專利名稱：黃斑變性和其他眼科疾病的緩解的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及眼科疾病的治療。更具體的是，本發(fā)明提供了通過包含羥胺化合物的藥物制劑的施用，減輕或預(yù)防黃斑變性和其他視網(wǎng)膜和周圍組織的有害疾病的方法。
背景技術(shù)：
在此引用了多種專利和其他文獻(xiàn)。每個這些專利和文獻(xiàn)的內(nèi)容在此整體引入作為參考。
作為身體的一個復(fù)雜而敏感的器官，眼睛會患多種疾病和其他影響其發(fā)揮正常功能的有害疾病。很多這種疾病可以存在于眼睛內(nèi)部，并且大部分尤其是存在于在眼睛的后面，那里存在著視神經(jīng)和視網(wǎng)膜、七層交替細(xì)胞和將光信號轉(zhuǎn)換為神經(jīng)信號的過程。視神經(jīng)和視網(wǎng)膜的疾病和變性病癥是全世界導(dǎo)致失明的最主要的原因。
明顯的視網(wǎng)膜退行性疾病是黃斑變性，也稱為老化相關(guān)性黃斑變性(AMD)。在50歲或更年長的美國人中，AMD是視力喪失的最常見原因，且其隨年齡的增加而愈加普遍。AMD可分為濕性的(新血管性的)(neovascular)或干性的(非新血管性的)。最為常見的是該疾病的干性形式。當(dāng)中心視網(wǎng)膜變得扭曲、具色素或最常見地變薄時，該疾病發(fā)生。黃斑變性的濕性形式引起最嚴(yán)重的視力喪失。黃斑變性的濕性形式通常與年齡老化相關(guān)，但能引起濕性黃斑變性的其它疾病包括嚴(yán)重的近視以及某些類似組織胞漿菌病的眼內(nèi)感染，其可在患有AIDS的個體中加重。包括遺傳構(gòu)成、年齡、營養(yǎng)、吸煙和暴露于陽光與否的多種因素都可能導(dǎo)致黃斑變性。
與糖尿病相關(guān)的視網(wǎng)膜病變是1型糖尿病失明的首要原因，在2型糖尿病中也很常見。視網(wǎng)膜病變的程度與患糖尿病的持續(xù)時間相關(guān)，通常開始于糖尿病發(fā)病之后的10年或更長時間。糖尿病的視網(wǎng)膜病變可分為(1)非增殖性或背景視網(wǎng)膜病變，其特征在于毛細(xì)管滲透性、水腫、出血、小動脈瘤、以及滲出物的增加，或(2)增殖性視網(wǎng)膜病變，其特征在于從視網(wǎng)膜向玻璃體延伸新血管、瘢痕化、纖維組織形成、以及視網(wǎng)膜脫落的潛在可能。一般認(rèn)為，糖尿病的視網(wǎng)膜病變至少部分由高血糖導(dǎo)致的糖基化蛋白的發(fā)展引起的。糖基化蛋白產(chǎn)生自由基，導(dǎo)致了氧化性組織損傷和諸如谷胱甘肽的細(xì)胞活性氧(ROS)清除劑的耗盡。
幾種其它較不常見但仍然使人衰弱的視網(wǎng)膜病變包括脈絡(luò)膜新血管膜(CNVM)，黃斑囊樣水腫(CME，也稱作黃斑水腫或黃斑水腫)，視網(wǎng)膜外膜(ERM)(黃斑皺褶)和黃斑裂孔。在CNVM中，起源于脈絡(luò)膜的異常血管滋長穿過了視網(wǎng)膜層。所述脆弱的新血管很容易破裂，從而引起血液或體液在視網(wǎng)膜層內(nèi)聚集。在CME中，可作為疾病、損傷或手術(shù)的后果發(fā)生，在黃斑層內(nèi)聚集體液，可以引起中心視覺的模糊、扭曲。ERM(黃斑皺褶)是在黃斑上形成的賽璐玢樣膜，其通過引起混濁和扭曲影響中心視覺。隨著其逐漸發(fā)展，在所述黃斑上的膜的收縮可引起腫脹。ERM在75歲以上的人群中最為常見。其病因?qū)W是未知的，但可能與糖尿病的視網(wǎng)膜病變、玻璃體后部脫落、視網(wǎng)膜脫離或創(chuàng)傷以及其它病癥相關(guān)。
另一種眼睛內(nèi)部的疾病是眼葡萄膜炎，或葡萄膜的炎癥。葡萄膜(色素層)由虹膜、睫狀體和脈絡(luò)膜組成。葡萄膜是眼球的三層包層的中間層，位于其后部(脈絡(luò)膜)部分的鞏膜和視網(wǎng)膜之間。眼葡萄膜炎可由創(chuàng)傷、感染或手術(shù)引起，并可感染任意年齡的人群。眼葡萄膜炎可解剖學(xué)地分為前部的、中部的、后部的或擴(kuò)散的。前部的眼葡萄膜炎感染眼睛的前部分，包括虹膜。中部的眼葡萄膜炎，也稱為外周眼葡萄膜炎位于緊接睫狀體區(qū)域的虹膜和晶狀體后面的區(qū)域中部。后部的眼葡萄膜炎也引起某種形式的視網(wǎng)膜炎，或可影響脈絡(luò)膜或視神經(jīng)。擴(kuò)散的眼葡萄膜炎涉及眼睛的所有部分。
青光眼是通過由視神經(jīng)損傷引起的視覺喪失的一系列眼部疾病的組合。由于不充分的眼部導(dǎo)液引起的較高的眼內(nèi)壓(IOP)是青光眼的主要原因。青光眼可隨眼睛年齡的老化而發(fā)展，或可作為眼睛損傷、炎癥、腫瘤或白內(nèi)障或糖尿病的老年病例的結(jié)果發(fā)生。其還可由諸如類固醇的某些藥物引起。此外，青光眼在不存在IOP升高的情況下也會發(fā)展。這種形式的青光眼與日裔祖先的遺傳(即正常壓力青光眼的家族史)，以及諸如心律不齊的系統(tǒng)性心臟病有關(guān)。
眼睛每天約產(chǎn)生一茶匙房水。通常情況下，這樣的液體通過稱為小梁網(wǎng)的海綿狀結(jié)締組織網(wǎng)、以其被產(chǎn)生出來的相同速率從眼睛中釋放出來。在一段時期之內(nèi)，自由基和其它的活性氧(ROS)能夠引起對于小梁網(wǎng)的逐漸的損傷。其結(jié)果是小梁網(wǎng)變得部分封阻，外流能力下降，且當(dāng)更多房水形成時IOP升高。盡管一開始所述IOP并未升高至足以引起任何值得注意的癥狀，但當(dāng)壓力維持在較高水平或繼續(xù)升高時，視神經(jīng)中的纖維被壓縮或破壞，導(dǎo)致了在若干年后的視覺逐漸喪失。Izzotti等人提供了在外流系統(tǒng)的微小但關(guān)鍵的組織結(jié)構(gòu)中將氧化性DNA損傷和青光眼相聯(lián)系的確鑿證據(jù)(Izzotti A，Sacca SC，Cartiglia C，De Flora S.，青光眼患者眼睛中的氧化性脫氧核糖核酸損傷(Oxidativedeoxyribonucleic damage in the eyes of glaucoma patients).Am J Med.2003；114)。他們在青光眼患者的小梁網(wǎng)組織中觀察到了8-氧-脫氧鳥苷(8-OH-dG)的量升高超過三倍。所述升高的氧化性DNA損傷還與諸如眼內(nèi)壓指數(shù)的臨床參數(shù)和視野喪失相關(guān)。
青光眼中視神經(jīng)病變的主要特征包括視神經(jīng)乳頭的特征性改變、存活視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目的下降以及視覺喪失。一般認(rèn)為級聯(lián)事件將視神經(jīng)乳頭的變性與該疾病中可觀察到的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的慢性死亡相聯(lián)系，且該級聯(lián)事件可通過神經(jīng)保護(hù)劑的使用而得以延緩或預(yù)防(Osborne等人，2003，Eur.J.Ophthalmol.13(Supp 3)S19-S26)，其中抗氧化劑和自由基清除劑是重要的一族(Hartwick，2001，Optometry andVision Science85-94)。
眼睛的一個沒那么嚴(yán)重但是更加普遍的疾病是老花眼，其影響眼睛的晶狀體。晶狀體被認(rèn)為給其予彈性的堅硬的膠原質(zhì)囊包裹，使其能夠通過睫狀體肌控制的曲率變化在不同的距離聚焦。隨著晶狀體老化，其體積增加且因而彈性逐漸降低，減少了個體聚焦于鄰近目標(biāo)的能力。
眼睛的最外層，即角膜，控制和集中眼睛光線的進(jìn)入。角膜必須保持對折射光線的適當(dāng)?shù)耐腹?。角膜也有助于保護(hù)眼睛的其余部分免受微生物、灰塵、和其他有害物質(zhì)的侵害，并且值得注意的是，它充當(dāng)一個過濾器，篩選出太陽光中一些最具破壞性的紫外(UV)波長。如果沒有這種保護(hù)，晶狀體和視網(wǎng)膜將對UV輻射的傷害高度敏感。
角膜和周圍的結(jié)膜也可經(jīng)常遭受損害視力的多種有害病癥。其包括諸如由過敏反應(yīng)、感染或創(chuàng)傷引起的炎癥反應(yīng)，和以多種營養(yǎng)不良(由于混濁物質(zhì)的積累導(dǎo)致的角膜的一個或多個部分喪失其正常的透明度)，例如富克斯(氏)營養(yǎng)不良、圓錐角膜、角膜網(wǎng)絡(luò)狀營養(yǎng)不良和map-dot-fingerprint營養(yǎng)不良來命名的少數(shù)幾種和其它的病癥(例如，干眼綜合征)。
在于眼中，眼睛表面和淚腺炎癥已被證實(shí)在稱為干性角結(jié)膜炎的眼睛表面上皮細(xì)胞疾病中具有病理學(xué)的作用。氧化性組織損傷和表現(xiàn)氧化性潛能的多型核白細(xì)胞可在患有干眼的患者的淚液膜中出現(xiàn)。這些反應(yīng)導(dǎo)致了所涉及組織的嚴(yán)重?fù)p傷。自由基和炎癥可參與所述疾病的病理學(xué)或自我蔓延(Augustin，A.J.等人，在患干眼患者淚液中的氧化反應(yīng)，″Oxidative reactions in the tear fluid of patients suffering from dryeyes″Graefe′s Arch.1995，11694-698)。
視網(wǎng)膜光毒性是由于通過位于顳部入路眼科手術(shù)的操作顯微鏡或由軍用激光將眼睛暴露于視網(wǎng)膜照度引起的。這些光源具有對小凹(fovea)造成光誘導(dǎo)損傷的潛能(M.A.Pavilack和R.D.Brod，在顳部入路眼科手術(shù)過程中對人視網(wǎng)膜的光誘導(dǎo)光毒性的顯微鏡操作的潛在位點(diǎn)，“Site of Potential Operating Microscope Light-induced Phototoxicityon the Human retina during Temporal Approach Eye Surgery”O(jiān)phthalmol.2001，108(2)381-385；H.F.McDonald和M.J.，在睫狀環(huán)玻璃體切割術(shù)中顯微鏡誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜光毒性，“microscope-induced retinalphototoxicity during pars plana vitrectomy”Arch.Ophthalmol.106521-523；Harris M.D.等人，軍事崗位中的眼睛損傷“eye injuries inmilitary occupations”Aviat.Space Environ.Med.2003，74(9)947-952)。損傷還可以發(fā)生在準(zhǔn)分子激光光療后脫落的角膜表面的治療后(SeijiHayashi等人，，準(zhǔn)分子激光治療后氧自由基對角膜的損傷，“Oxygenfree radical damage in the cornea after excimer laser therapy”J.Ophthalmol.1997，81141-144)。
某些角膜病癥是不可修正的，且僅可通過角膜移植進(jìn)行治愈，而其它病癥則可通過光性治療性角膜切除術(shù)(PTK)，即準(zhǔn)分子激光手術(shù)得以修正，其過程已知會引起炎癥反應(yīng)，引起角膜混濁或角膜區(qū)域混濁。
眼睛周圍的皮膚也經(jīng)?；技膊『筒“Y。尤其是，眼瞼的紅斑痤瘡和瞼炎都是較嚴(yán)重的病癥。眼紅斑痤瘡是一種常見的、具有不確定病因的潛在致盲病癥(Stone D.U.and J.Chodosh，2004 Curr.Opin.Ophthalmol.15(6)499-502)。眼部的瞼炎可以是葡萄球菌性的瞼炎、皮脂溢性瞼炎，這些炎癥的混合形式，或者是最嚴(yán)重的形式、潰瘍性的瞼炎。
在多種眼科疾病或病癥的發(fā)展和加速中都涉及到了氧化脅迫，包括上述AMD和多種視網(wǎng)膜病變(參見，例如Ambati等人，2003，Surveyof Ophthalmology 48257-293；Berra等人，2002，Arch.Gerontol.Geriatrics 34371-377)，和眼葡萄膜炎(例如Zamir等人，1999，F(xiàn)ree Rad.Biol.Med.277-15)，白內(nèi)障(例如，M.Lou，2003，Prog.Retinal & EyeRes.657-682)，青光眼(例如，Babizhayev和Bunin，2002，Curr.Op.Ophthalmol.1361-67)，角膜和結(jié)膜炎癥，多種角膜營養(yǎng)不良，手術(shù)后或UV相關(guān)的角膜損傷(例如，Cejkova等人，2001，Histol.Histopathol.16523-533；Kasetsuwan等人，1999，Arch.Ophthalmol.117649-652)和老花眼(Moffat等人，1999，Exp.Eye Res.69663-669)。出于這個原因，對具有抗氧化性的藥劑進(jìn)行了研究以作為治療這些病癥的潛在治療劑。已有眾多研究致力于對細(xì)胞中產(chǎn)生還原力的生化途徑，例如谷胱甘肽合成和循環(huán)。已經(jīng)對能還原活化氧諸如超氧化物岐化酶的酶類進(jìn)行了研究，從而確定其是否能夠降低細(xì)胞的氧化脅迫。通過直接的自由基清除在細(xì)胞膜中抑制脂類氧化的化合物也可被考慮成為可能的治療介入。
硝基氧是穩(wěn)定的游離自由基，其可還原為相應(yīng)的羥胺。這些化合物由于其清除自由基的特性而引起人們的興趣，模擬了過氧化物岐化酶的活性，在氧化損傷和炎癥的多種動物模型中發(fā)揮抗炎效果。Nilsson等在WO 88/05044中公開了硝基氧及其相應(yīng)的羥胺在局部缺血的細(xì)胞損傷的預(yù)防和治療中是有效的。Paolini等(美國專利5,981,548)公開了N-羥基哌啶化合物及其在由氧自由基引起的病狀的治療中、以及作為食品和化妝品添加劑的潛在的普遍用途。Hsia等(美國專利6,458,758，5,840,701，5,824,781，5,817,632，5,807,831，5,804,561，5,767,089，5,741,893，5,725,839和5,591,710)公開了穩(wěn)定的硝基氧和羥胺(例如，tempol及其羥胺對應(yīng)物tempol-H)在與多種生物相容性高分子結(jié)合以緩解血液和血液成分中的自由基毒性的用途。Hahn等(1998，Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phyics42839-842；2000，F(xiàn)ree Rad.Biol.Med.28953-958)報道了穩(wěn)定的自由基硝基氧及某些羥胺對應(yīng)物的體內(nèi)輻射防護(hù)作用和對血壓的影響。
在眼睛疾病中，Zamir等(1999，supra)報道了在大鼠模型中系統(tǒng)注射之后，硝基氧-4-羥基-2，2，6，6-四甲基哌啶-1-N-氧基(TPL或tempol)減輕了視網(wǎng)膜的S-抗原誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性眼色素視網(wǎng)膜炎(EAU)的嚴(yán)重程度。Reddan等(1993，Exp.Eye Res.56543-554)報道了對硝基氧tempol在體外對保護(hù)晶狀體上皮細(xì)胞免受過氧化氫損傷的用途的研究。Mitchell等(美國專利5,462,946)也公開了硝基氧(例如tempol)在保護(hù)晶狀體上皮細(xì)胞免受氧化損傷的用途。雖然Mitchell等也報道了相應(yīng)的羥胺tempol-H并不提供這樣的保護(hù)(Mitchell等，1991，Arch.Biochem.Biophys.28962-70；Krishna等，1991，CancerResearch516622-6628)，Zigler等(美國專利6,001,853)的報道相反，公開了羥胺與相應(yīng)的硝基氧相比是更好的anti-cataractogenic組合物。
由于毒性較低，羥胺與硝基氧相比是優(yōu)選的治療藥劑。然而，除了眼睛晶狀體的高度還原環(huán)境(M.Lou，2003，supra)，尚未有羥胺組合物在眼睛疾病或病癥治療上的用途的報道。因此，對于AMD與視網(wǎng)膜和眼睛內(nèi)部許多其他疾病和病癥，以及其他的眼睛疾病的安全且臨床上有效的非手術(shù)治療，仍然存在保持了大量卻未能解決的需求。
發(fā)明概述根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了緩解、延緩或預(yù)防患者眼睛的一種疾病或病癥的發(fā)展，或減輕其癥狀的一種方法，其中的疾病或病癥是黃斑變性、視網(wǎng)膜病變青光眼和眼葡萄膜炎、黃斑囊樣水腫、以及角膜、眼瞼和結(jié)膜的某些疾病，其包括但并不限于炎癥、創(chuàng)傷、通過暴露于操作顯微鏡誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜光毒性、激光眼睛創(chuàng)傷、受激準(zhǔn)分子激光器光療后角膜脫落表面的處理；老花眼、輻射損傷、角膜的新血管化和多種營養(yǎng)不良如Fuch營養(yǎng)不良、圓錐形角膜、晶格營養(yǎng)不良和map-dot-fingerprint營養(yǎng)不良，眼睛的瞼炎和紅斑痤瘡、以及干眼綜合癥。在一些眼外的實(shí)施方案中，化合物和組合物可用于治療禿頭癥和預(yù)防/治療由化療引起的直腸組織的損傷。對于眼睛治療，本方法包括對患者眼睛施用包括眼科可接受的載體或稀釋劑和足以緩解、延緩或預(yù)防疾病或病癥的發(fā)展，或減輕其癥狀的治療量的羥胺化合物的組合物。對于眼外的治療，本方法包括對患者的受感染區(qū)域施用包括眼科可接受的載體或稀釋劑和足以緩解、延緩或預(yù)防疾病或病癥的發(fā)展，或減輕其癥狀的治療量的羥胺化合物的組合物。
在一個實(shí)施方案中，疾病或病癥是老化相關(guān)性黃斑變性。在另一個實(shí)施方案中，疾病或病癥是視網(wǎng)膜病變，且視網(wǎng)膜病變分為脈絡(luò)膜新血管膜、黃斑水腫、視網(wǎng)膜外膜或黃斑裂孔。在另一個實(shí)施方案中，疾病或病癥是眼葡萄膜炎，且眼葡萄膜炎分為前部的、中部的、后部的或擴(kuò)散的眼葡萄膜炎。在另一個實(shí)施方案中，疾病或病癥是青光眼，且青光眼分為高眼壓(IOP)或正常眼壓青光眼。在另一個實(shí)施方案中，疾病或病癥是關(guān)于角膜、眼瞼或結(jié)膜的，尤其是涉及與炎癥、創(chuàng)傷、UV輻射或老化關(guān)聯(lián)的氧化損傷。
在某些實(shí)施方案中，組合物包含至少一種羥胺化合物，其是tempol-H，tempo-H或oxano-H。在一個典型的實(shí)施方案中，羥胺是tempol-H。
在某些實(shí)施方案中，本方法進(jìn)一步包括對患者的眼睛施用一種還原劑。還原劑可以與組合物共施用，或者可以分開施用。還原劑優(yōu)選巰基化合物。
在上述的方法中，組合物可以通過多種途徑施用。實(shí)例包括通過注射施用、從放置于眼睛表面上的一個聚合物圓板或圓片(例如，接觸透鏡)施用、通過插管或從植入患者身體或在眼睛內(nèi)或眼睛附近的裝置施用、或者通過眼藥水、洗眼液或眼用軟膏施用。
本發(fā)明的組合物可包含本發(fā)明的一種以上的化合物。而且，所述組合物可包含本領(lǐng)域已知的另一種化合物，與本發(fā)明的化合物結(jié)合，用于一種特定適應(yīng)癥的治療。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的多種化合物同時地施用。在另一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的多種化合物順序地施用。同樣地，用于治療這里描述的疾病和病癥的本領(lǐng)域已知的其他化合物可與本發(fā)明的化合物同時地或順序地施用。本發(fā)明也提供使用這樣的組合治療來治療疾病和病癥的方法。
本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)可通過參考以下的詳細(xì)描述和實(shí)施例得以理解。


圖1顯示不同濃度的Tempol-H保護(hù)藍(lán)光照射的充滿A2E的RPE細(xì)胞。
圖2顯示1mM Tempol-H對藍(lán)光輻射的充滿A2E的RPE細(xì)胞的保護(hù)效果。
示例性實(shí)施方案的詳細(xì)描述本發(fā)明提供了對目前的藥理學(xué)療法稀缺或者完全缺乏的許多眼睛疾病或病癥的治療或預(yù)防的方法。特別是，提供了緩解黃斑變性、糖尿病性視網(wǎng)膜病變和其他視網(wǎng)膜病變，包括但并不限于脈絡(luò)膜新血管膜(CNVM)、黃斑水腫、視網(wǎng)膜外膜(ERM)(黃斑皺褶)和黃斑裂孔，以及青光眼、眼葡萄膜炎、和角膜(和眼瞼周圍和結(jié)膜)疾病，包括但并不限于炎癥、創(chuàng)傷、輻射損傷、角膜新血管化和多種營養(yǎng)不良如Fuch營養(yǎng)不良、圓錐形角膜、晶格營養(yǎng)不良和map-dot-fingerprint營養(yǎng)不良，以及干眼綜合癥、眼睛的瞼炎和紅斑痤瘡。也提供減輕、預(yù)防或緩解對視網(wǎng)膜的色素上皮細(xì)胞的光氧化損傷，其與黃斑變性的發(fā)展有關(guān)，并用于緩解眼睛的激光手術(shù)包括青光眼的trabeculectomy治療和角膜再成形的角膜切除術(shù)期間的疼痛和炎癥的方法。本方法包括施用包括眼科可接受的載體或稀釋劑和一種足以預(yù)防、延緩上面列出的一種或多種眼科疾病的發(fā)展，或減輕其癥狀的的治療量的羥胺化合物的組合物。
如提及的一樣，Zigler等的美國專利6,001,853公開了羥胺，優(yōu)選與還原劑組和，在抑制眼睛的晶狀體白內(nèi)障發(fā)展的用途。然而，清澈透明的晶狀體擁有幾個獨(dú)特的特征，使其保持透明度以便光線可以透過并聚焦于視網(wǎng)膜上。這包括(1)高含量的還原的谷胱甘肽(GSH)，(2)不尋常的高蛋白含量(其濕重的35-50％)和，重要的(3)多種抗氧化劑和氧化防衛(wèi)酶(M.Lou，2003，supra)。存在于晶狀體內(nèi)的獨(dú)特的條件可解釋為什么羥胺化合物被發(fā)現(xiàn)對于預(yù)防白內(nèi)障有效。但是因?yàn)槟切l件不會在眼睛的別處復(fù)制，羥胺在眼睛的晶狀體中作為抗-cataractogenics的功效并未提供這類化合物在AMD、視網(wǎng)膜病變、眼睛任何部分的炎癥疾病、神經(jīng)病、或晶狀體以外的任何其他疾病或病癥的緩解上有任何功效的預(yù)測。此外，Zigler等人的羥胺是晶狀體內(nèi)的抗-cataractogenic的報道并未陳述晶狀體內(nèi)的其他疾病，例如老花眼。
本發(fā)明者鑒定了眼睛內(nèi)部和后面及晶狀體外其他組織(例如角膜)的疾病或病癥也可通過羥胺化合物如tempol-H的施用而得到緩解或預(yù)防。這些鑒定是通過利用黃斑變性和其他視網(wǎng)膜疾病的動物模型建立的，其方案被列舉在實(shí)施例中。
在本發(fā)明中適用的羥胺化合物的優(yōu)選實(shí)例是tempol-H(硝基氧4-羥基-2，2，6，6-四甲基哌啶-1-基氧的羥胺還原形式)，tempo-H(硝基氧2，2，6，6-四甲基哌啶-1-基氧的羥胺還原的形式)和oxano-H(2-乙基-2，4，4-三甲基惡唑烷，其是oxano，2-乙基-2，4，4-三甲基惡唑烷-3-基氧的還原形式)。本發(fā)明中適用的其他羥胺化合物包括但并不限于由Hahn等(1998，supra；2000，supra)、Samuni等(200l，supra)公開的那些羥胺化合物；和Paolini等的美國專利5,981,548(公開了某些N-羥基哌啶酯及其作為抗氧化劑在許多方面、而非眼科學(xué)中的用途)；Gupta等的美國專利4,404,302(公開了某些N-羥胺作為光穩(wěn)定劑在整形外科手術(shù)制劑中的用途)；Mitchell等的美國專利5,462,946(公開了衍生自取代的惡唑烷的某些硝基氧，用于保護(hù)生物體免受氧化脅迫的傷害)；Ramey等的美國專利3,936,456(公開了取代的哌嗪dione氧基和羥化物，用于聚合體的穩(wěn)定化)；Behrens等的美國專利4,691,015(描述了衍生自阻胺的羥胺及其中某些羥胺在聚烯烴的穩(wěn)定化中的用途)；和Hsia等的幾個上述的美國專利中公開的羥胺化合物。大部分上述引用的化合物對于眼睛的施用迄今仍然未知。確實(shí)，它們中沒有一個已知被用于黃斑變性、視網(wǎng)膜病變、青光眼或眼葡萄膜炎，或角膜、眼瞼、或結(jié)膜的疾病的治療。
本發(fā)明的方法包括將一個或多個前述的(或其他適合的)羥胺化合物配制成組合物，應(yīng)用于需要治療的患者的眼睛。因此，如下面的更加詳細(xì)的描述一樣，這些組合物適合作為注射劑、或作為眼藥水或在接觸晶體中、嵌入物或類似的物質(zhì)使用的藥物。因此，可以將化合物配制入含有任一需要的稀釋劑、鹽、pH改性物質(zhì)和在藥物劑型領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的類似物質(zhì)的無菌水中做成劑型，目的是為了獲得適宜施用于眼睛的溶液。其可以是血管注射劑、眼藥水、嵌入物、接觸晶體、凝膠，和可能要求某種不同劑型的其他液體類型。因此包括了適合直接施用于眼睛的所有這些劑型。
本發(fā)明的所述組合物還具有根據(jù)所使用抗氧化劑的不同范圍的抗氧化劑。所述應(yīng)用還依賴于允許所述藥物組合物至少2年保存期所需的抗氧化劑量。所述制劑制劑中可包括一種或多種抗氧化劑。某些常用的抗氧化劑具有管理部門所允許的最高水平。同樣地，需要給藥的抗氧化劑量也應(yīng)該足夠有效而不引起任何不希望的效果。這樣的劑量可由內(nèi)科醫(yī)生根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)節(jié)，在管理部門所設(shè)定的最高水平之內(nèi)，且處于本領(lǐng)域所屬技術(shù)人員確定適當(dāng)和有效的劑量范圍之內(nèi)。合理的范圍是約0.01％-約0.15％重量體積比的EDTA，約0.01％-約2.0％重量體積的亞硫酸鈉，和約0.01％-約2.0％重量體積比的偏亞硫酸氫鈉。本領(lǐng)域所屬技術(shù)人員能夠?qū)ι鲜雒糠N物質(zhì)采用約0.1％重量體積比的濃度。N-乙酰基半胱氨酸可以約0.1％-約5.0％重量體積比的范圍存在，約0.1％-約10％的羥胺濃度是優(yōu)選的?？箟难峄螓}可以約0.1％-約5.0％重量體積比的范圍存在，約0.1％-約10％重量體積比的羥胺濃度是優(yōu)選的。其它的巰基，如果包括在內(nèi)的話，可以與N-乙酰基半胱氨酸具有相同的范圍。其它示例性的化合物包括巰基丙?；拾彼?，N-乙酰基半胱氨酸，β-巰基乙胺，谷胱甘肽和類似的物質(zhì)，雖然也可以采用其它適于眼科給藥的抗氧化劑，例如，抗壞血酸及其鹽或亞硫酸鹽或偏亞硫酸氫鈉。
可采用緩沖劑將眼藥水制劑制劑的pH保持在約4.0-約8.0的范圍中；從而使眼睛的疼痛最小化。在某些實(shí)施方案中，所述pH優(yōu)選地被保持在約3.5-約6.0，優(yōu)選為約4.0-約5.5。以便確保了大多數(shù)羥胺處于其質(zhì)子化形式以具有最高的水溶性。所述緩沖液可以是pKa為約4.0-約5.5的任意弱酸及其共軛堿；例如乙酸/乙酸鈉；檸檬酸/檸檬酸鈉。羥胺的pKa為約6.0。為了直接的玻璃體內(nèi)和眼球內(nèi)注射，制劑應(yīng)為pH7.2-7.5，優(yōu)選為pH 7.3-7.4。
本發(fā)明的所述化合物還可包括適于眼睛給藥的張力劑。其中適合的是氯化鈉，其可將本發(fā)明的制劑配制成和0.9％鹽水大約等滲的制劑。
在某些實(shí)施方案中，可將本發(fā)明的所述化合物與增稠劑一起進(jìn)行配制。示例性的增稠劑有羥乙基纖維素，羥丙基纖維素，甲基纖維素和聚乙烯吡咯烷酮。所述化合物中的粘度劑可高至約2.0％重量體積比。優(yōu)選地，所述粘度劑的存在范圍從約0.2％-約0.5％重量體積比。聚乙烯吡咯烷酮的優(yōu)選范圍可從約0.1％-約2.0％重量體積比。本領(lǐng)域所屬技術(shù)人員可優(yōu)選根據(jù)食品藥品管理局(FDA)接受的制定的任意范圍。
如果需要的話，本發(fā)明所述化合物還可含有添加的共溶劑。適合的共溶劑可包括甘油，聚乙二醇(PEG)，聚山梨醇酯，丙二醇，甘露醇和聚乙烯醇。所述共溶劑可以約0.2％-約0.4％的重量體積比的范圍存在。優(yōu)選地，甘露醇可以約0.5％-約4.0％重量體積比的范圍配制在本發(fā)明的所述化合物中。優(yōu)選地，聚乙烯醇可以約0.1％-約4.0％重量體積比的范圍配制在本發(fā)明的所述化合物中。本領(lǐng)域所屬技術(shù)人員可優(yōu)選根據(jù)食品藥品管理局(FDA)接受的制定的任意范圍。
在本發(fā)明中可以在特定的范圍內(nèi)使用防腐劑。其中，優(yōu)選為高至0.013％重量體積比的苯扎氯銨，高至0.013％重量體積比的芐索氯銨，高至0.5％重量體積比的氯丁醇，高至0.004％重量體積比的乙酸苯基汞或硝酸苯基汞，高至0.01％重量體積比的硫柳汞，和約0.01％-約0.2％重量體積比的對羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯。
用于注射的制劑被優(yōu)選地設(shè)計成一次性給藥且不含有防腐劑。可注射的溶液應(yīng)該具有相當(dāng)于0.9％氯化鈉溶液(摩爾滲透壓濃度為290-300mOsmoles)的等滲度。這可以通過添加氯化鈉或其它如上所列示的共溶劑、或如上所列示的諸如緩沖劑的賦型劑和抗氧化劑來實(shí)現(xiàn)?？勺⑸涞闹苿┦菬o菌的，且在一個實(shí)施方案中，是以一次性使用的小管或安瓿提供的。在其它實(shí)施方案中，為了進(jìn)行再組成和隨后的注射，可以無菌的、凍干的固體形式提供可注射的產(chǎn)品。
眼睛前房組織浸在房水之中，而視網(wǎng)膜持續(xù)暴露于玻璃體。這些液體/凝膠以一種高度還原的氧化還原狀態(tài)存在，因其包含抗氧化劑化合物和酶。因此，根據(jù)本發(fā)明配制的眼科組合物優(yōu)選包含一種還原劑是有利的，或者分開施用還原劑以維持羥胺的還原狀態(tài)。
優(yōu)選的還原劑可以是N-乙酰半胱氨酸、抗壞血酸或鹽的形式，和亞硫酸鹽鈉或偏亞硫酸氫鈉，抗壞血酸和/或N-乙酰半胱氨酸或谷胱甘肽尤其適合可注射的溶液。N-乙酰半胱氨酸和抗壞血酸鈉的組合可被用于不同的劑型中。金屬螯合抗氧化劑，例如EDTA(乙二胺四乙酸)或可能的DTPA(二乙烯三胺五乙酸)也可被加入以維持羥胺在眼藥水劑型中的還原狀態(tài)。
可采用一種或多種本領(lǐng)域公知的遞送方式將含有本發(fā)明所述化合物的組合物對患者的眼睛進(jìn)行遞送。在優(yōu)選實(shí)施方案中，可以眼藥水或洗液的方式將所述組合物對眼睛進(jìn)行局部遞送。在其它實(shí)施方案中，可將所述組合物以局部眼用軟膏的形式進(jìn)行施用，其特別適于有效治療角膜、結(jié)膜或周圍皮膚的疾病，例如干眼和瞼炎。在其它實(shí)施方案中，可通過定期的結(jié)膜下或眼內(nèi)注射，或通過諸如BSS或BSSPLUS(Alcon USA，F(xiàn)ort Worth，德克薩斯州)的沖洗溶液灌注，或通過使用諸如BSS或BSS PLUS組合物的羥胺預(yù)配制溶液，將所述組合物遞送至眼內(nèi)的多個位置。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明所述化合物在玻璃體切割術(shù)中的應(yīng)用可有效減輕或預(yù)防與玻璃體切割術(shù)相關(guān)的白內(nèi)障的發(fā)展。
或者，可將所述組合物應(yīng)用于其它本領(lǐng)域所述技術(shù)人員公知的眼科制劑形式，例如預(yù)形成或原位形成的凝膠或脂質(zhì)體，例如在Herrero-Vanrell的美國專利5,718,922中公開的那樣。已采用了向玻璃體中直接注射藥物來進(jìn)行疾病治療，其中使用微球體或脂質(zhì)體來緩慢地釋放藥物(Moritera，T.等人，作為玻璃體中藥物傳遞系統(tǒng)的生物可降解聚合物的微球體，“Microspheres of biodegradable polymers as adrug-delivery system in the vitreous”Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.199132(6)1785-90)。
在其它實(shí)施方案中，所述組合物可通過接觸透鏡(例如Lidofilcon B，Bausch & Lomb CW79或DELTACON(Deltafilcon A))或臨時滯留在眼睛表面上的其它物體被遞送到或透過需要治療的眼睛的晶狀體。例如，美國專利6,410,045描述了接觸透鏡類型的藥物遞送裝置，其包括吸收于所述接觸透鏡中的濃度為按重量計0.05％-0.25％的能夠遞送入眼液的含有藥物的多聚水凝膠接觸透鏡。
在其它實(shí)施方案中，可采用諸如膠原角膜防護(hù)物(例如，BIO-COR可溶解的角膜防護(hù)物，Summit Technology，Watertown，馬薩諸塞州)的支持物。還可通過來自滲透泵(ALZET，Alza Copr.，Palo Alto，加利福尼亞州)插管或通過含有所述組合物的定時釋放的膠囊(OCCUSENT)或生物可降解片(OCULEX，OCUSERT)的植入，將所述組合物通過灌注施用進(jìn)入眼球。這些施用方法的益處在于為眼睛提供了連續(xù)的組合物供給。例如，這有利于羥胺化合物對角膜和水狀體的局部遞送。
還有幾種其它的遞送系統(tǒng)也是可取的，其特別適于向眼睛的內(nèi)部或后部遞送藥物組合物。例如，Parel等人的美國專利6,154,671公開了通過離子滲入療法向眼球進(jìn)行藥劑遞送的裝置。該裝置采用了用于容納所述活性劑的容器，其含有至少一種位于角膜周圍面向眼睛組織的活性表面電極。所述容器還具有與所述患者部分關(guān)閉的眼瞼相接觸的返回電極。Wong等人的美國專利5,869,079公開了在生物可降解緩釋眼科植入物中親水和疏水實(shí)體的組合。此外，Guo等人的美國專利6,375,972，Chen等人的美國專利5,902,598，Wong等人的美國專利6,331,313，Ogura等人的美國專利5,707,643，Weiner等人的美國專利5,466,233和Avery等人的美國專利6,251,090的每一個都描述了可用來遞送含有本發(fā)明化合物的藥物組合物的眼內(nèi)植入裝置和系統(tǒng)。
本領(lǐng)域中已知用于藥物遞送的眼睛植入裝置的許多例子。例如，美國專利6,726,918描述用于治療炎癥介導(dǎo)的眼睛疾病的方法，包括給個體的眼睛玻璃體植入一種生物可降解的植入裝置，包括一種類固醇抗炎劑和一種生物可降解的聚合體，其中的植入裝置將藥劑遞送到玻璃體，其量在約48小時內(nèi)足以達(dá)到相當(dāng)于至少約0.05μg/ml地塞米松的濃度，且維持相當(dāng)于至少約0.03μg/ml地塞米松的濃度至少約三周。
美國專利6,713,081描述以控釋和緩釋方式將治療藥劑遞送到眼睛的眼睛植入裝置。說明和描述了雙重模式和單一模式的藥物遞送裝置。描述了適合結(jié)膜下和玻璃體內(nèi)放置的植入裝置。該專利也描述與眼睛植入裝置關(guān)聯(lián)的制作和實(shí)施技術(shù)。
美國專利6,251,090描述了玻璃體內(nèi)的藥物遞送裝置、方法和植入裝置，通過它們僅需一次最初的手術(shù)植入裝置，可在持續(xù)的一段時間將廣泛的有益藥物包括藥物或其他藥理學(xué)藥劑導(dǎo)入玻璃體的空穴。該裝置和方法將植入所必須的手術(shù)切口最小化，避免將來的或重復(fù)的侵害手術(shù)或程序。最初藥物的補(bǔ)充量可容易地被導(dǎo)入，或者加入藥物可依照要求變化或改變。此外，該裝置和方法可以控制遞送到玻璃體腔的劑量，并允許患者控制遞送的時間。該裝置被構(gòu)造成可過濾遞送到眼睛的藥物，也避免在植入或使用期間損傷或干擾眼睛的其他部分。
美國專利5,824,072描述了生物相容的眼睛植入裝置，包括用于治療目的而導(dǎo)入眼睛的脈絡(luò)膜上層空間或無血管區(qū)域的活性劑。藥物的施用被控制和維持長時期，然而確保施用位點(diǎn)以外基本上不會達(dá)到有效水平。
美國專利5,773,019描述了一種持續(xù)釋放藥物遞送植入裝置，其在其他提到的地方，可被安置到眼睛的外表面或眼睛內(nèi)部。藥物核被聚合體包衣層覆蓋，可滲透到低溶解度溶劑，釋放速度不限。
美國專利5,773,021描述被放置于結(jié)膜囊中的生物粘合性眼科嵌入物。該嵌入物通過擠壓、熱成形、或熱壓縮一種聚合物基質(zhì)和待遞送的藥物進(jìn)行制備。聚合體基質(zhì)包括水溶性的生物相容的聚合體，如羥基烷基纖維素、麥芽糖糊精、殼聚糖、改性淀粉或聚乙烯基醇；非水溶性的生物相容聚合體，如烷基纖維素。應(yīng)用時可使用生物粘合性聚合物如聚乙烯基羧酸型聚合體或某些生物粘合性多糖或其衍生物。所述眼科嵌入物的特征在于目的是延長和控制藥物的釋放。
美國專利5,443,505和5,766,242公開了包括用于導(dǎo)入眼睛的脈絡(luò)膜上層空間或無血管區(qū)域的活性劑的植入裝置，并描述了將包括氫化可的松的微膠囊和平板放置到平坦部。
美國專利5,378,475描述一種緩釋的植入裝置，用于嵌入眼睛的玻璃體。該植入裝置具有第一層非滲透性包衣，如乙烯基乙酸乙烯酯，包圍藥物貯存器的大部分但非全部，且具有第二層滲透性包衣，如滲透性的交聯(lián)的聚乙烯基醇，置于第一層包衣之上，其中第一層包衣不覆蓋的藥物貯存器，以提供藥物可通過其擴(kuò)散到植入裝置之外的部位。
美國專利5,725,493描述了一種眼科植入裝置，用于在一段時間內(nèi)給玻璃體腔提供藥物。藥物貯存器被附著在眼睛的外面，具有一個通道可允許藥物進(jìn)入眼睛的玻璃體腔。
美國專利5,164,188公開以膠囊包裹的藥劑用于導(dǎo)入眼睛的脈絡(luò)膜上層，并描述放置包含氫化可的松的微膠囊和plaques到平坦部。
美國專利4,997,652公開了生物可降解的包括微膠囊藥物的眼睛植入裝置，并描述了將含有氫化可的松琥珀酸酯的微膠囊植入到眼睛的后面部分。
美國專利4,014,335描述一種眼科藥物遞送裝置，放置于鞏膜和下眼瞼之間的盲管，用于施用藥物并作為貯存器。該眼睛裝置的特征在于以受控制、持續(xù)的施用速度長時間對眼睛施用藥物。為達(dá)此目的，該眼睛裝置包括一個三層的聚合材料薄片，藥物裝在薄片的中央貯存器區(qū)域。藥物通過至少一層聚合物薄片從貯存器擴(kuò)散。
美國專利4,300,557教導(dǎo)了一種膠囊，填充有待遞送的藥理學(xué)藥物，其作為眼內(nèi)的植入裝置使用。通過在眼睛中切開一個切口，將膠囊嵌入眼睛的玻璃體區(qū)域，嵌入膠囊并封閉切口。膠囊在適當(dāng)?shù)奈恢帽Ａ粢欢螘r間，且通過造成第二個眼睛外科切口取出裝置。膠囊具有連上的管子，其通過眼睛的表面并從眼睛向外延伸，用于后來的藥物注射。而在玻璃體中，裝置未被錨定，可自由地移動。
Zhou等進(jìn)一步公開了多重藥物的植入裝置，包括5-fluorouridine、去炎松、和用于增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變(PVR)眼內(nèi)處理的人類重組組織血纖維蛋白溶酶原活化劑(Zhou，T，等1998，“用于增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變眼內(nèi)處理的復(fù)合藥物遞送植入裝置的研發(fā)”J.Controlled Release55281-295)。
配制和施用根據(jù)本發(fā)明的方法的組合物，使得應(yīng)用的劑量可有效緩解眼睛內(nèi)部和后部的氧化脅迫，和/或抑制眼睛的黃斑變性、其他視網(wǎng)膜病變或眼葡萄膜炎的發(fā)展。通常，優(yōu)選的活性量為在劑型中占約0.1％到約10.0％的重量體積比。在一些實(shí)施方案中，優(yōu)選的活性藥物濃度為0.25％到約10.0％的重量體積比。羥胺成分在組織和體液中的濃度優(yōu)選在約0.1μM到約10mM的范圍。在一些實(shí)施方案中，范圍為1μM到5mM，在另一個實(shí)施方案中，范圍為10μM到2.5mM。在另一個實(shí)施方案中，范圍為約50μM到1mM。最優(yōu)選羥胺濃度范圍為1到100μM。還原劑在組織和體液中的濃度將為0.1μM到5mM，優(yōu)選的范圍為10μM到2mM。組合物成分的濃度根據(jù)施用途徑適當(dāng)?shù)卣{(diào)整，通過典型的藥代動力學(xué)和稀釋法計算，獲得這樣的局部濃度。
本發(fā)明的方法可被應(yīng)用到眼科學(xué)以外更廣泛的領(lǐng)域。這些領(lǐng)域可包括，例如保護(hù)毛囊和直腸在癌癥的放療期間免受輻射損傷。其它不提倡對眼睛進(jìn)行遞送的施用形式可包括口服藥片，液體或噴霧劑；靜脈內(nèi)，皮下和腹膜內(nèi)注射；以貼片或軟膏對皮膚進(jìn)行的施用；灌腸劑，栓劑或氣霧劑。
本發(fā)明的組合物可包含一種以上的本發(fā)明的化合物。因此本發(fā)明的組合物包含至少一種本發(fā)明的化合物。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物被同時施用。在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物被順序地施用。本發(fā)明的方法包括應(yīng)用這種組合療法。
在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的所述化合物可與本領(lǐng)域中公知的其它化合物一起施用，所述其它化合物可有效地治療疾病或病癥，所述疾病或病癥是本發(fā)明所述化合物的靶。因此，本發(fā)明的所述組合物還包括至少一種本領(lǐng)域中公知的治療擬被治療的疾病或病癥的其它化合物。所述本領(lǐng)域中公知的其它化合物可以與本發(fā)明的所述化合物同時施用，或依次施用。類似地，本發(fā)明的方法包括使用這樣的組合治療方案。
對于黃斑變性或任何其他的視網(wǎng)膜病變或這里描述的眼睛疾病的有效治療，本領(lǐng)域技術(shù)人員可推薦一個劑量方案和足以用于待治療的受試者的劑量。如果需要，優(yōu)選每天劑量給藥1到4次。如果組合物被配制在緩釋遞送介質(zhì)中，或通過植入裝置或玻璃體內(nèi)注射遞送，則不會那么頻繁地施用。劑量方案也會改變，這取決于活性藥物的濃度，其由使用的羥胺和患者的需要而定。
眼科醫(yī)師或?qū)Ρ绢I(lǐng)域類似的技術(shù)人員有多種方式監(jiān)測劑量方案的效果，并由此調(diào)整劑量。例如，黃斑變性或其他視網(wǎng)膜的治療效果可通過視覺敏度的提高、異常的評估和立體彩色的底部照片的分級來確定。(老化相關(guān)性眼睛疾病研究調(diào)查組，NEI，NIH，AREDS報告號8，2001，Arch.Ophthalmol.1191417-1436)。在眼葡萄膜炎中的治療效果可通過視覺敏度和玻璃體薄霧的改善及炎癥的控制來確定(Foster等2003，Arch.Ophthalmol.121437-40)。依據(jù)這種評估，如果需要，眼科醫(yī)師可調(diào)整劑量給藥的頻率和/或濃度。
列舉下面的實(shí)施例以更加詳細(xì)地描述本發(fā)明。用于舉例說明，并非限制于本發(fā)明。
實(shí)施例1在兔子模型中，Tempol-H對光化學(xué)視網(wǎng)膜損害的治療效果光產(chǎn)生視網(wǎng)膜損傷的能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其能夠產(chǎn)生熱損傷的水平被稱為光化學(xué)視網(wǎng)膜損傷。一般認(rèn)為光化學(xué)視網(wǎng)膜損傷的作用機(jī)理是光誘導(dǎo)的自由基的產(chǎn)生。目前已經(jīng)充分意識到了在臨床眼科中所使用的常見光源能夠產(chǎn)生的光化學(xué)視網(wǎng)膜損傷的能力。已證明在眼科手術(shù)中使用的操作顯微鏡具有產(chǎn)生視網(wǎng)膜光化學(xué)損傷的能力。這一觀察結(jié)果已被用來在兔眼中構(gòu)建一個模型，用來檢測各種制劑對光化學(xué)視網(wǎng)膜損傷的防御能力?，F(xiàn)已測定眼觀察儀器(opthalmoscopically)可見的視網(wǎng)膜損傷在暴露于操作顯微鏡僅2.5分鐘之后就可檢測到。以下設(shè)定的操作方法可用來確定通過玻璃體內(nèi)注射施用tempol-H是否能夠阻止由操作顯微鏡產(chǎn)生的眼觀察儀器可見的光化學(xué)視網(wǎng)膜損傷的發(fā)展。
材料和方法在處理前一周，對每只動物進(jìn)行基線眼底照相和FA。在暴露于來自操作顯微鏡的光線前1天，每只動物的一只眼睛接受0.1cc BSS的玻璃體內(nèi)注射作為對照，而另一只眼睛則接受0.1cc溶于BSS介質(zhì)的Tempol-H。通過IM注射60-40％鹽酸氯胺酮(氯胺酮)100mg/ml和甲苯噻嗪20mg/ml的混合物將所述動物麻醉。將窺器插入接受所述注射的眼中，使用30g的針穿過緊鄰于緣之后的鞏膜，并轉(zhuǎn)變角度使其不接觸到晶狀體，并將其尖端放置于玻璃體腔中部。注射之后，用手持Applanation眼壓器監(jiān)測眼內(nèi)壓。如果必要的話，可在所述動物返回其籠子之前，實(shí)施穿刺術(shù)將眼內(nèi)壓降低至正常水平。
將20只有色兔子的40只眼睛暴露于Zeiss OpMi 1型操作顯微鏡的光不同時間段直至1小時。通過IM注射60-40％鹽酸氯胺酮100mg/ml和甲苯噻嗪20mg/ml的混合物將所述動物麻醉。然后將所述兔子固定于桌上；向要暴露的眼中插入眼瞼窺器。用托品酰胺HCl 1％使瞳孔擴(kuò)大，用BSS?jīng)_洗角膜。將來自顯微鏡的光定位于離所述動物20cm位置的方式，從而將所述光集中并與所述眼睛平行。所述光束集中在所述角膜上銳聚焦中。暴露后48小時，對所述動物進(jìn)行檢驗(yàn)并重復(fù)進(jìn)行眼底照相和FA。采用標(biāo)準(zhǔn)方法處死動物并收集選中的眼睛，并儲存于冷的戊二醛(glutaldehyde)溶液中以進(jìn)行其它分析。
實(shí)施例2玻璃體內(nèi)注射之后Tempol-H摻入兔子視網(wǎng)膜組織的評估為了評價tempol-H對預(yù)防AMD和其它視網(wǎng)膜病癥的有效性，必須確定所述藥物已摻入視網(wǎng)膜組織。在本實(shí)施例中設(shè)定的操作方法采用了閃爍技術(shù)來制定在向所述兔子進(jìn)行玻璃體內(nèi)注射之后，tempol-H摻入視網(wǎng)膜組織的量和持續(xù)時間。因?yàn)橥米拥拇笱劬橹委熓┯锰峁┝诉m當(dāng)?shù)哪０?，所以在包括玻璃體內(nèi)注射的實(shí)驗(yàn)中對新西蘭白兔進(jìn)行詳細(xì)的表征(Hosseini等人，2003，Lasers Surg.Med.32265-270)。此外，在通過閃爍技術(shù)對吸收進(jìn)入視網(wǎng)膜組織的藥物進(jìn)行評估的實(shí)驗(yàn)中也廣泛的使用了新西蘭白兔(Ahmed等人，1987，J.Pharm.Sci.76583-586)。
材料與方法在本實(shí)驗(yàn)方法中使用的是24只2.5-3公斤重的雄性新西蘭白兔。將所述兔子隨即分入兩個處理分組中的一組。開始對兔子進(jìn)行基線眼科檢查從而確保所有眼睛都沒有受到刺激和感染。在隨即分組和基線檢測之后，通過皮下注射100mg/ml鹽酸氯胺酮/20mg/ml甲苯噻嗪將所述兔子麻醉。向雙眼施用1滴商業(yè)可獲得的0.5％鹽酸丙對卡因(proparacaine hydrochloride)。然后根據(jù)以下所示的盲隨機(jī)化方案(masked randomization)通過玻璃體內(nèi)注射對兔子進(jìn)行雙側(cè)(bilaterally)處理。
盲處理組1.用標(biāo)記的tempol-H進(jìn)行雙側(cè)的玻璃體內(nèi)注射。(N＝12)2.用安慰劑(介質(zhì))進(jìn)行雙側(cè)的玻璃體內(nèi)注射。(N＝12)在1、7、14和28天，將分別來自每一處理組的3只兔子共6只兔子，用致死劑量的戊巴比妥鈉處死。處死后立即實(shí)施雙側(cè)摘出，并將所述視網(wǎng)膜組織取出進(jìn)行閃爍分析(在摘出后可將視網(wǎng)膜組織冷凍以防止液體流失)。將視網(wǎng)膜組研磨成勻漿并溶解于堿或季銨化合物中。記錄閃爍讀數(shù)從而對存在于所述視網(wǎng)膜組織中的tempol-H的量進(jìn)行定量。
對統(tǒng)計分析而言，來自用實(shí)驗(yàn)物體施用的所有兔子的數(shù)據(jù)都認(rèn)為是有價值的。初級和次級效率變量具有統(tǒng)計顯著性。采用的是雙側(cè)非參數(shù)統(tǒng)計檢驗(yàn)，p＜0.05被認(rèn)為統(tǒng)計顯著。
實(shí)施例3Tempol-H對視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(RPE)中的光氧化過程進(jìn)行保護(hù)的效率背景盡管目前還不清楚萎縮性老化相關(guān)性黃斑變性(AMD)的病因?qū)W，但通常都接受AMD是開始于視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的死亡、光受體細(xì)胞的變性，以及由此引起的之后發(fā)生的視覺喪失。有越來越多的證據(jù)將在RPE中累積的脂褐素與這些細(xì)胞的死亡關(guān)聯(lián)起來。例如，不僅黃斑下面RPE細(xì)胞中的脂褐素水平最高，通過測定眼底自動熒光監(jiān)測RPE的脂褐素也證明了在先前熒光增強(qiáng)的位點(diǎn)，RPE萎縮的區(qū)域會隨之?dāng)U大。對于測定RPE脂褐素和RPE細(xì)胞死亡之間關(guān)聯(lián)的研究顯示RPE脂褐素的組分，即雙維甲酸類發(fā)光團(tuán)A2E能夠擾亂細(xì)胞膜，并且介導(dǎo)藍(lán)光對RPE的損傷。A2E的光激活導(dǎo)致了單態(tài)氧的生成，且后者沿著來自A2E的維甲酸類側(cè)鏈對碳-碳雙鍵的加成由此形成了環(huán)氧化物。以這種方式，可將A2E轉(zhuǎn)化成含有多種環(huán)氧化物化合物的混合物(A2E-環(huán)氧化物)。已證明這些高活性的環(huán)氧化物能夠損傷細(xì)胞。最終，在RPE細(xì)胞中由A2E的激發(fā)引起的光化學(xué)事件啟動了細(xì)胞死亡，該啟動過程包括半胱氨酸依賴性蛋白酶(caspase)的參與來分解細(xì)胞底物，并且可通過線粒體蛋白bcl-2進(jìn)行調(diào)節(jié)。
還測定了tempol-H對A2E介導(dǎo)的藍(lán)光損傷的保護(hù)能力。
材料與方法將在培養(yǎng)中積累了A2E的APRE-19細(xì)胞暴露于鹵素源所遞送來的430+/-20nm的光。這個波長的光是適當(dāng)?shù)?，因?yàn)?i)A2E的激發(fā)最大值為約430nm，和(ii)這一波長的光可在體內(nèi)達(dá)到所述RPE，而波長大于400nm的光則不能被角膜和晶狀體所吸收。對用tempol-H預(yù)處理(24小時)和沒有預(yù)處理的藍(lán)光照射的充滿A2E的RPE的細(xì)胞死亡進(jìn)行了比較。細(xì)胞活力的喪失是通過以下2種方式進(jìn)行定量的1.基于健康的具有代謝活性的細(xì)胞將所述黃色四唑鎓鹽MTT分解成紫色的formazan晶體進(jìn)行量熱計微滴定分析。在藍(lán)光照射之后24小時測定細(xì)胞活力。在2個實(shí)驗(yàn)中的每一個中都分析三個重復(fù)的小孔。
2.雙色熒光分析，其中通過膜-impermeant染料(Dead Red核酸染料，Molecular Probes)染色所有死細(xì)胞的細(xì)胞核都染成紅色，而DAPI將所述細(xì)胞的細(xì)胞核染成藍(lán)色。在藍(lán)光照射后8小時測定細(xì)胞活力。通過對每個孔中照射區(qū)域中5個視野內(nèi)的細(xì)胞計數(shù)進(jìn)行重復(fù)分析，每個實(shí)驗(yàn)對3個孔進(jìn)行分析。所的數(shù)據(jù)是基于3次實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。
結(jié)果如圖1和圖2所示，在這一黃斑變性的模型中，tempol-H提供了對于充滿A2E的RPE死亡的劑量依賴性保護(hù)。
盡管參照所提供的優(yōu)選實(shí)施方案對本發(fā)明進(jìn)行了特別地說明和描述，但還需理解本發(fā)明并不局限于在此具體公開和示例性的實(shí)施方案?？蓪Ρ景l(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案進(jìn)行諸多改變和修改，并且這種改變和修改不背離所附權(quán)利要求所限定的本發(fā)明的范圍和精神。
權(quán)利要求
1.緩解、延緩或預(yù)防患者眼睛的疾病或病癥的發(fā)展，或減輕其癥狀的方法，其中的疾病或病癥是黃斑變性、視網(wǎng)膜病變、角膜疾病、眼瞼疾病、老花眼、青光眼或眼葡萄膜炎，其中該方法包括對患者的眼睛施用包括眼科可接受的載體或稀釋劑和至少一種足以緩解、延緩或預(yù)防所述疾病或病癥的發(fā)展或減輕其癥狀的治療量的羥胺化合物的組合物。
2.權(quán)利要求1的方法，其中的疾病或病癥是老化相關(guān)性黃斑變性。
3.權(quán)利要求1的方法，其中的疾病或病癥是視網(wǎng)膜病變，且視網(wǎng)膜病變分為脈絡(luò)膜新血管膜、黃斑水腫、視網(wǎng)膜外膜或黃斑裂孔。
4.權(quán)利要求1的方法，其中的疾病或病癥是眼葡萄膜炎，且眼葡萄膜炎分為前部的、中部的、后部的或擴(kuò)散的眼葡萄膜炎。
5.權(quán)利要求1的方法，其中的疾病或病癥是青光眼，且青光眼分為高眼壓(IOP)或正常眼壓的青光眼。
6.權(quán)利要求1的方法，其中的疾病或病癥是瞼炎或眼睛紅斑痤瘡。
7.權(quán)利要求1的方法，其中將所述化合物施用直至在組織和體液中的濃度達(dá)到約0.1μM到約10mM。
8.權(quán)利要求1的方法，其中將所述化合物施用直至在組織和體液中的濃度達(dá)到約1μM到約5mM。
9.權(quán)利要求1的方法，其中將所述化合物施用直至在組織和體液中的濃度達(dá)到約25μM到約1mM。
10.權(quán)利要求1的方法，其中中將所述化合物施用直至在組織和體液中的濃度達(dá)到約50μM到約100μM。
11.權(quán)利要求1的方法，其中的疾病或病癥是老花眼。
12.權(quán)利要求1的方法，其中的疾病或病癥是角膜疾病。
13.權(quán)利要求1的方法，其中的疾病或病癥是干眼。
14.權(quán)利要求1的方法，其中的羥胺化合物是tempol-H，tempo-H或oxano-H。
15.權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括對患者的眼睛施用還原劑。
16.權(quán)利要求15的方法，其中的還原劑與組合物共施用。
17.權(quán)利要求16的方法，其中的還原劑被配制成組合物的組成部分。
18.權(quán)利要求15的方法，其中的還原劑與組合物分開施用。
19.權(quán)利要求15的方法，其中的還原劑是巰基化合物。
20.權(quán)利要求15的方法，其中的還原劑是巰基丙?；拾彼帷-乙酰基半胱氨酸、β-巰基乙胺或谷胱甘肽。
21.權(quán)利要求1的方法，其中的組合物通過注射施用。
22.權(quán)利要求1的方法，其中的組合物從放置于眼睛表面上的聚合物圓盤或圓片施用。
23.權(quán)利要求1的方法，其中的組合物通過插管或植入患者體內(nèi)或者靠近眼睛或通過離子電滲療法裝置施用于眼睛表面的裝置進(jìn)行施用。
24.權(quán)利要求1的方法，其中的組合物以眼藥水、洗眼液或眼用軟膏的形式進(jìn)行施用。
25.權(quán)利要求14的方法，其中所述羥胺化合物以約0.1μM到10mM的濃度存在。
26.權(quán)利要求14的方法，其中所述羥胺化合物以約1.0μM到5mM的濃度存在。
27.權(quán)利要求14的方法，其中所述羥胺化合物以約10μM到2.5mM的濃度存在。
28.權(quán)利要求14的方法，其中所述羥胺化合物以約50μM到1mM的濃度存在。
29.權(quán)利要求14的方法，其中所述羥胺化合物以約100μM到1mM的濃度存在。
30.保護(hù)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞免受光氧化損傷的方法，其中該方法包括對患者的眼睛施用包括眼科可接受的載體或稀釋劑以及足以緩解、延緩或預(yù)防光氧化損傷的發(fā)展，或減輕光氧化損傷的治療量的羥胺化合物的組合物。
31.權(quán)利要求30的方法，其中的羥胺化合物是tempol-H、tempo-H或oxano-H。
32.權(quán)利要求30的方法，進(jìn)一步包括對患者的眼睛施用還原劑。
33.權(quán)利要求32的方法，其中的還原劑是巰基化合物。
34.權(quán)利要求32的方法，其中的還原劑是巰基丙?；拾彼帷-乙?；腚装彼?、β-巰基乙胺或谷胱甘肽。
35.保護(hù)毛囊并預(yù)防由放療引起的進(jìn)一步的脫發(fā)的方法，包括對需要的患者施用包括藥物可接受的載體或稀釋劑和至少一種足以改善、延緩或預(yù)防進(jìn)一步脫發(fā)的發(fā)展的治療量的羥胺化合物的組合物。
36.保護(hù)或治療由放療引起的直腸組織損傷的方法，包括對需要的患者施用包括藥物可接受的載體或稀釋劑和至少一種足以改善、延緩或預(yù)防組織損傷的治療量的羥胺化合物的組合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了治療或預(yù)防大量眼睛疾病或病癥的方法。特別是，公開了緩解眼睛的黃斑變性、糖尿病視網(wǎng)膜病變和其他視網(wǎng)膜病變、以及眼葡萄膜炎、老花眼、干眼、青光眼、瞼炎和紅斑痤瘡的方法。本方法包括一種施用含有眼科可接受載體或稀釋劑和足以預(yù)防、延緩一種或多種眼科疾病的發(fā)展或減輕其癥狀的治療量的羥胺化合物的組合物。
文檔編號A61K31/13GK1882339SQ200480034356
公開日2006年12月20日 申請日期2004年11月22日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月20日
發(fā)明者威廉·L·馬蒂爾, 甘希亞姆·帕蒂爾 申請人:奧特拉藥物公司