專利名稱：一種穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑及其制備方法，屬藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
穿心蓮內(nèi)酯(Andrographolide)是從爵床科植物穿心蓮Andrographispaniculata(Burm.f.)Nees中提取得到的二萜內(nèi)酯類化合物，是中藥穿心蓮的主要有效成分之一，具有清熱解毒、消炎止痛等功能，對(duì)細(xì)菌性與病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊療效，被譽(yù)為天然抗生素藥物?，F(xiàn)代藥理研究表明，穿心蓮內(nèi)酯具有抗菌消炎、抗病毒感染、抗腫瘤、抗心血管疾病、免疫刺激等功能。(穿心蓮內(nèi)酯及其衍生物的藥理研究進(jìn)展，劉新建等，中藥材第26卷第2期2003年2月；穿心蓮內(nèi)酯片治療上呼吸道感染臨床觀察，陳炯華等，中國(guó)中醫(yī)急癥2004年2月第13卷第2期)穿心蓮內(nèi)酯為二萜類內(nèi)酯化合物，難溶于水，通常僅能口服給藥。但由于穿心蓮內(nèi)酯口服可因極苦而致嘔吐，因此口服制劑使用較少。由于其水溶性差，故難以將其直接制備成可供臨床使用的注射液。藥學(xué)工作者針對(duì)臨床上感染急癥的需求，將本品內(nèi)酯結(jié)構(gòu)中引入不同的親水基團(tuán)，增強(qiáng)其水溶性，如將其制成穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯單鉀鹽(商品名穿琥寧)、穿心蓮內(nèi)酯二琥珀酸半酯鉀鈉鹽(商品名炎琥寧)及亞硫酸氫鈉穿心蓮內(nèi)酯(商品名蓮必治)。但這三種化合物的化學(xué)性質(zhì)均不穩(wěn)定，易氧化降解。并且由于其用藥劑量較大，在臨床使用過程中，常有過敏反應(yīng)和毒副作用發(fā)生，如全身紅紫、發(fā)熱、咳嗽、皮疹、瘙癢、心悸、胸悶、呼吸困難、頭疼、腹瀉及血小板減少等。
20世紀(jì)七十年代，將藥物直接運(yùn)送到體內(nèi)的病變部位，也就是具有藥物導(dǎo)彈性的“靶向治療”。美國(guó)的臨床藥物學(xué)家首先在實(shí)驗(yàn)室實(shí)現(xiàn)了這一設(shè)想，八十年代世界制藥業(yè)由此出現(xiàn)了藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)(DDS)這一理念。在這一理念下，將藥物溶于脂肪油中經(jīng)磷脂乳化分散于水相制成脂微球制劑，其中粒子平均粒徑在200納米左右形成一種微粒體分散系，稱為脂微球。脂微球是新型靶向藥物的載體，可選擇性在病變部位聚積，將治療藥物最大限度地運(yùn)送到靶區(qū)，使治療藥物在靶區(qū)濃度超出傳統(tǒng)制劑的數(shù)倍至數(shù)百倍，治療效果明顯提高；同時(shí)藥物在正常組織分布量極少，藥物的毒副作用和不良反應(yīng)會(huì)明顯減輕，達(dá)到高效低毒的效果。此外，脂微球靶向制劑具有藥物包封率高，安全性及穩(wěn)定性好，給藥方便等特點(diǎn)。例如日本的水島裕教授發(fā)明的前列地爾脂微球注射液(商品名凱時(shí))，該新型載體制劑具有以下特性(1)靶向性脂微球以其特有的特性易于聚集于病變部位。(2)持續(xù)性在脂微球的屏障保護(hù)作用下，藥物的肺部滅活明顯降低。(3)高效性僅需傳統(tǒng)劑型十分之一的給藥量，療效更佳。(4)低副作用在脂微球的屏障保護(hù)下，明顯減少了血管的刺激和炎性反應(yīng)。(5)使用簡(jiǎn)便直接靜脈注射，可在門診治療。當(dāng)人體受細(xì)菌、病毒等微生物感染后會(huì)引發(fā)各種炎癥，在炎癥反應(yīng)過程中，組織中的巨噬細(xì)胞會(huì)聚集到炎癥部位。此時(shí)，經(jīng)靜脈(或口服)給藥的包載藥物的脂微球在血液循環(huán)過程會(huì)被炎癥部位的巨噬細(xì)胞當(dāng)作外源性異物而吞噬，進(jìn)而使藥物于炎癥部位濃集并釋放，發(fā)揮其治療作用。迄今為止，國(guó)內(nèi)外尚未見穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑的文獻(xiàn)及專利報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)方案提供了一種穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑，本發(fā)明還提供了該脂微球制劑的制備方法。
本發(fā)明提供了一種穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑，它是由穿心蓮內(nèi)酯為活性成分，加上藥學(xué)上常用的注射/口服用油、乳化劑、注射用水/制劑用水制備而成的脂微球制劑，其中脂微球的粒徑分布范圍在0.05微米～1微米，平均粒徑為0.05微米～0.4微米。
其中，所述的脂微球制劑為靜脈給藥脂微球制劑、口服脂微球制劑。
其中，本發(fā)明穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑每100ml脂微球制劑含穿心蓮內(nèi)酯10毫克～1000毫克、注射或口服用油為1毫升～50毫升、乳化劑0.1克～5克(當(dāng)需要調(diào)節(jié)滲透壓時(shí)，加入注射用甘油)，其余為注射用水或制藥用水。
進(jìn)一步地，所述的口服脂微球制劑中口服用油為口服用大豆油；其含量為每100ml脂微球制劑中含穿心蓮內(nèi)酯250毫克、口服用大豆油為10毫升、乳化劑為1.0克，其余為制藥用水。其中，乳化劑為豆磷脂、普羅尼克(F-68)、阿拉伯膠、明膠及藥學(xué)上可接受的乳化劑中的一種或其混合。
更進(jìn)一步地，所述的每100ml靜脈給藥脂微球制劑中注射用油為注射用大豆油，其中含量為每100ml脂微球制劑中含穿心蓮內(nèi)酯250毫克、注射用大豆油為10毫升、乳化劑1克(當(dāng)需要調(diào)節(jié)滲透壓時(shí)，加入注射用甘油2.5克)，其余為注射用水。其中，乳化劑為注射用豆磷脂、普羅尼克(F-68)中的一種或其混合。
本發(fā)明還提供了本發(fā)明穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑的制備方法，其中，靜脈給藥脂微球制劑的制備方法，包括如下步驟a、稱取處方量的各原料、輔料；b、取處方量的原料藥穿心蓮內(nèi)酯溶于預(yù)熱的油相中，再將處方量的豆磷脂或普羅尼克和甘油溶于預(yù)熱的水相中；c、將上述水相或油相轉(zhuǎn)入組織搗碎機(jī)內(nèi)，于高速攪拌條件下滴加油相入水相或滴加水相入油相，至油相均勻分散于水相中或水相均勻分散于油相中，得初乳；d、取上述初乳轉(zhuǎn)移至高壓乳勻機(jī)內(nèi)，勻化至平均粒徑達(dá)0.5微米以下，微孔濾膜過濾，所得脂微球制劑灌封于輸液瓶或安瓿中，充氮?dú)?，熱壓滅菌，即得?br> 具體地，所述靜脈給藥脂微球制劑的制備方法包括如下步驟a、稱取各原料穿心蓮內(nèi)酯10毫克～1000毫克、注射用油為1毫升～50毫升(當(dāng)需要調(diào)節(jié)滲透壓時(shí)，加入注射用甘油1克～5克)、乳化劑0.1克～5克、其余為注射用水；b、取穿心蓮內(nèi)酯溶于預(yù)熱至80℃的注射用油中，再稱取豆磷脂和甘油溶于預(yù)熱至80℃的適量注射用水中；c、將上述水相轉(zhuǎn)入組織搗碎機(jī)內(nèi)，于10000轉(zhuǎn)/分鐘的攪拌條件下緩緩滴加油相入水相，以每分鐘10000轉(zhuǎn)攪拌3分鐘，反復(fù)3次，直至溶有穿心蓮內(nèi)酯的油相均勻分散；d、取上述初乳加入預(yù)熱至80℃的注射用水使達(dá)全量，轉(zhuǎn)移至高壓乳勻機(jī)內(nèi)，勻化3次，取樣測(cè)定粒徑，至平均粒徑達(dá)0.5微米以下，通過3微米微孔濾膜過濾，取上述脂微球制劑灌封于輸液瓶或安瓿中，充氮?dú)猓?05℃下滅菌45分鐘。
所述的靜脈給藥脂微球制劑的另一種制備方法包括如下步驟a、稱取各原料穿心蓮內(nèi)酯10毫克～1000毫克、注射用油為1毫升～50毫升(當(dāng)需要調(diào)節(jié)滲透壓時(shí)，加入注射用甘油1克～5克)、乳化劑0.1克～5克、其余為注射用水；b、將處方量的穿心蓮內(nèi)酯加入預(yù)熱至80℃的處方量的注射用油中，攪拌至使其溶解并分散均勻；C、將處方量的豆磷脂，注射用甘油與預(yù)熱至80℃的適量注射用水用高速組織搗碎機(jī)進(jìn)行分散混合，以每分鐘10000轉(zhuǎn)攪拌3分鐘，反復(fù)3次，直至豆磷脂均勻分散；d、于上述溶有穿心蓮內(nèi)酯的油相中，攪拌下緩慢加入含有豆磷脂、注射用甘油的水相分散液，用高速組織搗碎機(jī)進(jìn)行分散混合，得到初乳，取上述初乳加入預(yù)熱至80℃的注射用水使達(dá)全量，再轉(zhuǎn)入高壓乳勻機(jī)內(nèi)，勻化3次，取樣測(cè)定粒徑，至平均粒徑在0.5微米以下，通過3微米微孔濾膜過濾；e、取上述脂微球制劑灌封于輸液瓶或安瓿中，充氮?dú)猓?05℃滅菌45分鐘。
上述工藝制備的脂微球制劑，系根據(jù)相似相溶及乳化原理，將脂溶性的穿心蓮內(nèi)酯溶解分散于油中，再與水及乳化劑制備成脂微球制劑，可顯著增加穿心蓮內(nèi)酯的溶解度，提高其穩(wěn)定性，從而直接將穿心蓮內(nèi)酯制備成可供臨床使用的靜脈注射(或口服)脂微球制劑。
由于穿心蓮內(nèi)酯具有廣泛的抑菌、抗炎作用，考慮到穿心蓮內(nèi)酯難溶于水的特點(diǎn)，將其溶于脂肪油中經(jīng)磷脂乳化分散于水相制成脂微球制劑，不僅克服了穿心蓮內(nèi)酯水溶性衍生物化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，易氧化降解，常有過敏反應(yīng)和毒副作用發(fā)生的不足；同時(shí)可減少給藥量，使穿心蓮內(nèi)酯選擇性于病變部位聚積，降低藥物在正常組織分布量，達(dá)到高效低毒的效果。
且本發(fā)明將穿心蓮內(nèi)酯制備成脂微球后，由于將藥物包封于內(nèi)相油中，避免了口服穿心蓮內(nèi)酯的苦味與不適感，可明顯改善穿心蓮內(nèi)酯口服制劑的用藥順應(yīng)性。
本發(fā)明制備的脂微球制劑，粒徑在100～1000nm之間，屬亞納米乳范疇。外觀不透明，呈乳狀，可加入普羅尼克(F-68)助乳化，或僅需使用豆磷脂作為乳化劑。經(jīng)熱壓滅菌后理化性質(zhì)穩(wěn)定，安全性試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明制備的脂微球制劑無(wú)菌、熱原檢查合格，且無(wú)溶血性、無(wú)過敏性、無(wú)刺激性，符合臨床用藥對(duì)于安全性和穩(wěn)定性的要求。
顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。


圖1 穿心蓮內(nèi)酯靜脈脂微球制劑的粒徑及其分布具體實(shí)施方式
實(shí)施例1 將注射用大豆卵磷脂1.5g和注射用甘油2.5g置入高速組織搗碎機(jī)，加適量注射用水，以12000轉(zhuǎn)/分鐘的速度制備成均勻分散相；將分散相和溶有穿心蓮內(nèi)酯250毫克的注射用油10毫升分別預(yù)熱至60～80℃，混合后制成初乳，將初乳加注射用水至100毫升，置入高壓乳勻機(jī)反復(fù)乳化，通過3微米微孔濾膜過濾，再充氮灌裝，滅菌，即得靜脈注射用脂微球制劑乳，亦可口服。
實(shí)施例2 將注射用大豆卵磷脂1.2g與普羅尼克(F-68)0.3g及注射用水先制備成均勻分散相；加入預(yù)熱的溶有穿心蓮內(nèi)酯25毫克的注射用油10毫升制成初乳，加注射用水配至100毫升；高壓乳化，通過0.8微米微孔濾膜過濾，再充氮灌裝，滅菌，即制得靜脈注射用脂微球制劑。
實(shí)施例3 將注射用大豆磷脂1.5g和注射用甘油2.5g及注射用水先制備成均勻分散相；加入預(yù)熱的溶有穿心蓮內(nèi)酯25毫克的注射用油20毫升制成初乳，加注射用水配至100毫升，高壓乳化，再充氮灌裝，即制得靜脈脂微球制劑。
實(shí)施例4 將大豆卵磷脂1.0g與普羅尼克(F-68)0.3g和注射用甘油2.5g及注射用水先制備成均勻分散相；加入預(yù)熱的溶有穿心蓮內(nèi)酯25毫克的注射用油10毫升制成初乳，加注射用水配至100毫升，高壓乳化，通過0.8微米微孔濾膜過濾，再充氮灌裝，滅菌，即制得靜脈脂微球制劑。
實(shí)施例5 將注射用大豆卵磷脂100g及注射用水制成分散相預(yù)熱至80℃，與溶有穿心蓮內(nèi)酯2.5克的1000毫升注射用油(預(yù)熱至80℃)混合，通過高壓乳勻機(jī)制備成10000毫升的均勻脂微球制劑，通過3微米微孔濾膜過濾，再充氮灌裝，壓蓋，滅菌，即得靜脈脂微球制劑。
實(shí)施例6 將注射用大豆卵磷脂110g和注射用甘油250g及注射用水制成分散相預(yù)熱至80℃，與溶有穿心蓮內(nèi)酯5克的1000毫升注射用油(預(yù)熱至80℃)混合，通過高壓乳勻機(jī)制備成10000毫升的均勻脂微球制劑，通過0.8微米微孔濾膜過濾，再充氮灌裝，壓蓋，滅菌，即得靜脈乳。
實(shí)施例7 將注射用大豆卵磷脂120g和注射用水制成分散相預(yù)熱至80℃，與溶有穿心蓮內(nèi)酯2.5克的1000毫升注射用油(預(yù)熱至80℃)混合，通過高壓乳勻機(jī)制備成10000毫升的均勻脂微球制劑，通過0.8微米微孔濾膜過濾，再充氮灌裝，壓蓋，滅菌，即得靜脈乳。
實(shí)施例8 將大豆卵磷脂120g、尼泊金乙酯10g與制藥用水制成分散相預(yù)熱至80℃，與溶有穿心蓮內(nèi)酯5克的1000毫升藥用大豆油(預(yù)熱至80℃)混合，通過高速組織搗碎機(jī)制備成10000毫升的均勻脂微球制劑，壓蓋，即得口服乳。
實(shí)施例9 原料用量?jī)?yōu)選本發(fā)明首先對(duì)穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑的處方進(jìn)行了優(yōu)選。采用藥學(xué)中常用的均勻設(shè)計(jì)法分別對(duì)注射用油用量、穿心蓮內(nèi)酯用量、注射用豆磷脂用量進(jìn)行了考察。各因素水平設(shè)計(jì)如下，結(jié)果見表1。
A注射用油 (ml) 1～50B穿心蓮內(nèi)酯(mg) 5～250C注射用豆磷脂 (g) 0.1～5表1穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑處方 因素—水平

將以上3因素7水平按7水平均勻表U7(74)及使用表安排試驗(yàn)，按本發(fā)明所述制備方法配制不同的穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑，以穿心蓮內(nèi)酯加速試驗(yàn)與室溫留樣長(zhǎng)期穩(wěn)定性為考察指標(biāo)，優(yōu)選最佳處方，結(jié)果顯示當(dāng)制備的穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑每100ml脂微球制劑中含穿心蓮內(nèi)酯250毫克，其中含注射用油為10毫升、乳化劑1.0克，注射用甘油(根據(jù)滲透壓進(jìn)行調(diào)節(jié))2.5g，其余為注射用水時(shí)，所得供試品在低溫4℃放置6個(gè)月、高溫45℃放置6個(gè)月、室溫25℃放置12個(gè)月后，樣品的物理外觀、pH及包封率，均無(wú)明顯變化，穩(wěn)定性良好。據(jù)此實(shí)驗(yàn)結(jié)果，得到本發(fā)明穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑的最佳處方。
以下通過對(duì)上述實(shí)施例制備的脂微球制劑進(jìn)行理化性質(zhì)及安全性檢測(cè)試驗(yàn)。
試驗(yàn)例1 本發(fā)明藥物粒徑的測(cè)定對(duì)本發(fā)明脂微球制劑的粒徑及其分布進(jìn)行了測(cè)定，具體方法如下取本發(fā)明制備的靜脈與口服脂微球制劑各10ml，加入至400ml水中，用Malvern-2000型激光散射粒徑分析儀(英國(guó))，測(cè)定所得脂微球制劑的粒徑及其分布，結(jié)果見圖1。
由圖1可見，所得靜脈脂微球制劑的粒徑大小符合正態(tài)分布。靜脈脂微球制劑的50％的粒徑小于172nm，90％的粒徑小于215nm。該測(cè)定結(jié)果符合靜脈注射用脂微球制劑的相關(guān)要求。其中脂微球的粒徑分布范圍在0.05微米～1微米，平均粒徑為0.05微米～0.4微米。
試驗(yàn)例2 本發(fā)明藥物穩(wěn)定性檢測(cè)我們對(duì)本發(fā)明制備的穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑于低溫4℃放置6個(gè)月、高溫45℃放置6個(gè)月、室溫25℃放置12個(gè)月后，檢測(cè)樣品的外觀、pH及包封率，考察本品的穩(wěn)定性，結(jié)果見表1。
表1 本發(fā)明制備的穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑的穩(wěn)定性考察結(jié)果

由表1可見，采用本發(fā)明制備的脂微球制劑穩(wěn)定性良好。低溫4℃放置6個(gè)月、高溫45℃放置6個(gè)月、室溫25℃放置12個(gè)月后，樣品的外觀、pH及包封率均無(wú)明顯變化。
綜上結(jié)果可知，采用本發(fā)明制備的脂微球制劑穩(wěn)定性良好，可達(dá)到國(guó)家新藥研究技術(shù)指導(dǎo)原則中關(guān)于制劑穩(wěn)定性的要求。
試驗(yàn)例3 本發(fā)明藥物質(zhì)量控制方法本發(fā)明中穿心蓮內(nèi)酯的含量測(cè)定方法采用高效液相色譜法(毋福海等.HPLC測(cè)定復(fù)方穿心蓮片中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量.華西藥學(xué)雜志.2004，19(2)133-135)，以十八烷基鍵合硅膠為固定相，甲醇∶水(體積比70∶30)混合溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為225nm，以穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品(購(gòu)自中檢所)配制對(duì)照品溶液，外標(biāo)法計(jì)算穿心蓮內(nèi)酯含量。
試驗(yàn)例4 本發(fā)明藥物脂微球制劑包封率的測(cè)定以穿心蓮內(nèi)酯為指標(biāo)采用超速離心法離心脂微球制劑，40000r/min，離心30min，取上層清液0.5ml，用無(wú)水乙醇溶解，以高效液相色譜法測(cè)定穿心蓮內(nèi)酯含量，可確定被包封的穿心蓮內(nèi)酯的含量M1。脂微球制劑中穿心蓮內(nèi)酯總量為M0，按下式計(jì)算穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑對(duì)穿心蓮內(nèi)酯IIA的重量包封率Q。
Q＝M1/M0×100％結(jié)果以穿心蓮內(nèi)酯為指標(biāo)，本發(fā)明所制備的靜脈脂微球制劑包封率均大于97％。
試驗(yàn)例5 本發(fā)明藥物無(wú)菌檢查取以本發(fā)明方法自制脂微球制劑，按照無(wú)菌檢查法(中國(guó)藥典2000版附錄XI H)檢查，以本發(fā)明方法制備的脂微球制劑無(wú)菌檢查合格。
試驗(yàn)例6 本發(fā)明藥物熱原檢查取以本發(fā)明方法自制脂微球制劑，按照熱原檢查法(中國(guó)藥典2000版附錄XI D)檢查，以本發(fā)明方法制備的脂微球制劑熱原檢查合格。
試驗(yàn)例7 本發(fā)明藥物過敏性試驗(yàn)試驗(yàn)方法將豚鼠按體重隨機(jī)分為3組，每組6只，1、2兩組豚鼠間日一次，連續(xù)三次腹腔注射穿心蓮內(nèi)酯靜脈注射用脂微球制劑0.5ml/只致敏，1、2兩組分別于第一次腹腔注射后的14天及21天足趾靜脈注射穿心蓮內(nèi)酯靜脈注射用脂微球制劑1.0ml/只激發(fā)；3組豚鼠間日一次，連續(xù)三次腹腔注射20％雞蛋清液0.5ml/只致敏，于注射后的14天足趾靜脈注射20％雞蛋清液1.0ml/只激發(fā)，三組均在激發(fā)注射后15分鐘內(nèi)觀察過敏反應(yīng)癥狀。
試驗(yàn)結(jié)果穿心蓮內(nèi)酯靜脈注射用脂微球制劑的兩組豚鼠分別于第1次腹腔注射后14天和第21天用原藥液進(jìn)行攻擊均未發(fā)生過敏性反應(yīng)；而陽(yáng)性對(duì)照組(3組)豚鼠于注射后2分鐘內(nèi)出現(xiàn)呼吸困難，抽搐倒下，而后死亡，豚鼠死亡均發(fā)生在注射后1～3分鐘內(nèi)。
試驗(yàn)結(jié)論在本次試驗(yàn)條件下，穿心蓮內(nèi)酯靜脈注射用脂微球制劑對(duì)受試豚鼠無(wú)致敏作用。
試驗(yàn)例8 本發(fā)明藥物溶血性試驗(yàn)試驗(yàn)方法取試管7支，1～5管分別加入0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml的穿心蓮內(nèi)酯靜脈注射用脂微球制劑，并用10％葡萄糖注射液稀釋至2.5ml，6號(hào)試管中加入10％葡萄糖注射液2.5ml、7號(hào)試管中加入蒸餾水2.5ml(完全溶血對(duì)照)。最后每管均加入2％兔紅細(xì)胞懸液2.5ml，輕輕搖勻，置37℃水浴中，分別記錄15min、30min、45min、1h、2h、3h、4h各管的溶血和凝集情況。
試驗(yàn)結(jié)果穿心蓮內(nèi)酯靜脈注射用脂微球制劑1～5管在4小時(shí)內(nèi)均未引起溶血和凝集反應(yīng)。
試驗(yàn)結(jié)論本實(shí)驗(yàn)條件下，穿心蓮內(nèi)酯靜脈注射用脂微球制劑對(duì)兔紅細(xì)胞無(wú)溶血和凝集反應(yīng)。
試驗(yàn)例9 本發(fā)明藥物刺激性試驗(yàn)試驗(yàn)方法取新西蘭兔2只，均于左耳緣靜脈緩慢注射穿心蓮內(nèi)酯靜脈注射用脂微球制劑10ml/kg(考慮到穿心蓮內(nèi)酯靜脈注射用脂微球制劑將具有靶向分布、高效低毒的特點(diǎn)，其在應(yīng)用時(shí)較穿琥寧注射液用量將明顯減少，但為確保脂微球制劑的安全性，本發(fā)明在藥物刺激性試驗(yàn)研究中參考穿琥寧注射液用量，成人每日一次，250～500ml靜脈滴注。以人50kg體重計(jì)，則為5～10ml/kg/天)。右耳緣靜脈緩慢注射10％葡萄糖注射液10ml/kg，每天一次，連續(xù)注射三天，于注射第一次開始，每天觀察注射部位有無(wú)水腫、紅斑，末次注射后24小時(shí)，從耳根剪下耳朵置10％甲醛溶液中固定，然后作病理切片檢查。
試驗(yàn)結(jié)果穿心蓮內(nèi)酯靜脈注射用脂微球制劑給兔耳緣靜脈每日注射一次，連續(xù)三天，2只兔耳注射部位未見有水腫和紅斑的發(fā)生。病理組織學(xué)觀察，兔耳表皮結(jié)構(gòu)正常。表皮下乳頭層及網(wǎng)織層無(wú)炎細(xì)胞滲出、無(wú)出血，血管內(nèi)無(wú)血栓形成。附件結(jié)構(gòu)正常。
試驗(yàn)結(jié)論穿心蓮內(nèi)酯靜脈注射用脂微球制劑對(duì)兔耳緣靜脈血管無(wú)刺激性。
從以上結(jié)果可以看出，采用本發(fā)明制備的脂微球制劑安全可靠，無(wú)過敏性、溶血性及刺激性，符合臨床用藥的相關(guān)要求。
從本發(fā)明提供的試驗(yàn)例中，粒徑的測(cè)定試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、包封率測(cè)定試驗(yàn)及無(wú)菌、熱原、過敏性、溶血、刺激性試驗(yàn)證明本發(fā)明提供的穿心蓮靜脈制劑克服了穿心蓮內(nèi)酯水溶性差，不易制備成注射劑的缺陷，也克服了常規(guī)制劑穩(wěn)定性差、易氧化降解，過敏反應(yīng)和毒副作用大等缺陷；當(dāng)本發(fā)明穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑作為口服制劑時(shí)，避免了穿心蓮內(nèi)酯口感極苦，方便臨床使用，是一種安全性高、療效良好的新的藥用制劑。
權(quán)利要求
1.一種穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑，其特征在于它是以穿心蓮內(nèi)酯為活性成分，加上藥學(xué)上常用的注射或口服用油、乳化劑、注射用水/制藥用水制備而成的脂微球制劑，其中脂微球的粒徑分布范圍在0.05微米～1微米，平均粒徑為0.05微米～0.4微米。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑，其特征在于每100ml脂微球制劑含穿心蓮內(nèi)酯10毫克～1000毫克、注射或口服用油為1毫升～50毫升、乳化劑0.1克～5克，其余為注射用水或制藥用水。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑，其特征在于所述的脂微球制劑為靜脈注射用脂微球制劑、口服脂微球制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑，其特征在于所述的口服脂微球制劑中所用油為口服用大豆油；其含量為每100ml脂微球制劑中含穿心蓮內(nèi)酯250毫克、口服用大豆油為10毫升、乳化劑為1克，其余為制藥用水。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑，其特征在于乳化劑為豆磷脂、普羅尼克F-68、阿拉伯膠、明膠及藥學(xué)上可接受的乳化劑中的一種或其混合。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑，其特征在于所述的每100ml靜脈注射用脂微球制劑中所用油為注射用大豆油，其中含量為每100ml脂微球制劑中含穿心蓮內(nèi)酯10毫克～1000毫克、注射用大豆油為5毫升～50毫升、乳化劑0.1克～5克，其余為注射用水。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑，其特征在于所述的每100ml靜脈注射用脂微球制劑中所用油為注射用大豆油，每100ml脂微球制劑中含有穿心蓮內(nèi)酯250毫克、注射用大豆油為10毫升、乳化劑1克，其余為注射用水。
8.根據(jù)權(quán)利要求6、7所述的穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑，其特征在于所述的乳化劑為注射用豆磷脂、普羅尼克F-68中的一種或兩種混合。
9.一種制備權(quán)利要求6、7所述的穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑的方法，其特征在于所述靜脈注射用脂微球制劑的制備方法包括如下步驟a、稱取處方量的各原料、輔料；b、取處方量的原料藥穿心蓮內(nèi)酯溶于油相中，再將處方量的注射用豆磷脂或普羅尼克(F-68)一種或兩種混合溶于水相中；c、將上述水相或油相轉(zhuǎn)入組織搗碎機(jī)內(nèi)，于高速攪拌條件下滴加油相入水相或滴加水相入油相，至油相均勻分散于水相中或水相均勻分散于油相中，得初乳；d、取上述初乳轉(zhuǎn)移至高壓乳勻機(jī)內(nèi)，勻化至平均粒徑達(dá)0.5微米以下，微孔濾膜過濾，所得脂微球制劑灌封于輸液瓶或安瓿中，充氮?dú)?，熱壓滅菌，即得?br> 全文摘要
本發(fā)明提供了一種穿心蓮內(nèi)酯脂微球制劑，它是以穿心蓮內(nèi)酯為活性成分，加上藥學(xué)上常用的注射或口服用油、乳化劑、注射用水/制藥用水制備而成的脂微球制劑。本發(fā)明制備的脂微球制劑，穩(wěn)定性好，經(jīng)熱壓滅菌后理化性質(zhì)無(wú)明顯改變，安全性試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明制備的脂微球制劑無(wú)菌、熱原檢查合格，且無(wú)溶血性、無(wú)過敏性、無(wú)刺激性，符合臨床用藥安全性的要求。
文檔編號(hào)A61K31/365GK1686108SQ20051002052
公開日2005年10月26日 申請(qǐng)日期2005年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月18日
發(fā)明者毛聲俊, 金輝, 梁臻, 吳宇 申請(qǐng)人:四川思達(dá)康藥業(yè)有限公司