專利名稱：含有親水性載體和硅氧烷基質(zhì)的局部用制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明總的來說涉及用于局部皮膚處理的制劑，更具體說，本發(fā)明涉及含有硅氧烷基質(zhì)和親水性載體的制劑，該制劑提供活性劑的緩釋。
硅氧烷是以烷基硅氧烷或有機(jī)硅氧烷化學(xué)結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的化合物，并且包括已在藥物應(yīng)用中用作賦形劑和加工助劑的聚二甲基硅氧烷物質(zhì)。這些物質(zhì)的一些已取得藥典化合物的資格。本領(lǐng)域已知在受控藥物傳遞系統(tǒng)、特別是在其中特定性能的關(guān)聯(lián)對(duì)滿足產(chǎn)品設(shè)計(jì)需求(即，生物相容性和多用性)來說是關(guān)鍵的應(yīng)用中使用這種硅氧烷化合物。新的長效藥物傳遞應(yīng)用，包括植入、插入、粘液粘連、經(jīng)皮和局部形式，體現(xiàn)出硅氧烷的獨(dú)特和固有特性。這些傳遞系統(tǒng)允許用生物學(xué)適宜的動(dòng)力學(xué)將活性分子控制釋放至定向區(qū)域，并且防止不利效果，例如傳統(tǒng)口服和腸胃外藥療法中常見的峰劑量、低順應(yīng)性和藥物降解。
經(jīng)皮藥物傳遞系統(tǒng)由含藥物的粘合性貼劑組成，將其粘附在完整無傷的皮膚上最多7天。貼劑設(shè)計(jì)控制活性劑的釋放，然后通過循環(huán)系統(tǒng)被攜帶至生物體成為全身活性。使用皮膚作為進(jìn)入點(diǎn)，由粘合性硬膏劑或成膜和實(shí)體(substantive)物料(例如乳膏或凝膠)組成的局部形式被用來局部治療(肌肉或皮膚疾病)。然而，這些經(jīng)皮藥物傳遞系統(tǒng)從沒有被摻入局部敷料應(yīng)用中，如傷口敷料和軟膏，其中將分散在硅氧烷基質(zhì)中的生物化學(xué)試劑釋放至皮膚或傷口上，以加速愈合。
因此，相關(guān)領(lǐng)域中仍然需要能夠有利利用硅氧烷的有益特性、并且可以提供活性劑緩釋的制劑。
本發(fā)明提供局部用制劑來滿足這種需要，其中所述局部用制劑含有硅氧烷基質(zhì)、親水性載體和至少一種欲從該制劑中釋放的活性劑。活性劑可以是蛋白質(zhì)，特別是酶，如水解酶和葡萄糖氧化酶。硅氧烷基質(zhì)可包括高M(jìn)w的聚二甲基硅氧烷，松散或輕度交聯(lián)的硅氧烷彈性體，交聯(lián)的硅氧烷彈性體，如凝膠(無填料彈性體)，二氧化硅補(bǔ)強(qiáng)的橡膠或泡沫體，其中交聯(lián)通過使用加成和縮合固化系統(tǒng)來實(shí)現(xiàn)，硅氧烷壓敏型粘合劑和硅氧烷-有機(jī)共聚物，如硅氧烷聚酰胺。制劑可以用來形成敷料、軟膏等等。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明的制劑可以包括薄膜敷料，其可以施用在皮膚上，包括受損組織，根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明的制劑包括貼劑敷料。根據(jù)本發(fā)明的再一個(gè)方面，本發(fā)明的制劑包括鋪展型繃帶敷料。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明的制劑包括軟膏。薄膜、貼劑、鋪展型繃帶和軟膏全部可以施用于皮膚，施用于手術(shù)切口、傷口或其它皮膚損傷、擦傷、刮傷、抓傷或其它受損組織上。本發(fā)明的制劑對(duì)液體是吸留性的，并且在阻止微生物引起皮膚表面感染方面是有效的。在一個(gè)實(shí)施方案中，諸如蛋白酶的活性劑，可以從制劑中釋放在傷口的位置，以便進(jìn)行酶性清創(chuàng)、凝固形成和凝塊去除，以及就地產(chǎn)生過氧化物和/或過酸，以便加速在不同階段的傷口愈合。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，局部用制劑含有含活性劑的親水性載體的混合物，其遍布分散在硅氧烷基質(zhì)中。該混合物與硅氧烷基質(zhì)一起形成本發(fā)明的這個(gè)實(shí)施方案的局部用制劑。親水性載體例如是丙二醇的溶液，可以將其與水溶性或親水性組分例如聚乙烯醇(″PVA″)或聚乙烯基吡咯烷酮(″PVP″)混合。親水性載體和活性劑混合物可以形成呈乳液或分散液形式的內(nèi)相，并且此內(nèi)相被散布在硅氧烷基質(zhì)(外相)內(nèi)。所以，可以添加硅氧烷基表面活性劑，以便將內(nèi)相分散或乳化成非常小的液滴并且增強(qiáng)活性劑的釋放。
因此，本發(fā)明的特征是提供局部用制劑，其可有效地向皮膚提供活性劑的控制釋放。本發(fā)明的這個(gè)和其它特征和優(yōu)點(diǎn)將通過以下對(duì)本發(fā)明的詳細(xì)描述而變得顯而易見。
當(dāng)結(jié)合下列附圖進(jìn)行閱讀時(shí)，以下對(duì)本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述將會(huì)得到最好地理解，其中圖1是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案蛋白酶從制劑中緩釋的示意圖。
圖2A和2B是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案蛋白酶和脂肪酶從制劑中釋放/傳遞的示意圖。
圖3A-3C是蛋白酶從具有不同量親水性組分的制劑中釋放的示意圖。
圖4是蛋白酶從具有不同硅氧烷基質(zhì)的制劑中的釋放速率的示意圖。
圖5是蛋白酶從具有不同貼劑厚度的制劑中的釋放速率的示意圖。
圖6是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案蛋白酶從軟膏制劑中的釋放的示意圖。
圖7是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案蛋白酶在制劑中的穩(wěn)定性的示意圖。
圖8是根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案蛋白酶在制劑中的穩(wěn)定性的示意圖。
圖9是根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案蛋白酶在制劑中的穩(wěn)定性的示意圖。
圖10是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案蛋白酶在制劑中的穩(wěn)定性的示意圖。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種摻有硅氧烷基質(zhì)的局部用制劑。該制劑可有效地提供活性劑從硅氧烷基質(zhì)中的控釋和緩釋。將活性劑與親水性載體共混，形成分散在硅氧烷基質(zhì)內(nèi)的混合物?；钚詣┰诠柩跬榛|(zhì)內(nèi)保持穩(wěn)定并且可受控制地和自由地從基質(zhì)中釋放。
為定義和描述本發(fā)明的實(shí)施方案，以下術(shù)語應(yīng)當(dāng)按照本文下面給出的定義來理解。
活性劑應(yīng)當(dāng)理解為是指蛋白質(zhì)，特別是酶。
表面活性劑應(yīng)當(dāng)理解為是指表面-活性試劑，將其添加至懸浮介質(zhì)中，以促進(jìn)多種不溶混性液體或液體與極細(xì)固體顆粒(經(jīng)常是膠體大小的)的均勻和最大程度的分離。表面活性劑可促進(jìn)不溶混性液體、液滴或細(xì)固體顆粒在液體分散介質(zhì)中的潤濕、有效分布及穩(wěn)定化以防止顆粒聚集。表面活性劑通常以足以給顆粒表面提供完全表面覆蓋的量添加至分散介質(zhì)中。
敷料應(yīng)當(dāng)理解為是指各種類型的適于直接施用于皮膚、受傷組織或患病組織的任何覆蓋物，以便用于吸收分泌物、保護(hù)組織不受創(chuàng)傷、組織給藥、保護(hù)組織不受環(huán)境影響，從而達(dá)到止血、保持或提供濕潤環(huán)境及其的組合。例如敷料可以是以膜、貼劑、繃帶、凝膠等的形式。
乳液應(yīng)當(dāng)理解為是指一種液相在第二種液相內(nèi)的暫時(shí)或持久的分散液。通常，液體之一是水或水溶液，并且另一種是油或其它水-不溶混性液體。第二種液體通常被稱作連續(xù)相或外相。乳液可以進(jìn)一步分類成簡單乳液，其中分散的液相或內(nèi)相是簡單的均相液體，或者分類成較復(fù)雜乳液，其中分散的液相是液相或固相的多相組合，如雙相乳液或多相乳液。
親水性載體應(yīng)當(dāng)理解為是指本發(fā)明制劑的相中的至少一種組分，其起活性劑溶劑的作用。親水性載體有助于活性劑從本發(fā)明實(shí)施方案中所用的硅氧烷基質(zhì)中釋放。
親水性組分應(yīng)當(dāng)理解為是指添加至本發(fā)明實(shí)施方案中親水性載體和活性劑的混合物中的至少一種組分。親水性組分可以有助于活性劑從本發(fā)明實(shí)施方案中所用的硅氧烷基質(zhì)中釋放。
蛋白質(zhì)應(yīng)當(dāng)理解為是指天然、合成和工程酶，如氧化還原酶、轉(zhuǎn)移酶、異構(gòu)酶、連接酶、水解酶；抗體；多肽；肽；激素；細(xì)胞因子；生長因子和其它生物學(xué)調(diào)制劑。
軟膏應(yīng)當(dāng)理解為是指用于外涂，如外涂于皮膚、受傷組織和患病組織的任何適宜的半固體制劑。
根據(jù)本發(fā)明，制劑可以在各種各樣的可以施用于皮膚、受傷組織和患病組織的局域用敷料中使用。局部用敷料允許活性劑釋放并且施用于下層皮膚、受傷組織和患病組織。此外，制劑可以用于形成軟膏，并且軟膏允許活性劑釋放并且施用于下層皮膚、受傷或患病組織。
根據(jù)優(yōu)選的實(shí)施方案，提供的制劑含有存在于外相或連續(xù)相內(nèi)的內(nèi)相或不溶混性分散相。外相通常含有硅氧烷基質(zhì)，并且內(nèi)相通常含有含至少一種活性劑的親水性載體。此外，內(nèi)相還可以含有任何適宜的親水性組分。內(nèi)相和外相可以用任何適宜于形成本發(fā)明制劑的方式來混合。例如可以使用高剪切混合器來將內(nèi)相和外相混合，形成本發(fā)明的制劑。此外，可以手動(dòng)混合內(nèi)相和外相。內(nèi)相的液滴大小可以改變。例如液滴大小可以是約0.1μm至約2000μm，約0.1μm至約1000μm，約0.1μm至約500μm，約0.1μm至約200μm，或者約0.1μm至約100μm。
內(nèi)相可以含有任何適宜的親水性載體，所述親水性載體中含至少一種活性劑。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，親水性載體是高溫下的液體，和也可以使用溶于適宜溶劑中的固體物料(例如山梨糖醇、甘露糖醇、乳糖、氯化鈉和檸檬酸)。例如活性劑可以包含在丙二醇(PPG)、聚乙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物(poloxamer)、甘油、醇、多元醇、水或其它適宜親水性載體的溶液中。
內(nèi)相還可以含有水溶性和親水性組分。親水性組分通常不起活性劑溶劑的作用。親水性組分可以增強(qiáng)活性劑從硅氧烷基質(zhì)中釋放的速率并且可以包括聚乙烯醇(PVA或PVOH)(例如Mowiol3-83，可獲得自Cariant Corporation，Charlotte，N.C.)或聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)，例如LuviskolK-30，可獲得自BASF Corporation，MountOlive，N.J。內(nèi)相溶液可以包括最多約35wt.％的PVA水溶液或最多約50wt.％的PVP水溶液。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，親水性組分也可以是用水稀釋的水-增稠劑，如纖維素衍生物(如，羧甲基纖維素，甲基纖維素，羧甲基纖維素鈉，羥丙基纖維素，羥丙基甲基纖維素)，聚丙烯酸，藻酸鹽衍生物，脫乙酰殼多糖衍生物，明膠，果膠，聚乙二醇，丙二醇，甘油和其它適宜的親水性分子和大分子，其中活性劑可以是或可以不是可溶性的。這種分子包括親水性大分子。
不指望被任何特定理論束縛，據(jù)認(rèn)為親水性組分可以在硅氧烷基質(zhì)中產(chǎn)生孔、裂縫、裂紋或縫隙，從而有助于活性劑的釋放。在形成內(nèi)相時(shí)向親水性載體添加增加量的PVA或PVP可以增加被釋放的活性劑的百分比。除此之外，增加內(nèi)相中的親水性載體的量可以增加被釋放的活性劑的百分比。
此外，可以使用賦形劑來穩(wěn)定活性劑或增加其相容性，以及有助于它們從硅氧烷基質(zhì)中釋放。用于本發(fā)明的硅氧烷賦形劑可以包括硅氧烷聚醚、硅氧烷流體、二甲聚硅氧烷、二甲聚硅氧烷共聚醇、二甲聚硅氧烷醇、硅氧烷烷基蠟、硅氧烷聚酰胺等等。其它可能的賦形劑包括但不限于親水性有機(jī)物，如(多)糖衍生物、丙烯酸酯衍生物、PVA衍生物、二醇、三醇、甘油酯衍生物、丙二醇(PPG)、聚乙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物、甘油、醇、纖維素衍生物、聚丙烯酸、藻酸鹽衍生物、脫乙酰殼多糖衍生物、明膠、果膠和多元醇。
本發(fā)明的硅氧烷基質(zhì)可以包括高分子量的聚二甲基硅氧烷(12,500 cSt至樹膠型材料)，如EP 966972A1、WO 01/19190 A1和WO 200122923中所描述的那些。
硅氧烷基質(zhì)可以包括松散或輕度交聯(lián)的硅氧烷彈性體，例如DowCorning9040硅氧烷彈性體共混物(可獲得自Dow CorningCorporation，Midland，MI)。松散或輕度交聯(lián)的硅氧烷彈性體在以下US專利中有所描述，其描述了布置在揮發(fā)性硅氧烷溶劑(D5)中的松散交聯(lián)的聚二甲基硅氧烷US專利6,200,581，6,238,657，6,177,071，6,168,782和6,207,717。隨著揮發(fā)性硅氧烷溶劑蒸發(fā)，輕度或松散交聯(lián)的硅氧烷彈性體從糊狀稠度增稠至彈性體硅氧烷凝膠。
硅氧烷基質(zhì)也可以包括無填料的彈性體，如US專利5,145,937和4,991,574及EP 0955347中描述的那些。這些專利講述了使用硅氧烷凝膠，例如Dow Corning7-9800 SSA KIT(可獲得自Dow CorningCorporation，Midland，MI)。
或者，硅氧烷基質(zhì)可以包括多孔彈性體(無填料的或二氧化硅補(bǔ)強(qiáng)的)，如EP 0425164、EP 0506241和US 5,010,115中描述的那些。這些專利教導(dǎo)使用硅氧烷泡沫體，例如Dow Corning7-0192 FOAMPART A和PART B(可獲得自Dow Corning Corporation，Midland，MI)。此外，硅氧烷基質(zhì)可以包括硅氧烷橡膠，如加成固化橡膠(類似于凝膠，但用二氧化硅補(bǔ)強(qiáng))或縮合固化橡膠，例如Dow Cornin7-5300 FILM-IN-PLACE COATING或Dow Corning7-FC4210 FILMFORMING BASE AND CURE AGENT(可獲得自Dow Corning Corporation，Midland，MI)。
最后，硅氧烷基質(zhì)可以包括硅氧烷壓敏粘合劑(硅氧烷PSA)，如為硅氧烷聚合物形式的硅酸酯樹脂，其可以是溶劑基的或熱熔體，如US專利2,736,721、2,814,601、2,857,356、3,528,940和6,337,086中描述的那些。這些專利教導(dǎo)使用硅氧烷PSAs，例如DowCorningPSA 7-4402(可獲得自Dow Corning Corporation，Midland，MI)。
本發(fā)明的硅氧烷基質(zhì)還可以含有硅氧烷基表面活性劑，例如DowCorning9011硅氧烷彈性體共混物(可獲得自Dow CorningCorporation，Midland，MI)，其有助于親水性載體和活性劑分散或乳化成小的液滴并且防止這些較小的液滴聚結(jié)成較大的液滴。例如當(dāng)使用硅氧烷基表面活性劑時(shí)，內(nèi)相的液滴可以是約0.1-500μm。在形成本發(fā)明的局部用敷料中，也可使用硅氧烷基表面活性劑以產(chǎn)生穩(wěn)定的乳液。除此之外，本發(fā)明的外相可以含有稀釋劑，用于傳遞硅氧烷基質(zhì)，如揮發(fā)性硅氧烷(即，D5(Dow Corning245流體)、MDM(DowCorning200流體1 cSt))或有機(jī)溶劑(即，庚烷或乙酸乙酯)。
本發(fā)明的活性劑通常是蛋白質(zhì)，如酶，將其摻入親水性載體中?；钚詣┛梢允怯H水性的。適宜于摻入敷料中的酶可以是任何酶或酶混合物。酶包括但不限于可商購獲得類型、改性類型、重組體類型、野生類型、自然界中不存在的變體及其混合物。例如適宜的酶包括水解酶、角質(zhì)酶、氧化酶、轉(zhuǎn)移酶、還原酶、半纖維素酶、酯酶、異構(gòu)酶、果膠酶、乳糖酶、過氧化酶、漆酶、觸酶及其混合物。水解酶包括但不限于蛋白酶(細(xì)菌性、真菌性、酸性、中性或堿性)，淀粉酶(α或β)，脂肪酶，甘露聚糖酶，纖維素酶，膠原酶及其混合物。
被認(rèn)為可以適宜于包含在本發(fā)明制劑中的脂肪酶包括假單胞菌屬(Pseudomonas)微生物生產(chǎn)的那些酶，其中所述微生物如施氏假單胞菌(Pseudomonass stutzeri)ATCC 19.154，如英國專利1,372,034中所公開的；門多薩假單胞菌(Pseudomonas mendocina)，如US專利5,389,536中所描述的，及類產(chǎn)堿假單胞菌(Pseudomonaspseudoalcaligenes)，如US專利5,153,135中所公開的。脂肪酶還包括對(duì)脂肪酶的抗體顯示陽性免疫交叉反應(yīng)的那些酶，由微生物熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)IAM 1057生產(chǎn)。這種脂肪酶可按商標(biāo)名稱Lipase P″Amano″獲得自Amano Pharmaceutical Co.Ltd.，Nagoya，日本。脂肪酶包括M1 Lipase和Lipomax(Gist-BrocadesNV，Delft，荷蘭)和Lipase(Novozymes A/S，Bagsvaerd，丹麥)。正常情況下，脂肪酶在硅氧烷基質(zhì)中的摻加量為硅氧烷基質(zhì)重量的約0.0001％至約2％活性酶，或者約0.001mg/g至約20mg/g。
蛋白酶是羰基水解酶，其通常裂解蛋白質(zhì)或肽的肽鍵。本文中″蛋白酶″意指天然存在的蛋白酶或重組蛋白酶。天然存在的蛋白酶包括α-氨基酰基肽水解酶，肽基氨基酸水解酶，?；被饷福z氨酸羧基肽酶，金屬羧基肽酶，巰基蛋白酶，羧基蛋白酶和金屬蛋白酶。絲氨酸、金屬、巰基和酸性蛋白酶以及內(nèi)切和外切-蛋白酶包括在內(nèi)。
蛋白酶可以是動(dòng)物、植物或微生物來源的。例如蛋白酶可以是細(xì)菌來源的絲氨酸蛋白水解酶?？梢允褂眉兓蚍羌兓问降拿浮６x中包括通過化學(xué)或基因改性突變體產(chǎn)生的蛋白酶，也包括近親結(jié)構(gòu)酶變體。特別優(yōu)選的蛋白酶是細(xì)菌絲氨酸蛋白水解酶，特別是枯草桿菌蛋白酶(subtilases)，其由芽胞桿菌屬(Bacillus)，例如枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)、遲緩芽胞桿菌(Bacillus lentus)、解淀粉芽胞桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)和/或地衣芽胞桿菌(Bacillus licheniformis)獲得。被認(rèn)為可以包含在本發(fā)明組合物中的適宜的市售蛋白水解酶包括Alcalase、Esperase、Durazym、Everlase、Kannase、Relase、Savinase、Maxatase、Maxacal和Maxapem15(蛋白質(zhì)工程Maxacal)；Purafect、Properase(蛋白質(zhì)工程Purafect)及枯草溶菌素BPN和BPN′。
蛋白酶還包括具有自然界所不存在的氨基酸序列的蛋白酶變體，其可從前體蛋白酶中通過替代自然界中不存在的不同氨基酸序列來獲得，即從前體蛋白酶中通過用不同氨基酸替代所述蛋白酶中相當(dāng)于以下位置的氨基酸殘基來獲得，其中按照解淀粉芽胞桿菌枯草溶菌素(Bacillus amyloliquefaciens subtilisin)的編碼，所述位置相當(dāng)于選自+76，+87，+99，+101，+103，+104，+107，+123，+27，+105，+109，+126，+128，+135，+156，+166，+195，+197，+204，+206，+210，+216，+217，+218，+222，+260，+265和/或+274的那些，如US專利RE 34,606；5,700,676；5,972,682和/或6,482,628中所描述的。
示例性的蛋白酶變體包括得自于遲緩芽胞桿菌(Bacillus lentus)的枯草溶菌素變體，如US專利RE 34,606中所描述的，以下稱作蛋白酶A。另一種適宜的蛋白酶是得自于解淀粉芽胞桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)的Y217L變體，如US專利5,700,676中所描述的，以下稱作蛋白酶B。適宜的還有本文所稱的蛋白酶C，其是US專利6,482,628中描述的改性細(xì)菌絲氨酸蛋白水解酶；及蛋白酶D，其是US專利5,972,682中描述的改性細(xì)菌絲氨酸蛋白水解酶。適宜的還有US專利5,677,163中描述的LG12枯草芽胞桿菌(B.subtilis)。
其它可在本發(fā)明的實(shí)踐中使用的蛋白酶可以選自Savinase、Esperase、Maxacal、Purafect、BPN′、蛋白酶A、蛋白酶B、蛋白酶C、蛋白酶D及其混合物。蛋白酶在本發(fā)明制劑中的存在量通常為硅氧烷基質(zhì)重量的約0.01％至約0.5％或者約0.1mg/g至約10.0mg/g，并且優(yōu)選約0.1mg/g至約5.0mg/g。
本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解，本發(fā)明不限于上述所列的酶。本領(lǐng)域技術(shù)人員還應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的局部用制劑中可以使用一種或多種活性劑。
活性劑可以發(fā)揮各種各樣的功能。例如基質(zhì)可以釋放蛋白酶和其它酶清除劑，用于局部性除去壞死組織和一般的傷口清潔，凝固形成和凝塊除去酶，產(chǎn)生過氧化物、過酸、活化氧物質(zhì)和抗粘連催化拮抗物(用于自身滅菌、抗感染和加速愈合)的試劑及用于皮膚治療的試劑等等。
本發(fā)明的制劑可以具有任何適宜量的組分。例如外相可以占局部用制劑的約50.000％至約99.999％。內(nèi)相可以含有約0.001％至約2.000％的活性劑和約0.001％至約49.999％親水性載體。當(dāng)向制劑中添加表面活性劑時(shí)，表面活性劑可以占約0.001％至約60.000％，更通常占約0.100％至約50.000％。當(dāng)添加親水性組分時(shí)，親水性組分可以占制劑的約0.001％至約50.000％，并且親水性組分可以更通常占局部用制劑的約5.000％至約40.000％。在另一個(gè)實(shí)施方案中，親水性組分可以占制劑的約10.000％至約35.000％。在另一個(gè)實(shí)施方案中，親水性組分可以占制劑的約15.000％至約35.000％。
本發(fā)明的制劑可以通過如下過程來產(chǎn)生，通過將含活性劑的親水性載體溶液如丙二醇溶液與親水性組分溶液一起在旋轉(zhuǎn)混合器上于約30rpm下混合約15分鐘來制備內(nèi)相。將外相的成分，如硅氧烷基質(zhì)和硅氧烷基表面活性劑，預(yù)先混合獲得均相混合物。
待內(nèi)相和外相各自制成之后，可以進(jìn)行乳化或分散的機(jī)械操作。優(yōu)選，用高剪切的實(shí)驗(yàn)室混合器，即，具有正方形孔高剪切篩網(wǎng)的Silverson L4R(可獲得自 Silverson Machins，Inc.，EastLongmeadow，MA)，將內(nèi)相添加至外相中并且劇烈攪拌。這種高剪切混合導(dǎo)致產(chǎn)生具有約0.1-50μm，約0.1-0μm和約0.i-5μm直徑的液滴，并且該液滴具有非常窄的尺寸分布?；旌衔锏臄嚢杩梢栽诩s5400rpm下進(jìn)行約90秒。然后，可以將所得的混合物轉(zhuǎn)移至適宜的容器中進(jìn)行固化。設(shè)計(jì)容器的大小和/或形狀以提供合意的貼劑。
或者，可以通過手動(dòng)混合來制備敷料。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，如上所述制備內(nèi)相和外相，并且將內(nèi)相添加至外相中。然后在容器中通過用小刮勺施加環(huán)形運(yùn)動(dòng)來劇烈攪拌混合物約30秒，形成敷料。內(nèi)相和外相的手動(dòng)混合可以導(dǎo)致產(chǎn)生具有約10至約1000μm直徑的內(nèi)相液滴。
在施用給皮膚之前，可以將本發(fā)明的制劑澆鑄成膜，或者直接施用于皮膚，讓它們?cè)谄つw上就地聚合。根據(jù)本發(fā)明，當(dāng)施用于皮膚時(shí)，″鋪展型″薄膜聚合，并且可以來自軟管中的乳膏或軟膏、小香包、滾球、噴劑、貼劑、繃帶等的形式傳遞。可以通過將硅氧烷橡膠，例如加成固化物(類似于凝膠，但用二氧化硅補(bǔ)強(qiáng))或縮合固化物，例如可獲得自Dow Corning Corporation(Midland，MI)的Dow Corning7-5300 FILM-IN-PLACE COATING，摻入外相中來獲得薄膜。當(dāng)與內(nèi)相混合時(shí)，所得的乳液被允許固化并且提供″鋪展型″薄膜、貼劑或繃帶，當(dāng)施用于皮膚上時(shí)，乳液聚合并且有效地釋放諸如蛋白酶的活性劑?？梢詫⑷橐轰佌乖诨咨线_(dá)到合意的厚度。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解，本發(fā)明的敷料可以通過任何適宜的方法來制備并且制備方法不限于本文所述的那些方法。
本發(fā)明的軟膏可以通過如下過程來產(chǎn)生，將硅氧烷彈性體和硅氧烷表面活性劑一起攪拌，形成外相，其中所述硅氧烷彈性體如DowCorning9041 SILICONE ELASTOMER BLEND，所述硅氧烷表面活性劑如Dow Corning5200 FORMULATION AID，其可獲得自Dow CorningCorporation(Midland，MI)。內(nèi)相可以通過將活性劑溶液和諸如PVA的親水性載體混合在一起來制備。可以通過將內(nèi)相緩慢添加至外相中，同時(shí)進(jìn)行恒定攪拌，而將內(nèi)相摻入外相中。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以將本發(fā)明的制劑制備成使活性劑的釋放速率達(dá)到最佳，以便適于給定的用途。例如可以選擇硅氧烷基質(zhì)，以便提供增加或降低的活性劑釋放速率。活性劑的釋放速率可以通過向硅氧烷基質(zhì)添加親水性組分如PVA和PVP來增加。類似地，添加增加量的親水性載體可以增加活性劑的釋放速率，例如可以使用最高約50％重量的親水性載體來形成制劑?；蛘?，可以選擇硅氧烷基質(zhì)，以便增加活性劑的釋放速率。例如具有低交聯(lián)密度的硅氧烷基質(zhì)比具有高交聯(lián)密度的硅氧烷基質(zhì)能夠提供更快的活性劑釋放速率。
也可以改變敷料貼劑的厚度來影響活性劑的釋放速率。為增加活性劑的釋放速率，可以將貼劑的厚度向下調(diào)整。此外，可以將敷料制備成能夠吸留更多的空氣。隨著敷料的吸留性增加，活性劑的釋放速率可以增加。
類似地，傷口床的參數(shù)可以引起活性劑釋放速率增加或降低。例如隨著傷口床的含水量增加，活性劑的釋放速率也可以增加。或者，隨著傷口床的溫度增加，活性劑的釋放速率可以增加。由此，可以選擇制劑的各種參數(shù)，以便針對(duì)給定的傷口床和敷料或軟膏條件，以合意的釋放速率最佳地傳遞活性劑。
通常來說，應(yīng)當(dāng)將制劑配制成能夠提供可以儲(chǔ)存規(guī)定期限的敷料或軟膏，而不會(huì)喪失顯著比例的活性劑活性。例如敷料或軟膏可以在室溫下穩(wěn)定最長至六個(gè)月的期限，而不喪失超過有效比例活性的活性。
如上所討論的，制劑可以制備成致使活性劑或試劑從硅氧烷基質(zhì)中釋放，從而可以去除壞死組織。制劑可以是流體吸留性的，并且這種吸留性可以促進(jìn)產(chǎn)生在制劑所覆蓋的區(qū)域內(nèi)的潮濕的傷口環(huán)境。這種潮濕的傷口環(huán)境可以允許制劑所覆蓋的壞死組織溶脹，并且這種溶脹可以允許活性劑更有效地和有選擇性地除去溶脹的壞死組織。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，具有壞死組織的傷口周圍的區(qū)域可以具有涂敷在其上的粘合劑，并且粘合劑可以用來將制劑粘附在傷口上面。粘合劑可以包括硅氧烷基質(zhì)，其包括如本文所述的硅氧烷壓敏粘合劑(如Dow CorningPSA 7-4402)、親水性載體(如PVA)和活性劑，其是經(jīng)過選擇的，以抑制所選擇的用于去除壞死組織的活性劑，以便健康的組織受到保護(hù)?；钚詣┛梢匀绫疚乃鰪恼澈蟿┲嗅尫?。例如如果在傷口上面的制劑中的活性劑包括蛋白酶，則粘合劑中的活性劑可以是蛋白酶抑制劑。適宜的蛋白酶抑制劑的實(shí)例包括但不限于絲氨酸蛋白酶抑制劑，如在絲氨酸蛋白酶抑制劑、Kunitz、Kazal和白細(xì)胞蛋白酶類抑制劑中所發(fā)現(xiàn)的那些抑制劑。這種適宜的抑制劑可見R.M.Roberts，等，Regulation and Regulatory Roleof ProteinaseInhibitors，Crit.Rev.Eukaryot.Gene Expr.5(3-4)385-436(1995)。
為使本發(fā)明更容易理解，參考以下實(shí)施例，這些實(shí)施例旨在對(duì)本發(fā)明進(jìn)行舉例說明，但不限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1進(jìn)行第一個(gè)實(shí)驗(yàn)來評(píng)價(jià)蛋白酶從硅氧烷基質(zhì)中的緩釋。使用松散或輕度交聯(lián)的硅氧烷彈性體組合物(Dow Corning9040)和硅氧烷基表面活性劑(Dow Corning9011)，二者均可商購獲得自Dow CorningCorporation(Midland，MI)，形成Dow Corning9040和Dow Corning9040/9011硅氧烷彈性體制劑。將1.1mg/ml蛋白酶A(得自于遲緩芽孢桿菌(B.lentus))溶解于丙二醇的儲(chǔ)備溶液添加至這兩種DowCorning組合物中。將5ml儲(chǔ)備溶液樣品添加至20克的9040制劑中并且還添加至20克的9040/9011制劑中，其中所述9040/9011制劑含有10克的9040制劑和10克的9011制劑。制備含有9040和9040/9011以及水代替儲(chǔ)備酶溶液的對(duì)照。除此之外，為測定硅氧烷基質(zhì)的任何組分是否抑制蛋白酶，制備另一種樣品，其具有等量的DowCorning9040和9040/9011酶制劑，和不含蛋白酶的含水對(duì)照。這些抑制對(duì)照通過從不含蛋白酶的樣品中取等分部分，并且將它們添加至等量的酶制劑樣品的等分部分中來制備，以便觀察對(duì)蛋白酶活性的抑制。然后將樣品材料在通風(fēng)廚中風(fēng)干兩周。
將Dow Corning9040/9011制劑干燥成薄膜并且將DowCorning9040組合物干燥成餅塊形式燥。使用標(biāo)準(zhǔn)分析蛋白酶試驗(yàn)來分析樣品，使用N-琥珀酰-L-Ala-L-Ala-L-Pro-L-Phe-對(duì)硝基酰苯胺(SAAPFpNA)，如Delmar等(1979) Anal.Biochem.94，316-320；Achtstetter，Arch.Biochem.Biophys 207445-54(1981))(pH6.5，25℃)中所描述的。分析試驗(yàn)使用Hewlett Packard 8451A二極管測定分光光度計(jì)在410納米下測定釋放的蛋白酶，以mAbs/min為單位計(jì)。此第一個(gè)實(shí)施例的結(jié)果示于下表1表1.蛋白酶的釋放
*表達(dá)單位是mAbs/min釋放的蛋白酶。
這些數(shù)據(jù)說明，在5小時(shí)的期限內(nèi)，蛋白酶從硅氧烷基質(zhì)中得到有效釋放。數(shù)據(jù)來自于儲(chǔ)存干燥兩周以上的物料。將不含蛋白酶的硅氧烷制劑對(duì)照和抑制對(duì)照按相同的容積溫育并且溫育與含蛋白酶的硅氧烷基質(zhì)相同的時(shí)間。抑制樣品顯示相當(dāng)一致值的蛋白酶活性，其低于酶制劑的蛋白酶活性。結(jié)果說明，當(dāng)將附加的制劑添加至酶樣品中時(shí)，可能存在一些輕度抑制性化合物。
實(shí)施例2進(jìn)行另一個(gè)實(shí)驗(yàn)來評(píng)價(jià)蛋白酶從硅氧烷基質(zhì)中的緩釋。將0.81mg/ml蛋白酶A的聚乙二醇儲(chǔ)備溶液的0.5ml等分部分轉(zhuǎn)移至小的聚丙烯稱重船中。接下來，將5.0ml硅氧烷橡膠組合物(DowCorning7-5300，Dow Corning Corporation，Midland，MI)添加至蛋白酶溶液中并且在其添加的15秒鐘內(nèi)混合。據(jù)認(rèn)為，DowCorning7-5300組合物具有作為″鋪展型″薄膜、貼劑或繃帶的用途。然后，讓混合物固化30分鐘。固化后，使用1.0ml蒸餾水將混合物洗滌三次。將各洗液如上所述地使用SAAPFpNA分析試驗(yàn)在等分部分上進(jìn)行分析，并且測定洗液中的酶的量。然后將組合物在其側(cè)面上干燥15分鐘，接著附加15分鐘放平。最后，將5.0ml蒸餾水添加至稱重船并且輕輕渦旋幾秒。從零時(shí)間點(diǎn)取200μl等分部分。繼續(xù)渦旋稱重船，每小時(shí)時(shí)間點(diǎn)取200μl。
本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果示于圖1中。在洗液中回收了9％的蛋白酶活性，并且在4小時(shí)間，有3.8％的蛋白酶從硅氧烷基質(zhì)中釋放。
進(jìn)一步檢測Dow Corning7-5300硅氧烷橡膠組合物的脂肪酶釋放，使用獲得自P.mendocina的脂肪酶，通過上面直接描述的方法。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果以mAbs/min為單位計(jì)示于下表2中表2.脂肪酶釋放
洗液中回收了18％的脂肪酶活性，并且在9小時(shí)期間，有2.2％的脂肪酶釋放。
圖2A顯示了蛋白酶A的釋放/傳遞，圖2B顯示了脂肪酶從DowCorning7-5300硅氧烷橡膠溶液中的釋放/傳遞。


，隨時(shí)間，有～2-4％的添加酶從硅氧烷基質(zhì)中線性釋放。
實(shí)施例3進(jìn)行另一個(gè)實(shí)驗(yàn)來評(píng)價(jià)親水性添加劑對(duì)蛋白酶A從硅氧烷基質(zhì)中緩釋的影響。首先，將測試用敷料或更具體說是含有蛋白酶的貼劑澆鑄至小的平皿(大約3cm直徑)中，致使貼劑的總重量是恒定的(約2克)并且貼劑中的酶濃度也是恒定的(約0.6mg酶/克貼劑)。貼劑包括松散或輕度交聯(lián)的硅氧烷彈性體組合物(Dow Corning9040)和硅氧烷基表面活性劑(Dow Corning9011)，二者均可商購獲得自DowCorning Corporation(Midland，MI)。除此之外，還測試Dow Corning7-5300(硅氧烷橡膠組合物)。此外，制劑中含有不同量的PVA、高丙二醇含量PVA、或PVP，通過攪拌來添加它們。
使用兩種方法來評(píng)價(jià)酶的釋放。在第一種方法中，將貼劑洗滌，以除去任何可能存在于貼劑表面上和非常接近貼劑表面的酶。將約1ml的溶解緩沖液(10 mM Tris、10 mM CaCl2和0.005％Tween 80，pH 5.4)添加至平皿測試貼劑的頂部。然后將緩沖液渦旋20秒并且將緩沖液潷倒至Eppendorf管中進(jìn)行分析。重復(fù)洗滌步驟三次并且測定每次洗液的酶活性。將結(jié)果匯總，得到洗滌過程期間釋放的酶的總量。包括圖3A-3C中的零時(shí)間點(diǎn)的酶的量。
另一種方法不包括洗滌步驟。將約5ml的溶解緩沖液吸移至測試貼劑的頂部并且將平皿蓋上蓋子以便消除蒸發(fā)。然后，將含有測試貼劑和溶解緩沖液的平皿在橢圓混合器上于約75rpm下渦旋，并且以1小時(shí)為增量，取出10μl等分部分的溶解緩沖液進(jìn)行酶活性分析。將等分部分直接吸移至含有測定緩沖液(100 mM Tris和0.005％ Tween80，pH 8.6)的比色杯中并且在UV/可見光分光計(jì)上測定酶活性，得到溶解緩沖液中的酶的濃度，以mg/ml計(jì)。
圖3A顯示了具有不同量PVA和高PG(丙二醇)含量PVA的酶從DowCorning9040/9011硅氧烷基質(zhì)中的釋放。正如圖3A中所看到的，向硅氧烷基質(zhì)中添加較大量的親水性PVA增加了酶的釋放速率。同樣，圖3B顯示了蛋白酶A從各種含量PVA的Dow Corning7-5300制劑中的釋放百分率。正如從圖中所看到的，釋放速率隨PVA增加而增加。圖3C顯示了酶從具有不同量PVP的Dow Corning9040/9011硅氧烷基質(zhì)中的釋放。正如從圖3C中看到的，向硅氧烷基質(zhì)中添加親水性PVP增加了酶的釋放速率。
實(shí)施例4進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來評(píng)價(jià)硅氧烷基質(zhì)對(duì)蛋白酶B從硅氧烷基質(zhì)中緩釋的影響。首先，將測試用敷料或更具體說是含有蛋白酶的貼劑澆鑄至小的平皿(大約3cm直徑)中，致使貼劑的總重量是恒定的(約2克)并且貼劑中的酶濃度也是恒定的(約0.6mg試劑/克貼劑)。貼劑包括松散或輕度交聯(lián)的硅氧烷彈性體組合物(Dow Corning9040)和硅氧烷基表面活性劑(Dow Corning9011)，二者均可商購獲得自Dow CorningCorporation(Midland，MI)。或者，貼劑包括Dow CorningPSA 7-4402壓敏粘合劑或Dow Corning7-FC-4210多孔彈性體，二者均可獲得自Dow Corning Corporation(Midland，MI)。此外，制劑含有0％或20％PVA。
使用兩種方法來評(píng)價(jià)酶的釋放。在第一種方法中，將貼劑洗滌，以除去任何可能存在于貼劑表面上和非常接近貼劑表面的酶。將約1ml的溶解緩沖液(10 mM Tris、10 mM CaCl2和0.005％Tween80，pH 5.4)添加至平皿測試貼劑的頂部。然后將緩沖液渦旋20秒并且將緩沖液潷倒至Eppendorf管中進(jìn)行分析。重復(fù)洗滌步驟三次并且測定每次洗液的酶活性。將結(jié)果匯總，得到洗滌過程期間釋放的酶的總量。包括圖4中的零時(shí)間點(diǎn)的酶的量。
另一種方法不包括洗滌步驟。將約5ml的溶解緩沖液吸移至測試貼劑的頂部并且將平皿蓋上蓋子以便消除蒸發(fā)。然后，將含有測試貼劑和溶解緩沖液的平皿在橢圓混合器上于約75rpm下渦旋，并且以1小時(shí)為增量，取出10μl等分部分的溶解緩沖液進(jìn)行酶活性分析。將等分部分直接吸移至含有測定緩沖液(100 mM Tris和0.005％Tween80，pH 8.6)的比色杯中并且在UV/可見光分光計(jì)上測定酶活性，得到溶解緩沖液中的酶的濃度，以mg/ml計(jì)。
圖4顯示了該酶釋放研究的結(jié)果。正如從圖中看到的，PSA 7-4402基質(zhì)具有最大的釋放速率。酶的釋放速率受硅氧烷基質(zhì)交聯(lián)密度的影響。
實(shí)施例5進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來觀察貼劑厚度對(duì)酶釋放速率的影響。將含有蛋白酶B、7-5300硅氧烷和其它組分例如PVA的測試制劑乳化。使用刮膜器(UVProcess Supply，Inc.，Chicago)，將制劑鋪展在Mylar片材上。通過調(diào)整刀片和Mylar片材之間的縫隙來控制涂敷涂層的厚度。分別涂敷13和25μm厚的涂層。允許涂層干燥或完全固化之后，從Mylar片材上切出25mm直徑的測試圓片。使用數(shù)字涂層厚度計(jì)(Elcometer，Manchester，UK)測定涂層的最終干厚度。還測定測試樣品圓片的最終干重，以便酶的有效載荷是精確已知的。測定Mylar的單獨(dú)的重量和厚度并且從Mylar上的樣品的重量和厚度中減去，得到樣品單獨(dú)的重量的厚度。
使用Franz滲濾池(Amie Systems，Riegelsville，PA)研究酶的釋放。將測試樣品安裝在滲濾池頂部并且給池填充預(yù)熱至37℃的13.7毫升溶解緩沖液(10mM MES，含10mM NaCl和0.005％Tween80，pH 5.5)。小心除去滲濾池內(nèi)存在的任何空氣泡。
將池的攪拌速率預(yù)設(shè)至50rpms。以定期的時(shí)間間隔，從滲濾池中取出0.1ml的樣品等分部分并且分析酶活性，得到活性酶濃度，以單位mg/ml計(jì)。還計(jì)算釋放的酶的百分率。
正如參考圖5所看到的，發(fā)現(xiàn)釋放速率與貼劑厚度呈反比。因此，從最薄的貼劑中可達(dá)到100％的酶的釋放。
實(shí)施例6進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來研究蛋白酶從軟膏制劑中的釋放。如下制備測試軟膏制劑，通過制備含有硅氧烷彈性體Dow Corning 9041和硅氧烷表面活性劑Dow Corning 5200制劑助劑(二者均可獲得自Dow CorningCorporation(Midland，MI))的外相。制備含有蛋白酶B儲(chǔ)備溶液的內(nèi)相。此外，將內(nèi)相制備成含有0或20％的40％PVA溶液。蛋白酶B儲(chǔ)備溶液中含有活性酶、甲酸鈉、氯化鈣、水和PG。使用機(jī)械攪拌器將內(nèi)相和外相混合。軟膏具有約3毫克酶/克軟膏。
制得軟膏制劑之后，使用Hansen軟膏池(Hansen，Chatworth，CA)測定它們的釋放速率，以便測定制劑的穩(wěn)定性。將大約0.5克軟膏裝入軟膏池的軟膏劑量區(qū)。將0.45μm HT Tuffryn膜(Pall Corp.，Ann Arbor，MI)放在軟膏劑量的頂部并且將軟膏池密封關(guān)閉。然后將軟膏池放入軟膏池?zé)恐?，并且給燒瓶填充25毫升pH 5.5緩沖溶液(10mM MES，10mM CaCl2，0.005％Tween)，使軟膏池浸沒在緩沖溶液中。試驗(yàn)在30℃下進(jìn)行并且使用槳葉將緩沖液在恒定的50rpms下攪拌。10min、1hr、2hrs、4hrs、8hrs、16hrs和24hrs之后，借助自動(dòng)取樣器取出0.5ml等分部分。在UV/可見光分光計(jì)上測定酶活性，得到溶解緩沖液中的酶活性，以mg/ml計(jì)。該溶解試驗(yàn)平行進(jìn)行6次并且匯報(bào)平均值。
參看圖6，添加PVA溶液使得酶在24小時(shí)的期間部分地從軟膏中釋放。從圖6中看出，軟膏提供了可以用于局部處理皮膚用的制劑。
實(shí)施例7進(jìn)行穩(wěn)定性研究來測定室溫下儲(chǔ)存的干貼劑內(nèi)的酶的穩(wěn)定性。經(jīng)過儲(chǔ)存后的酶的釋放與上述實(shí)施例所匯報(bào)的初始釋放數(shù)據(jù)相當(dāng)，說明酶在儲(chǔ)存期間保持穩(wěn)定。將干貼劑儲(chǔ)存0至6個(gè)月的時(shí)間，并且在合適的時(shí)間點(diǎn)測定酶的釋放。將含有蛋白酶A、9040/9011硅氧烷和其它組分的測試制劑乳化。測試制劑含有3.1250g干重的DC-9040硅氧烷、3.2500g干重的DC-9011硅氧烷表面活性劑、2.5mg/g蛋白酶A和4.2000g干重的PVA。使用刮膜器(UV Process Supply，Inc.，Chicago)將制劑鋪展在Mylar片材上。通過調(diào)整刀片和Mylar片材之間的縫隙來控制涂敷涂層的厚度。允許涂層干燥或完全固化之后，從Mylar片材上切出25mm直徑圓片。使用數(shù)字涂層厚度計(jì)(Elcometer，Manchester，UK)測定涂層的最終干厚度，并且樣品大約100μm厚。還測定測試樣品圓片的最終干重，以便酶的有效載荷是精確已知的。測定Mylar的單獨(dú)的重量和厚度并且從Mylar上的樣品的重量和厚度中減去，得到樣品單獨(dú)的重量的厚度。
制備含有存在于50％丙二醇中的蛋白酶A儲(chǔ)備溶液(含有400ppm氯化鈣的50％甲酸鈉緩沖液，pH 5.5)的對(duì)照。將對(duì)照室溫下儲(chǔ)存，并且在不同時(shí)間點(diǎn)測試保留的酶活性。據(jù)預(yù)計(jì)，蛋白酶A酶在對(duì)照溶液中是穩(wěn)定的。
使用Hanson(Hanson，Chatsworth，CA)溶解測試儀進(jìn)行酶釋放研究，其中所述溶解測試儀裝配有自動(dòng)取樣附件和小體積溶解試劑盒。使用橡膠膠粘劑，將測試樣品固定于3/16″厚的直徑與樣品相同(25mm)的玻璃圓盤上。然后將樣品裝入溶解容器中，有測試樣品的側(cè)面朝上。將25毫升溶解緩沖液(10mM MES，含10mM NaCl和0.005％Tween80，pH 5.5)傾在各樣品的頂部并且立即將攪拌漿葉連同自動(dòng)取樣器管一起降低至緩沖液中。給溶解容器封蓋，以便最大程度地減少蒸發(fā)并且在50rpm下開始攪拌。自動(dòng)取樣器按規(guī)定時(shí)間點(diǎn)取出0.5ml或1ml等分部分，并且使用上述的SAAPFpNA蛋白酶測定方法來分析這些樣品的酶活性，得到活性酶濃度，以mg/ml計(jì)。在一些情形中，通過測定280nm下的吸光度并且采用合適的消光系數(shù)，還在各時(shí)間點(diǎn)測定總蛋白質(zhì)。
參看圖7，顯示了儲(chǔ)存0、1、3和6個(gè)月的9040/9011干貼劑中的蛋白酶A的酶穩(wěn)定性。數(shù)據(jù)點(diǎn)是各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的6次平行測定的平均。對(duì)照溶液中的活性的損失大于硅氧烷貼劑中。因此，硅氧烷貼劑可為儲(chǔ)存和隨后的酶釋放提供更穩(wěn)定的方式。
實(shí)施例8進(jìn)行穩(wěn)定性研究來測定室溫下儲(chǔ)存的具有PSA 7-4402的干貼劑內(nèi)的酶的穩(wěn)定性。經(jīng)過儲(chǔ)存后的酶的釋放與上述實(shí)施例所匯報(bào)的初始釋放數(shù)據(jù)相當(dāng)，說明酶在儲(chǔ)存期間保持穩(wěn)定。將干貼劑儲(chǔ)存0至6個(gè)月的時(shí)間，并且在合適的時(shí)間點(diǎn)測定酶的釋放。將含有蛋白酶B、PSA7-4402硅氧烷和其它組分的測試制劑乳化。測試制劑含有33.7500g干重的PSA 7-4402硅氧烷、2.3500g干重的DC-193流體(可獲得自Dow Corning Corp.，Midland，MI)、3.8612mg/g蛋白酶B和9.4100g干重的PVA。使用刮膜器(UV Process Supply，Inc.，Chicago)將制劑鋪展在Mylar片材上。通過調(diào)整刀片和Mylar片材之間的縫隙來控制涂敷涂層的厚度。允許涂層干燥或完全固化之后，從Mylar片材上切出25mm直徑圓片。使用數(shù)字涂層厚度計(jì)(Elcometer，Manchester，UK)測定涂層的最終干厚度，并且樣品大約100μm厚。還測定測試樣品圓片的最終干重，以便酶的有效載荷是精確已知的。測定Mylar的單獨(dú)的重量和厚度并且從Mylar上的樣品的重量和厚度中減去，得到樣品單獨(dú)的重量的厚度。
制備含有存在于50％丙二醇中的蛋白酶B的儲(chǔ)備溶液(含有400ppm氯化鈣的50％甲酸鈉緩沖液，pH 5.5)的對(duì)照。將對(duì)照室溫下儲(chǔ)存，并且在不同時(shí)間點(diǎn)測試保留的酶活性。據(jù)預(yù)計(jì)，蛋白酶B酶在對(duì)照溶液中是穩(wěn)定的。
使用Hanson(Hanson，Chatsworth，CA)溶解測試儀進(jìn)行酶釋放研究，其中所述溶解測試儀裝配有自動(dòng)取樣附件和小體積溶解試劑盒。使用橡膠膠粘劑，將測試樣品固定于3/16″厚的直徑與樣品相同(25mm)的玻璃圓盤上。然后將樣品裝入溶解容器中，有測試樣品的側(cè)面朝上。將25毫升溶解緩沖液(10mM MES，含10mM NaCl和0.005％Tween80，pH 5.5)傾在各樣品的頂部并且立即將攪拌槳葉連同自動(dòng)取樣器管一起降低至緩沖液中。給溶解容器封蓋，以便最大程度地減少蒸發(fā)并且在50rpm下開始攪拌。自動(dòng)取樣器按規(guī)定時(shí)間點(diǎn)取出0.5ml或1ml等分部分，并且使用上述的SAAPFpNA蛋白酶測定方法來分析這些樣品的酶活性，得到活性酶濃度，以mg/ml計(jì)。在一些情形中，通過測定280nm下的吸光度并且采用合適的消光系數(shù)，還在各時(shí)間點(diǎn)測定總蛋白質(zhì)。
參看圖8，顯示了儲(chǔ)存0、1、3和6個(gè)月的PSA 7-4402干貼劑中的蛋白酶B的酶穩(wěn)定性。數(shù)據(jù)點(diǎn)是各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的6次平行測定的平均。硅氧烷貼劑可為儲(chǔ)存和隨后的酶釋放提供更穩(wěn)定的方式。然而，釋放的蛋白酶B百分率小于保留在蛋白酶B對(duì)照溶液中的活性的百分率。
實(shí)施例9進(jìn)行穩(wěn)定性研究來測定室溫下儲(chǔ)存的具有PSA 7-4401干貼劑內(nèi)的酶的穩(wěn)定性。經(jīng)過儲(chǔ)存后的酶的釋放與上述實(shí)施例所匯報(bào)的初始釋放數(shù)據(jù)相當(dāng)，說明酶在儲(chǔ)存期間保持穩(wěn)定。將干貼劑儲(chǔ)存0至3個(gè)月的時(shí)間，并且在合適的時(shí)間點(diǎn)測定酶的釋放。將含有蛋白酶B、PSA 7-4401硅氧烷和其它組分的測試制劑乳化。測試制劑含有33.9088干重的PSA 7-4401硅氧烷、2.3500g干重的DC-193流體、3.8723mg/g蛋白酶B和9.6170g干重的PVA。使用刮膜器(UV Process Supply，Inc.，Chicago)將制劑鋪展在Mylar片材上。通過調(diào)整刀片和Mylar片材之間的縫隙來控制涂敷涂層的厚度。允許涂層干燥或完全固化之后，從Mylar片材上切出25mm直徑圓片。使用數(shù)字涂層厚度計(jì)(Elcometer，Manchester，UK)測定涂層的最終干厚度，并且樣品大約100μm厚。還測定測試樣品圓片的最終干重，以便酶的有效載荷是精確已知的。測定Mylar的單獨(dú)的重量和厚度并且從Mylar上的樣品的重量和厚度中減去，得到樣品單獨(dú)的重量的厚度。
制備含有存在于50％丙二醇中的蛋白酶B的儲(chǔ)備溶液(含有400ppm氯化鈣的50％甲酸鈉緩沖液，pH 5.5)的對(duì)照。將對(duì)照室溫下儲(chǔ)存，并且在不同時(shí)間點(diǎn)測試保留的酶活性。
使用Hanson(Hanson，Chatsworth，CA)溶解測試儀進(jìn)行酶釋放研究，其中所述溶解測試儀裝配有自動(dòng)取樣附件和小體積溶解試劑盒。使用橡膠膠粘劑，將測試樣品固定于3/16″厚的直徑與樣品相同(25mm)的玻璃圓盤上。然后將樣品裝入溶解容器中，有測試樣品的側(cè)面朝上。將25毫升溶解緩沖液(10mM MES，含10mM NaCl和0.005％Tween80，pH 5.5)傾在各樣品的頂部并且立即將攪拌槳葉連同自動(dòng)取樣器管一起降低至緩沖液中。給溶解容器封蓋，以便最大程度地減少蒸發(fā)并且在50rpm下開始攪拌。自動(dòng)取樣器按規(guī)定時(shí)間點(diǎn)取出0.5ml或1ml等分部分，并且使用上述的SAAPFpNA蛋白酶測定方法來分析這些樣品的酶活性，得到活性酶濃度，以mg/ml計(jì)。在一些情形中，通過測定280nm下的吸光度并且采用合適的消光系數(shù)，還在各時(shí)間點(diǎn)測定總蛋白質(zhì)。
參看圖9，顯示了儲(chǔ)存0、1和3個(gè)月的PSA 7-4401干貼劑中的蛋白酶B的酶穩(wěn)定性。數(shù)據(jù)點(diǎn)是各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的6次平行測定的平均。硅氧烷貼劑可為儲(chǔ)存和隨后的酶釋放提供更穩(wěn)定的方式。然而，釋放的蛋白酶B百分率小于保留在蛋白酶B對(duì)照溶液中的活性的百分率。
實(shí)施例10進(jìn)行穩(wěn)定性研究來測定室溫下儲(chǔ)存的具有7-FC 4210的干貼劑內(nèi)的酶的穩(wěn)定性。經(jīng)過儲(chǔ)存后的酶的釋放與上述實(shí)施例所匯報(bào)的初始釋放數(shù)據(jù)相當(dāng)，說明酶在儲(chǔ)存期間保持穩(wěn)定。將干貼劑儲(chǔ)存0至1個(gè)月的時(shí)間，并且在合適的時(shí)間點(diǎn)測定酶的釋放。將含有蛋白酶B、7-FC4210基料和固體劑硅氧烷和其它組分的測試制劑乳化。測試制劑含有36.0000g干重的7-FC 4210基料硅氧烷、7.2000g干重的7-FC 4210固化劑、4.08000g干重的DC 225二甲聚硅氧烷流體(可獲得自DowCorning Corp.，Midland，MI)、4.2006mg/g蛋白酶B和12.2880g干重的PVA。使用刮膜器(UV Process Supply，Inc.，Chicago)將制劑鋪展在Mylar片材上。通過調(diào)整刀片和Mylar片材之間的縫隙來控制涂敷涂層的厚度。允許涂層干燥或完全固化之后，從Mylar片材上切出25mm直徑的測試圓片。使用數(shù)字涂層厚度計(jì)(Elcometer，Manchester，UK)測定涂層的最終干厚度，并且樣品大約100μm厚。還測定測試樣品圓片的最終干重，以便酶的有效載荷是精確已知的。測定Mylar的單獨(dú)的重量和厚度并且從Mylar上的樣品的重量和厚度中減去，得到樣品單獨(dú)的重量的厚度。
制備含有存在于50％丙二醇中的蛋白酶B的儲(chǔ)備溶液(含有400ppm氯化鈣的50％甲酸鈉緩沖液，pH 5.5)的對(duì)照。將對(duì)照室溫下儲(chǔ)存，并且在不同時(shí)間點(diǎn)測試保留的酶活性。
使用Hanson(Hanson，Chatsworth，CA)溶解測試儀進(jìn)行酶釋放研究，其中所述溶解測試儀裝配有自動(dòng)取樣附件和小體積溶解試劑盒。使用橡膠膠粘劑，將測試樣品固定于3/16″厚的直徑與樣品相同(25mm)的玻璃圓盤上。然后將樣品裝入溶解容器中，有測試樣品的側(cè)面朝上。將25毫升溶解緩沖液(10 mM MES，含10mM NaCl和0.005％Tween80，pH 5.5)傾在各樣品的頂部并且立即將攪拌片連同自動(dòng)取樣器管一起降低至緩沖液中。給溶解容器封蓋，以便最大程度地減少蒸發(fā)并且在50rpm下開始攪拌。自動(dòng)取樣器按規(guī)定時(shí)間點(diǎn)取出0.5ml或1ml等分部分，并且使用上述的SAAPFpNA蛋白酶測定方法來分析這些樣品的酶活性，得到活性酶濃度，以mg/ml計(jì)。在一些情形中，通過測定280nm下的吸光度并且采用合適的消光系數(shù)，還在各時(shí)間點(diǎn)測定總蛋白質(zhì)。
參看圖10，顯示了儲(chǔ)存0和1個(gè)月的7-FC 4210干貼劑中的蛋白酶B的酶穩(wěn)定性。數(shù)據(jù)點(diǎn)是各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的6次平行測定的平均。硅氧烷貼劑可為儲(chǔ)存和隨后的酶釋放提供穩(wěn)定的方式。然而，釋放的蛋白酶B百分率小于保留在蛋白酶B對(duì)照溶液中的活性的百分率。
實(shí)施例11使用丟棄的焦痂作為體外模型，用于測試適宜于清創(chuàng)術(shù)的酶的效能。將焦痂從受傷或壞疽的死組織中蛻掉。酶可為局限于或沒機(jī)會(huì)使用器具進(jìn)行快速清創(chuàng)的患者提供另一種可供選擇的創(chuàng)傷快速清創(chuàng)方式，其中所述器具是利用手術(shù)解剖刀或其它鋒利手術(shù)工具。拋棄的焦痂獲得自人糖尿病患者中存在的足潰瘍的快速清創(chuàng)術(shù)。
在清創(chuàng)的同一天，獲得兩塊大的焦痂，并且分成兩塊。將這兩塊各自進(jìn)一步分成三小塊。在6個(gè)平皿的每個(gè)平皿中放置一3×3細(xì)網(wǎng)眼的網(wǎng)墊并且將平皿稱重。在各個(gè)網(wǎng)墊上放一小塊焦痂，并且將平皿再次稱重。通過從平皿、網(wǎng)墊和焦痂的重量中減去平皿和網(wǎng)墊的重量，獲得焦痂的干重。將20ml可商購獲得的磷酸鹽緩沖的鹽水(PBS)添加至各平皿中。6個(gè)平皿中的2個(gè)平皿是對(duì)照，僅具有PBS和得自兩個(gè)初始焦痂片的每一個(gè)焦痂樣品。6個(gè)平皿中的接下來的2個(gè)平皿中的PBS各自含有250μg/20ml PBS的蛋白水解膠原酶，該酶得自溶組織梭菌(Clostridium histolyticum)(Sigma)。最后兩個(gè)平皿中的PBS溶液各自含有250μg/20ml PBS的蛋白酶B枯草溶菌素酶(得自Genencor International，Inc.)。
然后將網(wǎng)墊和焦痂保持浸入PBS溶液中48小時(shí)。48小時(shí)之后，檢查樣品并且將第二20ml量的PBS添加至各平皿中，包括向四個(gè)酶樣品平皿中各自添加相同的250μg/20ml PBS酶樣品。浸泡另外48小時(shí)之后，將各平皿中的焦痂轉(zhuǎn)移至新平皿中的新3×3網(wǎng)墊中。將平皿稱重。
表3顯示了6個(gè)樣品重量的變化。在96小時(shí)結(jié)束時(shí)所有樣品都變重，據(jù)推測是因?yàn)榻桂栉找后w而溶脹。膠原酶樣品具有較低的百分比重量增重，據(jù)推測是由于焦痂的降解。蛋白酶樣品也具有較低的百分比重量增重，據(jù)推測是由于焦痂的降解。
表3焦痂重量的變化
96小時(shí)時(shí)視覺觀察焦痂結(jié)構(gòu)完整性的變化并且證實(shí)發(fā)生降解。在用蛋白酶處理的樣品中，焦痂變得多少有些膠凝狀，并且在一些情形中，當(dāng)用PBS洗滌時(shí)焦痂完全崩解。對(duì)照和膠原酶焦痂處理的樣品沒有變成膠凝狀并且當(dāng)用PBS洗滌時(shí)不崩解。
對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，在不背離本發(fā)明的范圍的前提下可以做出各種改變，本發(fā)明的范圍不能認(rèn)為限于說明書所描述的內(nèi)容。
實(shí)施例12進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)來比較許多適宜于清創(chuàng)術(shù)的酶的效能。使用糖尿病患者足潰瘍焦痂和模擬灌溉來模仿傷口狀況。按照以下方案進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
標(biāo)記并且稱重小的帶蓋平皿。然后將2-平方英寸的網(wǎng)墊添加至各平皿并且將平皿再稱重。然后用實(shí)驗(yàn)刀或剪子，將糖尿病患者足潰瘍焦痂分離成視覺上相同的部分。將樣品在平皿中的網(wǎng)墊上稱重測試。如果樣品彼此在10％或0.1g內(nèi)，則進(jìn)行下一步驟。如果樣品彼此不在10％或0.1g內(nèi)，則將它們按重量的基礎(chǔ)重分配，直至在10％或0.1g內(nèi)。
然后，將焦痂放在平皿的網(wǎng)墊上稱重。將合適體積的存在于PBS溶液(Dulbecco′s磷酸鹽緩沖的鹽水，Mediatech，Inc.，含0.002％添加的疊氮化鈉)中的酶添加至網(wǎng)墊中，以便引入250微克酶。立即加入10ml PBS溶液。將平皿蓋上蓋兒并且轉(zhuǎn)移至無菌通風(fēng)櫥。理想地，應(yīng)當(dāng)將10ml PBS鈉添加至酶被吸入網(wǎng)墊中的斑點(diǎn)處，以確保充分混合。允許平皿在無菌通風(fēng)櫥中室溫下溫育48小時(shí)。
48小時(shí)之后，將網(wǎng)墊瀝干(讓網(wǎng)墊接觸平皿的側(cè)面，以瀝掉多余的液體)后轉(zhuǎn)移至無菌過濾燒瓶中的0.22微米濾器，所述燒瓶連接有一真空器并且具有開口。網(wǎng)墊干燥并且貼附于濾器。取出1ml平皿中的殘余反應(yīng)混合物并且放入eppendorf管中進(jìn)行48小時(shí)時(shí)的A280分析。
A280分析通過以下過程來進(jìn)行將樣品在eppendorf管中用PBS溶液稀釋直至樣品的吸光度在0.0-2.0吸收單位的線性范圍內(nèi)。分析在Amersham Bioscience Ultrospec 3100pro UV/VIS分光光度計(jì)上于280nm下進(jìn)行。A280分析用來測定酶是否水解焦痂并且從水解的焦痂中釋放游離的氨基酸或可溶性肽至殘余的反應(yīng)混合物中。
將30ml PBS溶液傾倒在焦痂樣品上面，傾倒的方式應(yīng)當(dāng)致使樣品不被從網(wǎng)墊上洗掉。從過濾燒瓶中取出網(wǎng)墊和焦痂樣品并且放入第二個(gè)標(biāo)記的平皿中。將洗液收集至瓶中，并且將瓶用螺旋蓋蓋住。將濾器單元丟棄。此洗滌步驟模仿酶施用后傷口的灌溉。
提供第二次酶的施用。將合適體積的酶添加至網(wǎng)墊中，以便引入250微克酶。在酶被吸入網(wǎng)墊中的斑點(diǎn)處附近，立即加入10ml PBS溶液。給平皿蓋上蓋并且轉(zhuǎn)移至無菌通風(fēng)櫥。將平皿溫育另外48小時(shí)。
48小時(shí)之后，將網(wǎng)墊瀝干(讓網(wǎng)墊接觸平皿的側(cè)面，以瀝掉多余的液體)后轉(zhuǎn)移至無菌過濾燒瓶中的0.22微米濾器，所述燒瓶連接有一真空器并且具有開口。網(wǎng)墊干燥并且貼附于濾器。取出1ml平皿中的殘余反應(yīng)混合物并且放入eppendorf管中進(jìn)行96小時(shí)時(shí)的A280分析。
將30ml PBS溶液傾倒在焦痂樣品上面，傾倒的方式應(yīng)當(dāng)致使樣品不被從網(wǎng)墊上洗掉。從過濾燒瓶中取出網(wǎng)墊和焦痂樣品，并且放入第三個(gè)標(biāo)記的平皿中并且稱重平皿。將洗液收集至瓶中，并且將瓶用螺旋蓋蓋住。將濾器單元丟棄。
將具有網(wǎng)墊的平皿放置在通風(fēng)櫥中過夜并且隨后稱重。計(jì)算網(wǎng)墊加焦痂的重量。再過24小時(shí)之后，將網(wǎng)墊加焦痂重新稱重。
用僅有PBS和焦痂樣品的空白進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。使用得自溶組織梭菌(Clostridium histolyticum)(Sigma)的蛋白水解膠原酶。此外，使用蛋白酶B枯草溶菌素酶(得自Genencor International，Inc.)。
表4顯示了焦痂樣品在進(jìn)行酶處理和洗滌之前和之后的重量，從表中可以看出，蛋白酶B對(duì)焦痂的降解似乎最有效。
表4焦痂重量的變化
表5顯示了殘余反應(yīng)混合物的48小時(shí)時(shí)和96小時(shí)時(shí)的A280分析結(jié)果。從表中可以看出，更多游離的氨基酸存在于蛋白酶B樣品中。由此，看上去蛋白酶B在降解焦痂方面更有效。
表5A280分析
實(shí)施例13按實(shí)施例12所述的情況進(jìn)行另一個(gè)實(shí)驗(yàn)。用僅有PBS和焦痂樣品的空白進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。使用得自溶組織梭菌(Clostridium histolyticum)(Sigma)的蛋白水解膠原酶。此外，使用蛋白酶B枯草溶菌素酶(得自Genencor International，Inc.)。
表6顯示了殘余反應(yīng)混合物的48小時(shí)時(shí)和96小時(shí)時(shí)的A280分析結(jié)果。從表中可以看出，更多游離的氨基酸存在于蛋白酶B樣品中。由此，看上去蛋白酶B在降解焦痂方面更有效。
表6A280分析
實(shí)施例14按實(shí)施例12所述的情況進(jìn)行另一個(gè)實(shí)驗(yàn)。用僅有PBS和焦痂樣品的空白進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。使用蛋白酶B枯草溶菌素酶(得自GenencorInternational，Inc.)。此外，使用US專利5,677,163中所述的LG12B.subtilis，該專利引入本文作為參考。
表7顯示了殘余反應(yīng)混合物的48小時(shí)時(shí)和96小時(shí)時(shí)的A280分析結(jié)果。從表中可以看出，更多游離的氨基酸存在于LG12溶液中。由此，看上去LG12在降解焦痂方面更有效。
表7A280分析
實(shí)施例15按實(shí)施例5制備含有蛋白酶B和7-5300硅氧烷的干膠片。此外，制備含有7-5300硅氧烷的對(duì)照干膠片。將干膠片放在1.6％酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基平板上并且在37℃下溫育1小時(shí)。含有蛋白酶B的干膠片水解脫脂乳，得到瓊脂透明區(qū)(clearing)。對(duì)照干膠片不能溶解脫脂乳得到透明區(qū)。
實(shí)施例16按實(shí)施例8制備含有蛋白酶B和PSA 7-4402硅氧烷的貼劑。將貼劑室溫下儲(chǔ)存13個(gè)月。將貼劑放在1.6％酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基平板上并且在37℃下溫育1小時(shí)。貼劑水解脫脂乳，得到少量瓊脂透明區(qū)。然后將平板在37℃下溫育過夜，貼劑進(jìn)一步水解脫脂乳，得到與實(shí)施例15的7-5300蛋白酶B貼劑相同量的透明區(qū)。
權(quán)利要求
1.一種局部用制劑，包括內(nèi)相和外相；其中，所述內(nèi)相分散在所述外相中；所述內(nèi)相包含有至少一種親水性載體和至少一種活性劑，所述活性劑可從所述外相釋放，以去除壞死組織；所述外相包含硅氧烷基質(zhì)；并且其中所述局部用制劑對(duì)流體是吸留性的，以當(dāng)施用于皮膚上時(shí)促進(jìn)產(chǎn)生潮濕的環(huán)境。
2.權(quán)利要求1的局部用制劑，其中所述至少一種活性劑是親水性的。
3.權(quán)利要求1的局部用制劑，其中所述內(nèi)相包含分散在所述外相中的液滴，并且其中所述液滴的直徑為約0.1μm至約2000μm或約0.1μm至約1000μm或約0.1μm至約500μm。
4.權(quán)利要求1的局部用制劑，其中所述液滴的直徑為約0.1μm至約200μm或約0.1μm至約100μm或約0.1μm至約50μm或約0.1μm至約10μm或約0.1μm至約5μm。
5.權(quán)利要求1的局部用制劑，其中所述至少一種親水性載體選自丙二醇、聚乙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物、甘油、醇、多元醇和水、及其組合。
6.權(quán)利要求1的局部用制劑，其中所述至少一種親水性載體包括聚丙二醇。
7.權(quán)利要求1的局部用制劑，其中所述至少一種親水性載體占所述局部用制劑的最多約50wt％。
8.權(quán)利要求1的局部用制劑，其中所述至少一種活性劑包括選自以下的至少一種酶水解酶，角質(zhì)酶，氧化酶，轉(zhuǎn)移酶，還原酶，半纖維素酶，酯酶，異構(gòu)酶，果膠酶，乳糖酶，過氧化酶，漆酶，觸酶，多肽，抗體，肽，激素，細(xì)胞因子和生長因子，及其組合。
9.權(quán)利要求1的局部用制劑，其中所述至少一種活性劑包括至少一種水解酶。
10.權(quán)利要求9的局部用制劑，其中所述水解酶選自脂肪酶和蛋白酶。
11.權(quán)利要求10的局部用制劑，其中所述蛋白酶選自枯草溶菌素蛋白酶、蛋白酶A、蛋白酶B或LG12。
12.權(quán)利要求9的局部用制劑，其中所述水解酶包括脂肪酶，并且其中所述脂肪酶占所述硅氧烷基質(zhì)的約0.0001wt％至約0.2wt％。
13.權(quán)利要求9的局部用制劑，其中所述水解酶包括蛋白酶，并且其中所述蛋白酶的濃度為所述局部用制劑的約0.1mg/g至約5.0mg/g。
14.權(quán)利要求1的局部用制劑，其中所述內(nèi)相還含有至少一種親水性組分。
15.權(quán)利要求14的局部用制劑，其中所述至少一種親水性組分選自聚乙烯醇和聚乙烯基吡咯烷酮及其組合。
16.權(quán)利要求15的局部用制劑，其中所述至少一種親水性組分占所述內(nèi)相的最多約50wt％，或所述內(nèi)相的最多約35wt％。
17.權(quán)利要求14的局部用制劑，其中所述至少一種親水性組分占所述局部用制劑的約5wt％至約40wt％，或約10wt％至約35wt％，或約15wt％至約35wt％。
18.權(quán)利要求14的局部用制劑，其中所述至少一種親水性組分包括水-增稠劑。
19.權(quán)利要求1的局部用制劑，其中所述硅氧烷基質(zhì)選自高分子量聚二甲基硅氧、松散或輕度交聯(lián)的硅氧烷彈性體、無填料的彈性體、多孔彈性體、硅氧烷橡膠、硅氧烷壓敏粘合劑及其組合。
20.權(quán)利要求1的局部用制劑，其中所述外相還含有硅氧烷基表面活性劑。
21.權(quán)利要求1的局部用制劑，其中選擇所述內(nèi)相和所述外相，以使所述局部用制劑包括局部用敷料，并且其中所述局部用敷料包括貼劑。
22.權(quán)利要求21的局部用制劑，其中所述貼劑最多約25μm厚。
23.權(quán)利要求21的局部用制劑，其中所述外相包含松散或輕度交聯(lián)的硅氧烷彈性體。
24.權(quán)利要求23的局部用制劑，其中所述內(nèi)相包含丙二醇和蛋白酶。
25.權(quán)利要求24的局部用制劑，其中所述內(nèi)相還包含選自聚乙烯醇和聚乙烯基丙烯的親水性組分。
26.權(quán)利要求1的局部用制劑，其中選擇所述內(nèi)相和所述外相，以使所述局部用制劑包括局部用敷料，并且其中所述局部用敷料包括鋪展膜。
27.權(quán)利要求26的局部用制劑，其中所述外相包含硅氧烷橡膠。
28.權(quán)利要求1的局部用制劑，其中選擇所述內(nèi)相和所述外相，以使所述局部用制劑包括軟膏。
29.權(quán)利要求28的局部用制劑，其中所述外相包含至少一種硅氧烷彈性體和至少一種硅氧烷表面活性劑。
30.權(quán)利要求29的局部用制劑，其中所述內(nèi)相包含活性劑和丙二醇。
31.權(quán)利要求30的局部用制劑，其中所述內(nèi)相還包含聚乙烯醇。
32.一種局部地提供活性劑的方法，包括提供流體吸留性的局部用制劑，其中所述局部用制劑包括內(nèi)相和外相；其中所述內(nèi)相分散在所述外相中；所述內(nèi)相包含至少一種親水性載體和至少一種活性劑，所述活性劑可從所述外相中釋放，以去除壞死組織；和所述外相包含硅氧烷基質(zhì)；使所述局部用制劑與患者的皮膚接觸，以使所述活性劑從所述硅氧烷基質(zhì)中局部釋放到所述患者的所述皮膚上。
33.權(quán)利要求32的方法，其中所述內(nèi)相還包含親水性組分，并且其中選擇所述親水性組分，以使所述活性劑以合意的速率從所述硅氧烷基質(zhì)中釋放。
34.權(quán)利要求32的方法，其中所述局部用制劑包括具有一定厚度的貼劑，并且其中選擇所述貼劑的所述厚度，以使所述活性劑以合意的速率從所述硅氧烷基質(zhì)中釋放。
35.權(quán)利要求32的方法，其中所述對(duì)流體的吸留性促進(jìn)產(chǎn)生潮濕環(huán)境，以允許被所述局部用制劑覆蓋的壞死組織溶脹，致使所述壞死組織變得溶脹；并且從所述硅氧烷基質(zhì)中釋放的所述活性劑選擇性地除去所述溶脹的壞死組織。
36.權(quán)利要求35的方法，還包括提供包括內(nèi)相和外相的第二局部用制劑，其中所述內(nèi)相分散在所述外相中；所述內(nèi)相包含至少一種親水性載體和至少一種第二活性劑，選擇所述第二活性劑，致使所述第二活性劑抑制所選擇的用于除去壞死組織的活性劑；所述外相包含硅氧烷基質(zhì)；并且所述硅氧烷基質(zhì)包含硅氧烷粘合劑；將所述第二局部用制劑置于所述患者的所述皮膚上傷口周圍的所述皮膚上；并且通過使局部用制劑與所述第二局部用制劑接觸，而將所述局部用制劑粘附在所述傷口上面，其中所述患者的所述傷口周圍的所述皮膚得到保護(hù)，免受所選擇的用于除去壞死組織的活性劑的影響。
全文摘要
本發(fā)明提供局部用制劑，用于釋放能夠去除壞死組織的活性劑，本發(fā)明還提供該局部用制劑的制造方法和使用方法。制劑可以具有分散在外相中的內(nèi)相。內(nèi)相可以是親水性載體和活性劑。外相可以是硅氧烷基質(zhì)。
文檔編號(hào)A61K9/06GK1849114SQ200480026084
公開日2006年10月18日 申請(qǐng)日期2004年8月13日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月10日
發(fā)明者R·R·博特, M·S·格伯特, P·C·克雷凱恩, I·馬佐, X·J-P·托馬斯 申請(qǐng)人:陶氏康寧公司, 金克克國際有限公司