洗滌、萃取、重結(jié)晶、各種色譜法等來進行。另外，轉(zhuǎn)化至前述酸加成鹽的變換可通過常用方法進行。
探討在體外對人肝臟微粒體的代謝時，如圖1所示，30分中后原型的殘存率相對于化合物(B)鹽酸鹽的16％，化合物(1a)為27％，化合物(1b)顯示62％的較高值。由此可以理解本發(fā)明化合物(1)對人肝臟微粒體的抗代謝性被大幅改善。
另外，研究對水的溶解度時，如表3所示，相對于化合物(B)鹽酸鹽，本發(fā)明化合物(1)的溶解度大幅下降。由此可見本發(fā)明化合物(1)的口服吸收性成為問題。
但是，使用雌雄大鼠進行口服實驗時，相對于化合物(B)鹽酸鹽，本發(fā)明化合物(1)卻意外地顯示了較高的值，血濃度(Cmax)為化合物(B)鹽酸鹽的2～3倍，藥時曲線下總面積(AUC)為化合物(B)鹽酸鹽的2～4倍。由此確認，與化合物(B)鹽酸鹽相比，本發(fā)明化合物(1)顯示了較高的口服吸收性。
此外，體外ACAT抑制活性如表1所示，本發(fā)明化合物(1)顯示與化合物(B)鹽酸鹽相同強度的抑制活性。
從以上的結(jié)果可知，由于本發(fā)明化合物(1)顯示與化合物(B)相同強度的ACAT抑制活性，與化合物(B)相比顯示了較高的人肝臟微粒體抵抗性以及較高的口服吸收性，因此，本發(fā)明化合物(1)作為高脂血癥以及動脈硬化癥的預防·治療劑有用本發(fā)明化合物(1)通過其優(yōu)良的ACAT抑制作用，可成為高脂血癥、動脈硬化癥、頸部以及腦動脈硬化癥、腦血管障礙、局部缺血性心臟疾病、局部缺血性腸疾病、冠狀動脈硬化癥、腎硬化癥、動脈硬化性腎硬化癥、惡性腎硬化癥、急性腸道膜血管閉塞癥、慢性腸管絞痛、局部缺血性大腸炎、大動脈瘤、閉塞性動脈硬化癥(ASO)等的預防以及治療藥。
使用本發(fā)明化合物(1)作為藥物時，可單獨使用本發(fā)明化合物(1)或其鹽，或者可使用在藥學上允許的賦形劑、粘合劑、稀釋劑等載體，制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、粉末劑、注射劑、栓劑等劑型。這些制劑可通過公知的方法制造。例如制成口服制劑時，可通過將本發(fā)明化合物(1)與淀粉、甘露醇、乳糖等賦形劑，羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素等粘合劑，結(jié)晶纖維素、羧甲基纖維素鈣等崩解劑，滑石粉、硬酯酸酸鎂等潤滑劑，輕質(zhì)硅酸酐等流動性提高劑等適當組合形成的處方來制造。
本發(fā)明的藥物可以經(jīng)口服或非口服給藥，較好為口服給藥。本發(fā)明的藥物的給藥量根據(jù)患者的體重、年齡、性別、癥狀等不同而不同，本發(fā)明化合物(1)的通常成人1日的給藥量為1～500mg，較好為5～200mg，較好為分1～3次給藥。
實施例以下，將例舉實施例更詳細地說明本發(fā)明，但本發(fā)明技術(shù)的范圍并不限于實施例。
制造例15，6-二氟-2-巰基苯并咪唑的制造在醋酸(100mL)以及濃鹽酸(2.3mL)中溶解4，5-二氟-2-硝基苯胺(5.75g，33.03mmol)，一邊在冰浴中劇烈攪拌一般在10分鐘之內(nèi)加入鋅粉(6.91g，105.6mmol)。在相同溫度下攪拌20分鐘后、再于室溫攪拌130分鐘。在相同的溫度下再在5分鐘內(nèi)加入鋅粉(1.20g，18.35mmol)，于相同溫度下攪拌30分鐘。減壓濃縮反應液，在飽和碳酸氫鈉水中中和所得殘渣，用硅藻土進行過濾。用氯仿萃取濾液，再用飽和食鹽水洗滌有機層。用無水硫酸鈉干燥后減壓濃縮，得到褐色油狀物質(zhì)(4.73g)。
在乙醇(200mL)中溶解該褐色油狀物質(zhì)，添加O-乙基黃原酸鉀(15.75g，98.25mmol)，加熱回流14小時。減壓濃縮反應液，在醋酸乙酯-1mol/L鹽酸中萃取所得殘渣，用飽和食鹽水清洗有機層。用無水硫酸鈉干燥后，減壓濃縮，通過氯仿-己烷使所得殘渣結(jié)晶化，得到呈淡褐色粉末的5，6-二氟-2-巰基苯并咪唑(5.58g，計算収率為91％)。
制造例21-叔丁氧基羰基-4-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪的制造在1-叔丁氧基羰基-4-(2-羥乙基)哌嗪(7.40g，32.13mmol)的THF(100mL)溶液中，于冰冷卻攪拌下依次加入三乙胺(4.36g，43.09mmol)、4-二甲基氨基吡啶(200mg，1.64mmol)以及甲磺酰氯(7.40g，38.76mmol)。升溫至室溫后攪拌50分鐘。過濾反應液，減壓濃縮濾液，在DMF(200mL)中溶解所得殘渣，在室溫下依次添加5，6-二氟-2-巰基苯并咪唑(5.00g，26.86mmol)、碳酸鉀(8.64g，62.51mmol)以及18-冠醚-6(500mg，1.92mmol)，于80℃攪拌90分鐘。減壓濃縮反應液后，用硅膠柱色譜法(硅膠200g，己烷∶丙酮＝8∶1～1∶1)精制所得殘渣。用丙酮-乙醚-己烷使其結(jié)晶化，得到1-叔丁氧基羰基-4-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪(7.26g，收率68％)的無色結(jié)晶。
mp 192.3-193.0℃IR(KBr)3061，2976，2836，1672，1475，1427(cm-1).
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.50(9H，s)，2.51-2.68(4H，m)，2.94(2H，t，J＝5.4Hz)，3.28(2H，t，J＝5.4Hz)，3.45-3.65(4H，m)，6.85-7.62(2H，m).
實施例11-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪·3三氟醋酸鹽的制造于冰冷卻攪拌下，用15分鐘在三氟醋酸(50mL)中添加、溶解1-叔丁氧基羰基-4-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪(7.26g，18.22mmol)。在冰冷卻下攪拌10分鐘后，向反應液中添加乙醚(100mL)以及己烷(100mL)，過濾分離所生成的結(jié)晶。用乙醇-乙醚對所得結(jié)晶進行重結(jié)晶，得到呈淡黃色粉末的1-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪·3三氟醋酸鹽(9.58g，収率82％)。mp 141.2-142.9℃IR(KBr)3417，3026，2749，2483，1671，1484(cm-1).
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ2.78-3.26(10H，m)，3.49(2H，t，J＝7.2Hz)，7.51(2H，t，J＝9.0Hz)，8.76(2H，m).
制造例31-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]-4-甲?；哙旱闹圃煸诒?50mL)中溶解1-甲?；?4-(2-羥乙基)哌嗪(1.11g，7.0mmol)、5，6-二氟-2-巰基苯并咪唑(1.30g，7.0mmol)、二異丙基乙胺(3.62g，28.0mmol)，添加氰基甲基三甲基碘化鏻(6.80g，28.0mmol)，在氬氣氛下于92℃攪拌1小時。放冷后，注入水(100mL)，用氯仿(100mL×3)萃取。用飽和食鹽水洗浄有機層，再用無水硫酸鈉干燥后，減壓下濃縮。用丙酮-乙醚使所得粗生成物結(jié)晶化，得到呈黃色結(jié)晶性粉末的1-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]-4-甲?；哙?.78g(収率78％)。
mp 197.0-198.0℃
IR(KBr)cm-13441，2825，1648，1476，1431，1363.
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.38(2H，t，J＝5.1Hz)，2.44(2H，t，J＝5.0Hz)，2.69(2H，t，J＝7.0Hz)，3.23-3.38(4H，m)，3.41(2H，t，J＝7.0Hz)，7，38-7.58(2H，m)，7.97(1H，s)，12.8(1H s).
MS(m/z)326(M+)，140(100).
實施例21-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪的制造在甲醇(20mL)中溶解1-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]-4-甲酰基哌嗪(1.70g，5.2mmol)，添加12N鹽酸(2mL)，在室溫攪拌18小時，減壓濃縮反應液，加入飽和氨-甲醇溶液在室溫攪拌5分鐘。將減壓濃縮溶劑所得的殘渣用硅膠柱色譜法(氯仿∶飽和氨-甲醇＝100∶3)精制，得到呈褐色油狀物的1-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪1.40g(収率90％)。
IR(KBr)cm-12925，2853，1664，1602，1478，1435，1364.
1H-NMR(CDCl3)δ2.61-2.82(4H，m)，3.00(2H，t，J＝4.8Hz)，3.10(4H，t，J＝4.8Hz)，3.16(2H，t，J＝4.8Hz)，7.16-7.42(2H，m).
MS(m/z)298(M+)，70(100).
制造例42，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基-3-硝基吡啶的制造在2，2，2-三氟乙醇(250mL)中溶解2，4-二氯-6-甲基-3-硝基吡啶(30g，144.9mmol)，添加碳酸鉀(50g，361.8mmol)，加熱回流21小時。用水稀釋反應液，用氯仿萃取。用飽和食鹽水洗浄有機層，在用無水硫酸鈉干燥后、經(jīng)減壓濃縮得到呈淡黃色固體的2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基-3-硝基吡啶(45.40g，収率94％)。
mp 72.8-73.2℃IR(KBr)3432，3111，2975，1610，1585，1535(cm-1).
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ2.50(3H，s)，4.49(2H，q，J＝7.7Hz)，4.85(2H，q，J＝8.3Hz)，6.53(1H，s).
元素分析C10H8F6N2O4計算值C，35.94；H，2.41；N，8.38，實測值C，35.94；H，2.45；N，8.49.
實施例3
3-氨基-2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶的制造攪拌下，于80℃在2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基-3-硝基吡啶(45.00g，134.7mmol)的異丙醇(300mL)溶液中添加連二亞硫酸鈉(78.00g，448.0mmol)的水(300mL)溶液，反應開始15分鐘后再添加連二亞硫酸鈉(16.50g，94.8mmol)的水(51mL)溶液，再于反應開始25分鐘后添加連二亞硫酸鈉(11.10g，63.8mmol)的水(51mL)溶液，再攪拌10分鐘。反應結(jié)束后向反應液中添加4mol/L硫酸水溶液(201mL)，在90℃攪拌30分鐘。放冷后在冰冷卻下加入28％氨水(360mL)，攪拌30分鐘。用水稀釋反應液，用氯仿萃取。用飽和食鹽水洗浄有機層，再用無水硫酸鈉干燥后減壓濃縮。用己烷對所得結(jié)晶進行重結(jié)晶，得到呈黃色針狀晶的3-氨基-2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶(32.91g，收率80％)。
mp 53.5-53.8℃IR(KBr)3453，3314，2968，1603，1505，1456(cm-1).
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ2.34(3H，s)，3.66(2H，br.s)，4.39(2H，q，J＝8.0Hz)，4.79(2H，q，J＝8.6Hz)，6.35(1H，s).
元素分析C10H10F6N2O2·0.55H2O計算值C，38.24；H，3.56；N，8.92，實測值C，37.96；H，3.19；N，8.94.
實施例42-溴-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]乙酰胺的制造在3-氨基-2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶(42.29g，139.0mmol)的二氯甲烷(600mL)溶液中加入N，N-二甲替苯胺(20.46g，168.8mmol)，在冰冷卻攪拌下，加入溴乙酰溴(28.73g，142.3mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液，攪拌10分鐘。用水稀釋反應液，用氯仿萃取。用飽和食鹽水洗浄有機層，再用無水硫酸鈉干燥后，減壓濃縮。所得結(jié)晶用氯仿-己烷重結(jié)晶，得到呈無色針狀晶的2-溴-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]乙酰胺(50.25g，収率85％)。
mp 152.8-154.0℃IR(KBr)3250，3053，1677，1597，1541，1456(cm-1).
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ2.43(3H，s)，4.02(2H，s)，4.42(2H，q，J＝7.9Hz)，4.78(2H，q，J＝8.5Hz)，6.47(1H，s)，7.49(1H，br s).
元素分析C12H11BrF6N2O3計算值C，33.90；H，2.61；N，6.59，
實測值C，34.13；H，2.66；N，6.65.
實施例52-[4-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪-1-基]-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]乙酰胺(化合物1b)的制造在冰冷卻以及攪拌下，在1-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪·3三氟醋酸鹽(4.00g，6.25mmol)以及碳酸鉀(31.26mmol)的乙腈(100mL)以及水(30mL)的混合溶液中，在15分鐘內(nèi)加入2-溴-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]乙酰胺(2.20g，5.22mmol)。返回室溫攪拌15小時后用水稀釋反應液，用氯仿萃取。用飽和食鹽水洗浄有機層，用無水硫酸鈉干燥后，減壓濃縮。用硅膠柱色譜法精制所得殘渣(硅膠150g，己烷∶丙酮＝4∶1～2∶1～1∶1)。用氯仿-己烷重結(jié)晶所得結(jié)晶，得到呈無色晶體的2-[4-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪-1-基]-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]乙酰胺(3.04g，収率91％)。
mp 191-192℃IR(KBr)3275，1686，1604，1591，1509(cm-1).
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ2.38(3H，s)，2.42-2.62(8H，m)，2.67(2H，t，J＝6.7Hz)，3.30(2H，s)，3.40(2H，t，J＝6.7Hz)，4.82(2H，q，J＝8.8Hz)，4.90(2H，q，J＝8.8Hz)，6.91(1H，s)，7.47(2H，m)，8.77(1H，s)，12.82(1H，br.s).
元素分析C25H26F8N6O3S計算值C，46.73；H，4.08；N，13.08實測值C，46.55；H，4.12；N，12.94制造例55-氟-2-巰基苯并咪唑的制造在甲醇(100mL)中溶解4-氟-2-硝基苯胺(8.00g，51.22mmol)，添加10％鈀-碳粉末(0.80g)，在氫氣氛下于室溫攪拌4小時。過濾反應溶液，減壓濃縮濾液用柱色譜法精制所得殘渣(硅膠150g，己烷∶醋酸乙酯＝1∶4)，得到褐色油狀物質(zhì)(5.67g，収率88％)。
在乙醇(150mL)中溶解該褐色油狀物質(zhì)(5.64g，44.72mmol)，加入O-乙基黃原酸鉀(8.60g，53.65mmol)，加熱回流3小時。再加入O-乙基黃原酸鉀(1.43g，8.92mmol)，加熱回流2小時。減壓濃縮反應液，用柱色譜法精制所得殘渣(硅膠150g，己烷∶醋酸乙酯＝2∶1)，得到呈褐色粉末的5-氟-2-巰基苯并咪唑(5.93g，収率79％)。
制造例61-叔丁氧基羰基-4-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪的制造在THF(36mL)中溶解1-叔丁氧基羰基-4-(2-羥乙基)哌嗪(6.00g，26.05mmol)，加入三乙胺(3.43g，33.90mmol)、4-二甲基氨基吡啶(159mg，1.30mmol)后，在冰冷卻下滴入甲磺酰氯(3.58g，31.25mmol)的THF(9mL)溶液。攪拌1小時后過濾反應液，減壓濃縮濾液，在DMF(90mL)中溶解所得殘渣。在室溫一邊攪拌，一邊依次加入5-氟-2-巰基苯并咪唑(4.82g，28.66mmol)、碳酸鉀(5.40g，39.07mmol)以及18-冠醚-6(688mg，2.60mmol)，在80℃攪拌2小時。減壓濃縮反應液，在所得殘渣中加入水，再用醋酸乙酯萃取，用水、飽和食鹽水洗浄有機層。用無水硫酸鈉干燥后，用硅膠柱色譜法(硅膠150g，己烷∶醋酸乙酯＝2∶1～1∶1～1∶2)精制減壓濃縮所得殘渣，得到1-叔丁氧基羰基-4-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪(7.28g，收率73％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.49(9H，s)，2.63(4H，t，J＝4.9Hz)，2.94(2H，t，J＝5.9Hz)，3.29(2H，t，J＝5.9Hz)，3.58(4H，t，J＝4.9Hz)，6.93(1H，td，J＝9.2，2.5Hz)，7.19(1H，dd，J＝9.2，2.5Hz)，7.40(1H，dd，J＝9.2，4.9Hz).
實施例61-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪·3三氟醋酸鹽的制造在冰冷卻并攪拌下，于30分鐘之內(nèi)，在三氟醋酸(17mL)中加入、溶解1-叔丁氧基羰基-4-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪(6.50g，17.08mmol)。返回至室溫攪拌30分鐘后，加入乙醚以及己烷，過濾分離所生成的固形物。用乙醚將其洗浄，得到呈褐色粉末1-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪·3三氟醋酸鹽(10.50g，収率99％)。
mp 127.7-129.3℃IR(KBr)3143，3032，2731，1789，1747，1660(cm-1).
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.29-3.47(8H，m)，3.48(2H，t，J＝6.6Hz)，3.62(2H，t，J＝6.6Hz)，7.03(1H，t，J＝9.0Hz)，7.32(1H，d，J＝9.0Hz)，7.48(1H，dd，J＝9.0，4.4Hz)，9.36(2H，br)，13.76(3H，br).
制造例7
1-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]-4-甲?；哙旱闹圃煸诒?50mL)中溶解1-甲?；?4-(2-羥乙基)哌嗪(1.20g，7.6mmol)、5-氟-2-巰基苯并咪唑(1.28g，7.6mmol)、二異丙基乙胺(3.93g，30.4mmol)，加入碘化氰基甲基三甲基鏻(7.39g，30.4mmol)，在氬氣氛下于92℃攪拌1小時。放冷后注入水(100mL)，用氯仿(100mL×3)萃取。用飽和食鹽水洗浄有機層，用無水硫酸鈉干燥后，減壓下濃縮。由丙酮-乙醚使所得粗生成物結(jié)晶化，得到呈褐色結(jié)晶性粉末的1-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]-4-甲?；哙?.87g(収率80％)。
mp 173.0-175.0℃IR(KBr)cm-13435，3051，2953，2825，1648，1503，1446.
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.38(2H，t，J＝5.2Hz)，2.44(2H，t，J＝5.0Hz)，2.70(2H，t，J＝7.0Hz)，3.22-3.38(4H，m)，3.42(2H，t，J＝7.0Hz)，6.87-6.98(1H，m)，7.23(1H，br s)，7.39(1H，br s)，7.97(1H，s)，12.6(1H s).MS(m/z)308(M+)，140(100).
實施例71-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪的制造在甲醇(20mL)中溶解1-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]-4-甲酰基哌嗪(1.80g，5.8mmol)，添加12N鹽酸(2mL)，在室溫下攪拌18小時。減壓下濃縮反應液，在室溫下于5分鐘之內(nèi)，在攪拌下加入飽和氨-甲醇溶液。在減壓下除去溶劑，用硅膠柱色譜法(氯仿∶飽和氨-甲醇＝100∶3)精制所得殘渣，得到呈褐色油狀物的1-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪1.33g(收率81％)。
IR(KBr)cm-13059，2947，2815，1626，1602，1482，1444，1408.
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.30-2.45(4H，m)，2.62(2H，t，J＝6.8Hz)，2.67(4H，t，J＝4.8Hz)，3.39(2H，t，J＝6.8Hz)，6.90-6.98(1H，m)，7.23(1H，dd，J＝9.5，2.5Hz)，7.39(1H，dd，J＝8.8，4.9Hz).
MS(m/z)280(M+)，70(100).
實施例82-[4-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪-1-基]-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]乙酰胺(化合物1a)的制造在1-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪·3三氟醋酸鹽(6.92g，11.12mmol)以及2-溴-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]乙酰胺(4.50g，10.59mmol)的乙腈(90mL)懸濁液中緩緩加入碳酸鉀(5.85g，42.33mmol)。室溫下攪拌5小時后，在反應液中加入水(100mL)再用醋酸乙酯萃取，用飽和食鹽水清洗有機層。用無水硫酸鈉干燥后，用硅膠柱色譜法精制減壓濃縮所得殘渣(氯仿∶甲醇＝50∶1)。用丙酮-乙醚對所得結(jié)晶進行重結(jié)晶，得到呈淡褐色棱晶的2-[4-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪-1-基]-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]乙酰胺(4.72g，收率71％)。
mp 182.0-182.7℃IR(KBr)3282，2824，1509，1413，1272，1166(cm-1).
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ2.41(3H，s)，2.66-2.91(8H，m)，2.97(2H，t，J＝5.1Hz)，3.25(2H，t，J＝5.1Hz)，3.29(2H，s)，4.41(2H，q，J＝8.0Hz)，4.75(2H，q，J＝8.5Hz)，6.45(1H，s)，6.93(1H，td，J＝9.0，2.3Hz)，7.10-7.56(2H，m)，8.28(1H，s)，13.14(1H，br.s)元素分析C25H27F7N6O3S計算值C，48.08；H，4.36；N，13.46實測值C，47.98；H，4.38；N，13.31實施例9N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]-2-[4-(2-羥乙基)哌嗪-1-基]乙酰胺的制造在1-(2-羥乙基)哌嗪(1.95g，15.0mmol)和2-溴-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基-3-吡啶-3-基]乙酰胺(5.00g，12.5mmol)的乙腈(30ml)溶液中添加碳酸鉀(2.25g，16.3mmol)，在室溫攪拌5小時。用水稀釋反應液，用醋酸乙酯萃取。用水、飽和食鹽水依次洗浄有機層，用無水硫酸鈉干燥后，減壓濃縮。用硅膠柱色譜法(展開溶劑氨飽和甲醇/氯仿＝1/20)精制所得殘渣，得到呈無色晶體的N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]-2-[4-(2-羥乙基)哌嗪-1-基]乙酰胺5.40g(収率91％)。
1H-NMR(CDCl3)δ2.42(3H，s)，2.48-2.82(8H，m)，2.57(2H，t，J＝5.3Hz)，3.17(2H，s)，3.63(2H，t，J＝5.3Hz)，4.41(2H，q，J＝8.0Hz)，4.75(2H，q，J＝8.5Hz)，6.47(1H，s)，8.38(1H，br s).
實施例102-[4-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪-1-基]-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]乙酰胺(化合物1b)的制造
于氬氣氛、冰冷卻下，在N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]-2-[4-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪-1-基]乙酰胺(4.0g，8.43mmol)、5，6-二氟-2-巰基苯并咪唑(5.8g，31.2mmol)以及三苯基膦(7.8g，29.7mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(170mL)溶液中，滴加偶氮二羧酸二乙酯(40％w/v甲苯溶液，11.0mL，25.3mmol)，在相同溫度下攪拌1.5小時。在反應液中，添加醋酸乙酯以及1mol/L鹽酸，分離水層，再用1mol/L鹽酸萃取有機層。合并水層，用1mol/L氫氧化鈉水溶液調(diào)至堿性，用醋酸乙酯萃取。用水以及飽和食鹽水依次洗浄有機層，用無水硫酸鈉干燥后，減壓除去。用硅膠柱色譜法(展開溶劑；氯仿∶氨飽和甲醇＝100∶3)精制所得殘渣，得到呈無色晶體的2-[4-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪-1-基]-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]乙酰胺(4.9g、収率90.1％)。
試驗例1J774A細胞中的ACAT抑制活性試驗在24孔板中接種J774細胞(2×105細胞/孔)，用500μL的DMEM(10％FBS)培養(yǎng)24小時。換培養(yǎng)基后添加25-羥基膽固醇(10μg/mL)以及ACAT抑制劑(終濃度0，10-9～10-5mol/L)培養(yǎng)18小時。用0.9％氯化鈉洗浄后，用己烷-異丙醇(3∶2)250μL萃取脂質(zhì)。用己烷-異丙醇(3∶2)250μL再次萃取脂質(zhì)，除去萃取溶劑后，用熒光酶法定量膽固醇酯(CE)。另外，對脂質(zhì)萃取后的細胞進行蛋白質(zhì)定量(micro BCA法)，求出相當于1mg蛋白質(zhì)的CE量。由相對于空白的被驗物質(zhì)的CE生成比算出IC50(抑制50％CE生成的藥物濃度)。試驗中N＝4。
結(jié)果如表1所示，確認化合物(1a)以及(1b)具有強ACAT抑制活性。
表1


試驗例2人肝臟微粒體代謝穩(wěn)定性試驗按照下表2，在0.1mol/L磷酸緩沖液(pH7.4)中添加NRS(NADPH生成系)試液、16％人血清白蛋白，再在其中添加供試化合物(100μM)的乙腈(0.01mL)溶液。在37℃溫浴中預培養(yǎng)5分鐘后，添加人肝臟微粒體(POOLED HUMAN LIVER MICROSOMES、Lot.No.20 GENTEST公司)，37℃溫浴中進行反應30分鐘。在反應開始0以及30分后分取反應液0.25mL，進行萃取操作*，用HPLC測定檢體量。30分后的檢體的殘存率按照(30分后的峰面積/0分的峰面積)×100算出。
其結(jié)果如圖1所示，確認與化合物(B)鹽酸鹽相比，化合物(1a)以及化合物(1b)對人肝臟微粒體的代謝的穩(wěn)定性顯著提高。
表2人肝臟微粒體反應液的組成(1mL)

*萃取操作在各樣品中添加甘氨酸緩沖液(pH10)1.0mL、內(nèi)標物質(zhì)0.1mL以及叔丁基甲基醚5.0mL，振蕩10分鐘，在2500轉(zhuǎn)下離心分離10分鐘，分取有機層。
試驗例3溶解性試驗(日本藥典I液)將各供試化合物溶解于乙腈中調(diào)制100μM的溶液，將該溶液加入到日本藥典I液中制成1000ng/mL的溶液。攪拌該溶液10分鐘后，用注射器吸取1mL，通過孔徑0.2μm的濾膜(HLC-DISK 13水系·溶劑系關(guān)東化學株式會社)。使用0.5mL濾液，進行萃取操作*，用HPLC測定檢體量。
結(jié)果如表3所示，化合物(1a)以及化合物(1b)的溶解度較化合物(B)鹽酸鹽的低。從溶解度預想本發(fā)明化合物的口服吸收性較低。
表3


*萃取操作與人肝臟微粒體代謝穩(wěn)定性試驗相同。
試驗例4大鼠口服試驗在0.01N鹽酸溶液中溶解供試化合物，口服給予雄性或雌性SD大鼠10mg/5mL/kg。分別在給藥后30、60、120、180、240、360分鐘采血0.25mL。所采血液在4℃、9,000g的條件下進行離心分離5分鐘，得到血漿。所得血漿直至進行測定時始終保存在-30℃，進行萃取操作*，用LC/MS/MS法測定化合物的血漿中濃度。其結(jié)果如表4所示，與化合物(B)鹽酸鹽相比，化合物(1a)以及化合物(1b)顯示了較高的Cmax和較高的藥時曲線下AUC值，由此確認了具有比化合物(B)鹽酸鹽更好的口服吸收性。
表4
(10mg/kg·p.o.)*萃取操作與人肝臟微粒體代謝穩(wěn)定性試驗相同。
與專利文獻1記載的化合物(B)相比，本發(fā)明化合物(1)顯示了優(yōu)良的人肝臟微粒體代謝穩(wěn)定性，保持了強大的ACAT抑制活性。雖然與化合物(B)鹽酸鹽相比，本發(fā)明化合物(1)對水的溶解性較差，但是在雄雌大鼠的口服試驗中顯示了良好的口服吸收性。由此，可期待出現(xiàn)對人的良好的生物學利用率。
權(quán)利要求
1.通式(1) 所示的2，4-二(三氟乙氧基)吡啶化合物或其鹽，式中，X1表示氟原子或氫原子。
2.藥物，其特征在于，以權(quán)利要求1所述的化合物或其鹽為有効成分。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物，其特征還在于，所述藥物為高脂血癥和/或動脈硬化癥的預防·治療藥。
4.權(quán)利要求1所述的化合物或其鹽的制造方法，其特征在于，使通式(2) 所示的的哌嗪化合物與通式(3) 所示的吡啶化合物反應，式中、X1表示氟原子或氫原子，X2表示氯原子、溴原子或碘原子。
5.通式(2) 所示的哌嗪化合物或其鹽，式中，X1表示氟原子或氫原子。
6.通式(4) 所示的吡啶化合物或其鹽，式中，R1表示氫原子、氯乙?；?、溴乙?；虻庖阴；?。
7.2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基-3-硝基吡啶。
8.N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]-2-[4-(2-羥乙基)哌嗪-1-基]乙酰胺。
9.藥物組合物，其特征在于，含有權(quán)利要求1所述的化合物或其鹽以及藥學中允許的載體。
10.權(quán)利要求1所述化合物或其鹽在藥物的制備中的應用。
11.高脂血癥和/或動脈硬化癥的處置方法，其特征在于，將權(quán)利要求1所述的化合物或其鹽給藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式(1)(式中、X
文檔編號A61P9/10GK1816542SQ200480019168
公開日2006年8月9日 申請日期2004年7月6日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月7日
發(fā)明者澀谷公幸, 扇谷忠明, 松田隆行, 三浦徹 申請人:興和株式會社