專利名稱：用于預(yù)防或治療Th1型免疫疾病的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有以下述物質(zhì)作為有效成分的用于預(yù)防或治療Th1型免疫疾病的藥物組合物，所述的物質(zhì)可作用于在樹突狀細(xì)胞中表達(dá)的鈉利尿肽(NP)的受體鳥苷酸環(huán)化酶A(GC-A)，促進(jìn)環(huán)單磷酸鳥苷(cGMP)產(chǎn)生。
背景技術(shù)：
免疫系統(tǒng)原本作為用以識別和排除外來異物(微生物等)的防御機(jī)構(gòu)而得到進(jìn)化。所以，機(jī)體能將自己的細(xì)胞或組織與外來的異物(非己)區(qū)別開來，對自己不反應(yīng)，或即使反應(yīng)也持續(xù)保持不能發(fā)揮功能的狀態(tài)(免疫寬容)，使能夠迅速并且有效地排除非己的后天免疫日益成熟。在后天免疫中承擔(dān)中心作用的是T細(xì)胞。未分化的外周原始T細(xì)胞(Thp)，在抗原刺激下開始增殖、分化。此時，Thp通過表面上的T細(xì)胞受體接受來自巨噬細(xì)胞或樹突狀細(xì)胞等抗原呈遞細(xì)胞(antigen-presenting cell)的抗原呈遞，同時在來自活化相關(guān)分子群的信號的作用下得到活化，分泌IL-2，進(jìn)行增殖。然后分化成幾乎能夠產(chǎn)生所有細(xì)胞因子的Th0，根據(jù)抗原刺激的種類或強(qiáng)度、抗原呈遞細(xì)胞產(chǎn)生的刺激信號等，確定最終的分化方向，成熟為Th1或Th2，各自行使功能，分別產(chǎn)生特異的細(xì)胞因子，進(jìn)一步誘導(dǎo)細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒活性等。即，白介素12(IL-12)誘導(dǎo)向與細(xì)胞性免疫相關(guān)的Th1細(xì)胞的分化，分化了的Th1細(xì)胞產(chǎn)生白介素2(IL-2)或干擾素-γ(IFN-γ)等細(xì)胞因子，另一方面，白介素4(IL-4)誘導(dǎo)向參與體液性免疫相關(guān)的Th2細(xì)胞的分化，產(chǎn)生白介素4、10(IL-4、10)等細(xì)胞因子。兩種細(xì)胞所產(chǎn)生的細(xì)胞因子或者使細(xì)胞向Th1或Th2細(xì)胞分化或使兩種細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子的活動相互負(fù)向調(diào)控，保持Th1/Th2的平衡。
近年來，認(rèn)為這種Th1/Th2的失衡是免疫性疾病的原因。當(dāng)傾向于以Th1為中心的免疫應(yīng)答(Th1型免疫)時，細(xì)胞性免疫被增強(qiáng)的針對癌癥和所感染疾病的免疫反應(yīng)被促進(jìn)，這成為引起對自身組織傷害的自身免疫疾病并發(fā)癥的原因。組織的損傷和感染導(dǎo)致持續(xù)的炎癥反應(yīng)、而且進(jìn)一步導(dǎo)致組織的纖維化、臟器的功能障礙。
此外，在治療方面，期待著能夠抑制即使是正常免疫應(yīng)答的伴隨臟器移植的排斥反應(yīng)或伴隨骨髓(造血干細(xì)胞)移植的針對移植物的宿主病。這些所誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答基本上是一致的，以Th1性免疫為主體。
作為Th1型免疫導(dǎo)致的免疫異常而引發(fā)的Th1型免疫疾病，例如包括移植排斥反應(yīng)、骨髓(造血干細(xì)胞)移植導(dǎo)致的移植物抗宿主疾病以及自身免疫性肝炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胰島素依賴性糖尿病、潰瘍性結(jié)腸炎、克郎氏病(Crohn′s disease)、多發(fā)性硬化癥、自身免疫性心肌炎、銀屑病、皮膚硬化癥、重癥肌無力、多發(fā)性肌肉炎/皮膚肌肉炎、橋本病(Hashimoto′s disease)、自身免疫性血細(xì)胞減少癥(純紅細(xì)胞再生障礙性貧血、再生不良性貧血等)、干燥綜合征、血管炎綜合癥、全身性紅斑狼瘡等的自身免疫疾病，此外，可列舉伴隨這類疾病導(dǎo)致的組織損傷或感染而引發(fā)的炎癥反應(yīng)、纖維化、臟器功能障礙等。
在針對Th1型免疫導(dǎo)致的自身免疫疾病或移植免疫，以及與之相伴的慢性活動性的免疫學(xué)炎癥反應(yīng)的治療中，希望選擇性抑制Th1型免疫。在這種情況下，現(xiàn)在，希望通過控制T細(xì)胞活化系統(tǒng)的介導(dǎo)因子實(shí)現(xiàn)治療，環(huán)孢素或FK506針對T細(xì)胞的強(qiáng)有力的免疫抑制效果、抗細(xì)胞因子療法、抗粘附分子(活化相關(guān)分子)療法、單克隆抗體療法等引人注目。
可是，這些療法也和以往的甾體制劑、作用于核酸合成體系的某種免疫抑制劑或干擾素制劑的療法相同，不具有對Th1型免疫的選擇性，而且存在感染癥惡化、糖尿病、血栓、滿月臉、腎病、發(fā)熱等各種副作用等問題需要解決，因此需要開發(fā)安全性更好、有效性更優(yōu)越的藥物制劑。
自身免疫性疾病除了是全身性疾病之外，也是可以在大多數(shù)臟器中可以發(fā)現(xiàn)的疾病。而且以后，伴隨著臟器移植手術(shù)或造血干細(xì)胞移植的日益發(fā)展，排斥反應(yīng)或移植物抗宿主病(Graft-versus-hostdisease)的問題也將增加。這樣，因?yàn)門h1型免疫起到支配性作用的疾病涉及面廣泛，所以期待開發(fā)有效的治療藥物。實(shí)際上，作為具有Th1型免疫抑制作用的藥物制劑，據(jù)報(bào)道有serotonin 1A受體拮抗劑(J Immunol 153489-498，1994)、pentoxifyllin(J CardiovascPharmacol 25 Suppl 2S75-79，1995)、beta2-adrenergic受體拮抗劑(J Immunol 1584200-4210，1997、J Clin Invest 1001513-1519，1997)、腺苷酸環(huán)化酶活化劑的iloprost(J Autoimmun 10519-529，1997)、P38 MAP激酶抑制劑的pyridinyl imidazole化合物或SB203580(EMBO J 172817-2829，1998、Int Immunol 12253-261，2000)、lisofylline(J Immunol 1636567-6574，1999)、adenosineA2a受體拮抗劑的CGS-21680(J Immunol 164436-442，2000)、NO-aspirin(Gastroenterology 118404-421，2000)以及1，25-dihydroxyvitamin D(3)(Eur J Immunol 30498-508，2000)等?？墒?，尚未開發(fā)出可選擇性抑制Th1型免疫并減輕副作用的可用于臨床的醫(yī)藥制品。
近年已經(jīng)闡明克郎氏病是Th1型疾病，該病作為IL-12和IL-10治療的靶標(biāo)引人注目(最新醫(yī)學(xué)901076-1081，2004)。即，IL-12是由活化的巨噬細(xì)胞或樹突狀細(xì)胞分泌的，其在由原始T細(xì)胞向Th1細(xì)胞的分化中起到支配性作用。據(jù)報(bào)道在模型動物中，抗IL-12抗體顯示出治療效果，因此認(rèn)為也可以將其用做治療人克郎氏病的候選目標(biāo)。此外，IL-10是能夠抑制從Th1細(xì)胞生成細(xì)胞因子的分子，在IL-10基因敲除的小鼠中，Th1應(yīng)答增強(qiáng)，自然引發(fā)腸炎(Clin Invest Med2001；24250-257)，因此期待IL-10也可以作為克郎氏病的治療的候選目標(biāo)。實(shí)際上，已經(jīng)研究了基因重組人IL-10對克郎氏病的效果，發(fā)現(xiàn)具有改善效果，但是其效力不充分，此外，還發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生頭疼、發(fā)熱、貧血等副作用(Gastroenterology，2000；1191473-1482)。當(dāng)血中持續(xù)維持高濃度的IL-10時，暗示表現(xiàn)出免疫活化作用，期待著僅在病灶局部能夠生理性地促進(jìn)產(chǎn)生IL-10的治療方法。最近，對于中等程度到重度的克郎氏病，采用了TNFα抗體的infliximab，雖然確認(rèn)了其有效性，但是據(jù)報(bào)道也有高頻率的副作用發(fā)生，這限制了其使用。
此外，多發(fā)性硬化癥也是自身免疫疾病中特別以Th1型免疫占主導(dǎo)地位的疾病，已有指出復(fù)發(fā)-緩解型也是在緩解時向Th2偏移等，期待能將Th2傾向作用用于疾病治療?，F(xiàn)在作為用于多發(fā)性硬化癥的治療藥物，已知在急性期使用甾體制劑、在復(fù)發(fā)-緩解期使用干擾素β1b、在穩(wěn)定期使用各種免疫抑制劑等。已有指出這些制劑具有各種副作用，此外有效性也不充分，所以不能充分滿足使病情確切好轉(zhuǎn)、防止惡化、減輕副作用的需要。
所以，期待著開發(fā)出針對兩種疾病能更有選擇性地抑制Th1型免疫、減輕副作用的醫(yī)藥制品，現(xiàn)在尚無可以用于臨床的藥物。
已知樹突狀細(xì)胞是能在淋巴器官T區(qū)最強(qiáng)有力地活化原始T細(xì)胞的唯一的抗原呈遞細(xì)胞，并在維持生物體防御的穩(wěn)定性方面擔(dān)當(dāng)著重要的作用(Banchereau，J.等，Nature，Vol.392，p245，1998)。樹突狀細(xì)胞在普通組織中以T細(xì)胞的活化能低下的未成熟狀態(tài)存在，但在從病原體或損傷了的組織中釋放出來的炎癥性介質(zhì)的作用下，受到成熟、活化的刺激，將來自抗原的肽與MHC復(fù)合體結(jié)合，呈遞給原始T細(xì)胞。同時，使共刺激分子的表達(dá)增強(qiáng)，使之產(chǎn)生各種細(xì)胞因子，募集T細(xì)胞，活化抗原特異性的細(xì)胞，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答(伊豫田智典、Inaba Kayo，蛋白質(zhì)、核酸和酶，Vol.47，p2133，2002)。此外，人樹突狀細(xì)胞中至少存在2中前體細(xì)胞。單核系前體細(xì)胞在GM-CSF和IL-4的刺激下而分化，此外，通過CD40L的刺激產(chǎn)生IL-12，通過IL-12的作用使原始T細(xì)胞分化成Th1細(xì)胞。轉(zhuǎn)化細(xì)胞系前體細(xì)胞在病毒或CpG寡核苷酸、以及IL-3及CD40L的刺激下，分化成幾乎不產(chǎn)生IL-12的樹突狀細(xì)胞，使原始T細(xì)胞分化成Th2細(xì)胞(樗木俊聰，醫(yī)學(xué)のあみ、Vol.205，p57，2003)。即，樹突狀細(xì)胞是在免疫中承擔(dān)控制Th1/Th2平衡的重要作用的細(xì)胞。所以，如果能夠開發(fā)出特異性作用于樹突狀細(xì)胞，調(diào)節(jié)其活性或細(xì)胞因子的表達(dá)，抑制原始T細(xì)胞向Th1的分化增殖，使之傾向Th2型的藥物，就有望可以根治或預(yù)防Th1型免疫導(dǎo)致的免疫異常(特別是克郎氏病或多發(fā)性硬化癥)?？墒?，至今為止，尚沒有具有這種作用的有效藥物。
另一方面，作為能夠作用于GC-A促進(jìn)產(chǎn)生第二信使cGMP的物質(zhì)，可列舉肽性物質(zhì)，特別是鈉利尿肽，該肽有ANP(心房鈉利尿肽)、BNP(腦鈉利尿肽)以及CNP(C型鈉利尿肽)3種，作為與該肽相對應(yīng)的NP受體，有GC-A、GC-B(鳥苷酸環(huán)化酶B)以及NPR-C(NP受體-C)3種。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)GC-A和GC-B具有膜結(jié)合型鳥苷酸環(huán)化酶結(jié)構(gòu)；ANP以及BNP是GC-A的特異性配體；CNP是GC-B的特異性配體；以及這些物質(zhì)分別與各自的受體結(jié)合后，能通過使細(xì)胞內(nèi)的cGMP上升而發(fā)揮利尿作用以及血管擴(kuò)張作用等生理作用。此外，據(jù)稱NPR-C與cGMP的不產(chǎn)生共軛(couple)，與這些的激素代謝、清除有關(guān)(Suzuki，T.等，Cardiovasc.Res.Vol.51，p489，2001)。
ANP是由心臟分泌的、對水電解質(zhì)代謝以及血壓調(diào)節(jié)具有重要作用的肽激素。已知在人以及模型動物中，伴隨著心肌肥大以及心不全的加重，血中的APN濃度上升，認(rèn)為其起到了對心不全病情的代償性作用。實(shí)際上，在心不全的患者中，發(fā)現(xiàn)通過給予ANP發(fā)揮其血管擴(kuò)張作用以及利尿作用，使心臟的前負(fù)荷、后負(fù)荷減輕，產(chǎn)生了改善血液流動狀態(tài)的效果(Suzuki，T.等，Cardiovasc.Res.Vol.51，p489，2001)。
據(jù)報(bào)道ANP受體的GC-A不只在心血管系統(tǒng)中，也在白細(xì)胞中有表達(dá)，暗示ANP可能對血細(xì)胞承擔(dān)有生理功能。即，ANP促進(jìn)嗜中性細(xì)胞的釋放(Izumi，T.等，J.Clin.Invest.Vol.108，p203，2001)、抑制大鼠胸腺細(xì)胞的增殖(Vollmar，A.M.，K.N.，等，Endocrinology.Vol.137，1706，1996)、增強(qiáng)人自然殺傷(NK)細(xì)胞的細(xì)胞殺傷性(Moss，R.B.，and M.G.Golightly，Peptides，Vol.2，p851，1991)、抑制從小鼠巨噬細(xì)胞中產(chǎn)生NO或TNFα(Kiemer，A.K.and A.M.，Vollmar.J.Biol.Chem.Vol.273，p13444，1998)等。
可是，據(jù)報(bào)道與作用于來自小鼠單核細(xì)胞的巨噬細(xì)胞的情況不同，人單核細(xì)胞不表達(dá)ANP受體，ANP在單核細(xì)胞中不表達(dá)產(chǎn)生cGMP等生理活性(Sprenger H.，等，Immunobiol.Vol.183，p94，1991)。完全沒有關(guān)于作用于來自與免疫系統(tǒng)相關(guān)的人單核細(xì)胞的樹突狀細(xì)胞上的GC-A以促進(jìn)cGMP產(chǎn)生物質(zhì)的生理功能或病理生理性意義、或免疫調(diào)節(jié)作用的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明鑒于上述現(xiàn)狀以提供下述抑制劑為課題該抑制劑針對Th1型免疫疾病的自身免疫疾病、臟器移植的排斥反應(yīng)、骨髓(造血干細(xì)胞)移植導(dǎo)致的移植物抗宿主病、以及伴隨著起因于自身免疫疾病或類似疾病的組織損傷或感染發(fā)生的炎癥反應(yīng)，還有組織纖維化和臟器的功能障礙，是不具有以抑制Th1型細(xì)胞因子的產(chǎn)生、抑制Th1細(xì)胞的增殖/功能抑制作為作用原理的副作用，可能適于臨床使用并且具有Th1型免疫選擇性的抑制劑。具體而言，提供了能夠用于預(yù)防或治療Th1型免疫疾病(特別是克郎氏病或多發(fā)性硬化癥)的藥物組合物，該組合物以作用于在樹突狀細(xì)胞表達(dá)的NP受體GC-A，促進(jìn)cGMP的產(chǎn)生、調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞的細(xì)胞因子的產(chǎn)生、能將T細(xì)胞分化成Th2的物質(zhì)作為有效成分。
作為可以用作本發(fā)明所涉及的藥物組合物的有效成分的物質(zhì)，只要具有通過NP受體GC-A促進(jìn)cGMP產(chǎn)生的特性的物質(zhì)即可，優(yōu)選肽類物質(zhì)，因?yàn)闆]有特定的限定，也可以使用肽類物質(zhì)以外的能夠作用于NP受體GC-A促進(jìn)cGMP的化合物。
作為肽類物質(zhì)，優(yōu)選鈉利尿肽(natriuretic peptide)，例如特別是心房鈉利尿肽(以下稱為ANP)、腦鈉利尿肽(以下稱為BNP)等。
作為ANP，可以使用由28個氨基酸組成的來自人的α-hANP(序列號1)或來自大鼠的α-rANP(序列號2)，作為本發(fā)明的有效成分的肽，只有具有ANP的環(huán)結(jié)構(gòu)(基于Cys形成的二硫鍵)以及連在環(huán)結(jié)構(gòu)上的C末端部分的肽即可。作為該肽，可列舉具有α-hANP的7-28位的氨基酸殘基的肽(序列號3)。作為ANP，特別優(yōu)選是來自人的α-hANP。
作為BNP，例如由32個氨基酸組成的人BNP(序列號4)等。
此外，作為本發(fā)明中涉及的具有通過NP受體GC-A促進(jìn)cGMP產(chǎn)生的特性的物質(zhì)，可以是從天然中單純地分離、純化出的物質(zhì)，或是通過化學(xué)合成法或基因重組法制備得到的物質(zhì)，例如，基于上述物質(zhì)(α-hANP等)涉及的氨基酸序列，如果是本領(lǐng)域的技術(shù)人員，可以通過適當(dāng)?shù)墓椒ǎㄟ^實(shí)施缺失、置換、添加、插入等修飾該序列中的氨基酸殘基而得到。無論通過何種方法得到的物質(zhì)，只要是能通過作用于NP受體GC-A促進(jìn)cGMP產(chǎn)生的物質(zhì)均可使用。作為該物質(zhì)，除了上述物質(zhì)之外，還可列舉蛙ANP(序列號5)、豬BNP(序列號6)、大鼠BNP(序列號7)、雞(序列號8)等。
作為可以用作本發(fā)明的藥物組合物的有效成分的物質(zhì)，可以使用無機(jī)酸，例如鹽酸、硫酸、磷酸，或有機(jī)酸，例如甲酸、醋酸、丁酸、琥珀酸、檸檬酸等酸的加成鹽使用。也可以是鈉、鉀、鋰、鈣等的金屬鹽，有機(jī)堿的鹽形式。此外，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以作為有效成分物質(zhì)的游離形式，也可以是其在醫(yī)藥上可被允許的鹽。
可以用作本發(fā)明的藥物組合物的有效成分的物質(zhì)或其在藥理學(xué)上允許的鹽，優(yōu)選和公知的藥理學(xué)上允許的載體、賦形劑、稀釋劑等混合，通過在醫(yī)藥中常規(guī)使用的給藥方法，即經(jīng)口給藥方法，或靜脈內(nèi)給藥、肌肉內(nèi)給藥或皮下給藥等非經(jīng)口給藥方法進(jìn)行給藥。
有效成分為肽類物質(zhì)時，可以作為在消化道內(nèi)難以分解的制劑，例如作為將活性成分的肽包容在脂質(zhì)體中的微囊制劑，經(jīng)口給藥。此外，可以使用從直腸、鼻內(nèi)、舌下等消化道以外的可使之從粘膜吸收的給藥方法。在這種情況下，可以作為栓劑、鼻噴霧、舌下片的形態(tài)來給藥。
可用作本發(fā)明醫(yī)藥組合物的有效成分的物質(zhì)的給藥量根據(jù)疾病的種類、患者的年齡、體重、癥狀的程度以及給藥途徑等有所不同，通常在0.1μg/kg～100mg/kg的范圍內(nèi)給藥，優(yōu)選以0.5μg/kg～5mg/kg給藥。
根據(jù)本發(fā)明可知以作用于鈉利尿肽受體GC-A促進(jìn)cGMP產(chǎn)生的物質(zhì)作為有效成分的組合物可以特異性地作用于樹突狀細(xì)胞，調(diào)節(jié)其產(chǎn)生細(xì)胞因子，因?yàn)槠渫ㄟ^誘導(dǎo)原始T細(xì)胞的Th2傾向性，可抑制Th1型免疫反應(yīng)，所以對Th1型免疫疾病有效。特別是，將ANP作為有效成分使用的時候，單獨(dú)的ANP不能對從樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子或T細(xì)胞的增殖反應(yīng)產(chǎn)生影響，僅表現(xiàn)出調(diào)節(jié)LPS(脂多糖)刺激時的反應(yīng)的作用，不對正常時的免疫功能產(chǎn)生大的影響，僅抑制刺激時的過剩反應(yīng)，即，表現(xiàn)出副作用小，可以安全使用，是有用的。
此外，LPS是革蘭氏陰性菌的外膜的主要構(gòu)成成分，能被對病原體固有的構(gòu)成成分的識別極其重要的樹突狀細(xì)胞所表達(dá)的稱為Toll樣受體(TLR)家族的膜蛋白受體群中的TLR4所識別，是刺激樹突狀細(xì)胞的成熟、活化，并誘導(dǎo)細(xì)胞因子以及CD40等輔助功能分子表達(dá)的物質(zhì)。
根據(jù)本發(fā)明，通過使用來自人的樹突狀細(xì)胞以及原始T細(xì)胞的一系列實(shí)驗(yàn)，闡明了在人樹突狀細(xì)胞中的GC-A的表達(dá)、可作用于NP受體GC-A促進(jìn)cGMP產(chǎn)生的物質(zhì)對樹突狀細(xì)胞的細(xì)胞因子產(chǎn)生的調(diào)節(jié)作用以及使T細(xì)胞傾向Th2的作用，這在臨床上是有用的。
由此可知，可作用于NP受體GC-A促進(jìn)cGMP產(chǎn)生的物質(zhì)表現(xiàn)出作用于在樹突狀細(xì)胞中表達(dá)的GC-A，使原始T細(xì)胞傾向于Th2型的作用，因?yàn)槟苷{(diào)節(jié)在免疫系統(tǒng)中的T細(xì)胞所涉及的Th1/Th2平衡，所以給予該物質(zhì)，能夠改善Th1型免疫疾病(特別是克郎氏病或多發(fā)性硬化癥)，以及即使在患有Th1型免疫疾病以前的狀態(tài)下，根據(jù)常規(guī)方法測定Th1和Th2的比例，當(dāng)Th1的比例高時，給予該物質(zhì)，通過調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)中的Th1/Th2的平衡，可以預(yù)防Th1型免疫疾病。
綜上所述，本發(fā)明包含下述內(nèi)容(1)用于預(yù)防或治療Th1型免疫疾病的藥物組合物，其中，以可作用于鈉利尿肽受體鳥苷酸環(huán)化酶A促進(jìn)產(chǎn)生環(huán)單磷酸鳥苷的物質(zhì)為有效成分。
(2)上述(1)所述的藥物組合物，其中，Th1型免疫疾病選自起因于伴隨移植的排斥反應(yīng)的疾病、骨髓(造血干細(xì)胞)移植導(dǎo)致的移植物抗宿主病以及自身免疫疾病。
(3)上述(2)所述的藥物組合物，其中，自身免疫疾病選自自身免疫性肝炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胰島素依賴性糖尿病、潰瘍性結(jié)腸炎、克郎氏病、多發(fā)性硬化癥、自身免疫性心肌炎、銀屑病、皮膚硬化癥、重癥肌無力癥、多發(fā)性肌肉炎/皮膚肌肉炎、橋本病、自身免疫血細(xì)胞減少癥(純紅細(xì)胞再生障礙性貧血、再生不良性貧血)、干燥綜合征、血管炎綜合癥以及全身性紅斑狼瘡。
(4)上述(3)所述的藥物組合物，其中，自身免疫疾病為克郎氏病或多發(fā)性硬化癥。
(5)一種藥物組合物，其以可作用于鈉利尿肽受體鳥苷酸環(huán)化酶A促進(jìn)產(chǎn)生環(huán)單磷酸鳥苷的物質(zhì)為有效成分，用于預(yù)防或治療伴隨起因于Th1型免疫疾病導(dǎo)致的組織損傷或感染而發(fā)生的炎癥反應(yīng)、纖維化或臟器功能障礙。
(6)上述(1)或(5)所述的藥物組合物，其中，可作用于鈉利尿肽受體鳥苷酸環(huán)化酶A促進(jìn)產(chǎn)生環(huán)單磷酸鳥苷的物質(zhì)為鈉利尿肽。
(7)上述(6)所述的藥物組合物，其中，鈉利尿肽為心房鈉利尿肽或腦性利尿肽。
(8)上述(7)所述的藥物組合物，其中，心房鈉利尿肽來自人。
(9)Th1型免疫疾病的治療方法，其特征在于，給予可作用于鈉利尿肽受體鳥苷酸環(huán)化酶A促進(jìn)產(chǎn)生環(huán)單磷酸鳥苷的物質(zhì)。
(10)上述(9)所述的治療方法，其中，Th1型免疫疾病選自伴隨移植的排斥反應(yīng)所導(dǎo)致的疾病、骨髓(造血干細(xì)胞)移植導(dǎo)致的移植物抗宿主病以及自身免疫疾病。
(11)上述(10)所述的治療方法，其中，免疫疾病選自自身免疫性肝炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胰島素依賴性糖尿病、潰瘍性結(jié)腸炎、克郎氏病、多發(fā)性硬化癥、自身免疫性心肌炎、銀屑病、皮膚硬化癥、重癥肌無力癥、多發(fā)性肌肉炎/皮膚肌肉炎、橋本病、自身免疫血細(xì)胞減少癥(純紅細(xì)胞再生障礙性貧血、再生不良性貧血)、干燥綜合征、血管炎綜合癥以及全身性紅斑狼瘡。
(12)上述(11)所述的治療方法，其中，自身免疫疾病為克郎氏病或多發(fā)性硬化癥。
(13)上述(9)所述的治療方法，其中，可作用于鈉利尿肽受體鳥苷酸環(huán)化酶A促進(jìn)產(chǎn)生環(huán)單磷酸鳥苷的物質(zhì)為鈉利尿肽。
(14)上述(13)所述的治療方法，其中，鈉利尿肽為心房鈉利尿肽或腦性利尿肽。
(15)上述(14)所述的治療方法，其中，心房鈉利尿肽來自人。
(16)可作用于鈉利尿肽受體鳥苷酸環(huán)化酶A促進(jìn)產(chǎn)生環(huán)單磷酸鳥苷的物質(zhì)在用于制造預(yù)防或治療Th1型免疫疾病的藥物組合物中的應(yīng)用。
(17)上述(16)所述的應(yīng)用，其中，Th1型免疫疾病選自伴隨移植的排斥反應(yīng)所導(dǎo)致的疾病、骨髓(造血干細(xì)胞)移植導(dǎo)致的移植物抗宿主病以及自身免疫疾病。
(18)上述(17)所述的應(yīng)用，其中，免疫疾病選自自身免疫性肝炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胰島素依賴性糖尿病、潰瘍性結(jié)腸炎、克郎氏病、多發(fā)性硬化癥、自身免疫性心肌炎、銀屑病、皮膚硬化癥、重癥肌無力癥、多發(fā)性肌肉炎/皮膚肌肉炎、橋本病、自身免疫血細(xì)胞減少癥(純紅細(xì)胞再生障礙性貧血、再生不良性貧血)、干燥綜合征、血管炎綜合癥以及全身性紅斑狼瘡。
(19)上述(18)所述的應(yīng)用，其中，自身免疫疾病為克郎氏病或多發(fā)性硬化癥。
(20)上述(16)所述的應(yīng)用，其中，可作用于鈉利尿肽受體鳥苷酸環(huán)化酶A促進(jìn)產(chǎn)生環(huán)單磷酸鳥苷的物質(zhì)為鈉利尿肽。
(21)上述(20)所述的應(yīng)用，其中，鈉利尿肽為心房鈉利尿肽或腦性利尿肽。
(22)上述(21)所述的應(yīng)用，其中，心房鈉利尿肽來自人。
(23)調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)中Th1/Th2平衡的方法，其特征為，將可作用于鈉利尿肽受體鳥苷酸環(huán)化酶A促進(jìn)產(chǎn)生環(huán)單磷酸鳥苷的物質(zhì)作用于樹突狀細(xì)胞，誘導(dǎo)T細(xì)胞的Th2傾向性。
(24)上述(23)所述的方法，其中，可作用于鈉利尿肽受體鳥苷酸環(huán)化酶A促進(jìn)產(chǎn)生環(huán)單磷酸鳥苷的物質(zhì)為鈉利尿肽。
(25)上述(24)所述的方法，其中，鈉利尿肽為心房鈉利尿肽或腦性利尿肽。
(26)上述(25)所述的方法，其中，心房鈉利尿肽來自人。
發(fā)明效果根據(jù)本發(fā)明，可作用于鈉利尿肽受體鳥苷酸環(huán)化酶A促進(jìn)產(chǎn)生環(huán)單磷酸鳥苷的物質(zhì)，因?yàn)榫哂型ㄟ^作用于樹突狀細(xì)胞，誘導(dǎo)Th2傾向性，通過使T細(xì)胞分化成Th2型細(xì)胞，抑制IL-12以及TNFα的產(chǎn)生，使IL-10的產(chǎn)生增強(qiáng)，由此抑制Th1型免疫反應(yīng)的作用，所以以該物質(zhì)為有效成分的藥物組合物通過調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)中的Th1/Th2的平衡，作為用于預(yù)防或治療Th1型免疫疾病(特別是克郎氏病或多發(fā)性硬化癥)的藥物組合物是非常有用的。


圖1是用RT-PCR法分析在人單核細(xì)胞(monocytes)和未成熟樹突狀細(xì)胞(immature DCs)中的3種NP受體，即GC-A、GC-B以及NPR-C的mRNA表達(dá)的圖。用胎盤作為各受體mRNA的陽性對照。此外，通過β-actin cDNA的擴(kuò)增確認(rèn)RNA的純度、cDNA合成的穩(wěn)妥性。結(jié)果表現(xiàn)出僅在未成熟樹突狀細(xì)胞中特異性地表達(dá)GC-A mRNA。
圖2為表示針對人單核細(xì)胞(monocytes，黑色四方形符號)和未成熟樹突狀細(xì)胞(immature DCs，白色四方形符號)，ANP(上面的圖)和GNP(下面的圖)的促進(jìn)cGMP產(chǎn)生的活性的圖。各值表示的是相當(dāng)于1×105個細(xì)胞的cGMP量。表示ANP以極低濃度促進(jìn)樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生cGMP。
圖3表示ANP對由經(jīng)過LPS刺激的樹突狀細(xì)胞作用的同種原始T細(xì)胞的增殖反應(yīng)的效果。樹突狀細(xì)胞在LPS(1μg/mL)、ANP(10×-7M)、LPS+ANP存在或不存在的情況下，培養(yǎng)24小時，經(jīng)過照射后，和原始T細(xì)胞共同培養(yǎng)6天。可以用[3H]-胸苷摻入能力對此時的原始T細(xì)胞的細(xì)胞增殖能力進(jìn)行評價。白色圓形無處理，黑色圓形ANP 10-7M處理，白色四方形1μg/mL的LPS處理，黑色四方形ANP+LPS處理。各個值用5例的平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示。*以p＜0.05表示與其他組間存在有意義差，用Student的t檢驗(yàn)檢測有意義差。
圖4表示ANP以及CNP對經(jīng)LPS刺激后的樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子的影響。表示的是將1×105個細(xì)胞/管的樹突狀細(xì)胞在ANP(10-8～10-6M)或CNP(10-6M)的存在或不存在的情況下，與LPS(1μg/mL)共同溫育24小時后，檢測培養(yǎng)基中的IL-12、TNF-α、IL-10的免疫活性。
圖5表示的是將用LPS或LPS+ANP預(yù)處理過的樹突狀細(xì)胞與原始T細(xì)胞共同培養(yǎng)后，再在含有IL-2的培養(yǎng)液中增殖該T細(xì)胞，用流式細(xì)胞術(shù)解析該T細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)的IFN-γ、IL-4的產(chǎn)生的結(jié)果。圖中的數(shù)字表示在各個組分中的白細(xì)胞的百分比。1號樣品、2號樣品分別表示使用來自不同供體的樹突狀細(xì)胞的結(jié)果。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明人對從人的外周血中分離、培養(yǎng)的樹突狀細(xì)胞中的ANP受體(GC-A)表達(dá)、和ANP促進(jìn)cGMP產(chǎn)生的活性進(jìn)行了研究，此外，為了闡明了ANP在樹突狀細(xì)胞中的生理功能，針對其在樹突狀細(xì)胞的分化、淋巴細(xì)胞的增殖作用、細(xì)胞因子的表達(dá)、Th1/Th2傾向性的作用進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)可作用于GC-A促進(jìn)cGMP產(chǎn)生的物質(zhì)，對于Th1型免疫疾病的預(yù)防或治療有用。
A.人樹突狀細(xì)胞的分離、以及NP受體表達(dá)、促進(jìn)cGMP產(chǎn)生作用的實(shí)驗(yàn)方法1.來自人外周血的樹突狀細(xì)胞的分離和培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)中，使用從正常人志愿者得到的外周血(京都府紅十字中心提供)的白細(xì)胞層(buffy coats)。用Ficoll-Paque密度梯度離心分離外周血單核細(xì)胞級分后，通過使用了MACS CD14的磁珠柱子，或在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中于37℃下培養(yǎng)1小時，通過選擇出粘附細(xì)胞，進(jìn)行單核細(xì)胞的分離。將2×105個細(xì)胞/ml的單核細(xì)胞在10％胎牛血清、50ng/mL人GM-CSF、20ng/mL人IL-4存在的情況下，在37℃培養(yǎng)7天獲得未成熟的樹突狀細(xì)胞。
2.NP受體的RT-PCR使用RNA分離試劑盒，從單核細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞中提取總RNA后，用1μg的總RNA和oligo(dT)引物，通過來自骨髓祖細(xì)胞病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶合成一條cDNA。使用下述引物。

針對NP受體進(jìn)行35個循環(huán)的PCR，針對β-actin進(jìn)行25個循環(huán)的PCR。用1.5～2％的瓊脂糖分離PCR產(chǎn)物，用溴化乙錠染色后，以紫外投射裝置檢測。
3.測定促進(jìn)cGMP產(chǎn)生的活性將1×105個細(xì)胞/樣品的細(xì)胞加入到500μL的培養(yǎng)液中，在存在有10mM HEPES、0.5mM 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤、1μM phospholamidon的情況下，于37℃下溫育10分鐘后，添加ANP或CNP使終濃度為10-12～10-6M，此外再溫育15分鐘。洗滌細(xì)胞、破碎后，用ELISA法測定細(xì)胞內(nèi)的cGMP濃度。
B.通過樹突狀細(xì)胞使原始T細(xì)胞發(fā)生增殖反應(yīng)、產(chǎn)生細(xì)胞因子、原始T細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)方法。
1.通過活化的樹突狀細(xì)胞使T細(xì)胞增殖的反應(yīng)原始T細(xì)胞(原始CD4+T細(xì)胞)是采用用于分離MACS CD4+T細(xì)胞的磁珠從來自新生兒臍帶血的單核細(xì)胞級分中分離得到的。在ANP(10-7M)存在或不存在的條件下，將樹突狀細(xì)胞與脂多糖(LPS、1μg/mL)培養(yǎng)24小時，使之激活。洗滌細(xì)胞，經(jīng)放射線照射(30Gy)使之失去增殖能力后，和原始T細(xì)胞(1×105個細(xì)胞/孔)共同培養(yǎng)6天。通過使之摻入0.5μCi/孔的(甲基-3H)-胸苷8個小時，對T細(xì)胞的增殖能力進(jìn)行評價。
2.測定從樹突狀細(xì)胞中產(chǎn)生的細(xì)胞因子在ANP(10-8M～10-6M)或CNP(10-6M)存在或不存在的情況下，將樹突狀細(xì)胞與LPS(1μg/mL)溫育24小時，用ELISA法測定培養(yǎng)上清中的IL-12、IL-10、TNFα的量。
3.原始T細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的表達(dá)分析(研究樹突狀細(xì)胞的Th1/Th2的傾向性)將樹突狀細(xì)胞預(yù)先在ANP(10-7M)存在或不存在的條件下與LPS(1μg/mL)共同溫育24小時，使之活化后，通過放射線照射(30Gy)使之失去增殖能力。將該樹突狀細(xì)胞(1×105個細(xì)胞/孔)和從臍帶血分離的原始T細(xì)胞(1×106個細(xì)胞/孔)共同培養(yǎng)6天。在IL-2(50U/mL)存在的情況下，再培養(yǎng)T細(xì)胞8天使之增殖后，回收T細(xì)胞，用50ng/mL的佛波醇酯(PMA)和500ng/mL的Ionomycin刺激4個小時。在溫育結(jié)束的2小時之前加入BrefeldinA(10μg/mL)。用2％的福爾馬林固定細(xì)胞后，用含有2％FBS、0.5％皂苷的溶劑破壞細(xì)胞膜，用FITC標(biāo)記了的抗IFN-γ單克隆抗體以及PE標(biāo)記了的抗IL-4單克隆抗體染色細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子，用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行分析。IFN-γ陽性細(xì)胞為Th1型細(xì)胞，IL-4陽性細(xì)胞為Th2型細(xì)胞。
實(shí)施例下面通過實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明。
實(shí)施例1在未成熟的樹突狀細(xì)胞上表達(dá)GC-A基因以及通過ANP促進(jìn)cGMP產(chǎn)生的活性本發(fā)明人等，首先針對3種NP受體基因在樹突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞中的表達(dá)進(jìn)行了研究。從獲自正常人外周血的單核細(xì)胞以及未成熟樹突狀細(xì)胞中制備RNA，以RT-PCR法對NP受體GC-A、GC-B、NPR-C的基因表達(dá)進(jìn)行討論，結(jié)果如圖1所示。
經(jīng)確認(rèn)作為陽性對照的來自胎盤的RNA中表達(dá)了全部3種NP受體基因。明確確認(rèn)相對于在單核細(xì)胞中未表達(dá)任何受體基因，在未成熟的樹突狀細(xì)胞中僅表達(dá)GC-A基因。所以可以確定在單核細(xì)胞中不表達(dá)NP受體基因，在來自單核細(xì)胞的樹突狀細(xì)胞中特異性地表達(dá)GC-A基因。
然后，為了闡明在樹突狀細(xì)胞中表達(dá)的GC-A是否和生理功能相關(guān)聯(lián)，分別使單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞對ANP的cGMP產(chǎn)生促進(jìn)活性進(jìn)行了研究。作為對照，使用GC-B特異性的配體CNP。結(jié)果如圖2所示。
ANP通過以10-12M這種低濃度呈現(xiàn)濃度依賴性地使細(xì)胞內(nèi)的cGMP上升，但在單核細(xì)胞中以任何濃度都幾乎不能使cGMP上升。此外，CNP在單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞中的任何一個中都對細(xì)胞內(nèi)的cGMP濃度沒有影響。該結(jié)果支持圖1中所示的GC-A基因的表達(dá)結(jié)果，也很強(qiáng)烈地顯示可能是樹突狀細(xì)胞特異性地表達(dá)GC-A，并且該受體與ANP反應(yīng)擔(dān)負(fù)著生理活性。
實(shí)施例2有關(guān)ANP對樹突狀細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子的作用以及Th2傾向性的研究從實(shí)施例1的結(jié)果可知，ANP作用于樹突狀細(xì)胞，能夠調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。
樹突狀細(xì)胞的重要功能是引發(fā)原始T細(xì)胞的抗原特異性免疫反應(yīng)。因此首先，在已知能使樹突狀細(xì)胞成熟、活化的LPS的存在下以及不存在的條件下，將ANP添加到樹突狀細(xì)胞中，對其涉及針對原始T細(xì)胞的活化、增殖反應(yīng)的影響進(jìn)行研究。結(jié)果如圖3所示。
ANP單獨(dú)不對原始T細(xì)胞的增殖反應(yīng)造成影響，一旦向樹突狀細(xì)胞中添加LPS，就會引發(fā)顯著的T細(xì)胞增殖反應(yīng)。
另一方面，已知一旦同時添加ANP和LPS，就能夠幾乎完全地抑制LPS處理過的樹突狀細(xì)胞所誘導(dǎo)的T細(xì)胞增殖。
所以，ANP表現(xiàn)出能影響由LPS導(dǎo)致的樹突狀細(xì)胞的活化信號或影響樹突狀細(xì)胞的功能。
已知樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子對樹突狀細(xì)胞與T細(xì)胞的相互作用表達(dá)具有非常重要的作用。所以，下面關(guān)于ANP對從樹突狀細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子作用進(jìn)行了研究。結(jié)果如圖4所示。
LPS促進(jìn)從樹突狀細(xì)胞中產(chǎn)生IL-12、TNF-α、IL-10，與此相對，ANP呈現(xiàn)濃度依賴性地使IL-12和TNFα降低，另一方面，使IL-10的產(chǎn)生增強(qiáng)。另外，在LPS未刺激時，從樹突狀細(xì)胞中產(chǎn)生IL-12、TNF-α、IL-10的能力低，單獨(dú)使用ANP對此沒有影響。
此外，因?yàn)镚C-B配體CNP對細(xì)胞因子的表達(dá)沒有影響，由此確認(rèn)在LPS刺激時的ANP作用是通過樹突狀細(xì)胞所表達(dá)的GC-A所介導(dǎo)的。
由樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子中IL-12是具有代表性的Th1型細(xì)胞因子，另一方面，已知IL-10對由Th1細(xì)胞、活化的單核細(xì)胞以及NK細(xì)胞所產(chǎn)生的包括IL-12在內(nèi)的細(xì)胞因子的活性具有阻斷作用。ANP抑制LPS所誘導(dǎo)的由樹突狀細(xì)胞中產(chǎn)生IL-12，但增強(qiáng)IL-10的產(chǎn)生，據(jù)此表現(xiàn)出ANP有可能誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞傾向于Th2細(xì)胞。
所以，針對ANP是否能夠誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞傾向于Th2，用LPS刺激樹突狀細(xì)胞時，使之與ANP共存，分析原始T細(xì)胞究竟向Th1、Th2的那一種類型分化、增殖。已知LPS作用于樹突狀細(xì)胞的Toll樣受體4，促進(jìn)IL-12的表達(dá)，使原始T細(xì)胞傾向于具有高的IL-12產(chǎn)生能力的Th1型細(xì)胞(Akira S等，Nat.Immunol.Vol.2，p675，2001)。
單獨(dú)的LPS、或LPS與ANP共存下刺激的樹突狀細(xì)胞和原始T細(xì)胞相互作用后，將T細(xì)胞在含有IL-2的培養(yǎng)液中增殖，使用流式細(xì)胞術(shù)分析Th1型細(xì)胞表達(dá)的細(xì)胞因子IFN-γ、Th2型細(xì)胞表達(dá)因子IL-4。圖5表示了2例T細(xì)胞樣品的分析結(jié)果。在圖5中表示了IFN-γ陽性、IL-4陰性細(xì)胞向Th1型細(xì)胞分化、增殖，IL-4陽性、IFN-γ陰性細(xì)胞向Th2型的輔助T細(xì)胞分化、增殖。
在1號樣品和2號樣品的任何一個中，與LPS單獨(dú)處理組相比，在ANP共處理組中，IL-4產(chǎn)生細(xì)胞明顯增加，IFN-γ產(chǎn)生細(xì)胞明顯減少。此外，對另外的3份樣品進(jìn)行了研究，得到了相同的結(jié)果。
通過本實(shí)施例，可知ANP促進(jìn)樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生IL-10，使IL-12的產(chǎn)生降低，據(jù)此拮抗LPS的作用，將樹突狀細(xì)胞向Th2傾向性方面誘導(dǎo)，使T細(xì)胞向Th2型輔助T細(xì)胞分化，據(jù)此抑制Th1型免疫反應(yīng)。
序列表<110>第一阿斯比奧制藥株式會社<120>用于預(yù)防或治療Th1型免疫疾病的藥物組合物<130>031317<160>16<210>1<211>28<212>PRT<213>智人(Homo sapiens)<400>1Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg Ile Gly5 10 15Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr20 25<210>2<211>28<212>PRT<213>大鼠<400>2Ser Leu Arg Arg Ser Ser Cys Phe Gly Gly Arg Ile Asp Arg Ile Gly5 10 15Ala Gln Ser Gly Leu Gly Cys Asn Ser Phe Arg Tyr20 25<210>3<211>22<212>PRT<213>智人<400>3Cys Phe Gly Gly Arg Met Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser Gly Leu Gly5 10 15Cys Asn Ser Phe Arg Tyr20<210>4
<211>32<212>PRT<213>智人<400>4Ser Pro Lys Met Val Gln Gly Ser Gly Cys Phe Gly Arg Lys Met Asp5 10 15Arg Ile Ser Ser Ser Ser Gly Leu Gly Cys Lys Val Leu Arg Arg His20 25 30<210>5<211>24<212>PRT<213>蛙<400>5Ser Ser Asp Cys Phe Gly Ser Arg Ile Asp Arg Ile Gly Ala Gln Ser5 10 15Gly Met Gly Cys Gly Arg Arg Phe20<210>6<211>32<212>PRT<213>豬<400>6Ser Pro Lys Thr Met Arg Asp Ser Gly Cys Phe Gly Arg Arg Leu Asp5 10 15Arg Ile Gly Ser Leu Ser Gly Leu Gly Cys Asn Val Leu Arg Arg Tyr20 25 30<210>7<211>45<212>PRT<213>大鼠<400>7Ser Gln Asp Ser Ala Phe Arg Ile Gln Glu Arg Leu Arg Asn Ser Lys5 10 15
Met Ala His Ser Ser Ser Cys Phe Gly Gln Lys Ile Asp Arg Ile Gly20 25 30Ala Val Ser Arg Leu Gly Cys Asp Gly Leu Arg Leu Phe35 40 45<210>8<211>29<212>PRT<213>雞<400>8Met Met Arg Asp Ser Gly Cys Phe Gly Arg Arg Ile Asp Arg Ile Gly5 10 15Ser Leu Ser Gly Met Gly Cys Asn Gly Ser Arg Lys Asn20 25<210>9<211>21<212>DNA<213>人工序列<400>9gggaacctca agtcatccaa c<210>10<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>10atgaagggca aaggcaaggt<210>11<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>11tctagaaaat gacagcatca
<210>12<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>12tgacaacttt gatgtctaca<210>13<211>24<212>DNA<213>人工序列<400>13gaaggtatcg ccgggcaggt gtcc<210>14<211>24<212>DNA<213>人工序列<400>14tcttcccgta attcccgatg tttt<210>15<211>21<212>DNA<213>人工序列<400>15tcctgtggca tccacgaaac t<210>16<211>21<212>DNA<213>人工序列<400>16gaagcatttg cggtggacga t
權(quán)利要求
1.用于預(yù)防或治療Th1型免疫疾病的藥物組合物，其中，以可作用于鈉利尿肽受體鳥苷酸環(huán)化酶A促進(jìn)產(chǎn)生環(huán)單磷酸鳥苷的物質(zhì)為有效成分。
2.權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中，Th1型免疫疾病選自起因于伴隨移植的排斥反應(yīng)的疾病、骨髓(造血干細(xì)胞)移植導(dǎo)致的移植物抗宿主病以及自身免疫疾病。
3.權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其中，自身免疫疾病選自自身免疫性肝炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胰島素依賴性糖尿病、潰瘍性結(jié)腸炎、克郎氏病、多發(fā)性硬化癥、自身免疫性心肌炎、銀屑病、皮膚硬化癥、重癥肌無力癥、多發(fā)性肌肉炎/皮膚肌肉炎、橋本病、自身免疫血細(xì)胞減少癥(純紅細(xì)胞再生障礙性貧血、再生不良性貧血)、干燥綜合征、血管炎綜合癥以及全身性紅斑狼瘡。
4.權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其中，自身免疫疾病為克郎氏病或多發(fā)性硬化癥。
5.權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中，可作用于鈉利尿肽受體鳥苷酸環(huán)化酶A促進(jìn)產(chǎn)生環(huán)單磷酸鳥苷的物質(zhì)為鈉利尿肽。
6.權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其中，鈉利尿肽為心房鈉利尿肽或腦性利尿肽。
7.權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其中，心房鈉利尿肽來自人。
8.Th1型免疫疾病的治療方法，其特征在于，給予可作用于鈉利尿肽受體鳥苷酸環(huán)化酶A促進(jìn)產(chǎn)生環(huán)單磷酸鳥苷的物質(zhì)。
9.權(quán)利要求8所述的治療方法，其中，Th1型免疫疾病選自伴隨移植的排斥反應(yīng)所導(dǎo)致的疾病、骨髓(造血干細(xì)胞)移植導(dǎo)致的移植物抗宿主病以及自身免疫疾病。
10.權(quán)利要求9所述的治療方法，其中，免疫疾病選自自身免疫性肝炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胰島素依賴性糖尿病、潰瘍性結(jié)腸炎、克郎氏病、多發(fā)性硬化癥、自身免疫性心肌炎、銀屑病、皮膚硬化癥、重癥肌無力癥、多發(fā)性肌肉炎/皮膚肌肉炎、橋本病、自身免疫血細(xì)胞減少癥(純紅細(xì)胞再生障礙性貧血、再生不良性貧血)、干燥綜合征、血管炎綜合癥以及全身性紅斑狼瘡。
11.權(quán)利要求10所述的治療方法，其中，自身免疫疾病為克郎氏病或多發(fā)性硬化癥。
12.權(quán)利要求8所述的治療方法，其中，可作用于鈉利尿肽受體鳥苷酸環(huán)化酶A促進(jìn)產(chǎn)生環(huán)單磷酸鳥苷的物質(zhì)為鈉利尿肽。
13.權(quán)利要求12所述的治療方法，其中，鈉利尿肽為心房鈉利尿肽或腦性利尿肽。
14.權(quán)利要求13所述的治療方法，其中，心房鈉利尿肽來自人。
15.可作用于鈉利尿肽受體鳥苷酸環(huán)化酶A促進(jìn)產(chǎn)生環(huán)單磷酸鳥苷的物質(zhì)在用于制造預(yù)防或治療Th1型免疫疾病的藥物組合物中的應(yīng)用。
16.權(quán)利要求15所述的應(yīng)用，其中，Th1型免疫疾病選自伴隨移植的排斥反應(yīng)所導(dǎo)致的疾病、骨髓(造血干細(xì)胞)移植導(dǎo)致的移植物抗宿主病以及自身免疫疾病。
17.權(quán)利要求16所述的應(yīng)用，其中，免疫疾病選自自身免疫性肝炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胰島素依賴性糖尿病、潰瘍性結(jié)腸炎、克郎氏病、多發(fā)性硬化癥、自身免疫性心肌炎、銀屑病、皮膚硬化癥、重癥肌無力癥、多發(fā)性肌肉炎/皮膚肌肉炎、橋本病、自身免疫血細(xì)胞減少癥(純紅細(xì)胞再生障礙性貧血、再生不良性貧血)、干燥綜合征、血管炎綜合癥以及全身性紅斑狼瘡。
18.權(quán)利要求17所述的應(yīng)用，其中，自身免疫疾病為克郎氏病或多發(fā)性硬化癥。
19.權(quán)利要求15所述的應(yīng)用，其中，可作用于鈉利尿肽受體鳥苷酸環(huán)化酶A促進(jìn)產(chǎn)生環(huán)單磷酸鳥苷的物質(zhì)為鈉利尿肽。
20.權(quán)利要求19所述的應(yīng)用，其中，鈉利尿肽為心房鈉利尿肽或腦性利尿肽。
21.權(quán)利要求20所述的應(yīng)用，其中，心房鈉利尿肽來自人。
22.調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)中Th1/Th2平衡的方法，其特征為，將可作用于鈉利尿肽受體鳥苷酸環(huán)化酶A促進(jìn)產(chǎn)生環(huán)單磷酸鳥苷的物質(zhì)作用于樹突狀細(xì)胞，誘導(dǎo)T細(xì)胞的Th2傾向性。
23.權(quán)利要求22所述的方法，其中，可作用于鈉利尿肽受體鳥苷酸環(huán)化酶A促進(jìn)產(chǎn)生環(huán)單磷酸鳥苷的物質(zhì)為鈉利尿肽。
24.權(quán)利要求23所述的方法，其中，鈉利尿肽為心房鈉利尿肽或腦性利尿肽。
25.權(quán)利要求24所述的方法，其中，心房鈉利尿肽來自人。
全文摘要
本發(fā)明提供用于預(yù)防或治療Th1型免疫疾病的藥物組合物，所述藥物組合物是含有以下述物質(zhì)作為有效成分的用于預(yù)防或治療Th1型免疫疾病的藥物組合物，所述物質(zhì)可作用于在樹突狀細(xì)胞中表達(dá)的NP受體GC－A，促進(jìn)cGMP產(chǎn)生，通過調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子使T細(xì)胞分化成Th2型細(xì)胞。
文檔編號A61P1/02GK1816353SQ20048001927
公開日2006年8月9日 申請日期2004年6月11日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月13日
發(fā)明者堀利行 申請人:第一阿斯比奧制藥株式會社