專利名稱：乳清滲透物用于治療代謝綜合征的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及代謝綜合征或2型糖尿病的治療。進(jìn)一步公開的是乳清滲透物用于生產(chǎn)預(yù)防和治療代謝綜合征或2型糖尿病癥狀的飲食品和藥物組合物的用途。
背景技術(shù)：
根據(jù)WHO標(biāo)準(zhǔn)，工業(yè)化國家中63％的所有男性和55％的所有女性的體重過重。此危險(xiǎn)性發(fā)展的原因是碳水化合物和脂肪的熱量營養(yǎng)過度，同時(shí)每天能量釋放卻進(jìn)一步降低。甚至每天能量平衡的非常小的差異在數(shù)年中對(duì)體重將有大的累積效果。每天熱量的攝入高于熱量消耗的0.3％將導(dǎo)致25到55歲美國人9.1kg的體重增加。超重的個(gè)體經(jīng)常顯現(xiàn)代謝綜合征(ReavenGM，Curr.Opin.Lipidol.，1997，8(1)，p.23～27)。
與術(shù)語“代謝綜合征”的使用相關(guān)，保健專家通常提到所謂的“死四重奏”，它由超重(肥胖癥)、高血壓、升高的胰島素水平和脂類代謝紊亂組成。在技術(shù)文獻(xiàn)中，代謝綜合征也稱為第一早期綜合征或“前驅(qū)糖尿病”(“Pschyrembel，Klinisches Wrterbuch”，257thed.(1994)，p.321)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員理解“綜合征”表示復(fù)合癥狀；具有大多數(shù)不一致或未知病因?qū)W和/或發(fā)病機(jī)理的某些臨床特點(diǎn)為特征的一組疾病征兆(癥狀)。
當(dāng)代謝綜合征進(jìn)一步惡化時(shí)通常顯現(xiàn)2型糖尿病。血糖的增加是其最清楚特征。此外，這些疾病增加了繼發(fā)癥如動(dòng)脈硬化的危險(xiǎn)。由與糖尿病相關(guān)的病理變化引起的進(jìn)一步危害健康的風(fēng)險(xiǎn)是眼病、心臟和血管疾病、中風(fēng)、心臟病發(fā)作、腎臟疾病等。
在過去的幾十年中，2型糖尿病的頻發(fā)相當(dāng)大地增加。德國聯(lián)邦統(tǒng)計(jì)局預(yù)測(cè)大約四百萬德國人目前患有該病。然而，其它研究推測(cè)的數(shù)字更高。根據(jù)德國糖尿病協(xié)會(huì)的預(yù)測(cè)，十分之一的德國人將在2006年患2型糖尿病。超重糖尿病患者的血脂水平(膽固醇、甘油三酯)和血壓通常也增加。
與1型糖尿病相反，胰島素的確在2型糖尿病患者的體內(nèi)產(chǎn)生。然而，這些胰島素不能被身體適當(dāng)?shù)夭捎?。胰島素在胰腺中形成，并保證來自食品的葡萄糖進(jìn)入細(xì)胞。當(dāng)將來自食品的葡萄糖提供到身體中，并使血液中的血糖水平上升時(shí)，增加數(shù)量的胰島素將釋放到血液中以將葡萄糖輸送到細(xì)胞，因此引起血糖水平再次下降。一旦身體不再對(duì)胰島素產(chǎn)生正確反應(yīng)，細(xì)胞變成耐受胰島素的。根據(jù)1999年由Urban&Fischer出版的Roche LexikonMedizin第4版的記載，胰島素抵抗力被定義為胰島素療效的強(qiáng)烈減輕或缺失。存在三種對(duì)出現(xiàn)胰島素抵抗力的解釋。首先，IgG抗體可抑制胰島素的生物效率，因此每日需求增加到大于100IU(國際單位)。其次，可能發(fā)生增加的胰島素酶裂化，或第三，胰島素與其受體的結(jié)合可能降低。結(jié)果是，達(dá)到細(xì)胞的能量不足，而同時(shí)血糖水平又保持較高。這引起胰腺釋放甚至更多的胰島素以期降低血糖水平。胰島素的持續(xù)過度產(chǎn)生導(dǎo)致胰腺中產(chǎn)生胰島素的β細(xì)胞的耗盡，并最終導(dǎo)致胰島素缺乏。
目前，2型糖尿病通常由口服抗糖尿病的藥物進(jìn)行治療。這些藥物包括a)延遲碳水化合物攝入的藥物，如α葡萄糖苷酶抑制劑；b)雙胍——既延遲糖的吸收，也抑制肝中糖新生物的一組物質(zhì)。此外，雙胍可促進(jìn)糖進(jìn)入肌肉組織的吸收，并同時(shí)抑制食欲；c)胰島素增敏劑(glitazones)，在仍然生產(chǎn)胰島素時(shí)促進(jìn)細(xì)胞對(duì)胰島素的敏感性——因此有效地降低血糖水平；d)新格列萘類降糖藥(glinides)由特殊的機(jī)理通過刺激從胰腺的β細(xì)胞的短期胰島素釋放調(diào)節(jié)進(jìn)餐之后的血糖，e)磺酰脲類，它降低血糖的閾值，從該閾值開始胰腺的β細(xì)胞釋放胰島素。
除口服抗糖尿病的藥物以外，可能必須將胰島素提供給患者。在此，進(jìn)行針對(duì)患者需要的個(gè)性化形式的治療。
代謝綜合征的治療基本依賴通過改變患者的飲食習(xí)慣和做更多運(yùn)動(dòng)而使體重減輕。然而，通常必須用另外的藥物以降低血壓、血糖和血脂。在美國，由上述治療形式產(chǎn)生的直接支出的費(fèi)用和由生產(chǎn)率的損失導(dǎo)致的間接費(fèi)用使每年發(fā)生的費(fèi)用總計(jì)為980億美元——并且此數(shù)量仍在增加。
因此必須提供代謝綜合征或2型糖尿病預(yù)防和治療的措施和方式。此外，還需要防止或延緩癥狀惡化以及緩解或治愈它們的措施。特別地，需要代謝綜合征的改進(jìn)治療以抵抗其進(jìn)一步發(fā)展成2型糖尿病。
在如下內(nèi)容中，術(shù)語“防止”表示防止癥狀或疾病的發(fā)展。術(shù)語“治療”在此表示用于疾病癥狀的改進(jìn)、疾病進(jìn)展的延緩、疾病的退化或疾病癥狀的緩解的每種治療形式。


以下附圖顯示采用甜乳清滲透物用于測(cè)定與代謝綜合征或糖尿病癥狀有關(guān)的不同參數(shù)的動(dòng)物試驗(yàn)的結(jié)果。
圖1顯示在采用甜乳清滲透物(SMP)和其對(duì)照物治療的動(dòng)物中在6周觀察期內(nèi)食物和飲水的攝入。
圖2顯示在采用甜乳清滲透物(SMP)和其對(duì)照物治療的動(dòng)物中在觀察期內(nèi)體重的增長和血糖曲線。
圖3(a)顯示在采用或不采用SMP的治療開始之前、治療3周之后和治療6周之后，試驗(yàn)動(dòng)物的血液中非酯化脂肪酸(NEFA)和胰島素的濃度。
圖3(b)顯示在采用或不采用SMP的治療開始之前、3周之后和6周之后，試驗(yàn)動(dòng)物的血液中總膽固醇和HDL膽固醇的濃度。
圖3(c)顯示在采用或不采用SMP的治療開始之前、3周之后和6周之后，試驗(yàn)動(dòng)物的血液中LDL膽固醇和甘油三酯的濃度。
圖3(d)顯示在采用或不采用SMP的治療開始之前、3周之后和6周之后，試驗(yàn)動(dòng)物的血液中C反應(yīng)性蛋白的濃度。
圖3(e)顯示當(dāng)采用或不采用SMP治療時(shí)在6周的治療期間內(nèi)試驗(yàn)動(dòng)物的白血球數(shù)目。
圖4(a)顯示在治療開始之前口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(oGTT)中的血糖曲線和葡萄糖過量面積。
圖4(b)顯示在治療開始之前oGTT中的血清胰島素濃度曲線和胰島素過量面積。
圖5(a)顯示在3周治療之后oGTT中的血糖曲線和葡萄糖過量面積。
圖5(b)顯示在3周治療之后oGTT中的血清胰島素濃度曲線和葡萄糖過量面積。
圖6(a)顯示在6周治療之后oGTT中的血糖曲線和葡萄糖過量面積。
圖6(b)顯示在6周治療之后oGTT中的血清胰島素濃度曲線和葡萄糖過量面積。
圖7顯示在治療開始之前血糖和乳酸鹽的晝間情況。
圖8顯示在6周治療之后血糖和乳酸鹽的晝間情況。
具體實(shí)施例方式
令人驚奇地發(fā)現(xiàn)乳清滲透物對(duì)公認(rèn)為代謝綜合征和2型糖尿病模型的動(dòng)物的給藥導(dǎo)致防止葡萄糖不耐性和胰島素抵抗力，并導(dǎo)致血清中甘油三酯濃度的降低。
因此，根據(jù)本發(fā)明，提供包括乳清滲透物的藥物組合物。此藥物組合物用于哺乳動(dòng)物，優(yōu)選用于人類以預(yù)防、治療或防止代謝綜合征或2型糖尿病以及由其引發(fā)的繼發(fā)癥中的高甘油三酯血癥、葡萄糖不耐性和胰島素抵抗力。
伴隨代謝綜合征或糖尿病的繼發(fā)癥的例子是血管疾病、冠狀動(dòng)脈功能不全、動(dòng)脈阻塞性疾病、心肌梗塞、黃瘤、腹部不適、脾肝大、胰腺炎、視網(wǎng)膜脂血癥和/或中風(fēng)。
乳清在從奶生產(chǎn)乳酪的過程中累積。根據(jù)本發(fā)明，牛奶、山羊奶、綿羊奶、水牛奶和駱駝奶可用于在沉淀的奶中在提供酪蛋白之后提取乳清。依賴于提取的類型，產(chǎn)生甜乳清和酸乳清，其中通過凝乳酶的酪蛋白的酶沉淀之后得到的乳清為甜乳清，通過酸沉淀分離酪蛋白之后提取的為酸乳清。在甜和酸乳清之間的pH邊界不好定義，通常在5.6～5.9的范圍上下。甜乳清優(yōu)選用于本發(fā)明。
根據(jù)本發(fā)明使用的乳清包含奶的所有水溶性組分，除非這些組分被凝乳酶或酸沉淀。在特定的實(shí)施方案中，使用包含約4.9％乳糖、0.8％蛋白質(zhì)、0.5％礦物質(zhì)、0.2％乳脂和0.2％乳酸的甜乳清。
通過超濾(膜過程，平均孔度25～100千道爾頓)，乳清蛋白可以從乳清中分離。此“脫白的”乳清包括約95％，并可以由噴霧干燥進(jìn)一步加工成粉末。此粉末在此稱為乳清滲透物。在本發(fā)明中，優(yōu)選使用從甜乳清中提取的乳清滲透物。其中平均包含的組分是84.9％乳糖、4.5％蛋白質(zhì)、0.1％脂肪和7.5％礦物質(zhì)。剩余部分是未分離的水。依賴于生產(chǎn)方式，這些量是平均值，具體值可變化5～10％(相對(duì)的)。乳清滲透物可以就這樣使用，或者在乳糖(部分)水解之后使用。乳清的優(yōu)選給藥形式是作為糖漿或粉劑，但其它給藥形式也是可能的。
根據(jù)本發(fā)明可使用水解的以及部分水解的甜乳清滲透物。
在本發(fā)明的進(jìn)一步實(shí)施方案中，包括乳清滲透物的藥物組合物的微囊化被證明是特別有利的。微囊化可按照尤其在專利未決公開出版物DE 198 54 749A1和DE 100 08 880 A1及實(shí)用新型DE 296 23 285 U1中所述的進(jìn)行。將化合物牢固地封閉在，例如由多糖，如藻酸鹽組成的包衣中?？上M分如淀粉可以加入包衣中，使得可能不可消化的覆蓋物質(zhì)不能阻止化合物的釋放，而使由有機(jī)體的營養(yǎng)利用不可能。微囊化的藥物組合物對(duì)腸道不同區(qū)域的輸送可因此由熟練選擇和/或結(jié)合可溶的和不溶的包衣組分而進(jìn)行靶向控制。在腸中的逐步釋放，如在小腸中釋放50～80wt％、優(yōu)選60～70wt％、特別地62.5wt％，和在大腸中釋放20～50wt％、優(yōu)選30～40wt％、特別地62.5wt％，是可能的定向釋放類型?？梢酝ㄟ^保護(hù)囊化的化合物免受例如環(huán)境的影響而延長耐久性從而獲得進(jìn)一步有利的效果。
術(shù)語甜乳清或甜乳清滲透物的使用也包括可以從其中提取的所有物質(zhì)。這些物質(zhì)是蛋白質(zhì)、糖和它們的組分，以及礦物質(zhì)。
此外，優(yōu)選使用部分或完全除去乳糖的甜乳清滲透物。該甜乳清滲透物對(duì)于本發(fā)明的目的稱為乳糖降低的甜乳清滲透物。乳糖降低的甜乳清滲透物通常包含約85％乳糖，然而，該乳糖可以提取出來用于進(jìn)一步的用途。因此，乳糖降低的甜乳清滲透物中保留包含0.1～80％、優(yōu)選1～50％、更優(yōu)選5～25％的乳糖。特別優(yōu)選的乳糖降低的甜乳清滲透物仍然包含10～20％乳糖。
本發(fā)明進(jìn)一步提供具有如下效果的制劑，也如在如下實(shí)施例中所示-降低血清胰島素水平，-防止葡萄糖不耐性的發(fā)展，-防止胰島素抵抗力，-降低胰島的體積，-降低胰腺中β細(xì)胞的體積，-防止胰管上皮細(xì)胞中β細(xì)胞的新生，-防止高胰島素血癥的發(fā)展，-防止胰腺炎癥(胰腺炎)或小島和/或β細(xì)胞的選擇性炎癥(胰島炎)。
進(jìn)一步的目的是乳清滲透物用于2型糖尿病的預(yù)防和/或治療，特別地用于延緩疾病的進(jìn)展，優(yōu)選用于改進(jìn)其病理學(xué)的用途。
根據(jù)本發(fā)明令人驚奇地發(fā)現(xiàn)對(duì)于高胰島素血癥存在形態(tài)學(xué)關(guān)聯(lián)。這意味著β細(xì)胞體積增加，在外分泌的胰腺中出現(xiàn)β細(xì)胞的小簇，在胰管的上皮細(xì)胞中檢測(cè)到β細(xì)胞(新生的指示)和β細(xì)胞有絲分裂速率增加。此形態(tài)學(xué)關(guān)聯(lián)暗示對(duì)此器官需要的增加，它由細(xì)胞的增殖而得到補(bǔ)償，例如以利用過量的可代謝的能量。
此外，根據(jù)本發(fā)明不可預(yù)料地發(fā)現(xiàn)乳清滲透物的給藥導(dǎo)致β細(xì)胞體積增加的防止，和這些物質(zhì)導(dǎo)致胰島體積的降低。因此對(duì)于此目的用本發(fā)明的藥物組合物和制劑給藥是優(yōu)選的。
根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選乳清滲透物的使用導(dǎo)致血脂值的下降，特別地導(dǎo)致甘油三酯濃度的下降。
進(jìn)一步令人驚奇地發(fā)現(xiàn)當(dāng)乳清滲透物單獨(dú)使用或與進(jìn)一步有效的物質(zhì)結(jié)合使用時(shí)，采用乳清滲透物的治療可部分地顯著降低血清胰島素水平。這些有效物質(zhì)是α葡萄糖苷酶抑制劑、雙胍、胰島素增敏劑(glitazones)、磺酰脲類、新格列萘類降糖藥(glinides)或胰島素。乳清滲透物的使用以及除乳清滲透物以外進(jìn)一步包含活性物質(zhì)的制劑的使用也在本發(fā)明的范圍內(nèi)提供，只要進(jìn)一步有效的物質(zhì)不對(duì)乳清滲透物的效果具有負(fù)面影響。
在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，用于代謝綜合征或2型糖尿病預(yù)防或治療的乳清滲透物從牛、山羊、綿羊、水牛、駱駝或其它產(chǎn)奶動(dòng)物的奶中提取。
特別優(yōu)選的實(shí)施方案涉及形式為食品增補(bǔ)劑的包含乳清滲透物的本發(fā)明組合物或制劑的存在。在此也優(yōu)選使用(部分)水解的甜乳清滲透物。
在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，乳清滲透物用于生產(chǎn)包括合適的藥物可接受的添加劑的飲食和/或濃縮食物。添加劑的例子是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的著色劑、香味增強(qiáng)劑、防腐劑、結(jié)合劑或填充物。
根據(jù)本發(fā)明，上述物質(zhì)也可用于生產(chǎn)食物，例如飲食食物和/或食品增補(bǔ)劑，通過這些，能夠防止代謝綜合征或2型糖尿病的進(jìn)展和/或減輕或治愈這些適應(yīng)癥的癥狀。這樣食物的例子是富含本發(fā)明組合物的乳制品或果汁，然而，也可以是其它食物。
在借助于含乳清滲透物的組合物或制劑，治療和預(yù)防代謝綜合征和2型糖尿病癥狀中，劑量隨個(gè)體不同而變化，其中適當(dāng)?shù)那闆r下，根據(jù)被治療人的疾病征候、年齡、體重和性別而變化。
根據(jù)本發(fā)明含乳清滲透物的組合物或制劑在飲食和/或濃縮食物中的濃度可依賴于選擇的合適添加劑和/或載體而不同，特別要考慮最終產(chǎn)品的感官特性。
此外，根據(jù)本發(fā)明的組合物可以包含在用于代謝綜合征或2型糖尿病癥狀的預(yù)防或治療的結(jié)合制劑中。特別優(yōu)選除本發(fā)明的組合物以外，結(jié)合制劑包含一種或多種如下物質(zhì)α葡萄糖苷酶抑制劑、雙胍、胰島素增敏劑(glitazones)、新格列萘類降糖藥(glinides)和磺酰脲類。結(jié)合制劑的給藥也可適于患者個(gè)體的需要。根據(jù)本發(fā)明，這些結(jié)合制劑可以在兩個(gè)或多個(gè)單獨(dú)的劑量中分別，或一起給藥。
此外，用于生產(chǎn)藥物的本發(fā)明的組合物的用途是特別優(yōu)選的，優(yōu)選用于緩解或防止代謝綜合征癥狀，治療或防止2型糖尿病的發(fā)展，預(yù)防其進(jìn)展以及可從代謝綜合征或糖尿病發(fā)展的繼發(fā)癥。
本發(fā)明的結(jié)合制劑或藥物用于代謝綜合征或2型糖尿病癥狀的緩解/防止的用途特別涉及在人類中的應(yīng)用，但其它哺乳動(dòng)物如狗、貓、馬、綿羊、奶牛或豬等的治療也包括在本發(fā)明的范圍中。
本發(fā)明的組合物和制劑特別用于控制/防止胰腺中β細(xì)胞的生長、胰腺中β細(xì)胞的增殖、β-細(xì)胞和/或小島體積的增加或哺乳動(dòng)物特別是人類的胰腺炎。
此外，特別優(yōu)選本發(fā)明的組合物或制劑導(dǎo)致血清胰島素水平降低的用途。
進(jìn)一步優(yōu)選由于本發(fā)明組合物或制劑的給藥，防止葡萄糖不耐性的發(fā)展，或緩和葡萄糖不耐性。
此外，優(yōu)選本發(fā)明組合物或制劑的給藥導(dǎo)致早晨高血糖癥的延遲增加。
此外，特別優(yōu)選本發(fā)明組合物或制劑的消耗導(dǎo)致血脂值的下降，特別是甘油三酯濃度的下降，然而，對(duì)其它血脂的影響也包括在本發(fā)明的保護(hù)范圍中。
根據(jù)本發(fā)明，不將乳酸鈣加入包括乳清滲透物的藥物組合物或制劑中。
當(dāng)在血清中存在甘油三酯的升高的含量(＞160mg/100ml)時(shí)，這稱為高甘油三酯血癥(高脂血癥)。這狀況可在動(dòng)脈疾病和冠心病的發(fā)展中起作用(Vega和Grundy，Adv.Exp.Med.243，311(1989))。此外，嚴(yán)重的高甘油三酯血癥(＞1.000mg/dl)與乳糜微粒血癥相關(guān)，并引起急性胰腺炎(參見K.Soergel，急性胰腺炎，胃腸疾病91，第3版(Sleisenger，M.H.和Fordtran，J.S.，eds.)，W.B.Saunders Company，費(fèi)城，Pa.，1983，p.1462-1485；和Brown，M.S.和Goldstein，J.L.，用于高脂蛋白血癥治療的藥物，Goodman and Gillman′s，治療學(xué)的藥理學(xué)基礎(chǔ)34，第7版，(Macmillan Publishing Co.，紐約，1985，p.827-845))。乳糜微粒的嚴(yán)重增加直接引起胰腺炎，這可以通過降低甘油三酯而被防止(美國Department of Health and Human Services，NIH-Publication No.89-2925，p.74-77，1989年1月，“專家組對(duì)成人高血液膽固醇的檢測(cè)、評(píng)價(jià)和治療的報(bào)告”)。另外顯示可以通過降低血漿中甘油三酯含量降低冠心病患者中風(fēng)的危險(xiǎn)(D.Tanne，等人；Circulation 2001，104，2892-2897)。此外，與非糖尿病患者相比，2型糖尿病患者的預(yù)期壽命縮短三分之一。這可能與升高的甘油三酯水平直接相關(guān)(Diabety Care；2001，24，1335-1341)。因此需要作為代謝綜合征或2型糖尿病癥狀治療的一部分，也提供在高甘油三酯血癥的患者中降低血漿甘油三酯的過程。
本發(fā)明組合物或制劑的口服給藥是特別優(yōu)選，然而，其它給藥方式的可能性也包括在根據(jù)本發(fā)明的保護(hù)范圍中，如胃腸外、靜脈內(nèi)給藥等。
在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，給予根據(jù)本發(fā)明的組合物或制劑的組分以防止代謝綜合征或2型糖尿病的癥狀，或用以減輕或治愈這些疾病。
乳清滲透物在藥物或食品增補(bǔ)劑制劑中的濃度為0.01％～99.99％，優(yōu)選0.1～99.9％，更優(yōu)選1～99％，特別優(yōu)選1～80％，甚至更優(yōu)選10～80％，最優(yōu)選10～50％，相對(duì)于食品增補(bǔ)劑和/或藥物制劑的總重量。
根據(jù)本發(fā)明的食品增補(bǔ)劑或根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑可以每天一次或幾次如在早晨、中午、晚上，與每餐一起、在餐前或餐后服用或給予，然而，也可以設(shè)想其它給藥計(jì)劃。
現(xiàn)在參考試驗(yàn)解釋本發(fā)明，該試驗(yàn)并不進(jìn)一步限制本發(fā)明的范圍。
試驗(yàn)部分動(dòng)物模型/測(cè)試系統(tǒng)Zucker鼠用作研究對(duì)有限葡萄糖耐量，分布的脂類代謝，對(duì)心血管變化和炎癥參數(shù)的危險(xiǎn)標(biāo)準(zhǔn)的影響的動(dòng)物模型。
Zucker鼠是在馬薩諸塞州斯托(Stow)的比較病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室中Theodore和Lois Zucker的13M品系中自發(fā)突變的產(chǎn)物(表型fa＝脂肪過多)，它導(dǎo)致所謂的“肥胖”或“脂肪過多”表型。兩個(gè)術(shù)語表征超重和肥胖的鼠。
Zucker鼠在早期階段顯現(xiàn)攝食過多，導(dǎo)致體重的快速增加(超重)。在5～6周大時(shí)，它已經(jīng)顯現(xiàn)高甘油三酯血癥。高脂血癥。胰島素抵抗力，伴隨著葡萄糖不耐性和血胰島素過多癥的顯現(xiàn)。在12周大時(shí)，葡萄糖耐量紊亂變得明顯，高血糖癥可顯現(xiàn)，因此相似于2型糖尿病的臨床癥狀的表現(xiàn)。在此動(dòng)物模型中，2型糖尿病伴隨有胰島的組織病理變化。此外，心血管系統(tǒng)的變化也在此動(dòng)物模型中被報(bào)導(dǎo)。因此，血壓的增加在5到7個(gè)月大的動(dòng)物中被檢測(cè)到(Yoshioka，Metabolism，Vol.42(1)，1993，p.75-80)。
乳清滲透物用于控制代謝綜合征的影響的研究用所謂的WOK.W鼠進(jìn)行。WOK.W鼠是遺傳多源有性生殖紊亂和顯現(xiàn)幾乎代謝綜合征所有癥狀的動(dòng)物模型，雄性動(dòng)物以更顯著的方式表現(xiàn)這些癥狀。WOK.W鼠的具體特性描述在，例如-P.Kovacs等人，Ann.N.Y.Acad.Sci.，1997，827，94-99；-P.Kovacs等人，Biochem.Biophsy.Res.Commun.，2000，660-665；-J.van den Brandt等人，Int.J.Obesity，2000，24，1618-1622；-J.van den Brandt等人，Metabolism 49，2000，1140-1144。
當(dāng)研究代謝綜合征時(shí)，此模型動(dòng)物適于以介入研究形式進(jìn)行外因調(diào)節(jié)，特別地由于初步研究顯示發(fā)病率可以由例如富含脂肪的營養(yǎng)物而變化。
動(dòng)物維持將動(dòng)物在12:12小時(shí)光照/黑暗循環(huán)(光照從6:00a.m.到6:00p.m.)下養(yǎng)在半屏障條件下。為它們提供永久可能的食物(RM標(biāo)準(zhǔn)食物，Sniff，Soest，德國)和飲用水的途徑。
表1各物質(zhì)的飼喂量

物質(zhì)的施用將物質(zhì)溶于酸化飲用水(25g/l)，并隨意地提供給動(dòng)物以代替沒有補(bǔ)充劑的酸化飲用水。對(duì)照組接受純酸化飲用水(pH 2.65)(在試驗(yàn)動(dòng)物維持中，將自來水采用鹽酸酸化以降低病菌)。每天監(jiān)測(cè)飲用的數(shù)量，并使飲用水總是新制備的；分析方法●血糖和乳酸鹽的濃度通過葡萄糖分析器(Glucoseanalyzer)的方法(SuperGL Ambulance，Ruhrtal Labortechnik，德國)測(cè)量。
●免疫反應(yīng)性胰島素(IRI)濃度的測(cè)定通過鼠胰島素-特異性放射免疫測(cè)定法(Linco Research，Inc.；美國)進(jìn)行。
●總膽固醇，HDL膽固醇，LDL膽固醇和甘油三酯的測(cè)定由光度法進(jìn)行。
●C-反應(yīng)性蛋白由濁度法測(cè)定。
●發(fā)生的白血球數(shù)目的測(cè)定通過細(xì)胞計(jì)數(shù)法進(jìn)行。
評(píng)價(jià)方法●在口服葡萄糖耐量試驗(yàn)oGTT中，從葡萄糖給藥之前10分鐘的時(shí)間點(diǎn)開始到給藥后120min的時(shí)間內(nèi)做血糖和胰島素曲線。對(duì)于每個(gè)參數(shù)在其各自的治療時(shí)間表示測(cè)試組的平均曲線。為判斷生理學(xué)上的和治療的效果，對(duì)于血糖和胰島素的相應(yīng)于研究方案的每個(gè)參數(shù)計(jì)算反應(yīng)性和絕對(duì)過量面積(G-AUC和I-AUC從0～120min圖4(a)和(b)，5(a)和(b)，6(a)和(b))。
為此，關(guān)于血糖和胰島素濃度的數(shù)據(jù)依賴于取樣時(shí)間做圖。反應(yīng)性面積按照下面的方法計(jì)算-絕對(duì)面積Fa＝在血糖或胰島素濃度曲線(絕對(duì)AUC，曲線下的面積) 下的面積，依賴于時(shí)間(0～120min)-反應(yīng)性面積 Fr＝Fa-t y0(t＝總試驗(yàn)持續(xù)(反應(yīng)性AUC)時(shí)間，y0＝血糖或胰島素的基礎(chǔ)濃度)計(jì)算的解釋，使用血糖濃度作為例子
采用試驗(yàn)設(shè)計(jì)中規(guī)定的120min的總試驗(yàn)持續(xù)時(shí)間和取樣時(shí)間-10，0，10，20，30，40，60，90，120，從0到120min的絕對(duì)面積計(jì)算如下Fa＝(10y0+20y10+20y20+20y30+30y40+50y60+60y90+30y120)/2Fr＝Fa-120y0測(cè)量單位G-AUC以mmol×min/lI-AUC以ng×min/ml●成對(duì)比較在測(cè)試和對(duì)照狀況之間形成差異，并使用t-檢驗(yàn)測(cè)試該差異釋放異于0(p＜0.05)。
●使用t-檢驗(yàn)的平均值的比較。
●例外的異常測(cè)試根據(jù)“VerfahrensbibliothekVersuchsplanung und-auswertung”，第1卷，柏林1978，Rasch D.等人，p.408。
過程/試驗(yàn)設(shè)計(jì)將Zucker鼠在約14周齡時(shí)移入籠舍，測(cè)試在一周適應(yīng)之后開始。在15周齡時(shí)，將動(dòng)物用涉及葡萄糖和脂類代謝(其中血糖、血清胰島素、膽固醇和甘油三酯的濃度)，葡萄糖耐量(通過口服葡萄糖耐量測(cè)試)以及炎癥標(biāo)記(白血球和C-反應(yīng)性蛋白的數(shù)目)的參數(shù)進(jìn)行初始表征。為此必須的血樣從尾部靜脈取得。然后，開始治療。血糖濃度、體重、白血球數(shù)目和攝食的測(cè)定以一周的間隔連續(xù)進(jìn)行。每日監(jiān)測(cè)飲用水的攝入。在治療2和6周之后，重新測(cè)量葡萄糖和脂類代謝的參數(shù)并測(cè)定葡萄糖耐量。
為測(cè)定葡萄糖耐量，葡萄糖耐量測(cè)試斷食奪之后在晚間進(jìn)行。在此期間，血樣在從葡萄糖施喂(通過胃管)之前10分鐘到葡萄糖給藥(2g/kg)之后120分鐘的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行以測(cè)定血糖(取樣時(shí)間-10、0、10、20、30、40、60、90和120分鐘)和胰島素濃度(取樣時(shí)間0、20、40、60、90和120分鐘)。在治療開始和治療6周之后，得到血糖和乳糖濃度的每日情況(3小時(shí)間隔)。在規(guī)則的43天觀察期終止之后，治療狀態(tài)也在進(jìn)行最終口服葡萄糖耐量測(cè)試之后保持到治療的第62/第63天。通過麻醉劑過劑量的方法處死動(dòng)物。在發(fā)生麻醉之后，將胰腺取出，然后固定并貯存用于在布安液(Bouin’s solution)中用于隨后的組織學(xué)研究。
樣品貯存將所有的血清樣品在冰箱中在-20℃下貯存直到分析。
結(jié)果追蹤研究食物和飲用水的攝入●盡管飲水量在采用SMP治療的動(dòng)物中有輕微增加(圖1)，但每天消耗的熱量數(shù)量在所有的組中相當(dāng)(圖1a)。關(guān)于它們的每天飲食攝入各個(gè)組沒有顯著的區(qū)別(圖1)。在治療的第42天計(jì)算的能量攝入是SMP組87.6±6.6kcal/24hr對(duì)照組87.9±25.5kcal/24hr不能確認(rèn)各組之間的差異。
體重的發(fā)展●治療的各組關(guān)于它們體重的增長沒有不同(圖2)。
血糖和胰島素曲線●在治療開始之前，即在15周齡時(shí)，研究組中動(dòng)物的血糖濃度(圖2)和胰島素濃度(圖3a)是相當(dāng)?shù)?。而?duì)照組在治療開始之后早晨血糖持續(xù)上升，如在此動(dòng)物模型的老化過程所預(yù)期的，這樣的上升在SMP組中很大程度上是不存在的。
●與在治療開始之間的時(shí)間相比(n.s./不顯著)，當(dāng)治療的持續(xù)時(shí)間增加時(shí)，由SMP治療的組中的胰島素濃度(圖3a)下降。胰島素濃度保持在不變的水平(對(duì)照組)。
脂類代謝參數(shù)●非酯化脂肪酸的濃度在觀察期間保持不變。在各治療組之間沒有差異(圖3a)。
●與對(duì)照組相比，膽固醇濃度在觀察期間增加，與SMP組相反(n.s.，圖3b)。
●HDL膽固醇的濃度在觀察期間保持不變(圖3b)。僅在治療開始之前在各組之間存在差異，然而，該差異對(duì)于治療的效果不顯著。
●盡管LDL膽固醇濃度(圖3c)的上升，如可以在對(duì)照組中觀察到的那樣，不能通過SMP治療防止，但證明了SMP組的上升比對(duì)照組少(n.s.)。
●降低甘油三酯濃度的傾向在通過SMP治療的動(dòng)物組中被認(rèn)識(shí)到(圖3c)。
炎癥參數(shù)●炎癥參數(shù)C-反應(yīng)性蛋白(圖3d)和白血球數(shù)目在觀察期間的治療過程中不變。
口服葡萄糖耐量測(cè)試的結(jié)果●在治療之前各組在口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(oGTT)中的血糖和胰島素濃度曲線是相當(dāng)?shù)?圖4a和4b)。
●在3周治療之后，在各治療組之間血糖和胰島素的曲線和過量面積沒有檢測(cè)到顯著的差異(圖5a和b)。
●在6周治療之后，SMP組的GTT中血糖增加相當(dāng)少，并且在120分鐘觀察期后它下降到與對(duì)照組相比顯著低的水平(圖6a和b)。
在6周治療之前和之后GTT的血糖曲線(BG，mmol/l)的分析，平均值±SD(*相對(duì)于對(duì)照組p＜0.05)表2

●在6周治療之后，在GTT中作為葡萄糖過量面積(G-AUC)而被測(cè)量的葡萄糖耐量與對(duì)照組相比在通過SMP治療的組中有顯著的改進(jìn)。盡管對(duì)照組中的G-AUC在觀察期間增加，但G-AUC在治療開始之前與SMP治療組相當(dāng)。
在6周治療之前或之后反應(yīng)性G-AUC 0～120min(mmol×min/l)的評(píng)價(jià)，平均值±SD(相對(duì)于對(duì)照組p＜0.05)表3

表4患者和WOK.W鼠的選擇的參數(shù)的比較

1+++＝非常強(qiáng)烈突出的，2++＝強(qiáng)烈突出的，3+＝存在上表闡明為什么WOK.W鼠是用于人類中代謝綜合征非常合適的動(dòng)物模型。
胰腺形態(tài)測(cè)定將待檢查的胰腺在16周齡時(shí)，即在12周治療時(shí)間之后取出。將胰腺包埋入石蠟中并切割為7μm的厚度的薄片。將每第十個(gè)切片采用蘇木精-曙紅染色(以顯示小島體積和評(píng)價(jià)炎癥)或采用抗胰島素抗體培養(yǎng)(以顯示β細(xì)胞體積)。為評(píng)價(jià)炎癥(胰島炎)，計(jì)數(shù)15個(gè)小島。免疫組織化學(xué)反應(yīng)采用APAAP直觀化(染紅色)。小島細(xì)胞和胰島素形成β細(xì)胞分布的形態(tài)測(cè)定評(píng)價(jià)與外分泌細(xì)胞比較，纖維組織和血管通過計(jì)數(shù)位于制備物頂部的網(wǎng)上的40,000個(gè)點(diǎn)而實(shí)現(xiàn)。每個(gè)組有四只動(dòng)物用于每種情況。
表5胰腺免疫組織化學(xué)檢查的結(jié)果

WOK.W鼠的胰腺形態(tài)測(cè)定顯示不能發(fā)現(xiàn)高胰島素血癥的形態(tài)學(xué)關(guān)聯(lián)(參見上表5)。這自身表現(xiàn)在β細(xì)胞體積的增加，β細(xì)胞小簇在胰腺外分泌部的出現(xiàn)，在胰管上皮細(xì)胞中的檢測(cè)到β細(xì)胞(新生的指示)和β細(xì)胞有絲分裂數(shù)的增加，這有原因地涉及高胰島素血癥的發(fā)展。檢測(cè)到的形態(tài)暗示對(duì)此器官需求的增加(如通過可代謝能量的增加)，這部分由細(xì)胞增殖而被補(bǔ)償。
通過乳清滲透物在飲用水中的施加，在12周治療期之后β細(xì)胞體積的增加被防止或顯著降低。
盡管乳清是非常有效的，在任何被檢查的動(dòng)物中沒有檢測(cè)到小島和/或β細(xì)胞的選擇性炎癥(胰島炎)的出現(xiàn)。
WOK.W鼠中血清胰島素水平的研究在治療的鼠中血清胰島素水平的研究顯示當(dāng)與對(duì)照鼠比較時(shí)，它們?cè)谥委熎陂g顯示血清胰島素水平?jīng)]有增加或僅有較低增加。
表6比治療和未治療的WOK.W同齡鼠的血清胰島素值(ng/ml)。

●在觀察期間，通過SMP的治療防止葡萄糖不耐性的增加。
●口服葡萄糖耐量試驗(yàn)期間的胰島素釋放(測(cè)量為胰島素過量面積；I-AUC)在6周治療之后在通過SMP治療的動(dòng)物組中最高。
●oGTT中的胰島素釋放在SMP治療6周之后被最好的激發(fā)。然而，釋放的胰島素僅在SMP組中導(dǎo)致oGTT中血糖的顯著降低。
表7反應(yīng)性I-AUC 0～120min(ng×min/l)的測(cè)定，平均值±SD(標(biāo)準(zhǔn)偏差)

在6周治療之后，來自SMP組動(dòng)物的胰腺的β細(xì)胞能夠最好地對(duì)葡萄糖的刺激反應(yīng)。此外，該動(dòng)物較少有胰島素抵抗力。
血糖和乳酸鹽的晝間情況●在6周治療之前和之后，血糖的晝間情況顯示在各治療組之間沒有顯著差異(圖7和8)，然而采用SMP治療6周的組的血糖濃度，在一天過程中最低。
●在一些時(shí)間，乳酸鹽的晝間情況顯示在各組之間有顯著差異。然而，乳酸酸中毒可以在任何時(shí)間排除(圖7和8)。將在治療開始之前更高的乳酸鹽濃度解釋為應(yīng)激反應(yīng)，由于在此時(shí)動(dòng)物對(duì)血液取樣的熟習(xí)效果還沒能產(chǎn)生。
權(quán)利要求
1.乳清滲透物在生產(chǎn)預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物代謝綜合征或2型糖尿病或其繼發(fā)癥癥狀的藥物組合物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中癥狀選自葡萄糖不耐性或胰島素抵抗力。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中繼發(fā)癥選自動(dòng)脈硬化、冠狀動(dòng)脈功能不全、動(dòng)脈阻塞性疾病、心肌梗塞、黃瘤、腹部不適、脾肝大、胰腺炎、視網(wǎng)膜脂血癥、中風(fēng)或腎衰竭。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3任意一項(xiàng)所述的用途，其中所述乳清滲透物是甜乳清滲透物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1～4任意一項(xiàng)所述的用途，其中所述乳清滲透物是乳糖降低的乳清滲透物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1～5任意一項(xiàng)所述的用途，其中所述組合物是微囊化的。
7.根據(jù)權(quán)利要求1～6任意一項(xiàng)所述的用途，其中所述組合物作為口服給藥形式形成。
8.根據(jù)權(quán)利要求1～7任意一項(xiàng)所述的用途，其中口服給藥形式是錠劑、散劑、顆料劑、糖漿劑或汁液。
9.根據(jù)權(quán)利要求1～8任意一項(xiàng)所述的用途，其中所述組合物進(jìn)一步是食品的補(bǔ)充物。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中所述食品是飲食食物或食品增補(bǔ)劑。
11.根據(jù)權(quán)利要求1～10任意一項(xiàng)所述的用途，其中組合物進(jìn)一步包括藥物可接受的添加劑和/或載體。
12.根據(jù)權(quán)利要求1～11任意一項(xiàng)所述的用途，其中哺乳動(dòng)物是人類。
13.根據(jù)權(quán)利要求1～12任意一項(xiàng)所述的用途，其中乳清滲透物是水解的。
14.根據(jù)權(quán)利要求1～13任意一項(xiàng)所述的用途，其中乳清滲透物是部分水解的。
全文摘要
本發(fā)明涉及乳清滲透物，優(yōu)選甜乳清滲透物和更優(yōu)選水解的或部分水解的甜乳清滲透物用于生產(chǎn)預(yù)防或治療代謝綜合征、2型糖尿病和繼發(fā)癥癥狀的藥物組合物的用途，所述組合物用于哺乳動(dòng)物。
文檔編號(hào)A61K35/20GK1822879SQ200480019811
公開日2006年8月23日 申請(qǐng)日期2004年7月12日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月10日
發(fā)明者喬布斯特·克洛斯科普, 克里斯丁·蘇瓦達(dá) 申請(qǐng)人:S.K.企業(yè)有限公司