專利名稱：具有黑色素生物合成抑制活性的土曲霉酮化合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有黑色素生物合成抑制活性并源于真菌的化合物的新用途及其制備方法。
背景技術(shù)：
黑色素是一種酚類生物高聚物，并廣泛地分布在自然界中。它是黑色色素和蛋白的復(fù)合物，并具有提高抵抗任何環(huán)境和競(jìng)爭(zhēng)的生存能力的活性。然而，黑色素的過度產(chǎn)生會(huì)引起變色和雀斑，導(dǎo)致皮膚老化或甚至導(dǎo)致皮膚癌。黑色素之所以過度生物合成，其原因在于臭氧層被破壞而嚴(yán)重接觸UV光，而過度生物合成會(huì)對(duì)人類造成傷害，尤其是對(duì)皮膚造成傷害。因此，做出了多種嘗試來研發(fā)具有較強(qiáng)黑色素生物合成抑制活性的新物質(zhì)。
在皮膚癌方面，黑色素生物合成已成為研究的主要目標(biāo)，研發(fā)了各種黑色素生物合成抑制劑，并應(yīng)用到醫(yī)藥、化妝品和食品工業(yè)領(lǐng)域，例如，用于制備皮膚病治療劑、預(yù)防和治療變色和雀斑的皮膚增白劑和褐變抑制劑等。并且從環(huán)境角度出發(fā)，對(duì)抑制劑有極大的需求。
黑色素生物合成所涉及的因素可分成兩類；其中一類由直接抑制酪氨酸酶的各種因素構(gòu)成，而酪氨酸酶是一種黑色素生物合成速度調(diào)節(jié)酶。
酪氨酸酶是一種與銅結(jié)合的酶，并廣泛地存在于動(dòng)物、植物、微生物和人類中。它可以加速酚類化合物如一羥基-或二羥基-苯丙氨酸(DOPA)等的需氧氧化，并誘導(dǎo)因黑色素沉積在接觸UV光的皮膚上而造成的皮膚損傷和老化。此外，多酚氧化酶如酪氨酸酶引起食物發(fā)生褐變反應(yīng)，尤其是蔬菜或水果。
對(duì)黑色素生物合成抑制劑的研究集中在研發(fā)酪氨酸酶抑制劑，迄今所研發(fā)的代表性酪氨酸酶抑制劑是能夠與酪氨酸酶活性部位的銅離子產(chǎn)生螯合作用的物質(zhì)、使醌類轉(zhuǎn)化成酚類的還原劑如抗壞血酸、以及使酪氨酸酶本身變性的非亞硫酸鹽試劑。
酪氨酸酶抑制劑已被研發(fā)成各種形式的增白劑，盡管已被應(yīng)用，但仍存在問題。例如，4-羥基茴香醚和氫化奎寧，已被局部使用以治療黑素增多病，如變色、雀斑、斑點(diǎn)、妊娠期的色素沉著過度等，盡管它們具有較強(qiáng)的黑色素生物合成抑制活性，但同時(shí)也會(huì)誘導(dǎo)嗜鉻細(xì)胞的惡化或甚至死亡并損害細(xì)胞的原始功能。特別地，氫醌化合物已被研發(fā)成具有黑色素生物合成抑制活性的增白霜?jiǎng)瑩?jù)說其可誘導(dǎo)皮膚病或因其細(xì)胞毒性而產(chǎn)生的疾病，因而它們僅在一些國(guó)家被允許使用。
黑色素生物合成所涉及的另一類因素不直接抑制酪氨酸酶，但可以調(diào)節(jié)黑色素嗜鉻細(xì)胞中酪氨酸酶表達(dá)所涉及的轉(zhuǎn)錄因子。
根據(jù)近來關(guān)于ERK抑制測(cè)試的報(bào)道，黑色素細(xì)胞中的黑色素生物合成可能受到ERK活化作用的抑制(Englaro W等人，Inhibition of the mitogen-activated protein kinase pathway triggers B16melanoma cell differentiation.J Biol Chem，1998，2739966-9970)和由ERK活化作用產(chǎn)生的MITF分解的抑制(Wu M等人，c-Kit triggers dualphosphorylations，which couple activation and degradation of the essentialmelanocyte factor Mi.Genes Dev 2000，14301-312)。
利用這種因素的黑色素生物合成抑制劑不會(huì)產(chǎn)生與直接抑制酪氨酸酶有關(guān)的副作用，此外，當(dāng)它們與常規(guī)黑色素生物合成抑制劑一起使用時(shí)，由于其不同的作用機(jī)制可能會(huì)提高效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種黑色素生物合成抑制劑，它不直接抑制酪氨酸酶而產(chǎn)生增白作用，但是通過加速ERK(胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶)的活化作用可抑制MITF(小眼畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子)的表達(dá)，本發(fā)明還提供這種黑色素生物合成抑制劑的制備方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種含有土曲霉酮化合物作為有效成分的黑色素生物合成抑制劑。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明也提供一種從青霉菌sp(Penicillium sp)分離具有抑制黑色素合成特性的土曲霉酮化合物的方法。
盡管本發(fā)明的土曲霉酮化合物不直接抑制酪氨酸酶，但是它通過加速黑色素嗜鉻細(xì)胞中的ERK活化作用而抑制MITF的表達(dá)，從而表現(xiàn)出增白效果。此外，與直接作用于酪氨酸酶的常規(guī)黑色素生物合成抑制劑相比，這種化合物幾乎沒有細(xì)胞毒性，因此它不會(huì)引起明顯的副作用，這說明這種化合物是皮膚病治療劑、皮膚增白劑或褐變抑制劑的有應(yīng)用前景的候選物。


從下面結(jié)合附圖的詳細(xì)說明中，可以更清楚地理解本發(fā)明的上述和其他目的、特征以及優(yōu)點(diǎn)，在附圖中圖1是示意圖，表明從青霉菌sp KCTC 26245的代謝物分離土曲霉酮化合物的分離過程。
圖2是表明本發(fā)明的土曲霉酮化合物的1H-NMR(600MHz)譜圖。
圖3是表明本發(fā)明的土曲霉酮化合物的HMBC(600MHz)譜圖。
圖4是表明本發(fā)明的土曲霉酮化合物的細(xì)胞毒性測(cè)試結(jié)果的示意圖。
圖5是表明本發(fā)明的土曲霉酮化合物的黑色素生物合成抑制活性的示意圖。
圖6是表明曲酸(一種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì))的黑色素生物合成抑制活性的示意圖。
圖7是一組照片，表明本發(fā)明的土曲霉酮化合物的黑色素生物合成抑制活性。
圖8是電泳照片，表明本發(fā)明的土曲霉酮化合物對(duì)于MITF表達(dá)和ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的影響。
具體實(shí)施例方式
下面詳細(xì)地說明本發(fā)明。
本發(fā)明提供一種含有下式1所代表的土曲霉酮化合物作為有效成分的黑色素生物合成抑制劑。
式1所代表的土曲霉酮化合物具有黑色素生物合成抑制作用。如圖5-圖7所示，如同常規(guī)黑色素生物合成抑制劑曲酸一樣，本發(fā)明的土曲霉酮化合物以劑量依賴的方式抑制黑色素生物合成，但是本發(fā)明的化合物的抑制作用是曲酸的10倍。
盡管本發(fā)明的土曲霉酮化合物不直接抑制酪氨酸酶，但是它通過加速黑色素嗜鉻細(xì)胞中的ERK(胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶)活化作用而特異性地抑制MITF(小眼畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子)表達(dá)，從而進(jìn)行增白。由于與直接抑制酪氨酸酶的常規(guī)黑色素生物合成抑制劑相比具有低的細(xì)胞毒性，因而副作用更小。此外，當(dāng)與常規(guī)抑制劑一起使用時(shí)，由于它們不同的作用機(jī)制，增白效果會(huì)增強(qiáng)。因此，本發(fā)明的化合物可以有效地用作皮膚病治療劑、皮膚增白劑或褐變抑制劑。
本發(fā)明還提供一種從青霉菌sp分離土曲霉酮化合物的方法。
具體而言，本發(fā)明提供一種制備土曲霉酮化合物的方法，該方法包括如下步驟培養(yǎng)青霉菌sp菌株(步驟1)；從上述步驟1得到該菌株或其培養(yǎng)液(步驟2)；從上述菌株或培養(yǎng)液得到乙酸乙酯提取物(步驟3)；和通過柱色譜法對(duì)上述乙酸乙酯提取物進(jìn)行處理得到式1的土曲霉酮化合物(步驟4)。
在步驟1中，培養(yǎng)青霉菌sp菌株。
可以從土壤中分離青霉菌sp菌株。本發(fā)明優(yōu)選使用青霉菌sp KCTC26245。在步驟1中，在酵母-麥芽提取物介質(zhì)(YM介質(zhì))中，以140rpm的轉(zhuǎn)速將青霉菌sp KCTC 26245在28℃培養(yǎng)8天。
在從土壤中分離出新菌株KCTC 26245后，觀察菌株的黑色素生物合成抑制作用，以選擇主要活性菌株。在選擇的含有可被乙酸乙酯提取的高度激活的活性因子的活性菌株中，選擇具有最高活性的菌株。選擇的菌株稱作‘青霉菌sp F020135’，并于2003年8月24日保藏在韓國(guó)生物科學(xué)與生物技術(shù)研究所(KRIBB)的韓國(guó)典型菌種保藏中心(KCTC)(保藏號(hào)KCTC 26245)。
在步驟2中，得到菌株或其培養(yǎng)液。具體而言，從培養(yǎng)的青霉菌spKCTC 26245的丙酮提取物得到含有菌株代謝物的菌株或其培養(yǎng)液。
在步驟3中，從上述菌株或其培養(yǎng)液得到乙酸乙酯提取物。即，用乙酸乙酯提取上述菌株或菌株培養(yǎng)液的丙酮提取物的等份試樣，然后將其減壓濃縮。
在步驟4中，用柱色譜法對(duì)上述得到的乙酸乙酯提取物進(jìn)行處理，以得到土曲霉酮化合物。
具體而言，步驟4包括如下兩個(gè)子步驟；使用CHCl3和甲醇的混合溶劑作為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱色譜分離步驟3中制得的乙酸乙酯提取物，得到餾份(步驟4-1)；和使用甲醇作為流動(dòng)相，經(jīng)交聯(lián)葡聚糖-LH20柱色譜分離上述餾份，得到本發(fā)明的土曲霉酮化合物(步驟4-2)。
在步驟(4-1)中，CHCl3和甲醇的混合溶劑用作流動(dòng)相，CHCl3與甲醇的混合比優(yōu)選是20∶1-1∶1。
在步驟(4-2)中，使用甲醇作為流動(dòng)相。此時(shí)，100％甲醇優(yōu)選用于第一柱色譜，然后70％甲醇優(yōu)選用于第二柱色譜。
下面的實(shí)施例闡明本發(fā)明的可實(shí)施的和目前優(yōu)選的實(shí)施方案。
然而，可以理解，本領(lǐng)域所屬技術(shù)人員在考慮發(fā)明內(nèi)容后，可以在本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)做出各種修改和改進(jìn)。
<實(shí)施例1>制備本發(fā)明的土曲霉酮化合物本發(fā)明的黑色素生物合成抑制劑可以從由土壤中分離的青霉菌sp菌株的肉湯培養(yǎng)基中分離出來。
具體而言，在500ml Erlenmeyer燒瓶中，以140rpm的轉(zhuǎn)速將青霉菌sp F020135(保藏號(hào)KCTC 26245)(一種從土壤中分離出的真菌菌株)在100ml酵母-麥芽提取物(YM)介質(zhì)上在28℃培養(yǎng)8天。使用濾紙將細(xì)胞和培養(yǎng)液彼此分離，將細(xì)胞置于等量丙酮中，放置過夜。用濾紙過濾除去細(xì)胞，減壓濃縮得到丙酮提取物。將丙酮提取物和培養(yǎng)液置于等量乙酸乙酯中，進(jìn)一步提取。減壓濃縮混合物，得到乙酸乙酯提取物。
通過硅膠柱色譜從制備的乙酸乙酯提取物得到餾份。首先，制備201的CHCl3和甲醇的混合溶劑，用于洗脫。逐漸提高混合溶劑中的甲醇含量，以提高極性，直到比例達(dá)到1∶1。在得到的餾份中，選擇表現(xiàn)出黑色素生物合成抑制活性的那些餾份。
使用100％甲醇溶劑飽和的交聯(lián)葡聚糖LH-20柱色譜純化得到的餾份。此時(shí)，甲醇用作洗脫溶劑，僅收集活性餾份，以得到式1的土曲霉酮化合物(圖1)。
本發(fā)明的黑色素生物合成抑制劑的物理-化學(xué)性質(zhì)研究本發(fā)明的化合物即一種黑色素生物合成抑制劑的物理-化學(xué)性質(zhì)，其結(jié)果是，它被證實(shí)是白色粉末。
對(duì)該化合物進(jìn)行質(zhì)量分析，其結(jié)果證實(shí)該化合物的分子量是154。基于上述結(jié)果以及1H，13C NMR光譜數(shù)據(jù)分析，本發(fā)明的化合物其分子式被確定為C8H10O3。
本發(fā)明的化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)為表征該化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，進(jìn)行包括1H NMR光譜和13C NMR光譜的一維NMR以及進(jìn)行二維NMR(例如HMBC譜)。
將本發(fā)明的化合物溶解在氘代甲醇(CD3OD)中，研究1H NMR譜和13C NMR譜。其結(jié)果證實(shí)為一種土曲霉酮化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如式1所代表的4，5-二羥基-3-丙烯基-2-環(huán)戊烯-1-酮。
經(jīng)NMR數(shù)據(jù)分析和13C NMR譜研究，觀察到8個(gè)碳峰19.2(CH3)，78.0(CH)，82.5(CH)，125.0(CH)，126.1(CH)，145.0(CH)，170，和205.5ppm。經(jīng)1H-NMR譜研究，還觀察到其他峰1.94ppm(3H，dd，J＝6.9，1.5Hz)，4.07ppm(1H，d，J＝2.7Hz)，4.67ppm(1H，d，J＝2.7Hz)，6.0ppm(1H，s)，6.44ppm(1H，dd，J＝15.6，1.5)，和6.81ppm(1H，aq，J＝6.9，15.6)。基于分子量分析和NMR數(shù)據(jù)分析結(jié)果，該化合物的結(jié)構(gòu)最終確定為式1的土曲霉酮。
<制備實(shí)施例1>制備含有本發(fā)明的土曲霉酮化合物的霜?jiǎng)⒂仓?、十六醇十八醇混合物、辛?癸酸甘油三酯、礦物油和丁二醇放入置于水浴中的燒杯中，加熱至75℃成為油相?；旌仙鲜鰧?shí)施例1中制得的土曲霉酮化合物、水、甘油、吐溫60，吐溫80和氫氧化鉀，生成水相，向水相中加入上述油相。反應(yīng)溶液在1200-1500rpm的轉(zhuǎn)速下攪拌10-20分鐘，然后冷卻。將溶液在室溫下放置1-2天。霜?jiǎng)┲兴镔|(zhì)的含量如下表1所示(總重是100g)。
表1


<實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1>本發(fā)明的化合物的細(xì)胞毒性測(cè)試為研究本發(fā)明的土曲霉酮化合物的細(xì)胞毒性，用土曲霉酮化合物處理Mel-Ab細(xì)胞。
具體而言，在5％CO2、37℃條件下，用DMEM介質(zhì)培養(yǎng)Mel-Ab黑色素細(xì)胞，該DMEM介質(zhì)補(bǔ)充有10％胎牛血清(FBS)，100nM佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(phobol 12-myristate 13-acetate)，1nM霍亂毒素，50μg/ml鏈霉素和50U/ml青霉素。
以不同濃度(0，10，25，50，75，100μM)的土曲霉酮化合物處理上述培養(yǎng)的Mel-Ab黑色素細(xì)胞24小時(shí)，然后進(jìn)一步培養(yǎng)。隨后除去介質(zhì)。用0.5ml 0.1％結(jié)晶紫使細(xì)胞染色，檢查Mel-Ab黑色素細(xì)胞。通過洗滌幾次除去結(jié)晶紫。使用1.0ml 95％乙醇提取細(xì)胞中殘余的結(jié)晶紫。用ELISA測(cè)讀儀測(cè)量提取的結(jié)晶紫的OD590，以研究細(xì)胞的活力。結(jié)果如圖4所示。
如圖4所示，在100μM濃度下，本發(fā)明的土曲霉酮化合物沒有顯示細(xì)胞毒性，表明該化合物可以安全地對(duì)人施用。
<實(shí)驗(yàn)實(shí)施例2>本發(fā)明化合物的黑色素生物合成抑制作用分別用不同濃度的土曲霉酮化合物和曲酸(一種常規(guī)增白劑)(0，10，25，50，75和100μM的土曲霉酮化合物和0，1，10和100μM的曲酸)處理上述實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1中培養(yǎng)的Mel-Ab黑色素細(xì)胞。然后，比較每一次處理所產(chǎn)生的黑色素生物合成，結(jié)果如圖5和圖6所示。
在顯微鏡下對(duì)比在一般培養(yǎng)條件培養(yǎng)的Mel-Ab黑色素細(xì)胞和用本發(fā)明的土曲霉酮化合物處理的Mel-Ab黑色素細(xì)胞，結(jié)果如圖7所示。
如圖5和圖6所示，土曲霉酮化合物和曲酸劑量依賴性地抑制黑色素生物合成。然而，在10μM濃度時(shí)，土曲霉酮化合物的黑色素生物合成抑制作用是同濃度下曲酸的10倍。
如圖7所示，經(jīng)土曲霉酮化合物處理，在通常條件下培養(yǎng)的Mel-Ab黑色素細(xì)胞的深色黑色素劑量依賴性地顯著下降，這表明土曲霉酮化合物可抑制Mel-Ab黑色素細(xì)胞中的黑色素生物合成。
<實(shí)驗(yàn)實(shí)施例3>Mel-Ab黑色素細(xì)胞中的ERK活化作用和MITF分解為研究本發(fā)明的土曲霉酮化合物的黑色素生物合成抑制機(jī)理，用100μM土曲霉酮化合物處理上述培養(yǎng)的Mel-Ab黑色素細(xì)胞。在第0，2，10，30，60，180和360分鐘的每一時(shí)間點(diǎn)，用西方點(diǎn)墨法(Western blot)分析ERK(胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶)活化作用和MITF(小眼畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子)分解。結(jié)果如圖8所示。
結(jié)果如圖8所示，用土曲霉酮化合物處理Mel-Ab黑色素細(xì)胞2-10分鐘后，ERK1和ERK2快速活化，該活化作用至少持續(xù)6小時(shí)。但是，MITF的表達(dá)隨ERK活化作用下降。
根據(jù)對(duì)ERK抑制測(cè)試的近期報(bào)道，黑色素細(xì)胞中的黑色素生物合成可被ERK活化作用抑制(Englaro W等人，Inhibition of themitogen-activated protein kinase pathway triggers B16 melanoma celldifferentiation.J Biol Chem，1998，2739966-9970)，和被ERK活化作用引起的MITF分解抑制(Wu M等人，c-Kit triggers dual phosphorylations，which couple activation and degradation of the essential melanocyte factorMi.Genes Dev 2000，14301-312)。
綜上所述，如圖8所示，本發(fā)明的增白組合物中所含的土曲霉酮化合物可以活化ERK，從而調(diào)節(jié)MITF的表達(dá)，這表明該化合物通過抑制黑色素細(xì)胞中的黑色素生物合成而具有增白效果。
工業(yè)實(shí)用性如上所述，本發(fā)明涉及一種含有土曲霉酮化合物作為有效成分的黑色素生物合成抑制劑。本發(fā)明的土曲霉酮化合物可以從國(guó)內(nèi)土壤中寄居的青霉菌sp KCTC 26245真菌菌株中容易地分離出來。這種抑制劑不直接抑制酪氨酸酶，而是通過活化黑色素嗜鉻細(xì)胞中的ERK來抑制MITF表達(dá)而產(chǎn)生增白作用。因此，這種化合物的黑色素生物合成抑制作用遠(yuǎn)大于任何其他常規(guī)的抑制劑，并且當(dāng)這種化合物與其他常規(guī)抑制劑一起使用時(shí)，由于不同的作用機(jī)制，可進(jìn)一步提高效果。因此，本發(fā)明的化合物可有效地用于制備皮膚病治療劑、皮膚增白劑和褐變抑制劑。
本領(lǐng)域所屬技術(shù)人員可以理解的是，前述說明書中所公開的構(gòu)思和具體實(shí)施方案可以容易地用作改進(jìn)或設(shè)計(jì)用于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的其他實(shí)施方案的基礎(chǔ)。本領(lǐng)域所屬技術(shù)人員還可以理解的是，這種等同實(shí)施方案不會(huì)脫離所附權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明的精神和保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種含有下式1所代表的土曲霉酮化合物作為有效成分的黑色素生物合成抑制劑。<式1>
2.如權(quán)利要求1所述的黑色素生物合成抑制劑，其特征在于，所述黑色素生物合成抑制劑用作皮膚病治療劑。
3.如權(quán)利要求1所述的黑色素生物合成抑制劑，其特征在于，所述黑色素生物合成抑制劑用作皮膚增白劑。
4.如權(quán)利要求1所述的黑色素生物合成抑制劑，其特征在于，所述黑色素生物合成抑制劑用作褐變抑制劑。
5.一種土曲霉酮化合物的制備方法，所述方法包括如下步驟培養(yǎng)青霉菌sp菌株KCTC 26245(步驟1)；從上述步驟1得到所述菌株或其培養(yǎng)液(步驟2)；從上述菌株或培養(yǎng)液得到乙酸乙酯提取物(步驟3)；和通過柱色譜法對(duì)所述乙酸乙酯提取物進(jìn)行處理得到權(quán)利要求1所述的土曲霉酮化合物(步驟4)。
6.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述步驟4包括如下兩個(gè)子步驟使用CHCl3和甲醇的混合溶劑作為流動(dòng)相，經(jīng)硅膠柱色譜分離步驟3中制得的乙酸乙酯提取物，得到餾份(步驟4-1)；和使用甲醇作為流動(dòng)相，經(jīng)交聯(lián)葡聚糖-LH20柱色譜分離所述餾份，得到本發(fā)明的土曲霉酮化合物(步驟4-2)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含有土曲霉酮化合物作為有效成分的黑色素生物合成抑制劑。所述土曲霉酮化合物可以從國(guó)內(nèi)土壤中寄居的青霉菌spKCTC 26245真菌菌株中容易地分離出來。這種抑制劑不直接抑制酪氨酸酶，而是通過活化黑色素嗜鉻細(xì)胞中的ERK(胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶)來抑制MITF(小眼畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子)表達(dá)以產(chǎn)生增白作用。因此，這種化合物的黑色素生物合成抑制作用遠(yuǎn)大于任何其他常規(guī)的抑制劑，并且當(dāng)這種化合物與其他常規(guī)抑制劑一起使用時(shí)，由于它們不同的作用機(jī)制，可進(jìn)一步提高作用效果。因此，本發(fā)明的化合物可有效地用作皮膚病治療劑、皮膚增白劑和褐變抑制劑。
文檔編號(hào)A61K8/99GK1925848SQ200480036912
公開日2007年3月7日 申請(qǐng)日期2004年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月12日
發(fā)明者俞益東, 金元坤, 柳仁子, 金鐘平, 李相龜, 樸曙亨, 金東錫, 樸景贊 申請(qǐng)人:韓國(guó)生命工學(xué)研究院, 株式會(huì)社威爾斯金