專利名稱：乙炔雌二醇的二－甾族前體藥物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物和其藥學可接受的鹽。本發(fā)明也包括二-甾族前體藥物的藥物劑量單元和形成乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物的方法。
背景技術：
游離的17β-雌二醇是最具活性的、天然存在的人類雌激素。然而，由于吸收差和口腔服用之后的大量的胃腸道和肝臟的首過代謝，通常其沒有口服活性。增加活性的方法包括使用可以提高吸收的微粉化藥劑、和使用前體藥物例如雌二醇-17-戊酸酯和馬雌激素，后者是硫酸酯和葡糖苷酸衍生物的組合物(Martindale第32版，1999，Pharmaceutical Press)。
增加活性的另一個方法是改變17β-雌二醇的結構。乙炔雌二醇是這種的改變的一個例子。與17β-雌二醇相比，在17位上的乙炔基極大地降低了肝臟首過代謝，能夠使化合物比天然雌激素17β-雌二醇更具活性(Martindale第32版，1999 Pharmaceutical Press)。
乙炔雌二醇是在避孕制劑中使用的最常見的雌激素。與17β-雌二醇相比，由于其藥效增強了，其可使用比較低的劑量(即每天口服15到50μg)(Martindale第32版1999，Pharmaceutical Press)。其通過其它給藥途徑也更有效，即通過陰道，此時其可以以15μg的日劑量使用(參見美國專利No.5,989,581)。其也用于激素代替療法，不過比17β-雌二醇的應用范圍小。
Taubert等人的美國專利No.3,916,002描述了許多具有式R-O-CO-(CH2)n-CO-O-R的低聚類固醇酯，其中n在2和8之間，且每個R是單價類固醇基團。該類固醇基團衍生自具有羥基取代基的類固醇，羥基取代基在3、16或17號碳原子的其中一個上。它們可以通過用在3、16或17號碳原子上具有羥基取代基的類固醇將二羧酸的兩個羧基基團酯化來制備。然而，Taubert等人沒有公開連接在乙炔雌二醇部分的3′C位的新的乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物。
盡管在避孕用途中乙炔雌二醇優(yōu)于17β-雌二醇，但還是有一些與使用乙炔雌二醇有關的缺點。例如，不是所有給予的乙炔雌二醇是生物學可利用的。乙炔雌二醇在腸壁和肝臟中產(chǎn)生代謝，這影響其生物利用度。而且，其生物利用度在個體與個體之間可以略有變化(Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology，1991；6733-736)。此外，已經(jīng)注意到乙炔雌二醇在肝中代謝，發(fā)生腸肝再循環(huán)(Methods And Findings in Experimental ClinicalPharmacology，1982；4133-42)。
一種可提高生物利用度的新的乙炔雌二醇的前體藥物將是非常有利的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及按照式(I)的乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物式I 和其藥學可接受的鹽。其中R選自
或Y-Z-X其中X和Y獨立地選自 或 并且Z是(i)具有1到10個碳原子的脂族直鏈，其可以是飽和或不飽和的，并且任選可以被一個或多個低級烷基、羥基或氨基取代，(ii)A-B-D其中A和D獨立地是-CO(CH2)f-，其中f是0至5，且B是-O-(CH2CH2O)p-，其中p是1至700，或(iii)具有2至15個氨基酸單元的肽鍵，所述氨基酸單元獨立地衍生自選自下列的氨基酸丙氨酸，精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，半胱氨酸，谷氨酰胺，谷氨酸，甘氨酸，組氨酸，異亮氨酸，亮氨酸，賴氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，脯氨酸，絲氨酸，蘇氨酸，色氨酸，酪氨酸，纈氨酸，或其組合，其中肽的端基是獨立地衍生自天冬氨酸和谷氨酸的氨基酸單元。
本發(fā)明也包括藥物劑量單元，包含(a)按照式I的乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物，和(b)一或多種藥學可接受的賦形劑。在一個特別優(yōu)選實施方案中，將孕激素包括在藥物劑量單元內(nèi)。
本發(fā)明也包括形成具有式I結構的乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物的方法，包括乙炔雌二醇和連接劑在有效形成乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物的條件下反應的步驟。任選該方法可以包括進一步的純化步驟，例如色譜或重結晶。
在本發(fā)明的另一個方面，提供了一種達到避孕的方法。該方法包括給予有此需要的患者有效時間段的、有效量的本發(fā)明乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物的步驟，優(yōu)選與孕激素組合。
在本發(fā)明的又一個方面，提供了一種提供激素治療的方法。該方法包括給予有此需要的患者有效時間段的、有效量的本發(fā)明乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物的步驟。
發(fā)明的詳細說明對于本發(fā)明的目的，前體藥物是一種實體，其或者包括活性藥物的非活性形式，或者包括能夠使藥物具有優(yōu)選的性能的化學基團。
對于本發(fā)明的目的，應該理解室溫是指25℃+/-5℃。
在本發(fā)明中，乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物具有乙炔雌二醇部分，其通過二價連接基R連接在乙炔雌二醇部分的3′C位上。在特別優(yōu)選實施方案中，連接基R可以選自碳酸酯基團或具有2至10個碳原子的脂族骨架的二羧基，所述脂族骨架可以是飽和或不飽和的、直鏈或支鏈的，并且其可以任選被氨基、羥基或低級烷基取代。對于本文中使用的低級烷基，其是具有1至6個碳原子的直鏈或支鏈脂族基。在另一個實施方案中，R可以是具有聚氧乙烯骨架的二羧基。在進一步的實施方案中，連接基可以是在每個端部具有羧酸官能團的肽。
在本發(fā)明中，乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物具有下列結構式式I
其中R選自 或Y-Z-X其中X和Y獨立地選自 或 并且Z是(i)具有1到10個碳原子的脂族直鏈，其可以是飽和或不飽和的，并且任選可以被一個或多個低級烷基、羥基或氨基取代，(ii)A-B-D其中A和D獨立地是-CO(CH2)f-，其中f是0至5，且B是-O-(CH2CH2O)p-，其中p是1至700，或(iii)具有2至15個氨基酸單元的肽鍵，所述氨基酸單元獨立地衍生自選自下列的氨基酸丙氨酸，精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，半胱氨酸，谷氨酰胺，谷氨酸，甘氨酸，組氨酸，異亮氨酸，亮氨酸，賴氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，脯氨酸，絲氨酸，蘇氨酸，色氨酸，酪氨酸，纈氨酸，或其組合，其中肽的端基是獨立地衍生自天冬氨酸和谷氨酸的氨基酸單元。
很顯然，當Y和X是羧基或磺酸基時，那些基團的羰基或硫與Z結合。由此，在一個優(yōu)選實施方案中，當Y和X兩個都是羰基時，則R是 對普通技術人員更應該顯而易見的是，在二-甾族前體藥物中的每個乙炔雌二醇部分的立體化學構象將取決于R的結構構象。
在一個優(yōu)選實施方案中，R選自 在另一個實施方案中，R是 優(yōu)選，乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物選自
二-(3-乙炔雌二醇)碳酸酯， 二-(3-乙炔雌二醇)富馬酸酯， 二-(3-乙炔雌二醇)琥珀酸酯， 二-(3-乙炔雌二醇)戊二酸酯， 二-(3-乙炔雌二醇)天冬氨酸酯，
二-(3-乙炔雌二醇)谷氨酸酯， 二-(3-乙炔雌二醇)己二酸酯， 二-(3-乙炔雌二醇)蘋果酸酯，和其藥學可接受的鹽。
本文中使用的短語“藥學可接受的鹽”是指，保持具體化合物的游離酸和堿的生物有效性的鹽，而且不是生物學不合需要的或其它不合需要的鹽。藥學可接受的鹽的例子包括硫酸鹽，焦硫酸鹽，硫酸氫鹽，亞硫酸鹽，亞硫酸氫鹽，磷酸鹽，磷酸一氫鹽，磷酸二氫鹽，偏磷酸鹽，焦磷酸鹽，氯化物，溴化物，碘化物，乙酸鹽，丙酸鹽，癸酸鹽，辛酸鹽，丙烯酸鹽，甲酸鹽，異丁酸鹽，己酸鹽，庚酸鹽，丙炔酸鹽，草酸鹽，丙二酸鹽，琥珀酸鹽，辛二酸鹽，癸二酸鹽，富馬酸鹽，馬來酸鹽，丁炔-1，4-二酸鹽，己炔-1，6-二酸鹽，苯甲酸鹽，氯苯甲酸鹽，甲基苯甲酸鹽，二硝基苯甲酸鹽，羥基苯甲酸鹽，甲氧基苯甲酸鹽，鄰苯二甲酸鹽，磺酸鹽，二甲苯磺酸鹽，苯乙酸鹽，苯丙酸鹽，苯基丁酸鹽，檸檬酸鹽，乳酸鹽，g-羥基丁酸鹽，乙醇酸鹽，酒石酸鹽，甲烷-磺酸鹽(甲磺酸鹽)，丙磺酸鹽，萘-1-磺酸鹽，萘-2-磺酸鹽和扁桃酸鹽。所需要的鹽可以通過本領域已知的任何合適方法來制備，包括用無機酸處理游離堿，無機酸例如鹽酸，氫溴酸，硫酸，硝酸，磷酸，等等，或用有機酸，例如乙酸，馬來酸，琥珀酸，扁桃酸，富馬酸，丙二酸，丙酮酸，草酸，羥基乙酸，水楊酸，吡喃糖苷酸，例如葡糖醛酸或半乳糖醛酸，α-羥基酸，例如檸檬酸或酒石酸，氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸，芳香酸，例如苯甲酸或肉桂酸，磺酸，例如對甲苯磺酸或乙磺酸，等等。在本發(fā)明中，鹽酸鹽是優(yōu)選的鹽。
可以配制藥物劑量單元，其中包括本發(fā)明的乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物以及一或多種藥學可接受賦形劑。
用于本文中的賦形劑包括多種添加劑或成分，例如填料，稀釋劑(固體和液體)，生物相容的聚合物(例如有機聚硅氧烷，聚氨酯和聚丙烯酸甲酯)，皮膚滲透劑和滲透增強劑，增溶劑，潤滑劑，穩(wěn)定劑，流動調(diào)節(jié)劑，著色劑，助流劑，泡騰劑，甜味劑，香料，芳香劑等等。
在藥物劑量單元內(nèi)可以包括其它類固醇(例如孕激素)。典型的孕激素包括炔諾酮，醋炔諾酮，甲基炔諾酮，左炔諾孕酮，去氧孕烯，3-酮基去氧孕烯，孕二烯酮，醋酸甲羥孕酮等等。
藥物劑量單元可以是口服可吸收的形式，例如片劑、膠囊、咀嚼片或膠囊、片劑、液體懸浮液、藥丸或持續(xù)釋放劑型?；蛘?，藥物劑量單元可以是透皮遞送系統(tǒng)?；蛟诹硪粋€實施方案中，藥物劑量單元可以是局部組合物，例如凝膠、乳膏劑、油膏、液體等等。或在另一個替代的實施方案中，藥物劑量單元可以被設計成陰道給藥形式，例如陰道環(huán)。
可以使用本文描述的方法合成乙炔雌二醇的甾族前體藥物。這些方法可以改變，或可以依照要求使用替代的合成法。合成法一般從原料乙炔雌二醇開始，但還可以從雌酮開始。然而應該理解，對于指明的乙炔雌二醇，可以使用乙炔雌二醇的衍生物。
通常，本發(fā)明的乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物是在有效形成乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物條件下，通過乙炔雌二醇或其衍生物與合適的連接劑反應形成的。
合成本發(fā)明乙炔雌二醇的二-甾族酯的一個方法是在堿的存在下、通過乙炔雌二醇或其衍生物與碳酸酯連接劑和偶聯(lián)劑反應。得到的化合物是二-(3-乙炔雌二醇)碳酸酯。該反應描述在反應路線1中。
在一個優(yōu)選實施方案中，二(4-硝基苯基)碳酸酯(b-NPC)充當碳酸酯連接劑和偶聯(lián)劑，選擇4-二甲基氨基吡啶(DMAP)作為堿，選擇四氫呋喃(THF)作為溶劑。
可以用于合成本發(fā)明乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物的另一個方法，包括乙炔雌二醇或其衍生物與脂族二酸反應，其中脂族二酸具有1至10個碳原子，即n是從1至10的整數(shù)，其可以是飽和或不飽和的、并且可以任選被一個或多個低級烷基、羥基或氨基取代。脂族二酸是連接劑，并且可以是例如，琥珀酸，酒石酸，蘋果酸，戊二酸，己二酸，富馬酸，馬來酸，谷氨酸或天冬氨酸。在一個實施方案中，可以在堿催化劑的存在下使偶聯(lián)劑與二酸反應，如反應路線2所示。
反應路線2反應路線2A顯示了一個優(yōu)選實施方案，其中偶聯(lián)劑是1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基-碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)，且堿催化劑是4-二甲基氨基吡啶(DMAP)和三乙胺。盡管本領域技術人員容易認識到，許多其它有機溶劑是合適的，但用于進行反應的溶劑優(yōu)選氯仿。
反應路線2A本發(fā)明的前體藥物化合物也可以通過乙炔雌二醇或其衍生物直接與下式的連接劑反應來合成G-CO-Z-X-G其中G是鹵素，且Z和X如先前注釋所定義。優(yōu)選的鹵素是氯和溴。例如，連接劑可以是二-酰基氯，其在堿的存在下與乙炔雌二醇反應，如反應路線3中所描述。

反應路線3n是從1至10的整數(shù)。
使用反應路線3，可以使用DMAP和三乙胺作為堿催化劑。
形成本發(fā)明的乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物的又一個方法是用二酸氨基酸例如天冬氨酸或谷氨酸作為連接劑。
反應路線4舉例說明了這樣的合成法的機理。
反應路線4乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物也可以利用叔丁氧羰基磺基丙氨酸充當連接劑來合成，如反應路線5所描述。
反應路線5或者，可以使聚乙二醇與琥珀酸酐反應，以制備可以在3′C位連接乙炔雌二醇部分的二酸連接劑，如反應路線6所描述。
反應路線6其中n是從1至700的整數(shù)。優(yōu)選n是4至200，且更優(yōu)選n是4至60。
而且，可以使乙炔雌二醇與充當連接劑的二肽或任何合適長度的肽反應。肽連接劑具有2至15個衍生自氨基酸的單元，例如丙氨酸，精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，半胱氨酸，谷氨酰胺，谷氨酸，甘氨酸，組氨酸，異亮氨酸，亮氨酸，賴氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，脯氨酸，絲氨酸，蘇氨酸，色氨酸，酪氨酸，纈氨酸，和其組合。肽的端基獨立地衍生自天冬氨酸或谷氨酸，以形成二價連接劑。2至15個氨基酸可以連接在一起，形成肽連接子，只要連接在端部的氨基酸是天冬氨酸、谷氨酸或其組合。優(yōu)選，2至12個氨基酸連接在一起形成肽。更優(yōu)選，2至5個氨基酸形成二價肽。例如，用正(叔丁氧羰基)進行胺官能團保護的二肽Gly-Asp-Boc可以充當連接基，如反應路線7所示。
反應路線7
優(yōu)選，用于形成本發(fā)明的乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物的連接劑是碳酸酯，H-Y-Z-X-H，或或G-CO-Z-X-G其中G是鹵素。Z可以是二價肽基團。
可以用于合成本發(fā)明乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物的偶聯(lián)劑可以是例如b-NPC、EDCI和其混合物。可以使用替代的化合物，只要它們滿足預定的目的。
在所描述的合成反應中，堿可以用作催化劑。合適的堿包括但不局限于DMAP、三乙胺或其混合物。
可以用于合成反應中的溶劑是例如四氫呋喃(THF)、氯仿、二氯甲烷等等。
為了提高乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物的純度，可以用一或多個洗滌步驟和/或重結晶步驟處理前體藥物。
可以使用洗滌步驟來沖洗乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物形成的沉淀。正如所指明的那樣，可以使用一或多個洗滌步驟。水、氫氧化鈉或任何合適替代物通常可以用于洗滌目的。
正如先前所指明的那樣，通過對二-甾族前體藥物進行一個或多個重結晶步驟，可以提高純度。重結晶步驟可以通過各種方法、并使用合適的溶劑(例如但不局限于乙酸乙酯、庚烷或THF或其混合物)來進行。
合成中的干燥步驟可以通過各種方法來進行，包括但不局限于空氣干燥、真空干燥、烘爐干燥、過濾等等。可以通過使用干燥劑(例如硫酸鎂)來加強干燥，從而促使產(chǎn)物干燥。
已經(jīng)使用各種分析方法對本發(fā)明的乙炔雌二醇化合物的二-甾族前體藥物進行了表征。例如，高效液相色譜法(HPLC)用來確定合成產(chǎn)物的純度。1H和13C核磁共振(NMR)、質(zhì)譜和紅外(IR)光譜用來確定其結構。而且，進一步通過確定熔點來對產(chǎn)物表征。
本發(fā)明乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物可以用于提供避孕。給予有此需要的患者有效時間段的、治療有效量的本發(fā)明乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物。優(yōu)選，與孕激素組合給予二-甾族前體藥物。
本發(fā)明乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物還可以用于提供激素治療療法。這種治療方法包括給予有此需要的患者有效時間段的、治療有效量的本發(fā)明乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物的步驟。
本發(fā)明乙炔雌二醇的前體藥物以“治療有效量”給藥。應該理解，這是指可以正面改變所治療癥狀和/或病癥的足夠數(shù)量的化合物或劑量單元。治療有效量可以被本領域普通技術人員很容易地確定，但當然取決于若干因素。例如，應該考慮所治療的病癥和病癥的嚴重度，所治療患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食和身體條件，治療的持續(xù)時間，并行療法的性質(zhì)，所使用的具體活性組分，所使用的具體藥學-可接受的賦形劑，給予時間，給予方法，排泄比例，藥物組合和任何其它有關的因素。一般地，以每天為基礎所給予的本發(fā)明的乙炔雌二醇的前體藥物量將具有相當于約0.025至約100mcg乙炔雌二醇的藥效。
本發(fā)明的前體藥物優(yōu)選口服或陰道給予。優(yōu)選的劑型是片劑或陰道環(huán)。
具體實施例方式
現(xiàn)在將通過參考下列實施例來說明本發(fā)明的具體實施方案。應該理解，公開這些實施例僅僅是為了說明本發(fā)明，無論如何不應該認為其限定本發(fā)明的范圍。
實施例1二-(3-乙炔雌二醇)碳酸酯的合成制備將乙炔雌二醇(20.0克，0.068摩爾)、b-NPC(10.3克，0.034摩爾)、4-DMAP(0.85克，0.007摩爾)和THF(200毫升)加入到一個配備磁力攪拌器的500ml 3頸圓底燒瓶中。將反應混合物在室溫下攪拌約18小時。將反應混合物傾倒在500mL水中，形成黃色沉淀。伴隨著攪拌，用2M鹽酸(25mL)提取混合物。黃色沉淀轉(zhuǎn)變?yōu)榘咨?br> 將得到的反應混合物過濾，并將沉淀用500mL水徹底地洗滌，過濾。然后用500mL的1M氫氧化鈉徹底地洗滌沉淀，過濾。
然后用500mL的水徹底地洗滌沉淀，過濾。將得到的二-(3-乙炔雌二醇)碳酸酯在40℃真空烘箱中干燥過夜(約18小時)。
重結晶方法將二-(3-乙炔雌二醇)碳酸酯(18.1克)和乙酸乙酯(1L)加入到一個配備冷凝器和磁力攪拌器的3頸圓底燒瓶中。將混合物加熱至回流。將熱的混合物過濾。使濾液冷卻，并慢慢地重結晶。緊接著，使二-(3-乙炔雌二醇)碳酸酯空氣干燥。
通過HPLC分析化合物，測定其純度為98.5％。通過13C和1H NMR和IR光譜得到的結構分析顯示，已經(jīng)形成了3′C至3′C的碳酸酯前體藥物。質(zhì)譜顯示了化合物的形成。測定熔點為235℃。
實施例2二-(3-乙炔雌二醇)琥珀酸酯的合成制備將琥珀酸(3.17克；0.027摩爾)放入代一個配備磁力攪拌器的500毫升3頸圓底燒瓶中。加入氯仿(300mL)，并攪拌該混合物。加入EDCI(1.2g，0.094摩爾)和三乙胺(12毫升)并攪拌約15分鐘。然后加入乙炔雌二醇(15克；0.051摩爾)，而后加入4-二甲基氨基吡啶(0.93克，0.007摩爾)。將得到的溶液在室溫下攪拌約18小時，然后用氯仿(500mL)稀釋反應混合物。使用2M鹽酸溶液(2×400mL)、然后用鹽水(400mL)提取該溶液。最后使用飽和碳酸氫鈉溶液(2×400mL)提取該溶液。將得到的二-(3-乙炔雌二醇)琥珀酸酯用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。
重結晶方法將二-(3-乙炔雌二醇)琥珀酸酯(10克)和乙酸乙酯/庚烷(50∶50；200毫升)的混合物放入到一個配備冷凝器和磁力攪拌器的3頸圓底燒瓶中。將混合物加熱至回流，以使幾乎所有的乙炔雌二醇酯溶解。然后將熱的混合物過濾。使濾液冷卻，并慢慢地重結晶(約18小時)。緊接著，過濾二-(3-乙炔雌二醇)琥珀酸酯并使其空氣干燥。而后在室溫下、在真空烘箱中干燥約18小時。
通過HPLC分析化合物，測定其純度為97.8％。通過13C和1H NMR和IR光譜得到的結構分析顯示，已經(jīng)形成了3′C至3′C連接的前體藥物。測定熔點為198℃。
實施例3二-(3-乙炔雌二醇)戊二酸酯的合成制備將戊二酸(3.43克；0.027摩爾)放入一個配備磁力攪拌器的500毫升3頸圓底燒瓶中。加入氯仿(300mL)，并攪拌該混合物。加入EDCI(14.1g，0.073摩爾)和三乙胺(12毫升)，并攪拌約15分鐘。然后加入乙炔雌二醇(15克；0.051摩爾)，而后加入4-DMAP(1.5克，0.012摩爾)。將溶液在室溫下攪拌約18小時。將反應混合物用氯仿(250mL)稀釋，并用1M鹽酸溶液(2×500mL)、然后鹽水溶液(400mL)提取。最后用飽和碳酸氫鈉溶液(500mL然后250mL))提取該溶液。將有機層用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到二-(3-乙炔雌二醇)戊二酸酯。
重結晶方法將二-(3-乙炔雌二醇)戊二酸酯(10.6克)和乙酸乙酯/庚烷(50∶50；200毫升)的混合物放入到一個配備冷凝器和磁力攪拌器的3頸圓底燒瓶中。將混合物加熱至回流，以使幾乎所有的乙炔雌二醇酯溶解。將熱的混合物過濾。使濾液冷卻，并慢慢地重結晶(約18小時)。過濾二-(3-乙炔雌二醇)戊二酸酯，并使其空氣干燥。而后在室溫下、在真空烘箱中干燥約18小時。
通過HPLC分析化合物，測定其純度為96.0％。通過13C和1H NMR和IR光譜得到的結構分析顯示，已經(jīng)形成了3′C至3′C的前體藥物。測定熔點為194℃。
實施例4二-(3-乙炔雌二醇)己二酸酯的合成制備將己二酸(3.8克；0.026摩爾)放入到一個配備磁力攪拌器的500毫升3頸圓底燒瓶中。加入氯仿(300mL)，并攪拌該混合物。加入EDCI(14.1g，0.073摩爾)和三乙胺(12毫升)，并攪拌約15分鐘。然后加入乙炔雌二醇(15克；0.051摩爾)，而后加入4-二甲基氨基吡啶(1.5克，0.012摩爾)。將得到的溶液在室溫下攪拌約18小時。將反應混合物用氯仿(500mL)稀釋，并用2M鹽酸溶液(2×400mL)、然后鹽水(400mL)提取。最后用飽和碳酸氫鈉溶液(2×400mL)提取該溶液。將有機層用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到二-(3-乙炔雌二醇)己二酸酯。
重結晶方法將二-(3-乙炔雌二醇)己二酸酯(9克)和乙酸乙酯/庚烷(50∶50；150mL)的混合物放入到一個配備冷凝器和磁力攪拌器的3頸圓底燒瓶中。將混合物加熱至回流，以使幾乎所有的乙炔雌二醇酯溶解。然后將熱的混合物過濾。使濾液冷卻，并慢慢地重結晶(約18小時)。過濾二-(3-乙炔雌二醇)己二酸酯，并使其空氣干燥。而后在室溫下、在真空烘箱中干燥約18小時。
通過HPLC分析化合物，測定其純度為90.9％。通過13C和1H NMR和IR光譜得到的結構分析顯示，已經(jīng)形成了3′C至3′C的前體藥物。測定熔點為179℃。
實施例5二-(3-乙炔雌二醇)富馬酸酯的合成制備將乙炔雌二醇(25g；0.085摩爾)放入一個配備磁力攪拌器的1升3頸圓底燒瓶中。加入二氯甲烷(375mL)，并在氮氣氛圍中、在室溫下攪拌該混合物。加入三乙胺(15毫升)。將燒瓶放置在冰/水浴中，并冷卻至0℃。然后加入4-DMAP(0.78克，0.006摩爾)。在0℃攪拌該溶液約15分鐘。將富馬酰氯(7.14g；0.047mol)溶于二氯甲烷(125mL)中。通過加入漏斗將富馬酰氯溶液逐滴加入到乙炔雌二醇溶液中，同時保持溫度低于5℃。完成加入后，將該溶液慢慢地升溫至室溫，然后在氮氣氛圍中、在室溫下攪拌(約20小時)。將得到的懸浮液用二氯甲烷(1L)稀釋，過濾收集所有的固體。然后用二氯甲烷(500mL)和2M鹽酸溶液(500mL)洗滌固體。分離有機相，并用2M鹽酸(500mL)、碳酸氫鈉溶液(2×500mL)和鹽水(500mL)提取。將得到的二-(3-乙炔雌二醇)富馬酸酯用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。將固體溶于新鮮的二氯甲烷(1000mL)中。將脫色炭(35克)加入到該混合物中，然后將其加熱至40℃，保持約30分鐘。然后在硅藻土床上過濾固體，并用二氯甲烷(500mL)沖洗。然后濃縮黃色濾液。
重結晶方法將二-(3-乙炔雌二醇)富馬酸酯(14.6g)和THF/庚烷(2∶1；300mL)的混合物放入到一個配備冷凝器和磁力攪拌器的3頸圓底燒瓶中。將混合物加熱至回流。然后將熱的混合物過濾，以除去不溶物。使濾液冷卻，并慢慢地重結晶(約18小時)。過濾二-(3-乙炔雌二醇)富馬酸酯并使其空氣干燥。而后在室溫下、在真空烘箱中干燥約18小時。
通過HPLC分析化合物，測定其純度為98.4％。通過13C和1H NMR和IR光譜得到的結構分析顯示，已經(jīng)形成了3′C至3′C的前體藥物。測定熔點為260℃。
實施例6二-(3-乙炔雌二醇)天冬氨酸酯(Boc保護)的合成制備步驟1將N-(叔丁氧羰基)天冬氨酸(8.65克；0.037摩爾)放入到一個配備磁力攪拌器的1升3-頸圓底燒瓶中。加入氯仿(400mL)，并攪拌該混合物。加入EDCI(24g，0.125摩爾)和三乙胺(16毫升)，并攪拌約15分鐘。然后加入乙炔雌二醇(20g；0.067mol)，而后加入4-DMAP(2.0g，0.016mol)。將該溶液在氮氣氛圍下、在室溫下攪拌約20小時。將反應混合物用氯仿(500mL)稀釋，用2M鹽酸溶液(2×500mL)、然后鹽水(500mL)、最后飽和碳酸氫鈉溶液(2×500mL)洗滌。將有機相用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到二-(3-乙炔雌二醇)天冬氨酸酯白色固體，通過HPLC測定其純度為80.0％。將該粗品用HPLC純化。
通過HPLC分析化合物，測定其純度為94.0％。通過13C和1H NMR和IR光譜得到的結構分析顯示，已經(jīng)形成了3′C至3′C的前體藥物。測定熔點為141℃。
制備步驟2-去保護反應，制備二-(3-乙炔雌二醇)天冬氨酸酯將boc保護的天冬氨酸酯乙炔雌二醇酯(26克；0.033摩爾)放入到一個配備磁力攪拌器的500毫升3頸圓底燒瓶中。加入4M鹽酸/二烷(130mL)，并在氮氣氛圍中、在室溫下攪拌該混合物約18小時。減壓除去過量鹽酸和二烷。加入DCM(300mL)。將固體完全溶解，并減壓除去溶劑。
使殘余物在乙酸乙酯中形成漿液，過濾并在庚烷中洗滌，干燥，得到白色固體。
通過HPLC分析化合物，測定其純度為97.0％。通過13C和1H NMR和IR光譜得到的結構分析顯示，已經(jīng)形成了3′C至3′C的前體藥物。測定熔點為183-184℃。
盡管上面參考其具體實施方案來描述了本發(fā)明，但很明顯，在沒有背離本文公開的發(fā)明構思的條件下，可以進行許多改變、改進和變化。相應地，其意欲包括那些符合所附權利要求中的精神和落在權利要求的寬范圍內(nèi)的所有這類改變、改進和變化。本文中所引用的全部專利申請、專利，及其它出版物在此以其整體被引入作為參考。
權利要求
1.具有下式的乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物 其中R選自 或Y-Z-X其中X和Y獨立地選自 或 并且Z是(i)具有1到10個碳原子的脂族直鏈，其可以是飽和或不飽和的，并且任選可以被一個或多個低級烷基、羥基或氨基取代，(ii)A-B-D其中A和D獨立地是-CO(CH2)f-，其中f是0至5，且B是-O-(CH2CH2O)p-，其中p是1至700，或(iii)具有2至15個氨基酸單元的肽鍵，所述氨基酸單元獨立地衍生自選自下列的氨基酸丙氨酸，精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，半胱氨酸，谷氨酰胺，谷氨酸，甘氨酸，組氨酸，異亮氨酸，亮氨酸，賴氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，脯氨酸，絲氨酸，蘇氨酸，色氨酸，酪氨酸，纈氨酸，或其組合，其中肽的端基是獨立地衍生自天冬氨酸和谷氨酸的氨基酸單元。
2.權利要求1的前體藥物，其中R是
3.權利要求1的前體藥物，其中R選自
4.權利要求1的前體藥物，其中R是
5.權利要求1的前體藥物，其中所述前體藥物選自二-(3-乙炔雌二醇)碳酸酯，二-(3-乙炔雌二醇)蘋果酸酯，二-(3-乙炔雌二醇)琥珀酸酯，二-(3-乙炔雌二醇)戊二酸酯，二-(3-乙炔雌二醇)己二酸酯，二-(3-乙炔雌二醇)富馬酸酯，二-(3-乙炔雌二醇)谷氨酸酯，二-(3-乙炔雌二醇)天冬氨酸酯，和其藥學可接受的鹽。
6.藥物劑量單元，包括(a)具有下式的乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物 其中R選自 或Y-Z-X其中X和Y獨立地選自 或 并且Z是(i)具有1到10個碳原子的脂族直鏈，其可以是飽和或不飽和的，并且任選可以被一個或多個低級烷基、羥基或氨基取代，(ii)A-B-D其中A和D獨立地是-CO(CH2)f-，其中f是0至5，且B是-O-(CH2CH2O)p-，其中p是1至700，或(iii)具有2至15個氨基酸單元的肽鍵，所述氨基酸單元獨立地衍生自選自下列的氨基酸丙氨酸，精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，半胱氨酸，谷氨酰胺，谷氨酸，甘氨酸，組氨酸，異亮氨酸，亮氨酸，賴氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，脯氨酸，絲氨酸，蘇氨酸，色氨酸，酪氨酸，纈氨酸，或其組合，其中肽的端基是獨立地衍生自天冬氨酸和谷氨酸的氨基酸單元；和(b)一或多種藥學可接受的賦形劑。
7.合成具有下式的乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物的方法 其中R選自 或Y-Z-X其中X和Y獨立地選自 或 并且Z是(i)具有1到10個碳原子的脂族直鏈，其可以是飽和或不飽和的，并且任選可以被一個或多個低級烷基、羥基或氨基取代，(ii)A-B-D其中A和D獨立地是-CO(CH2)f-，其中f是0至5，且B是-O-(CH2CH2O)p-，其中p是1至700，或(iii)具有2至15個氨基酸單元的肽鍵，所述氨基酸單元獨立地衍生自選自下列的氨基酸丙氨酸，精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，半胱氨酸，谷氨酰胺，谷氨酸，甘氨酸，組氨酸，異亮氨酸，亮氨酸，賴氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，脯氨酸，絲氨酸，蘇氨酸，色氨酸，酪氨酸，纈氨酸，或其組合，其中肽的端基是獨立地衍生自天冬氨酸和谷氨酸的氨基酸單元，包括下列步驟(A)提供乙炔雌二醇或其衍生物；(B)將所述乙炔雌二醇與連接劑混合，其中所述連接劑選自(a)碳酸酯；(b)具有1至10個碳原子骨架的脂族二酸；(c)G-CO-Z-X-G其中G是鹵素；(d)具有2至15個氨基酸單元的肽鍵，所述氨基酸單元獨立地衍生自選自下列的氨基酸丙氨酸，精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，半胱氨酸，谷氨酰胺，谷氨酸，甘氨酸，組氨酸，異亮氨酸，亮氨酸，賴氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，脯氨酸，絲氨酸，蘇氨酸，色氨酸，酪氨酸，纈氨酸，或其組合，其中肽的端基是獨立地衍生自天冬氨酸和谷氨酸的氨基酸單元；(e)叔丁氧羰基保護的磺基丙氨酸；和(f)聚乙二醇和琥珀酸酐，(C)任選地混入偶聯(lián)劑和/或堿，從而形成所述乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物或其藥學可接受的鹽。
8.權利要求7的方法，其中所述連接劑是碳酸酯，H-Y-Z-X-H，或G-CO-Z-X-G其中G是鹵素。
9.權利要求7的方法，其中所述偶聯(lián)劑選自二(4-硝基苯基)碳酸酯，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基-碳二亞胺鹽酸鹽，和其混合物。
10.權利要求7的方法，其中所述的至少一種堿選自4-二甲基氨基吡啶，三乙胺，和其混合物。
11.權利要求7的方法，其中所述前體藥物是二-(3-乙炔雌二醇)碳酸酯或其藥學可接受的鹽。
12.權利要求7的方法，其中所述前體藥物選自二-(3-乙炔雌二醇)琥珀酸酯，二-(3-乙炔雌二醇)蘋果酸酯，二-(3-乙炔雌二醇)戊二酸酯，二-(3-乙炔雌二醇)己二酸酯，二-(3-乙炔雌二醇)富馬酸酯，二-(3-乙炔雌二醇)谷氨酸酯，二-(3-乙炔雌二醇)天冬氨酸酯，和其藥學可接受的鹽。
13.提供避孕的方法，包括給予有此需要的患者有效時間段的、有效量的權利要求1的乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物的步驟。
14.在有此需要的患者中提供激素治療法的方法，包括給予有此需要的所述患者有效時間段的、有效量的權利要求1的乙炔雌二醇的二-甾族前體藥物的步驟。
全文摘要
本發(fā)明涉及按照式(I)的乙炔雌二醇的二－甾族前體藥物。
文檔編號A61P5/30GK1906207SQ200480040516
公開日2007年1月31日 申請日期2004年12月10日 優(yōu)先權日2004年1月15日
發(fā)明者J·A·金, J·基翁, J·W·麥基爾羅伊, W·P·阿姆斯特朗, A·麥克維伊, A·麥克莫迪 申請人:沃納奇爾科特公司