專利名稱：經(jīng)芳基取代的苯并[d]異噻唑－3－基胺類似物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明大體而言是涉及經(jīng)芳基取代的苯并[d]異噻唑-3-基胺類似物，所述類似物為辣椒素受體(capsaicin receptor)的調(diào)節(jié)劑，以及涉及使用所述化合物來治療與辣椒素受體活化相關(guān)的病癥。本發(fā)明進(jìn)一步涉及使用所述化合物做為檢測和定位辣椒素受體的探針。
背景技術(shù)：
痛覺或傷害性刺激是由一群特化感覺神經(jīng)元的周邊末稍所介導(dǎo)，稱為“傷害性受體(nociceptor)”。各種不同物理和化學(xué)刺激會引起哺乳動物所述神經(jīng)元的活化，導(dǎo)致潛在傷害刺激的認(rèn)知。然而不適當(dāng)或過度活化傷害性受體可造成急性或慢性疼痛衰弱。
神經(jīng)病變性疼痛(亦可簡稱神經(jīng)痛)涉及無刺激存在的疼痛訊號傳導(dǎo)，一般起因于神經(jīng)系統(tǒng)的傷害。大部分的例子中，該疼痛的發(fā)生被視為由于周邊系統(tǒng)初期傷害(例如，直接傷害或全身性疾病)后周邊和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的敏化作用(sensitization)。神經(jīng)痛一般有灼熱、刺痛感且其強(qiáng)度持續(xù)，有時該神經(jīng)痛在引發(fā)該神經(jīng)痛的初期傷害或疾病期間更能使人衰弱。
已存在的神經(jīng)痛治療方式大部分效果不明顯。鴉片類(opiates)如嗎啡為強(qiáng)有力的止痛藥，但由于有害的副作用使其使用受限，此等副作用會造成例如生理上的成癮和戒斷特性以及呼吸抑制、性情改變和降低腸蠕動并伴隨便秘、惡心、嘔吐，及內(nèi)分泌和自律神經(jīng)系統(tǒng)的改變。另外，神經(jīng)痛對于已知的鴉片類止痛藥療法經(jīng)常是無反應(yīng)的，或僅部分有反應(yīng)。使用N-甲基-D-天門冬胺酸拮抗劑克他明(ketamine；亦可稱為氯胺酮)或α(2)-類腎上腺素促效劑(adrenergic agonist)氯壓定(clonidine)，可減輕急性或慢性疼痛，并使鴉片消耗量降低，但因其副作用而使所述藥劑常有不佳的耐受性。
以辣椒素做局部治療一直用作慢性或急性疼痛，包括神經(jīng)痛的治療方式。辣椒素為來自茄科植物(包括紅辣椒)的刺激性物質(zhì)，可能選擇性地作用于被視為介導(dǎo)疼痛的小徑傳入神經(jīng)纖維(A-δ和C纖維)。辣椒素反應(yīng)特性為持續(xù)活化在周邊組織中的傷害性受體，隨后使周邊傷害性受體對一或多個刺激脫敏(desensitization)。從動物研究中，辣椒素表現(xiàn)出通過打開鈣和鈉的陽離子選擇性通道而觸發(fā)C纖維膜去極化作用。
共有相同類香草醇(vanilloid)部分的辣椒素結(jié)構(gòu)類似物也引起相似的反應(yīng)。一種所述類似物為樹膠脂毒素(RTX)，為大戟科植物的天然產(chǎn)物。用術(shù)語類香草醇受體(VR)來描述辣椒素及其相關(guān)刺激化合物的神經(jīng)細(xì)胞膜辨識位置。辣椒素反應(yīng)會被其它辣椒素類似物(辣椒平(capsazepine；為辣椒素受體阻斷劑))競爭性地抑制(而因此拈抗)，也可被非選擇性陽離子通道阻斷劑(釕紅；ruthenium red)所抑制。所述拮抗劑使用只以中度的親和力(一般Ki值不小于140μM)結(jié)合至VR。
大鼠和人類的類香草醇受體是從背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞克隆出來。經(jīng)鑒別的第一類型類香草醇受體已知為類香草醇受體1型(VR1)，該詞”VR1”和”辣椒素受體”在本發(fā)明可交換地使用來指稱大鼠和/或人類的此類型受體，以及哺乳動物的同源系。VR1在痛覺上所扮演的角色已經(jīng)通過使用缺乏該受體的小鼠來證實，該小鼠沒有表現(xiàn)出類香草醇所引發(fā)的疼痛行為，且對熱和發(fā)炎的反應(yīng)減弱。VR1為具有開啟閾值的非選擇性陽離子通道，該閥值對應(yīng)高溫、低pH和辣椒素受體促效劑時降低。例如，該信道通常在大于45℃的溫度打開。該辣椒素受體通道通常在發(fā)炎肽釋放后開啟，以增加疼痛反應(yīng)，所述發(fā)炎肽來自于表現(xiàn)該受體的神經(jīng)元及其鄰近神經(jīng)元。在辣椒素初期活化后，辣椒素受體經(jīng)由以cAMP依賴型蛋白激酶(cAMP-dependent protein kinase)介導(dǎo)的磷酸化作用而經(jīng)歷快速的脫敏化(desensitization)作用。
VR1促效劑類香草醇化合物一直用作典型的麻醉劑，這是由于其對周邊組織的傷害性受體具有脫敏化的能力。然而，促效劑的應(yīng)用本身可能導(dǎo)致灼熱痛，從而限制其治療上的使用。最近有報導(dǎo)稱，VR1拮抗劑，包括非類香草醇化合物，亦有助于疼痛的治療(請參見PCT國際申請案公開號WO 02/08221，其于2002年1月31日公開)。
因此，與VR1發(fā)生反應(yīng)但不引起VR1促效劑類香草醇化合物的初期痛覺的化合物可用于慢性和急性疼痛(包括神經(jīng)痛)的治療。此受體的拮抗劑特別適用于疼痛和下列病癥的治療，例如暴露于催淚瓦斯、發(fā)癢及諸如尿失禁和膀胱過動癥(overactive bladder)的尿道疾病。本發(fā)明達(dá)到此需求，并進(jìn)一步提供相關(guān)的優(yōu)點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供能改變，優(yōu)選能抑制辣椒素受體活化的辣椒素受體調(diào)節(jié)劑。在某些方面，本發(fā)明提供如下面通式I所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式 式I其中W、Y和Z獨立地為N或CR1；R1在每種情況下獨立地選自氫、鹵素、氰基、氨基、任性經(jīng)取代的C1-C6烷基、任性經(jīng)取代的鹵代C1-C6烷基、任性經(jīng)取代的C1-C6烷氧基、任性經(jīng)取代的鹵代C1-C6烷氧基或任選經(jīng)取代的單-與二-C1-C6烷氨基；Ar1和Ar2獨立地選自5-至10-元芳族碳環(huán)與雜環(huán)，其中每一個任選經(jīng)取代，優(yōu)選地經(jīng)0至3個取代基來取代，所述取代基獨立地選自鹵素、氰基、硝基或通式為LRa的基團(tuán)；L在每種情況下獨立地選自單一共價鍵、O、C(＝O)、OC(＝O)、C(＝O)O、O-C(＝O)O、S(O)m、N(Rx)、C(＝O)N(Rx)-、N(Rx)C(＝O)、N(Rx)S(O)m、S(O)mN(Rx)或N[S(O)mRx]S(O)m；其中m在每種情況下獨立地選自0、1或2；而Rx在每種情況下獨立地選自氫或任選經(jīng)取代的C1-C8烷基；及Ra在每種情況下獨立地選自(i)氫；及(ii)C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、鹵代C1-C8烷基、C2-C8烷基醚、單-與二-(C1-C8烷基)氨基、及(3-至10-元雜環(huán))C0-C4烷基，其中每一個經(jīng)0至6個取代基來取代，所述取代基獨立地選自(a)羥基、鹵素、氨基、氨基羰基、氰基、硝基、酮基或COOH；及(b)C1-C8烷基、C1-C8烯基、C1-C8炔基、C1-C8烷氧基、C1-C8烷硫基、C1-C8烷基醚、C1-C8烷酰基、C1-C8烷酮、C1-C8烷?；趸?、C1-C8烷氧基羰基、羥基C1-C8烷基、鹵代C1-C8烷基、氰基C1-C8烷基、苯基C0-C8烷基、單-與二-(C1-C6烷基)氨基C0-C8烷基、C1-C8烷基磺?；?5-至7-元雜環(huán))C0-C8烷基；其中每一個任選地經(jīng)取代。
在某些方面，本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑在辣椒素受體結(jié)合試驗中顯現(xiàn)不大于1微摩爾濃度、100納摩爾濃度、50納摩爾濃度、10納摩爾濃度或1納摩爾濃度的Ki，和/或在測定辣椒素受體促效劑或拮抗劑活性的試驗中具有不大于1微摩爾濃度、100納摩爾濃度、50納摩爾濃度、10納摩爾濃度或1納摩爾濃度的EC50或IC50值。
在某些具體實施例中，本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑為VRI拮抗劑，且在辣椒素受體活化的體外試驗中顯示無可檢測的促效劑活性。
在某些方面，本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑用可檢測的標(biāo)記物(例如，放射性標(biāo)記或熒光標(biāo)記物)予以標(biāo)記。
在某些方面，本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑及其藥學(xué)上可接受的形式以可檢測的標(biāo)記物(例如，放射性標(biāo)記或熒光標(biāo)記物)予以標(biāo)記。
在其它方面，本發(fā)明進(jìn)一步提供包括至少一種如本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑(亦即本發(fā)明所提供的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式)和生理上可接受的載劑或賦形物的藥學(xué)組合物。
在其它方面，本發(fā)明提供降低細(xì)胞辣椒素受體的鈣離子傳導(dǎo)的方法，所述方法包括使表達(dá)辣椒素受體的細(xì)胞(例如神經(jīng)元)與辣椒素受體調(diào)節(jié)量的至少一種如本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑接觸。所述接觸可發(fā)生在體內(nèi)或體外。
本發(fā)明進(jìn)一步提供抑制類香草醇配位體與辣椒素受體結(jié)合的方法。在某些此類方面，所述抑制可發(fā)生在體外。所述方法包括在足以可檢測地抑制類香草醇配位體結(jié)合至辣椒素的條件與用量下，使辣椒素受體與至少一種如本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑接觸。在其它此類方面，所述辣椒素受體是在患者體內(nèi)。所述方法包括在足以體外可檢測地抑制類香草醇配位體與表達(dá)克隆辣椒素受體的細(xì)胞結(jié)合的用量下，使表達(dá)辣椒素受體的患者細(xì)胞與至少一種如本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑接觸，進(jìn)而抑制類香草醇配位體結(jié)合至患者的辣椒素受體。
本發(fā)明進(jìn)一步提供用于治療患者對辣椒素受體調(diào)節(jié)敏感的病癥的方法，所述包括對患者給藥辣椒素受體調(diào)節(jié)量的至少一種如本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑。
在其它方面，本發(fā)明提供治療患者疼痛的方法，所述包括對患有疼痛的患者給藥辣椒素受體調(diào)節(jié)量的至少一種如本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑。
本發(fā)明進(jìn)一步提供用于治療患者癢、尿失禁、膀胱過動、咳嗽和/或打嗝的方法，所述包括對患有一或多種上述癥狀的患者給藥辣椒素受體調(diào)節(jié)量的至少一種如本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑。
本發(fā)明進(jìn)一步提供促使肥胖患者減重的方法，所述方法包括對肥胖患者給藥辣椒素受體調(diào)節(jié)量的至少一種如本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑。
在其它方面，本發(fā)明進(jìn)一步提供用于測定試樣中辣椒素受體存在與否的方法，所述方面包括(a)在容許VR1調(diào)節(jié)劑結(jié)合至辣椒素受體的條件下，使試樣與如本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑接觸；及(b)檢測與辣椒素受體結(jié)合的VR1調(diào)節(jié)劑的濃度。
本發(fā)明也提供了經(jīng)包裝的藥學(xué)制劑，所述制劑包括(a)裝于容器中的如本發(fā)明所述的藥學(xué)組合物；及(b)使用該組合物治療對辣椒素受體調(diào)節(jié)作用敏感的一種或多種癥狀(例如疼痛、癢、尿失禁、膀胱過動、咳嗽、打嗝和/或肥胖癥)的說明書。
在又另一方面，本發(fā)明提供了制備本發(fā)明所揭示的化合物(包括中間產(chǎn)物)的方法。
參照下文詳細(xì)說明后，本發(fā)明的上述及其它方面將更為清楚明白。詳細(xì)說明如上文所述，本發(fā)明提供作為辣椒素受體調(diào)節(jié)劑的經(jīng)芳基取代的苯并[d]異噻唑-3-基胺類似物。所述調(diào)節(jié)劑可用于體外或體內(nèi)，以調(diào)節(jié)(優(yōu)選為抑制)各種背景下的辣椒素受體活性。
術(shù)語本發(fā)明中的化合物通常使用標(biāo)準(zhǔn)命名法予以敘述。對于具有不對稱中心的化合物，應(yīng)了解(除非特別指明)所有光學(xué)異構(gòu)體及其混合物均涵蓋在內(nèi)。另外，具有碳-碳雙鍵的化合物可存在Z-與E-型，除非特別指明，否則化合物的所有異構(gòu)體型均涵蓋在本發(fā)明范圍內(nèi)。當(dāng)化合物以多種互變異構(gòu)體存在時，所述化合物并不受限于任一特定的互變異構(gòu)體，而是要涵蓋所有互變異構(gòu)體。本發(fā)明中某些化合物是使用含有變量(例如，R3、A1、X)的通式進(jìn)行敘述的。除非特別指明，否則所述通式中每個變量皆獨立地界定為任何不同的變量，且在通式中出現(xiàn)超過一次以上的任何變量在每次出現(xiàn)時均各自獨立地進(jìn)行界定。
本發(fā)明所使用的術(shù)語“經(jīng)芳基取代的苯并[d]異噻唑-3-基胺類似物”涵蓋所有滿足通過式I的化合物，以及本發(fā)明所提供其它通式的化合物及所述化合物在藥學(xué)上可接受的形式。所述化合物包括苯并[d]異噻唑核心中環(huán)雜原子的數(shù)字和/或配置經(jīng)修改的類似物，以及經(jīng)各種在下文將做更詳細(xì)說明的取代基連接至所述核心結(jié)構(gòu)的類似物。在經(jīng)芳基取代的苯并[d]異噻唑-3-基胺類似物的范圍內(nèi)，具有下述核心結(jié)構(gòu)(具有或不具有進(jìn)一步環(huán)取代)的化合物是做為舉例給出的，而非用以限制本發(fā)明的范疇 本發(fā)明所述的化合物“藥學(xué)上可接受的形式”為藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、溶劑合物、結(jié)晶形式、多態(tài)異構(gòu)物(polymorph)、螯合物、非共價復(fù)合物、酯類、晶籠化合物及該化合物的前物(prodrug)。本發(fā)明所使用的藥學(xué)上可接受的鹽為酸式或堿式鹽，且通常為本技術(shù)領(lǐng)域中認(rèn)為適用于與人類或動物組織接觸，而無過度毒性、刺激性、過敏反應(yīng)或其它問題或并發(fā)癥的鹽。此種鹽類包括堿性殘基(諸如胺)的無機(jī)和有機(jī)酸鹽，及酸性殘基(諸如羧酸)的堿金屬或有機(jī)鹽。特定的藥學(xué)上的鹽包括，但不限于，例如鹽酸、磷酸、氫溴酸、蘋果酸、乙醇酸、反丁烯二酸、硫酸、胺磺酸、對胺苯磺酸、甲酸、甲苯磺酸、甲烷磺酸、苯磺酸、乙烷二磺酸、2-羥基乙磺酸、硝酸、苯甲酸、2-乙酰氧基苯甲酸、檸檬酸、酒石酸、乳酸、硬脂酸、柳酸、麩胺酸、抗壞血酸、雙羥酸、琥珀酸、反丁烯二酸、馬來酸、丙酸、羥基馬來酸、氫碘酸、苯基乙酸、烷酸如乙酸、HOOC-(CH2)n-COOH(其中n為0至4)等酸的鹽。同樣地，藥學(xué)上可接受的陽離子包括但不限于，鈉、鉀、鈣、鋁、鋰與銨。在此技術(shù)領(lǐng)域具有通常知識者可進(jìn)一步知道本發(fā)明提供的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽，包括那些由Remington’s PharmaceuticalSciences，17th ed.，Mack Publishing Company，Easton，PA，p.1418(1985)所列舉的那些。通常，藥學(xué)上可接受的酸式或堿式鹽可利用任何已知的化學(xué)方法，用含堿性或酸性部分的母化合物來合成。簡言的，所述鹽可通過使游離酸或堿形式的那些化合物與化學(xué)計量的適當(dāng)堿或酸，在水或有機(jī)溶劑或二者的混合物中反應(yīng)來制備；通常，優(yōu)選使用非水性介質(zhì)，例如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。
“前物”是一種化合物，其可能不完全滿足本發(fā)明提供的化合物的結(jié)構(gòu)需求，然而在給藥患者后即在活體內(nèi)經(jīng)修飾而產(chǎn)生通式I化合物或本發(fā)明所提供的其它通式的化合物。例如，前物可為本發(fā)明所提供的化合物的?；苌?。前物包括這樣的化合物，所述化合物中羥基、胺或硫氫基與任何基團(tuán)結(jié)合，當(dāng)給藥至哺乳動物對象后，所述基團(tuán)裂解而分別地形成游離的羥基、氨基或硫氫基。前物的實施例包括，但不限于，本發(fā)明所提供化合物中的醇和胺官能基的乙酸鹽、甲酸鹽及苯甲酸鹽衍生物。本發(fā)明提供的化合物的前物可通過修飾存在于化合物中的官能基來制備，其中所述修飾為經(jīng)裂解而成為母化合物。
本發(fā)明所用的“烷基”一詞是指直鏈或支鏈的飽和脂肪族烴。烷基包含具有1至8個碳原子(C1-C8烷基)、1至6個碳原子(C1-C6烷基)及1至4個碳原子(C1-C4烷基)的基團(tuán)，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、2-戊基、異戊基、新戊基、己基、2-己基、3-己基及3-甲基戊基、環(huán)丙基、環(huán)丙基甲基、環(huán)戊基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基、環(huán)庚基及降莰基。“C0-C4烷基”是指單一共價鍵(C0)或具有1、2、3或4個碳原子的烷基；“C0-C6烷基”是指單一共價鍵或C1-C6烷基；“C0-C8烷基”是指單一共價鍵或C1-C8烷基。在某些具體實施例中，優(yōu)選的烷基為直鏈或分支狀。在本發(fā)明某些例子中，烷基的取代基會特別地指明，例如“氰基C1-C4烷基”是指具有至少一個CN取代基的C1-C4烷基。一個代表性的分支狀氰基烷基的基團(tuán)是為-C(CH3)2CN。
同樣地，“烯基”是指直鏈或支鏈或環(huán)狀的烯基團(tuán)，其中至少存在一個不飽和碳-碳雙鍵。烯基包括分別具有2至8個、2至6個或2至4個碳原子的C2-C8烯基、C2-C6烯基及C2-C4烯基，例如乙烯基、烯丙基或異丙烯基?！叭不笔侵妇哂幸换蚨鄠€不飽和碳-碳鍵且其中至少一者為三鍵的直鏈或支鏈炔基團(tuán)。炔基包括分別具有2至8個、2至6個或2至4個碳原子的C2-C8炔基、C2-C6炔基及C2-C4炔基。在某些具體實施例中，優(yōu)選的烯基和炔基為直鏈或支鏈。
本發(fā)明所用的“烷氧基”意指經(jīng)由氧橋連接的如上所述的烷基。烷氧基包含分別具有1至6個或1至4個碳原子的C1-C6烷氧基及C1-C4烷氧基。特定的烷氧基為甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、2-戊氧基、3-戊氧基、異戊氧基、新戊氧基、己氧基、2-己氧基、3-己氧基或3-甲基戊氧基。
同樣地，“烷硫基”是指經(jīng)由硫橋連接的如上所述的烷基、烯基或炔基。優(yōu)選的烷氧基及烷硫基是經(jīng)由雜原子橋鍵連接的烷基。
本發(fā)明所用的“酮基(oxo)”一詞是指酮(keto)(C＝O)基團(tuán)，所述酮基為非芳族碳原子的取代基，并會使-CH2-轉(zhuǎn)變成-C(＝O)-。
“烷?；币辉~是指呈線型或分支型排列的?；?例如，-(C＝O)-烷基)，其中經(jīng)由酮基的碳進(jìn)行連接。烷?；ǚ謩e具有2至8個、2至6個或2至4個碳原子的C2-C8烷?；?、C2-C6烷?；癈2-C4烷?；?。“C1烷?；笔侵?(C＝O)-H，其(與C2-C8烷?；?已由“C1-C8烷酰基”一詞所涵蓋。乙酰基為C2烷?；?。
“烷酮”為碳原子呈線型或分支型烷基排列的酮基團(tuán)?！癈3-C8烷酮”、“C3-C6烷酮”與“C3-C4烷酮”分別是指具有3至8、6或4個碳原子的烷酮。舉例而言，C3烷酮的結(jié)構(gòu)式為-CH2-(C＝O)-CH3。
同樣地，“烷基醚”是指線型或分支型醚取代基。烷基醚基團(tuán)包括分別具有2至8、6或4個碳原子的C2-C8烷基醚、C2-C6烷基醚及C2-C4烷基醚等基團(tuán)。舉例而言，C2烷基醚的結(jié)構(gòu)式為-CH2-O-CH3。
“烷氧基羰基”一詞是指經(jīng)由羰基連接的烷氧基(即具有一般結(jié)構(gòu)為-C(＝O)-O-烷基)。烷氧基羰基包括分別具有2至8、6或4個碳原子的C2-C8、C2-C6及C2-C4烷氧基羰基?！癈1烷氧基羰基”是指-C(＝O)-OH，其已由“C1-C8烷氧基羰基”一詞所涵蓋。
本發(fā)明所用的“烷酰基氧基”，是指經(jīng)由氧橋連接的烷?；?即具有一般結(jié)構(gòu)為-O-C(＝O)-烷基的基團(tuán))。烷?；趸ǚ謩e具有2至8、6或4個碳原子的C2-C8、C2-C6及C2-C4烷酰基氧基。
“烷基磺酰基”是指通式為-(SO2)-烷基的基團(tuán)，其中連接點為硫原子。烷基磺?；ǚ謩e具有1至6或1至4個原子的C1-C6烷基磺?；cC1-C4烷基磺?；?。甲基磺?；鶠橐环N代表性的烷基磺?；?。
“烷基磺酰氨基”是指通式為-(SO2)-N(R)2的基團(tuán)，其中連接點為硫原子，且每一個R獨立地為氫或烷基?！皢?或二-(C1-C6烷基)磺酰氨基”是指該基團(tuán)中一個R為C1-C6烷基，而另一個R為氫或獨立地選自C1-C6烷基。
“烷氨基”是指通式為-NH-烷基或-N(烷基)(烷基)的二級或三級胺，其中每一個烷基相同或不同。此類基團(tuán)包括，例如，單-及二-(C1-C8烷基)氨基，其中每一個烷基相同或不同且可含1至8個碳原子，以及單-及二-(C1-C6烷基)氨基與單-及二-(C1-C4烷基)氨基。
“烷基胺烷基”是指經(jīng)由烷基連接的烷氨基(即通式為-烷基-NH-烷基或-烷基-N(烷基)(烷基)的基團(tuán))，其中各烷基經(jīng)獨立地選定。此類基團(tuán)包括，例如，單-及二-(C1-C8烷基)氨基C1-C8烷基、單-及二-(C1-C6烷基)氨基C1-C6烷基與單-及二-(C1-C4烷基)氨基C1-C4烷基，其中各烷基相同或不同?！皢?或二-(C1-C6烷基)氨基C0-C6烷基”是指經(jīng)由直接鍵結(jié)或C1-C6烷基連接的單-或二-(C1-C6烷基)氨基。下列為代表性的烷氨基烷基 “氨基羰基”一詞是指酰氨基(即-(C＝O)NH2)。“單-或二-(C1-C8烷基)氨基羰基”是其中一或兩個氫原子被C1-C8烷基置換的氨基羰基。若兩個氫原子均被如此置換時，所述C1-C8烷基可相同或不同。
“鹵素”一詞是指氟、氯、溴或碘。
“鹵烷基”為以1個或多個鹵原子取代的支鏈、直鏈或環(huán)狀烷基(例如，“C1-C8鹵烷基”具有1至8個碳原子；“C1-C6鹵烷基”基團(tuán)具有1至6個碳原子)。鹵烷基的實施例包括但不限于，單-、二-或三-氟甲基；單-、二-或三-氯甲基；單-、二-、三-、四-或五氟乙基；單-、二-、三-、四-或五氯乙基；及1，2，2，2-四氟-1-三氟甲基-乙基。典型的鹵烷基為三氟甲基及二氟甲基?！胞u烷氧基”是指經(jīng)由氧橋連接的如上文界定的鹵烷基?！癈1-C8鹵烷氧基”具有1至8個碳原子。
不是介于兩個字母或符號間的破折號(-)是用于指示取代基的連接點。例如，-CONH2是經(jīng)由碳原子連接。
“碳環(huán)”或“碳環(huán)狀基團(tuán)”包括完全由碳-碳鍵形成的至少一個環(huán)(本發(fā)明稱為碳環(huán)狀環(huán))，而不包含雜環(huán)。除非特別指示，否則碳環(huán)內(nèi)的各碳環(huán)狀環(huán)可為飽和、部分飽和或芳香族。碳環(huán)通常具有1至3個稠合環(huán)、側(cè)環(huán)(pendant ring)或螺環(huán)；特定具體實施例中的碳環(huán)具有一個環(huán)或兩個稠合環(huán)。典型地，各環(huán)含有3至8個環(huán)元(即C3-C8)；在特定具體實施例中列舉出C5-C7環(huán)。包括稠合環(huán)、側(cè)環(huán)或螺環(huán)的碳環(huán)一般含有9至14個環(huán)元。特定代表性碳環(huán)為環(huán)烷基(即包含飽和和/或部分飽和環(huán)的基團(tuán)，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、金剛烷基、十氫-萘基、八氫-茚基，及任何上述基團(tuán)的部分飽和變體，例如環(huán)己烯基)。其它碳環(huán)為芳基(即含有至少一個芳族碳環(huán))。所述碳環(huán)包括例如，苯基、萘基、芴基、茚滿基及1，2，3，4-四氫-萘基。
本發(fā)明列舉的某些碳環(huán)為C6-C10芳基C0-C8烷基(即含有至少一個芳族環(huán)的碳環(huán)是經(jīng)由直接鍵結(jié)或C1-C8烷基連接的基團(tuán))。此類基團(tuán)包括，例如，苯基與萘基，以及上述兩基團(tuán)中任一基團(tuán)經(jīng)由C1-C8烷基(優(yōu)選為經(jīng)由C1-C4烷基)連接的基團(tuán)。經(jīng)由直接鍵結(jié)或烷基連接的苯基可記為苯基C0-C8烷基(例如，芐基、1-苯基-乙基、1-苯基-丙基及2-苯基-乙基)。
“雜環(huán)”或“雜環(huán)基”具有1至3個稠合環(huán)、側(cè)環(huán)或螺環(huán)，其中至少一個為雜環(huán)狀環(huán)(即一或多個環(huán)原子為雜原子，其余環(huán)原子為碳)。典型地，雜環(huán)狀環(huán)含有1、2、3或4個雜原子；在某些具體實施例中，各雜環(huán)狀環(huán)每環(huán)具有1或2個雜原子。各雜環(huán)狀環(huán)通常含有3至8個環(huán)元(在某些具體實施例中列舉出具有4或5至7個環(huán)元的環(huán))及典型地由含有9至14個環(huán)元的稠合環(huán)、側(cè)出環(huán)或螺環(huán)構(gòu)成的雜環(huán)。某些雜環(huán)包含硫原子作為環(huán)元；在某些具體實施例中，硫原子經(jīng)氧化為SO或SO2。雜環(huán)可任選地以各種取代基來取代，如上所述。除非特別指示，否則雜環(huán)可為雜環(huán)烷基(即各環(huán)為飽和或部分飽和)或雜芳基(即該基團(tuán)內(nèi)至少一個環(huán)為芳族)。雜環(huán)基一般可經(jīng)由任何環(huán)或取代基原子來連接，只要能得到穩(wěn)定的化合物。N-連接的雜環(huán)基是經(jīng)由成份氮原子連接的。
雜環(huán)基包括，例如，azepanyl、吖辛因基(azocinyl)、苯并咪唑基、苯并嘧啶基、苯并異噻唑基、苯并異咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并四唑基、苯并二氫吡喃基、苯并吡喃基、噌啉基、十氫喹啉基、二氫呋喃并[2，3-b]四氫呋喃、二氫異喹啉基、二氫四氫呋喃基、1，4-二噁-8-氮雜-螺[4.5]癸基、二噻嗪基、呋喃基、呋呫基、咪唑啉基、咪唑烷基、咪唑基、吲唑基、吲哚烯基(indolenyl)、二氫吲哚基、中氮吲哚基、吲哚基、異苯并呋喃基、異苯并二氫吡喃基、異吲唑基、異二氫吲哚基、異吲哚、異噻唑基、異噁唑基、異喹啉基、嗎啉基、萘啶基、八氫異喹啉基、噁二唑基、噁唑啶基、噁唑基、2，3-二氮雜萘基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、喋啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、噠嗪基、吡啶并咪唑基、吡啶并噁唑基、吡啶并噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯酮基、吡咯啉基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹噁啉基、喹嚀環(huán)基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、四唑基、噻二嗪基、噻二唑基、噻唑基、噻吩并噻唑基、噻吩并噁唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、苯硫基、硫代嗎啉基及其中硫原子經(jīng)氧化的變體、三嗪基、及以經(jīng)上述1至4個的取代基所取代的上述任何基團(tuán)。
“雜環(huán)C0-C6烷基”為經(jīng)由直接鍵結(jié)或C1-C8烷基連接的雜環(huán)基團(tuán)。(3-至10-元雜環(huán))C0-C6烷基為經(jīng)由單一共價鍵或具有1至6個碳原子的烷基連接的具有3至10個環(huán)元的雜環(huán)基。倘若雜環(huán)為雜芳基，則該基團(tuán)記為(5-至10-元雜芳基)C0-C8烷基。(5-至7-元雜環(huán))C0-C8烷基為經(jīng)由單一共價鍵或C1-C8烷基連接的具5-至7-元的雜環(huán)狀環(huán)。
某些雜環(huán)基為含有1個雜環(huán)或2個稠合環(huán)或螺環(huán)的4-至10-元、5-至10元、3-至7-元、4-至7-元或5-至7-元基團(tuán)，并任選經(jīng)取代。4-至10-元雜環(huán)烷基包含，例如，哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、azepanyl、1，4-二噁-8-氮雜-螺[4.5]癸-8-基、嗎啉基、硫代嗎啉基及1，1-二酮基-硫代嗎啉-4-基。所述基團(tuán)可如所示經(jīng)取代。代表性芳族雜環(huán)為吖辛因基、吡啶基、嘧啶基、咪唑基、四唑基及3，4-二氫-1H-異喹啉-2-基。
本發(fā)明所用的“取代基”是指與所關(guān)注分子的原子共價結(jié)合的分子基團(tuán)。舉例而言，“環(huán)取代基”可為與環(huán)元原子(優(yōu)選為碳或氮原子)共價結(jié)合的部份，例如鹵素、烷基、鹵烷基或本發(fā)明論及的其它基團(tuán)?！叭〈币辉~是指以如上所述的取代基置換分子結(jié)構(gòu)中的氫原子，且未超出該指定原子的價數(shù)，及由該取代產(chǎn)生具有化學(xué)穩(wěn)定性的化合物(即可經(jīng)分離、鑒定特性、及測試生物活性的化合物)。
“任選取代”的基團(tuán)為未經(jīng)取代，或在一或多個可用位置，典型地為1、2、3、4或5個位置，經(jīng)除了氫以外的一或多個合適基團(tuán)(可相同或不同)取代。所述任選的取代基包括，例如，羥基、鹵素、氰基、硝基、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C1-C8烷氧基、C2-C8烷基醚、C3-C8烷酮、C1-C8烷硫基、氨基、單-或二-(C1-C8烷基)氨基、C1-C8鹵烷基、C1-C8鹵烷氧基、C1-C8烷?；?、C2-C8烷?；趸?、C1-C8烷氧羰基、-COOH、-CONH2、單-或二-(C1-C8烷基)氨基羰基、-SO2NH2、和/或單-或二-(C1-C8烷基)磺酰氨基，以及碳環(huán)與雜環(huán)基。任選取代也以“0至X個取代基取代”一詞表示，其中X為可能取代基的最大數(shù)目。特定的任選取代的基團(tuán)是以0至2、3或4個獨立選定的取代基取代(即未經(jīng)取代或經(jīng)達(dá)到所述最大數(shù)目的取代基取代)。
術(shù)語“VR1”與“辣椒素受體”在本發(fā)明中可交換使用，它們是指第1型類香草醇受體。除非特別指示，否則這些術(shù)語涵蓋大鼠及人類的VR1受體(例如，GenBank寄存編號AF327067、AJ277028及NM 018727；特定人類VR1 cDNAs的序列，由美國專利第6,482,611號的SEQ ID NOs1至3所提供，而其所編碼氨基酸序列則示于美國專利第6,482,611號的SEQ ID NOs4和5)，以及在其它物種中發(fā)現(xiàn)的同源物。
“VR1調(diào)節(jié)劑”，在本發(fā)明中亦稱為“調(diào)節(jié)劑”，是調(diào)節(jié)VR1活化作用和/或由VR1介導(dǎo)的訊息傳導(dǎo)作用的化合物。具體來說，本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑為通式I化合物及通式I化合物在藥學(xué)上可接受的形式。VR1調(diào)節(jié)劑可為VR1促效劑或拮抗劑。若VR1的Ki小于1微摩爾濃度，優(yōu)選為小于100納摩爾濃度、10納摩爾濃度或1納摩爾濃度時，則調(diào)節(jié)劑是以“高親和力”結(jié)合。本發(fā)明實施例3提供了用于測定VR1的Ki值的代表性試驗。
如果調(diào)節(jié)劑能可檢測地抑制類香草醇配位體結(jié)合至VR1和/或由VR1介導(dǎo)的訊息傳導(dǎo)作用(使用例如實施例4提供的代表性試驗)，則此調(diào)節(jié)劑被視為“拮抗劑”；一般而言，所述拈抗劑在實施例4提供的試驗中是以小于1微摩爾濃度，優(yōu)選為小于100納摩爾濃度，更優(yōu)選為小于10納摩爾濃度或1納摩爾濃度的IC50值來抑制VR1的活化作用。VR1拮抗劑包括中性拮抗劑及反向促效劑。在特定具體實施例中，本發(fā)明提供的辣椒素受體拮抗劑不是類香草醇。
VR1的“反向促效劑”為在不添加類香草醇配位體的情況下，使VR1的活性低于其基礎(chǔ)活性量的化合物。VR1的反向促效劑亦可抑制類香草醇配位體在VR1的活性，和/或也可抑制類香草醇配位體結(jié)合至VR1?；衔镆种祁愊悴荽寂湮惑w結(jié)合至VR1的能力可通過結(jié)合試驗(binding assay)予以測定，例如實施例3所提供的結(jié)合試驗。VR1的基礎(chǔ)活性，以及由于VR1拮抗劑存在下的VR1活性降低，均可由鈣離子移動試驗(calcium mobilization assay)予以測定，例如實施例4的試驗。
VR1的“中性拮抗劑”為抑制類香草醇配位體在VR1的活性，但不顯著改變該受體基礎(chǔ)活性的化合物(即在類香草醇配位體不存在下所進(jìn)行的如實施例4所述的鈣離子移動試驗中，VR1活性的減少不大于10％，更優(yōu)選為不大于5％，尤其更優(yōu)選為不大于2％；最優(yōu)選為沒有檢測到活性降低)。VR1的中性拮抗劑可抑制類香草醇配位體結(jié)合至VR1。
本發(fā)明所用的“辣椒素受體促效劑’或“VR1促效劑”是指提升該受體活性至其基礎(chǔ)活性量以上(即增進(jìn)VR1活化作用和/或由VR1介導(dǎo)的訊息傳導(dǎo))的化合物。辣椒素受體促效劑活性可使用實施例4所提供的辣椒素受體促效作用的代表性體外試驗予以鑒定。通常，該促效劑在實施例4所提供的試驗中具有小于1微摩爾濃度，優(yōu)選為小于100納摩爾濃度，更優(yōu)選為小于10納摩爾濃度的EC50值。在特定具體實施例中，本發(fā)明提供的辣椒素受體促效劑不是類香草醇。
“類香草醇”為辣椒素或任何辣椒素類似物，其含有苯環(huán)且該苯環(huán)上兩個氧原子與相鄰環(huán)碳原子結(jié)合(其中一個碳原子是位于與該苯環(huán)結(jié)合的第三部分的連接點的對位)。類香草醇若以不大于10μM的Ki(如本發(fā)明所述予以測定)與VR1結(jié)合，則為“類香草醇配位體”。類香草醇配位體促效劑包括辣椒素、歐瓦尼(olvanil)、N-花生四烯酰基-多巴胺及樹膠脂毒素(RTX)。類香草醇配位體拈抗劑包含辣椒平及碘-樹膠脂毒素。
“辣椒素受體調(diào)節(jié)量”是指投藥至患者后，在患者體內(nèi)所達(dá)到的VR1調(diào)節(jié)劑在辣椒素受體的濃度足以改變體外類香草醇配位體與VR1結(jié)合(使用實施例3所提供的試驗)，和/或VR1介導(dǎo)的訊息傳導(dǎo)作用(使用實施例4所提供的試驗)的量。該辣椒素受體可存在于體液中，例如血液、血漿、血清、CSF、關(guān)節(jié)液、淋巴、細(xì)胞間質(zhì)液、眼淚或尿液。
“治療有效量”是指投藥至患者后，可檢測到足以提供患者從所治療的癥狀中緩解的量。該緩解可使用任何適當(dāng)準(zhǔn)則予以檢測，包括一或多種癥狀(例如疼痛)的緩解。
“患者”是本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑所治療的任何個體?；颊甙ㄈ祟悾约捌渌鼊游镏T如陪伴動物(例如狗與貓)及家畜?；颊呖赡軞v經(jīng)對辣椒素受體調(diào)節(jié)敏感的病癥的一種或多種癥狀(例如，疼痛、暴露于類香草醇配位體、癢、尿失禁、膀胱過動、呼吸性疾病、咳嗽和/或打嗝)，或可能無所述癥狀(即為預(yù)防性治療)。
VR1調(diào)節(jié)劑如上所述，本發(fā)明提供可用于多種情況下的VR1調(diào)節(jié)劑，包括治療疼痛(例如，神經(jīng)性或周邊神經(jīng)介導(dǎo)的疼痛)；暴露于辣椒素下；暴露于酸、熱、光、催淚瓦斯空氣污染物、辣椒噴霧劑或相關(guān)制劑下；呼吸性癥狀諸如氣喘或慢性阻塞性肺疾?。话W；尿失禁或膀胱過動；咳嗽或打嗝；和/或肥胖癥。VR1調(diào)節(jié)劑亦可用于體外試驗(例如，受體活性試驗)、作為檢測與定位VR1的探針以及作為配位體結(jié)合與VR1介導(dǎo)的訊息傳導(dǎo)試驗的標(biāo)準(zhǔn)物。
本發(fā)明所提供的VR1調(diào)節(jié)劑為經(jīng)芳基取代的苯并[d]異噻唑-3-基胺類似物，所述類似物以納摩爾濃度(即次微摩爾)，優(yōu)選為以次納摩爾濃度，更優(yōu)選為以小于100微微摩爾濃度(picomolar)，或甚至小于20微微摩爾濃度檢測地調(diào)節(jié)辣椒素與VR1的結(jié)合。所述調(diào)節(jié)劑優(yōu)選為非類香草醇。優(yōu)選的調(diào)節(jié)劑為VR1拮抗劑，且在實施例4所述及的試驗中不具有可檢測的促效劑活性。在特定具體實施例中，所述調(diào)節(jié)劑進(jìn)一步以高親和力結(jié)合至VR1，且基本上不抑制人類EGF受體酪胺酸激酶(human EGF receptor tyrosine kinase)的活性。
本發(fā)明某種程度上是以下述發(fā)現(xiàn)為基礎(chǔ)具有上述通式I的小分子(以及其藥學(xué)上可接受的形式)具有調(diào)節(jié)VR1活性。通過式I的變數(shù)如上述所列舉。
式I如上所述，Ar1與Ar2獨立地為任選取代的碳環(huán)或雜環(huán)。某些取代基選自通式為LRa的那些取代基。如上所述，L在每種情況下獨立地選自單一共價鍵、O，C(＝O)、OC(＝O)、C(＝O)O、OC(＝O)O、S(O)m(即-S-、 或 )、N(Rx)(即 )、C(＝O)N(Rx)(即 )、N(Rx)C(＝O)(即 )、N(Rx)S(O)m(即 )、S(O)mN(Rx)(即 )，以及N[S(O)mRx]S(O)m(即 )。
在某些具體實施例中，Ar2獨立地為任選取代的苯基或任選取代的6-元芳族雜環(huán)狀環(huán)。所述Ar2基團(tuán)包括，但不限于，苯基、吡啶基或嘧啶基，其中每一個經(jīng)1或2個取代基取代，所述取代基獨立地選自鹵素、氰基、C1-C6烷基、鹵C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵C1-C6烷氧基、C1-C6烷基磺?；騿?與二-(C1-C6烷基)磺酰氨基。代表性Ar2基團(tuán)包括苯基和吡啶基(任選經(jīng)鹵素、C1-C4烷基或鹵C1-C4烷基取代)。在某些具體實施例中，Ar2的其中一個取代基是位于連接點對位的環(huán)上位置。換句話說，倘若Ar2為苯基，該取代基是位于4-位置。同樣地，倘若Ar2為2-吡啶基，該取代基是位于5-位置。
Ar1，在某些具體實施例中為苯基或吡啶基，經(jīng)1或2個取代基取代，所述取代基獨立地選自鹵素(例如，氟或氯)、氰基、COOH、C1-C6烷基(例如，甲基)、鹵C1-C6烷基(例如，三氟甲基)，C1-C6烷氧基、鹵C1-C6烷氧基、C1-C6烷基磺?；皢?與二-(C1-C6烷基)磺酰氨基。在某些具體實施例中，Ar1是在連接點的鄰位做單取代(即若Ar1為苯基則取代于2-位置；若Ar1為2-吡啶基則取代于3-位置。優(yōu)選的Ar1是2-吡啶基，經(jīng)1或2個選自鹵素、氰基、C1-C6烷基、鹵C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵C1-C6烷氧基、C1-C6烷基磺酰基或單-與二-(C1-C6烷基)磺酰氨基的取代基取代。某些所述Ar1基團(tuán)是在3-位置取代的2-吡啶基；所述基團(tuán)的實施例為3-甲基-吡啶-2-基、3-氯-吡啶-2-基、3-氰基-吡啶-2-基和3-三氟甲基-吡啶-2-基。
W、Y、和Z，在某些具體實施例中獨立地為N或CH。例如，W、Y、和Z其中的一個可為N，而其它為CH。或者，W、Y、和Z其中的一個可為CH，其它為N。在某些化合物中，W為CH；而Y和Z獨立地為N或CH。
在通式I的化合物中，Ar1是苯基或2-吡啶基，經(jīng)1或2個獨立地選自鹵素、氰基、C1-C4烷基或鹵C1-C4烷基的取代基取代；而Ar2為苯基或吡啶基，經(jīng)1或2個獨立地選自鹵素、氰基、C1-C4烷基與鹵C1-C4烷基、C1-C6烷基磺?；騿?與二-(C1-C6烷基)磺酰氨基的取代基取代。
本發(fā)明所提供的某些化合物可進(jìn)一步滿足通式II，其中Ar1和Ar2獨立地選自經(jīng)取代的苯基、經(jīng)取代的吡啶基及經(jīng)取代的嘧啶基，以及Y及Z如式通I中所述。
通式II本發(fā)明所提供的某些化合物可進(jìn)一步滿足通式III，其中A為CH或N，每一個Rb獨立地為鹵素、氰基、硝基或LRa，而其它變數(shù)如式通I中所述。
通式III
本發(fā)明所提供的代表性化合物包括，但不限于，在本發(fā)明實施例1與表1中所述的那些。很明顯，此處所特定列舉的化合物僅為代表性的，并非要限制本發(fā)明范圍。此外，如上所述，本發(fā)明的所有化合物皆可以游離堿或藥學(xué)上可接受的形式如酸加成鹽形式存在。
當(dāng)使用體外VR1配位體結(jié)合試驗和/或功能性試驗(例如鈣離子移動試驗、背根神經(jīng)節(jié)試驗或活體內(nèi)疼痛緩解試驗)測定時，本發(fā)明所提供的經(jīng)芳基取代的苯并[d]異噻唑-3-基胺類似物可檢測地改變(調(diào)節(jié))VR1的活性。本發(fā)明中有關(guān)“VR1配位體結(jié)合試驗”，是指例如實施例3所提供的標(biāo)準(zhǔn)體外受體結(jié)合試驗，以及“鈣離子移動試驗”(在本發(fā)明中亦稱為“訊息傳導(dǎo)試驗”)則可如實施例4所述進(jìn)行。簡而言之，要評估對VR1的結(jié)合作用可進(jìn)行競爭性結(jié)合試驗，其中，將VR1制劑與會結(jié)合至VRI的經(jīng)標(biāo)記(例如，125I或3H)的化合物(例如，辣椒素受體促效劑如RTX)以及未標(biāo)記的測試化合物一起培養(yǎng)。在本發(fā)明提供的試驗中，所用VR1優(yōu)選為哺乳動物的VR1，更佳為人類或大鼠的VR1。所述受體可經(jīng)重組或不經(jīng)任何修飾(naturally)地得到表達(dá)。所述VR1制劑可為，例如，來自重組表達(dá)人類VR1的HEK293或CHO細(xì)胞的細(xì)胞膜制劑。將可檢測地調(diào)節(jié)類香草醇配位體與VR1結(jié)合的化合物一起培育，會導(dǎo)致與VR1制劑結(jié)合的標(biāo)記量相對于化合物不存在下結(jié)合的標(biāo)記量降低或增加。這種降低或增加可用于測定如本發(fā)明所述VR1的Ki。通常，在所述試驗中，優(yōu)選化合物為能使與VR1制劑結(jié)合的標(biāo)記量降低者。
如上所述，在某些具體實施例中，優(yōu)選化合物為VR1拮抗劑。所述化合物的IC50值可使用如實施例4提供的標(biāo)準(zhǔn)體外VR1介導(dǎo)的鈣離子移動試驗予以測定。簡而言之，將表達(dá)辣椒素受體的細(xì)胞與所關(guān)注的化合物及細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度指示劑(例如，細(xì)胞膜可滲透性鈣敏感性染料例如Fluo-3或Fura-2(二者均可得自，例如，Molecular Probes，Eugene，OR)，其中每一個與Ca++結(jié)合時均產(chǎn)生熒光訊號)接觸。所述接觸優(yōu)選通過將細(xì)胞在緩沖液或培養(yǎng)液中培育一次或多次而進(jìn)行，所述緩沖液或培養(yǎng)液在溶液中包括化合物和/或指示劑。使接觸維持足夠長的時間(例如，1至2小時)以容許染料進(jìn)入細(xì)胞中。將細(xì)胞洗滌或過濾以去除過量染料，然后再與類香草醇受體促效劑(例如，辣椒素、RTX或歐瓦尼(olvanil))接觸，其濃度一般等于EC50濃度，接著測定熒光反應(yīng)。當(dāng)接觸促效劑的細(xì)胞與VR1拮抗劑化合物接觸時，與在測試化合物不存在下與促效劑接觸的細(xì)胞相比，其熒光反應(yīng)通常減少至少20％，優(yōu)選為至少50％及更優(yōu)選為至少80％。本發(fā)明提供的VR1拮抗劑的IC50，優(yōu)選為小于1微摩爾濃度、小于100nM、小于10nM或小于1nM。
在其它具體實施例中，優(yōu)選化合物為辣椒素受體促效劑。辣椒素受體促效劑的活性通?？扇鐚嵤├?所述予以測定。當(dāng)細(xì)胞與1微摩爾濃度的VR1促效劑化合物接觸時，熒光反應(yīng)通常增加，而該增加量是細(xì)胞與100nM辣椒素接觸時觀察所得的增加量的至少30％。本發(fā)明提供的VR1促效劑的EC50優(yōu)選為小于1微摩爾濃度、小于100nM或小于10nM。
或者，VR1調(diào)節(jié)活性也可使用如實施例7提供的經(jīng)培養(yǎng)的背根神經(jīng)節(jié)試驗和/或如實施例8提供的活體內(nèi)疼痛緩解試驗予以評估。本發(fā)明提供的化合物優(yōu)選在本發(fā)明提供的一或多個功能性試驗中，對于VR1活性具有統(tǒng)計學(xué)上顯著的特定影響。
在某些具體實施例中，本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑不會實質(zhì)上調(diào)節(jié)配位體與其它細(xì)胞表面受體(例如EGF受體酪胺酸激酶或煙堿性乙酰膽堿受體)的結(jié)合。換句話說，所述調(diào)節(jié)劑實質(zhì)上不會抑制細(xì)胞表面受體的活性，例如人類表皮生長因子(EGF)受體酪胺酸激酶或煙堿性乙酰膽堿受體(例如，所述受體的IC50或IC40優(yōu)選為大于1微摩爾濃度，最優(yōu)選為大于10微摩爾濃度)。優(yōu)選地，調(diào)節(jié)劑在0.5微摩爾濃度、1微摩爾濃度或更優(yōu)選為10微摩爾濃度下無法可檢測地抑制EGF受體活性或煙堿性乙酰膽堿受體活性。測定細(xì)胞表面受體活性的試驗為市售可得，且包括購自Panvera(Madison，WI)的酪胺酸激酶試驗套組。
本發(fā)明提供的優(yōu)選VR1調(diào)節(jié)劑為非鎮(zhèn)靜劑。換句話說，在測定疼痛緩解的動物模式(例如本發(fā)明實施例8提供的模式)中足以提供止痛的最小劑量的兩倍的VR1調(diào)節(jié)劑劑量，在動物模式鎮(zhèn)靜試驗中(使用Fitzgerald et al.(1988)Toxicology 49(2-3)433-9敘述的方法)只引起短暫(即持續(xù)不超過疼痛緩解持續(xù)的時間的1/2)或優(yōu)選為無統(tǒng)計學(xué)上顯著的鎮(zhèn)靜作用。優(yōu)選地，足以提供止痛的最小劑量的五倍劑量不會產(chǎn)生統(tǒng)計學(xué)上顯著的鎮(zhèn)靜作用。更優(yōu)選地，本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑在小于25mgmg/kg(優(yōu)選為小于10mgmg/kg)的靜脈內(nèi)劑量或小于140mgmg/kg(優(yōu)選為小于50mgmg/kg，更佳為小于30mgmg/kg)的口服劑量下不會產(chǎn)生鎮(zhèn)靜作用。
如果需要，則可對本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑進(jìn)行特定藥理性質(zhì)的評估，包括但不限于，口服生物利用度(優(yōu)選的化合物為經(jīng)口服生物利用直至使化合物的治療有效濃度達(dá)到小于140mg/kg，優(yōu)選為小于50mg/kg，更優(yōu)選為小于30mg/kg，又更優(yōu)選為小于10mg/kg，更優(yōu)選為小于1mg/kg，及最優(yōu)選為小于0.1mg/kg的口服劑量程度)、毒性(優(yōu)選的VR1調(diào)節(jié)劑在給藥辣椒素受體調(diào)節(jié)量至對象時沒有毒性)、副作用(優(yōu)選的VR1調(diào)節(jié)劑在給藥治療有效量的化合物至對象時，會產(chǎn)生相當(dāng)于安慰劑的副作用)、血清蛋白結(jié)合作用及體外與體內(nèi)半衰期(優(yōu)選的VR1調(diào)節(jié)劑具有相當(dāng)于體內(nèi)半衰期的體外半衰期，從而容許Q.I.D.給藥，優(yōu)選經(jīng)T.I.D.給藥，更佳為B.I.D.給藥，及最優(yōu)選為一天給藥一次)。此外，血腦障壁的差異穿透性(differential penetration)對于通過調(diào)節(jié)CNS VR1活性來治療疼痛的VR1調(diào)節(jié)劑而言可能為所需的，因此使得如上所述的口服總每日劑量提供所述調(diào)節(jié)作用至治療有效的程度，然而使用低腦濃度的VR1調(diào)節(jié)劑在治療周邊神經(jīng)介導(dǎo)的疼痛可能是優(yōu)選的(即所述劑量不會提供足以顯著地調(diào)節(jié)VR1活性的腦(例如，CFS)濃度的化合物)?？墒褂么隧椉夹g(shù)中已知的常規(guī)試驗來評估所述性質(zhì)，及鑒定具有特別用途的優(yōu)異化合物。例如，用于預(yù)測生物利用度的試驗包括跨越人類單層腸細(xì)胞(包括Caco-2單層細(xì)胞)的運(yùn)送?？捎山o予(例如，經(jīng)靜脈內(nèi))所述化合物的實驗室動物中所述化合物的腦濃度來預(yù)測在人類中所述化合物的血腦障壁穿透性。血清蛋白結(jié)合可由白蛋白結(jié)合試驗進(jìn)行預(yù)測?；衔锇胨テ谂c化合物的劑量頻率成反比。化合物的體外半衰期可由本發(fā)明實施例5所述的微粒體半衰期試驗予以預(yù)測。
如上所述，本發(fā)明提供的優(yōu)選VR1調(diào)節(jié)劑不具有毒性。一般而言，應(yīng)了解本發(fā)明所用的“不具毒性”一詞為相對意義，意指由美國食品藥物管理局(FDA)認(rèn)可的可用于給藥至哺乳動物(優(yōu)選為人類)的任何物質(zhì)，或遵守已建立的準(zhǔn)則的任何物質(zhì)，傾向于被FDA認(rèn)可的用于給藥至哺乳動物(優(yōu)選為人類)的任何物質(zhì)。此外，高度優(yōu)選的不具毒性化合物通常滿足一個或多個下述準(zhǔn)則(1)基本上不抑制細(xì)胞ATP生產(chǎn)；(2)不顯著延長心臟QT間隔；(3)基本上不引起肝臟腫大；且(4)不引起肝臟酵素的大量釋放。
本發(fā)明所使用“基本上不抑制細(xì)胞ATP生產(chǎn)”的VRI調(diào)節(jié)劑為滿足本發(fā)明實施例8所述準(zhǔn)則的化合物。換句話說，如實施例6所述用100μM的所述化合物處理的細(xì)胞表現(xiàn)其ATP濃度為未經(jīng)處理細(xì)胞內(nèi)所測得的ATP濃度的至少50％。在更高度優(yōu)選的具體實施例中，所述細(xì)胞顯現(xiàn)的ATP濃度為未經(jīng)處理細(xì)胞內(nèi)所測得的ATP濃度的至少80％。
“不顯著延長心臟QT間隔”的VR1調(diào)節(jié)劑為在給藥產(chǎn)生活體內(nèi)治療有效濃度的最低劑量的兩倍劑量后不會造成對天竺鼠、迷你豬或狗在統(tǒng)計學(xué)上顯著的延長心臟QT間隔(如心電圖所測定)的化合物。在某些優(yōu)選具體實施例中，以非口服或口服形式給藥0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、40或50mg/kg的劑量不會導(dǎo)致統(tǒng)計學(xué)上顯著的心臟QT間隔延長。所謂“統(tǒng)計學(xué)上顯著的”意指當(dāng)使用具統(tǒng)計意義的標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)試驗，例如學(xué)生氏T試驗(Student’s T test)測定時，偏離控制組在p＜0.1標(biāo)準(zhǔn)或更優(yōu)選在p＜0.05標(biāo)準(zhǔn)下的結(jié)果。
所謂“基本上不引起肝臟腫大”的VR1調(diào)節(jié)劑是指，若以產(chǎn)生活體內(nèi)治療有效濃度的最低劑量的兩倍劑量來每天治療實驗室嚙齒類(例如，小鼠或大鼠)5至10天后，造成肝臟對體重比的增加不大于對照組的100％。在更高度優(yōu)選的具體實施例中，此劑量不引起大于對照組的75％或50％的肝臟腫大。若是使用非嚙齒類哺乳動物(例如，狗)，此劑量不應(yīng)造成肝臟對體重比的增加大于對照組的50％，優(yōu)選為不大于25％，更優(yōu)選為不大于10％。所述試驗中的優(yōu)選劑量，包括以非口服或口服形式給藥0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、40或50mgmg/kg。
同樣地，所謂“不促進(jìn)肝臟酵素的大量釋放”的VR1調(diào)節(jié)劑是指，若給藥產(chǎn)生活體內(nèi)治療有效濃度的最低劑量的兩倍劑量時不會提升實驗室嚙齒類動物ALT、LDH或AST的血清濃度至大于模擬處理對照組的100％。在更高度優(yōu)選的具體實施例中，此劑量不會提升所述血清濃度至大于對照組的75％或50％。或者，所謂“不促進(jìn)肝臟酵素的大量釋放”的VR1調(diào)節(jié)劑是指，若在體外肝細(xì)胞試驗中，濃度(在體外與肝細(xì)胞接觸及培養(yǎng)的培養(yǎng)液或其它所述溶液中)等于該化合物在活體內(nèi)治療濃度的最低劑量的兩倍時，不會導(dǎo)致任何所述肝臟酵素可檢測地釋到培養(yǎng)液中，而高于從模擬處理的對照組細(xì)胞培養(yǎng)液中觀察到的基線量。在更高度優(yōu)選的具體實施例中，當(dāng)所述化合物濃度為該化合物在活體內(nèi)治療濃度的最低劑量的五倍時，優(yōu)選為十倍時，仍無任何所述肝臟酵素可檢測地釋放至培養(yǎng)液中而高于基線量。
于其它具體實施例中，某些優(yōu)選的VR1調(diào)節(jié)劑濃度在等于活體內(nèi)治療有效濃度的最低劑量時，不會抑制或誘發(fā)微粒體細(xì)胞色素P450酶活性，例如CYP1A2活性、CYP2A6活性、CYP2C9活性、CYP2C19活性、CYP2D6活性、CYP2E1活性或CYP3A4活性。
某些優(yōu)選的VR1調(diào)節(jié)劑濃度在等于活體內(nèi)治療有效濃度的最低劑量時不具基因破壞性(clastogenic)(例如，如使用小鼠紅血球源祖細(xì)胞(erythrocyte precursor cell)微核試驗、Ames微核試驗、螺旋微核試驗等予以測定)。在其它具體實施例中，在所述濃度下，某些優(yōu)選VR1調(diào)節(jié)劑不會誘發(fā)姊妹染色單體(sister chromatid)交換(例如，于中國倉鼠卵巢細(xì)胞中)。
如下文更詳細(xì)的討論，為了檢測目的，本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑可為同位素標(biāo)記或放射性標(biāo)記。例如，通式I至通III所列舉的化合物，可有一個或多個原子被原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)與一般在自然界發(fā)現(xiàn)的原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)不同的相同元素的原子置換。存在于本發(fā)明提供的化合物中的同位素實施例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟及氯的同位素，例如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F及36Cl。此外，由于代謝穩(wěn)定性較大，例如活體內(nèi)半衰期增加或劑量需求減少，所以以重同位素例如氘(亦即，2H)置換可提供特定的治療優(yōu)點，因此，在一些情形下可能是優(yōu)選的。
VR1調(diào)節(jié)劑的制備經(jīng)芳基取代的苯并[d]異噻唑-3-基胺類似物通?？墒褂脴?biāo)準(zhǔn)合成方法予以制備。例如Kwon等人的(1996)Arzneim.Forsch.46966-971；Boshagen的(1967)Chem.Ber.100954-960；Boshagen的(1967)Chem.Ber.1003326-3330(1967)；以及Yevich等人的(1986)J.Med.Chem.29359-369所述那些。一般而言，起始材料來自例如Sigma-Aldrich Corp.(St.Louis，MO)的供貨商，通過市場通路即可購得，或使用已建立的實驗流程通過市售可得的前驅(qū)物予以合成。舉例而言，可使用與下文反應(yīng)圖式1至3所示相似的合成途徑，以及合成有機(jī)化學(xué)范疇中已知的合成方法，或在此項技術(shù)領(lǐng)域具有通常知識者所知的其變異方法。下文反應(yīng)圖式中的各變量是參照與本發(fā)明提供的化合物說明中一致的任何基團(tuán)。
在下述的反應(yīng)圖示中，“催化劑”一詞是指適當(dāng)?shù)倪^渡金屬催化劑，例如，但不局限于，四(三苯基膦)鈀(O)或鈀(II)乙酸鹽。另外，催化系統(tǒng)可包括配位體，例如，但不局限于，2-(二環(huán)己基膦基)聯(lián)苯及三-叔丁基膦，也可包堿，例如K3PO4、Na2CO3或叔丁醇鈉或鉀。過渡金屬-催化反應(yīng)可在室溫或較高的溫度下進(jìn)行，并使用各種惰性的溶劑包括，但不局限于，甲苯、二甲苯、DMF、N-甲基吡咯烷酮、乙二醇、二甲基醚、二甘醇二甲醚與乙腈。常用的試劑/催化劑對包括芳基硼酸/鈀(O)(Suzuki反應(yīng)；Miyaura與Suzuki的(1995)Chemical Reviews952457)以及芳基三烷錫烷/鈀(O)(Stille反應(yīng)；T.N.Mitchell的(1992)Synthesis 9803-815)，芳基鋅(arylzinc)/鈀(O)及芳基格林納試劑(Grignard)/鎳(II)。
“活化”一詞是指合成性的轉(zhuǎn)換，其中酰胺部分的羰基轉(zhuǎn)變成適當(dāng)?shù)碾x去基(L)。適于進(jìn)行此項轉(zhuǎn)換的試劑為有機(jī)合成范疇中具有通常知識者所已知的，包括，但不局限于，SOCl2、POCl3及三氟甲磺酸酐。在下述反應(yīng)圖標(biāo)中標(biāo)記為″L″的離去基的實施例包括Cl、Br或O(C＝O)CF3。
本發(fā)明所使用的其它定義如下CDCl3經(jīng)氚化的氯仿d 化學(xué)位移DCM 二氯甲烷DME 乙二醇二甲基醚DMF 甲基甲酰胺EtOAc 酸乙酯EtOH 醇1H NMR 質(zhì)子核磁共振HPLC高效液相層析
Hz 赫茲LC/MS 液相層析/質(zhì)譜MS 質(zhì)譜(M+1) 質(zhì)量+1Pd(PPh3)4四(三苯基膦)鈀(O)反應(yīng)圖示1 反應(yīng)圖示2
反應(yīng)圖示3 在某些具體實施例中，VR1調(diào)節(jié)劑可包括一或多個不對稱碳原子，從而導(dǎo)致化合物以不同的立體異構(gòu)體形式存在。所述形式為，例如，消旋體或光學(xué)活性形式。如上所述，所有立體異構(gòu)體皆包含于本發(fā)明中。但是，希望能獲得單一的對映體(即光學(xué)活性形式)。制備單一對映體的常規(guī)方法包括不對稱合成和消旋體的拆分。消旋體的分離可通過例如已知方法予以完成，例如，在拆分劑存在下的結(jié)晶作用，或使用例如手性HPLC柱的層析法。
化合物可通過使用含有至少一個放射性同位素原子的前驅(qū)物來進(jìn)行合成，從而被放射性標(biāo)記。每一個放射性同位素優(yōu)選為碳(例如，14C)、氫(例如，3H)、硫(例如，35S)、或碘(例如，125I)。以氚標(biāo)記的化合物也可使用下述方法經(jīng)催化制備在氚化乙酸中的鉑催化交換、在氚化三氟乙酸中的酸催化交換、或使用化合物作為基質(zhì)以氚氣進(jìn)行非勻相催化交換。此外，倘若適當(dāng)，則特定前驅(qū)物可使用氚氣進(jìn)行氚-鹵素交換、進(jìn)行不飽和鍵結(jié)的氚氣還原、或使用硼氚化鈉進(jìn)行還原。放射性標(biāo)記化合物的制備亦可方便地向?qū)＞诤铣煞派湫詷?biāo)記探針化合物的放射性同位素供貨商訂購。
藥學(xué)組合物本發(fā)明也提供含有一或多種VR1調(diào)節(jié)劑、以及至少一種生理上可接受的載劑或賦形劑的藥學(xué)組合物。藥學(xué)組合物可包含，例如一或多種水、緩沖劑(例如，中性緩沖鹽液或磷酸鹽緩沖鹽液)、乙醇、礦物油、植物油、二甲亞砜、碳水化合物(例如，葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖)、甘露糖醇、蛋白質(zhì)、佐劑、多肽或例如甘胺酸的氨基酸、抗氧化劑例如EDTA或谷光甘肽的螯合劑和/或防腐劑。此外，本發(fā)明提供的藥學(xué)組合物中也可包含(但并非需要)其它活性成分。
藥學(xué)組合物可調(diào)配成任何適當(dāng)?shù)慕o藥方式，包括例如局部、口服、經(jīng)鼻、經(jīng)直腸或非口服給藥。本發(fā)明所用的非口服一詞包括經(jīng)皮下、皮內(nèi)、血管內(nèi)(例如，靜脈內(nèi))、肌內(nèi)、脊髓、顱內(nèi)、鞘內(nèi)(intrathecal)和腹腔內(nèi)注射，以及任何類似注射或灌注的技術(shù)。于某些具體實施例中，優(yōu)選為適用于口服的組合物。所述組合物包括例如，錠劑、片劑、菱形錠劑、水性或油性懸浮液、分散性粉劑或粒劑、乳液、硬或軟膠囊、或糖漿或酏劑。又在其它具體實施例中，本發(fā)明組合物可調(diào)配為凍干物。對于某些癥狀(例如，于治療例如灼傷或癢等皮膚癥狀)供局部給藥的配方可能是優(yōu)選的；治療尿失禁及膀胱過動時，直接給藥至膀胱(膀胱內(nèi)給藥)的配方是優(yōu)選的。
進(jìn)行口服用的組合物可進(jìn)一步包括一或多種成分，例如增甜劑、調(diào)味劑、著色劑和/或防腐劑，以提供迎合愛好且美味的制劑。錠劑包括與適用于制造錠劑的生理上可接受的賦形劑摻合的活性成分。所述賦形劑包括，例如，惰性稀釋劑(例如，碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉)、造粒及崩解劑(例如，玉米淀粉或海藻酸)、黏結(jié)劑(例如，淀粉、明膠或阿拉伯膠)及潤滑劑(例如，硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉)。錠劑可不用包覆或可利用現(xiàn)有技術(shù)包覆以延緩于胃腸道的崩解與吸收，進(jìn)而提供長期的持續(xù)作用。舉例而言，可使用時間延緩物質(zhì)，例如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
口服用配方也可以硬明膠膠囊形式存在，其中所述活性成分是與惰性固體稀釋劑(例如，碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土)混合；或以軟明膠膠囊形式存在，其中所述活性成分與水或油介質(zhì)(例如，花生油、液態(tài)石蠟或橄欖油)混合。
水性懸浮液包括與適用于制造水性懸浮液的賦形劑摻合的活性物質(zhì)。所述賦形劑包括懸浮劑(例如，羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙甲基纖維素、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠與阿拉伯膠)；及分散劑或潤濕劑(例如，天然存在的磷脂類例如卵磷脂、烯烴氧化物與脂肪酸的縮合產(chǎn)物例如聚氧乙烯硬脂酸酯、環(huán)氧乙烷與長鏈脂族醇的縮合產(chǎn)物例如十七乙烯氧基鯨蠟醇(heptadecaethyleneoxycatanol)、環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇的部分酯類的縮合產(chǎn)物例如聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯、或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇的部分酯類的縮合產(chǎn)物例如聚乙烯山梨糖酐單油酸酯)。水性懸浮液也可包括一或多種防腐劑(例如對羥苯甲酸-乙酯或-正丙酯)、一種或多種著色劑、一種或多種調(diào)味劑、及一種或多種增甜劑(例如蔗糖或糖精)。
油性懸浮液可通過使活性成分懸浮在植物油(例如，花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)中或礦物油(例如液態(tài)石蠟)中進(jìn)行配制。所述油性懸浮液可包含增稠劑，例如口蜜蠟、硬石蠟或鯨蠟醇。可添加如上所述的甜味劑和/或調(diào)味劑以提供美味的口服制劑。所述懸浮液可通過添加抗氧化劑(例如抗壞血酸)予以保存。
適用于通過添加水來制備水性懸浮液的可分散粉劑及粒劑提供了與分散劑或潤濕劑、懸浮劑及一或多種防腐劑摻合的活性成分。適當(dāng)?shù)姆稚┗驖櫇駝┘皯腋┤缟纤觥Ｒ部纱嬖谄渌x形劑，例如增甜劑、調(diào)味劑與著色劑。
藥學(xué)組合物亦可調(diào)配為水包油型乳液。其油相可為植物油(例如，橄欖油或花生油)、礦物油(例如，液態(tài)石蠟)或其混合物。適當(dāng)?shù)娜榛瘎┌ㄌ烊淮嬖诘哪z類(例如阿拉伯膠或黃蓍膠)、天然存在的磷脂類(例如，大豆卵磷脂、及衍生自脂肪酸與己糖醇的酯類或部分酯類)、酸酐類(例如山梨糖酐單油酸酯)及衍生自脂肪酸與己糖醇的部分酯類與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物(例如，聚氧乙烯山梨糖酐單油酸酯)。乳液亦可包括一或多種增甜劑和/或調(diào)味劑。
糖漿與酏劑可與增甜劑例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖一起配制。所述配方亦可包括一或多種緩和劑、防腐劑、調(diào)味劑和/或著色劑。
局部給藥的配方典型地包括與活性劑結(jié)合的局部載劑，含或不含附加的任選成分。合適的局部載劑及附加成分已為此項技術(shù)范疇中所熟知，且顯而易見地，載劑的選擇取決于特定的物理形式及遞送方式。局部載劑包括水；有機(jī)溶劑例如醇類(例如，乙醇或異丙醇)或甘油；二醇類(例如，丁二醇、異戊二醇或丙二醇)；脂族醇類(例如，羊毛脂)；水與有機(jī)溶劑的混合物，及有機(jī)溶劑(例如醇)與甘油的混合物；以脂質(zhì)為主的物質(zhì)例如脂肪酸、酰基甘油類(包含油類例如礦物油，及天然或合成來源的脂肪)、磷酸甘油酯類、神經(jīng)髓鞘脂類及蠟類；以蛋白質(zhì)為主的物質(zhì)例如膠原蛋白及明膠；以聚硅氧為主的物質(zhì)(非揮發(fā)性與揮發(fā)性二者)；及以烴為主的物質(zhì)例如微囊海綿及聚合物基質(zhì)。組合物可進(jìn)一步包括適用于增進(jìn)所施用配方穩(wěn)定性或效果的一或多種成分，例如穩(wěn)定劑、懸浮劑、乳化劑、黏度調(diào)整劑、膠凝劑、防腐劑、抗氧化劑、皮膚滲透增強(qiáng)劑、保濕劑及持續(xù)釋放物質(zhì)。該成分的實施例如Martindale-- The Extra Pharmacopoeia(Pharmaceutical Press，London1993)及Martin(ed.)Remington’s Pharmaceutical Sciences中所述的那些。配方可包括微膠囊，例如羥甲基纖維素或明膠-微膠囊、微脂粒、白蛋白微球體、微乳液、納米粒子或納米膠囊。
局部配方可制備為多種物理形式，包括，例如，固體、糊劑、乳霜、泡沫劑、洗劑、凝膠、粉劑、水性液體或乳液。所述藥學(xué)可接受形式的物理外觀及黏性可由配方中存在的乳化劑及黏度調(diào)整劑的存在與否及用量多少予以控制。固體通常堅實且具有不可傾瀉性，通常配制成為棒狀或條狀、或呈微粒狀；固體可為不透明的或透明的，且任選地包含溶劑、乳化劑、保濕劑、軟化劑、芳香劑、染料/著色劑、防腐劑及增加或加強(qiáng)最終產(chǎn)物效力的其它活性成分。乳霜及洗劑兩者通常極為相似，主要不同在于其黏性；洗劑及乳霜兩者可為不透明、半透明或透明，并且常含有乳化劑、溶劑、黏度調(diào)整劑、以及保濕劑、軟化劑、芳香劑、染料/著色劑、防腐劑及增加或加強(qiáng)最終產(chǎn)物效力的其它活性成分。凝膠可制備成具有廣范的黏性，從濃稠或高黏性至稀薄或低黏性。這些配方，如洗劑及乳霜，也可含有溶劑、乳化劑、保濕劑、軟化劑、芳香劑、染料/著色劑、防腐劑及增加或加強(qiáng)最終產(chǎn)物效力的其它活性成分。液體比乳霜、洗劑、或凝膠稀薄，且通常不含乳化劑。液體局部產(chǎn)品常含有溶劑、乳化劑、保濕劑、軟化劑、芳香劑、染料/著色劑、防腐劑及增加或加強(qiáng)最終產(chǎn)物效力的其它活性成分。
局部配方用的合適乳化劑包括，但不限于，離子性乳化劑、鯨蠟醇、非離子乳化劑例如聚氧乙烯油基醚、PEG-40硬脂酸酯、鯨蠟硬脂醇醚(ceteareth)-12、鯨蠟硬脂醇醚-20、鯨蠟硬脂醇醚-30、鯨蠟硬脂醇、PEG-100硬脂酸酯及硬脂酸甘油酯。合適的黏性調(diào)整劑包括，但不限于，保護(hù)膠體或非離子性膠類例如羥乙基纖維素、黃原膠、硅酸鋁鎂、硅石、微晶蠟、蜜蠟、石蠟、及棕櫚酸鯨蠟酯。凝膠組合物可通過添加膠凝劑例如幾丁聚糖、甲基纖維素、乙基纖維素、聚乙烯醇、聚季銨鹽類、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙甲基纖維素、卡波姆(carbomer)或胺化的甘草酸鹽而形成。合適的界面活性劑包括，但不限于，非離子性、兩性、離子性及陰離子性界面活性劑。舉例而言，可于局部配方中使用一或多種二甲基聚硅氧烷共聚物(dimethiconecopolyol)、聚山梨糖醇酯20、聚山梨糖醇酯40、聚山梨糖醇酯60、聚山梨糖醇酯80、月桂酰胺DEA、椰油酰胺DEA與椰油酰胺MEA、油基甜菜堿、椰油酰胺丙基磷脂?；鵓G-氯化二甲基銨(PG-dimoniumchloride)、及月桂醇硫酸銨。合適的防腐劑包括，但不限于，抗微生物劑例如對羥苯甲酸甲酯、對羥苯甲酸丙酯、山梨酸、苯甲酸、與甲醛，以及物理性安定劑與抗氧化劑例如維生素E、抗壞血酸鈉/抗壞血酸及沒食子酸丙酯。合適的保濕劑包括，但不限于，乳酸與其它羥基酸及其鹽、甘油、丙二醇與丁二醇。合適的軟化劑包括羊毛脂醇、羊毛脂、羊毛脂衍生物、膽固醇、礦脂、新戊酸異硬脂酯及礦物油。合適的芳香劑及著色劑包括，但不限于，F(xiàn)D&C紅色40號、FD&C黃色5號。其它可納入局部配方的合適附加成分包括，但不限于，磨蝕劑、吸收劑、抗結(jié)塊劑、抗起泡劑、抗靜電劑、收斂劑(例如，金縷梅、醇與草本抽出物例如洋甘菊萃取物)、黏結(jié)劑/賦形劑、緩沖劑、螯合劑、薄膜形成劑、調(diào)理劑、推進(jìn)劑、遮光劑、pH調(diào)整劑及保護(hù)劑。
凝膠配方用的合適局部載劑的實例為羥丙基纖維素(2.1％)；70/30異丙醇/水(90.9％)；丙二醇(5.1％)；及聚山梨糖醇酯80(1.9％)。泡沫劑配方用的合適局部載劑實例為鯨蠟醇(1.1％)；硬脂醇(0.5％)；季鹽52(1.0％)；丙二醇(2.0％)；乙醇95PGF3(61.05％)；去離子水(30.05％)；P75烴推進(jìn)劑(4.30％)。所有百分比均為重量％。
局部組合物用的典型敷用模式包括使用手指的施敷法；使用物理施敷器(例如布、面紙、紗布、棉棒或刷子)的施敷法；噴霧法(包括水氣、氣溶膠或泡沫噴霧法)；點滴器施敷法；淋灑；浸漬；及沖洗法。也可使用經(jīng)控制的釋放載劑。
藥學(xué)組合物可制備為無菌注射用水性或油質(zhì)懸浮液。視所用載體與濃度而定，可使調(diào)節(jié)劑懸浮或溶解于載劑中。所述組合物可使用如上所述的適當(dāng)分散劑、潤濕劑和/或懸浮劑，根據(jù)已知技術(shù)進(jìn)行配制。在可接受的載體與溶劑中，可使用水、1，3-丁二醇、林格氏溶液(Ringer’ssolution)及等張氯化鈉溶液。此外，可使用無菌的非揮發(fā)性油類作為溶劑或懸浮介質(zhì)。為了實現(xiàn)此目的，可使用任何廠牌的非揮發(fā)性油，包括合成的單-或二甘油酯。另外，脂肪酸例如油酸可用于注射組合物的制備中，而佐劑例如局部麻醉劑、防腐劑和/或緩沖劑可溶于載劑中。
調(diào)節(jié)劑亦可調(diào)配成栓劑(例如，供直腸給藥用)。所述組合物可通過將藥物與合適的無刺激性賦形劑混合而制備，該賦形劑在常溫時為固體，但在直腸溫度時為液體，從而在直腸溶解而釋出藥物。合適的賦形劑包括，例如，可可脂及聚乙二醇類。
藥學(xué)組合物可配制成持續(xù)釋放型配方(即給藥后緩慢釋放調(diào)節(jié)劑的膠囊配方)。該配方通?？墒褂靡阎夹g(shù)予以制備并通過例如，口服、直腸或皮下植入或在所需目標(biāo)位置植入來給藥。所述配方中所用的載劑具有生物兼容性，亦可具有生物降解性；優(yōu)選地，所述配方能提供相當(dāng)固定的調(diào)節(jié)劑釋放量。持續(xù)釋放型配方中所含調(diào)節(jié)劑的量取決于，例如，植入位置、釋放率與預(yù)期持續(xù)釋放時間及所治療或預(yù)防的癥狀性質(zhì)。
除了上述給藥模式或與所述模式并用者以外，也可方便地將調(diào)節(jié)劑添加于食物或飲用水中(例如，供投予非人類動物包括陪伴動物(例如狗與貓)及家畜用)?？膳渲苿游镲暳吓c飲用水以使動物隨其膳食一起攝入所述組合物的適當(dāng)量。亦可方便地以所述組合物的預(yù)混物形式將其添加到飼料或飲用水中。
調(diào)節(jié)劑通常以辣椒素受體調(diào)節(jié)量，優(yōu)選以治療有效量來給藥。優(yōu)選的全身性劑量為每天每公斤體重不高于50mg(例如，每天每公斤體重約0.001mg至約50mg)，其中，口服劑量通常比靜脈內(nèi)劑量高出約5至20倍(例如，每天每公斤體重0.01至40mg)。
可與載劑物質(zhì)組合以產(chǎn)生單一劑量單位的活性成分的量將根據(jù)例如所治療的患者及給藥的特定模式而定。劑量單位通常含有約10μg至約500mg之間的活性成分。適當(dāng)劑量可使用此項技術(shù)中已知的常規(guī)測試及程序予以建立。
可將藥學(xué)組合物包裝，以用于治療對VR1調(diào)節(jié)作用敏感的癥狀(例如，治療暴露于類香草醇配位體、疼痛、癢、肥胖癥或尿失禁)。經(jīng)包裝的藥學(xué)組合物可包括能容納治療有效劑量的如本發(fā)明所述的至少一種VR1調(diào)節(jié)劑的容器，及指示所含組合物是用于治療對VR1調(diào)節(jié)有敏感癥狀的患者的說明書(例如，標(biāo)簽)。
使用方法本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑可在體外及體內(nèi)的多種情況下用于改變辣椒素受體的活性和/或活化作用。在某些方面，VR1拮抗劑可用于抑制類香草醇配位體促效劑(例如辣椒素和/或RTX)在體外或體內(nèi)與辣椒素受體的結(jié)合。一般而言，所述方法包括在類香草醇配位體存在于水性溶液中，或存在其它適于該配位體與辣椒素受體結(jié)合的條件下使本發(fā)明所提供的一或多種VR1調(diào)節(jié)劑的辣椒素受體調(diào)節(jié)量與辣椒素受體接觸的這一步驟。辣椒素受體可存在于溶液或懸浮液(例如，在分離的細(xì)胞膜或細(xì)胞制劑)中、或在培養(yǎng)或分離的細(xì)胞中。在某些具體實施例中，辣椒素受體是通過存在在患者的神經(jīng)元細(xì)胞所表達(dá)的，且所述水性溶液為體液。給藥動物的一或多種VR1調(diào)節(jié)劑的量，優(yōu)選是使得存在于動物的至少一種體液中的類似物的量在治療有效濃度，所述治療有效濃度為1微摩爾濃度或更少；優(yōu)選為500納摩爾濃度或更少；又更優(yōu)選為100納摩爾濃度或更少、50納摩爾濃度或更少、20納摩爾濃度或更少，或10納摩爾濃度或更少。例如，該化合物可給藥的劑量為小于20mg/kg體重，優(yōu)選為小于5mg/kg體重，于一些情形下為小于1mg/kg體重。
本發(fā)明也提供了調(diào)節(jié)優(yōu)選為減少，細(xì)胞辣椒素受體的訊息傳導(dǎo)活性(即鈣離子傳導(dǎo))的方法。所述調(diào)節(jié)可通過在適于使所述調(diào)節(jié)劑與受體結(jié)合的條件下，使本發(fā)明提供的一或多種VR1調(diào)節(jié)劑的辣椒素受體調(diào)節(jié)量與辣椒素受體接觸(在體外或者活體內(nèi))而達(dá)成。所述受體可存在于溶液或懸浮液中、經(jīng)培養(yǎng)或分離的細(xì)胞制劑中或在患者的細(xì)胞中。所述細(xì)胞可為例如，在動物體內(nèi)接觸的神經(jīng)元細(xì)胞?；蛘?，所述細(xì)胞可為在動物活體內(nèi)接觸的上皮細(xì)胞，例如膀胱上皮細(xì)胞(泌尿上皮細(xì)胞)或氣管上皮細(xì)胞。訊息傳導(dǎo)活性的調(diào)節(jié)可通過檢測對鈣離子傳導(dǎo)(亦稱為鈣離子移動或流動)的影響予以評估。訊息傳導(dǎo)活性的調(diào)節(jié)亦可通過檢測使用本發(fā)明提供的一或多種VR1調(diào)節(jié)劑治療的患者癥狀(例如，疼痛、灼燒感、氣管收縮、炎癥、咳嗽、打嗝、癢、尿失禁或膀胱過動)的改變予以評估。
本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑，優(yōu)選為通過口服或局部給藥至患者(例如，人類)，并且在調(diào)節(jié)VR1訊息傳導(dǎo)活性的同時，存在于至少一種動物體液中。用于所述方法的優(yōu)選的VR1調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)體外VR1訊息傳導(dǎo)活性的濃度為1納摩爾濃度或更少，優(yōu)選為100微微摩爾濃度或更少，更佳為20微微摩爾濃度或更少，于活體內(nèi)體液中(例如血液中)的濃度是為1微摩爾濃度或更少，500納摩爾濃度或更少，或100納摩爾濃度或更少。
本發(fā)明進(jìn)一步提供治療對VR1調(diào)節(jié)敏感的癥狀的方法。在本發(fā)明中，“治療”一詞是涵蓋疾病改善的治療和癥狀的治療，兩者皆可為預(yù)防性的(即于癥狀發(fā)作前，為了預(yù)防、延緩或減少癥狀嚴(yán)重性)或治療性的(即于癥狀發(fā)作后，為了降低癥狀的嚴(yán)重性和/或持續(xù)性)。于下述情況下該癥狀為“對VR1調(diào)節(jié)作用敏感”無論局部存在的類香草醇配位體量的所少，若癥狀的特征為不適當(dāng)?shù)睦苯匪厥荏w活性，和/或若調(diào)節(jié)辣椒素受體活性造成其病癥或癥狀的緩解。所述癥狀包括，例如，在下文詳細(xì)描述的由于暴露在VR1活化刺激下產(chǎn)生的癥狀、疼痛、呼吸性疾病(例如氣喘及慢性阻塞性肺疾病)、癢、尿失禁、膀胱過動、咳嗽、打嗝、及肥胖癥。這些病癥可使用此項技術(shù)中已建立的準(zhǔn)則予以診斷及檢測。患者可包括人類、馴養(yǎng)的陪伴動物及家畜，其劑量如上所述。
治療方法可根據(jù)所用的化合物及要進(jìn)行治療的特定病癥而定。然而，多數(shù)疾病的治療優(yōu)選采用一天4次或4次以下的給藥頻率。一般而言，更優(yōu)選地采用一天2次的劑量療法，尤其優(yōu)選為一天給藥一次。治療急性疼痛時，要采用能迅速達(dá)到有效濃度的單一劑量。然而，可以理解，對于任何特定患者的特殊劑量標(biāo)準(zhǔn)及治療方法取決于各項因素，包括所用特定化合物的活性、年齡、體重、一般健康情形、性別、飲食、給藥時間、給藥途徑及排泄率、藥物組合及進(jìn)行治療的特定疾病嚴(yán)重性。一般而言，優(yōu)選使用足以提供有效治療的最低劑量。使用適于所治療或預(yù)防病癥的醫(yī)學(xué)或獸醫(yī)學(xué)準(zhǔn)則，通?？蓹z測患者治療的效果。
患有由于暴露在辣椒素受體活化刺激而產(chǎn)生的癥狀的患者包括經(jīng)由熱、光、催淚瓦斯或酸引起灼傷的個體，及其黏膜暴露(例如，經(jīng)由攝取、吸入或眼睛接觸)在辣椒素(例如，得自辣椒或辣椒噴霧劑)或相關(guān)刺激物(例如酸、催淚瓦斯或空氣污染物)下的患者。所產(chǎn)生的癥狀(可使用本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑，尤其是拮抗劑治療者)可包括，例如，疼痛、氣管收縮及發(fā)炎。
使用本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑治療的疼痛可為慢性或急性疼痛，包括，但不限于，由周邊神經(jīng)介導(dǎo)的疼痛(尤其是神經(jīng)痛)。本發(fā)明提供的化合物可用于治療，例如，乳房切除后疼痛癥候群、殘肢痛、幻覺肢體痛、口腔神經(jīng)痛、牙痛(牙齦痛)、假牙痛、帶狀疹后神經(jīng)痛、糖尿病神經(jīng)病變、反射性交感神經(jīng)失養(yǎng)癥、三叉神經(jīng)痛、骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、纖維肌痛、格巴兩氏癥候群(Guillain-Barre Syndrome)、感覺異常性股痛、口腔灼熱癥候群和/或兩側(cè)性周邊神經(jīng)病變。其它神經(jīng)痛癥狀包括灼熱痛(反射性交感神經(jīng)失養(yǎng)癥-RSD，僅次于周邊神經(jīng)傷害)、神經(jīng)炎(包括，例如，坐骨神經(jīng)炎、周邊神經(jīng)炎、多神經(jīng)炎、視神經(jīng)炎、熱病后神經(jīng)炎、移動性神經(jīng)炎、分節(jié)性神經(jīng)炎及宮保氏神經(jīng)炎(Gombault’s neuritis))、神經(jīng)細(xì)胞炎、神經(jīng)痛(例如，上文所述者、頸臂神經(jīng)痛、顱部神經(jīng)痛、膝狀神經(jīng)痛、舌咽神經(jīng)痛、偏頭性神經(jīng)痛、自發(fā)性神經(jīng)痛、肋間神經(jīng)痛、乳房神經(jīng)痛、下頷關(guān)節(jié)神經(jīng)痛、摩頓氏神經(jīng)痛(Morton’s neuralgia)、鼻睫神經(jīng)痛、枕骨神經(jīng)痛、紅斑性肢痛癥、史路德氏神經(jīng)痛(Sluder’s neuralgia)、蝶腭神經(jīng)痛、眶上神經(jīng)痛及翼管神經(jīng)痛)、與手術(shù)相關(guān)的疼痛、肌肉與骨骼疼痛、與AIDS相關(guān)的神經(jīng)病變、與MS相關(guān)的神經(jīng)病變、及與脊椎神經(jīng)受傷相關(guān)的疼痛。頭痛，包括涉及周邊神經(jīng)活性的頭痛，例如竇性、叢發(fā)性(即偏頭性神經(jīng)痛)及一些壓力性頭痛與偏頭痛，亦可如本發(fā)明所述予以治療。例如，可在患者一感受到偏頭痛前的預(yù)兆時，即給藥本發(fā)明提供的化合物來預(yù)防偏頭痛。其它疼痛癥狀可如本發(fā)明所述進(jìn)行治療，包括“口腔灼熱癥候群”、產(chǎn)痛、恰可氏疼痛癥(Charcot’s pains)、腸氣疼痛、經(jīng)痛、急性與慢性背痛(例如，下背痛)、痔痛、消化不良痛、心絞痛、神經(jīng)根疼痛、同位性疼痛及異位性疼痛-包括與癌癥有關(guān)的疼痛(例如，骨癌患者)、與暴露在毒液(例如，由于被蛇咬、被蜘蛛咬、或蟲叮)有關(guān)的疼痛(及炎癥)、及與外傷有關(guān)的疼痛(例如，手術(shù)后疼痛、由傷口、瘀傷與骨折引起的疼痛、及灼傷痛)。其它的疼痛狀癥可如本發(fā)明所述予以治療，包括與發(fā)炎性腸道疾病相關(guān)的疼痛、腸激躁癥候群和/或發(fā)炎性腸道疾病。
于某些方面，本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑可用于治療機(jī)械性疼痛。本發(fā)明所用的“機(jī)械性疼痛”一詞是指頭痛以外的不是神經(jīng)性或暴露于熱、冷或外在化學(xué)刺激下所導(dǎo)致的疼痛。機(jī)械性疼痛包括物理外傷(除了熱或化學(xué)灼燒或有毒化學(xué)劑的其它刺激和/或疼痛暴露以外)，例如手術(shù)后疼痛及由于傷口、瘀傷與骨折導(dǎo)致的疼痛；牙痛；假牙痛；神經(jīng)根疼痛；骨關(guān)節(jié)炎；風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；肌纖維痛；感覺異常性股痛；背痛；與癌癥相關(guān)的疼痛；心絞痛；腕隧道癥候群；及由于骨折、生產(chǎn)、痔瘡、腸氣、消化不良、及月經(jīng)產(chǎn)生的疼痛。
可治療的癢癥狀包括牛皮癬搔癢、由于血液透析引起的癢、過水搔癢癥、及與陰道前庭炎、接觸性皮膚炎、蟲咬及皮膚過敏相關(guān)的癢?？扇绫景l(fā)明所述予以治療的尿道癥狀包括尿失禁(包括滿溢性尿失禁、急迫性尿失禁及壓力性尿失禁)、以及膀胱過動或不穩(wěn)定的膀胱癥狀(包括源自脊椎的迫尿肌過度反射及膀胱過敏癥)。在某些該治療方法中，VR1調(diào)節(jié)劑是通過導(dǎo)管或類似裝置給藥的，從而使VR1調(diào)節(jié)劑直接注射至膀胱中。本發(fā)明提供的化合物也可作為止咳劑用(以預(yù)防、緩和或壓制咳嗽)、用于治療打嗝、及促進(jìn)肥胖患者的減重。
在其它方面，本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑可用于組合療法以治療涉及炎性成分的病癥。所述病癥包括，例如，已知具有炎性成分的自體免疫失調(diào)與病理性自體免疫反應(yīng)，其包括，但不限于，關(guān)節(jié)炎(尤其是風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)、牛皮癬、克隆氏病癥(Crohn’s disease)、紅斑狼瘡癥、腸激躁癥候群、組織移植排斥、及移植器官的超急性排斥。其它所述病癥包括外傷(例如，對頭或脊椎神經(jīng)的傷害)、心血管與腦血管疾病及特定感染病癥。
在所述組合療法中，將VR1調(diào)節(jié)劑是與抗炎劑一起給藥至患者。VR1調(diào)節(jié)劑與抗炎劑可存在于相同藥學(xué)組合物中，或可以以任一順序分開給藥?？寡讋┌?，例如，非類固醇抗炎藥物(NSAIDs)、非專一性及環(huán)氧化酶-2(COX-2)專一性環(huán)氧化酶抑制劑、金化合物、皮質(zhì)類固醇類、胺甲喋呤、腫瘤壞死因子(TNF)受體拮抗劑、抗-TNFα抗體、抗-C5抗體、及介白素-1(IL-1)受體拮抗劑。NSAIDs的實施例包括，但不限于異丁苯丙酸(例如，ADVILTM、MOTRINTM)、氟聯(lián)苯丙酸(flurbiprofen)(ANSAIDTM)、甲氧萘丙酸(naproxen)或甲氧萘丙酸鈉(naproxen sodium)(例如，NAPROSYN、ANAPROX、ALEVETM)、雙氯芬酸(diclofenac)(例如，CATAFLAMTM、VOLTARENTM)、雙氯芬酸鈉與米索前列醇(misoprostol)的組合(例如，ARTHROTETM)、舒林酸(sulindac)(CLINORILTM)、惡丙秦(oxaprozin)(DAYPROTM)、二氟苯水楊酸(DOLOBIDTM)、匹若西卡(piroxicam)(FELDENETM)、引朵美辛(indomethacin)(INDOCINTM)、伊托多雷(etodolac)(LODINETM)、菲諾洛芬鈣(fenoprofen calcium)(NALFONTM)、酮布洛芬(ketoprofen)(例如，ORUDISTM、ORUVAILTM)、萘美丁酮鈉(sodium nabumetone)(RELAFENTM)、硫氮磺胺吡啶(sulfasalazine)(AZULFIDINETM)、托美丁鈉(tolmetin sodium)(TOLECTINTM)、與羥基氯喹嚀(hydroxychloroquine)(PLAQUENILTM)。特定的NSAIDs類別是由抑制環(huán)氧化(COX)酶的化合物所構(gòu)成，例如塞利昔布(celecoxib)(CELEBREXTM)與羅非昔布(rofecoxib)(VIOXXTM)。NSAIDs進(jìn)一步包括水楊酸鹽類例如乙?；畻钏峄虬⑺酒レ`、水楊酸鈉、膽堿與水楊酸鎂類(TRILISATETM)、與雙水楊酯(salsalate)(DISALCIDTM)、以及皮質(zhì)類固醇類例如可體松(cortisone)(CORTONETM乙酸鹽)、地塞米松(dexamethasone)(例如，DECADRONTM)、甲基潑尼松龍(methylprednisolone)(MEDROLTM)、潑尼松龍(prednisolone)(PRELONETM)、潑尼松龍磷酸鈉(prednisolonesodium phosphate)(PEDIAPREDTM)、與潑尼松(例如，PREDNICEN-MTM、DELTASONETM、STERAPREDTM)。
所述組合療法中，VR1調(diào)節(jié)劑的適當(dāng)劑量通常如上述?？寡讋┑慕o藥劑量及方法在，例如，Physician’s Desk Reference中的廠商指示中進(jìn)行描述。在某些具體實施例中，VR1調(diào)節(jié)劑與抗炎劑的組合給藥導(dǎo)致需要產(chǎn)生治療效果的抗炎劑劑量減少。因此，優(yōu)選地，在本發(fā)明的組合或組合療法中抗炎劑的劑量小于由廠商告知的未與VR1拮抗劑組合給藥的抗炎劑的最大劑量。更優(yōu)選地，此劑量小于由廠商告知的未與VR1拮抗劑組合給藥的抗炎劑的最大劑量的3/4，又更優(yōu)選為小于1/2，及非常優(yōu)選為小于1/4，最優(yōu)選為小于該最大劑量的10％。顯而意見地，達(dá)到期望效果所需的組合中VR1拈抗劑成分的劑量同樣受該組合抗炎劑成分的劑量與效力影響。
在某些優(yōu)選具體實施例中，VR1調(diào)節(jié)劑與抗炎劑的組合給藥是通過在相同包裝盒中包裝一或多種VR1調(diào)節(jié)劑與一或多種抗炎劑而實現(xiàn)的，其可分別包裝在該包裝盒的分別容器中，或?qū)⒑幸换蚨喾NVR1調(diào)節(jié)劑與一或多種抗炎劑的混合物裝在相同容器中。優(yōu)選的混合物是調(diào)配成供口服給藥形式(例如，呈丸劑、膠囊、錠劑等)。在某些具體實施例中，所述包裝含印有指針的標(biāo)簽，說明所述一或多種VR1調(diào)節(jié)劑及一或多種抗炎劑是一起用于治療炎性疼痛病癥的。高度優(yōu)選的組合為其中抗炎劑包括下述的至少一種COX-2專一性環(huán)氧化酶抑制劑例如瓦第昔布(valdecoxib)(BEXTRA)、蘭拉昔布(lumiracoxib)(PREXIGETM)、依托昔布(etoricoxib)(ARCOXIA)、塞利昔布(CELEBREX)和/或羅非昔布(VIOXX)。
在其它方面，本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑可用于組合一或多種附加的疼痛緩解藥物。特定的疼痛緩解藥物也為如上所述的抗炎劑。其它疼痛緩解藥物為麻醉止痛劑，其典型地作用于一或多種類鴉片劑受體亞型(例如，μ、K和/或δ)，優(yōu)選為起促效劑或部分促效劑作用。所述制劑包括鴉片劑、鴉片劑衍生物及類鴉片劑，以及其藥學(xué)上可接受的鹽與水合物。在優(yōu)選具體實施例中，麻醉止痛劑的具體實施例包括阿芬旦尼(alfentanyl)、阿法普魯汀(alphaprodine)、安尼勒立汀(anileridine)、培集屈密特(bezitramide)、丁基原啡因(buprenorphine)、可待因(codeine)、二乙酰基二氫嗎啡、二乙酰基嗎啡、二氫可待因、氰苯哌酯(diphenoxylate)、乙基嗎啡、芬太尼(fentanyl)、海洛英、氫可酮(hydrocodone)、氫嗎啡酮(hydromorphone)、異美沙冬(isomethadone)、左旋甲基嗎泛(levomethorphan)、羥甲左嗎南(levorphane)、左旋碼泛(levorphanol)、麥啶(meperidine)、美他唑新(metazocine)、美沙酮(methadone)、美索芬(methorphan)、美托酮(metopon)、嗎啡、鴉片萃取物、鴉片流體萃取物、鴉片粉劑、鴉片粒劑、粗鴉片、鴉片酊、羥二氫可待因酮(oxycodone)、羥二氫嗎啡酮(oxymorphone)、復(fù)方樟腦酊(paregoric)、潘他唑新(pentazocine)、配西汀(pethidine)、吩那唑新(phenazocine)、匹密諾汀(piminodine)、丙氧吩(propoxyphene)、消旋甲基嗎泛(recemethorphan)、消旋嗎泛(racemorphan)、蒂巴因(thebaine)及前述制劑藥學(xué)上可接受的鹽與水合物。
麻醉止痛劑的其它實施例包括乙酰托啡因(acetophine)、乙?；淇纱颉⒁阴Ｃ郎扯?acetylmethadol)、丙烯普魯汀(allylprodine)、阿法乙酰美沙多(alphracetylmethadol)、阿法美普魯汀(alphameprodine)、阿法美沙多(alphamethadol)、苯才西汀(benzethidine)、芐基嗎啡、β乙酰美沙多(betacetylmethadol)、貝他美普魯汀(betameprodine)、貝他美沙多(betamethadol)、貝他普魯汀(betaprodine)、美妥芬諾(butorphonol)、克羅尼他凈(clonitazene)、甲基溴可待因(codeine methylbromide)、N-氧化可待因(codeine-N-oxide)、賽普諾啡(cyprenorphine)、二氫脫氧嗎啡(desomorphine)、右旋嗎拉密特(dextromoramide)、狄安普魯密特(diampromide)、二乙胺二噻吩丁烯(diethylthiambutene)、二氫嗎啡、狄門諾沙多(dimenoxadol)、狄美菲坦諾(dimepheptanol)、二甲胺二噻吩丁烯(dimethylthiambutene)、嗎苯丁酯(dioxaphetyl butyrate)、狄匹潘濃(dipipanone)、托蒂巴醇(drotebanol)、乙醇、甲乙胺二噻吩丁烯(ethylmethylthiambutene)、愛托失立汀(etonitazene)、羥戊甲嗎啡(etorphine)、愛托失立汀(etoxeridine)、佛萊西汀(furethidine)、羥二氫嗎啡(hydromorphinol)、羥基配西汀(hydroxyprthidine)、酚哌丙酮(ketobemidone)、左旋嗎拉密特(levomoramide)、左旋吩納西嗎泛(levophenacylmorphan)、甲基脫氧嗎啡(methyldesorphine)、甲基二氫嗎啡(methyldihydromorphine)、嗎啡里汀(morpheridine)、嗎啡甲基溴化物(morphine methylpromide)、甲基磺胺嗎啡(morphine methylsulfonate)、N-氧化嗎啡(morphine-N-oxide)、密羅啡因(myrophin)、那諾松(naloxone)、那拜芬(nalbuyphine)、那提喝松(naltyhexone)、煙堿?？纱?nicocodeine)、煙堿酰嗎啡(nicomorphine)、去甲基乙酰美沙多(noracymethadol)、左旋原嗎泛(norlevorphanol)、原美沙多(normethadone)、原嗎啡(normorphine)、原匹潘濃(norpipanone)、戊唑凱因(pentazocaine)、芬那多松(phenadoxone)、吩喃普魯密特(phenampromide)、吩諾嗎泛(phenomorphan)、吩諾配立汀(phenoperidine)、匹立屈密特(piritramide)、?？赏?pholcodine)、普魯庚唑英(proheptazoine)、普魯配立汀(properidine)、普魯匹蘭(propiran)、外消旋嗎密特(racemoramide)、蒂巴康(thebacon)、屈美配立汀(trimeperidine)及其藥學(xué)上可接受的鹽與水合物。
其它特定的代表性麻醉止痛劑，包括，例如TALWIN Nx與DEMEROL(二者均得自Sanofi Winthrop Pharmaceuticals；New York，NY)；LEVO-DROMORAN；BUPRENEX(Reckitt & ColemanPharmaceuticals，Inc.；Richmond，VA)；MSIR(Purdue Pharma L.P.；Norwalk，CT)；DILAUDID(Knoll Pharmaceutical Co.；Mount Olive，NJ)；SUBLIMAZE；SUFENTA(Janssen Pharmaceutica Inc.；Titusville，NJ)；PERCOCET、NUBAIN與NUMORPHAN(所有均得自EndoPharmaceuticals Inc.；Chadds Ford，PA)HYDROSTATIR、MS/S與MS/L(所有均得自Richwood Pharmaceutical Co.Inc；Florence，KY)、ORAMORPHSR與ROXICODONE(二者均得自RoxanneLaboratories；Columbus OH)及STADOL(Bristol-Myers Squibb；NewYork，NY)。另外的麻醉止痛劑包括CB-2受體促效劑，例如AM1241，及與α2δ次單元結(jié)合的化合物，例如Neurontin(Gabapentin)(加巴噴丁)與普瑞加巴林(pregabalin)。
在所述組合療法中，VR1調(diào)節(jié)劑的適當(dāng)劑量通常如上所述。其它疼痛緩解藥物的給藥劑量及方法可見，例如，Physician’s Desk Reference中的廠商說明書。在某些具體實施例中，將VR1調(diào)節(jié)劑與一或多種附加的疼痛緩解藥物組合給藥會使產(chǎn)生治療效果所需的各治療劑的劑量減少(例如，制劑中一或二者的劑量可能小于廠商告知或上列最大劑量的3/4，小于1/2，小于1/4，或小于該最大劑量的10％)。在某些優(yōu)選具體實施例中，VR1調(diào)節(jié)劑與一或多種附加疼痛緩解藥物的組合給藥，如上所述，是通過在相同包裝盒中包裝一或多種VR1調(diào)節(jié)劑與一或多種附加的疼痛緩解藥物而實現(xiàn)的。
VR1促效劑的調(diào)節(jié)劑可進(jìn)一步用于，例如，群眾控制(作為催淚瓦斯的代用品)、私人保護(hù)(例如，噴霧調(diào)配劑)，或通過辣椒素受體去敏化作用作為治療疼痛、癢、尿失禁或膀胱過動的藥學(xué)劑用。通常，用于群眾控制或私人保護(hù)的化合物是根據(jù)已知催淚瓦斯或辣椒噴霧劑技術(shù)調(diào)配及使用的。
在不同方面，本發(fā)明為本發(fā)明提供的化合物提供多種非藥學(xué)上的體外及體內(nèi)用途。例如，所述化合物可進(jìn)行標(biāo)記，以用作辣椒素受體(于例如細(xì)胞制劑或組織切片、其制劑或其片段的試樣中)檢測與定位的探針。所述化合物也可在受體活性試驗中作為正對照組用、作為測定候選藥劑與辣椒素受體結(jié)合能力的標(biāo)準(zhǔn)、或作為正子射出斷層造影(PET)成像用或單光子射出計算機(jī)斷層造影(SPECT)用的放射性追蹤劑。所述方法可用于鑒定活體對象的辣椒素受體。舉例而言，VR1調(diào)節(jié)劑可使用任何各種已知技術(shù)予以標(biāo)記(例如，如本發(fā)明所述以例如氚的放射性核種進(jìn)行放射性標(biāo)記)，及與試樣一起培養(yǎng)適當(dāng)?shù)呐嘤龝r間(例如，先進(jìn)行結(jié)合時間進(jìn)程試驗予以決定)。培養(yǎng)后，去除未結(jié)合的化合物(例如，通過洗滌)，并使用適用于所用標(biāo)記的任何方法檢測結(jié)合化合物(例如，進(jìn)行放射性標(biāo)記化合物的自動放射線顯影或閃爍計數(shù)；可使用光譜分析法檢測放光基團(tuán)及熒光基團(tuán))。含有標(biāo)記化合物及較大量(例如，10倍量)未標(biāo)記化合物的相配試樣可進(jìn)行相同操作，以作為對照組。與對照組相比，較大量的可檢測標(biāo)記殘留于測試試樣中說明試樣中存在辣椒素受體。該檢測試驗包括培養(yǎng)細(xì)胞或組織試樣中的受體的自動放射線顯影(受體圖譜(receptor mapping))可如Kuhar于Current Protocols inPharmacology(1998)John Wiley & Sons，New York中第8.1.1至8.1.9章節(jié)所述進(jìn)行。
本發(fā)明提供的調(diào)節(jié)劑亦可在各種已知的細(xì)胞分離方法中使用。例如，調(diào)節(jié)劑可連接在組織培養(yǎng)盤或其它支持體的內(nèi)側(cè)表面，作為固定用的親和配位體，從而于體外分離辣椒素受體(例如，分離受體表達(dá)的細(xì)胞)。在一優(yōu)選具體實施例中，使連接在熒光標(biāo)記(例如熒光黃)的調(diào)節(jié)劑與細(xì)胞接觸，然后通過熒光活化細(xì)胞分選儀(FACS，亦稱流式細(xì)胞儀)進(jìn)行分析(或分離)。
下述實施例是提供用于說明本發(fā)明而非用于局限。除非特別指出，否則所有試劑與溶劑均為標(biāo)準(zhǔn)商用級，不需要進(jìn)一步純化即可使用。通過運(yùn)用例行修飾法可將起始物質(zhì)進(jìn)行各種變化，并使用其它步驟來產(chǎn)生本發(fā)明提供的其它化合物。
實施例實施例1代表性化合物的制備該實施例是說明代表性經(jīng)芳基取代的苯并[d]異噻唑-3-基胺類似物的制備。
A.[1，1-二酮基-6-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)1H-λ6-苯并[D]異噻唑-3-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺1.2-(4-甲基苯基)-3-(三氟甲基)吡啶 在氮氣下的DME(10mL)中，將Pd(PPh3)4(0.09mmol)加到已除氣的2-氯-3-(三氟甲基)-吡啶(2.26mmol)，4-甲基-苯基硼酸(2.49mmol)及2M Na2CO3(5.65mmol)的混合物中。在80℃攪拌該混合物一夜，濃縮，以EtOAc萃取。以Na2SO4，干燥，在真空下濃縮，并用急驟管柱層析法(4∶1己烷/EtOAc)純化，得到2-(4-甲基苯基)-3-(三氟甲基)-吡啶。
2.2-甲基-5-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯磺酰胺 小心地將2-(4-甲基苯基)-3-(三氟甲基)-吡啶(42mmol)加至冰水冷卻的氯磺酸(211mmol)中。在60℃攪拌該混合物一小時。冷卻至室溫，將該混合物倒至冰水中(200mL)，以EtOAc萃取，用Na2SO4，干燥，并在真空下濃縮。用DCM(200mL)溶解該殘余物，在NH3氣體中起泡30分鐘，并于室溫下攪拌該混合物1小時。濃縮，在EtOAc與水之間分層，用Na2SO4，干燥，在真空下濃縮。用EtOAc-己烷進(jìn)行重結(jié)晶，獲得2-甲基-5-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯磺酰胺。
3.1，1-二酮-6-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-1，2-二氫-1λ6-苯并[d]異噻唑-3-酮 將高錳酸鉀(14.2mmol)加至2-甲基-5-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯磺酰胺(4.75mmol)的1N NaOH(5mL)溶液中。在80℃攪拌該混合物5小時，冷卻至室溫，過濾，酸化該濾液至pH3，并收集所得沉淀物就得到1，1-二酮基-6-(3-三氟甲烷-吡啶-2-基)-1，2-二氫-1λ6-苯并[d]異噻唑-3-酮。
4.3-氯-6-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯并[d]異噻唑1，1-二氧化物
于160℃加熱1，1-二酮基-6-(3-三氟甲烷-吡啶-2-基)-1，2-二氫-1λ6-苯并[d]異噻唑-3-酮(1.5mmol)、POCl3(3mL)和PCl5(2.0mmol)的混合物16小時。以冰終止該反應(yīng)，并以EtOAc萃取，濃縮就獲得3-氯-6-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯并[異噻唑1，1-二氧化物。
5.[1，1-二酮基-6-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)1H-λ6-苯并[d異噻唑-3-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺 于80℃加熱3-氯-6-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯并[d]異噻唑1，1-二氧化物(0.33mmol)和4-三氟甲基苯胺(0.33mmol)的吡啶溶液(4mL)16小時。濃縮并用色層分析法(EtOAc己烷/1∶1)純化，得到[1，1-二酮基-6-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)1H-λ6-苯并[d]異噻唑-3-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺。
B.[1，1-二酮基-6-(3-三氟甲基-苯基)1H-λ6-苯并[D]異噻唑-3-基]-(4-叔丁基-苯基)-胺1.6-溴-3-氯苯并[d]異噻唑1，1-二氧化物 在160℃加熱6-溴-1，1-二酮-1，2-二氫-1λ6-苯并[d]異噻唑-3-酮(Kwon等人的(1996)Arzneim.Forsch.46(10)966-971；1.5mmol)、POCl3(3mL)和PCl5(2.0mmol)的混合物16小時。以冰終止該反應(yīng)，并以EtOAc萃取，濃縮就獲得6-溴-3-氯-苯并[d]異噻唑1，1-二氧化物。
2.(6-溴-1，1-二氧化物-1H-λ6-苯并[d]異噻唑-3-基)-(4-叔丁基-苯基)-胺
在80℃加熱6-溴-3-氯-苯并[d]異噻唑1，1-二氧化物(0.33mmol)和4-叔丁基-苯胺(0.33mmol)的吡啶溶液(4mL)16小時。濃縮并用色層分析法(EtOAc∶己烷/1∶1)純化，得到(6-溴-1，1-二氧化物-1H-λ6-苯并[d]異噻唑-3-基)-(4-叔丁基-苯基)-胺。
3.[1，1-二酮基-6-(3三氟甲基-苯基)1H-λ6-苯并[d]異噻唑-3-基]-(4-叔丁基-苯基)-胺 在氮氣下將Pd(PPh3)4(0.012mmol)加至已除氣的(6-溴-1，1-二氧化物-1H-λ6-苯并[d]異噻唑-3-基)-(4-叔丁基-苯基)-胺(0.32mmol)、2-三氟甲基-苯基硼酸(0.40mmol)和2M Na2CO3(0.80mmol)的DME(5mL)溶液中。在80℃攪拌該混合物一夜，濃縮并以EtOAc萃取。用Na2SO4，干燥，在真空下濃縮，并用急驟管柱層析法(4∶1己烷/EtOAc)純化，就得到[1，1-二酮基-6-(3三氟甲基-苯基)1H-λ6-苯并[d]異噻唑-3-基]-(4-叔丁基-苯基)-胺。
C.加成化合物通過常規(guī)性的修飾可改變起始物質(zhì)，并使用另外的步驟來制備本發(fā)明所提供的化合物。使用此方法制備了表I列舉的化合物。如本發(fā)明所述測定的列于表I的化合物的IC501小于毫摩爾。
標(biāo)示“MS”字段的質(zhì)譜儀數(shù)據(jù)為電噴灑值譜(Electrospray MS)，是使用Micromass Time-of-Flight LCT，以15V或30V錐電壓于正離子模式中所獲得的，該Micromass Time-of-Flight LCT裝配有Waters 600泵、Waters 996光電二極管數(shù)組檢測器、Gilson 215自動進(jìn)樣器和Gilson841顯微注射儀。MassLynx(Advanced Chemistry Development，Inc；Toronto，Canada)4.0版軟件用于數(shù)據(jù)收集與分析。注射1毫升體積試樣于50×4.6mm Chromolith SpeedROD C18管柱，并以6毫升/分鐘流速使用2-相線性梯度(2-phase linear gradient)來沖提。在220至340nm紫外光范圍內(nèi)使用全吸收計數(shù)(total absorbance count)來測定樣品。沖提條件為一移動相A-95/5/0.05水/甲醇/TFA；移動相B-5/95/0.025水/甲醇/TFA。
梯度時間(分鐘)％B0 100.51001.21001.21 10每次注射間的整個運(yùn)作時間為2分鐘。
Table I-代表性經(jīng)芳基取代的苯并[d]異噻唑-3-基胺類似物
實施例2VR1-轉(zhuǎn)染細(xì)胞與細(xì)胞膜制劑此實施例說明結(jié)合試驗(實施例3)用的VR1-轉(zhuǎn)染細(xì)胞與含VR1的細(xì)胞膜制劑的制備。
將編碼人類辣椒素受體全長的cDNA序列(美國專利第6,482,611號的SEQ ID NO1、2或3)次克隆至用于哺乳動物細(xì)胞中重組表現(xiàn)的質(zhì)體pBK-CMV上(Stratagene，La Jolla，CA)。
使用標(biāo)準(zhǔn)方法將人類胚胎腎臟(HEK293)細(xì)胞將表達(dá)人類辣椒素受體全長序列的pBK-CMV進(jìn)行轉(zhuǎn)染。從中選出轉(zhuǎn)染細(xì)胞，并放在含G418(400μg/ml)的培養(yǎng)液中兩周，就得到一群能穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。通過限制稀釋(limitimg dilution)從該群細(xì)胞中分離出獨立的無性繁殖系(independent clones)，從而獲得可穩(wěn)定無性繁殖的細(xì)胞株，并用于下一個試驗的使用。
在進(jìn)行放射性配位體結(jié)合試驗時，將細(xì)胞接種在T175細(xì)胞培養(yǎng)燒瓶內(nèi)不含抗生素的培養(yǎng)液中，生長至約90％融合度(confluency)。再以PBS洗滌燒瓶，并在含5mM EDTA的PBS中收集細(xì)胞。通過溫和離心使細(xì)胞集結(jié)成團(tuán)，并保存在-80℃至分析為止。
用組織均質(zhì)器將先前的冷凍細(xì)胞在冰冷HEPES均質(zhì)緩沖液中分散(5mM KCl 5、5.8mM NaCl、0.75mM CaCl2、2mM MgCl2、320mM蔗糖與10mM HEPES pH 7.4)。首先將組織均質(zhì)液在1000xg(4℃)下離心10分鐘，以移除核部份及細(xì)胞碎片，然后將第一次離心的上清液在35,000xg(4℃)下再離心30分鐘，得到部份純化的膜部份。將膜再懸浮于HEPES均質(zhì)緩沖液中，再進(jìn)行分析。取一份膜均質(zhì)液，利用Bradford方法(BIO-RAD蛋白質(zhì)分析套組，#500-O001，BIO-RAD，Hercules，CA)測定蛋白質(zhì)濃度。
實施例3辣椒素受體結(jié)合試驗本實施例說明辣椒素受體結(jié)合的代表性試驗，可用于測定化合物對辣椒素(VR1)受體的結(jié)合親和性。
與[3H]樹膠脂毒素(RTX)的結(jié)合試驗基本上是依Szallasi與Blumberg(1992)J.Pharmacol.Exp.Ter.262883-888所述的方法進(jìn)行。在所述方法中，當(dāng)結(jié)合反應(yīng)結(jié)束后，非專一性的RTX結(jié)合會由于添加牛α1酸醣蛋白(每支試管100μg)而下降。
RTX(37 Ci/mmol)是由國家癌癥研究所-費(fèi)得利克癌癥研究與發(fā)展中心的化學(xué)合成與分析實驗室(the Chemical Synthesis and AnalysisLaboratory，National Cancer Institute-Frederick Cancer Research andDevelopment Center，F(xiàn)rederick，MD)合成所得到。[3H]RTX也可為市售購得(例如Amersham Pharmacia Biotech，Inc.；Piscataway，NJ)。
將實施例2得到的膜均質(zhì)液如上所述進(jìn)行離心，并再懸浮在均質(zhì)緩沖液中以使蛋白質(zhì)濃度達(dá)到333μg/ml。在冰上制備結(jié)合試驗混合物，該混合物包括[3H]RTX(比活性2200mCi/ml)、2μl非放射活性試驗化合物、0.25mg/ml牛血清白蛋白(Cohn V部份)、與5×104至1×105VR1-轉(zhuǎn)染細(xì)胞。將上述冰-冷HEPES均質(zhì)緩沖液(pH 7.4)調(diào)整最終體積至500μl(用于競爭結(jié)合試驗)或1,000μl(用于飽和結(jié)合試驗)。非專一性結(jié)合的定義為在1μM非放射活性RTX(Alexis Corp.；San Diego，CA)的存在下發(fā)生的結(jié)合性。在進(jìn)行飽和結(jié)合時，使用1比2的稀釋，添加的[3H]RTX濃度范圍為7至1,000pM。每條飽和結(jié)合曲線一般收集11個濃度點。
競爭結(jié)合試驗是在60pM[3H]RTX及不同濃度的試驗化合物存在下進(jìn)行得。通過將分析混合物移至37℃水浴來使結(jié)合反應(yīng)發(fā)生，在培育60分鐘后，將試管置于冰上冷卻以中止反應(yīng)。通過在WALLA玻璃纖維濾紙(PERKIN-ELMER，Gaithersburg，MD)上過濾將結(jié)合在膜的RTX及任何與α1酸醣蛋白結(jié)合的RTX從游離態(tài)的分離出來。該玻璃纖維濾紙使用前用1.0％PEI(聚伸乙亞胺)浸泡2小時。將濾紙干燥一夜后，在添加WALLAC BETA SCINT閃爍液后，在WALLAC 1205BETA PLATE計數(shù)器上計數(shù)。
平衡結(jié)合參數(shù)的測定是通過代入變構(gòu)性希爾公式(the allosteric Hillequation)，以計算機(jī)程序FITP(Biosoft，F(xiàn)erguson，MO)來輔助計算數(shù)據(jù)(說明于Szallasi等人的(1993)J.Pharmacol.Exp.Ther.266678-683)。本發(fā)明所提供化合物在此分析法中對辣椒素受體的Ki值小于1μM、100nM、50nM、25nM、10nM或1nM。
實施例4鈣離子移動試驗本實施例說明用于評估試驗化合物促效劑與拮抗劑活性的代表性鈣離子移動試驗。
將用表達(dá)質(zhì)體轉(zhuǎn)染得(如實施例2所述)，并進(jìn)而表達(dá)人類辣椒素受體的細(xì)胞接種在FALCON黑邊、透明底板的96孔分析盤中(#3904，BECTON-DICKINSON，F(xiàn)ranklin Lakes，NJ)，生長至70至90％融合度。將96孔板中的培養(yǎng)液排空，并在各孔中加入FLUO-3AM鈣敏感性染料(Molecular Probes，Eugene，OR)(染料溶液1mgFLUO-3AM、440μLDMSO與440μl 20％普羅尼克酸(pluronic acid)的DMSO溶液，在克氏-林格氏(Krebs-Ringer)HEPES(KRH)緩沖液(25mM HEPES、5mM KCl、0.96mM NaH2PO4、1mM MgSO4、2mM CaCl2、5mM葡萄糖、1mM羧苯磺胺(probenecid)，pH 7.4)中稀釋為1∶250，)每孔有50μl稀釋溶液)。以鋁箔覆蓋分析盤，并在37℃在含5％CO2環(huán)境下培育1至2小時。培育后，排空分析盤中的染料，并用KRH緩沖液洗滌細(xì)胞一次，再懸浮在KRH緩沖液中。
測定辣椒素EC50為了測量試驗化合物促效或拮抗表達(dá)辣椒素受體的細(xì)胞對辣椒素或其它類香草醇促效劑的鈣離子移動反應(yīng)的能力，先測定促效劑辣椒素的EC50。在各孔如上所述制備的細(xì)胞中添加20μl KRH緩沖液與1μlDMSO。通過FLIPR儀器將100μl辣椒素的KRH緩沖液自動加至各孔中。使用FLUOROSKAN ASCENT(Labsystems，F(xiàn)ranklin，MA)或FLIPR(熒光成像的分析盤讀取系統(tǒng)；Molecular Devices，Sunnyvale，CA)儀器監(jiān)控辣椒素所誘發(fā)的鈣離子移動。在促效劑施用后，在30至60秒間獲得的數(shù)據(jù)被用來產(chǎn)生8個點的濃度反應(yīng)曲線，此時辣椒素終濃度為1nM至3μM。使用KALEIDAGRAPH軟件(Synergy Software，Reading，PA)將數(shù)據(jù)代入公式y(tǒng)＝a*(1/(1+(b/x)c))來測定反應(yīng)的50％刺激濃度(EC-50)。此公式中，y為熒光訊號最大值，x為促效劑或拮抗劑濃度(此例中為辣椒素)，a為Emax；b相當(dāng)于EC50值，而c為希爾是數(shù)(Hill coefficient)。
促效劑活性的測定將試驗化合物溶于DMSO中，并用KRH緩沖液稀釋，然后立刻加至如上所述制備的細(xì)胞中。100nM辣椒素(適當(dāng)?shù)腅C-90濃度)也加至96孔分析盤的細(xì)胞中，做為陽性對照組。試驗孔中的試驗化合物最終濃度為0.1nM至5μM間。
通過測量表達(dá)辣椒素受體的細(xì)胞的熒光反應(yīng)來測定該試驗化合物作為辣椒素受體促效劑的能力，所述辣椒素受體是通過作為化合物濃度函數(shù)的化合物所引發(fā)的。該數(shù)據(jù)填入如上所述的公式中就獲得EC50，其一般小于1微摩爾濃度，優(yōu)選為小于100納摩爾濃度，更優(yōu)選為小于10納摩爾濃度。各試驗化合物的效力范圍也通過計算所述反應(yīng)來測定，所述反應(yīng)由試驗化合物濃度(一般為1μM)所引發(fā)，與100nM辣椒素所引發(fā)的反應(yīng)相比。此值稱為訊號百分比(Percent of Signal，POS)，通過下式來計算POS＝100*試驗化合物反應(yīng)/100nM辣椒素反應(yīng)此分析提供了對作為人類辣椒素受體促效劑的試驗化合物的功效與效力這兩者的定量評估。人類辣椒素受體通常在濃度小于100μM，或優(yōu)選濃度小于1μM，或更優(yōu)選為濃度小于10nM下引發(fā)可檢測的反應(yīng)。人類辣椒素受體在1μM濃度的效力范圍優(yōu)選為大于30POS，更優(yōu)選為大于80POS。某些促效劑基本上不具拮抗劑活性，這一點是通過如下所述分析法中，在低于4nM的化合物濃度下沒有可檢測的促效劑活性所證實得，更優(yōu)選為低于10μM的濃度，及最優(yōu)選為低于或等于100μM的濃度。
拮抗劑活性的測定將試驗化合物溶于DMSO中，并稀釋在20μl KRH緩沖液，以使分析孔中試驗化合物最終濃度在1μM至5μM的間，并加入如上所述制備的細(xì)胞。將含有所制備細(xì)胞及試驗化合物的96孔分析盤在室溫下在暗室中培育0.5至6小時，注意不可連續(xù)培育超過6小時。在即將測定熒光反應(yīng)前，通過FLIPR儀器自動添加100μl含辣椒素的KRH緩沖液(其濃度如上述測定所得為EC50濃度的2倍)至96孔分析盤的各孔中，使最終試樣體積為200μl，并且最終辣椒素濃度等于EC50。在分析孔中的試驗化合物的最終濃度為1μM至5μM間。相對于對應(yīng)的對照組(即在缺乏試驗化合物的情形下，以EC50濃度的2倍的辣椒素進(jìn)行處理)，辣椒素受體的拮抗劑使此反應(yīng)下降至少約20％，優(yōu)選為至少約50％，與最優(yōu)選為至少80％。與觀察存在辣椒素且無拮抗劑的反應(yīng)相比，提供下降50％的拮抗劑所需濃度為所述拮抗劑的IC50，且優(yōu)選低于1微摩爾濃度、100納摩爾濃度、10納摩爾濃度或1納摩爾濃度。
得某些優(yōu)選VR1調(diào)節(jié)劑為基本上無促效劑活性的拮抗劑，這一點是通過如上所述分析法中，在低于4nM的化合物濃度下沒有可檢測的促效劑活性所證實得，更優(yōu)選為低于10μM的濃度，及最優(yōu)選為低于或等于100μM的濃度。
實施例5活體外微粒體的半衰期此實施例說明采用代表性肝微粒體半衰期分析來評估化合物半衰期值(t1/2值)。
叢聚的人類肝微粒體是從XenoTech LLC(Kansas City，KS)所獲得。該肝微粒體也通過自活體外技術(shù)(Baltimore，MD)或組織轉(zhuǎn)形技術(shù)(Tissue Transformation Technologies)(Edison，NJ)獲得。制備6個試驗反應(yīng)，分別含25μl微粒體、5μl的100μM試驗化合物溶液，和399μl 0.1M磷酸鹽緩沖液(19mL 0.1M NaH2PO4、81mL 0.1M Na2HPO4，以H3PO4調(diào)至pH7.4)。制備第7個反應(yīng)作為陽性對照組，其中包含25μl微粒體、399μl 0.1M磷酸鹽緩沖液與5μl的100μM已知代謝性質(zhì)的化合物得溶液(例如DIAZEPAM或CLOZAPINE)。反應(yīng)在39℃下預(yù)培養(yǎng)10分鐘。
輔因子混合物(CoFactor Mixture)的制法是將16.2mgNADP與45.4mg葡萄糖-6-磷酸鹽(Gluose-6-phosphate)稀釋于4mL的100mMMgCl2中。葡萄糖-6-磷酸鹽脫氫酶(Gluose-6-phosphate dehydrogenase)溶液是取214.3μl葡萄糖-6-磷酸鹽脫氫酶懸浮液(Roche MolecularBiochemicals，Indianapolis，IN)于1285.7μl蒸餾水中稀釋制備而成的。將71μl起始反應(yīng)混合物(3mL輔因子混合物；1.2mL葡萄糖-6-磷酸鹽脫氫溶液)添加至6個試驗反應(yīng)中的5個以及陽性對照組中。將71μl的100mM MgCl2添加至第6個試驗反應(yīng)中作為陰性對照組。在各時間點(0、1、3、5、與10分鐘)，將75μl的各反應(yīng)混合物滴加至96孔含有75μl冰冷乙腈的深孔分析盤的孔中。將樣本渦轉(zhuǎn)混合，在3500rpm下離心10分鐘(Sorval T 6000D離心機(jī)，H1000B轉(zhuǎn)子)。從每一個反應(yīng)中取出75μl上清液移至96孔分析盤的孔中，96孔分析盤的每一個孔都含有150μl 0.5μM的具有已知其LCMS圖形(內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn))的化合物溶液。對各樣本進(jìn)行LCMS分析，以AUC測定未代謝試驗化合物的含量，畫出化合物濃度對時間的關(guān)系圖，外插就得到試驗化合物的t1/2值。
本發(fā)明提供的優(yōu)選化合物在人類肝微粒體活體外具有大于10分鐘至小于4小時的t1/2值，優(yōu)選介于30分鐘至1小時之間。
實施例6MDCK毒性分析此實施例說明使用Madin Darby犬腎臟(MDCK)細(xì)胞的細(xì)胞毒性分析評估化合物的毒性。
在透明底板的96孔分析盤(PACKARD，Meriden，CT)的各孔中添加1μl試驗化合物，以使分析法中化合物終濃度為10微摩爾濃度、100微摩爾濃度或200微摩爾濃度。向?qū)φ战M孔中則添加沒有試驗化合物的溶劑。
取MDCK細(xì)胞，ATCC no.CCL-34(美國菌種培養(yǎng)收集處(AmericanType Culture Collection，Manassas，VA))，依ATCC生產(chǎn)資料頁的指示，維持在無菌條件下。取融合的MDCK細(xì)胞經(jīng)胰蛋白酶處理，收集后，以溫?zé)?37℃)培養(yǎng)液(VITACELL伊格氏最低必需培養(yǎng)液(MinimumEssential Medium Eagle)、ATCC目錄#30-2003)稀釋至濃度為0.1×106個細(xì)胞/毫升。將100μL稀釋的細(xì)胞加至各孔中，除了5個標(biāo)準(zhǔn)曲線對照組的分析孔中含有不具細(xì)胞的100μl溫?zé)崤囵B(yǎng)液。再將該分析盤在37℃下，95％O2、5％CO2中，在恒定振蕩培育2小時。培育后，在各孔中加入50μL哺乳動物細(xì)胞溶胞液，孔上加蓋PACKARD TOPSEAL貼紙，將分析盤在約700rpm，在合適振蕩器上振蕩2分鐘。
相與未處理的細(xì)胞相比，造成毒性的化合物將會降低ATP產(chǎn)生。ATP-LITE-M冷光ATP檢測套組通常是依據(jù)制造商的指示使用，以測量已處理及未處理的MDCK細(xì)胞中的ATP產(chǎn)量。使PACKARD ATPLITE-M試劑平衡至室溫。一旦平衡后，即取凍干的受質(zhì)溶液在5.5mL受質(zhì)緩沖液(來自套組)中再組成。凍干的ATP標(biāo)準(zhǔn)溶液于去離子水中再組成，得到10mM母液。關(guān)于5個對照組孔，則分別添加10μL連續(xù)稀釋的PACKARD標(biāo)準(zhǔn)物至各標(biāo)準(zhǔn)曲線對照組孔中，使各連續(xù)孔的最終濃度為200nM、100nM、50nM、25nM與12.5nM。將PACKARD受質(zhì)溶液(50μL)加到所有孔中，然后加蓋，將分析盤在合適振蕩器上以約700rpm振蕩2分鐘。將白色PACKARD貼紙黏在各分析盤底部，并用金屬箔包裹分析板使試樣于黑暗中10分鐘。接著在22℃下使用冷光計數(shù)器(例如PACKARD TOPCOUNT微分析板閃爍與冷光計數(shù)器或TECAN SPECTRAFLUOR PLUS)量測冷光，并由標(biāo)準(zhǔn)曲線計算ATP含量。比較未處理細(xì)胞與經(jīng)試驗化合物處理的細(xì)胞中的ATP含量。以10μM優(yōu)選試驗化合物處理的細(xì)胞中的ATP含量為未處理細(xì)胞的至少80％，優(yōu)選為至少90％。當(dāng)試驗化合物使用100μM濃度時，以優(yōu)選試驗化合物處理的細(xì)胞中檢測的ATP含量為未處理細(xì)胞的至少50％，優(yōu)選為至少80％。
實施例7背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞分析法此實施例說明用于評估化合物的VR1拮抗劑或促效劑活性的代表性背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞分析。
DRG是從新生老鼠切下的，使用標(biāo)準(zhǔn)方法(Aguayo與White(1992)Brain Research 57061-67)進(jìn)行分離及培養(yǎng)。經(jīng)過48小時培育后，洗滌細(xì)胞一次，并以鈣敏感性染料Fluo-4AM(2.5-10μg/ml；TefLabs，Austin，TX)培育30至60分鐘，然后再洗滌細(xì)胞一次。添加不同濃度化合物至細(xì)胞中。將辣椒素加到細(xì)胞中會導(dǎo)致細(xì)胞外鈣離子含量隨著VR1而增加，該鈣離子含量是通過熒光計監(jiān)測Fluo-4熒光的變化而檢測的。收集60至180秒的數(shù)據(jù)，以決定熒光訊號的最大值。
在拈抗劑分析中，向細(xì)胞中添加各種濃度的化合物，然后以熒光訊號做為化合物濃度的函數(shù)畫圖，從而判別達(dá)到抑制50％辣椒素活化反應(yīng)所需的濃度，或IC50。辣椒素受體拮抗劑優(yōu)選的IC50為低于1微摩爾濃度、100納摩爾濃度、10納摩爾濃度或1納摩爾濃度。
促效劑分析中，添加各種化合物濃度于細(xì)胞中，而不加辣椒素。辣椒素受體促效劑化合物導(dǎo)致細(xì)胞外鈣離子含量隨著VR1而增加，該鈣離子含量是以熒光計監(jiān)測Fluo-4熒光的變化。該EC50，或達(dá)到辣椒素活化反應(yīng)的最大訊號50％所需的濃度，優(yōu)選為低于1微摩爾濃度、低于100納摩爾濃度或低于10納摩爾濃度。
實施例8用于測定疼痛緩解的動物模式此實施例說明用于評估化合物所提供的疼痛緩解程度的代表性方法。
A.疼痛緩解試驗下列方法是用于評估疼痛緩解。
機(jī)械性異常疼痛基本上評估機(jī)械性異常疼痛(對無害刺激產(chǎn)生的異常反應(yīng))是依Chaplan等人的(1994)J.Neurosci.Methods 5355-63及Tal與Eliav的(1998)Pain 64(3)511至518所述。取一系列不同剛度的凡弗瑞(von Frey)絲線(典型為一系列8至14種絲線)施加在后腳足底表面上，其力量恰足使絲線彎曲。絲線保持此位置不超過3秒或直到大老鼠出現(xiàn)陽性異常疼痛反應(yīng)為止。陽性異常疼痛反應(yīng)包括舉起處理的后腳，立即舔或搖動腳部。使用狄克森上下分析法(Dixon up-down method)決定各絲線的施加順序與頻率。以此系列中的中等絲線開始試驗，隨后依向上或向下順序連續(xù)施用，分別依開始時所使用絲線是否出現(xiàn)陰性或陽性反應(yīng)而定。
若接受此等化合物處理的大老鼠相較于未處理對照組或媒劑處理組大老鼠需要使用較高剛度的凡弗瑞(von Frey)絲線方可引起陽性異常疼痛反應(yīng)時，表示該化合物可有效逆轉(zhuǎn)或預(yù)防類似機(jī)械性異常疼痛的癥狀?；蛘?，或此外，可在給藥化合物之前及之后測試動物的慢性疼痛。此等分析法中，相較于處理前誘發(fā)反應(yīng)時所需絲線或未經(jīng)處理或經(jīng)媒劑處理且亦具慢性疼痛的動物所需絲線，有效化合物可使處理后誘發(fā)反應(yīng)所需絲線剛度提高。試驗化合物是于疼痛發(fā)作之前或之后投藥。當(dāng)試驗化合物在疼痛發(fā)作之后投藥時，則在投藥后10分鐘至3小時進(jìn)行試驗。
機(jī)械性痛覺過敏基本上評估機(jī)械性痛覺過敏(對疼痛刺激的反應(yīng)過度)是依Koch等人的(1996)Analgesia 2(3)157至164所述。取大老鼠置于有溫?zé)岫嗫捉饘俚匕宓膫€別籠內(nèi)。在任一只后腳足底表面上溫和針刺后，測定后腳抽回的時間期(亦即動物將其后腳放回地板上之前保持的時間)。
若化合物使后腳抽回的時間期縮短達(dá)統(tǒng)計顯著性時，則該化合物可降低機(jī)械性痛覺過敏。試驗化合物可于疼痛發(fā)作之前或之后投藥。當(dāng)試驗化合物在疼痛發(fā)作之后投藥時，則在投藥后10分鐘至3小時進(jìn)行試驗。
熱痛覺過敏基本上評估熱痛覺過敏(對有害熱刺激的反應(yīng)過度)是依Hargreaves等人的(1988)Pain.32(1)77至88所述。簡言的，在動物任一只后腳的足底表面施加恒定的輻射熱源。抽回后腳的時間(亦即動物移動后腳之前的加熱時間期)，或稱為熱閾值或潛伏期，即可決定動物后腳對熱的敏感性。
若化合物使后腳抽回的時間期增加達(dá)統(tǒng)計顯著性時(亦即出現(xiàn)反應(yīng)的熱閾值或潛伏期加長)，則該化合物可降低熱痛覺過敏。試驗化合物是于疼痛發(fā)作之前或之后投藥。當(dāng)試驗化合物在疼痛發(fā)作之后投藥時，則在投藥后10分鐘至3小時進(jìn)行試驗。
B.疼痛模式可采用下述任一種方法誘發(fā)疼痛，以測定化合物的止痛效力。一般而言，采用雄性SD大老鼠及下述至少一種模式時，本發(fā)明所提供的化合物通過上述至少一種試驗方法導(dǎo)致疼痛于統(tǒng)計上顯著降低。
急性發(fā)炎疼痛模式急性發(fā)炎疼痛基本上是依Field等人的(1997)Br.J.Pharmacol.121(8)1513-1522中的角叉菜膠模式所誘發(fā)。取100至200μl的1至2％角叉菜膠溶液注射大老鼠后腳中。注射后3至4小時，依上述方法測定動物對熱及機(jī)械性刺激的敏感性。在試驗前或注射角叉菜膠之前，對動物投與試驗化合物(0.01至50mg/kg)。化合物可口服或任何非口服、或局部投藥至腳部。在此模式中解除疼痛的化合物可使機(jī)械性異常疼痛與/或熱痛覺過敏在統(tǒng)計上顯著降低。
慢性發(fā)炎疼痛模式慢性發(fā)炎疼痛是使用下述其中一種方法所誘發(fā)1.基本上是依Bertorelli等人的(1999)Br.J.Pharmacol.128(6)1252-1258，及Stein等人的(1998)Pharmacol.Biochem.Behav.31(2)455-51所述，取200μl完全弗洛伊德氏輔劑(Complete Freund′sAdjuvant)(0.1mg熱殺死并干燥的結(jié)核菌(M.Tuberculosis))注射至大老鼠后腳中100μl注入足背，100μl注入足底表面。
2.基本上是依Abbadie等人的(1994)J Neurosci.14(10)5865-5871所述，在大老鼠的脛骨-跗骨關(guān)節(jié)上注射150μlCFA(1.5mg)。
任一方法中，在即將注射CFA之前，先獲得各試驗動物后腳對機(jī)械及熱刺激的個別敏感度底線注射CFA后，依上述測試大老鼠的熱痛覺過敏、機(jī)械性異常疼痛與機(jī)械性痛覺過敏。為了確使其發(fā)展出癥狀，在注射CFA后5、6與7天時才開始進(jìn)行大老鼠試驗。第7天時，以試驗化合物、嗎啡或媒劑處理動物。以口服劑量為1至5mg/kg的嗎啡作為合適的陽性對照組。典型采用的試驗化合物劑量為0.01至50mg/kg。化合物可在試驗前呈單一劑量投藥，或在試驗前每天投藥1、2或3次，進(jìn)行數(shù)天。藥物可口服或任何非口服、或局部投藥給動物。
結(jié)果如百分比最大值可能效力(Percent Maximum PotentialEfficacy，MPE)表示。0％MPE的定義為媒劑的止痛效力，100％MPE的定義為動物恢復(fù)注射CFA前的底線敏感度。在此模式中解除疼痛的化合物所得到的MPE為至少30％。
慢性神經(jīng)病變性疼痛模式慢性神經(jīng)病變性疼痛的誘發(fā)基本上是依Bennett與Xie的(1988)Pain 3387-107所述，采用慢性收縮傷害(CCI)處理大老鼠坐骨神經(jīng)。麻醉大老鼠(例如經(jīng)腹膜內(nèi)使用劑量50至65mg/kg的戊巴比妥及依需要增加其它劑量)。將各后腳側(cè)面刮干凈及消毒。采用無菌技術(shù)，切開后腳側(cè)面中股。將股二頭肌切成鈍端，曝露出坐骨神經(jīng)。在每只動物的其中一只后腳上，依約1至2毫米的間隔，將四條結(jié)扎線松弛地結(jié)扎于坐骨神經(jīng)周圍。另一只腳的坐骨神經(jīng)則沒有結(jié)扎且不處理。隨后蓋上肌肉，使用傷口夾或縫合線縫合皮膚。依上述分析大老鼠的機(jī)械性異常疼痛、機(jī)械性痛覺過敏與熱痛覺過敏。
當(dāng)化合物在此模式中，在即將試驗前呈單一劑量投藥，或在試驗前每天投藥1、2或3次，進(jìn)行數(shù)天(0.01至50mg/kg，口服、非口服或局部投藥)時，該化合物可在統(tǒng)計上顯著降低機(jī)械性異常疼痛、機(jī)械性痛覺過敏與/或熱痛覺過敏。
權(quán)利要求
1.一種如下面通式的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式 其中W、Y和Z獨立地為N或CR1；R1在每種情況下獨立地選自氫、鹵素、氰基、氨基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或鹵代C1-C6烷氧基；Ar1和Ar2獨立地選自5-至10-元芳族碳環(huán)與雜環(huán)，其中每一個經(jīng)0至3個取代基取代，所述取代基獨立地選自鹵素、氰基、硝基或通式為LRa的基團(tuán)；L在每種情況下獨立地選自單一共價鍵、O、C(＝O)、OC(＝O)，C(＝O)O、O-C(＝O)O、S(O)m、N(Rx)、C(＝O)N(Rx)-、N(Rx)C(＝O)、N(Rx)S(O)m、S(O)mN(Rx)或N[S(O)mRx]S(O)m；其中m在每種情況下獨立地選自0、1或2；而Rx在每種情況下獨立地選自氫或C1-C8烷基；及Ra在每種情況下獨立地選自(i)氫；及(ii)C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、鹵代C1-C8烷基、C2-C8烷基醚、單-與二-(C1-C8烷基)氨基、及(3-至10-元雜環(huán))C0-C4烷基，其中每一個經(jīng)0至6個取代基取代，所述取代基獨立地選自(a)羥基、鹵素、氨基、氨基羰基、氰基、硝基、酮基或COOH；及(b)C1-C8烷基、C1-C8烯基、C1-C8炔基、C1-C8烷氧基、C1-C8烷硫基、C1-C8烷基醚、C1-C8烷?；1-C8烷酮、C1-C8烷酰基氧基、C1-C8烷氧基羰基、羥基C1-C8烷基、鹵代C1-C8烷基、氰基C1-C8烷基、苯基C0-C8烷基、單-與二-(C1-C6烷基)氨基C0-C8烷基、C1-C8烷基磺?；?、C1-C8烷基磺酰氨基或(5-至7-元雜環(huán))C0-C8烷基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，Ar2為苯基、吡啶基或嘧啶基，其中每一個經(jīng)0至2個取代基取代，所述取代基獨立地選自鹵素、氰基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵代C1-C6烷氧基、C1-C6烷基磺酰基或(C1-C6烷基磺酰氨基)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，Ar2為苯基或吡啶基，并經(jīng)1或2個取代基取代，所述取代基獨立地選自鹵素、C1-C4烷基或鹵代C1-C4烷基。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，Ar2在環(huán)的連接點的對位具有一個取代基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，Ar1為苯基或吡啶基，經(jīng)1或2個取代基取代，所述取代基獨立地選自鹵素、氰基、COOH、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵代C1-C6烷氧基、C1-C6烷基磺酰基或單-或二-(C1-C6烷基)磺酰氨基。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，Ar1為2-吡啶基，經(jīng)1或2個取代基取代，所述取代基獨立地選自鹵素、C1-C4烷基或鹵代C1-C4烷基。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，Ar1為3-甲基-吡啶-2-基、3-氯-吡啶-2-基或3-三氟甲基-啶啶-2-基。
8.如權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，W為CH；Y與Z獨立地為N或CH。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，W、Y與Z各為CH。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，Ar1為苯基或2-吡啶基，經(jīng)1或2個取代基取代，所述取代基獨立地選自鹵素、氰基、C1-C4烷基或鹵代C1-C4烷基；Ar2為苯基或吡啶基，經(jīng)1或2個取代基取代，所述取代基獨立地選自鹵素、氰基、C1-C4烷基、鹵代C1-C4烷基、C1-C6烷基磺?；騿?或二-(C1-C6烷基)磺酰氨基。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，所述化合物具有通式為 其中A為N或CH，并且每一個Rb獨立地為鹵素、氰基、硝基或LRa。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，所述化合物選自(4-叔丁基-苯基)-[1，1-二酮基-6-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-1λ6-苯并[d]異噻唑-3-基]-胺；[1，1-二酮基-6-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-1λ6-苯并[d]異噻唑-3-基]-(4-異丙基-苯基)-胺；[1，1-二酮基-6-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-1λ6-苯并[d]異噻唑-3-基]-[4-(1，2，2，2-四氟-1-三氟甲基-乙基)-苯基]-胺；[1，1-二酮基-6-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-1λ6-苯并[d]異噻唑-3-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺；或[1，1-二酮基-6-(3-三氟甲基-苯基)-1H-1λ6-苯并[d]異噻唑-3-基]-(4-叔丁基-苯基)-胺。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，所述化合物在體外辣椒素受體促效作用試驗中沒有顯示可檢測的促效劑活性。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，所述化合物在辣椒素受體鈣離子移動試驗中具有1微摩爾或更小的IC50值。
15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，所述化合物在辣椒素受體鈣離子移動試驗中具有100納摩爾或更小的IC50值。
16.一種藥學(xué)組合物，所述組合物包括如權(quán)利要求1所述的至少一種化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，并與生理上可接受的載劑或賦形劑結(jié)合。
17.一種降低細(xì)胞辣椒素受體鈣離子傳導(dǎo)的方法，所述方法包括將如權(quán)利要求1所述的至少一種化合物或其藥學(xué)上可接受的形式與表達(dá)辣椒素受體的細(xì)胞接觸，從而降低辣椒素受體的鈣離子傳導(dǎo)。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述細(xì)胞在動物體內(nèi)接觸。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中，所述細(xì)胞為神經(jīng)細(xì)胞。
20.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中，所述細(xì)胞為尿道上皮細(xì)胞。
21.權(quán)利要求18所述的方法，其中，在接觸期間，所述化合物存在于動物的體液中。
22.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中，所述化合物以1微摩爾或更小的濃度存在于動物血液中。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中，所述化合物是以500納摩爾或更小的濃度存在于動物血液中。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述化合物是以100納摩爾或更小的濃度存在于動物血液中。
25.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中，所述動物為人類。
26.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述化合物是以口服形式給藥。
27.一種體外抑制類香草醇配位體與辣椒素受體結(jié)合的方法，所述方法包括在足以可檢測地抑制類香草醇配位體與辣椒素受體結(jié)合的條件與用量下，將根據(jù)權(quán)利要求1所述的至少一種化合物或其藥學(xué)上可接受的形式與辣椒素受體接觸。
28.一種在患者體內(nèi)抑制類香草醇配位體與辣椒素受體結(jié)合的方法，所述方法包括在足以可檢測地抑制類香草醇配位體與表達(dá)克隆的辣椒素受體的細(xì)胞在體外結(jié)合的用量下，將根據(jù)權(quán)利要求1所述的至少一種化合物或其藥學(xué)上可接受的形式與表達(dá)辣椒素受體的細(xì)胞接觸，從而抑制病患體內(nèi)類香草醇配位體與辣椒素受體的結(jié)合。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中，所述患者為人類。
30.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中，所述化合物是以1微摩爾或更小的濃度存在于病患血液中。
31.一種治療患者對辣椒素受體調(diào)節(jié)敏感的癥狀的方法，所述方法包括向患者給藥辣椒素受體調(diào)節(jié)量的如權(quán)利要求1所述的至少一種化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，從而緩解患者癥狀。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中，所述患者患有(i)暴露于辣椒素，(ii)由于暴露在熱下所引起的燒傷和刺激，(iii)由于暴露于光下所引起的燒傷和刺激，(iv)由于暴露在催淚瓦斯、空氣污染物或辣椒噴霧劑下所引起的燒傷、支氣管阻塞或刺激，或(v)由于暴露在酸下所引起的燒傷和刺激。
33.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中，所述癥狀為氣喘或慢性阻塞性肺疾病。
34.一種治療病患疼痛的方法，所述方法包括向患者給藥辣椒素受體調(diào)節(jié)量的如權(quán)利要求1所述的至少一種化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，從而緩解病患疼痛。
35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中，所述化合物是以1微摩爾或更小的濃度存在于病患血液中。
36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中，所述化合物是以500納摩爾或更小的濃度存在于病患血液中。
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中，所述化合物是以100納摩爾或更小的濃度存在于病患血液中。
38.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中，所述患者患有神經(jīng)病變性疼痛。
39.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中，所述疼痛與選自下列的病癥相關(guān)乳房切除后疼痛癥候群、殘肢痛、幻覺肢體痛、口腔神經(jīng)痛、牙痛、帶狀疹后神經(jīng)痛、糖尿病神經(jīng)病變、反射性交感神經(jīng)失養(yǎng)癥、三叉神經(jīng)痛、骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、纖維肌痛、格巴兩氏癥候群、感覺異常性股痛、口腔灼熱癥候群、兩側(cè)性末稍神經(jīng)病變、灼熱痛、神經(jīng)炎、神經(jīng)細(xì)胞炎、神經(jīng)痛、與AIDS相關(guān)的神經(jīng)病變、與MS相關(guān)的神經(jīng)病變、及與脊椎神經(jīng)受傷相關(guān)的疼痛、與手術(shù)相關(guān)的疼痛、肌肉與骨骼疼痛、背痛、頭痛、偏頭痛、心絞痛、產(chǎn)痛、庤痛、消化不良痛、恰可氏疼痛癥、腸氣疼痛、經(jīng)痛、癌癥、毒液接觸、炎性腸疾和/或外傷。
40.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中，所述患者為人類。
41.一種治療患者癢癥的方法，所述方法包括向患者給藥辣椒素受體調(diào)節(jié)量的如權(quán)利要求1所述的至少一種化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，從而緩解患者癢癥。
42.一種治療患者咳嗽或打嗝的方法，所述方法包括向患者給藥辣椒素受體調(diào)節(jié)量的如權(quán)利要求1所述的至少一種化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，從而緩解患者咳嗽或打嗝。
43.一種治療患者尿失禁或膀胱過動的方法，所述方法包括向患者給藥辣椒素受體調(diào)節(jié)量的如權(quán)利要求1所述的至少一種化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，從而緩解患者的尿失禁或膀胱過動。
44.一種促進(jìn)肥胖患者減重的方法，所述方法包括向患者給藥辣椒素受體調(diào)節(jié)量的如權(quán)利要求1所述的至少一種化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，從而促進(jìn)肥胖病患減重。
45.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，所述化合物或其藥學(xué)上可接受的形式是經(jīng)放射性標(biāo)記的。
46.一種決定試樣中是否有辣椒素受體存在的方法，所述方法包括下列步驟(a)在允許化合物與辣椒素受體結(jié)合的條件下將如權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式與試樣接觸；及(b)檢測與辣椒素受體結(jié)合的所述化合物的量，進(jìn)而測定試樣中是否有辣椒素受體存在。
47.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中，所述化合物為如權(quán)利要求45所述的放射性標(biāo)記化合物，且其中所述檢測步驟包括下列步驟(i)將未結(jié)合的化合物從結(jié)合的化合物中分離出來；及(ii)檢測試樣中是否有結(jié)合的化合物存在。
48.一種經(jīng)包裝的藥學(xué)制劑，所述制劑包括(a)裝于容器中的如權(quán)利要求16所述的藥學(xué)組合物；及(b)使用所述組合物治療疼痛的說明書。
49.一種經(jīng)包裝的藥學(xué)制劑，所述制劑包括(a)裝于容器中的如權(quán)利要求16所述的藥學(xué)組合物；及(b)使用所述組合物治療咳嗽或打嗝的說明書。
50.一種經(jīng)包裝的藥學(xué)制劑，所述制劑包括(a)裝于容器中的如權(quán)利要求16所述的藥學(xué)組合物；及(b)使用所述組合物治療肥胖的說明書。
51.一種經(jīng)包裝的藥學(xué)制劑，包括(a)裝于容器中的如權(quán)利要求16所述的藥學(xué)組合物；及(b)使用所述組合物治療尿失禁或膀胱過動的說明書。
52.一種根據(jù)權(quán)利要求1至15中任一權(quán)利要求所述的化合物或其藥學(xué)上可接受形式制造用于治療對辣椒素受體調(diào)節(jié)敏感的病癥的藥品的用途。
53.根據(jù)權(quán)利要求52所述的用途，其中，所述病癥為疼痛、氣喘、慢性阻塞性肺疾病、咳嗽、打嗝、肥胖、尿失禁、膀胱過動、暴露于辣椒素下、暴露于熱下所引起的燒傷或刺激、暴露于光下所引起的燒傷或刺激、暴露于催淚瓦斯、空氣污染或辣椒噴劑下所引起的燒傷、支氣管阻塞或刺激，或暴露于酸下所引起的燒傷或刺激。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種如右通式的經(jīng)芳基取代的苯并[d]異噻唑－3－基胺類似物，其中，變量如本發(fā)明所述。這種化合物為可用于體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)特定受體活性的配位體，并且尤其有用于在人類、經(jīng)馴化的陪伴動物及家畜上治療與病理受體活化相關(guān)的病癥。本發(fā)明還涉及藥學(xué)組合物及使用所述化合物治療疾病的方法，及使用所述配位體進(jìn)行受體定位研究的方法。
文檔編號A61K31/425GK1820007SQ200480019726
公開日2006年8月16日 申請日期2004年7月9日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月10日
發(fā)明者C·A·布盧姆, X·鄭 申請人:神經(jīng)能質(zhì)公司