專利名稱：大發(fā)表提取物在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種天然植物提取物在制藥領(lǐng)域中的新用途。
背景技術(shù)：
大發(fā)表為豆科植物三棱枝杭子梢，拉丁名Campylo-tropis trigonoclada[Franch]A.K.schindl.，俗名亦稱為“松漏爭”。大發(fā)表在自然界中至少分布在中國云南省、貴州省、四川省，為多年生小灌木。為保護資源，一般以地上部份入藥。在中國專利申請?zhí)枮?6121261.6，名稱為“治療前列腺疾病的康舒藥物”的專利申請公開了一種治療前列腺疾病的藥物，它是以大發(fā)表(學(xué)名為豆科植物三棱枝菥子梢)為主要原料，按照下述方法制成的單方或復(fù)方制劑；將藥材大發(fā)表粉碎，加入含醇量為0-80％的乙醇溶液，用加熱回流的方法提取，提取溫度為40℃以上，提取時間為1-3小時，提取液經(jīng)過濾，減壓濃縮至相對密度1.02-1.1(45-50℃)的浸膏，噴霧干燥，制得浸膏粉，還可添加輔料制成膠囊、顆?；蚱瑒?，用于治療前列腺增生和前列腺炎癥。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供植物大發(fā)表的提取物在制藥中的新的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及大發(fā)表提取物作為制備改善排尿功能的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及大發(fā)表提取物作為制備治療排尿不暢的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及大發(fā)表提取物作為制備治療輕度尿梗阻的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及大發(fā)表提取物作為制備治療尿潴留的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及大發(fā)表提取物作為制備由于損傷、致炎中樞神經(jīng)或周圍神經(jīng)造成的排尿困難的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及大發(fā)表提取物作為制備麻醉、手術(shù)后所造成的排尿困難的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及大發(fā)表提取物作為制備產(chǎn)后排尿功能障礙的藥物中的應(yīng)用。
上述的由于損傷、致炎中樞神經(jīng)或周圍神經(jīng)造成排尿困難主要是指因前列腺增生、前列腺炎、尿路結(jié)石、膀胱內(nèi)血塊、尿道狹窄所造成的排尿困難。
本發(fā)明所述的大發(fā)表提取物是大發(fā)表的水提物或者醇提物，可以通過現(xiàn)有技術(shù)獲得。
本發(fā)明所述的大發(fā)表提取物，每日服用量相當于原生藥材10-500g均可，優(yōu)選30至100g。由于其安全性良好，還可以再增加劑量，當然也可以長期服用。服用方式包括口服、血管內(nèi)注射、血管外注射、透皮吸收、霧化吸入和直腸吸收，如果是長期用藥，以口服為佳。本發(fā)明所述的大發(fā)表提取物可以制備成分散片、片劑、膠囊劑、口服液等多種口服劑型，也可以制備成注射液、靜脈注射液、氣霧劑、貼膏劑等劑型。
本發(fā)明對己知植物大發(fā)表提取物發(fā)掘了新的醫(yī)療用途，開拓了一個新的應(yīng)用領(lǐng)域。本發(fā)明的大發(fā)表提取物可單獨作為藥用有效成分，也可與其它無排斥作用的組分配伍，制成相應(yīng)劑型的藥劑。
為了更好地理解本發(fā)明的實質(zhì)，下面將用大發(fā)表提取物的藥理試驗及結(jié)果來說明其在制藥領(lǐng)域中的新用途。
一、實驗藥物的制備藥材大發(fā)表粉碎后，用0-80％的乙醇溶液提取(當乙醇含量為零時，即為用水提取)，采用熱回流1-3小時或冷浸24-48小時的方法，提取2-3次，提取液減壓濃縮至相對密度為1.02-1.10(45-50℃)浸膏，噴霧干燥或上大孔吸附樹脂，經(jīng)洗脫雜質(zhì)后再用乙醇洗脫，然后濃縮干燥，制得實驗藥物。以下實驗均采用經(jīng)大孔吸附樹脂富集有效成份后干燥得到的樣品。
二、藥理實驗(一)大發(fā)表提取物對離體膀胱肌和尿道平滑肌的作用研究1、大發(fā)表提取物對離體大鼠膀胱平滑肌的收縮作用選取320-400g的成年雄性大鼠，脫頸椎處死后立即分離出膀胱制成10×2mm的條片，懸置于盛有25ml Kerb’s營養(yǎng)液的麥氏浴皿中，恒溫36±1℃，負荷500mg；穩(wěn)定30min，給藥換液后休息十分鐘；以0.1ml 0.0625％的Ach(終濃度相當于2.5μg/ml)收縮幅度為100％，分別給予大發(fā)表提取物200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、舍尼通400μg/ml及其它試藥高特靈5-25μg/ml、竹林胺10μg/ml、津源靈10μg/ml。結(jié)果見表11大發(fā)表提取物對大鼠膀胱肌條的收縮作用

其它試藥高特靈5-25μg/ml、竹林胺10μg/ml、津源靈10μg/ml(均為α-受體拮抗劑)未見明顯收縮膀胱肌的作用。
2、大發(fā)表提取物對離體兔尿道平滑肌的舒張作用選用雄性日本大耳兔，棒擊后腦處死后立即分離出尿道制成條片(10×2mm)，懸置于麥氏浴皿中，加入25ml Kerb’s營養(yǎng)液，恒溫36±1℃，負荷500mg。穩(wěn)定30min，加入NA 0.1ml(相當于10μg/ml)，至曲線平穩(wěn)后，分別加入大發(fā)表提取物100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、舒列安(KS)200μg/ml、舍尼通100μg/ml及其它試藥竹林胺10μg/ml。記錄35分鐘，觀察藥物對抗NA所致尿道收縮作用。以NA所致收縮作用為100％，計算各藥舒張率。結(jié)果見表2表2大發(fā)表提取物對家兔離體尿道平滑肌的松馳作用

結(jié)果
(1)大發(fā)表提取物具有明顯的收縮膀胱和松馳尿道的作用。作用強度優(yōu)于植物花粉提取物舍尼通。
(2)α-受體拮抗劑竹林胺改善排尿功能主要通過松馳尿道平滑肌，對膀胱肌無收縮作用。
(二).大發(fā)表提取物對大鼠膀胱內(nèi)壓的影響3、大發(fā)表提取物對大鼠膀胱內(nèi)壓的影響一般對于膀胱排尿功能的研究往往采用測定動物膀胱內(nèi)壓和殘尿量。該方法能夠比較準確地反映體內(nèi)膀胱肌收縮力和尿道括約肌張力。
SD雄性大鼠，20-23周齡[1]，提前一天灌胃給藥，分別給予清潔水、大發(fā)表提取物0.5g/kg、0.25g/kg、0.125g/kg以及舍尼通70mg/kg，一日三次，第二天給藥一次。竹林胺5mg/kg，一日一次，給藥兩天。末次給藥后一小時腹腔注射烏拉坦(1.0g/kg)麻醉。
參考Keisvke Yokoi[2][3]和鈴木孝憲等[4]的方法，在恥骨弓上部縱向切開，暴露膀胱。在膀胱底用線松松打一活結(jié)。膀胱頂部剪一小洞，插入一根直徑為1.2mm的導(dǎo)管，導(dǎo)管通過血壓傳感器與生理記錄儀相連；導(dǎo)管內(nèi)扎入7號針頭與蠕動泵相連，灌注速度為0.2ml/min。描記泵啟動后的圖形，至出現(xiàn)排尿反射，停止泵液。記錄排尿時間、排尿閾值(開始排尿壓力)、最大排尿壓(排尿反射引起的一過性最大壓力)、停尿壓(排尿結(jié)束后壓力)。排尿結(jié)束曲線走平后重復(fù)一次，記錄排尿閾值、最大排尿壓。計算激發(fā)壓、最大膀胱容量。排尿結(jié)束后結(jié)扎膀胱底的線，剪下膀胱，重差法計算殘尿量。
激發(fā)壓＝最大排尿壓-排尿閾值最大膀胱容量＝排尿時間×灌注速度實驗結(jié)果見表3和表4表3大發(fā)表提取物對大鼠膀胱內(nèi)壓的影響(n＝8)單位mmHg

x±SD，t-test *P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表4大發(fā)表提取物對大鼠最大膀胱容量和殘尿量的影響(n＝8)單位克

x±SD，t-test *P＜0.05結(jié)果(1)大發(fā)表提取物各劑量組均可降低排尿閾值和最大排尿壓，但可升高激發(fā)壓，中、高劑量與正常組相比均有顯著性差異(P＜0.05)，表明大發(fā)表提取物可減小排尿阻力，增加膀胱平滑肌的收縮力，增強排尿反射正反饋的形成，從而有利于尿排空。
(2)各受試藥物均顯著減少最大膀胱容量(P＜0.05)，大發(fā)表提取物中、高劑量最為明顯。大發(fā)表提取物還能減少殘尿量；大發(fā)表提取物中、高劑量與正常組相比有顯著性差異(P＜0.05)。大發(fā)表提取物既可松弛膀胱頸平滑肌，又能增加膀胱逼尿肌的收縮(見離體實驗部份)，因而可同時減小最大膀胱容量和殘尿量。舍尼通作用較弱，而竹林胺主要是松弛膀胱頸平滑肌，它們對殘尿量減少均不明顯。
(3)植物花粉制劑舍尼通也可降低排尿閾值(P＞0.05)和最大排尿壓(P＜0.05)，但抑制激發(fā)壓(P＜0.05)，說明舍尼通主要降低排尿阻力，對排尿反射正反饋的形成有抑制作用。
(4)α-受體拮抗劑竹林胺顯著降低排尿閾值和最大排尿壓(P＜0.05)，也抑制激發(fā)壓(P＞0.05)。α-受體拮抗劑的作用機制主要是通過松弛膀胱頸平滑肌。
(三)大發(fā)表提取物對尿梗阻的影響3、尿梗阻模型參考文獻(Shinsuke Takechi.Nonbacterial prostatit is caused bypartial urethral obstruction in the rat.Urol Res(1999)27346-350)，2Kg±0.5Kg重量的單一性別的兔子，戊巴比妥鈉(1mg/Kg)麻醉后將兔仰臥位固定于實驗臺上，在膀胱頸處套上可調(diào)式塑料套環(huán)，塑料套環(huán)內(nèi)徑為5mm。然后縫合腹腔，讓其自然恢復(fù)。恢復(fù)期間分別給予清潔水、大發(fā)表0.5g/kg、0.25g/kg、0.125g/kg以及舍尼通70mg/kg，一日三次。竹林胺5mg/kg，一日一次。連續(xù)給藥三天。三天后造成尿梗阻模型。末次給藥后一小時腹腔注射烏拉坦(1.0g/kg)麻醉。
參考檢測膀胱內(nèi)壓的方法，在恥骨弓上部縱向切開，暴露膀胱。在膀胱底用線松松打一活結(jié)。膀胱頂部剪一小洞，插入一根導(dǎo)管(直徑2.0mm)，導(dǎo)管通過血壓傳感器與生理記錄儀相連；導(dǎo)管內(nèi)扎入8號針頭與蠕動泵相連(灌注速度為2ml/min)。描記泵啟動后的圖形，至出現(xiàn)排尿反射，停止泵液。記錄排尿時間、排尿閾值(開始排尿壓力)、最大排尿壓(排尿反射引起的一過性最大壓力)、停尿壓(排尿結(jié)束后壓力)。排尿結(jié)束曲線走平后重復(fù)一次，記錄排尿閾值、最大排尿壓。計算激發(fā)壓、最大膀胱容量。排尿結(jié)束后結(jié)扎膀胱底的線，剪下膀胱，重差法計算殘尿量。
激發(fā)壓＝最大排尿壓-排尿閾值最大膀胱容量＝排尿時間×灌注速度實驗結(jié)果見表5和表6表5大發(fā)表提取物對兔膀胱頸梗阻膀胱內(nèi)壓的影響(n＝8)單位mmHg

x±SD，t-test與模型對照組比*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表6大發(fā)表提取物對兔膀胱頸梗阻膀胱容量和殘尿量的影響(n＝8)單位克

x±SD，t-test與模型對照組比*P＜0.05大發(fā)表提取物能夠有效增加膀胱收縮力，促進尿排空。通過增加最大排尿壓，增強排尿反射(表現(xiàn)在激發(fā)壓增加)，從而降低殘尿量。
(四)大發(fā)表提取物對尿潴留的影響
5、尿潴留模型選擇2.5-3.0Kg健康雌性家兔36只，隨機分為三組，每組12只，分別為造模組、大發(fā)表提取物治療組(提前三天給藥，每日一次，每次0)、手術(shù)對照組。
造模方法從耳緣靜脈注射3％戊巴比妥鈉(1mg/Kg)，麻醉后將兔仰臥位固定于實驗臺上。無菌條件下剖腹，暴露膀胱及子宮，分離子宮，并在子宮頸處結(jié)扎，切除子宮和宮旁進入膀胱的部份神經(jīng)組織，造成子宮切除術(shù)后尿潴留模型，在尿道近恥骨聯(lián)合處剪開約2mm的小口，將導(dǎo)尿管插入膀胱，排空膀胱內(nèi)尿液后以1ml/s的速度，每隔2min向膀胱內(nèi)注37℃恒溫生理鹽水4ml，觀察并記錄排尿閾值、殘尿量。解剖鏡下分離盆神經(jīng)節(jié)至膀胱的節(jié)后分支，用玻璃分針輕輕分離此神經(jīng)長約1cm，記錄時將神經(jīng)輕輕挑起，置于直徑為30mm的鉑金絲電極上作單極引導(dǎo)，再用銀針插入附近腹部肌肉作參考電極，記錄盆神經(jīng)放電頻率。
表7三組家兔平均注水次數(shù)與膀胱內(nèi)壓力變化結(jié)果(KPa)

與造模組比較*P＜0.05，▲＜0.01表8排尿閾值和殘余尿量比較(x±SD，ml)

與造模組比較*P＜0.05，▲＜0.01表9三組家兔盆神經(jīng)平均放電頻率比較(次/min)

與造模組比較*P＜0.05，▲＜0.01結(jié)果造模后動物進入膀胱的部分神經(jīng)被切斷，表現(xiàn)為排尿閾值上升，膀胱潴溜尿量增加，殘尿量增加，盆神經(jīng)放電頻率下降，用大發(fā)表提取物治療后，排尿閾值明顯下降，殘尿量降低，增加盆神經(jīng)放電頻率，潴溜尿量有一定下降。
(五)大發(fā)表提取物的安全性實驗6、大發(fā)表提取物安全性實驗安全性實驗和臨床用藥制備方法均根據(jù)實施例二。
(1)大發(fā)表對大、小鼠的急性半數(shù)致死量(口服LD50)經(jīng)口(po)給予大發(fā)表的急性半數(shù)致死量(LD50)及95％可信限值分別為(a)大鼠12.0543(10.0528-14.4542)g/kg(b)小鼠6.8591(5.8314-8.0679)g/kg(2)大發(fā)表提取物對大、小鼠的急性半數(shù)致死量(腹腔注射LD50)腹腔注射(ip)給予大發(fā)表的急性半數(shù)致死量(LD50)及95％可信限值分別為(a)大鼠0.397(0.3052-0.5165)g/kg(b)小鼠0.6495(0.4627-0.9118)g/kg(3)大發(fā)表對大鼠長期毒性試驗SD大鼠連續(xù)六個月分別經(jīng)口給予大發(fā)表2.50(高劑量)、1.25(中劑量)和0.63(低劑量)g/(kg·d)劑量，三個劑量組對各階段的血液學(xué)、血液生化學(xué)指標均無明顯影響。對各階段的臟器重量及系數(shù)也無明顯影響，大體觀察和病理組織學(xué)檢查也均未見任何因受試物引起的病理形態(tài)學(xué)和組織學(xué)改變，與對照組相同。在本試驗劑量條件下，SD大鼠連續(xù)六個月經(jīng)口給予相當人臨床擬用劑量192、96、48倍的大發(fā)表，僅高、中劑量組大鼠在給藥期間出現(xiàn)可逆性不規(guī)則流涎現(xiàn)象，未明顯出現(xiàn)毒副反應(yīng)和未明顯顯示中毒靶器官。無毒(影響)劑量不低于2.50g/(kg·d)。
(六)大發(fā)表提取物的臨床應(yīng)用7、臨床應(yīng)用我們選取發(fā)病率較高的前列腺增生、產(chǎn)后尿潴留孕婦、腹腔手術(shù)后尿潴留患者各30例進行臨床驗證。每日服用量相當于50g生藥材。
(一)前列腺增生致排尿困難癥狀分級量化(1)夜尿次數(shù)正常 0-1次0分輕度 2次 1分中度 3-4次2分重度 5次以上 3分(2)排尿困難正常 無排尿困難 0分輕度 偶有 1分中度 時有 2分重度 經(jīng)常有 3分(3)尿線情況正常 0分輕度 細而成線 1分中度 斷續(xù)成線 2分重度 涓滴不成線 3分(4)尿道灼痛正常 無 0分輕度 偶有 1分中度 時有 2分重度 經(jīng)常有 3分(5)少腹癥狀正常 無 0分輕度 滿悶感 1分中度 脹滿 2分重度 脹痛 3分國際前列腺癥狀評分(I-PSS)

(二)前列腺增生致排尿困難療效評定標準(參照“中藥新藥的臨床研究指導(dǎo)原則”制定)1、顯效(1)I-PSS評分≤7，L指數(shù)≤1，或病情總分降低90％以上。
(2)前列腺體積縮小為原來的60％以下。殘余尿量減少70％以上(3)最大尿流率≥18ml/s。
以上具備2項即可1、有效(1)I-PSS評分≤13，治療前L指數(shù)為4-6者降低至2-3，或病情總分降低60％以上。
(2)前列腺體積縮小為原來的80％以下，殘余尿量減少50％以上。
(3)最大尿流率≥12ml/s。
以上具備1項即可2、無效未達到有效標準30例前列腺增生患者臨床結(jié)果

結(jié)果提示對前列腺增生患者有效率達到77％。提示大發(fā)表提取物對前列腺增生患者有較好治療作用。
(三)尿潴留排尿困難癥狀分級量化(1)排尿困難正常無排尿困難 0分輕度偶有 1分中度時有 2分重度經(jīng)常有 3分(2)尿線情況正常 0分輕度細而成線 1分中度斷續(xù)成線 2分重度涓滴不成線 3分(3)少腹癥狀正常無 0分輕度滿悶感 1分中度脹滿 2分重度脹痛 3分膀胱功能分級評分


泌尿癥狀困擾評分(BS)

(四)尿潴留療效評定標準(參照“中藥新藥的臨床研究指導(dǎo)原則”制定)1、痊愈(1)I-PSS評分≤3，L指數(shù)≤1，或病情總分降低90％以上。
(2)殘余尿量減少90％以上(3)最大尿流率≥24ml/s。
以上具備2項即可2、顯效(1)I-PSS評分≤7，L指數(shù)≤1，或病情總分降低80％以上。
(2)殘余尿量減少70％以上(3)最大尿流率≥18ml/s。
以上具備2項即可3、有效(1)I-PSS評分≤13，治療前L指數(shù)為4-6者降低至2-3，或病情總分降低60％以上。
(2)前列腺體積縮小為原來的80％以下，殘余尿量減少50％以上。
(3)最大尿流率≥12ml/s。
以上具備1項即可4、無效
未達到有效標準產(chǎn)后尿潴留孕婦、腹腔手術(shù)后尿潴留患者各30例臨床驗證結(jié)果

結(jié)果表明對產(chǎn)后尿潴留的有效率達到96％，對腹腔手術(shù)后尿潴留有效率達到87％。提示大發(fā)表提取物對以上兩種疾病有較好治療作用。
經(jīng)過對比實驗，大發(fā)表提取物比花粉制劑(如舍尼通)、化學(xué)藥α-受體拮抗劑如高特靈、竹林胺、津源靈等具有更好的改善排尿功能的作用。
具體實施例方式
實施例1藥材大發(fā)表粉碎后，用20-95.7％的乙醇溶液提取，優(yōu)化的為40％-70％采用冷浸72小時的方法，提取3次，提取液減壓濃縮至相對密度為1.02-1.10(45-50℃)浸膏，得粗提物，收率7.8％。可將大發(fā)表提取物加入淀粉及相應(yīng)的輔料，混勻后制粒，壓制成片劑。該方法的收率為5-8％，按日服用量折算為生藥材50g的話，每日需服用2.5-4g。服用量較大。用于改善排尿功能、治療排尿不暢。
實施例2也可以在實施例1述大發(fā)表提取物的基礎(chǔ)上進一步精制，采用JKSD型大孔吸附樹脂，與等重量大發(fā)表浸膏拌勻，上柱，先用3-5倍柱體積純凈水沖洗至無色，再用1-3倍柱體積5％乙醇稀溶液洗至無色。以上洗出液棄去不用，再用50％-99％乙醇洗脫，收集洗脫液。濃縮，干燥，研磨成粉狀?？蓪⒋蟀l(fā)表加入淀粉及相應(yīng)的輔料，混勻后裝入膠囊中制成膠囊劑。該方法的收率為0.8-1.2％，按日服用量折算為生藥材50g的話，每日需服用0.4-0.6g。用于治療輕度尿梗、尿潴留。
權(quán)利要求
1.大發(fā)表提取物作為制備改善排尿功能的藥物中的應(yīng)用。
2.大發(fā)表提取物作為制備治療排尿不暢的藥物中的應(yīng)用。
3.大發(fā)表提取物作為制備治療輕度尿梗阻的藥物中的應(yīng)用。
4.大發(fā)表提取物作為制備治療尿潴留的藥物中的應(yīng)用。
5.大發(fā)表提取物作為制備由于損傷、致炎中樞神經(jīng)或周圍神經(jīng)造成的排尿困難的藥物中的應(yīng)用。
6.大發(fā)表提取物作為制備麻醉、手術(shù)后所造成的排尿困難的藥物中的應(yīng)用。
7.大發(fā)表提取物作為制備產(chǎn)后排尿功能障礙的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種天然植物提取物在制藥領(lǐng)域中的新用途。本發(fā)明涉及大發(fā)表提取物作為制備改善排尿功能的藥物中的應(yīng)用、作為制備治療排尿不暢的藥物中的應(yīng)用、作為制備治療輕度尿梗阻的藥物中的應(yīng)用、作為制備治療尿潴留的藥物中的應(yīng)用、作為制備由于損傷、致炎中樞神經(jīng)或周圍神經(jīng)造成的排尿困難的藥物中的應(yīng)用、作為制備麻醉、手術(shù)后所造成的排尿困難的藥物中的應(yīng)用、作為制備產(chǎn)后排尿功能障礙的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明對已知植物大發(fā)表提取物發(fā)掘了新的醫(yī)療用途，開拓了一個新的應(yīng)用領(lǐng)域。本發(fā)明的大發(fā)表提取物配制成的藥物為多種劑型，即可單獨藥用，也可與其它無排斥作用的組分配伍。
文檔編號A61P25/00GK1853667SQ200510010760
公開日2006年11月1日 申請日期2005年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月21日
發(fā)明者唐書明, 馮有, 龍飛, 楊曉源, 楊存金 申請人:云南白藥集團股份有限公司