專利名稱：無水檸檬酸二氫銀組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明總體涉及抗微生物組合物。具體而言，本發(fā)明提供了包含無水檸檬酸二氫銀和檸檬酸的組合物、制備該組合物的方法以及使用該固體組合物的抗微生物方法。
背景技術：
抗微生物金屬離子溶液已被用作消毒劑。銀溶液已在冷卻塔、游泳池、醫(yī)院熱水系統(tǒng)、移動式水系統(tǒng)和溫泉池中用作消毒劑。另外，還制得了銀離子溶液用于傷口處理，然而，在所提出方法中使用的銀離子并不穩(wěn)定，且必須生成于傷口附近以將治療劑量遞送至傷口處。
亦已提出了將銀鹽(例如檸檬酸銀鹽)用作抗微生物粉劑(dustingagent)。然而，這些粉劑必須干燥保存，而且一般不能方便地將防腐的有益特性賦予消耗類產(chǎn)品(consumer product)或者將抗微生物效果作用于最終使用者或最終使用者所處環(huán)境。已發(fā)現(xiàn)膠態(tài)銀具有多種用途，包括木材防腐劑；食物、飲料容器以及工業(yè)加工設備的消毒劑；涂料中的殺細菌劑；合成聚合物膜中的殺生物劑；和繃帶中的滅菌劑。
美國專利US 6,197,814(全文納入本申請中)已公開了檸檬酸二氫銀和檸檬酸的含水溶液在多種場合中用作消毒劑。這種檸檬酸二氫銀和檸檬酸的水溶液通過使電流經(jīng)過浸入檸檬酸水溶液中的一對銀電極而制得。它對絕大多種微生物有效，所述微生物包括細菌、病毒和真菌，并且在有效對抗微生物侵染的濃度下對人類環(huán)境中無毒。然而，含水溶液體積龐大且笨重，因此在儲存和運輸方面并不經(jīng)濟。
需要一種儲存和/或運輸經(jīng)濟的檸檬酸二氫銀組合物。為達到其所需儲存空間最小以及運輸重量最小的目的，該組合物應基本無水。該組合物在與水或其他含水溶液混合時，應能夠提供與檸檬酸二氫銀溶液相同的有益的抗微生物效果。本發(fā)明滿足了上述需求，亦提供了相關的優(yōu)點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了包含無水檸檬酸二氫銀和檸檬酸的組合物以及制備所述組合物的方法。該方法包括凍結含水檸檬酸二氫銀的儲液，然后冷凍干燥上述已凍結的儲液以制得無水檸檬酸二氫銀。
本發(fā)明還提供了通過以下方式使用無水檸檬酸二氫銀和檸檬酸的方法將無水檸檬酸二氫銀和檸檬酸與含水稀釋劑混合，以制得抗微生物有效的含水檸檬酸二氫銀溶液。
具體實施例方式
本發(fā)明提供了包含無水檸檬酸二氫銀和檸檬酸的組合物。出人意料的是，已發(fā)現(xiàn)無水檸檬酸二氫銀組合物在一段時間后可復制(bereconstituted)以制備穩(wěn)定的具有有效抗微生物活性的檸檬酸二氫銀溶液。該無水組合物具有儲存簡便、經(jīng)濟的優(yōu)點。還具有比運輸檸檬酸二氫銀的含水溶液更經(jīng)濟的優(yōu)點。由于該無水組合物可用水或其他含水稀釋劑方便地復制，因此該無水組合物提供了一種檸檬酸二氫銀的含水溶液的方便替代品。
已確定，在由電解浸入檸檬酸電解質溶液的銀電極而制得的溶液中，檸檬酸二氫銀為抗微生物活性組分。檸檬酸二氫銀的結構可由結構式I表示 (I)，其中Ag+為銀離子，帶負電的碳酸根(carbonate)(COO-)為二氫檸檬酸部分中最可能帶電的基團(group)。該復合物(complex)的化學結構為AgC6H7O7，分子量為298.99g/mol。從上述結構式可以看出，檸檬酸二氫銀是一種鹽，其中銀離子為陽離子，二氫檸檬酸根為陰離子。在溶液中，所述鹽處于離解狀態(tài)，上述陽離子和陰離子被水分子包圍，所述水分子通過其極性OH基團與上述離子締合。
檸檬酸可由結構式II表示
(II)，其化學結構為C6H8O7，分子量192.13g/mol。檸檬酸可容易地從市場購得。檸檬酸極易溶于水。檸檬酸的含水溶液在25℃時的濃度最高可達約60％(重量/體積)。
本發(fā)明還提供了制備固體檸檬酸二氫銀組合物的方法。該方法起始于提供檸檬酸二氫銀儲液，如美國專利US6,197,814所述。制備檸檬酸二氫銀溶液的方法概述如下制備檸檬酸二氫銀儲液的方法為電解方法。該方法開始于制備電解質溶液，所述溶液為含檸檬酸的含水溶液。已發(fā)現(xiàn)，檸檬酸的濃度在約1％(重量/體積)至約檸檬酸在水中的溶解極限(約60％重量/體積)范圍內(nèi)時，所述檸檬酸溶液適于制備檸檬酸二氫銀溶液。在一些實施方案中，該范圍為約5重量％至25重量％，具體數(shù)值為10重量％、15重量％和20重量％。所述電解質可包含不會影響該電解法的其他組分。
將一對銀電極以一段合適的間距浸入電解質溶液中，使離子流在兩個電極間流動。合適的間距為約2mm以上，例如約2mm至8mm。在電極間施加電解勢以在電極間產(chǎn)生離子電流流動。雖然可采用直流(D.C.)電源來施加電解勢，但已發(fā)現(xiàn)對電極施加交變波形更理想。合適的電壓為約12伏至約50伏。合適的交變波形(alternatingwave)向電極施加峰值電壓約12伏至50伏的脈沖電壓，且進行周期間歇性相反轉。通過得到的經(jīng)過電解質溶液的離子流，制得檸檬酸二氫銀和檸檬酸的含水溶液。所述溶液可通過例如沉降、過濾或兩者結合的方法做進一步處理，然后在制備無水檸檬酸二氫銀的方法中使用。
前述方法可以以間歇方式進行或以連續(xù)方式進行。還可使檸檬酸二氫銀溶液循環(huán)經(jīng)過電解池，以提高溶液中檸檬酸二氫銀的最終濃度。本領域技術人員可以領會的是，前述步驟可以本領域已知的多種不同方式實施。該方法更完整詳細地描述于美國專利US 6,197,814(在此通過引用納入本申請)及以下實施例中。本申請中，所得溶液被稱為“儲液”，其含義是尚未經(jīng)過冷凍干燥處理的檸檬酸二氫銀和檸檬酸的水溶液。
得到儲液后，下一步是從儲液中去除水以制得無水檸檬酸二氫銀。已發(fā)現(xiàn)冷凍干燥可得到優(yōu)質的產(chǎn)物。在冷凍干燥過程中，含有檸檬酸二氫銀和檸檬酸溶液的凍結溶液經(jīng)真空處理，由此使溶液的溫度和壓力降至低于水的三相點。低于三相點時，水就會升華，直接從固相進入氣相。在一些實施方案中，首先將溶液凍結，然后置于冷凍干燥裝置中。可以通過溶液其置于寒冷環(huán)境(例如制冷器)中進行凍結。在其他實施方案中，將溶液置于冷凍干燥裝置中然后凍結。由于蒸發(fā)是吸熱過程，因此溶液可通過將其放置在冷凍干燥裝置中并使其處于真空狀態(tài)來凍結。隨著水從所述溶液試樣中蒸發(fā)，熱量從試樣中被帶出，由此使試樣的溫度降低至其三相點以下。在這種情況下，可有利地采用例如離心的措施以防止試樣起泡。還可有利地在冷凍干燥過程中加熱試樣以補償由于水的升華而導致的凍結溶液潛熱不足。本領域技術人員可以領會的是，只要試樣溫度保持在溶液的三相點以下，則加熱凍結試樣通常會加速冷凍干燥過程。
冷凍干燥裝置是已知的，并可從多個供應商處購得；或者可采用本領域已知的方法制造。冷凍干燥裝置包括干燥室、用于收集升華水的冷凝器、用于向真空室和冷凝器提供制冷劑的冷卻系統(tǒng)、向干燥室施以真空的真空系統(tǒng)。冷凍干燥裝置還可具有溫度控制設備，所述溫度控制裝置可以控制試樣冷卻至冰點以及加熱試樣，從而加速升華過程。在一些情況下，溫度控制設備還包括用于循環(huán)制冷劑的制冷線圈。溫度控制設備還可包括加熱線圈或其他合適的部件以在冷凍干燥過程中加熱試樣。
冷凍干燥過程去除足夠多的水以形成包含檸檬酸二氫銀和檸檬酸的無水組合物。無水檸檬酸二氫銀晶體呈半透明灰色。在一些實施方案中，將這些晶體研磨成細小的粉末并將其進行期限不定的儲存，直至其被復制。在一些實施方案中，所述粉末被儲存于不透光的容器中，例如不透明的瓶子或不透光的盒子中，以防止光引起的分解。
出人意料的是，已發(fā)現(xiàn)，采用與其儲液中相同體積的稀釋劑(例如水)而復制的檸檬酸二氫銀組合物，其中的游離銀離子的濃度與其儲液相同，并且沒有任何顯著的氧化還原態(tài)銀的降解、還原，或膠體的形成。由于在檸檬酸二氫銀組合物中銀離子是活性抗微生物劑，因此所述復制組合物有望具有與其儲液相同的抗微生物性能。因此，所述復制組合物可以儲液可采用的任何使用方式使用。
術語“包含無水檸檬酸二氫銀和檸檬酸的組合物”是指含有檸檬酸二氫銀和檸檬酸的固體組合物。因此，盡管該組合物可能含有可檢測量的水，但其含有的水不足以使組合物成為流體。固體組合物可以是無定形的或是晶體，但晶體更為理想，所述晶體本身在所述冷凍干燥過程中形成，并被認為是特別穩(wěn)定的。因此，本發(fā)明還提供了包含無水檸檬酸二氫銀和檸檬酸的晶體組合物。
本發(fā)明還提供了基本無水的無水檸檬酸二氫銀組合物。術語“基本無水”是指試樣包含的水量少于更低的可檢測極限。雖然理論上可從試樣去除所有的水，但是在一些情況下，將試樣干燥至使殘留的水量(如果有的話)低于現(xiàn)有技術檢測方法的檢測極限就足夠了?？商岢龅囊恍z測方法為氣相色譜法(GC)、核磁共振(NMR)、質譜(MS)、或其中兩種或更多種的結合，例如GC-MS。
本發(fā)明還提供了所含水量高于水的常規(guī)測試方法檢測極限的無水檸檬酸二氫銀。在這些實施方案中，優(yōu)選無水檸檬酸二氫銀包含少于約2％，更優(yōu)選少于約1％，最優(yōu)選少于約0.5％，尤為優(yōu)選少于約0.1％(重量/重量％)的水。本領域技術人員可以領會的是，這種無水組合物可通過在下述條件下進行冷凍干燥過程而獲得例如足以從凍結試樣中去除適當量的水的如真空度、時間長短及加熱條件。
本發(fā)明還提供了包含無水檸檬酸二氫銀和摩爾過量檸檬酸的組合物。術語“摩爾過量”是指，對于組合物中的每摩爾檸檬酸二氫銀而言，檸檬酸的量大于一摩爾。例如，經(jīng)前述電解處理的1-60％(重量/體積)的檸檬酸溶液含有約0.00001重量％至約1重量％的銀離子。在一個具體的實例中，經(jīng)前述電解處理的10％的檸檬酸溶液含有約0.1％的銀離子。本領域技術人員可以領會的是，該溶液中存在著相對于檸檬酸二氫銀而言摩爾過量的檸檬酸。在該實例中，摩爾過量為約15倍。本領域技術人員還可以領會的是，由于檸檬酸是非揮發(fā)性的，因此由前述冷凍干燥方法制得的固體檸檬酸二氫銀組合物將含有相對于檸檬酸二氫銀而言摩爾過量的檸檬酸。在一些實施方案中，所述摩爾過量為約5至約10,000倍；尤其是約8至約10,000倍。據(jù)信，對于檸檬酸二氫銀而言，過量約5倍以上、更優(yōu)選約10倍以上、最優(yōu)選約12倍以上的檸檬酸，會提供檸檬酸二氫銀復合物在溶液中的極強的穩(wěn)定性。因此，本發(fā)明提供了包含檸檬酸二氫銀，以及相對于檸檬酸二氫銀而言摩爾過量約5倍以上、更優(yōu)選至少約8倍、最優(yōu)選至少約10倍、尤為優(yōu)選至少約12倍的檸檬酸的固體檸檬酸二氫銀組合物。
出人意料的是，已發(fā)現(xiàn)所述無水檸檬酸二氫銀組合物可復制制得抗微生物活性組合物。此前尚未報道過將無水檸檬酸二氫銀組合物會溶解于稀釋劑，同時又不會破壞所述銀陽離子和檸檬酸陰離子之間的締合；亦從未表明相應的復制溶液具有抗微生物性能。
本發(fā)明提供了包含約0.05ppm至約10,000ppm銀離子(Ag+)的復制檸檬酸二氫銀和檸檬酸組合物。檸檬酸二氫銀的有效濃度取決于尋求保護所要應對的微生物、待處理的基質和基質上現(xiàn)有或潛在的染菌量(bioburden)、以及稀釋劑中是否存在其他的抗微生物活性物質。在一些實施方案中，銀離子的有效抗微生物濃度范圍為約0.075ppm至約2,500ppm，尤其是約0.1至約1,000ppm。
因此，本發(fā)明提供了采用無水檸檬酸二氫銀組合物制備復制檸檬酸二氫銀溶液的方法。該方法包括將上述無水組合物與稀釋劑混合。所述稀釋劑為可溶解檸檬酸二氫銀和檸檬酸的溶劑。在一些實施方案中，合適的稀釋劑為含水溶劑，例如水或含有水和另一種水溶性組分的溶液。例如，稀釋劑可以是水、乙醇或水與乙醇的混合物，例如10％的乙醇-水溶液。
本發(fā)明還提供了用基本上純的水作為稀釋劑復制無水檸檬酸二氫銀和檸檬酸組合物的方法。術語“基本上純的水”是指基本上無污染物或例如乙醇的抗微生物劑的水?；旧霞兊乃膶嵗姓麴s水、雙蒸水、雙蒸去離子水、超濾水和注射用水。
本發(fā)明還提供了用自來水、“淡水”(即采自江河、湖、溪、蓄水池等處的水)、“經(jīng)處理的水”(即經(jīng)處理去除污染物的污水)復制無水檸檬酸二氫銀和檸檬酸組合物的方法。最為常見的是使用普通自來水作為稀釋劑，如需要，也可采用更純的水。
本發(fā)明還提供了用包含水和另一種組分的含水溶液作為稀釋劑復制無水檸檬酸二氫銀和檸檬酸組合物的方法。所述另一種組分可以是洗滌劑、抗微生物劑或其他類型的組分。清洗劑的實例包括洗滌劑?？刮⑸飫┑膶嵗ㄒ掖?。本發(fā)明提供了包含水和一種選自洗滌劑、醇類及其混合物的物質的稀釋劑。稀釋劑的實例包括含水乙醇、含水十二烷基硫酸鈉水溶液以及乙醇與十二烷基硫酸鈉的含水混合物。例如，本發(fā)明提供了約0.1至約10％乙醇與任選約0.0001至約0.1％洗滌劑的含水溶液作為稀釋劑。稀釋劑的一個實例為在水中包含約2％的乙醇和約0.01％以上的洗滌劑。
檸檬酸二氫銀和乙醇的結合產(chǎn)生了意想不到的協(xié)同消毒和抗微生物性能。與不含檸檬酸二氫銀的含水乙醇組合物相比，本發(fā)明提供了比不含檸檬酸二氫銀時所需乙醇濃度更低的乙醇濃度下的消毒和抗微生物效果。
本發(fā)明還提供了使用無水檸檬酸二氫銀組合物得到抗微生物效果的方法。該方法包括將無水檸檬酸二氫銀組合物與稀釋劑結合以制得復制的檸檬酸二氫銀溶液。該方法還包含將復制的檸檬酸二氫銀和檸檬酸溶液施用在基質上。本申請中，術語“基質”一般是指任何需要進行抗微生物處理的表面、物品或環(huán)境。
可使用包含檸檬酸二氫銀的組合物來處理多種表面，包括臺面、地面、玻璃表面、金屬表面(例如不銹鋼、鉻和銅的表面)、磚瓦表面、混凝土表面、乙烯基地板材料(vinyl flooring)和涂有涂料的表面。本申請中所使用的術語“表面”是指任何表面，包括各種物體的內(nèi)外表面、包括容器(例如鍋爐、水罐、游泳池等)內(nèi)側、管內(nèi)側、家用設備和家用電器、臺面、玻璃門窗的外側。本申請中使用術語“表面”是為了區(qū)分于一個整體的物品。復制的檸檬酸二氫銀和檸檬酸溶液通過常規(guī)方式施用到上述表面，例如將溶液傾倒、噴灑或擦拭到上述表面。可方便地將溶液從上述表面上擦掉或沖掉，或有利地讓其留存在表面上至干，從而在上述表面上提供長久的抗微生物余漬或膜。
本發(fā)明還包括處理多種物品的方法，例如織物、金屬物品、塑料物品、天然產(chǎn)品和通常以含水清潔液處理的其他物品。例如，本發(fā)明提供了用復制的檸檬酸二氫銀和檸檬酸組合物處理食品的方法。以所述方式處理的食品的實例包括蔬菜和水果。可以所述方式處理的蔬菜的實例包括塊根類(例如胡蘿卜類、甜菜類、蘿卜類)；塊莖類(例如馬鈴薯類、蕪菁類、甘薯類和薯蕷類)；鱗莖類(例如洋蔥類、薤類)；球莖類(例如蒜)；綠葉植物類(例如菠菜、甘藍、萵苣和卷心菜)；十字花科苗(例如椰菜、花椰菜)；以及豆類(例如大豆、落花生)?？梢运龇绞教幚淼乃膶嵗瞎稀⑻鸸?、蘋果、桃、梨、香蕉、番茄、柑桔類(例如橙、葡萄柚、橘、桔柚、檸檬和酸橙)、葡萄和橄欖。本發(fā)明提供了將檸檬酸二氫銀組合物噴灑或擦拭在食品上的方法。作為選擇，本發(fā)明還提供了將食品浸漬到所述溶液中的方法。
本發(fā)明還包括用復制的檸檬酸二氫銀溶液處理多種物品的方法。例如，可將所述溶液噴灑或擦拭到多種物品上，所述物品包括用于食物服務或食物加工制造的機械零件。還可將所述溶液用于清洗玩具及兒童和嬰兒使用的其他物品。還可將所述溶液用于清洗織物，例如衣服、抹布、床上用品和其他織物。本發(fā)明提供了用作下述浸漬組合物的復制的檸檬酸二氫銀組合物，即用于消毒炊具、餐具和刀具的浸漬組合物。
本發(fā)明還包括抗微生物有效的檸檬酸二氫銀組合物。術語“抗微生物有效”是指組合物可有效抑制或減少一種或多種微生物的擴散、防止一種或多種微生物的侵染、殺滅一種或多種微生物、或上述效果的結合。術語微生物包括細菌、病毒或真菌。含水檸檬酸二氫銀組合物已顯示可有效對抗多種指示微生物和致病微生物，其中包括細菌，例如銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、豬霍亂沙門氏菌(Salmonella chloleraesuis)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、瘡皰丙酸桿菌(Proprionibacterium acnes)、大腸桿菌(Escherichia coli)、單核細胞增生李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)以及屎腸球菌(Enterococcus faecium)；病毒，例如人免疫缺陷病毒1型(HIV1)、單純皰疹病毒2型(HSV2)、流感病毒A、鼻病毒和脊髓灰質炎病毒2型；以及真菌，例如須瘡癬菌(Trichophyton mentagrophytes)。
通過參考以下示例性和非限制性實施例，可更充分地理解本發(fā)明。本發(fā)明的其他實施方案可在本發(fā)明的范圍內(nèi)實施。
實施例實施例1-檸檬酸二氫銀儲液的制備將水引入反滲透裝置，經(jīng)半透膜去除雜質，獲得去離子水。將99％純的無水檸檬酸與上述水混合，以制得200加侖20％(重量/體積)(每加侖水796g檸檬酸)的溶液。將上述200加侖20％的檸檬酸徑直引入帶有正、負電極的離子室中，每個電極由200金衡盎司的999純銀構成。正、負電極相距至少2.0mm，使檸檬酸溶液在兩個電極之間通過。將包括正、負導體的離子發(fā)生控制器(IGC)電源連接到正、負電極上。IGC在17伏下施加5安培的電流，每9秒施加一次脈沖，并且間隔1分鐘改變一次極性。整個過程中調(diào)節(jié)電極間隙，以維持5安-17伏的輸出。電流流動引起離子流在正、負電極間流動，在稀釋的檸檬酸溶液中產(chǎn)生游離銀離子。銀離子與檸檬酸溶液中的檸檬酸反應生成檸檬酸二氫銀溶液。使20％的檸檬酸溶液以每分鐘50加侖的流量循環(huán)通過離子室144小時，直至達到所需的銀離子濃度。然后將所得檸檬酸二氫銀溶液靜置，以使上述過程中形成的所有固體沉淀下來。所得產(chǎn)物為銀離子濃度為2400ppm的檸檬酸二氫銀溶液。在本申請下文中，該溶液被稱為儲液。該儲液可在以下實施例中立即使用，或者將其儲存待用。
本領域技術人員應理解的是，多種電極尺寸和/或間距的變化，以及多種峰值電壓的變化，以及多種間隔電壓極性的時間順序的變化，均可方便地用于獲得用于本發(fā)明的檸檬酸二氫銀。
實施例2-無水檸檬酸二氫銀的制備從SSA Batch No.04.06.03獲得上述實施例1制備的1,000ml的儲液試樣，利用裝有離子選擇性電極(ion specificelectrode，ISE)的OrionTM290A處理器確定其銀離子濃度為2400ppm。該處理器采用OrionTM標準溶液校正。
將1,000ml的儲液潷析至兩個2.5”×8”×15”的PyrexTM耐熱玻璃盤中。每個盤中的液體儲液液面高約1.5”。
然后將上述盤置于小型商品級冷凍干燥裝置中，所述冷凍干燥裝置由以下部件構成帶有溫度控制擱板的干燥室、用于收集從產(chǎn)物中去除的水的冷凝器、用于向溫度控制擱板和冷凝器供應制冷劑的冷卻系統(tǒng)、用于降低干燥室和冷凝器內(nèi)壓力以便于干燥處理的真空系統(tǒng)。將冷卻和真空壓力設定保持在與冷凍干燥含水溶液＞50％的水基(watermatrix)相關的標準范圍內(nèi)。
從產(chǎn)物中去除99％的水后，從盤中收集大塊的粗晶，并將其研磨為細小的晶體粉末，稱重，將其在環(huán)境室溫(74°F)下儲存一周。晶體總重量為206.12g。
實施例3-檸檬酸二氫銀溶液的復制用約794ml的藥用級純水將實施例2的晶體粉末在1,000ml的Pyrex玻璃燒瓶中復制。然后，用磁性攪拌器劇烈攪拌溶液30分鐘，將其放入不透光的儲存柜中24小時。
然后用實施例2中所述的Orion290A處理器和ISE測量復制溶液的銀離子濃度。在第24小時、48小時和72小時、以及共4周內(nèi)每隔1周的時間點采集測量結果。第24小時的讀數(shù)和第4周的讀數(shù)分別為2398ppm和2407ppm。上述濃度與2400ppm的儲液濃度基本相同(在Orion290ATM處理器操作說明書的％誤差以內(nèi))。
實施例4-復制的檸檬酸二氫銀溶液的抗微生物效果為了證實檸檬酸二氫銀溶液用作防腐劑的效果，對實施例1中所述的檸檬酸二氫銀儲液進行防腐挑戰(zhàn)測試(Preservative ChallengeTest)。防腐挑戰(zhàn)測試根據(jù)歐洲藥典中用于第2類產(chǎn)品(由含水基質或含水載體制得的常用產(chǎn)品、未消毒的鼻用產(chǎn)品、乳液(包括施用于粘膜的))的4.04/5.01.03.00測試方法進行。
在酪蛋白豆粉(Casein Soymeal)胨瓊脂上培養(yǎng)細菌測試用有機體和酵母菌，在沙氏4％葡糖瓊脂上培養(yǎng)真菌測試有機體，所述培養(yǎng)在35℃下進行18-24小時(細菌)，在25℃下進行48小時(念珠菌(Candida))或在25℃下進行一周(曲霉菌(Aspergillus))。
培育后，用0.9％的氯化鈉沖洗瓊脂平板表面以收集細菌和酵母菌。用0.9％的氯化鈉/0.01％的吐溫80沖洗瓊脂平板表面以收集曲霉菌。
測試用微生物懸濁液用0.9％的氯化鈉稀釋成密度為-108菌落形成單位的最終測試用有機體懸濁液。
對于測試用有機體，在玻璃瓶(產(chǎn)自Schott/德國的帶螺口蓋的250ml瓶)中稱重20g的測試產(chǎn)品，并以0.2ml的測試用有機體懸濁液污染。用玻璃刮鏟攪拌，細致地將所述微生物分散在測試產(chǎn)品中。
將經(jīng)過上述污染的測試產(chǎn)品在20-25℃下避光儲存。
在測試產(chǎn)品污染后立即取出1g試樣材料，并且在污染后2天、7天、14天和28天取出等量的試樣材料。
用0.9％的氯化鈉稀釋試樣，并利用Drialsky刮鏟將每等分0.1ml的稀釋液散布在瓊脂平板上。適量的特定抗微生物劑的鈍化劑(中和劑)被摻入用于制備產(chǎn)品稀釋液的稀釋劑中以及用于評估活體細胞總數(shù)的瓊脂平板中。
瓊脂平板在35℃下培育24小時(細菌和酵母菌)，或在25℃下培育3小時(曲霉菌)，培育階段之后對長成的菌落計數(shù)。對菌落及每g測試用產(chǎn)品的活體細胞數(shù)目(菌落形成單位)計數(shù)。然后計算產(chǎn)品中微生物的對數(shù)減少值(參見以下防腐挑戰(zhàn)測試結果表)。
測試菌株銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC 9027；NCIMB8626；CIP82.118金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC 6538；NCTC10788；NCIMB 9518；CIP 4.83白色念球菌(Candida albicans)ATCC10231；NCPF3179；IP48.72黑曲霉(Aspergillus niger)ATCC16404；IMI 149007；IP1431.83測試檸檬酸二氫銀在不同試劑中的抗微生物效果。下表1-3顯示了測試結果
表1防腐挑戰(zhàn)測試/除臭乳液測試用有機體金黃色 銅綠假大腸桿菌白色念球菌 黑曲霉葡萄球菌 單胞菌O/W PK03-260-01(空白對照)污染后2天 ＜100 ＜100 ＜1006.0×10E41.8×10E5污染后7天 ＜100 ＜100 ＜1001.6×10E43.0×10E5污染后14天 ＜100 ＜100 ＜1008.8×10E32.8×10E5污染后28天 ＜100 ＜100 ＜1001.4×10E3未測出O/W PK03-260-01(0.1％Axenohl)污染后2天 ＜1000＜100 ＜100＜1001.6×10E5污染后7天 ＜100 ＜100 ＜100＜1002.6×10E5污染后14天 ＜100 ＜100 ＜100＜1001.2×10E5污染后28天 ＜100 ＜100 ＜100＜100未測出O/W PK03-260-01(0.3％Axenohl)污染后2天 ＜100 ＜100 ＜100＜1001.4×10E5污染后7天 ＜100 ＜100 ＜100＜1001.2×10E5污染后14天 ＜100 ＜100 ＜100＜1001.0×10E5污染后28天 ＜100 ＜100 ＜100＜100未測出表2防腐挑戰(zhàn)測試/除臭乳液測試用有機體金黃色 銅綠假大腸桿菌 白色念球菌 黑曲霉葡萄球菌 單胞菌PK03-262-01(空白對照)污染后2天 2.0×10E4 1.0×10E5 1.0×10E61.0×10E62.0×10E5污染后7天 ＜100 3.1×10E3 4.4×105 6.2×10E53.0×10E5污染后14天 ＜100 1.0×10E2 1.1×10E61.3×10E63.5×10E5污染后28天 ＜100 1.2×10E2 6.0×10E71.1×10E6未測出PK03-262-01(0.1％Axenohl)污染后2天 5.0×10E2 4.0×10E2 3.0×10E24.0×10E31.4×10E5污染后7天 ＜100 2.0×10E2 ＜1003.4×10E41.8×10E5污染后14天 ＜100 ＜100 ＜1001.1×10E52.0×10E5污染后28天 ＜100 ＜100 ＜1004.0×10E5未測出PK03-262-01(0.3％Axenohl)污染后2天 3.0×10E2 4.0×10E3 7.0×10E24.0×10E31.8×10E5污染后7天 ＜100 2.0×10E2 ＜1002.4×10E32.4×10E5污染后14天 ＜100 100 ＜1001.2×10E32.4×10E5污染后28天 ＜100 ＜100 ＜1002.0×10E2未測出表3防腐挑戰(zhàn)測試/浴膠測試用有機體 金黃色銅綠假大腸桿菌 白色念球菌 黑曲霉葡萄球菌 單胞菌FB02-060-03(空白對照)污染后2天 4.0×10E22.2×10E5生長中2.2×10E52.4×1E5污染后7天 ＜1001.1×10E5生長中2.1×10E53.6×10E5污染后14天＜1008.2×10E4生長中9.0×10E43.6×10E5污染后28天未測出 未測出 生長中未測出 未測出洗浴香波(0.1％Axenohl)污染后2天 ＜1001.8×10E4＜100 ＜1002.0×10E5污染后7天 ＜100＜100＜100 ＜1003.0×10E5污染后14天＜100＜100＜100 ＜1003.2×10E5污染后28天＜100＜100＜100 ＜100未測出洗浴香波(0.1％Axenohl)污染后2天 ＜1006.0×10E3＜100 ＜1001.8×10E5污染后7天 ＜100＜100＜100 ＜1002.4×10E5污染后14天＜100＜100＜100 ＜1002.4×10E5污染后28天＜100＜100＜100 ＜100未測出通過參考以下示例性和非限制性實施例，可更充分地理解本發(fā)明。
本發(fā)明的其他實施方案可在本發(fā)明的范圍內(nèi)實施。
權利要求
1.一種組合物，包含無水檸檬酸二氫銀和檸檬酸。
2.權利要求1的無水組合物，其中所述組合物基本無水。
3.權利要求1的無水組合物，其中所述組合物包含少于約0.5％的水。
4.權利要求1的無水組合物，其中所述組合物是晶體。
5.權利要求1的無水組合物，其中所述組合物包含相對于檸檬酸二氫銀而言摩爾過量的檸檬酸。
6.權利要求1的無水組合物，其中所述組合物包含相對于檸檬酸二氫銀而言至少5倍摩爾過量的檸檬酸。
7.包含無水檸檬酸二氫銀和檸檬酸的組合物的制備方法，包括如下步驟(a)提供包含檸檬酸二氫銀、檸檬酸和水的儲液；(b)凍結所述儲液以形成凍結溶液；以及(c)冷凍干燥所述凍結溶液以形成無水組合物。
8.權利要求7的方法，其中所述檸檬酸相對于檸檬酸二氫銀而言摩爾過量。
9.權利要求7的方法，其中步驟(c)還包括加熱所述凍結溶液。
10.無水檸檬酸二氫銀和檸檬酸組合物的使用方法，包括將無水檸檬酸二氫銀組合物與含水稀釋劑結合，所述含水稀釋劑的量應足以制得復制的具有抗微生物活性的檸檬酸二氫銀組合物。
11.權利要求10的方法，其中所述含水稀釋劑為基本純的水。
12.權利要求10的方法，其特征在于所述含水稀釋劑包含水和至少一種選自醇類和洗滌劑的物質。
13.無水檸檬酸二氫銀和檸檬酸組合物的使用方法，包括將無水檸檬酸二氫銀組合物與足量含水稀釋劑混合，以制出抗微生物有效的檸檬酸二氫銀組合物；以及將所述抗微生物有效的檸檬酸二氫銀溶液施用到基質上，從而獲得抗微生物效果。
14.權利要求13的方法，其中所述基質為固體表面、食品或非食品物品。
15.權利要求14的方法，其中所述固體表面為管道內(nèi)表面、儲存罐、游泳池、溫泉池、冷卻系統(tǒng)或冷卻塔。
16.權利要求13的方法，其特征在于所述抗微生物效果是殺生物或生物膜抑制。
17.權利要求13的方法，其特征在于所述抗微生物效果是食物防腐。
全文摘要
無水檸檬酸二氫銀組合物包括檸檬酸二氫銀和檸檬酸。所述無水組合物可通過冷凍干燥制備。所述無水組合物可用適合的稀釋劑復制以形成檸檬酸二氫銀組合物。所述無水組合物可復制，并可施用在多種基質上以將抗微生物效果賦予所述基質。
文檔編號A61K31/28GK1842274SQ200480024460
公開日2006年10月4日 申請日期2004年8月27日 優(yōu)先權日2003年8月28日
發(fā)明者A·B·阿拉塔 申請人:純生物科學