專利名稱：一種煙曲霉酸型甾體在制造抗耐藥菌藥物中的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種煙曲霉酸型甾體與抗生素組合在制造抗耐藥菌藥物中的新用途。
背景技術(shù)：
由于抗生素類藥物的廣泛應(yīng)用以及微生物的迅速進(jìn)化使得多種耐藥機(jī)制在病源菌中廣泛傳播，導(dǎo)致多種抗生素臨床療效下降。(Christopher Walsh.Molecular mechanisms that conferantibacterial drug resistance.Nature，406775-781 2000)目前某些耐藥病源菌，特別是革蘭氏陽(yáng)性菌(如金黃色葡萄球菌)的耐藥問(wèn)題越來(lái)越嚴(yán)重。它們不僅對(duì)單一抗生素有很強(qiáng)的耐受能力，并且往往同時(shí)對(duì)多種抗生素具有耐藥性，臨床治療已十分困難。(Alexander Tomasz.Multiple-Antibiotic-Resistant Pathogenic Bacteria.The New England Journal of Medicine，3301247-1251 1994)微生物耐藥性的主要生物化學(xué)機(jī)理是病源菌產(chǎn)生多種抗生素酶(如β-內(nèi)酰胺酶)，這些酶能使抗生素在到達(dá)病源菌靶點(diǎn)前被改變結(jié)構(gòu)(如抗生素被水解，被羥基化)，從而導(dǎo)致抗生素失去抗菌活性。針對(duì)這種耐藥機(jī)制，學(xué)者們相繼研制了一些能夠抑制抗生素酶活性的β-內(nèi)酰胺酶抑制劑，如克拉維酸、蘇巴坦和他唑巴坦?，F(xiàn)在多家公司也開發(fā)生產(chǎn)了這些β-內(nèi)酰胺酶抑制劑同β-內(nèi)酰胺類抗生素的復(fù)方制劑，用以對(duì)付β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥菌。
至今還沒(méi)有更新的抑制劑用于臨床，而且對(duì)β-內(nèi)酰胺酶以外的多種抗生素酶引起的耐藥問(wèn)題更是有待解決。
并且有報(bào)道稱病源菌已開始產(chǎn)生抗抑制劑型的β-內(nèi)酰胺酶(Bret，L.，C.Chanel，D.Sirot，R.Labia，and J.Sirot.Characterization of an inhibitor-resistant enzyme IRT-2derived from TEM-2β-lactamase produced by Proteus mirabilis strains.J.Antimicrob.Chemother.38183-191 1996)。另一方面，對(duì)β-內(nèi)酰胺酶以外的多種類型抗生素酶引起的耐藥問(wèn)題尚未解決。
本發(fā)明采用專利(公開號(hào)CN 1412319)所述方法，從微生物發(fā)酵樣品篩選獲得具有抗耐藥菌活性的化合物，結(jié)構(gòu)鑒定為一類煙曲霉酸型的甾體化合物。煙曲霉酸型甾體是已知的甾體類抗生素，本身具有抗菌活性，代表物有煙曲霉酸及梭鏈孢酸。其中煙曲霉酸由于抗菌活性較低，因而現(xiàn)今不被使用，并且還沒(méi)有人對(duì)煙曲霉酸與多種抗生素的藥物組合進(jìn)行研究。里奧藥物制品有限公司申請(qǐng)了梭鏈孢酸衍生物17，20-二氫梭鏈孢酸的制備方法、藥物組合及用途的專利(公開號(hào)CN 1378554)，但未涉及梭鏈孢酸與多種抗生素的藥物組合及用途。

發(fā)明內(nèi)容
基于上述，為了克服已有技術(shù)的不足之處，本發(fā)明的目的在于公開一種煙曲霉酸型甾體在制造抗耐藥菌藥物中的新用途。
本發(fā)明涉及的煙曲霉酸型甾體結(jié)構(gòu)式見右圖， 其中，R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R9，R10，R11，R12可以為下述之一種氫原子(H)、羥基(hydroxyl)、羰基氧原子(O)、烴基(alkyl)、烯烴雙鍵(alkene)、芳基(aryl)、?；?acyl)、酰氧基(acyloxy)、烷氧基(alkoxy)、醛基(aldehyde)、鹵素(halogen)、氨基(amino)、烴氨基(alkylamino)、芳氨基(arylamino)、酰氨基(acylamino)和羧基(carboxyl)，且R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R9，R10，R11，R12不全為氫原子(H)。
特別地，當(dāng)R1，R3＝雙鍵；R5，R6＝R9，R10＝O；R7＝acetoxy；R2＝R4＝R8＝R11＝R12＝H時(shí)，為煙曲霉酸，該化合物如下圖所示。
特別地，當(dāng)R1＝R2＝R3＝R4＝R5＝R7＝R8＝R9＝R10＝R11＝H；R6＝R12＝hydroxyl時(shí)，為梭鏈孢酸，該化合物如下圖所示。

本發(fā)明中，煙曲霉酸型甾體(與相應(yīng)抗生素組合)應(yīng)用于制造抗菌藥物，具有顯著的抗耐藥菌協(xié)同作用。
本發(fā)明中，煙曲霉酸型甾體可與單種抗生素組合，也可與多種抗生素組合應(yīng)用于抗耐藥菌藥物的制造。可參與組合的抗生素為醫(yī)學(xué)上應(yīng)用的抗生素(β-內(nèi)酰胺、非β-內(nèi)酰胺)，包括青霉素、紅霉素、鏈霉素、氯霉素、卡那霉素、慶大霉素、四環(huán)素等。
本發(fā)明涉及的藥物組合物為煙曲霉酸型甾體與抗生素的藥物組合物，包括煙曲霉酸、梭鏈孢酸及其在藥學(xué)上可接收的鹽、鹽的水合物、酯或前體藥物如與鈉、鉀和鈣、氨和胺(如普魯卡因、二芐基胺、N-芐基-β-苯乙基胺、N，N-二芐基-1，2-乙二胺等)所形成的鹽與多種抗生素的藥物組合物。具體講，本發(fā)明涉及藥用的抗菌組合物，包括煙曲霉酸分別與青霉素、紅霉素、鏈霉素、氯霉素、卡那霉素、慶大霉素、四環(huán)素等抗生素的組合物，以及梭鏈孢酸分別與青霉素、紅霉素、鏈霉素、氯霉素、卡那霉素、慶大霉素、四環(huán)素等抗生素的組合物，這些組合物具有顯著的抗耐藥菌協(xié)同作用。
本發(fā)明涉及的藥物組合物，其特征在于煙曲霉酸型甾體與抗生素組合的重量配比范圍為1∶10000～64∶1。具體為煙曲霉酸與氯霉素的重量配比范圍為1∶8～64∶1，優(yōu)選的是1∶4～16∶1，更優(yōu)選的是1∶2～8∶1；煙曲霉酸與紅霉素的重量配比范圍為1∶500～64∶1，優(yōu)選的是1∶64～8∶1，更優(yōu)選的是1∶8～2∶1；煙曲霉酸與鏈霉素的重量配比范圍為1∶64～64∶1，優(yōu)選的是1∶4～16∶1，更優(yōu)選的是1∶2～8∶1；煙曲霉酸與慶大霉素的重量配比范圍為1∶8～64∶1，優(yōu)選的是1∶8～16∶1，更優(yōu)選的是1∶4～8∶1；煙曲霉酸與卡那霉素的重量配比范圍為1∶128～64∶1，優(yōu)選的是1∶16～4∶1，更優(yōu)選的是1∶16～1∶1；煙曲霉酸與四環(huán)素的重量配比范圍為1∶64～64∶1，優(yōu)選的是1∶8～8∶1，更優(yōu)選的是1∶4～4∶1；煙曲霉酸與青霉素的重量配比范圍為1∶64～64∶1，優(yōu)選的是1∶64～4∶1，更優(yōu)選的是1∶4～4∶1。
梭鏈孢酸與氯霉素的重量配比范圍為1∶80～8∶5，優(yōu)選的是1∶80～2∶5，更優(yōu)選的是1∶40～1∶5；梭鏈孢酸與紅霉素的重量配比范圍為1∶10000～8∶5，優(yōu)選的是1∶5000～1∶5，更優(yōu)選的是1∶1280～1∶10；梭鏈孢酸與鏈霉素的重量配比范圍為1∶640～8∶5，優(yōu)選的是1∶80～2∶5，更優(yōu)選的是1∶40～1∶5；梭鏈孢酸與慶大霉素的重量配比范圍為1∶320～8∶5，優(yōu)選的是1∶40～4∶5，更優(yōu)選的是1∶40～1∶5；梭鏈孢酸與卡那霉素的重量配比范圍為1∶1280～8∶5，優(yōu)選的是1∶640～4∶5，更優(yōu)選的是1∶640～1∶10；梭鏈孢酸與四環(huán)素的重量配比范圍為1∶1280～8∶5，優(yōu)選的是1∶160～1∶5，更優(yōu)選的是1∶160～1∶10；梭鏈孢酸與青霉素的重量配比范圍為1∶1280～8∶5，優(yōu)選的是1∶80～2∶5，更優(yōu)選的是1∶80～1∶10。
根據(jù)本發(fā)明，可與抗生素組合的煙曲霉酸型甾體還包括在藥學(xué)上可接收的鹽、鹽的水合物、酯或前體藥物，如鈉、鉀和鈣、氨和胺(如普魯卡因、二芐基胺、N-芐基-β-苯乙基胺、N，N-二芐基-1，2-乙二胺等)所形成的鹽。尤其是煙曲霉酸、梭鏈孢酸還包括在藥學(xué)上可接收的鹽、鹽的水合物、酯或前體藥物，如鈉、鉀和鈣、氨和胺(如普魯卡因、二芐基胺、N-芐基-β-苯乙基胺、N，N-二芐基-1，2-乙二胺等)所形成的鹽。
本發(fā)明各組合物的給藥途徑可為注射給藥、口服給藥、涂抹給藥。注射包括靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、皮內(nèi)注射和穴位注射等。
給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型。如液體劑型可以是真溶液類、膠體類、微粒劑型、乳劑劑型、混懸劑型。
本發(fā)明的組合物可以制成普通制劑、緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑。例如，將本發(fā)明的組合物制成注射制劑，如溶液劑、混懸劑溶液劑、乳劑、凍干粉針劑。這種制劑可以是含水或非水的，可含一種和/或多種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑，如水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酯等。另外，為了制備等滲注射液，可以向注射制劑中添加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油，此外，還可以添加本領(lǐng)域常規(guī)的助溶劑、緩沖劑、pH調(diào)節(jié)劑等。
本發(fā)明藥物組合物的給藥劑量取決于多種因素，例如所要預(yù)防或治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，患者或動(dòng)物的性別、年齡、體重、個(gè)體反應(yīng)、給藥途徑、給藥次數(shù)等，因此本發(fā)明的治療劑量可以有大范圍的變化。一般來(lái)講，本發(fā)明中藥學(xué)成分的使用劑量是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明組合物中最后的制劑中所含有的實(shí)際藥物數(shù)量，加以適當(dāng)調(diào)整，以達(dá)到其治療有效的要求，完成本發(fā)明的預(yù)防與治療耐藥菌感染的目的。
在開始治療前缺乏特異性診斷時(shí)，據(jù)估計(jì)，約每日0.1-200mg/Kg的劑量范圍能夠有效預(yù)防和治療耐藥菌引起的感染。
本發(fā)明另一方面涉及的是含有煙曲霉酸型甾體與多種抗生素的藥物組合物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用，尤其是在抗耐藥菌藥物中的應(yīng)用，以及預(yù)防和治療耐藥菌引起的疾病的用途。
本發(fā)明還涉及一種藥物組合，它包括分開的，或者稱分別獨(dú)立的煙曲霉酸、梭鏈孢酸及多種抗生素的制劑。在使用時(shí)，可以依次或同時(shí)將該單獨(dú)的煙曲霉酸、梭鏈孢酸制劑與多種抗生素的制劑混合或分別用藥，以最終達(dá)到使用本發(fā)明所述組合物的目的。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)1、本發(fā)明藥物組合物能有效解決細(xì)菌對(duì)多種抗生素的耐藥問(wèn)題。
2、本發(fā)明藥物組合物的成分之間具有顯著的協(xié)同增效作用，對(duì)產(chǎn)多種抗生素酶的耐藥菌具有明顯的協(xié)同抗菌作用。
3、本發(fā)明藥物組合可以減少抗生素的用量，從而相應(yīng)降低抗生素產(chǎn)生的副作用和不良反應(yīng)。
本發(fā)明為新型抗耐藥菌藥物的研制奠定了基礎(chǔ)。
具體實(shí)施例方式
以下的實(shí)施例及藥物活性實(shí)驗(yàn)用于進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但不表示實(shí)施例中所述方式是實(shí)施本發(fā)明的唯一途徑，也不意味著對(duì)本發(fā)明的任何限制。
實(shí)施例1煙曲霉酸/氯霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定和抗菌活性比較1材料與方法1.1臨床耐藥菌株臨床耐藥菌株為四川大學(xué)華西第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科從臨床患者中分離的耐多藥金黃色葡萄球菌(Staphylococcus.aureus)，菌號(hào)為13929、12334、11931、12352、12798、12760。對(duì)這些分離菌株進(jìn)行了傳代培養(yǎng)，然后用于本實(shí)施例中。
1.2藥品與試劑紅霉素、鏈霉素、氯霉素、卡那霉素、慶大霉素、四環(huán)素為Amresco公司產(chǎn)品，生化分析純；青霉素鈉為哈藥集團(tuán)制藥總廠的注射用青霉素鈉，批號(hào)為C 040710910。煙曲霉酸和梭鏈孢酸由本發(fā)明人從微生物發(fā)酵物分離制備，純度高于98％。水解蛋白胨、牛肉膏為北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司產(chǎn)品，酵母粉為日本大五榮養(yǎng)化學(xué)株式會(huì)社產(chǎn)品，葡萄糖為成都化學(xué)試劑廠產(chǎn)品。
1.3培養(yǎng)基成分水解蛋白胨6g牛肉膏1.5g無(wú)水葡萄糖1g酵母粉6g蒸餾水1000ml(煮沸10分鐘，冷卻后濾紙過(guò)濾)pH7.0～7.5 121℃ 30min滅菌1.4實(shí)驗(yàn)方法本實(shí)施例中采用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的實(shí)驗(yàn)方法(馬緒榮，蘇德模.《藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)手冊(cè)》科學(xué)出版社.P198～199.)，對(duì)本發(fā)明中氯霉素及煙曲霉酸/氯霉素組合物對(duì)耐藥金黃色葡萄球菌進(jìn)行了體外抗菌活性測(cè)定(MIC)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。
表1煙曲霉酸/氯霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，煙曲霉酸/氯霉素組合物對(duì)臨床耐多藥金黃色葡萄球菌具有較單獨(dú)使用煙曲霉酸或氯霉素更強(qiáng)的抗菌活性，表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增效作用。
本發(fā)明不限于實(shí)施例中藥物組合物的特定比例。
實(shí)施例2煙曲霉酸/紅霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定和抗菌活性比較按實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定紅霉素及煙曲霉酸/紅霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的抗菌活性，其結(jié)果見表2。
表2煙曲霉酸/紅霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，煙曲霉酸/紅霉素組合物對(duì)臨床耐多藥金黃色葡萄球菌具有較單獨(dú)使用煙曲霉酸或紅霉素更強(qiáng)的抗菌活性，表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增效作用。
本發(fā)明不限于實(shí)施例中藥物組合物的特定比例。
實(shí)施例3煙曲霉酸/鏈霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定和抗菌活性比較按實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定鏈霉素及煙曲霉酸/鏈霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的抗菌活性，其結(jié)果見表3。
表3煙曲霉酸/鏈霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，煙曲霉酸/鏈霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌具有較單獨(dú)使用煙曲霉酸或鏈霉素更強(qiáng)的抗菌活性，表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增效作用。
本發(fā)明不限于實(shí)施例中藥物組合物的特定比例。
實(shí)施例4煙曲霉酸/慶大霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定和抗菌活性比較按實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定慶大霉素及煙曲霉酸/慶大霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的抗菌活性，其結(jié)果見表4。
表4煙曲霉酸/慶大霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，煙曲霉酸/慶大霉素組合物對(duì)臨床耐多藥金黃色葡萄球菌具有較單獨(dú)使用煙曲霉酸或慶大霉素更強(qiáng)的抗菌活性，表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增效作用。
本發(fā)明不限于實(shí)施例中藥物組合物的特定比例。
實(shí)施例5煙曲霉酸/卡那霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定和抗菌活性比較按實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定卡那霉素及煙曲霉酸/卡那霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的抗菌活性，其結(jié)果見表5。
表5煙曲霉酸/卡那霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，煙曲霉酸/卡那霉素組合物對(duì)臨床耐多藥金黃色葡萄球菌具有較單獨(dú)使用煙曲霉酸或卡那霉素更強(qiáng)的抗菌活性，表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增效作用。
本發(fā)明不限于實(shí)施例中藥物組合物的特定比例。
實(shí)施例6煙曲霉酸/四環(huán)素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定和抗菌活性比較按實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定四環(huán)素及煙曲霉酸/四環(huán)素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的抗菌活性，其結(jié)果見表6。
表6煙曲霉酸/四環(huán)素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，煙曲霉酸/四環(huán)素組合物對(duì)臨床耐多藥金黃色葡萄球菌具有較單獨(dú)使用煙曲霉酸或四環(huán)素更強(qiáng)的抗菌活性，表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增效作用。
本發(fā)明不限于實(shí)施例中藥物組合物的特定比例。
實(shí)施例7煙曲霉酸/青霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定和抗菌活性比較按實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定青霉素及煙曲霉酸/青霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的抗菌活性，其結(jié)果見表7。
表7煙曲霉酸/青霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，煙曲霉酸/青霉素組合物對(duì)臨床耐多藥金黃色葡萄球菌具有較單獨(dú)使用煙曲霉酸或青霉素更強(qiáng)的抗菌活性，表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增效作用。
本發(fā)明不限于實(shí)施例中藥物組合物的特定比例。
實(shí)施例8煙曲霉酸鈉/紅霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定和抗菌活性比較按實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定紅霉素及煙曲霉酸鈉/紅霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的抗菌活性，其結(jié)果見表8。
表8煙曲霉酸鈉/紅霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，煙曲霉酸鈉/紅霉素組合物對(duì)臨床耐多藥金黃色葡萄球菌具有較單獨(dú)使用煙曲霉酸鈉或紅霉素更強(qiáng)的抗菌活性，表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增效作用。
本發(fā)明不限于實(shí)施例中藥物組合物的特定比例。
實(shí)施例9煙曲霉酸N，N-二芐基-1，2-乙二胺鹽/四環(huán)素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定和抗菌活性比較按實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定四環(huán)素及煙曲霉酸N，N-二芐基-1，2-乙二胺鹽/四環(huán)素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的抗菌活性，其結(jié)果見表9。
表9煙曲霉酸N，N-二芐基-1，2-乙二胺鹽/四環(huán)素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，煙曲霉酸N，N-二芐基-1，2-乙二胺鹽/四環(huán)素組合物對(duì)臨床耐多藥金黃色葡萄球菌具有較單獨(dú)使用煙曲霉酸N，N-二芐基-1，2-乙二胺鹽或四環(huán)素更強(qiáng)的抗菌活性，表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增效作用。
本發(fā)明不限于實(shí)施例中藥物組合物的特定比例。
實(shí)施例10梭鏈孢酸/氯霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定和抗菌活性比較按實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定氯霉素及梭鏈孢酸/氯霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的抗菌活性，其結(jié)果見表10。
表10梭鏈孢酸/氯霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，梭鏈孢酸/氯霉素組合物對(duì)臨床耐多藥金黃色葡萄球菌具有較單獨(dú)使用梭鏈孢酸或氯霉素更強(qiáng)的抗菌活性，表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增效作用。
本發(fā)明不限于實(shí)施例中藥物組合物的特定比例。
實(shí)施例11梭鏈孢酸/紅霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定和抗菌活性比較按實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定紅霉素及梭鏈孢酸/紅霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的抗菌活性，其結(jié)果見表11。
表11梭鏈孢酸/紅霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，梭鏈孢酸/紅霉素組合物對(duì)臨床耐多藥金黃色葡萄球菌具有較單獨(dú)使用梭鏈孢酸或紅霉素更強(qiáng)的抗菌活性，表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增效作用。
本發(fā)明不限于實(shí)施例中藥物組合物的特定比例。
實(shí)施例12梭鏈孢酸/鏈霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定和抗菌活性比較按實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定鏈霉素及梭鏈孢酸/鏈霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的抗菌活性，其結(jié)果見表12。
表12梭鏈孢酸/鏈霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，梭鏈孢酸/鏈霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌具有較單獨(dú)使用梭鏈孢酸或鏈霉素更強(qiáng)的抗菌活性，表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增效作用。
本發(fā)明不限于實(shí)施例中藥物組合物的特定比例。
實(shí)施例13梭鏈孢酸/慶大霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定和抗菌活性比較按實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定慶大霉素及梭鏈孢酸/慶大霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的抗菌活性，其結(jié)果見表13。
表13梭鏈孢酸/慶大霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，梭鏈孢酸/慶大霉素組合物對(duì)臨床耐多藥金黃色葡萄球菌具有較單獨(dú)使用梭鏈孢酸或慶大霉素更強(qiáng)的抗菌活性，表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增效作用。
本發(fā)明不限于實(shí)施例中藥物組合物的特定比例。
實(shí)施例14梭鏈孢酸/卡那霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定和抗菌活性比較按實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定卡那霉素及梭鏈孢酸/卡那霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的抗菌活性，其結(jié)果見表14。
表14梭鏈孢酸/卡那霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，梭鏈孢酸/卡那霉素組合物對(duì)臨床耐多藥金黃色葡萄球菌具有較單獨(dú)使用梭鏈孢酸或卡那霉素更強(qiáng)的抗菌活性，表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增效作用。
本發(fā)明不限于實(shí)施例中藥物組合物的特定比例。
實(shí)施例15梭鏈孢酸/四環(huán)素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定和抗菌活性比較按實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定四環(huán)素及梭鏈孢酸/四環(huán)素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的抗菌活性，其結(jié)果見表15。
表15梭鏈孢酸/四環(huán)素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，梭鏈孢酸/四環(huán)素組合物對(duì)臨床耐多藥金黃色葡萄球菌具有較單獨(dú)使用梭鏈孢酸或四環(huán)素更強(qiáng)的抗菌活性，表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增效作用。
本發(fā)明不限于實(shí)施例中藥物組合物的特定比例。
實(shí)施例16梭鏈孢酸/青霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定和抗菌活性比較按實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定青霉素及梭鏈孢酸/青霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的抗菌活性，其結(jié)果見表16。
表16梭鏈孢酸/青霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，梭鏈孢酸/青霉素組合物對(duì)臨床耐多藥金黃色葡萄球菌具有較單獨(dú)使用梭鏈孢酸或青霉素更強(qiáng)的抗菌活性，表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增效作用。
本發(fā)明不限于實(shí)施例中藥物組合物的特定比例。
實(shí)施例17梭鏈孢酸N-芐基-β-苯乙基胺鹽/紅霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定和抗菌活性比較按實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定紅霉素及梭鏈孢酸N-芐基-β-苯乙基胺鹽/紅霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的抗菌活性。其結(jié)果見表17。
表17梭鏈孢酸N-芐基-β-苯乙基胺鹽/紅霉素組合物對(duì)臨床耐藥金黃色葡萄球菌的體外抗菌活性測(cè)定

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，梭鏈孢酸N-芐基-β-苯乙基胺鹽/紅霉素組合物對(duì)臨床耐多藥金黃色葡萄球菌具有較單獨(dú)使用梭鏈孢酸N-芐基-β-苯乙基胺鹽或紅霉素更強(qiáng)的抗菌活性，表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增效作用。本發(fā)明不限于實(shí)施例中藥物組合物的特定比例。
實(shí)施例18煙曲霉酸同青霉素聯(lián)合使用對(duì)產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶耐藥菌的協(xié)同抗菌活性1材料與方法1.1青霉素耐藥菌株青霉素耐藥菌株為誘導(dǎo)型β-內(nèi)酰胺酶產(chǎn)生菌蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus NCPF 63509)1.2藥品與試劑青霉素鈉為哈藥集團(tuán)制藥總廠的注射用青霉素鈉，批號(hào)為C 040710910。煙曲霉酸和梭鏈孢酸由本發(fā)明人從微生物發(fā)酵物分離制備，純度大于98％。水解蛋白胨、牛肉膏為北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司產(chǎn)品，NaCl為成都科龍化工試劑廠產(chǎn)品，生化分析純。瓊脂粉為Amresco公司產(chǎn)品。
1.3培養(yǎng)基成分水解蛋白胨0.5g 蒸餾水1600mlNaCl 0.5g 牛肉膏0.3g瓊脂粉1.0％pH7.0-7.2 121℃ 30min滅菌1.4實(shí)驗(yàn)方法本實(shí)施例參照官家發(fā)等人申請(qǐng)的專利(公開號(hào)CN 1412319)和歐洲專利(GB 1489235)的方法，對(duì)本發(fā)明中煙曲霉酸、青霉素及煙曲霉酸/青霉素組合物對(duì)產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的耐藥菌進(jìn)行了體外抗菌活性測(cè)定，實(shí)施程序見下。
1.4.1測(cè)定平板的制作將瓊脂培養(yǎng)基沸水融化后，50℃水浴，待培養(yǎng)基溫度下降到50℃時(shí)，向培養(yǎng)基(100ml)加入指示菌3ml(蠟狀芽孢桿菌NCPF 63509，600nm光程1cm透光率T＝12)，青霉素2.1ml(20mg/ml)，混勻后向每個(gè)測(cè)定培養(yǎng)皿加入15ml培養(yǎng)基。瓊脂培養(yǎng)基完全凝固后，每個(gè)測(cè)定平板放入6個(gè)紙片(直徑為6mm)，其中相間3個(gè)加入測(cè)定樣品，另3個(gè)加入作為陽(yáng)性對(duì)照和活力矯正的標(biāo)準(zhǔn)物(克拉維酸)?？瞻讓?duì)照為溶解用試劑，空白對(duì)照平板為不加入青霉素的測(cè)定平板。
1.4.2陽(yáng)性對(duì)照物(克拉維酸)的抗耐藥菌活性定量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線分別以118、168、240、343、490、700、1000μg/ml的克拉維酸作為測(cè)定濃度，每個(gè)紙片加樣20μl(即2.36、3.36、4.8、6.86、9.8、14、20μg/片)，并以343μg/ml克拉維酸作為中心矯正濃度。30℃培養(yǎng)約16小時(shí)后，平板培養(yǎng)基上出現(xiàn)清晰的抑菌圈，用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑(cm)。
測(cè)得在118～1000μg/ml范圍內(nèi)，克拉維酸濃度(X)的對(duì)數(shù)與抑菌圈直徑(Y)呈線形關(guān)系。其關(guān)系可表示為Y＝0.606Ln(X)-1.5163 r＝0.9991.4.3煙曲霉酸活性的定量測(cè)定以DMSO將煙曲霉酸配制成1mg/ml的溶液，按20μl/片加入紙片(即20μg/片)。將加樣紙片放入測(cè)定平板(以及空白對(duì)照平板)中相間3個(gè)位置，另3個(gè)位置加入作為陽(yáng)性對(duì)照和活力矯正物的標(biāo)準(zhǔn)物(6.86μg/片克拉維酸)?？瞻讓?duì)照為溶解用試劑，空白對(duì)照平板為不加入青霉素的測(cè)定平板。
結(jié)果如下，測(cè)定平板中青霉素(420μg/ml)單獨(dú)作用不能抑制耐藥菌的生長(zhǎng)，而含煙曲霉酸的紙片(20μg/片)單獨(dú)作用也不能抑制耐藥菌在空白對(duì)照平板(不加入青霉素的測(cè)定平板)中的生長(zhǎng)。但是將煙曲霉酸的紙片(20μg/片)放入測(cè)定平板培養(yǎng)后，就能產(chǎn)生明顯的抑菌圈。并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)得1000μg/ml煙曲霉酸的活性相當(dāng)于1035.71μg/ml的克拉維酸活性，或1mol煙曲霉酸活性相當(dāng)于2.96mol克拉維酸活性。
以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，煙曲霉酸與青霉素的聯(lián)合使用對(duì)產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的耐藥菌具有較單獨(dú)使用煙曲霉酸或青霉素更強(qiáng)的抗菌活性，表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增效作用。
本發(fā)明不限于實(shí)施例中藥物組合物的特定比例。
實(shí)施例19梭鏈孢酸同青霉素聯(lián)合使用對(duì)產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶耐藥菌的協(xié)同抗菌活性按實(shí)施例18的操作程序進(jìn)行抗菌活性實(shí)驗(yàn)。
結(jié)果如下，測(cè)定平板中的青霉素(420μg/ml)單獨(dú)作用不能抑制耐藥菌的生長(zhǎng)，而含梭鏈孢酸的紙片(0.75μg/片)單獨(dú)作用也不能抑制耐藥菌在空白對(duì)照平板(不加入青霉素的測(cè)定平板)中的生長(zhǎng)。但是將梭鏈孢酸的紙片(0.75μg/片)放入含青霉素(420μg/ml)平板培養(yǎng)后，能產(chǎn)生明顯的抑菌圈。并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)得1000μg/ml梭鏈孢酸的活性相當(dāng)于13067μg/ml的克拉維酸活性，或1mol梭鏈孢酸活性相當(dāng)于33.7mol克拉維酸活性.
以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，梭鏈孢酸與青霉素的聯(lián)合使用對(duì)產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的耐藥菌具有較單獨(dú)使用梭鏈孢酸或青霉素更強(qiáng)的抗菌活性，表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增效作用。
本發(fā)明不限于實(shí)施例中藥物組合物的特定比例。
權(quán)利要求
1.一種煙曲霉酸型甾體在制造抗耐藥菌藥物中的新用途，其特征是具有如下結(jié)構(gòu)式特征的煙曲霉酸型甾體，可與單種或多種抗生素組合，應(yīng)用于抗耐藥菌藥物的制造； 其中，R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R9，R10，R11，R12可以為下述之一種氫原子(H)、羥基(hydroxyl)、羰基氧原子(O)、烴基(alkyl)、烯烴雙鍵(alkene)、芳基(aryl)、?；?acyl)、酰氧基(acyloxy)、烷氧基(alkoxy)、醛基(aldehyde)、鹵素(halogen)、氨基(amino)、烴氨基(alkylamino)、芳氨基(arylamino)、酰氨基(acylamino)和羧基(carboxyl)，且R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R9，R10，R11，R12不全為氫原子(H)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙曲霉酸型甾體在制造抗耐藥菌藥物中的新用途，其特征在于當(dāng)R1，R3＝雙鍵；R5，R6＝R9，R10＝O；R7＝acetoxy；R2＝R4＝R8＝R11＝R12＝H時(shí)，為如下結(jié)構(gòu)式的煙曲霉酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙曲霉酸型甾體在制造抗耐藥菌藥物中的新用途，其中當(dāng)R1＝R2＝R3＝R4＝R5＝R7＝R8＝R9＝R10＝R11＝H；R6＝R12＝hydroxyl時(shí)，為梭鏈孢酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的煙曲霉酸型甾體在制造抗耐藥菌藥物中的新用途，其特征是所述的煙曲霉酸型甾體包括其在藥學(xué)上可接收的鹽、鹽的水合物、酯或前體藥物，如與鈉、鉀和鈣、氨和胺(如普魯卡因、二芐基胺、N-芐基-β-苯乙基胺、N，N-二芐基-1，2-乙二胺等)所形成的鹽。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的煙曲霉酸型甾體在制造抗耐藥菌藥物中的新用途，其特征是參與組合的抗生素為醫(yī)學(xué)上應(yīng)用的β-內(nèi)酰胺類或非β-內(nèi)酰胺類抗生素，包括青霉素、紅霉素、鏈霉素、氯霉素、卡那霉素、慶大霉素、四環(huán)素等。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的煙曲霉酸型甾體在制造抗耐藥菌藥物中的新用途，其特征在于煙曲霉酸型甾體與抗生素組合的重量配比范圍為1∶10000～64∶1。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的煙曲霉酸型甾體在制造抗耐藥菌藥物中的新用途，其特征在于煙曲霉酸與氯霉素的重量配比范圍為1∶8～64∶1，優(yōu)選的是1∶4～16∶1，更優(yōu)選的是1∶2～8∶1；煙曲霉酸與紅霉素的重量配比范圍為1∶500～64∶1，優(yōu)選的是1∶64～8∶1，更優(yōu)選的是1∶8～2∶1；煙曲霉酸與鏈霉素的重量配比范圍為1∶64～64∶1，優(yōu)選的是1∶4～16∶1，更優(yōu)選的是1∶2～8∶1；煙曲霉酸與慶大霉素的重量配比范圍為1∶8～64∶1，優(yōu)選的是1∶8～16∶1，更優(yōu)選的是1∶4～8∶1；煙曲霉酸與卡那霉素的重量配比范圍為1∶128～64∶1，優(yōu)選的是1∶16～4∶1，更優(yōu)選的是1∶16～1∶1；煙曲霉酸與四環(huán)素的重量配比范圍為1∶64～64∶1，優(yōu)選的是1∶8～8∶1，更優(yōu)選的是1∶4～4∶1；煙曲霉酸與青霉素的重量配比范圍為1∶64～64∶1，優(yōu)選的是1∶64～4∶1，更優(yōu)選的是1∶4～4∶1。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的煙曲霉酸型甾體在制造抗耐藥菌藥物中的新用途，其特征在于梭鏈孢酸與氯霉素的重量配比范圍為1∶80～8∶5，優(yōu)選的是1∶80～2∶5，更優(yōu)選的是1∶40～1∶5；梭鏈孢酸與紅霉素的重量配比范圍為1∶10000～8∶5，優(yōu)選的是1∶5000～1∶5，更優(yōu)選的是1∶1280～1∶10；梭鏈孢酸與鏈霉素的重量配比范圍為1∶640～8∶5，優(yōu)選的是1∶80～2∶5，更優(yōu)選的是1∶40～1∶5；梭鏈孢酸與慶大霉素的重量配比范圍為1∶320～8∶5，優(yōu)選的是1∶40～4∶5，更優(yōu)選的是1∶40～1∶5；梭鏈孢酸與卡那霉素的重量配比范圍為1∶1280～8∶5，優(yōu)選的是1∶640～4∶5，更優(yōu)選的是1∶640～1∶10；梭鏈孢酸與四環(huán)素的重量配比范圍為1∶1280～8∶5，優(yōu)選的是1∶160～1∶5，更優(yōu)選的是1∶160～1∶10；梭鏈孢酸與青霉素的重量配比范圍為1∶1280～8∶5，優(yōu)選的是1∶80～2∶5，更優(yōu)選的是1∶80～1∶10。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的煙曲霉酸型甾體在制造抗耐藥菌藥物中的新用途，其特征是所述的藥物給藥劑型是液體劑型或固體劑型；給藥途徑為注射給藥或口服給藥或涂抹給藥。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的煙曲霉酸型甾體在制造抗耐藥菌藥物中的新用途，其特征是在使用時(shí)，可以依次或同時(shí)將該單獨(dú)的煙曲霉酸、梭鏈孢酸制劑與多種抗生素的制劑混合或分別用藥。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種煙曲霉酸型甾體在制造抗耐藥菌藥物中的新用途，包括煙曲霉酸、梭鏈孢酸及其在藥學(xué)上可接收的鹽、鹽的水合物、酯或前體藥物與單種或多種抗生素組合，應(yīng)用于抗耐藥菌藥物的制造。本發(fā)明藥物組合物能有效解決細(xì)菌對(duì)多種抗生素的耐藥問(wèn)題，組合物成分之間具有顯著的協(xié)同增效作用，對(duì)產(chǎn)多種抗生素酶的耐藥菌具有明顯的協(xié)同抗菌作用，可減少抗生素的用量，從而相應(yīng)降低抗生素產(chǎn)生的副作用和不良反應(yīng)。
文檔編號(hào)A61P31/04GK1943580SQ20051002182
公開日2007年4月11日 申請(qǐng)日期2005年10月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月8日
發(fā)明者秦嶺, 官家發(fā), 李伯剛, 范成英, 廖連華, 何開澤, 張國(guó)林 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所