專利名稱：豬白細(xì)胞介素6基因與CpG分子融合抗感染免疫制劑的制備及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
1.生物技術(shù) 2.分子免疫學(xué)背景技術(shù)CpG ODN是指含有CpG基序(以非甲基化胞嘧啶鳥嘌呤為基元構(gòu)成的特定核苷酸序列結(jié)構(gòu))的寡聚核苷酸序列。研究表明，CpG ODN對(duì)天然和獲得性免疫系統(tǒng)具有廣泛的刺激作用，是全譜非特異性免疫增強(qiáng)劑。CpG ODN作為佐劑，可明顯促進(jìn)Th1型免疫應(yīng)答的產(chǎn)生。其與不完全弗氏佐劑(IFA)聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)甚至強(qiáng)于完全弗氏佐劑(CFA)。即使與Th2型佐劑如氫氧化鋁合用亦可明顯促進(jìn)免疫應(yīng)答的產(chǎn)生，且Th1型應(yīng)答明顯強(qiáng)于Th2型應(yīng)答。CpG ODN能直接激活B細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、抗原提呈細(xì)胞等，間接激活T細(xì)胞、NK細(xì)胞，誘導(dǎo)以Th1型為主的免疫應(yīng)答，是一種高效低毒的免疫佐劑。CpG ODN在基因疫苗、免疫缺陷性疾病、腫瘤、感染性疾病及過敏性疾病的治療中有著強(qiáng)大的潛在應(yīng)用價(jià)值。
IL-6是迄今發(fā)現(xiàn)的功能最為廣泛的細(xì)胞因子之一，它可以促進(jìn)多種細(xì)胞的增殖和分化。IL-6可由各種淋巴細(xì)胞和非淋巴細(xì)胞所產(chǎn)生，其產(chǎn)生可對(duì)各種刺激應(yīng)答。成纖維細(xì)胞、單核細(xì)胞、某些T細(xì)胞系等都可以產(chǎn)生IL-6。特別由于T細(xì)胞在表位DNA疫苗、T細(xì)胞疫苗及常規(guī)疫苗所引起的特異性免疫反應(yīng)中起關(guān)鍵作用，應(yīng)用IL-6基因作為免疫增強(qiáng)劑有重要的理論和應(yīng)用價(jià)值。
CpG寡聚核苷酸一般通過PCR擴(kuò)增得到，還需純化使用，大規(guī)模應(yīng)用時(shí)成本偏高。為了降低成本以便生產(chǎn)應(yīng)用，進(jìn)一步探討免疫刺激序列CpG寡聚核苷酸插入質(zhì)粒應(yīng)用的效果以及免疫刺激序列CpG-ODN與細(xì)胞因子之間是否存在協(xié)同作用，本研究設(shè)計(jì)了兩條新型CpG ODN，應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增后，將其中一條CpG ODN1導(dǎo)入真核載體VR1012中，構(gòu)建了CpG1寡聚核苷酸的重組真核表達(dá)質(zhì)粒VR1C；將另一條CpG ODN2導(dǎo)入含有豬白細(xì)胞介素-6的真核載體VPIL6中，構(gòu)建了重組豬白細(xì)胞介素6基因與CpG2寡聚核苷酸質(zhì)粒VR6C。
殼聚糖是天然生物多糖甲殼質(zhì)的脫乙?；苌?，具有很好的生物相容性、可被體內(nèi)多種酶類降解、降解產(chǎn)物安全無毒，并能被生物體完全吸收；而且由于其具有獨(dú)特的聚陽離子特性，已有的研究結(jié)果顯示它是一種具有很大潛力的緩釋材料。近年來，在基因轉(zhuǎn)染表達(dá)研究領(lǐng)域已出現(xiàn)了基于殼聚糖的納米顆粒系統(tǒng)。大量研究表明，殼聚糖可包裹濃縮DNA，形成小的分散顆粒，將殼聚糖DNA復(fù)合物用于基因運(yùn)載和轉(zhuǎn)染表達(dá)時(shí)，能有效攜帶目的基因進(jìn)入靶細(xì)胞中。包封于殼聚糖顆粒中的物質(zhì)，其釋放率主要決定于殼聚糖的生物降解和溶蝕，因此物質(zhì)釋放明顯延長。初步研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)基于殼聚糖的顆粒系統(tǒng)在生物醫(yī)學(xué)方面具有廣闊的應(yīng)用前景。
由于殼聚糖納米顆粒良好的生物相容性使其在DNA制劑的包裹應(yīng)用中顯示了廣闊的前景，本發(fā)明首次將殼聚糖納米顆粒包裹的重組豬白細(xì)胞介素6基因與CpG2寡聚核苷酸質(zhì)粒VR6C和插入CpG1寡聚核苷酸的真核表達(dá)質(zhì)粒VR1C組合免疫豬，并以殼聚糖納米顆粒包裹的空質(zhì)粒載體為對(duì)照，觀察了重組質(zhì)粒組合對(duì)豬的免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)效應(yīng)，探討豬IL-6基因、CpG寡聚核苷酸及其不同組合對(duì)豬免疫機(jī)能效應(yīng)的影響，為研制高效安全、效應(yīng)持久的新型免疫增強(qiáng)劑奠定初步基礎(chǔ)，為應(yīng)用新技術(shù)防治疾病提供依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所解決的技術(shù)問題具體包括重組豬白細(xì)胞介素6基因與CpG2寡聚核苷酸質(zhì)粒VR6C的構(gòu)建、插入CpG1寡聚核苷酸的真核表達(dá)質(zhì)粒VR1C的構(gòu)建，殼聚糖納米顆粒對(duì)VR1C+VR6C重組真核質(zhì)粒的分子包裝及其增強(qiáng)動(dòng)物免疫應(yīng)答和免疫保護(hù)力的應(yīng)用技術(shù)。該方法包括下列步驟1、CpG寡聚核苷酸序列及其引物的設(shè)計(jì)、合成CpGODN1全序列5’>CGCTGCAGAACGTTGTCGTCAACGTTGTCGTCAAGCTTGACGTTATCGATGGCGTTGACGTTGACGTCATCGATGTCGTTCTGCAGCG<3’CpGODN1序列引物P15’>CGCTGCAGAACGTTGTC<3’P25’>CGCTGCAGAACGACATCG<3’CpGODN2全序列5’>CGAGATCTAACGTTGTCGTCGACGTCGTCGTCAGGCCTGACGTTATCGATGGCGTTGTCGTCAACGTTGTCGTTAACGTTAGATCTCG<3’CpGODN2序列引物P35’>CGAGATCTAACGTTGTC<3’P45’>CGAGATCTAACGTTAAC<32、免疫用CpG寡聚核苷酸制備以合成的CpG序列為模版，利用PCR(多聚酶連鏈?zhǔn)椒磻?yīng))擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物溶解于滅菌生理鹽水，用紫外分光光度計(jì)測其濃度。
3、重組豬白細(xì)胞介素6基因與CpG2寡聚核苷酸質(zhì)粒及插入CpG1寡聚核苷酸的真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建將擴(kuò)增后CpGODN1導(dǎo)入真核載體VR1012中，經(jīng)HindIII酶切鑒定，該CpGODN1序列已成功插入到VR1012中，插入CpG1寡聚核苷酸的真核表達(dá)質(zhì)粒命名為VR1C。將擴(kuò)增后CpGODN2導(dǎo)入含有豬白細(xì)胞介素-6基因的真核載體VPIL6中，經(jīng)Stu I酶切鑒定，該CpGODN2序列已成功插入到VPIL6中，重組豬白細(xì)胞介素6基因與CpG2寡聚核苷酸質(zhì)粒命名為VR6C。
4、納米粒的制備利用離子交聯(lián)法，以分子量150000，脫乙酰度95％以上的殼聚糖制備納米包裝顆粒，將殼聚糖溶液(pH5.5)和VR1C+VR6C質(zhì)粒組合、VR1020質(zhì)粒(含適當(dāng)濃度三聚磷酸鹽)溶液50℃水浴分別恒溫20min，然后均勻混合質(zhì)粒溶液和殼聚糖溶液5min，即得質(zhì)粒殼聚糖納米顆粒樣品液。
5、免疫用質(zhì)粒DNA的大量制備接種含有重組真核表達(dá)質(zhì)粒VR1C、VR6C單菌落于含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基，37℃振搖過夜；離心后收集菌體；加入溶液I懸浮菌體，加入溶液II，翻轉(zhuǎn)混合后，冰浴加入溶液III，翻轉(zhuǎn)混合，冰?。浑x心后轉(zhuǎn)移上清至新的離心管，加入異丙醇，-20℃放置，離心去上清，Tris.Cl溶解DNA，加入亞精胺、異丙醇、70％乙醇純化質(zhì)粒，溶解于滅菌生理鹽水，調(diào)節(jié)濃度為3pmol/μl。
6、質(zhì)粒組合殼聚糖納米顆粒抗感染制劑的應(yīng)用選擇3周齡小豬20只，隨機(jī)分為2組，每組10只。采用肌肉注射法，每頭質(zhì)粒劑量0.5mg/頭，一組免疫殼聚糖納米顆粒包裹VRlC+VR6C質(zhì)粒組合，另一組為對(duì)照組，免疫殼聚糖納米顆粒包裹VR1020空載體。所有豬按該養(yǎng)豬場常規(guī)免疫程序接種疫苗1周齡免疫接種藍(lán)耳病疫苗；2周齡免疫接種偽狂犬病疫苗。3周齡在免疫注射基因制劑時(shí)同時(shí)免疫接種豬瘟疫苗。
豬自免疫后第0，1，2，4，6，8周前腔靜脈采血，分離血清，用以檢測體液免疫反應(yīng)。酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)按照常規(guī)ELSA方法。
檢測了各組豬只的體液免疫(IgG、IgA及IgM的含量、特異性抗體的測定)和細(xì)胞免疫水平(細(xì)胞因子和外周血免疫細(xì)胞數(shù)量)的影響情況，并對(duì)不同形式的質(zhì)粒作用下細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答的變化，進(jìn)行了較為系統(tǒng)地分析。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)以殼聚糖納米顆粒包裹重組豬白細(xì)胞介素6基因與CpG2寡聚核苷酸質(zhì)粒VR6C和插入CpG1寡聚核苷酸的真核表達(dá)質(zhì)粒VR1C組合作為免疫增強(qiáng)劑時(shí)，與豬瘟疫苗、豬藍(lán)耳病疫苗聯(lián)合使用，豬只的IgG、IgA、IgM含量和血清IL-2、IL-4、IL-6等細(xì)胞因子水平比對(duì)照組顯著升高；同時(shí)，淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等免疫細(xì)胞數(shù)量也明顯增加；對(duì)疫苗的特異性免疫應(yīng)答也顯著加強(qiáng)。
這些結(jié)果表明殼聚糖納米顆粒包裝重組豬白細(xì)胞介素6基因與CpG2寡聚核苷酸質(zhì)粒VR6C和插入CpG1寡聚核苷酸的真核表達(dá)質(zhì)粒VR1C組合能顯著提高豬只的免疫應(yīng)答水平，提高機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫水平，增強(qiáng)免疫應(yīng)答及免疫保護(hù)力，可望作為有效的新型畜用抗感染免疫調(diào)節(jié)劑，具有潛在的廣泛應(yīng)用前景。


圖1 VR1C轉(zhuǎn)化子質(zhì)粒HindIII酶切電泳圖譜1λDNA EcoRI/HindIII雙酶切Marker2重組子質(zhì)粒3重組子質(zhì)粒HindIII酶切圖2 VR1C轉(zhuǎn)化子質(zhì)粒Pst I酶切電泳圖譜1重組子質(zhì)粒2重組子質(zhì)粒Pst I酶切3DL2000 Marker圖3 重組質(zhì)粒VP6C的酶切圖譜1marker(Lambda EcoR I/HindIII)2VR6C質(zhì)粒3VR6C質(zhì)粒用stuI單酶切圖4 免疫豬血清中IgG含量圖5 免疫豬血清中IgA含量圖6 免疫豬血清中IgM含量圖7 免疫豬血清中豬瘟特異性抗體含量圖8 免疫組豬血清中豬藍(lán)耳病特異性抗體含量圖9 免疫豬血清中IL-2含量圖10 免疫豬血清中IL-4含量圖11 免疫豬血清中IL-6含量圖12 免疫豬白細(xì)胞數(shù)量變化圖13 免疫豬單核細(xì)胞數(shù)量變化圖14 免疫豬淋巴細(xì)胞數(shù)量變化圖15 免疫豬中性粒細(xì)胞數(shù)量變化具體實(shí)施方式
1、CpG寡聚核苷酸序列及其引物的設(shè)計(jì)、合成CpGODN1全序列5’>CGCTGCAGAACGTTGTCGTCAACGTTGTCGTCAAGCTTGACGTTATCGATGGCGTTGACGTTGACGTCATCGATGTCGTTCTGCAGCG<3’CpGODN1序列引物P15’>CGCTGCAGAACGTTGTC<3’P25’>CGCTGCAGAACGACATCG<3’CpGODN2全序列5’>CGAGATCTAACGTTGTCGTCGACGTCGTCGTCAGGCCTGACGTTATCGATGGCGTTGTCGTCAACGTTGTCGTTAACGTTAGATCTCG<3’CpGODN2序列引物P35’>CGAGATCTAACGTTGTC<3’P45’>CGAGATCTAACGTTAAC<32、免疫用CpG寡聚核苷酸制備以合成的CpG序列為模版，利用PCR(多聚酶連鏈?zhǔn)椒磻?yīng))擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物溶解于滅菌生理鹽水，用紫外分光光度計(jì)測其濃度。
3、重組豬白細(xì)胞介素6基因與CpG2寡聚核苷酸質(zhì)粒及插入CpG1寡聚核苷酸的真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建將擴(kuò)增后CpGODN1與經(jīng)Pst I酶切的真核載體VR1012連接、轉(zhuǎn)化，經(jīng)HindIII、PstI酶切鑒定篩選重組質(zhì)粒，將插入CpG1寡聚核苷酸的真核表達(dá)質(zhì)粒命名為VR1C。將含CpGODN2的重組質(zhì)粒用BglII酶切后與VPIL6質(zhì)粒BglII酶切、脫磷酸化的DNA在T4 DNA連接酶作用下進(jìn)行連接反應(yīng)。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)化子經(jīng)酶切Stu I鑒定，得到含有目的CpG2片段的重組質(zhì)粒，將重組豬白細(xì)胞介素6基因與CpG2寡聚核苷酸質(zhì)粒命名為VR6C。
結(jié)果見說明書附圖1、2、3。圖1顯示在卡那平板上挑取單菌落，接菌培養(yǎng)提取質(zhì)粒后用HindIII酶切，電泳結(jié)果顯示重組子質(zhì)粒被切成兩條2000多bp的條帶，與預(yù)期相符。圖2顯示用Pst I酶切重組質(zhì)粒，切出一小片段，通過與DL2000Marker對(duì)比，略小于100bp，與CpGODN1大小相符，從而說明CpG1片段已被正確連接到載體VR1012上。圖3顯示VPIL6質(zhì)粒沒有Stu I酶切位點(diǎn)，而CpGODN2有Stu I酶切位點(diǎn)，重組質(zhì)粒被Stu I酶切成一條帶，說明重組豬白細(xì)胞介素6基因與CpG2寡聚核苷酸質(zhì)粒已構(gòu)建成功。
4、納米顆粒的制備以分子量150000，脫乙酰度95％以上的殼聚糖分散在1％醋酸溶液中(A液)；分別將VR1C、VR6C、VR1C+VR6C質(zhì)粒溶解于三聚磷酸鹽溶液(B液)。將A液、B液置于50℃水浴分別恒溫20min，將DNA溶液按一定比例(氨基摩爾數(shù)與DNA的磷酸酯基摩爾數(shù)比)加入殼聚糖溶液，磁力攪拌使其充分混合，靜置過濾得到粒徑40-60nm的復(fù)合物微粒，即為質(zhì)粒殼聚糖納米顆粒樣品液。
6、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的免疫選擇3周齡小豬20只，隨機(jī)分為2組，每組10只。采用肌肉注射法，每頭質(zhì)粒劑量0.5mg/頭，一組免疫殼聚糖納米顆粒包裹VR1C+VR6C質(zhì)粒組合，另一組為對(duì)照組，免疫殼聚糖納米顆粒包裹VR1020空載體。所有豬按該養(yǎng)豬場常規(guī)免疫程序接種疫苗1周齡免疫接種藍(lán)耳病疫苗；2周齡免疫接種偽狂犬疫苗。3周齡在免疫注射基因制劑時(shí)同時(shí)免疫接種豬瘟疫苗。
動(dòng)物免疫分組見說明書表1。
表1 免疫豬分組

注CNP殼聚糖納米顆粒7、殼聚糖納米顆粒包裝VR1C+VR6C質(zhì)粒組合對(duì)豬特異性免疫應(yīng)答的影響豬自免疫后第0，1，2，4，6，8周前腔靜脈采血，分離血清，用以檢測各項(xiàng)免疫指標(biāo)。
(1)IgG、IgA及IgM的測定含量實(shí)驗(yàn)豬血清分別作105(IgG)和104(IgM、IgA)稀釋包被Costar酶標(biāo)板，用特異性的兔抗豬IgG、IgM和IgA重鏈抗體(美國Bethyl公司生產(chǎn))作一抗，酶標(biāo)羊抗兔IgG為二抗(華美生物工程公司)，TMB(四甲基聯(lián)苯胺)為底物，測定豬血清中IgG、IgM和IgA含量。
結(jié)果見說明書附圖4、5、6。從圖中可見，豬只在注射殼聚糖納米顆粒包裝的重組豬白細(xì)胞介素6基因與CpG2寡聚核苷酸質(zhì)粒VR6C和插入CpGl寡聚核苷酸的真核表達(dá)質(zhì)粒VR1C組合后，其血清中IgG、IgA、IgM含量比對(duì)照組有顯著增高。
(2)特異性抗體的測定間接ELISA法。用豬瘟抗原、豬藍(lán)耳病抗原包被Costar酶標(biāo)板，實(shí)驗(yàn)豬血清100倍稀釋為一抗，TMB(四甲基聯(lián)苯胺)為底物，測定豬血清中豬瘟、豬藍(lán)耳病特異性抗體含量。
結(jié)果見說明書附圖7、8。圖7、8顯示了豬瘟疫苗、豬藍(lán)耳病疫苗與相應(yīng)VR6C和VR1C組合聯(lián)合免疫動(dòng)物后豬只特異性抗體變化情況。結(jié)果顯示動(dòng)物在免疫一周后，就檢測到特異性抗體的產(chǎn)生，免疫組豬特異性抗體含量比對(duì)照組顯著提高(P＜0.05)。
(3)細(xì)胞因子的檢測實(shí)驗(yàn)豬血清100倍稀釋包被Costar酶標(biāo)板，兔抗豬IL2、IL4、IL6 IgG抗體(武漢博士德生物工程公司提供)為一抗，TMB(四甲基聯(lián)苯胺)為底物，SABC法檢測血清中IL2、IL4及IL6含量，觀測豬細(xì)胞免疫應(yīng)答情況。
結(jié)果見說明書附圖9、10、11。由圖可知，VR6C和VR1C組合免疫豬血清中IL-2、IL-4和IL-6的含量均較對(duì)照組明顯升高(P＜0.05)。
(4)免疫豬外周血免疫細(xì)胞數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化血球自動(dòng)分類計(jì)數(shù)儀分類計(jì)數(shù)中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞核、淋巴細(xì)胞。
結(jié)果見說明書附圖12、13、14、15。免疫豬外周血免疫細(xì)胞數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化是考察豬只細(xì)胞免疫應(yīng)答的一個(gè)重要指標(biāo)。結(jié)果顯示殼聚糖納米顆粒包裝重組豬白細(xì)胞介素6基因與CpG2寡聚核苷酸質(zhì)粒VR6C和插入CpG1寡聚核苷酸的真核表達(dá)質(zhì)粒VR1C組合免疫豬后，免疫豬只外周血白細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組都有顯著增加。
8、數(shù)據(jù)分析上述各種數(shù)據(jù)均用方差分析進(jìn)行差異顯著性比較，以P＜0.05為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。
權(quán)利要求
1.豬白細(xì)胞介素6基因與CpG分子融合抗感染免疫制劑的制備及應(yīng)用，其特點(diǎn)包括重組豬白細(xì)胞介素6基因與CpG2寡聚核苷酸質(zhì)粒VR6C的構(gòu)建、插入CpG1寡聚核苷酸的真核表達(dá)質(zhì)粒VR1C的構(gòu)建，殼聚糖納米顆粒對(duì)VR1C+VR6C質(zhì)粒組合進(jìn)行分子包裝制備基因納米顆粒制劑，并將此基因制劑應(yīng)用于增強(qiáng)豬機(jī)體免疫應(yīng)答及抗感染免疫力的應(yīng)用技術(shù)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬白細(xì)胞介素6基因與CpG分子融合抗感染免疫制劑的制備，其特征在于所述的免疫制劑包括豬白細(xì)胞介素6基因與CpG2寡聚核苷酸重組質(zhì)粒VR6C和插入CpG1寡聚核苷酸的真核表達(dá)質(zhì)粒VR1C組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬白細(xì)胞介素6基因與CpG分子融合抗感染免疫制劑的制備，其特征在于所述的免疫制劑的包裹材料是分子量為150000，脫乙酰度95％以上的殼聚糖，用離子交聯(lián)法制備的殼聚糖納米顆粒分子。
4.使用權(quán)利要求1要求的豬白細(xì)胞介素6基因與CpG分子融合抗感染免疫制劑作為豬用新型抗感染分子免疫調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用技術(shù)，其特征在于以下兩方面a)將制備的重組豬白細(xì)胞介素6基因與CpG2寡聚核苷酸質(zhì)粒和插入CpG1寡聚核苷酸的真核表達(dá)質(zhì)粒組合納米顆粒以肌肉注射的投遞方式免疫豬只，以殼聚糖納米顆粒包裝VR1020空質(zhì)粒為對(duì)照，檢測了殼聚糖包裝VR1C+VR6C質(zhì)粒組合對(duì)豬的體液免疫(IgG、IgA及IgM的含量、特異性抗體的測定)和細(xì)胞免疫水平(細(xì)胞因子和外周血免疫細(xì)胞數(shù)量)的影響情況，進(jìn)行了較為系統(tǒng)地分析；b)以制備的殼聚糖VR1C+VR6C質(zhì)粒組合納米顆粒聯(lián)合疫苗(豬瘟疫苗、豬藍(lán)耳病疫苗)共免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，結(jié)果表明殼聚糖VR1C+VR6C質(zhì)粒組合納米顆粒可顯著增強(qiáng)豬對(duì)疫苗的細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答反應(yīng)，增強(qiáng)免疫保護(hù)水平。
全文摘要
本發(fā)明構(gòu)建了豬白細(xì)胞介素6基因與CpG2寡聚核苷酸重組質(zhì)粒VR6C，構(gòu)建了插入CpG1寡聚核苷酸的真核表達(dá)質(zhì)粒VR1C，以分子量為150000、脫乙酰度95％以上的殼聚糖制備了殼聚糖納米顆粒，提供了利用殼聚糖納米顆粒對(duì)VR1C+VR6C質(zhì)粒組合進(jìn)行分子包裝制備納米顆粒免疫制劑的方法，公開了該納米顆粒免疫制劑作為新型抗感染分子免疫增強(qiáng)劑的應(yīng)用技術(shù)。該方法包括殼聚糖納米顆粒包裝VR1C+VR6C質(zhì)粒組合，將此制備納米顆粒免疫制劑以肌肉注射方式協(xié)同疫苗免疫豬，增強(qiáng)豬特異細(xì)胞和體液免疫機(jī)能，提供了殼聚糖納米顆粒包裝VR1C+VRIL6C質(zhì)粒組合作為新型融合抗感染免疫制劑的應(yīng)用技術(shù)。
文檔編號(hào)A61P37/00GK1954884SQ20051002195
公開日2007年5月2日 申請(qǐng)日期2005年10月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月28日
發(fā)明者武梅, 高榮, 李江凌, 王澤州, 呂學(xué)斌, 吳凱源, 謝曌, 王穎玉, 趙鐘鐘, 陳茜 申請(qǐng)人:四川大學(xué)