專利名稱：用作趨化因子受體活性調(diào)節(jié)劑的新穎三環(huán)螺環(huán)衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新化合物、其制備方法、含該化合物的藥物組合物以及其治療用途。特別是，本發(fā)明涉及新的螺環(huán)化合物、其制備及其用途。
在各類疾病和失調(diào)，包括哮喘和應(yīng)變性疾病，以及自身免疫病理，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和動(dòng)脈粥樣硬化癥的免疫和炎癥反應(yīng)中，趨化因子起著重要的作用。這些小分泌性分子是一個(gè)日益增長(zhǎng)的8-14kDa蛋白質(zhì)超家族的成員，其特征為保守的四個(gè)半胱氨酸基序?？蓪⑦@個(gè)趨化因子超家族主要分為呈現(xiàn)特征性結(jié)構(gòu)基序的兩組，即Cys-X-Cys(C-X-X)和Cys-Cys(C-C)家族。根據(jù)在NH-附近的半胱氨酸殘基對(duì)之間插入的單個(gè)氨基酸和序列類似性來(lái)區(qū)分這兩個(gè)家族。
C-X-C趨化因子包括嗜中性粒細(xì)胞如白細(xì)胞介素-8(IL-8)和嗜中性粒細(xì)胞活化肽2(NAP-2)的幾種有效化學(xué)引誘物和活化劑。C-C趨化因子包括單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞但不包括嗜中性粒細(xì)胞的有效化學(xué)引誘物，如人單核細(xì)胞趨化蛋白1-3(MCP-1、MCP-2和MCP-3)、RANTES(調(diào)節(jié)活化、正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌的)、嗜伊紅粒細(xì)胞趨化蛋白和巨嗜細(xì)胞炎性蛋白1α和1β(MIP-1α和MIP-1β)。
研究表明趨化因子的作用由G-蛋白偶聯(lián)受體的亞族介導(dǎo)，其中將這些受體稱為CCR1、CCR2、CCR2A、CCR2B、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10、CXCR1、CXCR2、CXCR3和CXCR4。由于調(diào)節(jié)這些受體的藥物可用于治療如前提到的那些病癥和疾病，所有這些受體代表藥物研制的好的靶標(biāo)。
US 4,166,119描述了具有鎮(zhèn)痛及鎮(zhèn)靜活性的螺(二氫苯并呋喃)哌啶及吡咯烷酮化合物。EP 0 351 282 B描述了特別是抗精神病藥物及腦缺血藥物的螺(2，3-二氫苯并呋喃-2，4-哌啶-1-基)衍生物。
因此本發(fā)明提供了式(I)的化合物
其中m為0、1、2、3或4；各R1獨(dú)立地表示鹵素、氰基、羥基、C1-C6烷基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基磺?；虬被酋；?-SO2NH2)；X表示化學(xué)鍵或-CH2-并且Y表示化學(xué)鍵或-CH2-，條件是X和Y不同時(shí)表示化學(xué)鍵或-CH2-；n為0、1或2；各R2獨(dú)立地表示鹵素、C1-C6烷基或C1-C6鹵代烷基；q為0或1；p為0、1或2；R3選自鹵素、NR6R7、羧基或C1-C6烷基，其中所述的C1-C6烷基任選被一或多個(gè)鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基、N-(C1-C6烷基)氨基，N，N-二-(C1-C6烷基)氨基，羧基或氨基甲?；〈?；R4表示氫，C1-C6烷基，C1-C6鹵代烷基或鹵素；t是0，1或2，條件是p及t不均為0；R5表示飽和的或不飽和的5～10員環(huán)，該環(huán)可包括至少一個(gè)選自氮、氧及硫的環(huán)雜原子，該環(huán)任選被一或多個(gè)取代基取代，所述的取代基獨(dú)立地選自鹵素、氰基、氧代、硝基、羥基、羧基、-C(O)H、-NR8R9、-C(O)NR10R11、-NHC(O)R12、-NHSO2R13、-SO2NR14R15、-NHC(O)NR16R17，或選自C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6烷基羰基、苯基羰基、C3-C6環(huán)烷基、苯基及至少包括一個(gè)選自氮、氧及硫的雜原子的飽和的或不飽和的5～6員雜環(huán)的基團(tuán)，每個(gè)基團(tuán)任選被一或多個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、氰基、羥基、羧基、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、C1-C6烷氧基及C1-C6烷氧基羰基的取代基取代；R6及R7各自獨(dú)立地表示氫或選自C1-C6烷基及C1-C6烷基羰基的基團(tuán)，各基團(tuán)可任選被一或多個(gè)選自鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基、N-(C1-C6烷基)氨基、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基、羧基、氨基甲?；駽1-C6烷氧基羰基的取代基取代，或R6及R7與其相連的氮原子一起形成4～7員飽和雜環(huán)，該雜環(huán)可任選被一或多個(gè)選自鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基、N-(C1-C6烷基)氨基、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基、羧基、氨基甲?；駽1-C6烷氧基羰基的取代基取代；R8、R9、R10、R11各自獨(dú)立地表示氫或選自C1-C6烷基或C3-C6環(huán)烷基的基團(tuán)，各基團(tuán)任選被一或多個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基、N-(C1-C6烷基)氨基、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基、羧基或氨基甲?；娜〈〈换騌10及R11與其相連的氮原子一起形成4～7員飽和雜環(huán)，該雜環(huán)可任選被至少一個(gè)選自鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基、N-(C1-C6烷基)氨基、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基、羧基或氨基甲酰基的基團(tuán)取代；R12表示氫或選自C1-C6烷基或C3-C6環(huán)烷基的基團(tuán)，各基團(tuán)任選被一或多個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基、N-(C1-C6烷基)氨基、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基、羧基或氨基甲酰基的取代基取代；R13選自C1-C6烷基或C3-C6環(huán)烷基，各基團(tuán)任選被一或多個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基、N-(C1-C6烷基)氨基、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基、羧基或氨基甲?；娜〈〈?；R14、R15、R16及R17各自獨(dú)立地表示氫或選自C1-C6烷基或C3-C6環(huán)烷基的基團(tuán)，各基團(tuán)任選被一或多個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基、N-(C1-C6烷基)氨基、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基、羧基或氨基甲?；娜〈〈?；或R14及R15，或R16及R17，與其各自獨(dú)立地相連的氮原子一起形成4～7員飽和雜環(huán)，該雜環(huán)可任選被至少一個(gè)選自鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基，N-(C1-C6烷基)氨基、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基、羧基或氨基甲?；娜〈〈换蚱淇伤幱名}或溶劑合物。
除非另有說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)“烷基”單用或聯(lián)用指線性或支鏈的烷基部分。C1-C6烷基具有1～6個(gè)碳原子，包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、叔丁基、正戊基、正己基等。提及‘C1-C4烷基’應(yīng)相應(yīng)理解為具有1～4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基部分。提及單個(gè)烷基如“丙基”特指直鏈形式，提及單個(gè)支鏈烷基如“異丙基”僅特指支鏈形式。
同樣地，術(shù)語(yǔ)“C1-C6烷氧基”及“C1-C4烷氧基”，當(dāng)單用或聯(lián)用時(shí)，應(yīng)理解為指分別具有1～6或1～4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈基團(tuán)，包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、正戊氧基或正己氧基。
“C2-C6鏈烯基”指具有2～6碳原子的直鏈或支鏈基團(tuán)，如乙烯基、異丙烯基、烯丙基及丁-2-烯基。C2-C6炔基合適地為乙炔基、1-丙炔基及丙炔-2-基。
術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”，當(dāng)單用或聯(lián)用時(shí)，指具有3～6個(gè)碳原子地飽和脂環(huán)部分，并包括，例如，環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基。合適的C3-C6環(huán)烷基甲基為環(huán)丙基甲基、環(huán)丁基甲基、環(huán)戊基甲基或環(huán)己基甲基。
此處的術(shù)語(yǔ)“鹵素”包括氟、氯、溴及碘。
鹵代烷基將包含至少一個(gè)鹵素原子，如1、2、3、4或5個(gè)鹵素原子。合適的例子包括三氟甲基或五氟乙基。
合適的C1-C6烷基磺?；鶠榧谆酋；?、乙基磺?；?、正丙基磺?；?、異丙基磺酰基、正丁基磺?；?、異丁基磺酰基、叔丁基磺?；?、正戊基磺?；蛘夯酋；?。
合適的C1-C6烷硫基包括甲硫基、乙硫基、正丙硫基、異丙硫基、正丁硫基、異丁硫基、叔丁硫基、正戊硫基或正己硫基。
N-(C1-C6烷基)氨基的實(shí)例包括甲基氨基及乙基氨基。
N，N-二-(C1-C6烷基)氨基的實(shí)例包括二-N-甲基氨基、二-N-乙基氨基及N-乙基-N-甲基氨基。
合適的C1-C6烷氧基羰基為甲氧基羰基、乙氧基羰基、正-及叔丁氧羰基。
C1-C6烷基羰基的實(shí)例包括甲基羰基、乙基羰基、正丙基羰基、異丙基羰基、正-丁基羰基、異丁基羰基、叔丁基羰基、正戊基羰基或正己基羰基。
“任選被取代”此處指在任何合適的位置被一個(gè)基團(tuán)或多個(gè)基團(tuán)任選取代。
在被R2取代的環(huán)中，R2可連接至任何合適的環(huán)碳原子包括(CH2)q的碳原子上。
“雜原子”為氮、硫或氧原子。當(dāng)環(huán)包含氮原子時(shí)，其可為滿足N成鍵的需要而被取代，或其通過氮原子連接至結(jié)構(gòu)的其它部分。氮原子也可為N-氧化物的形式。硫原子可以是S、S(O)或SO2的形式。
“飽和的或不飽和的5～10員環(huán)，該環(huán)可包括至少一個(gè)選自氮、氧及硫的雜原子”應(yīng)理解為指包括5～10個(gè)成環(huán)原子的單環(huán)或多環(huán)(例如雙環(huán))、脂環(huán)或芳香環(huán)、碳環(huán)或雜環(huán)。除非特殊說(shuō)明，雜環(huán)可以為碳或氮相連的。合適的環(huán)的實(shí)例包括一或多個(gè)環(huán)戊基、環(huán)己基、苯基、二環(huán)[2.2.1]庚基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、二氮雜二環(huán)[2.2.1]庚-2-基、萘基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并間二氧環(huán)戊烯基(benzodioxolyl)、異喹啉基、喹啉基、1，2-二氫喹啉基、1，2，3，4-四氫喹啉基、2，3-二氫苯并嗪基、喹唑啉基、1，2，3，4-四氫喹唑啉基、2，3-二氫苯并呋喃基、吡唑基、吡嗪基、噻唑烷基、茚滿基、噻吩基、異唑基、噠嗪基、噻二唑基，吡咯基、呋喃基、噻唑基、吲哚基、咪唑基、嘧啶基、苯并咪唑基、三唑基、四唑基及吡啶基。
當(dāng)指飽和的或不飽和的的5～6員雜環(huán)時(shí)，應(yīng)理解為指包括5或6個(gè)成環(huán)原子的脂環(huán)或芳香環(huán)，代表性實(shí)例如上述。
“4～7員飽和雜環(huán)”指具有4～7個(gè)成環(huán)原子的飽和單環(huán)，其中一或多個(gè)環(huán)碳原子被選自氮、氧及硫的雜原子替代。除特殊說(shuō)明，雜環(huán)可以是碳或氮相連的。實(shí)例包括吡咯烷基、哌啶基、嗎啉基、四氫呋喃基及哌嗪基。
合適的m為2、3或4，但優(yōu)選0或1。
R1可為氰基、羥基、C1-C6烷基，優(yōu)選C1-C4烷基(例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、正戊基或正己基)、C1-C6烷氧基，優(yōu)選C1-C4烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基或正己氧基)、C1-C6烷基磺?；?，優(yōu)選C1-C4烷基磺?；?例如甲基磺酰基、乙基磺酰基、正丙基磺酰基、異丙基磺?；?、正丁基磺?；?、異丁基磺酰基、叔丁基磺?；?、正戊基磺?；蛘夯酋；?或氨基磺?；珒?yōu)選鹵素(例如氯、氟、溴或碘)或C1-C6鹵代烷基(例如，三氟甲基或五氟乙基)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，各R1獨(dú)立地表示鹵素，特別是氟或氯。
在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，m為1，R1表示鹵素，特別是氟或氯。
X可表示-CH2但是優(yōu)選地X表示化學(xué)鍵并且Y表示-CH2-。
合適的各R2獨(dú)立地表示鹵素(例如氯、氟、溴或碘)、C1-C6烷基，優(yōu)選地C1-C4烷基(例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、正戊基或正己基)或C1-C6鹵代烷基，優(yōu)選地C1-C4鹵代烷基(例如三氟甲基或五氟乙基)。
n可為2，但優(yōu)選為0或1，尤其0。
在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，n為1，并且R2表示鹵素，特別是氟。
q優(yōu)選為1。
在一個(gè)實(shí)施方案中，p為0。
t優(yōu)選為1。
合適的R3可為鹵素(例如氯、氟、溴或碘)、NR6R7、羧基或C1-C6烷基，優(yōu)選地C1-C4烷基(例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、正戊基或正己基)，任選被一或多個(gè)(例如，1、2、3或4)個(gè)取代基取代，取代基獨(dú)立地選自鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基，優(yōu)選C1-C4烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基或正己氧基)、N，N-(C1-C6烷基)氨基(例如，甲基氨基和乙基氨基)、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基(例如，二-N-甲基氨基，二-N-乙基氨基及N-乙基-N-甲基氨基)、羧基或氨基甲酰基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，R3表示鹵素(優(yōu)選氟或氯)、NR6R7或C1-C6烷基，優(yōu)選C1-C4烷基(特別是甲基)，任選被一或兩個(gè)選自鹵素、氨基、羥基的取代基取代。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R3表示甲基、氯、-NH2、-NHMe、-NMe2，-NHCOCH3或-CH2NH2。
合適的R4可表示為鹵素，或任選取代的C1-C6烷基，但優(yōu)選R4表示氫。
R5可以是飽和的或不飽和的5～10員環(huán)，該環(huán)上可包括至少一個(gè)獨(dú)立地選自氮、氧及硫的環(huán)雜原子(例如包括一、二、三或四個(gè)環(huán)雜原子)及可任選被一或多個(gè)(例如一、二或三個(gè)取代基)獨(dú)立地選自鹵素、氰基、氧代、硝基、羥基、羧基、-C(O)H、-NR8R9、-C(O)NR10R11、-NHC(O)R12、-NHSO2R13、-SO2NR14R15、-NHC(O)NR16R17的取代基，選自C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、C1-C6烷基磺?；1-C6鹵代烷基、C1-C6烷基羰基、苯基羰基、C3-C6環(huán)烷基、苯基及包括至少一個(gè)選自氮、氧及硫的環(huán)雜原子的飽和的或不飽和的5～6員雜環(huán)的基團(tuán)取代，各基團(tuán)任選被一或多個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、氰基、羥基、羧基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基及C1-C6烷氧基羰基的取代基取代。
在一個(gè)實(shí)施方案中，R5是包含5～10，優(yōu)選6～10個(gè)成環(huán)原子的單環(huán)或多環(huán)(例如雙環(huán))的不飽和環(huán)，可包括1或2個(gè)獨(dú)立地選自氮及氧的雜原子(例如，喹啉基、1，2-二氫喹啉基、1，2，3，4-四氫喹啉基、2，3-二氫苯并嗪基、1，2，3，4-四氫喹唑啉基、苯基、萘基、吡啶基、苯并呋喃基、嘧啶基、異喹啉基及喹唑啉基)，該環(huán)任選如上被取代。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R5是包含5～10，優(yōu)選6～10個(gè)成環(huán)原子的單環(huán)或多環(huán)(例如雙環(huán))的不飽和環(huán)，該環(huán)系任選被一、二或三個(gè)上述取代基取代。
在一個(gè)具體實(shí)施方案中，R5表示苯基，任選被一或兩個(gè)獨(dú)立地選自-NHC(O)R12、-NHC(O)NR16R17、羥基或C1-C6烷氧基的取代基取代。
在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，R5表示苯基，任選被一、二或三個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、羥基、或羧基的取代基取代。
在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，R5為包含10個(gè)成環(huán)原子的雙環(huán)不飽和環(huán)，該環(huán)系被一或兩個(gè)獨(dú)立地選自氮及氧的成環(huán)雜原子取代，該環(huán)系任選被氧代基取代。
R6及R7均可獨(dú)立地表示C1-C6烷基，優(yōu)選C1-C4烷基，任選被一或多個(gè)上述取代基取代，或R6及R7與其相連的氮原子一起形成4～7員飽和雜環(huán)，該雜環(huán)任選被至少一個(gè)上述取代基取代，但優(yōu)選R6及R7各獨(dú)立地表示氫或任選被一或兩個(gè)上述取代基取代的C1-C6烷基羰基。
在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案中，R8及R9各獨(dú)立地表示氫或選自C1-C6烷基，優(yōu)選C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基的基團(tuán)，任選被一或兩個(gè)獨(dú)立地選自鹵素或C1-C6烷氧基的取代基取代。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R10及R11各獨(dú)立地表示氫或C1-C6烷基或C3-C6環(huán)烷基，任選被一或兩個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基、N-(C1-C6烷基)氨基、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基、羧基或氨基甲?；娜〈〈?；或R10及R11與其相連的氮原子一起形成4～7員飽和雜環(huán)，該雜環(huán)任選被至少一個(gè)上述取代基取代。
R12及R13各獨(dú)立地優(yōu)選表示C1-C6烷基或C3-C6環(huán)烷基，任選被一或兩個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基、N-(C1-C6烷基)氨基、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基、羧基或氨基甲酰基的取代基取代。
R14及R15各自獨(dú)立地優(yōu)選表示氫或C1-C6烷基或C3-C6環(huán)烷基，任選被一或兩個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基、N-(C1-C6烷基)氨基、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基、羧基或氨基甲?；娜〈〈?；或R14及R15與其相連的氮原子一起形成4～7員飽和雜環(huán)，該雜環(huán)任選被至少一個(gè)上述取代基取代。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R16及R17各獨(dú)立地表示氫或C1-C6烷基或C3-C6環(huán)烷基，任選被一或兩個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基、N-(C1-C6烷基)氨基、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基、羧基或氨基甲?；娜〈〈?；或R16及R17與其相連的氮原子一起形成4～7員飽和雜環(huán)，該雜環(huán)任選被至少一個(gè)上述取代基取代。
本發(fā)明優(yōu)選的一組式(I)的化合物，m是0或1；R1是鹵素；X表示化學(xué)鍵及Y表示-CH2-；q是1；n是0；R3是鹵素，-NR6R7或C1-C6烷基任選被一或兩個(gè)選自鹵素、氨基或羥基的取代基取代；R4是氫；R5是包括5～10個(gè)成環(huán)原子的不飽和環(huán)系，該環(huán)系可包括一或兩個(gè)獨(dú)立地選自氮及氧成環(huán)雜原子，并且任選被一或多個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、氰基、氧代、硝基、羥基、羧基、-C(O)H、-NR8R9、-C(O)NR10R11、-NHC(O)R12、-NHSO2R13、-SO2NR14R15、-NHC(O)NR16R17的取代基，選自C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6烷基羰基、苯基羰基、C3-C6環(huán)烷基、苯基及包括至少一個(gè)選自氮、氧及硫的成環(huán)雜原子的飽和的或不飽和的5～6員雜環(huán)的基團(tuán)取代，各基團(tuán)任選被一或多個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、氰基、羥基、羧基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基及C1-C6烷氧基羰基的取代基取代。
本組化合物特別優(yōu)選的化合物，其中R5表示苯基，任選被一或兩個(gè)獨(dú)立地選自-NHC(O)R12、-NHC(O)NR16R17、羥基或C1-C6烷氧基的取代基取代，或其中R5表示苯基，任選被一、二或三個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、羥基或羧基的取代基取代，或其中R5是包含10個(gè)成環(huán)原子的雙環(huán)不飽和環(huán)系，該環(huán)系包括一或兩個(gè)獨(dú)立地選自氮及氧的成環(huán)雜原子，并且該環(huán)系任選被氧代取代。
應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明化合物環(huán)上取代基的數(shù)量及性質(zhì)將避免選擇立體不合適的組合。
本發(fā)明優(yōu)選化合物的實(shí)例包括N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺；N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-羥基苯基)乙酰胺雙(三氟乙酸鹽)(鹽)；N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺；N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-羥基苯基)乙酰胺雙(三氟乙酸鹽)(鹽)；N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺；N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-羥基苯基)乙酰胺雙(三氟乙酸鹽)(鹽)；N-(2-{[(2S)-2-(乙酰氨基)-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺；N-{2-[3-氨基-2-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-甲氧基苯基}乙酰胺雙(三氟乙酸鹽)；N-{2-[3-氨基-2-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-甲氧基苯基}乙酰胺雙(三氟乙酸鹽)；N-{2-[3-氨基-2-(1 ′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-甲氧基苯基}乙酰胺雙(三氟乙酸鹽)；N-{2-[3-氨基-2-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]苯基}脲雙(三氟乙酸鹽)；N-{2-[3-氨基-2-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]苯基}脲雙(三氟乙酸鹽)；N-{2-[2-氯-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-羥基苯基}乙酰胺三氟乙酸鹽(鹽)；N-{2-[2-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-甲氧基苯基}乙酰胺三氟乙酸鹽；
5-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-2H-1，4-苯并嗪-3(4H)-酮；8-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}喹啉-2(1H)-酮；5-氯-2-[2-氯-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-羥基苯甲酸；2-[2-氨基-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-5-氯-4-羥基苯甲酸；5-氯-2-[3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-2-(甲基氨基)丙氧基]-4-羥基苯甲酸；5-氯-2-[3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-2-(二甲基氨基)丙氧基]-4-羥基苯甲酸及其任一化合物的可藥用鹽及溶劑合物。
本發(fā)明進(jìn)一步提供一種制備如上定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或溶劑合物的方法， 所述的方法包括(a)將式(II)的化合物
其中R1、m、X、Y、R2、n、q、p、R4、t及R5如式(I)所定義，轉(zhuǎn)化為式(I)的化合物；或(b)將式(III)化合物 其中R1、m、X、Y、R2、n及q如式(I)所定義，與式(IV)反應(yīng) 其中L是離去基團(tuán)(例如羥基或甲基磺酰氧基)及p、R3、R4、t及R5如式(I)所述；(c) 將式(V)化合物 其中R1、m、X、Y、R2、n、q、p、R3、R4及t如式(I)所定義，與式(VI)化合物反應(yīng)HO-R5(VI)其中L是離去基團(tuán)(例如甲基磺酰氧基或硝基苯磺酰氧基)及R5如式(I)所述；并且必要時(shí)可任選之后進(jìn)行(i)將一種式(I)的化合物轉(zhuǎn)化為另一種式(I)的化合物；
(ii)去除保護(hù)基；或(iii)形成可藥用鹽或溶劑合物。
本發(fā)明的方法可方便地在溶劑例如有機(jī)溶劑如醇(例如甲醇或乙醇)、烴(例如甲苯)或四氫呋喃、二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二氯甲烷或乙腈中，在溫度例如，0℃或以上如在從0、5、10、15或20℃至100、110或120℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。
根據(jù)方法(a)，將式(II)化合物轉(zhuǎn)化為式(I)的化合物涉及將預(yù)期的R3取代基取代為式中的羥基。這可通過使用本領(lǐng)域已知的方法，如實(shí)施例中所述的方法。氨基的引入，例如可通過在合適的偶合試劑如三苯膦以及亞胺偶氮二羧酸二乙酯及合適的溶劑如四氫呋喃存在下，通過將相應(yīng)的羥基衍生物與亞胺基碳酸二叔丁酯(di-tert-butyl imidocarbonate)反應(yīng)。
式(II)、(III)、及(IV)、(V)及(VI)的化合物或已經(jīng)商品化，或文獻(xiàn)已知或可使用已知技術(shù)制備。部分這些化合物的制備方法的實(shí)例見后述的實(shí)施例。
p是1的式(II)的化合物，可以，例如，將式(VII)的化合物 其中R1、m、X、Y、R2、n及q如式(I)所定義，與式(VIII)的化合物反應(yīng)進(jìn)行制備。
其中R3及R5如式(I)所定義，及t是1或2。
式(VII)及(VIII)的化合物或已經(jīng)商品化，或文獻(xiàn)已知或可使用已知技術(shù)制備。
本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)該意識(shí)到在本發(fā)明的方法中的一些官能團(tuán)如羥基或氨基可能需要利用保護(hù)基進(jìn)行保護(hù)。因此，式(I)的化合物的制備在適當(dāng)?shù)碾A段可能涉及一或多個(gè)保護(hù)基的去除。
官能團(tuán)的保護(hù)和脫保護(hù)在′Protective Groups in Organic Chemistry′，editedby J.W.F.McOmie，Plenum Press(1973)和′Protective Groups in OrganicSynthesis′，3rdedition，T.W.Greene and P.G.M.Wuts，Wiley-Interscience(1999)中有記載。
上述式(I)的化合物可轉(zhuǎn)化成其可藥用鹽或溶劑合物，優(yōu)選地酸加成鹽如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、富馬酸鹽、馬來(lái)酸鹽、酒石酸酯、檸檬酸鹽、草酸鹽、甲烷磺酸鹽或?qū)妆交撬猁}。
式(I)的化合能以立體異構(gòu)體的形式存在。應(yīng)該理解為本發(fā)明包括式(I)的化合物的所有幾何和光學(xué)異構(gòu)體的(包括阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體)和其包括消旋體的混合物的用途。互變異構(gòu)體以及其混合物的用途也構(gòu)成了本發(fā)明的一方面。對(duì)映體純的形式是尤其需要的。
式(I)的化合物具有作為藥物的活性，特別是作為趨化因子受體(尤其是MIP-1α趨化因子受體)活性的調(diào)節(jié)劑，并可用于治療自身免疫性、炎性、增生性以及過度增生性疾病以及免疫調(diào)節(jié)的疾病包括移植器官或組織的排斥以及獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)。
這些疾病的實(shí)例為(1)(呼吸道)氣道疾病包括慢性阻塞性肺疾病(COPD)如不可逆COPD；哮喘如支氣管、過敏性、內(nèi)源性、外源性或粉塵性哮喘，特別是久喘或綿延難治的哮喘(例如晚期哮喘或氣道高反應(yīng)性)；支氣管炎；急性、過敏性、萎縮性鼻炎或慢性鼻炎包括干酪性鼻炎、肥厚性鼻炎、膿性鼻炎、干燥性鼻炎或藥物性鼻炎；膜性鼻炎包括格魯布性、纖維蛋白性或假膜性鼻炎或結(jié)核性鼻炎；季節(jié)性鼻炎包括神經(jīng)性鼻炎(干草熱)或血管運(yùn)動(dòng)性鼻炎；結(jié)節(jié)病；農(nóng)夫肺和相關(guān)的疾病；纖維化肺或特發(fā)性間質(zhì)性肺炎；(2)(骨和關(guān)節(jié))類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病(包括強(qiáng)直性脊柱炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎或萊特病)、貝赫切特病、Sjogren氏綜合征或全身性硬化癥；(3)(皮膚)牛皮癬、特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎或其它濕疹性皮炎、脂溢性皮炎、扁平苔蘚、天皰瘡、大泡天皰瘡、大皰性片劑皮松解癥、蕁麻疹、血管胚層癥、紅斑血管炎、皮膚的嗜酸粒細(xì)胞增多、葡萄膜炎、斑禿及春季結(jié)膜炎；(4)(胃腸道)腹部疾病、直腸炎、嗜酸細(xì)胞性胃腸炎、肥大細(xì)胞增生病、節(jié)段性回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、食物相關(guān)的變態(tài)反應(yīng)，其在遠(yuǎn)離消化道起作用，例如偏頭痛、鼻炎或濕疹；(5)(其它組織或疾病)多發(fā)性硬化癥、動(dòng)脈粥樣硬化、獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)、狼瘡病、紅斑狼瘡或全身性紅斑狼瘡(systemic lupus)、全身性紅斑狼瘡(erythematosus)、橋本甲狀腺炎、重癥肌無(wú)力、I型糖尿病、腎病綜合征、嗜曙紅細(xì)胞增多筋膜炎、高IgE綜合征、如瘤型麻風(fēng)、惡性皮膚網(wǎng)狀細(xì)胞增多綜合征和特發(fā)性血小板減少性紫癲；(6)(同種異體移植物的排斥)例如急性或慢性腎、心臟、肝、肺、骨髓、皮膚和角膜移植的排斥反應(yīng)；以及慢性移植物抗宿主疾??；(7)癌癥，尤其是非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)和鱗片肉瘤；(8)其中血管發(fā)生與升高的趨化因子水平相關(guān)的疾?。灰约?9)囊性纖維化、中風(fēng)以及心臟、腦、四肢的再灌注損傷以及膿血癥。
因此，本發(fā)明提供了用于治療的如前述定義的式(I)的化合物，或其可藥用鹽或溶劑合物。
另一方面，本發(fā)明提供了如前述定義的式(I)的化合物，或其可藥用鹽或溶劑合物在制備用于治療的藥物中的用途。
在本說(shuō)明書的上下文中，術(shù)語(yǔ)″治療″也包括″預(yù)防″，除非有相反的明確的指出。術(shù)語(yǔ)″治療的″以及″治療地″也應(yīng)該作相應(yīng)地解釋。
本發(fā)明還提供了一種治療炎性疾病(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)的方法，所述的方法包括對(duì)需要治療的病人施用治療有效量的如前述定義的式(I)的化合物，或其可藥用鹽或溶劑合物。
本發(fā)明還提供了一種治療氣道疾病(例如哮喘或慢性阻塞性肺病)的方法，所述的方法包括對(duì)需要治療的病人施用治療有效量的如前述定義的式(I)的化合物，或其可藥用鹽或溶劑合物。
針對(duì)上述治療用途，施用的劑量將理所當(dāng)然地隨使用的化合物、給藥方式、期望的治療以及表征的疾病而變化。式(I)的化合物的日劑量的范圍為0.001mg/kg～30mg/kg。
式(I)的化合物和其可藥用鹽以及溶劑合物可以其自身使用但通常以藥物組合物的形式給藥，其中式(I)的化合物/鹽/溶劑合物(活性成分)聯(lián)合可藥用佐劑、稀釋劑或載體。取決于給藥方式，藥物組合物優(yōu)選地包括0.05～99％w(重量百分比)，更優(yōu)選地0.05～80％w，更優(yōu)選地0.10～70％w，并且甚至更優(yōu)選地0.10～50％w的活性成分，所有的重量百分比基于總的組合物。
本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，包括如前定義的式(I)的化合物，或其可藥用鹽或溶劑合物以及可藥用佐劑、稀釋劑或載體。
本發(fā)明還提供了一種制備本發(fā)明的藥物組合物的方法，所述的方法包括將如前定義的式(I)的化合物，或其可藥用鹽或溶劑合物以及可藥用佐劑、稀釋劑或載體進(jìn)行混和。
藥物組合物可以如，乳劑、溶液、混懸劑、七氟烷烴氣霧劑以及干粉制劑的形式進(jìn)行局部給藥(如對(duì)皮膚或?qū)Ψ魏?或氣道)；或以片劑、膠囊、糖漿、散劑或顆粒如經(jīng)口服進(jìn)行全身給藥；或以溶液或混懸浮液的形式進(jìn)行腸胃外給藥；或進(jìn)行皮下給藥；或以栓劑的形式經(jīng)直腸給藥；或透皮給藥。
下面本發(fā)明將參考下述非限制性實(shí)施例進(jìn)行進(jìn)一步的解釋。
其中1H NMR波譜在Varian Unity Inova 400上測(cè)定。溶劑中央峰氯仿-d(δH7.27ppm)、丙酮-d6(δH2.05ppm)、DMSO-d6(δ112.50ppm)，或甲醇-d4(δH4.87ppm)用作內(nèi)標(biāo)。
低分辨率質(zhì)譜以及精確的質(zhì)量測(cè)定利用裝配有APCI/ESI離子化室的Hewlett-Packard 1100 LC-MS system進(jìn)行記錄。
所有的溶劑以及商業(yè)試劑是實(shí)驗(yàn)室級(jí)的并且以接受的狀態(tài)使用。
化合物使用的命名利用ACD/Name和ACD/Name Batch產(chǎn)生。
實(shí)施例中使用的縮寫或術(shù)語(yǔ)具有下述含義DEAD偶氮二羧酸二乙基酯DMF N，N-二甲基甲酰胺DMSO二甲亞砜THF 四氫呋喃TMSCl 氯三甲基硅烷實(shí)施例中間體化合物5-氯-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4’-哌啶]
方法A該化合物按照Effland，R.C；Gardner，B.A；Strupczewski，J.，J.雜環(huán)的Chem.，1981，18，811-814中描述的方法進(jìn)行制備。
方法B 步驟Ii)1-氧雜-6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-羧酸叔丁基酯在20℃下，將叔丁醇鉀(31g)加入至三甲基硫氧碘化物(60.8g)在1，2-二甲氧基乙烷(250ml)中的攪拌懸浮液中。1小時(shí)后，在0℃下，用30分鐘將混合物分批加入至4-氧代-1-哌啶羧酸，1，1-二甲基乙基酯(50g)在1，2-二甲氧基乙烷(50ml)中的攪拌溶液中。再攪拌2小時(shí)后，加入水(500ml)，并將混合物用叔丁基甲基醚(2×500ml)萃取。將有機(jī)物用飽和的碳酸氫鈉溶液(250ml)洗滌，合并有機(jī)層、在無(wú)水的硫酸鎂上干燥，過濾，并減壓蒸發(fā)。將殘留的油用甲苯(100ml)共蒸得到固體的小標(biāo)題化合物(43.25g)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ 3.75-3.70(m，2H)；3.47-3.38(m，2H)；2.69(s，2H)；1.84-1.75(m，2H)；1.48-1.43(m，2H)；1.46(s，9H)。
步驟II5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1’-羧酸叔丁基酯在0℃氮?dú)鈿夥障?，?5分鐘將氯化異丙基鎂在四氫呋喃(2M，106ml)中的溶液滴加至2-溴-4-氯-1-氟苯(42.5g)在無(wú)水的四氫呋喃(250ml)中的攪拌溶液中。攪拌15分鐘后，加入1-氧雜-6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-羧酸叔丁基酯(43.2g)在無(wú)水的四氫呋喃(50ml)中的溶液、溴化銅(I)二甲硫醚復(fù)合物(0.4g)。將混合物在40℃攪拌18小時(shí)，冷卻至20℃，用水(300ml)稀釋，并用叔丁基甲基醚(2×300ml)萃取。將有機(jī)萃取物在無(wú)水硫酸鎂上干燥，過濾并減壓蒸發(fā)。將殘留的油狀物溶解在1，2-二甲氧基丙烷(200ml)中。加入叔丁醇鉀(22.8g)，并將混合物在40℃攪拌16小時(shí)然后在50℃攪拌24小時(shí)。再加入叔丁醇鉀(5.7g)，并在50℃攪拌2小時(shí)然后在55℃攪拌4小時(shí)。加入水(500ml)，并將混合物用叔丁基甲基醚(2×300ml)萃取。將有機(jī)萃取物在無(wú)水硫酸鎂上干燥，過濾并減壓蒸發(fā)得到油狀的小標(biāo)題化合物(47.45g)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ7.10(s，1H)；7.06(d，1H)；6.67(d，1H)；3.80-3.65(m，2H )；3.39(dt，2H)；2.94(s，2H)；1.93-1.85(m，2H)；1.67(dt，2H)；1.47(s，9H)。
步驟III5-氯螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]將濃鹽酸(23ml)加入5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1’-羧酸叔丁基酯(46.43g)在四氫呋喃(230ml)中的溶液中。將混合物在50℃攪拌6小時(shí)，冷卻至20℃，用水(230ml)稀釋，并用叔丁基甲基醚(2×230ml)萃取。加入50wt.％氫氧化鈉溶液將水相調(diào)節(jié)至pH＞10，并用叔丁基甲基醚(3×300ml)萃取。將有機(jī)萃取物在無(wú)水硫酸鎂上干燥，過濾并減壓蒸發(fā)。將殘留的油狀物溶解在四氫呋喃(240ml)中，加入濃鹽酸(12ml)，并將混合物在20℃攪拌6小時(shí)。將沉淀的固體過濾并溶解在水(100ml)中。加入50wt.％氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)節(jié)至pH＞10，并用叔丁基甲基醚(3×100ml)萃取得到固體的標(biāo)題化合物(13.3g)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ7.13(s，1H)；7.04(d，1H)；6.65(d，1H)；3.03-2.98(m，4H)；2.84-2.78(m，2H)；1.87-1.83(m，2H)；1.76-1.69(m，2H)。
APCI-MSm/z 224(MH+)。
中間體化合物5-氟-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]方法A步驟I1′-芐基-5-氟-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]氮?dú)庀拢蜴V條(763mg)的乙醚(7mL)懸浮液中加入碘(一粒晶體)，然后加入0.4mL的2-(溴甲基)-1，4-二氟苯。以電吹風(fēng)加熱啟動(dòng)反應(yīng)，緩慢加入2-(溴甲基)-1，4-二氟苯(5.0g，24.25mmol)的乙醚(7mL)溶液。加入完畢后，將反應(yīng)混合物回流100分鐘，冷至室溫。劇烈攪拌下，向反應(yīng)混合物中滴加入1-芐基哌啶-4-酮(4.57g，24.24mmol)的乙醚(12mL)溶液。加入完畢后，將混合物室溫放置過夜。加入飽和NH4Cl水溶液(過量)，室溫?cái)嚢柚了馔耆?，將混合物以乙醚萃取。有機(jī)層以H2O洗滌、Na2SO4干燥、過濾及真空濃縮。殘留物經(jīng)快速硅膠層析純化(0-1％甲醇的二氯甲烷溶液，0.2％NH4OH)得中間體1-芐基-4-(2，5-二氟芐基)哌啶-4-醇(2.74g)，包含大量未知雜質(zhì)。向NaH(55％，1.12g，26.0mmol)的甲苯(10mL)懸浮液中緩慢加入1-芐基-4-(2，5-二氟芐基)哌啶-4-醇的甲苯(15mL)溶液。加入完畢后，將反應(yīng)混合物110℃(在預(yù)熱的油浴中)攪拌5分鐘后，加入DMF(9mL)，將混合物回流2小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷至室溫，加入水(20mL)，以乙酸乙酯萃取。有機(jī)層以Na2SO4干燥、過濾及真空濃縮。殘留物經(jīng)快速硅膠層析(0-1.5％甲醇的二氯甲烷溶液，0.2％NH4OH)純化得到小標(biāo)題混合物(190mg)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ7.39-7.26(m，5H)；6.88-6.76(m，2H)；6.67(dd，J＝4.2，8.7Hz，1H)；3.59(s，2H)；2.99(s，2H)；2.68-2.47(m，4H)；2.03-1.94(m，2H)；1.86-1.76(m，2H)。
APCI-MSm/z 298(MH+)。
步驟II5-氟-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]將氯甲酸乙酯(65.6mg，0.604mmol)加入至1′-芐基-5-氟-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶](150mg，0.504mmol)的甲苯溶液(2mL)中，將混合物回流過夜，冷至室溫，加入甲苯(10mL)稀釋，以飽和NaHCO3水溶液及水連續(xù)洗滌。有機(jī)層以Na2SO4干燥、過濾、真空濃縮。將殘留物溶于乙醇(3.5mL)，加入KOH水溶液(800mg KOH溶于0.8mL H2O)，將混合物回流過夜后，冷至室溫，真空除去乙醇。將水相以乙醚萃取。合并乙醚層，以3N HCl洗滌。加入3N NaOH水溶液將水相調(diào)至pH 10。將堿液以乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層以水洗滌、Na2SO4干燥，過濾及真空濃縮。殘留物以HPLC(10-55％乙腈的水溶液，0.1％NH4OH)純化得到標(biāo)題化合物(49mg)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ6.92-6.87(m，1H)；6.81-6.75(m，1H)；6.64(dd，J＝4.2，8.7Hz，1H)；3.08-2.98(m，4H)；2.89-2.81(m，2H)；1.91-1.83(m，2H)；1.78-1.69(m，2H)。
APCI-MSm/z 208(MH+)。
方法B 步驟I4-(5-氟-2-甲氧基芐基)-4-羥基哌啶-1-羧酸叔丁基酯在30℃氮?dú)獗Ｗo(hù)下，30分鐘內(nèi)將異丙基氯化鎂的四氫呋喃(2M，130mL)溶液滴加入2-溴-4-氟苯甲醚(34.2mL)的無(wú)水四氫呋喃(400mL)溶液中。在30℃再反應(yīng)16小時(shí)后，加入溴化銅(I)二甲基硫醚的復(fù)合物(0.4g)，然后加入1-氧雜-6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-羧酸叔丁基酯(56.2g)的無(wú)水四氫呋喃(110mL)溶液。再在30℃反應(yīng)3小時(shí)后，將溶液冷至20℃，以水(600mL)稀釋，然后以叔丁基甲基醚(600mL)萃取，再以乙酸乙酯(600mL)萃取。以無(wú)水硫酸鎂干燥合并的有機(jī)萃取物，過濾、減壓濃縮得固體的粗的小標(biāo)題化合物(86g)。
APCI-MSm/z 240[M+H-(CH3)2CCH2-CO2]+步驟II5-氟-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]將氫溴酸(48％，60mL)加入至粗制的4-(5-氟-2-甲氧基芐基)-4-羥基哌啶-1-羧酸叔丁酯(86g)的乙酸(300mL)溶液中。將混合物回流加熱5小時(shí)。再加入氫溴酸(48％，60mL)并繼續(xù)回流24小時(shí)。將混合物冷至室溫，加入水(2L)中，再以叔丁基甲基醚(2×500mL)萃取。加入50wt.％氫氧化鈉溶液將水相調(diào)至pH＞10，以叔丁基甲基醚(2L+1L)萃取。有機(jī)萃取物以無(wú)水硫酸鎂干燥、過濾及減壓濃縮。殘留固體以四氫呋喃/叔丁基甲基醚(4∶1，500mL)結(jié)晶得標(biāo)題化合物(20g)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ6.92-6.87(m，1H)；6.81-6.75(m，1H)；6.64(dd，J＝4.2，8.7Hz，1H)；3.08-2.98(m，4H)；2.89-2.81(m，2H)；1.91-1.83(m，2H)；1.78-1.69(m，2H)。
APCI-MSm/z 208(MH+)。
實(shí)施例1N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺步驟I(2R)-2-[(5-甲氧基-2-硝基苯氧基)甲基]環(huán)氧乙烷在攪拌條件下，向5-甲氧基-2-硝基苯酚(2.11g，12.5mmol)及2(S)-環(huán)氧乙烷-2-基甲醇(0.926g，12.5mmol)的CH2Cl2(150mL)溶液中加入聚合物結(jié)合的三苯基膦(6.2g，18.7mmol)。將混合物室溫?cái)嚢?5分鐘，然后冷至0℃，滴加入DEAD(3.65g，18.7mmol)。加入完畢后，將反應(yīng)混合物在0℃攪拌2小時(shí)。然后撤除冰浴，將反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢柽^周末。以硅藻土過濾除去聚合物結(jié)合的試劑。真空濃縮濾液后，加入叔丁基甲基醚(100mL)并在室溫?cái)嚢?0分鐘得沉淀及清液。將沉淀過濾并以叔丁基甲基醚洗滌。真空濃縮濾液，將殘留物經(jīng)快速硅膠層析(庚烷/乙酸乙酯)純化得到小標(biāo)題化合物(1.45g)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ8.00(d，J＝9.1Hz，1H)；6.60(d，J＝2.5Hz，1H)；6.55(dd，J＝2.5，9.1Hz，1H)；4.42(dd，J＝2.7，11.2Hz，1H)；4.13(dd，J＝5.1，11.2Hz，1H)；3.88(s，3H)；3.41(m，1H)；2.92(m，2H)。
步驟II(2R)-1-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-3-(5-甲氧基-2-硝基苯氧基)丙-2-醇在88℃下，將5-氯-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶](396mg，1.77mmol)及(2R)-2-[(5-甲氧基-2-硝基苯氧基)甲基]環(huán)氧乙烷(400mg，1.77mmol)的乙醇(5mL)混合物攪拌4小時(shí)。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物經(jīng)快速硅膠層析(0-2％甲醇的二氯甲烷溶液，0.2％NH4OH)純化得到小標(biāo)題化合物(700mg)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ8.02(d，J＝9.1Hz，1H)；7.12(s，1H)；7.07(dd，J＝2.2，8.5Hz，1H)；6.68(d，J＝8.5Hz，1H)；6.58(d，J＝2.5Hz，1H)；6.55(dd，J＝2.5，9.1Hz，1H)；4.26-4.12(m，3H)；3.90(s，3H)；3.00(s，2H)；2.98-2.65(m，6H)；2.06-1.82(m，4H)。
APCI-MSm/z 449(MH+)。
步驟IIIN-(2-{[(2R)-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-2-羥基丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺將(2R)-1-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-3-(5-甲氧基-2-硝基苯氧基)丙-2-醇(700mg，1.56mmol)溶于乙酸乙酯(35mL)，加入Pt/C(5％，121mg)，在室溫大氣壓下氫化3小時(shí)。氫化完全后，加入乙酸酐(0.22mL，2.34mmol)，將反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢?小時(shí)。過濾催化劑，真空濃縮濾液，將殘留物溶于甲醇(10mL)，加入2滴濃氫氧化鈉水溶液并將混合物回流3小時(shí)，冷至室溫。加入鹽酸水溶液將反應(yīng)混合物pH調(diào)至2，濃縮并將所得殘留物經(jīng)快速硅膠層析(0-4％甲醇的二氯甲烷溶液，0.2％NH4OH)純化得到小標(biāo)題化合物(620mg)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ8.18(d，J＝8.8Hz，1H)；8.10(br.s，1H)；7.12(s，1H)；7.08(dd，J＝2.2，8.4Hz，1H)；6.68(d，J＝8.4Hz，1H)；6.57-6.50(m，2H)；4.18(m，1H)；4.06(dd，J＝3.3，10.2Hz，1H)；3.96(dd，J＝5.5，10.2Hz，1H)；3.79(s，3H)；3.02(s，2H)；2.96(m，2H)；2.82-2.58(m，4H)；2.22(s，3H)；2.00(m，4H)。
APCI-MSm/z 461(MH+)。
步驟IVN-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺在0℃下，向N-(2-{[(2R)-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-2-羥基丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺(610mg，1.32mmol)，三苯基膦(692mg，2.64mmol)及亞胺二羧酸二叔丁基酯(574mg，2.64mmol)的THF(6mL)混合物中滴加入DEAD(460mg，2.64mmol)的THF(4mL)溶液。加入完畢后，將反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢柽^夜。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物以三氟乙酸水溶液(0.4mL的H2O與7.6mL的CF3CO2H)室溫處理15分鐘。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物經(jīng)快速硅膠層析(0-3％甲醇的二氯甲烷溶液，0.2％NH4OH)純化得到標(biāo)題化合物(81mg)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ7.66(d，J＝8.8Hz，1H)；7.13(m，1 H)；7.04(dd，J＝2.2，8.5Hz，1H)；6.65(d，J＝8.5Hz，1H)；6.59(d，J＝2.6Hz，1H)；6.49(dd，J＝2.6，8.8Hz，1H)；4.10(dd，J＝3.3，9.6Hz，1H)；3.90(dd，J＝6.5，9.6Hz，1H)；3.78(s，3H)；3.38(m，1H)；3.02(s，2H)；2.75-2.46 8m，6H)；2.16(s，3H)；1.98-1.77(m，4H)。
APCI-MSm/z 460(MH+)。
還得到副產(chǎn)物N-{2-[3-氨基-2-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-甲氧基苯基}乙酰胺(84mg)，見實(shí)施例8。
實(shí)施例2N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將BBr3的CH2Cl2溶液(1M，0.42mL，0.42mmol)緩慢加入至冷(冰-水)的N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺(65mg，0.141mmol)的CH2Cl2溶液(3mL)中。加入完畢后，將反應(yīng)混合物在0℃攪拌3.5小時(shí)，再加入1(M)的BBr3的CH2Cl2溶液(0.2mL)，將混合物在同樣溫度下再攪拌1小時(shí)，緩慢加入甲醇(2mL)，在0℃繼續(xù)攪拌20分鐘。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物溶于甲醇(5mL)，加入濃NH4OH(1mL)，5分鐘后，真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物以HPLC(10-65％乙腈水溶液，0.1％CF3CO2H)純化得到標(biāo)題化合物(31mg)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ7.27(d，J＝8.6Hz，1H)；7.18(m，1H)；7.08(dd，J＝2.2，8.6Hz，1H)；6.70(d，J＝8.6Hz，1H)；6.54(d，J＝2.4Hz，1H)；6.45(dd，J＝2.4，8.6Hz，1H)；4.35(dd，J＝3.3，10.9Hz，1H)；4.19(dd，J＝5.9，10.9Hz，1H)；4.04(br.s，1H)；3.28-2.98(m，8H)；2.15(s，3H)；2.16-2.01(m，4H)。
APCI-MSm/z 446(MH+)。
實(shí)施例3N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺步驟I(2R)-2-[(5-甲氧基-2-硝基苯氧基)甲基]環(huán)氧乙烷在0℃下，向(2S)-環(huán)氧乙烷-2-基甲醇(445mg，6.0mmol)，5-甲氧基-2-硝基苯酚(1.02g，6.0mmol)及三苯基膦(1.57g，6.0mmol)在THF(10mL)中的混合物中滴加入DEAD(0.95mL，6.0mmol)的THF溶液(5mL)。加入完畢后，撤除冰浴，將混合物室溫?cái)嚢柽^夜。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物經(jīng)快速硅膠層析(0-40％乙酸乙酯-石油醚溶液)純化得到小標(biāo)題化合物(820mg)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ8.00(d，J＝9.1Hz，1H)；6.60(d，J＝2.5Hz，1H)；6.54(dd，J＝2.5，9.1Hz，1H)；4.41(dd，J＝2.7，11.3Hz，1H)；4.12(dd，J＝5.0，11.3Hz，1H)；3.88(s，3H)；3.41(m，1H)；2.92(m，2H)。
APCI-MSm/z 226(MH+)。
步驟IIN-{4-甲氧基-2-[(2R)-環(huán)氧乙烷-2-基甲氧基]苯基}乙酰胺將(2R)-2-[(5-甲氧基-2-硝基苯氧基)甲基]環(huán)氧乙烷(620mg，2.75mmol)，Pd/C(10％，250mg)，N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.94mL，5.5mmol)及乙酸酐(0.52mL，5.5mmol)的乙酸乙酯混合物(25mL)在室溫大氣壓下氫化40分鐘。過濾催化劑，將濾液真空濃縮。殘留物經(jīng)快速硅膠層析(0-60％乙酸乙酯-石油醚溶液)純化得到小標(biāo)題化合物(155mg)及204mg的N-[2-(2-羥基丙氧基)-4-甲氧基苯基]乙酰胺(見實(shí)施例14)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ8.22(d，J＝8.8Hz，1H)；7.64(br.s，1H)；6.55-6.49(m，2H)；4.34(dd，J＝2.5，11.3Hz，1H)；3.94(dd，J＝6.1，11.3Hz，1H)；3.78(s，3H)；3.39(m，1H)；2.96(t，J＝4.5Hz，1H)；2.78(dd；J＝2.6，4.8Hz，1H)；2.20(s，3H)。
APCI-MSm/z 238(MH+)。
步驟IIIN-(2-{[(2R)-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-2-羥基丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺80℃下，將5-氟-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶](250mg，1.02mmol)及N-{4-甲氧基-2-[(2R)-環(huán)氧乙烷-2-基甲氧基]苯基}乙酰胺(150mg，0.632mmol)的乙醇混合物(3mL)攪拌過夜。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物經(jīng)快速硅膠層析(0-1.5％甲醇的二氯甲烷溶液，0.2％NH4OH)純化得到小標(biāo)題化合物(266mg)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ7.74(d，J＝8.8Hz，1H)；6.90(dd，J＝2.6，8.2Hz，1H)；6.77(m，1H)；6.65-6.60(m，2H)；6.51(dd，J＝2.6，8.8Hz，1H)；4.17(m，1H)；4.09(dd，J＝3.4，9.9Hz，1H)；3.96(dd，J＝6.2，9.9Hz，1H)；3.78(s，3H)；3.01(s，2H)；2.70(br.s，4H)；2.61(m，2H)；2.15(s，3H)；1.97-1.81(m，4H)。
APCI-MSm/z 445(MH+)。
步驟IVN-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺0℃下，向N-(2-{[(2R)-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-2-羥基丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺(260mg，0.58mmol)、三苯基膦(228mg，0.87mmol)及亞胺二羧酸二叔丁基酯(189mg，0.87mmol)的THF混合物(3mL)中滴加入DEAD(0.137mL，0.87mmol)的THF溶液(1.5mL)。加入完畢后，將反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢柽^夜。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物以三氟乙酸水溶液(0.2mL的H2O與3.8mL的CF3CO2H)室溫處理30分鐘。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物經(jīng)快速硅膠層析(0-2％甲醇的二氯甲烷溶液，0.2％NH4OH)純化得到標(biāo)題化合物(45mg)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ7.65(d，J＝8.8Hz，1H)；6.89(dd，J＝2.7，8.1Hz，1H)；6.77(m，1H)；6.62(dd，J＝4.2，8.7Hz，1H)；6.60(d，J＝2.6Hz，1H)；6.50(dd，J＝2.6，8.8Hz，1H)；4.10(dd，J＝3.3，9.7Hz，1H)；3.90(dd，J＝6.6，9.7Hz，1H)；3.79(s，3H)；3.38(m，1H)；3.01(s，2H)；2.76-2.46(m，6H)；2.15(s，3H)；1.94(m，2H)；1.82(m，2H)。
APCI-MSm/z 444(MH+)。
從該反應(yīng)混合物中，得到副產(chǎn)物N-{2-[3-氨基-2-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-甲氧基苯基}乙酰胺(22mg)(見實(shí)施例9)。
實(shí)施例4N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-羥基苯基)乙酰胺雙(三氟乙酸鹽)(鹽)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，向冷(冰-水)的N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺(43mg，0.097mmol)的CH2Cl2溶液(2mL)中緩慢加入BBr3的CH2Cl2溶液(1M，0.29mL，0.29mmol)。加入完畢后，將反應(yīng)混合物于0℃攪拌3小時(shí)，緩慢加入甲醇(1mL)，繼續(xù)于0℃攪拌30分鐘。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物溶于甲醇(5mL)，加入濃NH4OH(1mL)，5分鐘后，真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物以HPLC(10-70％乙腈水溶液，0.1％CF3CO2H)純化得到標(biāo)題化合物(25mg)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ7.26(d，J＝8.6Hz，1H)；6.94(dd，J＝2.6，8.1Hz，1H)；6.81(m，1H)；6.67(dd，J＝4.1，8.7Hz，1H)；6.54(d，J＝2.5Hz，1H)；6.45(dd，J＝2.5，8.6Hz，1H)；4.35(dd，J＝3.4，10.9Hz，1H)；4.20(dd，J＝5.9，10.9Hz，1H)；4.05(m，1H)；3.30-3.00(m，8H)；2.15(s，3H)；2.12-2.01(m，4H)。
APCI-MSm/z 430(MH+)。
實(shí)施例5N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺步驟I(2R)-1-(5-甲氧基-2-硝基苯氧基)-3-(1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙-2-醇在88℃下，將3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]1(335mg，1.77mmol)及(2R)-2-[(5-甲氧基-2-硝基苯氧基)甲基]環(huán)氧乙烷(400mg，1.77mmol)的乙醇混合物(5mL)攪拌5小時(shí)。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物經(jīng)快速硅膠層析(0-2％甲醇的二氯甲烷溶液，0.2％NH4OH)純化得到小標(biāo)題化合物(533mg)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ8.02(d，J＝9.1Hz，1H)；7.16(d，J＝7.7Hz，1H)；7.12(d，J＝7.5Hz，1H)；6.84(m，1H)；6.77(d，J＝8.0Hz，1H)；6.57(d，J＝2.5Hz，1H)；6.54(dd，J＝2.5，9.1Hz，1H)；4.28-4.12(m，3H)；3.89(s，3H)；3.02(s，2H)；2.96(m，1H)；2.90-2.64(m，5H)；2.04(m，2H)；1.89(m，2H)。
APCI-MSm/z 415(MH+)。
1參考文獻(xiàn)Effland，R.R；Gardner，B.A；Strupczewski，J.J.HeterocyclicChem.1981，18，811-814.
步驟IIN-(2-{[(2R)-2-羥基-3-(1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺在Pt/C(5％，100mg)存在條件下，將(2R)-1-(5-甲氧基-2-硝基苯氧基)-3-(1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙-2-醇(530mg，1.28mmol)在乙酸乙酯(30mL)中在室溫大氣壓下氫化4小時(shí)。加入乙酸酐(0.182mL，1.92mmol)，將混合物室溫?cái)嚢?小時(shí)。過濾催化劑，將濾液濃縮。殘留物溶于甲醇(10mL)，加入濃NaOH水溶液(4滴)，將混合物室溫?cái)嚢?0小時(shí)。加入HCl水溶液，將混合物pH調(diào)至2。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物經(jīng)快速硅膠層析(0-3％甲醇的二氯甲烷溶液，0.2％NH4OH)純化得到小標(biāo)題化合物(466mg)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ7.74(d，J＝8.8Hz，1H)；7.12(d，J＝7.3Hz，1H)；7.06(t，J＝7.9Hz，1H)；6.78(t，J＝7.3Hz，1H)；6.68(d，J＝7.9Hz，1H)；6.61(d，J＝2.8Hz，1H)；6.51(dd，J＝2.6，8.8Hz，1H)；4.18(m，1H)；4.10(dd，J＝3.4，10.0Hz，1H)；3.97(dd，J＝6.3，10.0Hz，1H)；3.78(s，3H)；3.01(s，2H)；2.72(br.s，4H)；2.62(m，2H)；2.15(s，3H)；1.94(m，2H)；1.84(m，2H)。
APCI-MSm/z 427(MH+)。
步驟IIIN-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺在0℃下，向N-(2-{[(2R)-2-羥基-3-(1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺(460mg，1.08mmol)、三苯基膦(566mg，2.16mmol)及亞胺二羧酸二叔丁基酯(469mg，2.16mmol)的THF混合物(5mL)中滴加入DEAD(376mg，2.16mmol)的THF溶液(3mL)。加入完畢后，將反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢柽^夜。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物以三氟乙酸水溶液(0.4mL的H2O與7.6mL的CF3CO2H)室溫處理15分鐘。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物經(jīng)快速硅膠層析(0-3％甲醇的二氯甲烷溶液，0.2％NH4OH)純化得到標(biāo)題化合物(85mg)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ7.65(d，J＝8.8Hz，1H)；7.13(d，J＝7.3Hz，1H)；7.05(t，J＝7.9Hz，1H)；6.78(t，J＝7.3Hz，1H)；6.67(d，J＝7.9Hz，1H)；6.60(d，J＝2.6Hz，1H)；6.50(dd，J＝2.6，8.8Hz，1H)；4.11(dd，J＝3.4，9.7Hz，1H)；3.91(dd，J＝6.5，9.7Hz，1H)；3.78(s，3H)；3.40(m，1H)；3.01(s，2H)；2.78-2.48(m，6H)；2.15(s，3H)；1.94(m，2H)；1.84(m，2H)。
APCI-MSm/z 426(MH+)。
從該反應(yīng)混合物中，得到副產(chǎn)物N-{2-[3-氨基-2-(1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-甲氧基苯基}乙酰胺(55mg)，見實(shí)施例10。
實(shí)施例6N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′基)丙基]氧基}-4-羥基苯基)乙酰胺雙(三氟乙酸鹽)(鹽)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，向冷(冰-水)的N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺(75mg，0.176mmol)的CH2Cl2溶液(3mL)中緩慢加入BBr3的CH2Cl2溶液(1M，1.0mL，1.0mmol)。加入完畢后，將反應(yīng)混合物在0℃攪拌3.5小時(shí)，緩慢加入甲醇(2mL)，繼續(xù)在0℃攪拌20分鐘。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物溶于甲醇(5mL)，加入濃NH4OH(1mL)，5分鐘后，真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物以HPLC(10-55％乙腈水溶液，0.1％CF3CO2H)純化得到標(biāo)題化合物(45mg)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ7.27(d，J＝8.6Hz，1H)；7.17(d，J＝7.3Hz，1H)；7.08(t，J＝7.6Hz，1H)；6.84(t，J＝7.3Hz，1H)；6.72(d，J＝8.0Hz，1H)；6.53(d，J＝2.4Hz，1H)；6.44(dd，J＝2.5，8.6Hz，1H)；4.35(dd，J＝3.5，10.9Hz，1H)；4.19(dd，J＝5.8，10.9Hz，1H)；4.05(m，1H)；3.30-3.00(m，8H)；2.16(s，3H)；2.08(m，4H)。
APCI-MSm/z 412(MH+)。
實(shí)施例7N-(2-{[(2S)-2-(乙酰氨基)-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺向N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺(13mg，0.029mmol)的THF溶液(1.5mL)中加入吡啶(0.3mL)，然后加入乙酸酐(0.15mL)，將混合物室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后加入0.5mL的H2O，將混合物室溫?cái)嚢?0分鐘。真空除去揮發(fā)性成分，以甲苯共蒸餾。殘留物溶于甲醇(3mL)，加入3M的NaOH水溶液將pH調(diào)至14。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物經(jīng)快速硅膠層析(0-1.5％甲醇的二氯甲烷溶液，0.2％NH4OH)純化得到標(biāo)題化合物(9mg)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ7.63(d，J＝8.8Hz，1H)；6.89(dd，J＝2.6，8.3Hz，1H)；6.77(m，1H)；6.64-6.59(m，2H)；6.50(dd，J＝2.6，8.8Hz，1H)；4.47(m，1H)；4.10(dd，J＝4.3，9.6Hz，1H)；4.05(dd，J＝5.7，9.6Hz，1H)；3.78(s，3H)；3.00(s，2H)；2.74-2.52(m，6H)；2.16(s，3H)；2.02(s，3H)；1.93(m，2H)；1.81(m，2H)。
APCI-MSm/z 486(MH+)。
實(shí)施例8N-{2-[3-氨基-2-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-甲氧基苯基}乙酰胺雙(三氟乙酸鹽)快速硅膠層析(實(shí)施例1，步驟IV)后，將該化合物以HPLC(10-65％乙腈的水溶液，0.1％CF3CO2H)純化得到標(biāo)題化合物(95mg)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ7.28(d，J＝8.7Hz，1H)；7.14(m，1H)；7.04(dd，J＝2.2，8.5Hz，1H)；6.71-6.66(m，2H)；6.57(dd，J＝2.5，8.7Hz，1H)；4.34(d，J＝5.0Hz，2H)；3.79(s，3H)；3.54(m，1H)；3.42-3.24(m，2H)；3.18-2.95(m，6H)；2.13(s，3H)；2.02(m，4H)。
APCI-MSm/z 460(MH+)。
實(shí)施例9N-{2-[3-氨基-2-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′基)丙氧基]-4-甲氧基苯基}乙酰胺雙(三氟乙酸鹽)快速硅膠層析(實(shí)施例3，步驟IV)后，將該化合物以HPLC(10-70％乙腈的水溶液，0.1％CF3CO2H)純化得到標(biāo)題化合物(16mg)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ7.30(d，J＝8.6Hz，1H)；6.92(dd，J＝2.7，8.2Hz，1H)；6.82-6.75(m，1H)；6.69-6.64(m，2H)；6.57(dd，J＝2.6，8.7Hz，1H)；4.34-4.23(m，2H)；3.82(s，3H)；3.42(m，1H)；3.22(m，2H)；3.08-2.79(m，6H)；2.13(s，3H)；2.07-2.84(m，4H)。
APCI-MSm/z 444(MH+)。
實(shí)施例10N-{2-[3-氨基-2-(1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-甲氧基苯基}乙酰胺雙(三氟乙酸鹽)快速硅膠層析(實(shí)施例5，步驟III)后，該化合物以HPLC(10-65％乙腈的水溶液，0.1％CF3CO2H)純化得到標(biāo)題化合物(55mg)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ7.30(d，J＝8.7Hz，1H)；7.15(d，J＝7.2Hz，1H)；7.07(t，J＝7.4Hz，1H)；6.81(t，J＝7.3Hz，1H)；6.71(d，J＝7.9Hz，1H)；6.68(d，J＝2.6Hz，1H)；6.58(dd，J＝2.6，8.7Hz，1H)；4.32(m，2H)；3.81(s，3H)；3.48(m，1H)；3.40-3.22(m，2H)；3.14-2.88(m，6H)；2.13(s，3H)；2.00(m，4H)。
APCI-MSm/z 426(MH+)。
實(shí)施例11N-{2-[3-氨基-2-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]苯基}脲雙(三氟乙酸鹽)步驟IN-(2-羥基苯基)脲將2-氨基苯酚(1.09g，10.0mmol)溶于HCl水溶液(1M，10mL)，然后加入乙酸銨至pH變?yōu)?，室溫劇烈攪拌下，加入異氰酸鉀(892mg，11.0mmol)的水溶液(3mL)。加入完畢后，將反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢柽^夜。將沉淀過濾、水洗、收集沉淀得到小標(biāo)題化合物(1.3g)。
1H -NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.00(br.s，1H)；8.00(br.s，1H)；7.80(d，J＝8.0Hz，1H)；6.80-6.65(m，3H)；6.22(br.s，2H)。
APCI-MSm/z 153(MH+)。
步驟IIN-{2-[(2R)-環(huán)氧乙烷-2-基甲氧基]苯基}脲室溫下，向(2S)-環(huán)氧乙烷-2-基甲醇(296mg，4.0mmol)，N-(2-羥基苯基)脲(609mg，4.0mmol)及三苯基膦(1.05g，4.0mmol)的THF混合物(10mL)中滴加入DEAD(697mg，4.0mmol)的THF溶液(3mL)。加入完畢后，將反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢柽^夜。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物經(jīng)快速硅膠層析(0-80％乙酸乙酯-石油醚溶液)純化得到小標(biāo)題化合物(336mg)。
1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.08(m，1H)；7.82(s，1H)；6.98(m，1H)；6.85(m，2H)；6.24(br.s，2H)；4.37(dd，J＝2.5，11.7Hz，1H)；3.89(dd，J＝6.6，11.7Hz，1H)；3.38(m，1H)；2.87(t，J＝4.7Hz，1H)；2.75(dd，J＝2.7，5.0Hz，1H)。
步驟IIIN-(2-{[(2R)-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-2-羥基丙基]氧基}苯基)脲在88℃下，將5-氯-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶](161mg，0.72mmol)及N-{2-[(2R)-環(huán)氧乙烷-2-基甲氧基]苯基}脲(150mg，0.72mmol)的乙醇混合物(2mL)攪拌5小時(shí)。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物經(jīng)快速硅膠層析(0-2％甲醇的二氯甲烷溶液，0.2％NH4OH)純化得到小標(biāo)題化合物(220mg)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ7.95(m，1H)；7.14(m，1H)；7.04(dd，J＝2.2，8.4Hz，1H)；7.00-6.86(m，3H)；6.66(d，J＝8.5Hz，1H)；4.23-4.16(m，1H)；4.09(dd，J＝3.8，9.9Hz，1H)；4.00(dd，J＝6.1，9.9Hz，1H)；3.02(s，2H)；2.78-2.55(m，6H)；1.94(m，2H)；1.84(m，2H)。
APCI-MSm/z 432(MH+)。
步驟IVN-{2-[3-氨基-2-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]苯基}脲雙(三氟乙酸鹽)
在0℃下，向N-(2-{[(2R)-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-2-羥基丙基]氧基}苯基)脲(190mg，0.439mmol)，三苯基膦(173mg，0.658mmol)及亞胺二羧酸二叔丁基酯(143mg，0.658mmol)的THF混合物(3mL)中滴加入DEAD(115mg，0.658mmol)的THF溶液(2mL)。加入完畢后，將反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢柽^夜。真空除去揮發(fā)性成分，室溫下，將殘留物以三氟乙酸水溶液(0.2mL的H2O與3.8mL的CF3CO2H)處理20分鐘。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物以HPLC(10-70％乙腈的水溶液，0.1％CF3CO2H)純化得到標(biāo)題化合物(10mg)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ7.63(m，1H)；7.17-6.95(m，5H)；6.68(d，J＝8.4Hz，1H)；4.44-4.28(m，2H)；3.50(m，1H)；3.31(m，3H)；3.18-2.87(m，5H)；2.02(m，4H)。
APCI-MSm/z 431(MH+)。
實(shí)施例12N-{2-[3-氨基-2-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]苯基}脲雙(三氟乙酸鹽)步驟IN-(2-{[(2R)-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-2-羥基丙基]氧基}苯基)脲在88℃下，將5-氟-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4’-哌啶](182mg，0.88mmol)及N-{2-[(2R)-環(huán)氧乙烷-2-基甲氧基]苯基}脲(183mg，0.88mmol)的乙醇混合物(2mL)攪拌過夜。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物經(jīng)快速硅膠層析(0-2％甲醇的二氯甲烷溶液，0.2％NH4OH)純化得到小標(biāo)題化合物(250mg)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ7.94(m，1H)；7.00-6.87(m，4H)；6.78(m，1H)；6.63(dd，J＝4.2，8.8Hz，1H)；4.23-4.16(m，1H)；4.10(dd，J＝3.8，9.9Hz，1H)；4.00(dd，J＝6.1，9.9Hz，1H)；3.02(s，2H)；2.78-2.55(m，6H)；1.93(m，2H)；1.83(m，2H)。
APCI-MSm/z 416(MH+)。
步驟IIN-{2-[3-氨基-2-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]苯基}脲雙(三氟乙酸鹽)在0℃下，向N-(2-{[(2R)-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-2-羥基丙基]氧基}苯基)脲(200mg，0.48mmol)，三苯基膦(189mg，0.72mmol)及亞胺二羧酸二叔丁基酯(156mg，0.72mmol)的THF混合物(3mL)中滴加入DEAD(125mg，0.72mmol)的THF溶液(2mL)。加入完畢后，將反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢柽^夜。真空除去揮發(fā)性成分，室溫下，將殘留物以三氟乙酸水溶液(0.2mL的H2O與3.8mL的CF3CO2H)處理20分鐘。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物以HPLC(10-70％乙腈的水溶液，0.1％CF3CO2H)純化得到標(biāo)題化合物(15mg)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ7.63(dd，J＝1.2，8.0Hz，1H)；7.15-7.05(m，2H)；6.97(m，1H)；6.91(dd，J＝2.6，8.2Hz，1H)；6.78(m，1H)；6.65(dd，J＝4.2，8.8Hz，1H)；4.37(dd，J＝5.5，10.7Hz，1H)；4.28(m，1H)；3.43(m，1H)；3.30(m，3H)；3.17-2.78(m，5H)；2.07-1.88(m，4H)。
APCI-MSm/z 415(MH+)。
實(shí)施例13N-{2-[2-氯-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-羥基苯基}乙酰胺三氟乙酸鹽(鹽)步驟I(1Z)-1-(2，4-二氫苯基)乙酮肟將1-(2，4-二氫苯基)乙酮(4.5g，29.6mmol)溶于吡啶(17mL)。10分鐘內(nèi)分次加入鹽酸羥胺(2.1g，29.6mmol)。將反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢柽^夜，分散于乙酸乙酯及H2O中。有機(jī)層分別以H2O及0.2M HCl水溶液洗滌。將油狀殘留物以H2O處理，真空濃縮得白色半固體殘留物，甲苯處理后，真空濃縮得到白色固體的小標(biāo)題化合物(4.8g)。
APCI-MSm/z 168(MH+)。
步驟II2-甲基-1，3-苯并唑-6-醇向冷卻(冰-水)的(1Z)-1-(2，4-二氫苯基)乙酮肟(9.7g，57.7mmol)及二甲基乙酰胺(11mL)的乙腈溶液(65mL)中滴加入三氯氧磷(5.6mL，60.3mmol)。反應(yīng)過程中，溫度不允許超過10℃。室溫下攪拌1小時(shí)后，將黃色漿狀物傾入NaHCO3水溶液及冰的混合物中。將所得沉淀過濾、干燥得到小標(biāo)題化合物(6.3g)。
1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.68(br.s，1H)；7.38(d，J＝8.5Hz，1H)；6.94(d，J＝2.2Hz，1H)；6.74(dd，J＝8.5，2.2Hz，1H)；2.50(s，3H)。
APCI-MSm/z 150(MH+)。
步驟III2-甲基-1，3-苯并唑-6-基乙酸酯將漿狀的2-甲基-1，3-苯并唑-6-醇(7.1g，48.7mmol)的THF混合物(150mL)冷卻至10℃，一次性加入三乙胺(11.3mL，81.3mmol)，然后分次加入乙酰氯(5.8mL，81.3mmol)。加入完畢后，將反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢柽^夜，然后分散于乙酸乙酯及水中。有機(jī)層以Na2SO4干燥、過濾、真空濃縮得到小標(biāo)題化合物(8.2g)。
1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.65(d，1H)；7.47(s，1H)；7.15(d，1H)；2.60(s，3H)；2.24(s，3H)。
步驟IV4-(乙酰氨基)-3-羥基苯基乙酸酯向2-甲基-1，3-苯并唑-6-基乙酸酯(5.05g，28.8mmol)的THF溶液(100mL)中加入三氟乙酸/水(4mL/10mL)混合物。將反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢?6小時(shí)，加入飽和的NaHCO3水溶液(150mL)。將混合物以乙酸乙酯萃取、Na2SO4干燥、過濾及真空濃縮。得到小標(biāo)題化合物粗品(4.0g)。
步驟V4-(乙酰氨基)-3-[(2S)-環(huán)氧乙烷-2-基甲氧基]苯基乙酸將4-(乙酰氨基)-3-羥基苯基乙酸(669mg，3.2mmol)，(2S)-環(huán)氧乙烷-2-基甲基3-硝基苯磺酸酯(748mg，2.9mmol)及Cs2CO3(1.05g，3.2mmol)的1-甲基-吡咯烷酮的混合物(10mL)室溫?cái)嚢柽^夜。將反應(yīng)混合物分散于乙酸乙酯及水中。有機(jī)層以Na2SO4干燥、過濾及真空濃縮。將所得黃色油狀物懸浮于甲醇/乙醚中。將沉淀過濾、干燥得到小標(biāo)題化合物(296mg)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ8.40(d，1H)；7.80(s，1H)；6.78(m，2H)；4.39(m，1H)；3.92(m，1H)；3.40(m，1H)；2.98(t，1H)；2.80(m，1H)；2.25(s，3H)；2.20(s，3H)。
步驟VIN-(2-{[(2S)-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′基)-2-羥基丙基]氧基}-4-羥基苯基)乙酰胺在80℃下，將5-氯-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶](335.5mg，1.5mmol)及4-(乙酰氨基)-3-[(2S)-環(huán)氧乙烷-2-基甲氧基]苯基乙酸酯(398mg，1.5mmol)的乙醇混合物(3mL)攪拌24小時(shí)。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物經(jīng)快速硅膠層析(0-3％甲醇的二氯甲烷溶液，0.2％NH4OH)純化得到小標(biāo)題化合物(302mg)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ7.57(d，J＝8.7Hz，1H)；7.14(s，1H)；7.04(dd，J＝2.3，8.5Hz，1H)；6.65(d，J＝8.5Hz，1H)；6.48(d，J＝2.5Hz，1H)；6.36(dd，J＝2.6，8.7Hz，1H)；4.20-4.13(m，1H)；4.05(dd，J＝3.4，9.8Hz，1H)；3.93(dd，J＝6.2，9.8Hz，1H)；3.02(s，2H)；2.77-2.55(m，6H)；2.14(s，3H)；1.93(m，2H)；1.84(m，2H)。
APCI-MSm/z 447(MH+)。
步驟VIIN-{2-[2-氯-3-(5-氯-1′H，3 H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-羥基苯基}乙酰胺三氟乙酸鹽(鹽)在-78℃下，向草酰氯(22mg，0.173mmol)的二氯甲烷溶液(1mL)中緩慢加入DMSO(26mg，0.332mmol)的二氯甲烷溶液(0.5mL)。10分鐘后，緩慢加入N-(2-{[(2S)-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-2-羥基丙基]氧基}-4-羥基苯基)乙酰胺(25mg，0.056mmol)的二氯甲烷溶液(0.5mL)。25分鐘后，緩慢加入二乙基氨基三氟化硫(DAST)(0.1mL)的二氯甲烷溶液(0.5mL)，將反應(yīng)混合物-78℃下攪拌4小時(shí)，加入Et3N(0.2mL)，5分鐘后撤除冷卻浴，加入二氯甲烷將反應(yīng)混合物稀釋(5mL)，水洗。有機(jī)層以Na2SO4干燥、過濾及真空濃縮。殘留物以HPLC(10-70％乙腈的水溶液，0.1％CF3CO2H)純化得到為副產(chǎn)物的標(biāo)題化合物(2mg)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ7.32(d，J＝8.7Hz，1H)；7.15(s，1H)；7.06(dd，J＝2.2，8.5Hz，1H)；6.68(d，J＝8.5Hz，1H)；6.51(d，J＝2.5Hz，1H)；6.41(dd，J＝2.5，8.6Hz，1H)；4.54(br.s，1H)；4.28(d，J＝5Hz，2H)；3.24-2.83(m，8H)；2.13(s，3H)；1.98(m，4H)。
APCI-MSm/z 465(MH+)。
實(shí)施例14N-{2-[2-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-甲氧基苯基}乙酰胺三氟乙酸鹽步驟IN-[2-(2-羥基丙氧基)-4-甲氧基苯基]乙酰胺其以實(shí)施例3中的步驟II反應(yīng)方法制備，為副產(chǎn)物(204mg)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ8.02(d，J＝8.6Hz，1H)；7.85(br.s，1H)；6.48(m，2H)；4.22(m，1H)；3.98(dd，J＝2.9，9.9Hz，1H)；3.84(m，1H)；3.78(s，3H)；2.15(s，3H)；1.29(d，J＝6.5Hz，3H)。
APCI-MSm/z 240(MH+)。
步驟IIN-{2-[2-(5-氯-1′H，3H -螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-甲氧基苯基}乙酰胺將N-[2-(2-羥基丙氧基)-4-甲氧基苯基]乙酰胺(92mg，0.38mmol)溶于二氯甲烷溶液(3mL)中，冷至0℃，加入Et3N(0.076mL，0.547mmol)，然后加入甲磺酰氯(52mg，0.456mmol)。將反應(yīng)混合物于0℃攪拌2小時(shí)，加入二氯甲烷(20mL)稀釋，連續(xù)以飽和NaHCO3水溶液及H2O洗滌。有機(jī)層以Na2SO4干燥、過濾及真空濃縮。殘留物溶于乙醇(3mL)中，加入5-氯-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶](85mg，0.38mmol)，將混合物回流40小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷至室溫，真空除去揮發(fā)性成分。殘留物溶于乙酸乙酯(30mL)，連續(xù)以飽和NaHCO3水溶液及水洗滌，Na2SO4干燥、過濾及真空濃縮。殘留物以HPLC(10-70％乙腈的水溶液，0.1％CF3CO2H)純化得到標(biāo)題化合物(35mg)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ7.20(m，1H)；7.18(d，J＝8.6Hz，1H)；7.11(dd，J＝2.1，8.5Hz，1H)；6.77(d，J＝8.5Hz，1H)；6.71(d，J＝2.6Hz，1H)；6.61(dd，J＝2.6，8.7Hz，1H)；4.46(dd，J＝3.4，12.2Hz，1H)；4.36(dd，J＝8.6，12.2Hz，1H)；3.96(m，1H)；3.81(s，3H)；3.69-3.40(m，4H)；3.12(s，2H)；2.45-2.17(m，4H)；1.50(d，J＝7.0Hz，3H)。
APCI-MSm/z 445(MH+)。
實(shí)施例155-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-2H-1，4-苯并嗪-3(4H)-酮步驟I2-氨基苯-1，3-二醇將2-硝基苯-1，3-二醇(5g，32.2mmol)及10％Pd-C(230mg)的乙醇混合物(100ml)以H2常壓氫化過夜。將反應(yīng)混合物以硅藻土過濾。濃縮除去乙醇得到小標(biāo)題化合物(4g，99％)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.81(br.s，2H)，6.24(m，3H)，3.81(br.s，2H)。
APCI-MSm/z 126.0(MH+)。
步驟II2-氯-N-(2，6-二羥基苯基)乙酰胺將KH2PO4(17.2g，126.3mmol)及K2HPO4(8.2g，35.7mmol)的188ml蒸餾水溶液以氬氣脫氧0.5小時(shí)。向緩沖液中加入2-氨基苯-1，3-二醇(1g，8.0mmol)，然后向反應(yīng)混合物中緩慢加入氯乙酰氯(0.64mL，8.0mmol)。加入完畢后，將反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。凍干除去水分，將殘留物溶于20％MeOH的DCM溶液中。過濾除去不溶鹽，蒸干溶劑得到小標(biāo)題化合物，無(wú)需純化用于下一步驟。
APCI-MSm/z 202.0(MH+)。
步驟III5-羥基-2H-1，4-苯并嗪-3(4H)-酮將2-氯-N-(2，6-二羥基苯基)乙酰胺(1.99g，9.88mmol)溶于150ml10％K2CO3水溶液，將溶液在40℃加熱45分鐘。冷卻后，以2M HCl中和反應(yīng)混合物，并用乙酸乙酯萃取。經(jīng)MgSO4干燥后，蒸干溶劑得粗品(0.54g，從步驟II及III計(jì)算總收率41％)。
APCI-MSm/z 166.0(MH+)。
步驟IVN-(叔丁氧羰基)-3-(5-氟-1’H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4’-哌啶]-1’-基)-L-丙氨酸甲酯向冷(冰-水浴)的5-氟-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4’-哌啶](1.03g，5mmol)及N-(叔丁氧羰基)-3-碘-L-丙氨酸甲酯(1.64g，5mmol)的二氯甲烷懸浮液(20mL)中加入三乙胺(0.697mL，5mmol)。得透明溶液后，將反應(yīng)混合物于5℃放置48小時(shí)。然后加入二氯甲烷(50mL)稀釋、水洗(10mL)、Na2SO4干燥、過濾及真空濃縮。殘留物經(jīng)快速硅膠層析(0-1.5％甲醇的二氯甲烷溶液，包含0.2％氨)純化得到小標(biāo)題化合物(1.2g)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ6.85(m，1H)；6.78(m，1H)；6.64(dd，J＝4.2，8.7Hz，1H)；5.40(br.s，1H)；4.35(br.s，1H)；3.76(s，3H)；2.99(s，2H)；2.80-2.43(m，6H)；1.93(m，2H)；1.77(m，2H)；1.48(s，9H)。
APCI-MSm/z 409(MH+)。
步驟V[(1S)-2-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-1-(羥基甲基)乙基]氨基甲酸叔丁基酯0℃下，向LiBH4(77mg，3.51mmol)的THF懸浮液(10mL)中加入N-(叔丁氧羰基)-3-(5-氟-1’H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4’-哌啶]-1’-基)-L-丙氨酸甲酯(1.2g，2.93mmol)的THF溶液(15mL)。加入完畢后，在0℃繼續(xù)攪拌4小時(shí)，然后室溫反應(yīng)過夜。將反應(yīng)混合物再冷卻至0℃，緩慢加入飽和的NH4Cl水溶液(15mL)。1小時(shí)后，將反應(yīng)混合物以乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層以水洗(10mL)、Na2SO4干燥、過濾及濃縮。殘留物經(jīng)快速硅膠層析(0-1.5％甲醇的二氯甲烷溶液，包含0.2％氨)純化得到標(biāo)題化合物(376mg)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ6.90(m，1H)；6.77(m，1H)；6.62(dd，J＝4.2，8.7Hz，1H)；3.78(m，1H)；3.56(m，2H)；3.00(s，2H)；2.68(br.s，4H)；2.50(m，2H)；1.94(m，2H)；1.82(m，2H)；1.48(s，9H)。
APCI-MSm/z 381(MH+)。
步驟VI(2S)-2-[(叔丁氧羰基)氨基]-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基3-硝基苯磺酸酯在攪拌下，向[(1S)-2-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-1-(羥基甲基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(300mg，0.79mmol)的DCM溶液(20ml)中加入三乙胺(120mg，1.18mmol)。將混合物冷至0℃，加入3-硝基苯磺酰氯(250mg，1.18mmol)的DCM溶液(5ml)。將混合物0℃攪拌4小時(shí)，然后升至室溫并且攪拌過夜。再將反應(yīng)混合物以水(30ml)及NaHCO3水溶液(1M，30ml)洗滌，Na2SO4干燥。真空除去溶劑得無(wú)色油狀物(155mg，35％)，無(wú)需純化用于下一步。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.73(m，1H)，8.30-8.21(m，2H)，7.58(t，J＝8.0Hz，1H)，7.06(br.d，J＝5.8Hz，1H)，6.91-6.78(m，2H)，6.64(dd，J＝8.7，4.1Hz，1H)，5.00(m，2H)，4.87(m，1H)，4.71(m，1H)，4.40(m，2H)，3.96(d，J＝12.0Hz，1H)，3.64(m，3H)，3.07(s，2H)，2.16(s，4H)，1.41(s，9H)步驟VII5-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-2H-1，4-苯并嗪-3(4H)-酮將3-硝基苯磺酸(2S)-2-[(叔丁氧羰基)氨基]-3-(5-氟-1′H，3H -螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙酯(77mg，0.14mmol)，5-羥基-2H-1，4-苯并嗪-3(4H)-酮(23mg，0.14mmol)及Cs2CO3(68mg，0.21mmol)的DMF混合物(2ml)在室溫?cái)嚢?6小時(shí)。然后將混合物分散于DCM(50ml)及水(50ml)中，分離有機(jī)層。將有機(jī)層以水洗，真空除去溶劑。將殘留物溶于TFA(95％的水溶液，2ml)，室溫?cái)嚢枞芤?小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物以乙酸乙酯(30ml)稀釋，以NaHCO3水溶液(1M，30ml)洗滌。真空除去溶劑，將殘留物以HPLC(10-40％乙腈的水溶液，0.6％NH3)純化得到標(biāo)題化合物(12mg，21％)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ6.91(m，2H)，6.78(td，J＝8.9，2.7Hz，1H)，6.68(d，J＝8.4Hz，2H)，6.62(m，2H)，4.54(s，2H)，4.14(dd，J＝9.6，3.3Hz，1H)，3.94(dd，J＝9.5，6.4Hz，1H)，3.43(m，1H)，3.02(s，2H)，2.77-2.55(m，4H)，2.52(d，J＝7.0Hz，2H)，1.95(m，2H)，1.85(m，2H)。
APCI-MSm/z 428(MH+)。
實(shí)施例168-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}喹啉-2(1H)-酮步驟I8-羥基喹啉-2(1H)-酮在90℃下，將喹啉-8-醇1-氧化物(20g，124mmol)在乙酸酐(200ml)中攪拌反應(yīng)5小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物傾入水/冰混合物(1.5L)中，加入濃NH3調(diào)中性。過濾收集所得沉淀并水洗。將粗品懸浮于丙-2-醇中，加入石油醚純化得到乙酸2-氧代-1，2-二氫喹啉-8-基酯。將乙酸2-氧代-1，2-二氫喹啉-8-基酯于濃HCl(200ml)中并在90℃下加熱4小時(shí)。將反應(yīng)混合物傾入冰水(400ml)中，過濾收集所得沉淀、水洗。以丙-2-醇/石油醚重結(jié)晶得到小標(biāo)題化合物(14.1g，70％)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.46(s，1H)，10.21(s，1H)，7.84(d，J＝9.5Hz，1H)，7.10(d，J＝7.6Hz，1H)，7.00(t，J＝7.7Hz，1H)，6.95(dd，J＝7.8，1.2Hz，1H)，6.48(d，J＝9.5Hz，1H)APCI-MSm/z 162(MH+)。
步驟II8-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}喹啉-2(1H)-酮根據(jù)5-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-2H-1，4-苯并嗪-3(4H)-酮(實(shí)施例15，步驟VII)的方法，制備得到8-羥基喹啉-2(1H)-酮。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δ7.96(d，J＝9.4Hz，1H)，7.28(dd，J＝7.0，2.1Hz，1H)，7.20(m，2H)，6.90(dd，J＝8.2，2.6Hz，1H)，6.78(td，J＝8.9，2.7Hz，1H)，6.65(d，J＝9.4Hz，1H)，6.62(m，1H)，4.27(dd，J＝9.6，3.3Hz，1H)，4.08(dd，J＝9.5，6.4Hz，1H)，3.52(m，1H)，3.02(s，2H)，2.78-2.60(m，4H)，2.58(d，J＝7.1Hz，2H)，1.95(m，2H)，1.85(m，2H)。
APCI-MSm/z 424(MH+)。
實(shí)施例175-氯-2-[2-氯-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-羥基苯甲酸步驟I5-氯-2，4-二羥基苯甲酸甲酯使用Anderson，W.K.，et al.，J.Med.Chem.1996，39，46-55.所述的方法制備2，4-二羥基苯甲酸甲基酯。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ10.85(s，1H)，7.84(s，1H)，6.63(s，1H)，5.99(s，1H)，3.95(s，3H)步驟II5-氯-2-羥基-4-[(4-甲氧基芐基)氧基]苯甲酸甲酯向5-氯-2，4-二羥基苯甲酸甲酯(0.41g，2mmol)的丙酮溶液中加入1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(0.32g，2mmol)及K2CO3(0.28g，2mmol)。將反應(yīng)混合物回流加熱3天，然后冷至室溫。過濾除去無(wú)機(jī)物。真空蒸餾除去溶劑，并將殘留物以甲醇重結(jié)晶得白色固體(0.37g，60％)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ10.89(s，1H)，7.82(s，1H)，7.37(d，J＝8.7Hz，2H)，6.92(d，J＝8.7Hz，2H)，6.56(s，1H)，5.09(s，2H)，3.92(s，3H)，3.82(s，3H)步驟III5-氯-4-[(4-甲氧基芐基)氧基]-2-[(2S)-環(huán)氧乙烷-2-基甲氧基]苯甲酸甲基酯將5-氯-2-羥基-4-[(4-甲氧基芐基)氧基]苯甲酸甲基酯(0.37g，1.16mmol)，(2S)-環(huán)氧乙烷-2-基甲基3-硝基苯磺酸酯(0.30g，1.16mmol)及碳酸銫(0.45g，1.4mmol)的二甲基甲酰胺溶液(15mL)室溫?cái)嚢柽^夜。將混合物分散于水及乙酸乙酯，有機(jī)層以水洗滌兩次及鹽水洗滌一次，最后濃縮。所得粗品以快速硅膠層析(洗脫劑乙酸乙酯/N-庚烷)純化得到標(biāo)題化合物(0.33，74％)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ7.91(s，1H)，7.37(d，J＝8.7Hz，2H)，6.92(dd，J＝6.7，2.0Hz，2H)，6.66(s，1H)，5.14(m，2H)，4.33(dd，J＝11.4，2.6Hz，1H)，3.98(dd，J＝11.5，5.1Hz，1H)，3.86(s，3H)，3.82(s，3H)，3.36(m，1H)，2.93-2.87(m，2H)APCI-MSm/z 379(MH+)步驟IV5-氯-2-{[(2S)-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-2-羥基丙基]氧基}-4-[(4-甲氧基芐基)氧]苯甲酸甲酯三氟乙酸鹽(鹽)將5-氯-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶](100mg，0.45mmol)及5-氯-4-[(4-甲氧基芐基)氧基]-2-[(2S)-環(huán)氧乙烷-2-基甲氧基]苯甲酸甲酯(170mg，0.45mmol)的乙醇溶液(5mL)回流6小時(shí)。減壓蒸去溶劑。殘留物以HPLC(洗脫劑[乙腈/水+0.1％TFA])純化得到無(wú)色固體(218mg，67％)。
APCI-MSm/z 602(MH+)步驟V5-氯-2-{[(2S)-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-2-羥基丙基]氧基}-4-[(4-甲氧基芐基)氧基]苯甲酸鹽酸鹽向5-氯-2-{[(2S)-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-2-羥基丙基]氧基}-4-[(4-甲氧基芐基)氧基]苯甲酸甲酯三氟乙酸鹽(220mg，0.3mmol)的乙醇混合物(10mL)中加入氫氧化鉀(4g)及水(4mL)的溶液。將混合物室溫?cái)嚢?小時(shí)，以HCl水溶液(37％)將pH調(diào)至1，以乙酸乙酯萃取、硫酸鈉干燥。真空除去揮發(fā)性成分，所得到小標(biāo)題化合物(180mg)，無(wú)需進(jìn)一步純化。
APCI-MSm/z 588(MH+)步驟VI5-氯-2-[2-氯-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-[(4-甲氧基芐基)氧基]苯甲酸在攪拌條件下，向5-氯-2-{[(2S)-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-2-羥基丙基]氧基}-4-[(4-甲氧基芐基)氧基]苯甲酸鹽酸鹽(0.623g，1mmol)的干燥THF懸浮液(50ml)中加入氯化亞砜(0.187g，1.5mmol)。將反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢柽^夜，然后加入水結(jié)束反應(yīng)(100ml)，以乙酸乙酯(3×75ml)萃取。合并的有機(jī)萃取物以Na2SO4干燥、真空除去溶劑。殘留物以HPLC(洗脫劑[乙腈/水+0.1％TFA])純化得到小標(biāo)題化合物，為三氟乙酸鹽(134mg，19％)。
APCI-MSm/z 608(MH+)步驟VII5-氯-2-[2-氯-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′基)丙氧基]-4-羥基苯甲酸向5-氯-2-[2-氯-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-[(4-甲氧基芐基)氧基]苯甲酸三氟乙酸鹽(45mg，0.062mmol)的DCM溶液(2ml)中加入三氟乙酸(95％的水溶液，1ml)，將反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢?小時(shí)。真空除去溶劑，將殘留物以HPLC(洗脫劑[乙腈/水+0.1％TFA])純化得到標(biāo)題化合物，為三氟乙酸鹽(25mg，67％)。
1H-NMR(400MHz，丙酮-d6)δ7.91(s，1H)，7.22(m，1H)，7.13(m，2H)，6.76(d，J＝8.5Hz，1H)，5.08(tt，J＝7.3，4.8Hz，1H)，4.62(dd，J＝9.8，4.8Hz，1H)，4.35(dd，J＝9.7，7.3Hz，1H)，4.09(dd，J＝13.8，7.4Hz，1H)，3.90(dd，J＝13.7，4.6Hz，2H)，3.75(m，1H)，3.61(m，2H)，3.20(s，2H)，2.50(m，2H)，2.23(m，2H)。
APCI-MSm/z 488(MH+)實(shí)施例182-[2-氨基-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-5-氯-4-羥基苯甲酸將5-氯-2-[2-氯-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-[(4-甲氧基芐基)氧基]苯甲酸三氟乙酸鹽(見實(shí)施例1 7，步驟VI)(35mg，0.048mmol)溶于NH3的甲醇溶液(7M，1ml)中，室溫?cái)嚢?天。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物溶于DCM(1ml)，加入TFA(95％的水溶液，0.5ml)。室溫?cái)嚢枞芤?小時(shí)，然后真空除去溶劑。殘留物以HPLC(洗脫劑[乙腈/水+0.1％TFA])純化得到標(biāo)題化合物，為雙三氟乙酸鹽(15mg，44％)。
1H-NMR(400MHz，丙酮-d6)δ7.90(s，1H)，7.16(d，J＝2.0Hz，1H)，7.10(s，1H)，7.08(dd，J＝8.5，2.3Hz，1H)，6.70(d，J＝8.5Hz，1H)，4.53(dd，J＝10.7，3.2Hz，1H)，4.35(dd，J＝10.6，4.6Hz，1H)，3.66-3.48(m，3H)，3.23-3.03(m，4H)，2.94(m，1H)，2.83(m，1H)，2.12-1.94(m，4H，部分被溶劑信號(hào)覆蓋)。
APCI-MSm/z 467(MH+)實(shí)施例195-氯-2-[3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-2-(甲基氨基)丙氧基]-4-羥基苯甲酸將5-氯-2-[2-氯-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-[(4-甲氧基芐基)氧基]苯甲酸三氟乙酸鹽(見實(shí)施例17，步驟VI)(35mg，0.048mmol)溶于甲胺的乙醇溶液(33％wt.，1ml)中，室溫?cái)嚢?天，然后于40℃反應(yīng)24小時(shí)。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物溶于DCM(1ml)，加入TFA(95％的水溶液，0.5ml)。將溶液室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后真空除去溶劑。殘留物以HPLC(洗脫劑[乙腈/水+0.1％TFA])純化得到標(biāo)題化合物，為雙三氟乙酸鹽(24mg，70％)。
1H-NMR(400MHz，丙酮-d6)δ7.92(s，1H)，7.29(s，1H)，7.17(d，J＝2.0Hz，1H)，7.09(dd，J＝8.5，2.3Hz，1H)，6.72(d，J＝8.4Hz，1H)，4.61(d，J＝6.0Hz，2H)，3.98(m，1H)，3.83(dd，J＝13.0，4.1Hz，1H)，3.73(dd，J＝13.1，6.9Hz，1H)，3.40-3.22(m，4H)，3.11(s，2H)，2.93(s，3H)，2.13-2.03(m，4H，部分被溶劑信號(hào)覆蓋)。
APCI-MSm/z 481(MH+)實(shí)施例205-氯-2-[3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-2-(二甲基氨基)丙氧基]-4-羥基苯甲酸將5-氯-2-[2-氯-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-[(4-甲氧基芐基)氧基]苯甲酸三氟乙酸鹽(見實(shí)施例17，步驟VI)(35mg，0.048mmol)溶于二甲胺的乙醇溶液(33％wt.，1ml)中，室溫?cái)嚢?天，然后于40℃反應(yīng)36小時(shí)。真空除去揮發(fā)性成分，將殘留物溶于DCM(1ml)，加入TFA(95％的水溶液，0.5ml)。將溶液室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后真空除去溶劑。殘留物以HPLC(洗脫劑[乙腈/水+0.1％TFA])純化得到標(biāo)題化合物，為雙三氟乙酸鹽(19mg，54％)。
1H-NMR(400MHz，丙酮-d6)δ7.90(s，1H)，7.37(s，1H)，7.16(d，J＝2.0Hz，1H)，7.08(dd，J＝8.5，2.3Hz，1H)，6.69(d，J＝8.4Hz，1H)，4.49(dd，J＝9.9，5.2Hz，2H)，4.43(dd，J＝9.7，7.2Hz，2H)，3.85(m，1H)，3.76(m，2H)，3.16(s，6H)，3.20-2.86(m，6H)，2.01-1.86(m，4H)。
APCI-MSm/z 495(MH+)THP-1趨化性分析介紹該分析測(cè)定人單核細(xì)胞株THP-1中MIP-1α趨化因子引起的趨化性響應(yīng)。利用針對(duì)標(biāo)準(zhǔn)濃度的MIP-1α趨化因子的趨化性響應(yīng)的抑制評(píng)價(jià)實(shí)施例的化合物的活性。
方法THP-1細(xì)胞的培養(yǎng)從冷凍的等分在37℃將細(xì)胞快速解凍并懸浮在25cm瓶中，該瓶中含5ml的RPMI-1640培養(yǎng)基，補(bǔ)充了Glutamax以及10％熱失活的胎牛血清且不帶抗生素(RPMI+10％HIFCS)。在第3天，棄去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基替換。
按照常規(guī)方法，將THP-1細(xì)胞在補(bǔ)充了10％熱失活的胎牛血清以及glutamax但沒有抗生素的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。細(xì)胞的理想生長(zhǎng)需要每3天傳代一次并且最小的次培養(yǎng)密度為4×105細(xì)胞/ml。
趨化性分析將細(xì)胞從瓶中移出并經(jīng)在RPMI+10％HIFCS+glutamax中離心進(jìn)行清洗。然后將細(xì)胞以2×107細(xì)胞/ml懸浮在新鮮培養(yǎng)基(RPMI+10％HIFCS+glutamax)中，向其中加入鈣黃綠素-AM(5μl的儲(chǔ)存溶液至1ml得到終濃度為5×10-6M)。輕輕混合后，將細(xì)胞于37℃在CO2孵箱中培養(yǎng)30分鐘。然后將細(xì)胞用培養(yǎng)基稀釋至50ml，并在400xg離心洗滌兩次。將標(biāo)記的細(xì)胞然后以1×107細(xì)胞/ml的濃度再懸浮，并與等體積的MIP-1α拮抗劑(10-10M～10-6M終濃度)于37℃在濕度CO2孵箱中培養(yǎng)30分鐘。
利用Neuroprobe 96-孔趨化性板，利用8μm濾器(目錄號(hào)101-8)測(cè)定趨化性。將補(bǔ)充了不同濃度拮抗劑或溶媒的30微升趨化物加到板的較低孔中，一式三份。然后小心地將濾器放置在上面，然后將與相應(yīng)濃度的拮抗劑或溶媒預(yù)培養(yǎng)的25μl細(xì)胞加到濾器的表面。然后將板在濕度CO2孵箱中37℃培養(yǎng)2小時(shí)。吸附去除表面上剩余的細(xì)胞，并將整塊板在2000rpm離心10分鐘。然后移除濾器，將已經(jīng)遷移到較低孔中的細(xì)胞利用細(xì)胞結(jié)合的鈣黃綠素-AM的熒光進(jìn)行定量。減去試劑空白后，然后將細(xì)胞的遷移以熒光單位表示，并且通過與已知數(shù)目的標(biāo)記細(xì)胞的熒光值進(jìn)行比較將數(shù)值標(biāo)準(zhǔn)化為％遷移。當(dāng)遷移的細(xì)胞數(shù)目與溶媒的遷移的細(xì)胞的數(shù)目進(jìn)行比較后，將拮抗劑的效果計(jì)算為％抑制。
權(quán)利要求
1.下式化合物 其中m為0、1、2、3或4；各R1獨(dú)立地表示鹵素、氰基、羥基、C1-C6烷基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基磺?；虬被酋；?-SO2NH2)；X表示化學(xué)鍵或-CH2-并且Y表示化學(xué)鍵或-CH2-，條件是X和Y不同時(shí)表示化學(xué)鍵或-CH2-；n為0、1或2；各R2獨(dú)立地表示鹵素、C1-C6烷基或C1-C6鹵代烷基；q為0或1；p為0、1或2；R3選自鹵素、NR6R7、羧基或C1-C6烷基，其中所述的C1-C6烷基任選被一或多個(gè)鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基、N-(C1-C6烷基)氨基、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基、羧基或氨基甲酰基所取代；R4表示氫，C1-C6烷基，C1-C6鹵代烷基或鹵素；t是0，1或2，條件是p及t不都為0；R5表示飽和的或不飽和的5～10員環(huán)，該環(huán)可包括至少一個(gè)選自氮、氧及硫的環(huán)雜原子，該環(huán)任選被一或多個(gè)取代基獨(dú)立地取代，所述的取代基獨(dú)立地選自鹵素、氰基、氧代、硝基、羥基、羧基、-C(O)H、-NR8R9、-C(O)NR10R11、-NHC(O)R12、-NHSO2R13、-SO2NR14R15、-NHC(O)NR16R17，或選自C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6烷基羰基、苯基羰基、C3-C6環(huán)烷基、苯基及至少包括一個(gè)選自氮、氧及硫的雜原子的飽和的或不飽和的5～6員雜環(huán)的基團(tuán)，每個(gè)基團(tuán)任選被一或多個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、氰基、羥基、羧基、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、C1-C6烷氧基及C1-C6烷氧基羰基的取代基取代；R6及R7各自獨(dú)立地表示氫或選自C1-C6烷基及C1-C6烷基羰基的基團(tuán)，各基團(tuán)可任選被一或多個(gè)選自鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基、N-(C1-C6烷基)氨基、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基、羧基、氨基甲?；駽1-C6烷氧基羰基的取代基取代，或R6及R7與其相連的氮原子一起形成4～7員飽和雜環(huán)，該雜環(huán)可任選被一或多個(gè)選自鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基、N-(C1-C6烷基)氨基、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基、羧基、氨基甲?；駽1-C6烷氧基羰基的取代基取代；R8、R9、R10、R11各自獨(dú)立地表示氫或選自C1-C6烷基或C3-C6環(huán)烷基的基團(tuán)，各基團(tuán)任選被一或多個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基、N-(C1-C6烷基)氨基、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基、羧基或氨基甲?；娜〈〈?；或R10及R11與其相連的氮原子一起形成4～7員飽和雜環(huán)，該雜環(huán)可任選被至少一個(gè)選自鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基、N-(C1-C6烷基)氨基、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基、羧基或氨基甲?；娜〈〈?；R12表示氫或選自C1-C6烷基或C3-C6環(huán)烷基的基團(tuán)，各基團(tuán)任選被一或多個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基、N-(C1-C6烷基)氨基、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基、羧基或氨基甲酰基的取代基取代；R13表示選自C1-C6烷基或C3-C6環(huán)烷基的基團(tuán)，各基團(tuán)任選被一或多個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基、N-(C1-C6烷基)氨基、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基、羧基或氨基甲?；娜〈〈籖14、R15、R16及R17各自獨(dú)立地表示氫或選自C1-C6烷基或C3-C6環(huán)烷基的基團(tuán)，各基團(tuán)任選被一或多個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基、N-(C1-C6烷基)氨基、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基、羧基或氨基甲?；娜〈〈?；或R14及R15，或R16及R17，與其各自獨(dú)立相連的氮原子一起形成4～7員飽和雜環(huán)，該雜環(huán)可任選被至少一個(gè)選自鹵素、氨基、羥基、C1-C6烷氧基、N-(C1-C6烷基)氨基、N，N-二-(C1-C6烷基)氨基、羧基或氨基甲?；娜〈〈换蚱淇伤幱名}或溶劑合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中X表示化學(xué)鍵及Y表示-CH2-。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其中q是1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)的化合物，其中m是0或1及R1表示鹵素。
5.根據(jù)權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)的化合物，其中n是0。
6.根據(jù)權(quán)利要求1～5中任一項(xiàng)的化合物，其中R3表示鹵素、-NR6R7或C1-C6烷基，任選被一或兩個(gè)選自鹵素、氨基、羥基的取代基取代。
7.根據(jù)權(quán)利要求1～6中任一項(xiàng)的化合物，其中R4表示氫。
8.根據(jù)權(quán)利要求1～7中任一項(xiàng)的化合物，其中R5表示飽和的或不飽和的5～10員環(huán)系，該環(huán)系可包括一、二、三或四個(gè)獨(dú)立地選自氮、氧及硫的成環(huán)雜原子，并且該環(huán)系任選被一、二或三個(gè)取代基獨(dú)立地選自鹵素、氰基、氧代、硝基、羥基、羧基、-C(O)H、-NR8R9、-C(O)NR10R11、-NHC(O)R12、-NHSO2R13、-SO2NR14R15、-NHC(O)NR16R17的取代基，選自C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6烷基羰基、苯基羰基、C3-C6環(huán)烷基、苯基及包括至少一個(gè)選自氮、氧及硫的成環(huán)雜原子的飽和的或不飽和的5～6員雜環(huán)的基團(tuán)取代，各基團(tuán)任選被一或多個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、氰基、羥基、羧基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基及C1-C6烷氧基羰基的取代基取代。
9.根據(jù)權(quán)利要求1～8中任一項(xiàng)的化合物，其中R5表示苯基，其中所述苯基任選被一或兩個(gè)獨(dú)立地選自-NHC(O)R12、-NHC(O)NR16R17、羥基或C1-C6烷氧基的取代基取代，或其中所述苯基任選被一、二或三個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、羥基、或羧基的取代基取代。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，選自N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺；N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-羥基苯基)乙酰胺雙(三氟乙酸鹽)(鹽)；N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺；N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-羥基苯基)乙酰胺雙(三氟乙酸鹽)(鹽)；N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺；N-(2-{[(2S)-2-氨基-3-(1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-羥基苯基)乙酰胺雙(三氟乙酸鹽)(鹽)；N-(2-{[(2S)-2-(乙酰氨基)-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-4-甲氧基苯基)乙酰胺；N-{2-[3-氨基-2-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-甲氧基苯基}乙酰胺雙(三氟乙酸鹽)；N-{2-[3-氨基-2-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-甲氧基苯基}乙酰胺雙(三氟乙酸鹽)；N-{2-[3-氨基-2-(1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-甲氧基苯基}乙酰胺雙(三氟乙酸鹽)；N-{2-[3-氨基-2-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]苯基}脲雙(三氟乙酸鹽)；N-{2-[3-氨基-2-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]苯基}脲雙(三氟乙酸鹽)；N-{2-[2-氯-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-羥基苯基}乙酰胺三氟乙酸(鹽)；N-{2-[2-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-甲氧基苯基}乙酰胺三氟乙酸；5-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}-2H-1，4-苯并嗪-3(4H)-酮；8-{[(2S)-2-氨基-3-(5-氟-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙基]氧基}喹啉-2(1H)-酮；5-氯-2-[2-氯-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-4-羥基苯甲酸；2-[2-氨基-3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)丙氧基]-5-氯-4-羥基苯甲酸；5-氯-2-[3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-2-(甲基氨基)丙氧基]-4-羥基苯甲酸；5-氯-2-[3-(5-氯-1′H，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-2-(二甲基氨基)丙氧基]-4-羥基苯甲酸及任一化合物的可藥用鹽及溶劑合物。
11.一種制備如權(quán)利要求1定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或溶劑合物的方法，所述的方法包括(a)將式(II)化合物 其中R1、m、X、Y、R2、n、q、p、R4、t及R5如式(I)中定義，轉(zhuǎn)化為式(I)的化合物；或者(b)將式(III)化合物 其中R1、m、X、y、R2、n及q如式(I)中定義，與式(IV)化合物反應(yīng) 其中L是離去基團(tuán)及p、R3、R4、t及R5如式(I)中定義；(c)將式(V)化合物 其中R1、m、X、Y、R2、n、q、p、R3、R4及t如式(I)中定義，與式(VI)化合物反應(yīng)HO-R5(VI)其中L是離去基團(tuán)及R5如式(I)所定義；并且必要時(shí)可任選之后(i)將一種式(I)的化合物轉(zhuǎn)化為另一種式(I)的化合物；(ii)去除保護(hù)基；或(iii)形成可藥用鹽或溶劑合物。
12.一種藥物組合物，包括如權(quán)利要求1～10中任一項(xiàng)定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或溶劑合物以及可藥用佐劑、稀釋劑或載體。
13.一種制備如權(quán)利要求12定義的藥物組合物的方法，該方法包括將權(quán)利要求1～10中任一項(xiàng)定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或溶劑合物以及可藥用佐劑、稀釋劑或載體進(jìn)行混和。
14.用于治療的權(quán)利要求1～10中任一項(xiàng)定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或溶劑合物。
15.權(quán)利要求1～10中任一項(xiàng)定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或溶劑合物在制備用于治療其中調(diào)節(jié)趨化因子受體的活性是有益的人類疾病或病癥的藥物中的用途。
16.權(quán)利要求1～10中任一項(xiàng)定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或溶劑合物在制備用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途。
17.權(quán)利要求1～10中任一項(xiàng)定義的式(1)的化合物或其可藥用鹽或溶劑合物在制備用于治療慢性阻塞性肺病的藥物中的用途。
18.權(quán)利要求1～10中任一項(xiàng)定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或溶劑合物在制備用于治療哮喘的藥物中的用途。
19.權(quán)利要求1～10中任一項(xiàng)定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或溶劑合物在制備用于治療多發(fā)性硬化癥的藥物中的用途。
20.一種治療炎性疾病的方法，所述的方法包括向需要治療的病人給藥治療有效量的權(quán)利要求1～10中任一項(xiàng)定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或溶劑合物。
21.一種治療氣道疾病的的方法，所述的方法包括向需要治療的病人給藥治療有效量的權(quán)利要求1～10中任一項(xiàng)定義的式(I)的化合物或其可藥用鹽或溶劑合物。
全文摘要
本發(fā)明提供了式(I)的化合物，其中m、R
文檔編號(hào)A61P11/08GK1918160SQ200480042013
公開日2007年2月21日 申請(qǐng)日期2004年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月22日
發(fā)明者納菲扎爾·霍塞恩, 斯維特拉納·伊凡諾瓦 申請(qǐng)人:阿斯利康(瑞典)有限公司