專利名稱：基于醛基的微粒表面多重生物功能因子組裝方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種基于醛基的微粒表面的多重生物功能因子組裝方法，屬于多重生物功能因子組裝技術(shù)。
背景技術(shù)：
納米粒子或微球由于其較小的粒徑，較長(zhǎng)的體內(nèi)循環(huán)時(shí)間，且對(duì)藥物起到保護(hù)和控釋、緩釋的作用，是藥物的理想載體。然而，理想的疾病治療，如癌癥治療，要求藥物只作用于病變組織或細(xì)胞，而對(duì)正常組織沒有影響，即藥物的靶向釋放；而有些療法則要求載體既具有較強(qiáng)的負(fù)載能力，又具有良好的靶向性，如表皮生長(zhǎng)因子、內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、神經(jīng)生長(zhǎng)因子的運(yùn)輸。上述各種功能因子需要與載體相結(jié)合，而聚乳酸等生物可降解材料為基質(zhì)的粒子或微球雖然具有良好的生物相容性，但其結(jié)構(gòu)上卻缺乏可反應(yīng)性基團(tuán)，從而限制了功能因子與載體結(jié)合。葡聚糖、普魯蘭、淀粉、透明質(zhì)酸、血清蛋白、膠原、明膠等天然大分子物質(zhì)及其改性物的結(jié)構(gòu)中富含可反應(yīng)性基團(tuán)，且具有良好的生物相容性、可降解性，表面以多糖修飾的納米粒子與微球具有與聚乙二醇相似的延長(zhǎng)體內(nèi)循環(huán)周期的作用。
藥物載體與靶向功能因子結(jié)合方式的設(shè)計(jì)對(duì)靶向制劑的成功實(shí)施是十分關(guān)鍵的。近年來大部分的研究只局限于納米粒子及微球表面的單功能化，即只在納米粒子或微球表面連接一種功能因子。常用的連接方式包括硫醚鍵、二硫鍵、酯鍵、酰胺鍵、酰腙鍵、西夫堿等共價(jià)偶連和生物素-親和素物理作用實(shí)現(xiàn)連接。上述方法實(shí)現(xiàn)的單功能化粒子在一些情況下并不能很好的解決問題，如用于癌癥治療的納米粒子在體內(nèi)的靶向效果受到各種生物屏障(如血腦屏障，BBB)的影響，阻礙了它們順利到達(dá)靶向部位，即使它們的表面連有靶向物質(zhì)，一種有效的解決方法就是在粒子表面引入多種功能化因子，其中某種因子引導(dǎo)粒子通過諸如BBB等生物屏障，而其它因子則引導(dǎo)粒子順利到達(dá)靶向部位；又如上述提及的表皮生長(zhǎng)因子、內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、神經(jīng)生長(zhǎng)因子的運(yùn)輸，在負(fù)載的同時(shí)還要求靶向性，也可通過多重生物因子在載體表面的功能化來解決。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種基于醛基的微粒表面多重生物功能因子組裝方法。該方法以微粒表面的醛基為生物性分子的結(jié)合位點(diǎn)，通過簡(jiǎn)便的席夫堿反應(yīng)將多種生物活性分子偶聯(lián)于微粒表面，并引導(dǎo)載藥微粒的靶向藥物釋放。
本發(fā)明是通過以下的技術(shù)方案加以實(shí)現(xiàn)的，一種基于醛基的微粒表面多重生物功能因子組裝方法，其特征在于包括以下步驟1.雙親性多糖衍生物的制備1)醛化多糖的制備4℃避光條件下，在水體系中按高碘酸鈉(NaIO4)與糖單元的摩爾比為1∶2～50投料反應(yīng)0.5～8h，將反應(yīng)液用截留分子量10,00～40,000半透膜對(duì)去離子透析10～144h，冷凍干燥得固態(tài)產(chǎn)物；所述的多糖選自相對(duì)分子質(zhì)量10,000～1000,000的葡聚糖或淀粉或普魯蘭。
2)雙親性改性醛化多糖的制備a.膽固醇改性醛化多糖的制備將膽固醇與丁二酸酐按摩爾比1∶1～5投料，70℃在吡啶催化下反應(yīng)3～8h生成膽固醇-3-半琥珀酸(Chol-Succ)，乙醇重結(jié)晶1～3次，真空干燥；將膽固醇-3-半琥珀酸與二氯亞砜按摩爾比1∶2～10溶于10～50mL干燥三氯甲烷中，70℃反應(yīng)1～10h，生成膽固醇-3-半琥珀酸酰氯(Chol-Succ-COCl)，真空蒸出液體，將殘余固體復(fù)溶于20mL干燥三氯甲烷中待用；將上述凍干得到的醛化多糖溶于40mL干燥DMSO中，滴加數(shù)滴三乙胺，按酰氯(-COCl)與糖單元的摩爾比為1∶2～50量取Chol-Succ-COCl滴加入醛化多糖溶液中，氮?dú)獗Ｗo(hù)，80℃反應(yīng)3～8h，產(chǎn)物對(duì)去離子水透析10～144h，透析液冷凍干燥，得膽固醇改性醛化多糖。
b.膽酸改性醛化多糖的制備將1g膽酸溶于20～60mL乙醇中，40～78℃在1～5mL濃鹽酸催化下形成膽酸乙酯，將膽酸乙酯的乙醇溶液在40～78℃下向溶有0.5～10mL水合肼的乙醇溶液中緩慢滴加，反應(yīng)3～8h，冷卻析出物用乙醇重結(jié)晶，得膽酸酰肼(CAH)；將100mg醛化多糖溶于8mL水中，CAH溶于16mL DMF中，兩溶液混合得到一均相體系，體系中CAH與糖單元的摩爾比為1∶2～50；體系的pH值調(diào)節(jié)到4，室溫反應(yīng)1～24h，反應(yīng)溶液倒入大量的甲醇中沉淀出產(chǎn)物，過濾，用甲醇充分洗滌多次，室溫下真空干燥，得膽酸改性醛化多糖。
c.苯氧基改性醛化多糖的制備將苯基甘油醚(1，2-epoxy-3-phenoxypropane)醛化多糖糖單元的摩爾比為1∶2～50投料，在1M氫氧化鈉(NaOH)溶液中室溫反應(yīng)10-48h，將產(chǎn)物在乙醇中沉降，再對(duì)去離子水透析，10～144h，冷凍干燥得苯氧基改性醛化多糖。
2.載藥微球制備1)透析法a.將脂溶性藥物與可生物降解聚合物和雙親性改性醛化多糖按重量比為1∶0.5～100∶0.5～100共溶于1～1000體積份的二甲基亞砜(DMSO)或N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，室溫下攪拌形成均相體系；所述的脂溶性藥物包括卡氮芥、消炎痛、環(huán)孢菌素A、阿克拉霉素A、利福平、酮洛芬、他莫西芬、紅霉素或阿苯達(dá)唑；所述的可生物降解聚合物包括相對(duì)分子質(zhì)量5,000～100,000的聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚己內(nèi)酯(PCL)或聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)；所述的雙親性改性醛化多糖選自相對(duì)分子質(zhì)量10,000～1000,000的醛化葡聚糖或淀粉或普魯蘭經(jīng)膽固醇、膽酸或苯氧基疏水改性形成物。
b.將上述共溶體系用截留分子量7,000～50,000的半透膜在4～25℃下對(duì)去離子水透析1～144h，得到表面含醛基的載藥可生物降解聚合物微粒；
2)乳液法a.將脂溶性藥物與聚合物按重量比為1∶0.5～100共溶于1～1,000體積份的丙酮、二氯甲烷或上述二者的混合溶液中形成油相，所述的脂溶性藥物包括卡氮芥、消炎痛、環(huán)孢菌素A、阿克拉霉素A、利福平、酮洛芬、他莫西芬、紅霉素或阿苯達(dá)唑；所述的聚合物包括相對(duì)分子質(zhì)量5,000～200,000的聚3-羥基丁酸酯、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯或尼龍。
b.按脂溶性藥物與雙親性改性醛化多糖重量比為1∶0.5～100，將脂溶性藥物和雙親性改性醛化多糖溶于1～1,000體積份的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉(PBS)緩沖溶液中，得水相，所述的脂溶性藥物包括卡氮芥、消炎痛、環(huán)孢菌素A、阿克拉霉素A、利福平、酮洛芬、他莫西芬、紅霉素或阿苯達(dá)唑；所述的雙親性改性醛化多糖選自相對(duì)分子質(zhì)量10,000～1,000,000的醛化葡聚糖或淀粉，或普魯蘭經(jīng)膽固醇、膽酸或苯氧基疏水改性。
c.在4～25℃下將步驟a制得油相在轉(zhuǎn)速500～1,200轉(zhuǎn)/分的攪拌下快速注入步驟b制得水相中并繼續(xù)在磁力條件下攪拌至微球固化為止。
3.將微球水溶液離心10,000～16,000rpm，去除上清液，再將離出微球超聲分散于同體積份的pH為7.4～9.18的碳酸鈉-碳酸氫鈉的緩沖溶液中，形成質(zhì)量濃度為0.2～2.0mg/mL的微球溶液；4.按體積比1∶0.1～2.0，將pH為7.4～9.18的微球溶液滴加溶有0.1～2.0mg/mL的兩種或兩種以上生物因子的pH為7.4～9.18碳酸鈉-碳酸氫鈉的緩沖溶液中，孵化1～5h，所述生物因子包括轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)、兔IgG、表皮生長(zhǎng)因子受體EGFR、轉(zhuǎn)鐵蛋白受體CD71、單抗OX26、內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和神經(jīng)生長(zhǎng)因子。
5.在4～25℃下向孵化液中加入0.2～1mL的0.01mol/L的硼氫化鈉(NaBH4)溶液，還原未反應(yīng)的醛基和生成的西夫堿；10,000～16,000rpm下離心，用去離子水洗滌。
本發(fā)明中，多功能因子在微粒表面的組裝方式是利用微球表面游離醛基與生物功能因子結(jié)構(gòu)中的氨基進(jìn)行化學(xué)偶連。利用本發(fā)明中基于醛基的微粒表面多重生物功能因子組裝方法及其制備方法，可制得形狀規(guī)整，粒徑范圍50-1,000nm且粒徑分布窄的表面多重功能化組裝的微球或顆粒。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單，通過制備表面含反應(yīng)性基團(tuán)—醛基的微粒，控制反應(yīng)條件與反應(yīng)步驟，可以在微粒表面組裝兩種或兩種以上的生物功能因子，以滿足不同的應(yīng)用要求，所制備的表面生物多功能化微粒在藥物投遞、控釋緩釋等方面具有重要的應(yīng)用前景。


圖1為實(shí)施例1制備的雙功能化微球的透射電子顯微鏡照片，平均粒徑約為250nm左右，且粒徑分布較窄，微球表面極其光滑；圖2為實(shí)施例1制備的雙功能化微球的原子力顯微鏡照片；
圖3為實(shí)施例1制備的雙功能化微球的熒光顯微鏡照片，粒子溶液呈現(xiàn)綠色熒光，證明了異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)在粒子表面的結(jié)合；圖4為實(shí)施例1制備的雙功能化微球經(jīng)ELISA比色的照片，表面結(jié)合雙重因子的超微粒子分散液呈藍(lán)色，而空白對(duì)照組則呈色不明顯，證明表面兔IgG的結(jié)合具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明實(shí)施例11.膽固醇疏水改性醛化葡聚糖(Chol-Dex-CHO)的制備(1)將1g膽固醇與1g丁二酸酐溶于30mL干燥吡啶中，70℃下反應(yīng)5h，乙醇重結(jié)晶2次，真空干燥24h，得膽固醇-3-半琥珀酸(Chol-Succ)；(2)1g膽固醇-3-半琥珀酸溶于20mL干燥三氯甲烷中，70℃下向體系滴加2mL二氯亞砜，反應(yīng)6h，生成膽固醇-3-半琥珀酸酰氯(Chol-Succ-COCl)，將反應(yīng)液蒸干，再加入20mL干燥三氯甲烷復(fù)溶；(3)4℃避光條件下，2g葡聚糖溶于20mL去離子水中，按高碘酸鈉(NaIO4)與糖單元的摩爾比為1∶5投料反應(yīng)8h，將反應(yīng)液用截留分子量14,000半透膜對(duì)去離子透析48h，冷凍干燥得醛化葡聚糖；(4)將上述凍干得到得醛化葡聚糖溶于40mL干燥DMSO中，滴加數(shù)滴三乙胺，按-COCl與糖單元的摩爾比為1∶10量取Chol-Succ-COCl滴加入醛化葡聚糖溶液中，氮?dú)獗Ｗo(hù)，80℃反應(yīng)6h，產(chǎn)物對(duì)去離子水透析48h，透析液冷凍干燥，得膽固醇改性醛化葡聚糖。
2.微球制備(1)稱取4mg膽固醇疏水改性醛化葡聚糖(Chol-Dex-CHO)，8mg PLA3,0000及4mg消炎痛共溶于6mL DMSO中；(2)室溫下將上述溶液用截留分子量7,000的半透膜對(duì)去離子水透析48h，，得到具有明顯濁光的微球水溶液體系；(3)將微球水溶液16,000rpm離心，去除上清液；(4)離出物超聲分散于4mL pH＝9.18的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖溶液；3.功能化(1)將微球溶液向溶有2mg FITC標(biāo)記的轉(zhuǎn)鐵蛋白和2mg兔IgG的pH＝9.18的磷酸氫二鈉-磷酸二氫緩沖溶液中滴加，冰浴下攪拌5h；(2)向反應(yīng)液中加入1mL0.01mol/L的NaHB4溶液，還原未反應(yīng)的醛基和生成的西夫堿；(3)16,000rpm下離心，去離子水洗滌三次，再次加入生理鹽水4mL，小功率超聲分散。
實(shí)施例21.膽酸疏水改性醛化淀粉(Cholic-Sta-CHO)的制備(1)將1g膽酸溶于30mL乙醇中，78℃在4mL濃鹽酸催化下形成膽酸乙酯，將膽酸乙酯的乙醇溶液在78℃下向溶有5mL水合肼的乙醇溶液中緩慢滴加，反應(yīng)8h，冷卻析出物用乙醇重結(jié)晶，得膽酸酰肼(CAH)；(2)將100mg醛化淀粉(制備工藝同實(shí)例1中的醛化葡聚糖)溶于8mL水中，CAH溶于16mL DMF中，兩溶液混合得到一均相體系，體系中CAH與糖單元的摩爾比為1∶10；體系的pH值調(diào)節(jié)到4，室溫反應(yīng)8h，反應(yīng)溶液倒入大量的甲醇中沉淀出產(chǎn)物，過濾，用甲醇充分洗滌多次，室溫下真空干燥，得膽酸改性醛化淀粉。
2.微球制備(1)將40mg聚苯乙烯和10mg消炎痛溶于15mL丙酮中油相；(2)將20mg膽酸疏水改性醛化淀粉(Cholic-Sta-CHO)溶于45mL pH＝6.98的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖溶液中，在磁力條件下攪拌6小時(shí)，轉(zhuǎn)速800轉(zhuǎn)/分，得水相；(3)將油相在轉(zhuǎn)速800轉(zhuǎn)/分的攪拌下快速注入水相中并繼續(xù)在磁力條件下攪拌至超微載體固化為止；(4)將步驟(3)得到的產(chǎn)物在10,000轉(zhuǎn)/分離心分離、水洗；(5)將微球超聲分散于10mL pH＝9.18的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖溶液；3.功能化(1)將微球溶液向10mL溶有5mg FITC標(biāo)記的轉(zhuǎn)鐵蛋白和200uL OX26的pH＝9.18的磷酸氫二鈉-磷酸二氫緩沖溶液中滴加，冰浴攪拌5h；(2)向反應(yīng)液中加入2mL 0.01mol/L的NaHB4溶液，還原未反應(yīng)的醛基和生成的西夫堿；(3)16,000rpm下離心，去離子水洗滌三次，再次加入生理鹽水20mL，小功率超聲分散。
實(shí)施例31.苯氧基疏水改性醛化普魯蘭(Ph-Pull-CHO)的制備將0.5g醛化普魯蘭(制備工藝同實(shí)例1中的醛化葡聚糖)溶于20mL 1M氫氧化鈉(NaOH)溶液中，將苯基甘油醚(1，2-epoxy-3-phenoxypropane)按苯基甘油醚∶醛化普魯蘭糖單元的摩爾比為1∶10投料，室溫反應(yīng)24h，將產(chǎn)物在乙醇中沉降，再對(duì)去離子水透析，24h，冷凍干燥得苯氧基改性醛化普魯蘭。
2.微球制備(1)將2mg利福平4mg Ph-Pull-CHO與8mg聚己內(nèi)酯共溶于4mL DMSO中；(2)室溫下對(duì)pH＝9.18 Na2CO3-NaHCO4緩沖溶液透析48h，形成穩(wěn)定的具有帶濁光的溶液；(3)溶液離心并超聲清洗，去除未結(jié)合Ph-Pull-CHO，再加入同體積份的pH＝9.18的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖溶液進(jìn)行分散；3.功能化(1)將微球溶液向2mL溶有100ug EGFR(表皮生長(zhǎng)因子受體)和100ul CD71的pH＝9.18的磷酸氫二鈉-磷酸二氫緩沖溶液中滴加，孵化5h；(2)向反應(yīng)液中加入2mL0.01mol/L的NaHB4溶液，還原未反應(yīng)的醛基和生成的西夫堿；(3)16,000rpm下離心，去離子水洗滌三次，再次加入生理鹽水20mL，小功率超聲分散，得表面雙功能化的普魯蘭修飾聚己內(nèi)酯超微粒子。
實(shí)施例41.膽固醇疏水改性醛化葡聚糖(Chol-Dex-CHO)的制備同實(shí)例12.微球制備(1)稱取8mg膽固醇疏水改性醛化葡聚糖(Chol-Dex-CHO)，2mg PCL3,0000及2mg阿苯達(dá)唑共溶于6mL DMSO中；(2)室溫下將上述溶液用截留分子量7,000的半透膜對(duì)去離子水透析36h，，得到具有明顯濁光的微球水溶液體系；(3)將微球水溶液16,000rpm離心，去除上清液；(4)離出物超聲分散于4mL pH＝9.18的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖溶液；3.功能化(1)將微球溶液向溶有2mg轉(zhuǎn)鐵蛋白和50ug內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的pH＝9.18的磷酸氫二鈉-磷酸二氫緩沖溶液中滴加，冰浴下孵化3h；(2)向反應(yīng)液中加入1mL 0.01mol/L的NaHB4溶液，還原未反應(yīng)的醛基和生成的西夫堿；(3)16,000rpm下離心，去離子水洗滌三次，再次加入生理鹽水4mL，小功率超聲分散。
實(shí)施例51.膽酸疏水改性醛化葡聚糖(Chol-Dex-CHO)的制備同實(shí)例2中膽酸疏水改性醛化淀粉的制備，將淀粉換成葡聚糖即可。
2.微球制備(1)將30mg聚3-羥基丁酸酯和5mg他莫西芬溶于20mL二氯甲烷中得油相；(2)將40mg膽酸疏水改性醛化葡聚糖(Chol-Dex-CHO)溶于60mL pH＝6.98的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖溶液中，在磁力條件下攪拌6小時(shí)，轉(zhuǎn)速800轉(zhuǎn)/分，得水相；(3)將油相在轉(zhuǎn)速800轉(zhuǎn)/分的攪拌下快速注入水相中并繼續(xù)在磁力條件下攪拌至超微載體固化為止；(4)將步驟(3)得到的產(chǎn)物在10,000轉(zhuǎn)/分離心分離、水洗；(5)將微球超聲分散于10mL pH＝9.18的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖溶液；3.功能化(1)將微球溶液向10mL溶有5mg兔IgG和200uL神經(jīng)生長(zhǎng)因子的pH＝9.18的磷酸氫二鈉-磷酸二氫緩沖溶液中滴加，冰浴攪拌5h；(2)向反應(yīng)液中加入2mL 0.01mol/L的NaHB4溶液，還原未反應(yīng)的醛基和生成的西夫堿；(3)16,000rpm下離心，去離子水洗滌三次，再次加入生理鹽水20mL，小功率超聲分散。
權(quán)利要求
1.一種基于醛基的微粒表面多重生物功能因子組裝方法，其特征在于包括以下步驟1)雙親性多糖衍生物的制備(1)醛化多糖的制備4℃避光條件下，在水體系中按高碘酸鈉與糖單元的摩爾比為1∶2～50投料反應(yīng)0.5～8h，將反應(yīng)液用截留分子量10,00～40,000半透膜對(duì)去離子透析10～144h，冷凍干燥得固態(tài)產(chǎn)物；所述的多糖選自相對(duì)分子質(zhì)量10,000～1000,000的葡聚糖或淀粉或普魯蘭；(2)雙親性改性醛化多糖的制備a.膽固醇改性醛化多糖的制備將膽固醇與丁二酸酐按摩爾比1∶1～5投料，70℃在吡啶催化下反應(yīng)3～8h生成膽固醇-3-半琥珀酸，乙醇重結(jié)晶1～3次，真空干燥；將膽固醇-3-半琥珀酸與二氯亞砜按摩爾比1∶2～10溶于10～50mL干燥三氯甲烷中，70℃反應(yīng)1～10h，生成膽固醇-3-半琥珀酸酰氯，真空蒸出液體，將殘余固體復(fù)溶于20mL干燥三氯甲烷中待用；將上述凍干得到的醛化多糖溶于40mL干燥的二甲基亞砜中，滴加數(shù)滴三乙胺，按酰氯與糖單元的摩爾比為1∶2～50量取膽固醇-3-半琥珀酸酰氯滴加入醛化多糖溶液中，氮?dú)獗Ｗo(hù)，80℃反應(yīng)3～8h，產(chǎn)物對(duì)去離子水透析10～144h，透析液冷凍干燥，得膽固醇改性醛化多糖；b.膽酸改性醛化多糖的制備將1g膽酸溶于20～60mL乙醇中，40～78℃在1～5mL濃鹽酸催化下形成膽酸乙酯，將膽酸乙酯的乙醇溶液在40～78℃下向溶有0.5～10mL水合肼的乙醇溶液中緩慢滴加，反應(yīng)3～8h，冷卻析出物用乙醇重結(jié)晶，得膽酸酰肼；將100mg醛化多糖溶于8mL水中，膽酸酰肼溶于16mL的N，N-二甲基甲酰胺中，兩溶液混合得到一均相體系，體系中膽酸酰肼與糖單元的摩爾比為1∶2～50；體系的pH值調(diào)節(jié)到4，室溫反應(yīng)1～24h，反應(yīng)溶液倒入大量的甲醇中沉淀出產(chǎn)物，過濾，用甲醇充分洗滌多次，室溫下真空干燥，得膽酸改性醛化多糖；c.苯氧基改性醛化多糖的制備將苯基甘油醚與醛化多糖糖單元的摩爾比為1∶2～50投料，在1M氫氧化鈉溶液中室溫反應(yīng)10-48h，將產(chǎn)物在乙醇中沉降，再對(duì)去離子水透析，10～144h，冷凍干燥得苯氧基改性醛化多糖；2)載藥微球制備(1)透析法a.將脂溶性藥物與可生物降解聚合物和雙親性改性醛化多糖按重量比為1∶0.5～100∶0.5～100共溶于1～1,000體積份的二甲基亞砜或N，N-二甲基甲酰胺中，室溫下攪拌形成均相體系；所述的脂溶性藥物包括卡氮芥、消炎痛、環(huán)孢菌素A、阿克拉霉素A、利福平、酮洛芬、他莫西芬、紅霉素或阿苯達(dá)唑；所述的可生物降解聚合物包括相對(duì)分子質(zhì)量5,000～100,000的聚乳酸、聚乙醇酸、聚己內(nèi)酯或聚乳酸-聚乙醇酸共聚物；所述的雙親性改性醛化多糖選自相對(duì)分子質(zhì)量10,000～1000,000的醛化葡聚糖或淀粉，或普魯蘭經(jīng)膽固醇、膽酸或苯氧基疏水改性形成物；b.將上述共溶體系用截留分子量7,000～50,000的半透膜在4～25℃下對(duì)去離子水透析1～144h，得到表面含醛基的載藥可生物降解聚合物微粒；(2)乳液法a.將脂溶性藥物與聚合物按重量比為1∶0.5～100共溶于1～1,000體積份的丙酮、二氯甲烷或上述二者的混合溶液中形成油相，所述的脂溶性藥物包括卡氮芥、消炎痛、環(huán)孢菌素A、阿克拉霉素A、利福平、酮洛芬、他莫西芬、紅霉素或阿苯達(dá)唑；所述的可生物降解聚合物包括相對(duì)分子質(zhì)量5,000～200,000聚3-羥基丁酸酯、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯或尼龍；b.按脂溶性藥物與雙親性改性醛化多糖重量比為1∶0.5～100，將脂溶性藥物和雙親性改性醛化多糖溶于1～1,000體積份的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液中，得水相，所述的脂溶性藥物包括卡氮芥、消炎痛、環(huán)孢菌素A、阿克拉霉素A、利福平、酮洛芬、他莫西芬、紅霉素或阿苯達(dá)唑；所述的雙親性改性醛化多糖選自相對(duì)分子質(zhì)量10,000～1,000,000的醛化葡聚糖或淀粉，或普魯蘭經(jīng)膽固醇、膽酸或苯氧基疏水改性；c.在4～25℃下將步驟a制得油相在轉(zhuǎn)速500～1,200轉(zhuǎn)/分的攪拌下快速注入步驟b制得水相中并繼續(xù)在磁力條件下攪拌至粒子固化為止；3)將步驟2)制得的微球水溶液以10,000～16,000rpm離心，去除上清液，再將離出微球超聲分散于同體積份的pH為7.4～9.18的碳酸鈉-碳酸氫鈉的緩沖溶液中，形成質(zhì)量濃度為0.2～2.0mg/mL的微球溶液；4)按體積比1∶0.1～2.0，將pH為7.4～9.18的微球溶液滴加溶有0.1～2.0mg/mL的兩種或兩種以上生物因子的pH為7.4～9.18碳酸鈉-碳酸氫鈉的緩沖溶液中，孵化1～5h，所述生物因子包括轉(zhuǎn)鐵蛋白、兔IgG、表皮生長(zhǎng)因子受體EGFR、轉(zhuǎn)鐵蛋白受體CD71、單抗OX26、內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和神經(jīng)生長(zhǎng)因子；5)在4～25℃下向孵化液中加入0.2～1mL的0.01mol/L的硼氫化鈉溶液，還原未反應(yīng)的醛基和生成的西夫堿；在10,000～16,000rpm下離心，用去離子水洗滌。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種基于醛基的微粒表面的多重生物功能因子組裝方法，屬于多重生物功能因子組裝技術(shù)。該方法包括以下步驟將葡聚糖、淀粉或普魯蘭進(jìn)行醛化和雙親性改性，再將雙親性改性醛化多糖與脂溶性藥物及可生物降解聚合物制備載藥微球，微球水溶液經(jīng)分離再分散于緩沖溶液中，形成微球溶液；將微球溶液滴加至溶有生物因子的緩沖溶液中孵化，再向孵化液加入硼氫化鈉溶液，還原未反應(yīng)的醛基和生成的西夫堿，用去離子水洗滌，得到表面組裝有多重生物功能因子的微粒。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單，所制備的表面生物多功能化微粒在藥物投遞、控釋緩釋等方面具有重要的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A61K9/16GK1768859SQ20051001557
公開日2006年5月10日 申請(qǐng)日期2005年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月24日
發(fā)明者原續(xù)波, 顧鳴岐, 田恩江, 董穆, 盛京 申請(qǐng)人:天津大學(xué)