專利名稱：一種含氧化苦參堿、黃芩苷的藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種治療乙型肝炎的藥物組合物。具體是涉及含氧化苦參堿和黃芩苷的一種治療乙型肝炎的藥物組合物。
背景資料氧化苦參堿(Oxymatrine)是從中藥苦參根和苦豆子中提取的化合物，分子式為C15H24N2O2，相對分子質量為264.4。近年來臨床上發(fā)現(xiàn)其有較好的抗炎、免疫調節(jié)、抗乙型肝炎病毒作用。
黃芩為唇形科植物黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的干燥根，具有清熱燥濕、瀉火解毒的作用，臨床上主要用于治療呼吸道感染、肝炎和其他炎癥。黃芩主要成分為黃芩苷(Baicailin)，分子式為C21H18O11，相對分子質量為446.35。黃芩苷為黃酮類化合物，在黃芩根中含量約9％～14％。黃芩苷在甲醇、乙醇中微溶、不溶于水(黃芩苷的物化常數(shù)測定，沈陽藥科大學學報，2000，Vol17，No.2，P105-106)?，F(xiàn)代藥理學研究表明黃芩苷有多種藥理作用，如廣譜抗菌作用、抗病毒、抗炎、保肝利膽、免疫調節(jié)、抗腫瘤、降血壓和鎮(zhèn)靜等作用，另外黃芩苷還有降血脂、抑制前列腺素合成和有抗氧化等作用。黃芩苷不溶于水，因此大大限制了其在制備人體可利用的藥品上的應用和臨床上的應用。
病毒性肝炎是一種世界性的常見病、疑難病，我國屬于流行乙型肝炎的“重災區(qū)”。據(jù)預測，我國表面抗原(HBsAg)陽性者即感染乙型肝炎病毒者有1.2億人以上，而由乙型肝炎引起的肝功能不正常者有3000萬人，部分病人(約占乙肝患者的10％)可發(fā)展為肝硬化、肝癌，嚴重地威脅著人民的健康。
目前，國內用于乙型肝炎治療的藥物品種甚多，歸納起來大體可分為3類一、抗病毒藥主要有干擾素(IFN)和核苷類藥物。干擾素有α-IFN、β-IFN、γ-IFN 3種，其中以α-IFN作用最強。α-IFN治療慢性乙型肝炎的療效在30％-40％。療效較好，但療程長(一般6-12個月)、易復發(fā)(停藥6個月至1年內大部分病人會復發(fā))、藥費相當昂貴(一個療程數(shù)萬元人民幣)。主要適用于病程短、轉氨酶高、HBV-DNA水平低(小于100pg.ml-1)和HbeAgd的P/N偏低(P/N 5-8)、無免疫抑制現(xiàn)象的乙型肝炎患者。核苷類藥物主要有拉米夫定等，療效較好，但停藥后大多數(shù)患者出現(xiàn)病毒血癥，拉米夫定長療程還可誘發(fā)DNA聚合酶YMDD變異的產生。
二、改善肝功能藥改善肝功能藥又稱保肝藥或抗肝細胞損傷藥，如聯(lián)苯雙酯、肝細胞生長因子、甘草甜素、水飛薊素及多數(shù)中草藥制劑。
三、免疫調節(jié)藥免疫調節(jié)藥有胸腺肽、白細胞介素-2、轉移因子和香菇多糖等，這類藥治療乙型肝炎的療效尚待肯定，藥費較昂貴，且有副反應。
由上述可見，目前尚無滿意的治療乙型肝炎藥物，要解決我國千百萬乙型肝炎病人的冶療問題，迫切需要創(chuàng)制更好的新藥。治病必須求根，乙型肝炎由病毒引起，欲想徹底治愈肝炎，關鍵還是尋找有效的抗病毒藥物。面對我國國情，從中草藥中挖掘和開辟新的具有抗病毒、改善肝功能及提高免疫功能的多靶點藥物，是重要的抗乙型肝炎新藥研制方向。
為此本發(fā)明采用國際上通用的HepG2.2.15細胞株為模型，評估不同配伍比例的氧化苦參堿與黃芩苷抗乙型肝炎病毒的作用，并評估了氧化苦參堿、黃芩苷聯(lián)合用藥時保肝降酶作用。

發(fā)明內容
本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，氧化苦參堿與黃芩苷以一定的比例組合能夠有效地抑制HepG2.2.15細胞分泌乙肝病毒表面抗原(Hepatitis B viral surface antigen，HBsAg)和乙肝病毒e抗原(HepatitisB viral e antigen，HBeAg)，而且對HBeAg的抑制程度明顯優(yōu)于HBsAg。特別在氧化苦參堿∶黃芩苷在7∶1至11∶1之間效果更佳，尤其是氧化苦參堿∶黃芩苷為9∶1時效果最佳。按照該比例配制的氧化苦參堿與黃芩苷對乙肝病毒抗原的抑制效果明顯優(yōu)于單獨使用氧化苦參堿或者黃芩苷，提示按照這種比例配制的氧化苦參堿與黃芩苷在抗乙肝病毒方面存在協(xié)同作用，極有可能成為很有前途的治療乙型肝炎病毒感染的新藥物。
本發(fā)明中采用了HepG2.2.15細胞株為體外抗HBV藥物的篩選細胞模型。HepG2.2.15細胞株是一種國內外通用的細胞模型，廣泛用于體外抗HBV藥物的篩選。HepG2.2.15細胞株是通過將克隆HBV DNA及抗G418抗體質粒共轉染人肝癌細胞系HepG2細胞而建立的，能長期穩(wěn)定地向培養(yǎng)上清液中分泌HBsAg、HBeAg和完整的Dane顆粒，并能產生大量的病毒復制中間體。HBsAg和HBeAg是分泌到HepG 2.2.15細胞培養(yǎng)上清液中的可溶性蛋白質，能夠間接地反映病毒復制狀況。觀察HepG 2.2.15細胞分泌HBV抗原的變化，可以判斷藥物的療效。HBV基因組有4個開放讀碼區(qū)S、C、P和X基因區(qū)，分別編碼不同的抗原產物。它們的基因表達分別由各自獨立的啟動子調控。HBeAg是由3.5kb的前C基因組mRNA編碼產生相對分子質量為24×103的多肽，然后轉運到內質網和高爾基體，并經細胞蛋白酶剪切后形成相對分子質量為16×103的HBeAg，最后分泌到細胞外。HBsAg是由S基因區(qū)轉錄產生的2.1kb和2.4kb的mRNA翻譯產生，單獨或包裝成HBV的外殼再分泌到細胞外。
本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿黃芩苷復方還具有較強的保肝利膽作用，優(yōu)于單獨使用氧化苦參堿。
另外本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)，氧化苦參堿能夠增加黃芩苷在水中的溶解度，對黃芩苷有增溶作用。本發(fā)明的研究發(fā)現(xiàn)解決了黃芩苷不溶于水的問題，改善了黃芩苷在體內的吸收，擴大了黃芩苷在藥物制備和臨床上的應用，具有重大的意義。
本發(fā)明中的氧化苦參堿和黃芩苷的藥物組合物可制備成治療乙型肝炎、保肝利膽的藥物，可以是口服制劑，如片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液等；或胃腸道外給藥制劑如凍干粉針、注射液、輸液等。
具體實施例方式一、材料1、藥物氧化苦參堿，黃芩苷，由上海凱銳斯公司提供。
2、試劑MEM培養(yǎng)基干粉，美國GIBCO產品(Cat.No.61100-053，Lot No.1334591)。胎牛血清，美國HyClone產品(Cat No.SH30070，Lot No.APJ22103)。G418，購自上海捷倍思基因技術有限公司(LotNo.11023)。谷氨酰胺、EDTA，上海實生細胞生物技術有限公司分裝。四甲基偶氮唑藍(MTT)(SERVA產品)，HBsAg、HBeAg酶聯(lián)免疫試劑盒，購自華美生物公司。青霉素、鏈霉素，上海先鋒藥業(yè)公司產品。其余常用試劑為分析純。
3、實驗用品及儀器培養(yǎng)皿、培養(yǎng)板，美國Coming公司產品。CO2培養(yǎng)箱、HEALFORCE生物安全柜，德國Heraeus公司制造。Labsystems Multiskan MS Microplate Reader(酶標儀)，芬蘭制造。倒置顯微鏡(XDS-1B)，上海生產。微量移液器，購自法國Gilson公司。
二、結果判斷按照試劑盒的說明，HBsAg及HBeAg的結果用實驗孔與對照孔的OD值計算其抑制率，抑制率＝(對照孔OD值-實驗孔OD值)/對照孔OD值三、數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計各組測定值以均數(shù)±標準差(x±s)表示，采用SPSS10.0軟件包進行方差分析，P＜0.05為差異有顯著性。
通過以下實施例可進一步說明本發(fā)明，并不因此將本發(fā)明限制在所述的實施例范圍之內。
實施例1細胞培養(yǎng)HepG2.2.15細胞株購自天津醫(yī)科大學微生物教研室。以含10％胎牛血清、0.38％谷氨酰胺、0.38mg/mL的G418的MEM培養(yǎng)液，青霉素、鏈霉素各50U/mL，用5％碳酸氫鈉調pH至7.0，37℃、5％CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。細胞消化液含0.25％胰酶、0.02％EDTA，用D-Hanks配制。待HepG2.2.15細胞長滿培養(yǎng)皿，以細胞消化液消化2～3分鐘，棄消化液，加培養(yǎng)液輕輕吹打。調整細胞密度為1×106/L，接種于細胞培養(yǎng)板，96孔板每孔0.2mL，24孔板每孔1mL，37℃、5％CO2培養(yǎng)，貼壁后按照相應時間用于實驗。
實施例2HepG2.2.15細胞分泌HBsAg、HBeAg時間曲線測定(結果見表1、

圖1)HepG2.2.15細胞以1×106/L接種于24孔培養(yǎng)板，分別收集傳代后第1天～第7天的細胞培養(yǎng)上清，-20℃保存統(tǒng)一檢測。使用ELISA法檢測培養(yǎng)上清的HBsAg、HBeAg，顯色反應后，酶標儀讀取OD值，繪制分泌曲線。實驗結果顯示，HepG2.2.15細胞經傳代培養(yǎng)，在傳代后第1天～第7天，其培養(yǎng)上清中的HBsAg及HBeAg分泌量隨著細胞培養(yǎng)時間的增加而逐漸增加，結果見表1、圖1，與文獻報道的相一致。后續(xù)實驗統(tǒng)一選取傳代培養(yǎng)第4天進行檢測。
表1、不同時間HepG2.2.15細胞株上清夜中HBsAg和HBeAg的OD值(3批獨立實驗，n＝8孔[HBsAg]，n＝9孔[HBeAg]，x±s)

實施例3藥物對細胞毒性試驗將藥物用培養(yǎng)液分別配成不同濃度加于96孔細胞板，每種濃度至少2孔～3孔。并設無藥細胞對照。加藥后培養(yǎng)4天后，傾去培養(yǎng)液，用MTT染色，每孔加0.4g MTT 0.1ml，37℃5％CO2孵育4小時，棄上清后加酸性異丙醇溶解，然后以570nm波長比色測定OD值。實驗至少重復3次。
1、氧化苦參堿對HepG2.2.15細胞的毒性作用(MTT法)(結果見表2、圖2、圖3)根據(jù)文獻報道，選取0.125～4mg/L的氧化苦參堿進行實驗，發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿在0.125～1mg/L濃度范圍內對HepG2.2.15細胞毒性較小，而2mg/L和4mg/L的氧化苦參堿對HepG2.2.15細胞株毒性較大，與文獻報道基本一致。因此后續(xù)實驗選取1mg/L的氧化苦參堿濃度進行實驗。結果見表2、圖2、圖3。
表2、不同濃度氧化苦參堿對HepG2.2.15細胞增殖的抑制作用(MTT法，3批獨立實驗，n＝11孔，x±s)

2、黃芩苷對HepG2.2.15細胞的毒性作用(MTT法)(結果見表3、圖4、圖5)根據(jù)文獻報道，選取0.625～2mg/L的黃芩苷進行實驗，從實驗研究結果看出，黃芩苷對細胞增殖的抑制作用在0～2mg/mL劑量范圍內隨著劑量的增加而增加。在0.5mg/mL的濃度對細胞的抑制作用即超過50％，提示對細胞的毒性較大。結果見表3、圖4、圖5。
表3、不同濃度黃芩苷對HepG2.2.15細胞增殖的抑制作用(MTT法，3批獨立實驗，n＝10孔，x±s)

實施例4藥物抑制HepG2.2.15細胞分泌抗原的試驗在HepG2.2.15細胞長滿培養(yǎng)瓶后轉種于培養(yǎng)板板上。每孔1×106個細胞，第二天加入不同濃度的藥物，留一不加藥的對照孔。每天觀察細胞生長情況。第5天收取培養(yǎng)液，收集換下的培養(yǎng)液-20℃保存，待實驗結束后統(tǒng)一檢測。HBsAg及HBeAg均用EISA法檢測。所得結果綜合計算分析。
1、不同濃度氧化苦參堿對HepG2.2.15細胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制作用(結果見表4、圖6、圖7)從實驗研究結果看出，氧化苦參堿對HBsAg和HBeAg抑制作用在0～1mg/mL劑量范圍內隨著劑量的增加而增加，與文獻報道的基本一致。提示氧化苦參堿在1mg/mL的濃度對HBsAg和HBeAg有良好的抑制作用，結合上述氧化苦參堿對HepG2.2.15細胞毒性的MTT檢測，后續(xù)實驗將氧化苦參堿的作用濃度定為1mg/mL進行實驗。結果見表4、圖6、圖7表4、不同濃度氧化苦參堿對HepG2.2.15細胞分泌抗原的抑制作用(ELSIA法，3批獨立實驗，n＝6孔，x±s)

2、不同濃度黃芩苷對HepG2.2.15細胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制作用(結果見表5、圖8、圖9)從實驗研究結果看出，黃芩苷對細胞增殖的抑制作用在0～2mg/mL劑量范圍內隨著劑量的增加而增加。在0.5mg/mL的濃度對細胞的抑制作用即超過50％，提示對細胞的毒性較大。結果見表5、圖8、圖9表5、不同濃度黃芩苷對HepG2.2.15細胞分泌抗原的抑制作用(ELSIA法，3批獨立實驗，n＝6孔，x±s)

實施例5篩選不同比例配伍的氧化苦參堿與黃芩苷對HepG2.2.15細胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制作用1、篩選實驗1不同比例配伍的氧化苦參堿與黃芩苷對HepG2.2.15細胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制作用(結果見表6、圖10、圖11)設立空白對照組為參照，根據(jù)先前實驗結果，將氧化苦參堿濃度定為1mg/mL，分別設立氧化苦參堿1mg/mL、氧∶黃4∶1、氧∶黃1∶1、氧∶黃1∶4、黃0.25mg/mL、黃1mg/mL、黃4mg/mL，分別檢測對表面抗原和e抗原的抑制率，進行最佳配伍比例的篩選。從實驗結果看氧∶黃比例在小于4∶1以下的效果不佳(主要用于篩選，所以只做一批實驗，n＝2孔)。后續(xù)實驗舍棄其它比例和單純黃芩苷用藥組。結果見表6、圖10、圖11表6、不同配伍比例的氧化苦參堿與黃芩苷對HepG2.2.15細胞分泌抗原的抑制作用(ELSIA法，3批獨立實驗，n＝2孔，x±s)

2、篩選實驗2不同比例配伍的氧化苦參堿與黃芩苷對HepG2.2.15細胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制作用(結果見表7、圖12、圖13)設立空白對照組為參照，根據(jù)先前實驗結果，將氧化苦參堿濃度定為1mg/mL，分別設立氧化苦參堿1m/mL、氧∶黃10∶1、氧∶黃9∶1、氧∶黃8∶1、氧∶黃7∶1、氧∶黃6∶1、氧∶黃5∶1、氧∶黃4∶1，分別檢測對表面抗原和e抗原的抑制率，進行最佳配伍比例的篩選。從實驗結果看氧∶黃比例在小于5∶1以下的效果不佳，而6∶1以上的效果似乎較好(主要用于篩選，所以只做一批實驗，n＝2)。后續(xù)實驗舍棄氧∶黃5∶1以下的比例。結果見表7、圖12、圖13表7、不同配伍比例的氧化苦參堿與黃芩苷對HepG2.2.15細胞分泌抗原的抑制作用(ELSIA法，3批獨立實驗，n＝6孔，x±s)

3、不同比例配伍的氧化苦參堿與黃芩苷對HepG2.2.15細胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制作用(結果見表8、圖14、圖15)設立空白對照組為參照，根據(jù)先前實驗結果，將氧化苦參堿濃度定為1mg/mL，分別設立氧化苦參堿1mg/mL、氧∶黃11∶1、氧∶黃10∶1、氧∶黃9∶1、氧∶黃8∶1、氧∶黃7∶1、氧∶黃6∶1，分別檢測對表面抗原和e抗原的抑制率，進行最佳配伍比例的篩選。實驗重復3次，n＝6孔。結果見表8、圖14、圖15。
根據(jù)實驗檢測結果，經過統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，特別在氧化苦參堿∶黃芩苷在7∶1至11∶1之間對HepG2.2.15細胞株分泌抗原的抑制作用較好，而且對e抗原的抑制效果比對表面抗原的抑制效果更好。特別是氧化苦參堿∶黃芩苷按照9∶1配伍對HepG2.2.15細胞株分泌表面抗原和e抗原的抑制效果最好，具有協(xié)同作用；使用SPSS11.0方差分析，氧化苦參堿∶黃芩苷按照9∶1比例配制對表面抗原與e抗原的抑制率與單獨使用氧化苦參堿的P值分別為0.043(HBsAg)和0.026(HBeAg)，按照P＜0.05的水平分析差異具有統(tǒng)計學顯著性。而11∶1、10∶1、8∶1、7∶1比例配制的藥物，與單獨使用氧化苦參堿相比較，對病毒抗原的抑制效果差異沒有統(tǒng)計學顯著性(P＞0.05)。而6∶1配制的效果低于單獨使用氧化苦參堿(P＜0.05)，推測與藥物對細胞的協(xié)同毒性增加有關。
表8、不同配伍比例的氧化苦參堿與黃芩苷對HepG2.2.15細胞分泌抗原的抑制作用(ELSIA法，3批獨立實驗，n＝6孔，x±s)

4、不同比例配伍的氧化苦參堿與黃芩苷對HepG2.2.15細胞的毒性作用(結果見表9、圖16、圖17)根據(jù)上述實驗結果，設立無藥對照組、氧化苦參堿1mg/mL、氧∶黃11∶1、氧∶黃10∶1、氧∶黃9∶1、氧∶黃8∶1、氧∶黃7∶1、氧∶黃6∶1，MTT法檢測藥物對HepG2.2.15細胞的毒性。實驗重復3次，n＝6孔。從實驗研究結果看出，氧∶黃11∶1～氧∶黃7∶1比例配伍的氧化苦參堿與黃芩苷對HepG2.2.15細胞增殖的抑制作用在50％左右。而氧∶黃6∶1對HepG2.2.15細胞增殖的抑制作用在55％左右，提示該比例配置的藥物對細胞的毒性較大。結果見表9、圖16、圖17。
表9、不同比例配伍的氧化苦參堿與黃芩苷對HepG2.2.15細胞增殖的抑制作用(MTT法，3批獨立實驗，n＝6孔，x±s)

實施例6對四氯化碳(CCL4)所致小鼠急性肝損傷的影響1材料1.1藥品復方黃芩苷(氧化苦參堿∶黃芩苷＝9∶1)、黃芩苷、氧化苦參堿均由上海凱銳斯生物科技有限公司提供。
2方法與結果取小鼠60只，雌雄各半，體重18-22克，分為6組。對照組(灌服蒸餾水20ml/kg)；模型組(灌服CCL40.1ml/kg)；陽性組(灌服CCL4同時靜脈注射氧化苦參堿)；試驗組(灌服CCL4同時靜脈注射復方黃芩苷)，連續(xù)10天，末次給藥后12小時，斷頭取血清，測定天門冬氨酸氨基轉換酶(AST)和丙氨酸氨基轉換酶(ALT)，并取每只動物的同一部位肝葉做病理檢查，病變程度進行分級。各數(shù)據(jù)經成組t檢驗處理。
結果復方黃芩苷各劑量組與模型組比較，均有非常顯著差異(p＜0.01)。高、中劑量組與陽性藥比較也有顯著差異(p＜0.05)。說明復方黃芩苷能顯著降低ALT、AST，且優(yōu)于單獨使用氧化苦參堿，見表10。
表10、對四氯化碳(CCL4)所致小鼠急性肝損傷的影響(x±SD)

備注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，與陽性藥組#P＜0.05，##P＜0.01實施例7對大鼠膽汁排泄及對大鼠血清膽紅素的影響取Wistar大鼠60只，雌雄各半，體重160-240克，隨機分為6組?？瞻讓φ战M(灌服蒸餾水)，模型組，陽性藥組(強的松龍，每日注射)，復方黃芩苷高、中、低劑量組(每日分別靜脈注射給藥)。自給藥后第6天始，除空白對照組外，其他5組用4％ANIT油劑灌胃，首次劑量12ml/kg體重，24小時后，再給予1/4首次劑量加強，造成大鼠膽汁淤積模型。分別在造模后24、48、72、96、120小時五個時間段的后6小時，從各個試驗組抽取動物2只，每個時間段10只，用硫苯妥鈉麻醉后分離總膽管，插入膽汁收集管，收集膽汁。計算每個時間段、每只動物、每百克體重膽汁流量；然后，采血測定血清總膽紅素(T-BiL)量。各數(shù)據(jù)經成組t檢驗處理，結果見表11、表12。
表11、對大鼠膽汁排泄的影響

備注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，與陽性藥組#P＜0.05，##P＜0.01表12、對大鼠血清膽紅素的影響

結果每個時間段各組動物膽汁排泄量，均以復方黃芩苷三個劑量組為多，與模型組有非常顯著差異(p＜0.01)。與陽性藥組也有非常顯著性差異(p＜0.01)。血清總膽紅素(T-BiL)測定結果，以復方黃芩苷三個劑量組為最低，特別是在24小時、48小時、72小時，均顯著低于模型組和陽性藥組。其中，高、中劑量組在72小時內血清膽紅素恢復正常值。以上結果提示，復方黃芩苷有明顯的利膽作用，其作用顯著優(yōu)于單獨使用氧化苦參堿(p＜0.01)。
實施例8凍干粉針的制備取處方量藥物，加注射用水溶解，用10％NaOH溶液調pH至5.8-6.8，攪拌使溶解。藥液依次經預濾器(0.45μm微孔濾膜)、除熱原超濾器(8000分子量)過濾；用注射用水洗滌容器、管道并依次經過上述濾器，洗滌液與濾液合并混勻；合并后藥液再經0.22μm無菌過濾器過濾，灌裝，凍干，壓塞，軋蓋，即得。
附圖簡述圖1是HepG2.2.15細胞抗原分泌曲線圖。
圖2是不同濃度氧化苦參堿對HepG2.2.15細胞增殖的抑制作用圖(MTT法)。
圖3是不同濃度氧化苦參堿對HepG2.2.15細胞增殖的抑制率圖(MTT法)。
圖4是不同濃度黃芩苷對HepG2.2.15細胞增殖的抑制作用圖(MTT法)。
圖5是不同濃度黃芩苷對HepG2.2.15細胞增殖的抑制率圖(MTT法)。
圖6是不同濃度氧化苦參堿對HepG2.2.15細胞分泌抗原的抑制作用圖(ELSIA法)。
圖7是不同濃度氧化苦參堿對HepG2.2.15細胞分泌抗原的抑制率圖(ELSIA法)。
圖8是不同濃度黃芩苷對HepG2.2.15細胞分泌抗原的抑制作用圖(ELSIA法)。
圖9是不同濃度黃芩苷對HepG2.2.15細胞分泌抗原的抑制率圖(ELSIA法)。
圖10是不同比例配伍的氧化苦參堿與黃芩苷對HepG2.2.15細胞分泌抗原的抑制作用圖(ELSIA法)。
圖11是不同比例配伍的氧化苦參堿與黃芩苷對HepG2.2.15細胞分泌抗原的抑制率圖(ELSIA法)。
圖12是不同比例配伍的氧化苦參堿與黃芩苷對HepG2.2.15細胞分泌抗原的抑制作用圖(ELSIA法)。
圖13是不同比例配伍的氧化苦參堿與黃芩苷對HepG2.2.15細胞分泌抗原的抑制率圖(ELSIA法)。
圖14是不同比例配伍的氧化苦參堿與黃芩苷對HepG2.2.15細胞分泌抗原的抑制作用圖(ELSIA法)。
圖15是不同比例配伍的氧化苦參堿與黃芩苷對HepG2.2.15細胞分泌抗原的抑制率圖(ELSIA法)。
圖16是不同比例配伍的氧化苦參堿與黃芩苷對HepG2.2.15細胞增殖的抑制作用圖(MTT法)。
圖17是不同比例配伍的氧化苦參堿與黃芩苷對HepG2.2.15細胞增殖的抑制率圖(MTT法)。
權利要求
1.一種治療乙型肝炎、保肝利膽的藥物組合物，其特征在于含氧化苦參堿與黃芩苷為活性成份的藥物組合物。
2.根據(jù)權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于其中活性成份氧化苦參堿與黃芩苷的重量比為11-1∶1。
3.根據(jù)權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于其中活性成份氧化苦參堿與黃芩苷的重量比為11-7∶1。
4.根據(jù)權利要求1-3所述的藥物組合物，其活性成份氧化苦參堿與黃芩苷的重量比優(yōu)選為9∶1。
5.一種治療乙型肝炎、保肝利膽的藥物組合物，其特征在于由氧化苦參堿和黃芩苷為活性成分和可藥用的輔料組成。
6.根據(jù)權利要求5所述的藥物組合物，其特征在于其中活性成份氧化苦參堿與黃芩苷的重量比為11-1∶1。
7.根據(jù)權利要求5所述的藥物組合物，其特征在于其中活性成份氧化苦參堿與黃芩苷的重量比為11-7∶1。
8.根據(jù)權利要求5-7所述的藥物組合物，其活性成份氧化苦參堿與黃芩苷的重量比優(yōu)選為9∶1。
9.根據(jù)權利要求1-8的藥物組合物，其可以制備成口服制劑或胃腸道外給藥制劑。
10.根據(jù)權利要求9所述的藥物組合物，其可以制備成注射用凍干粉。
全文摘要
本發(fā)明涉及含氧化苦參堿和黃芩苷的藥物組合物。本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，氧化苦參堿與黃芩苷以一定的比例組合能夠有效地抑制HepG2.2.15細胞分泌乙肝病毒表面抗原和乙肝病毒e抗原，而且對乙肝病毒e抗原的抑制程度明顯優(yōu)于乙肝病毒表面抗原。特別在氧化苦參堿∶黃芩苷在7∶1至11∶1之間效果更佳，尤其是氧化苦參堿∶黃芩苷為9∶1時效果最佳。按照9∶1配制的氧化苦參堿與黃芩苷對乙肝病毒抗原的抑制效果明顯優(yōu)于單獨使用氧化苦參堿或者黃芩苷。本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿黃芩苷藥物組合物具有較強的保肝利膽的作用。本發(fā)明預示氧化苦參堿黃芩苷復方有望開發(fā)成抗乙肝病毒、保肝利膽的新藥。
文檔編號A61P31/20GK1919205SQ20051002911
公開日2007年2月28日 申請日期2005年8月26日 優(yōu)先權日2005年8月26日
發(fā)明者周兆暉, 成揚, 許懷棟, 付海軍, 平鍵 申請人:上海凱銳斯生物科技有限公司