專利名稱：一種蕨類植物用于提取三尖杉酯堿或高三尖杉酯堿的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蕨類植物中的華南鱗蓋蕨(Microlepia hanceiprantl)植物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
三尖杉酯堿和高三尖杉酯堿是一種生物堿類周期非特異性抗腫瘤藥，通過(guò)抑制蛋白質(zhì)合成或誘使核糖體解囊，使腫瘤細(xì)胞分裂指數(shù)減少，瘤組織核酸含量降低，廣泛用于急、慢性髓系白血病，并已獲得良好的療效。此外臨床上還有以下用途1、急性白細(xì)胞增多癥；2、嗜酸性淋巴肉芽腫；3、骨髓增生異常綜合；4、過(guò)敏性紫癜；5、原發(fā)性血小板增多癥；6、慢性粒細(xì)胞白血病；7、嗜酸性細(xì)胞增多癥；8、原發(fā)性血小板減少性紫癜；9、多發(fā)性骨髓瘤；10、中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病；11、急性白血病膜浸潤(rùn)等。
難而目前國(guó)內(nèi)現(xiàn)有的三尖杉屬植物因過(guò)度開(kāi)發(fā)利用及生存環(huán)境的惡化造成該植物面臨生存危機(jī)，有的種類甚至在原分布區(qū)絕跡，加上三尖杉屬植物生長(zhǎng)緩慢，繁殖困難，極大的影響了從三尖杉屬分離出抗癌有效酯堿原料三尖杉酯堿和高三尖杉酯堿。而國(guó)外則多利用人工合成生產(chǎn)，但價(jià)格昂貴，致使國(guó)內(nèi)大多數(shù)癌癥患者難以接受。
尚且目前國(guó)內(nèi)、外還至今未發(fā)現(xiàn)有除三尖杉屬9種植物外的其它植物體內(nèi)含有三尖杉酯堿和高三尖杉酯堿等成份。
為此我們進(jìn)行了查新檢索，其相關(guān)文獻(xiàn)有1.三尖杉屬植物資源利用與保護(hù)/王有生、王獻(xiàn)(中國(guó)醫(yī)科院藥植所海南分所中國(guó)科學(xué)院植物研究所)//中藥材1992，15(5)14～162.抗腫瘤藥物——三尖杉酯類堿的開(kāi)發(fā)研究進(jìn)展/白雪芳、杜昱光(中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所)//中國(guó)生化藥物雜志.1998，19(1).-50-523.臺(tái)灣三尖杉?jí)A絕對(duì)構(gòu)型研究/杜江等//天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)1997，9(4)19～244.幾種植物來(lái)源不同作用機(jī)制的抗癌藥抗侵襲作用/劉紅巖等(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)藥物研究所)//藥學(xué)學(xué)報(bào)1998，33(1)18～21其查新結(jié)論為三尖杉屬分為9種，中國(guó)醫(yī)科院藥植所的王有生等綜述了三尖杉屬植物資源利用與保護(hù)的概況，并闡明三尖杉屬植物生長(zhǎng)緩慢，繁殖困難，因過(guò)度開(kāi)發(fā)利用及生存環(huán)境的惡化造成該植物面臨生存危機(jī)(見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)1)；中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所白雪芳等綜述了三尖杉酯類堿的開(kāi)發(fā)研究進(jìn)展(見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)2)；但未見(jiàn)除三尖杉屬9種植物外能提取三尖杉酯堿和高三尖杉酯堿等酯類生物堿的植物，并進(jìn)行該植物的組織培養(yǎng)及藥用成份分析研究的文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是尋找一種能等同、替代三尖杉屬中含有的三尖杉酯堿和高三尖杉酯堿成份的植物。本發(fā)明的技術(shù)方案是蕨類植物中的華南鱗蓋蕨植物用于提取三尖杉酯堿或高三尖杉酯堿的應(yīng)用。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)從華南鱗蓋蕨植物中發(fā)現(xiàn)、提取三尖杉酯堿或高三尖杉酯堿等同、替代珍稀樹(shù)種三尖杉中的三尖杉酯堿或高三尖杉酯堿；華南鱗蓋蕨植物為蕨類植物，生長(zhǎng)迅速，采集量大，這是喬本三尖杉屬樹(shù)種所不能比擬的，由此可大大增加了抗癌藥物所需的三尖杉酯堿和高三尖杉酯堿的原料來(lái)源，從而降低了成本。


圖1質(zhì)譜圖(上半部分是樣品圖，下半部分是標(biāo)準(zhǔn)品圖2三尖杉酯堿標(biāo)準(zhǔn)品紅外光譜3華南鱗蓋蕨提取溶液紅外光譜4三尖杉酯堿標(biāo)準(zhǔn)品紫外光譜5華南鱗蓋蕨提取溶液的紫外光譜6三尖杉酯堿標(biāo)準(zhǔn)品核磁共振光譜7華南鱗蓋蕨提取物溶液的核磁共振光譜圖
具體實(shí)施例方式從蕨類植物中的碗蕨科鱗蓋蕨屬的華南鱗蓋蕨(Microlepia hancei prantl)中用于提取三尖杉酯堿或高三尖杉酯堿的應(yīng)用。
提取方法、步驟取苗圃采集的華南鱗蓋蕨枝葉粗粉四份，每份5g，置索氏提取器中加85％的乙醇80ml，加熱回流至無(wú)色，回流后乙醇液減壓回收乙醇后用5％檸檬酸溶液調(diào)酸度至pH2～3，過(guò)濾后酸水液徐徐加入飽和碳酸鈉溶液調(diào)酸度至pH9以上，用三氯甲烷萃取三次，萃取液用蒸餾水洗后集中在燒杯中，置通風(fēng)櫥中水浴加熱至干，再加5％檸檬酸溶液洗澆杯，把杯中的溶液再過(guò)濾，徐徐加入飽和碳酸鈉溶液使pH依次為6、7、8、9以上，分別用三氯甲烷萃取，將pH7～8的三氯甲烷萃取液合并，濃縮至原體積的1/6，濃縮液用等體積的pH6.7緩沖液萃取2次，三氯甲烷液再用等體積的pH5緩沖液萃取3次，合并萃取液，加飽和碳酸鈉溶液堿化，再用三氯甲烷萃取，三氯甲烷萃取液水浴加熱至干，再用少量的三氯甲烷溶解，三氯甲烷液用100目中性氧化鋁柱進(jìn)行柱層析，用三氯甲烷洗脫，合并洗脫液水浴加熱蒸干，用甲醇溶解得粗樣品液。將粗樣品液與標(biāo)準(zhǔn)品液一起進(jìn)行薄層層析分離，就可得到比較純的樣品溶液。
從以上提取方法、步驟中所得的樣品溶液通過(guò)以下測(cè)試方法證明與標(biāo)準(zhǔn)樣品是等同物質(zhì)1、薄層層析后發(fā)現(xiàn)薄層板上在標(biāo)準(zhǔn)品顯色點(diǎn)的同一高度，樣品液也存在顯色點(diǎn)，這說(shuō)明樣品液中存在與標(biāo)準(zhǔn)品相同Rf值的物質(zhì)。
2、將該植物不同部位的粉未和高三尖杉酯堿標(biāo)準(zhǔn)品送至福建省醫(yī)學(xué)測(cè)試重點(diǎn)公共試驗(yàn)室進(jìn)行高效液相色譜測(cè)試，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該植物含有與標(biāo)準(zhǔn)品相同的液相色譜圖譜，由此證明該植物含有高三尖杉酯堿。
3、將標(biāo)準(zhǔn)品溶液和提純的樣品溶液送至中科院福建省物質(zhì)結(jié)構(gòu)研究所進(jìn)行質(zhì)譜、紅外光譜、紫外光譜、核磁共振光譜四大光譜測(cè)試，結(jié)果如下3.1質(zhì)譜測(cè)試將三尖杉酯堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液和華南鱗蓋蕨提純的樣品溶液用Finnigan LCQ離子肼質(zhì)譜儀進(jìn)行測(cè)試，所得結(jié)果見(jiàn)圖1。從圖1中可以看出，標(biāo)準(zhǔn)品三尖杉酯堿(C28H37NO9)的分子離子峰m/e532.4與華南鱗蓋蕨提取的樣品溶液的分子離子峰m/e532.3一致，而且標(biāo)準(zhǔn)品溶液的主要碎片峰m/e298.5與樣品溶液的碎片峰m/e298.3也幾乎一致。所以從質(zhì)譜圖上看樣品、標(biāo)準(zhǔn)品基本上是同一物質(zhì)。其光譜組測(cè)試報(bào)告的結(jié)論是所送兩個(gè)樣品基本上是同一類物質(zhì)。
3.2紅外光譜測(cè)試將三尖杉酯堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液和華南鱗蓋蕨提純的樣品溶液用Nicolot Magna750付立葉變換紅外光譜儀進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果見(jiàn)圖2、3。從圖2、3中可以看出，三尖杉酯堿標(biāo)準(zhǔn)品紅外光譜vKBrmax3374.86cm-1，2946.73cm-1，2834.88cm-1，2522.47cm-1，2219.69cm-1，2044.20cm-1，1654.65cm-1，1450.23cm-1，1413.58cm-1，1114.87cm-1，1031.74cm-1，857.62cm-1與華南鱗蓋蕨提純的樣品溶液的紅外光譜vKBrmax3376.79cm-1，2946.73cm-1，2832.95cm-1，2522.47cm-1，2217.76cm-1，2042.27cm-1，1654.65cm-1，1450.23cm-1，1419.37cm-1，1114.87cm-1，1031.74cm-1，857.62cm-1幾乎完全一致，因此報(bào)告單報(bào)告的結(jié)論也是所送兩個(gè)樣品基本上是同一類物質(zhì)。
3.3紫外光譜測(cè)試將三尖杉酯堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液和華南鱗蓋蕨提純的樣品溶液用Lsmbda 35Simulation紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果見(jiàn)圖4、5，從圖4、5中可以看出，三尖杉酯堿紫外光譜圖與華南鱗蓋蕨提取溶液的紫外光譜圖基本上一致，因此報(bào)告單報(bào)告的結(jié)論也是所送兩個(gè)樣品基本上是同一類物質(zhì)。
3.4核磁共振光譜測(cè)試將三尖杉酯堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液和華南鱗蓋蕨提純的樣品溶液用UNITY 500核磁共振儀進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果見(jiàn)圖6、7，從圖6、7中可以看出，三尖杉酯堿標(biāo)準(zhǔn)品核磁共振光譜圖和華南鱗蓋蕨提取物溶液的核磁共振光譜圖在6.76ppm，5.98ppm，3.82ppm，1.41ppm，1.02ppm五個(gè)位置出現(xiàn)大致一樣的譜線。因此兩種物質(zhì)基本上是同一物質(zhì)。
以上各種測(cè)試結(jié)果均可說(shuō)明從華南鱗蓋蕨植物中發(fā)現(xiàn)、提取三尖杉酯堿或高三尖杉酯堿可替代、等同珍稀樹(shù)種三尖杉中的三尖杉酯堿或高三尖杉酯堿。
權(quán)利要求
1.一種蕨類植物用于提取三尖杉酯堿或高三尖杉酯堿的應(yīng)用，其特征在于蕨類植物中的華南鱗蓋蕨植物用于提取三尖杉酯堿或高三尖杉酯堿的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及蕨類植物用于提取三尖杉酯堿或高三尖杉酯堿的應(yīng)用，即蕨類植物中的華南鱗蓋蕨植物用于提取三尖杉酯堿或高三尖杉酯堿的應(yīng)用。從華南鱗蓋蕨植物中發(fā)現(xiàn)、提取三尖杉酯堿或高三尖杉酯堿等同、替代珍稀樹(shù)種三尖杉中的三尖杉酯堿或高三尖杉酯堿；華南鱗蓋蕨植物為蕨類植物，生長(zhǎng)迅速，采集量大，這是喬本三尖杉屬樹(shù)種所不能比擬的，由此可大大增加了抗癌藥物所需的三尖杉酯堿和高三尖杉酯堿的原料來(lái)源，從而降低了成本。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1807429SQ200510007120
公開(kāi)日2006年7月26日 申請(qǐng)日期2005年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2005年1月21日
發(fā)明者劉潤(rùn)東, 魯雪華 申請(qǐng)人:劉潤(rùn)東, 魯雪華