專利名稱：(－)－表沒食子兒茶素沒食子酸酯－鋅絡合物固體分散體及其制備方法與應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥組合物領域，具體涉及一種(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯-鋅絡合物固體分散體及其制備方法與醫(yī)藥用途。
背景技術：
(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯[(-)-Epigallocatechin-3-gallate，簡稱EGCG]具有很好的清除自由基、抗氧化、抗突變、延緩衰老、防輻射、抗病毒、防癌抗癌、降血脂和降膽固醇、抗動脈粥樣硬化、抗菌、降血糖、降血壓等種保健及藥理作用。
但是，由于EGCG不穩(wěn)定，極容易吸潮、氧化，生物利用度低，吸收差，并對胃腸道造成刺激，長期使用會降低鐵等金屬在機體內(nèi)含量，這些缺點大大局限了EGCG的應用。單純茶多酚與金屬離子Zn2+形成絡合物，文獻報道僅用于制備茶多酚，無應用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)制備EGCG-鋅絡合物固體分散體并應用于藥理作用的報道。這是由于EGCG與鋅(Zn2+)形成絡合物，難溶于水、乙酸乙酯、氯仿、吡啶等溶劑，在胃酸性環(huán)境下易分解為EGCG及Zn2+離子，而在腸道堿性環(huán)境下難于溶解、難于吸收。有報道應用不溶于水的交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮(PPVP)對茶多酚的吸附報道，但無應用水溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVP)應用于EGCG制備固體分散體的報道。
由于生活水平的提高和醫(yī)療保健的不斷進步，人均壽命越來越長，使世界人口老齡化的趨勢越來越明顯。據(jù)中國老年協(xié)會專家指出，我國老年人口迅速增長，1990年以來，我國老年人口以平均每年3.32％的速度增長，到1994年底，全國60歲以上老年人口總數(shù)已達到1.1億，約占人中總數(shù)的9.5％。2000年，我國已成為“老年型”國家，隨著老年人口增加，對老年性疾病的防治問題也越來越突出。因此，研制開發(fā)新的抗衰老及防治常見老年性疾病的新藥，已成為當今醫(yī)藥學界的一個研究熱點。
鋅為體內(nèi)多種酶的重要組成成份，具有促進生長發(fā)育，改善味覺，加速傷口愈合等作用，缺鋅可引起的生長發(fā)育遲緩，營養(yǎng)不良，厭食癥、異食癖以及口腔潰瘍。
老年性癡呆癥、記憶衰退、高血脂癥、腦缺血、動脈硬化、血栓形成、血小板聚集、糖尿病、病毒性傳染病等是常見的老年性疾病，而且許多情況下是多種病癥同時出現(xiàn)于同一病人身上。但是，現(xiàn)有的治療這些疾病的藥物普通存在著適用癥單一、療效不盡理想的問題。因此，能否研究開發(fā)一種對上述多種老年性疾病具有良好綜合治療效果的藥物，這對方便老年性疾病的防治、保證老年人健康將具有十分重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有老年性疾病治療中普遍存在藥物適用癥單一、療效不盡理想的問題，提供一種療效顯著、用途廣泛的EGCG-鋅絡合物固體分散體。
本發(fā)明的另一個目的是提供上述EGCG-鋅絡合物固體分散體的制備方法。
本發(fā)明的另一個目的是提供上述EGCG-鋅絡合物固體分散體在制備用于治療免疫功能低下、胃潰瘍、老年性癡呆癥、腎衰、高血脂癥、動脈硬化、糖尿病、腦缺血、心肌缺血、心律失常、抗炎、病毒感染、腫瘤、自由基損傷、肝損傷的藥物或保健品中的應用。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案本發(fā)明利用EGCG分子中相鄰的兩個酚羥基與鋅離子(Zn2+)形成絡合物，并利用聚乙烯吡咯烷酮(PVP-k30)作為載體，利用EGCG分子中的活潑氫與PVP分子中的羰基0以氫鍵結合在一起，形成EGCG-鋅絡合物PVP固體分散體，大大提高EGCG-鋅絡合物的水溶性，發(fā)揮EGCG與Zn2+離子的協(xié)同作用，具有更強的藥理作用，同時，避免EGCG在胃腸道與蛋白質(zhì)以疏水鍵和氫鍵等方式結合，減少EGCG對胃腸道的刺激。
EGCG-鋅絡合物固體分散體中EGCG-Zn與PVP-k30的質(zhì)量比為1∶4～1∶30，優(yōu)選比例為1∶5～1∶20，最佳比例為1∶6～1∶16。將EGCG溶于去離子水，滴加飽和鋅鹽溶液，邊滴加邊攪拌，通氮氣保護，至沉淀完全，收集沉淀物，再用去離子水懸浮，收集沉淀物，得到EGCG-Zn絡合物；將EGCG-Zn絡合物和聚乙烯吡咯烷酮按比例混合溶解于水中，通氮氣保護，經(jīng)高壓均質(zhì)機均質(zhì)，過濾，濾液噴霧干燥得EGCG-鋅絡合物固體分散體。EGCG為(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯。聚乙烯吡咯烷酮為PVP-k30(簡稱PVP)。所述鋅鹽溶液為可溶性鋅鹽溶液，如醋酸鋅、氯化鋅等。
EGCG-鋅絡合物固體分散體可提高EGCG-鋅絡合物的水溶性93倍以上，療效高于EGCG的藥理作用，在制備用于治療免疫功能低下、胃潰瘍、老年性癡呆癥、腎衰、高血脂癥、高膽固醇癥、動脈硬化、糖尿病、腦缺血、心肌缺血、心律失常、抗炎、病毒感染、腫瘤、自由基損傷、肝損傷的藥物或保健品中具有重要的作用。
EGCG-鋅絡合物固體分散體可與普通常規(guī)的藥劑填充劑配合，經(jīng)常規(guī)方法而制得；可根據(jù)需要制成適當?shù)膭┬?，如針劑、輸液、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊劑、膏劑、糖漿劑或栓劑等。通常以口服方式使用，當然也可以采用皮膚外用給藥等其它給藥方式；EGCG-Zn絡合物每天使用劑量一般為約0.1～5000毫克，成年人常用量為每天10～1000毫克，最常用劑量為50～500毫克。每天一次或分數(shù)次使用。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，具有如下有益效果1、EGCG-鋅絡合物固體分散體解決了EGCG不穩(wěn)定，極容易吸潮、氧化，生物利用度低，吸收差，并對胃腸道造成刺激，長期使用會降低鐵等金屬在機體內(nèi)含量等等缺點，大大提高了EGCG的藥理作用。
2、本發(fā)明的EGCG-鋅絡合物固體分散體用途廣泛，在治療各種老年性疾病中療效顯著；克服了現(xiàn)有老年性疾病治療中普遍存在藥物適用癥單一、療效不盡理想的問題。
3、本發(fā)明的制備方法簡單，應用前景廣闊。
具體實施例方式
實施例1 EGCG-鋅絡合物固體分散體的制備EGCG，純度為99.6％，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供。聚乙烯吡咯烷酮PVP-k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學試劑批發(fā)部提供。
將10克EGCG溶于20ml去離子水，滴加飽和醋酸鋅溶液，邊滴加邊攪拌，通氮氣保護，至沉淀完全，5000rpm離心5min，收集沉淀物，重新用100ml去離子水懸浮，5000rpm離心5min，收集沉淀物，再用100ml去離子水懸浮，5000rpm離心5min(重復三次)，得EGCG-Zn 9.2克。將EGCG-Zn 9.2克溶解15％PVP溶液300ml(即為45克PVP)水中，通氮氣保護，經(jīng)高壓均質(zhì)機均質(zhì)，過濾，濾液噴霧干燥得EGCG-Zn PVP固體分散體46.3克。
實施例2 EGCG-鋅絡合物固體分散體的制備EGCG，純度為99.6％，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供。聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學試劑批發(fā)部提供。
將10克EGCG溶于20ml去離子水，滴加飽和醋酸鋅溶液，邊滴加邊攪拌，通氮氣保護，至沉淀完全，5000rpm離心5min，收集沉淀物，重新用100ml去離子水懸浮，5000rpm離心5min，收集沉淀物，再用100ml去離子水懸浮，5000rpm離心5min(重復三次)，得EGCG-Zn 9.2克。將EGCG-Zn 9.2克溶解14.6％PVP溶液1000ml(即為146克PVP)中，通氮氣保護，經(jīng)高壓均質(zhì)機均質(zhì)，過濾，濾液噴霧干燥得EGCG-Zn PVP固體分散體131.7克。
實施例3 EGCG-鋅絡合物固體分散體的制備EGCG，純度為99.6％，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供。聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學試劑批發(fā)部提供。
將10克EGCG溶于20ml去離子水，滴加飽和氯化鋅溶液，邊滴加邊攪拌，通氮氣保護，至沉淀完全，5000rpm離心5min，收集沉淀物，重新用100ml去離子水懸浮，5000rpm離心5min，收集沉淀物，再用100ml去離子水懸浮，5000rpm離心5min(重復三次)，得EGCG-Zn 9.0克。將EGCG-Zn 9.2克溶解于23％PVP溶液1000ml(即為230克PVP)，通氮氣保護，經(jīng)高壓均質(zhì)機均質(zhì)，過濾，濾液噴霧干燥得EGCG-Zn PVP固體分散體201.3克。
實施例4 對小鼠急性毒性試驗實驗樣品EGCG-Zn PVP固體分散體(質(zhì)量比EGCG-Zn∶PVP＝1∶6)，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供。使用時分別用小動物腸溶膠囊(潮州市強基制藥廠提供)裝填灌胃給藥(20mg/膠囊)。
實驗動物NIH系小鼠18-22g，60只，雌雄各半，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供。
方法與結果選取健康NIH系小鼠，體重20±2g，20只，雌雄各半，即EGCG-Zn PVP固體分散體組，對小鼠禁食不緊水12h后，對應每組小鼠1次灌胃裝EGCG-ZnPVP固體分散體小動物腸溶膠囊(20mg/膠囊)，連續(xù)觀察7d，小鼠活動正常、敏捷，未引起死亡或異常反應，限于給受試樣品體積不能再增大，故進行最大耐受量試驗。
另選擇健康NIH系小鼠20只，體重20±2g，雌雄各半，即EGCG-Zn PVP固體分散體組，對小鼠禁食不緊水12h后，對應每組小鼠1次灌胃裝EGCG-ZnPVP固體分散體小動物腸溶膠囊(20mg/膠囊)，每隔2h灌胃一次，共8次，此后連續(xù)觀察7d，此期間讓小鼠自由進食和飲水，觀察期間小鼠活動正常，未引起死亡或異常反應。
小鼠限于給受試樣品體積不能再增大不能測出LD50。故改作最大耐受量試驗，結果如下小鼠灌服EGCG-Zn PVP固體分散體最大耐受量不少于8g·kg-1體重，在最大耐受量給受試樣品觀察期間，小鼠活動敏捷，毛皮光滑，未見死亡。
由此可知，EGCG-Zn PVP固體分散體(質(zhì)量比EGCG-Zn∶PVP＝1∶6)的最大耐受量均不小于8g/kg體重，屬于實際無毒級，服用安全。
實施例5 抗心律失常作用一、實驗材料EGCG，純度為99.6％，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供，EGCG-Zn PVP固體分散體(EGCG-Zn∶PVP，質(zhì)量比為1∶6)由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供。聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學試劑批發(fā)部提供。使用時樣品分別用小動物腸溶膠囊(潮州市強基制藥廠提供)裝填灌胃給藥。
SD大鼠，廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供；烏頭堿(Aconitine，Aco)，Merck藥廠出品；MS-302多媒體生物信號記錄分析系統(tǒng)(廣東藥學院)；WZ-50D型微量注射泵(浙江醫(yī)科大學醫(yī)學儀器廠)二、方法與結果1、對烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常的影響SD大鼠，雄性，體重211.0±20.0g，隨機分為空白對照組、EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組，空白對照組大鼠灌胃給予等量PVP膠囊，其余各組大鼠分別對應給予EGCG、EGCG-Zn 50mg/Kg體重，灌胃給予受試樣品膠囊40min后，給予腹腔注射烏拉坦1.2g/kg麻醉，以MS302生物信號記錄分析系統(tǒng)連續(xù)監(jiān)視并記錄II導聯(lián)心電圖(ECG)。頸外靜脈插管，以2.5μg/min速度恒速靜脈注射Aco，分別記錄出現(xiàn)室性早搏(ventricular premature beat，VP)，室性心動過速(ventricular tachycardia，VT)，心室纖顫(ventricular fibrillation，VF)及心臟停搏(cardiac arrest，CA)時Aco的用量并進行t檢驗。如表1，結果表明EGCG-Zn PVP固體分散體對烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常有保護作用，優(yōu)于純EGCG。
表1 對烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常的作用(n＝10，x±s)

與空白對照組相比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；與EGCG組比較，#P＜0.05，##P＜0.01 ，###P＜0.001實施例6 對心肌缺血的保護作用及清除自由基作用一、實驗樣品EGCG，純度為99.6％， 由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供，EGCG-Zn PVP固體分散體(EGCG-Zn∶PVP，質(zhì)量比為1∶6)，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供；聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學試劑批發(fā)部提供，使用時樣品分別用小動物腸溶膠囊(潮州市強基制藥廠提供)裝填灌胃給藥。
SD大鼠，廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供；MS-302多媒體生物信號記錄分析系統(tǒng)(廣東藥學院)；WZ-50D型微量注射泵(浙江醫(yī)科大學醫(yī)學儀器廠)二、實驗方法試驗前測定SD大鼠心電圖和胸導聯(lián)，棄去T波、ST段位移有異常和心律失常者。選取合格大鼠，體重210.1±20.0g，雌雄兼用，每組8只大鼠，隨機分為空白對照組、EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組，空白對照組大鼠灌胃給予等量PVP，其余各組大鼠分別對應灌胃給予EGCG、EGCG-Zn 50mg/Kg體重，30min后乙醚麻醉，記錄心電圖后頸背部皮下注射異丙腎上腺素(Isoproterenol，ISO)2mg/kg，30min后再記錄心電

圖1次，24h和48h后再一次灌胃受試品30min后，各組按上述方法重復給ISO并記錄心電圖。72h后再一次灌胃受試品30min后，大鼠眼眶取血并離心分離血清，處死大鼠，剪取心尖以4℃生理鹽水制成10％的心肌組織勻漿備用。
對∑ST段位移幅度的影響測量第一次給ISO前、第一、二、三次皮下注射ISO后30min各鼠ST值，計算∑ST的mv數(shù)均值作為心肌損傷程度的指標并做t檢驗。
對血清中CK、LDH和MDA的影響用試劑盒測血清中的丙二醛(MDA)、乳酸脫氫酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的變化。
對心肌組織勻漿中CK、LDH和MDA的影響用試劑盒測血清和心肌勻漿中的丙二醛(MDA)、乳酸脫氫酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的變化。
三、結果1對∑ST段的影響ST段的變化幅度可基本反映心肌缺血的嚴重程度，而∑ST段可作為缺血程度的定量指標。皮下注射ISO誘發(fā)大鼠心肌缺血后，ST段明顯抬高，顯示大鼠心肌有嚴重的心肌缺血損傷。EGCG-Zn PVP固體分散體對能降低皮下注射ISO引起的ST段的異常抬高程度(∑ST平均位移幅度)，優(yōu)于EGCG PVP固體分散體。EGCG PVP固體分散體能降低皮下注射ISO引起的ST段的異常抬高程度(∑ST平均位移幅度)有保護作用，優(yōu)于EGCG，如表2。
表2 對異丙腎上腺素致大鼠心肌損傷模型中∑ST的影響(x±s，n＝8)

與空白對照組相比，***P＜0.001；與EGCG組比較，#P＜0.05，**P＜0.01，###P＜0.001對血清中CK、LDH和MDA的影響
大鼠皮下注射ISO后，血清中的CK、LDH和MI)A均明顯上升，顯示由于心肌組織的損傷而使心肌細胞中的CK和LDH漏出到血液中，血清中的脂質(zhì)過氧化物(Lipid per-oxidation，LPO)大量增加。結果顯示受試化合物可明顯抑制CK和LDH從心肌細胞內(nèi)向血清中漏出，顯著抑制Iso致大鼠血清中MDA的異常升高，對自由基損傷具有保護作用。
結果表明EGCG-Zn PVP固體分散體對ISO致心肌缺血大鼠的心肌造成自由基損傷具有保護作用，優(yōu)于純EGCG。
表3 對Iso致心肌損傷大鼠血清的影響(x±s，n＝8)

與空白對照組相比，***P＜0.001；與EGCG組比較，#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001實施例7 對腦缺血模型的保護作用一、實驗材料EGCG，純度為99.6％，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供，使用時用去離子水配成所需濃度。EGCG-Zn PVP固體分散體(EGCG-Zn∶PVP，質(zhì)量比為1∶6)，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供，聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學試劑批發(fā)部提供；使用時樣品分別用小動物腸溶膠囊(潮州市強基制藥廠提供)裝填灌胃給藥。NIH系小鼠，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供。
劑量實驗方法與結果NIH小鼠，18-22g，以戊巴比妥鈉60mg·kg-1，麻醉，進行手術。將小鼠仰臥位固定，頸部正中切開皮膚約7mm，分離兩側頸總動脈，并套以“O”號絲線，缺血時用動脈夾夾閉雙側頸總動脈2min，造成大腦缺血狀態(tài)，缺血結束，松開動脈夾，恢復血液再灌注，短時間歇5min，如此反復二次。阻斷頸總動脈血流后，縫合切口。加上尾端放血，放血量為總血量的10％以下。術畢從腹腔內(nèi)注入適量的生理鹽水以補充血容量。假手術組麻醉后分離雙側頸總動脈但不阻斷血流，亦不放血。
雙側頸總動脈完全阻斷后，首先出現(xiàn)驚厥，體溫降低，呼吸減慢，最后翻正反射消失。實驗動物以體溫降低和翻正反射消失為缺血陽性指標，無典型缺血指征者棄之不用。在缺血過程中、或手術后均會有動物死亡?；謴脱汗嘧⒑?，動物翻正反射逐漸恢復，呼吸加快，3-5h基本恢復正?；顒?。手術后的動物隨機分為7組假手術組、EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組，空白對照組。每天給藥一次，空白對照組小鼠灌胃給予等量PVP，其余各組小鼠分別對應給予EGCG、EGCG-Zn 70mg/Kg體重，按表4劑量灌胃，連續(xù)給藥15天。15天后進行記憶試驗。
表4 對腦缺血再灌注損傷小鼠腦記憶避暗實驗的作用(x±s，n＝10)

與空白對照組相比，*P＜O.05，**P＜0.Ol，***P＜0.001；與EGCG組比較，##P＜0.Ol從表4的結果顯示，假手術組與空白組相比，進入暗箱的潛伏期明顯延長，受電擊次數(shù)明顯減少(P＜0.05)，說明腦缺血再灌注對小鼠的學習記憶功能造成了明顯損害。與空白對照組相比，受試化合物能夠明顯延長進入暗箱的潛伏期，同時能顯著降低錯誤次數(shù)，對腦缺血造成記憶功能損傷具有保護作用。EGCG-ZnPVP固體分散體對腦缺血造成記憶功能損傷具有保護作用，優(yōu)于EGCG。
實施例8 對機體免疫功能的影響一、實驗材料EGCG，純度為99.6％，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供，EGCG-Zn PVP固體分散體(EGCG-Zn∶PVP，質(zhì)量比為1∶5)，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供；聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學試劑批發(fā)部提供；使用時樣品分別用小動物腸溶膠囊(潮州市強基制藥廠提供)裝填灌胃給藥。NIH系小白鼠，S.D.系大白鼠，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供；家雞，由中山大學菜市場購得。
二、實驗方法對小鼠胸腺和脾臟的作用選擇健康NIH系小鼠50只，18～22g，雌雄各半，隨機選取10只作為正常對照組，雌雄各半，其余40只實驗時腹腔注射環(huán)磷酰胺60mg/Kg體重，隨機分成3組，每組10只，雌雄各半，即空白對照組、EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組。灌胃給受試樣品，空白對照組及正常對照組小鼠給予同量PVP，EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組小鼠分別對應給予含EGCG或EGCG-Zn30mg/Kg體重相應制劑受試樣品，連續(xù)給受試樣品30d，第30d各組小鼠禁食一天，但提供飲水。第31d，處死各組小鼠，稱量各組小鼠的體重，胸腺及脾臟重量，計算胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)，比較各組間的差異。
三、實驗結果表5 對小鼠胸腺和脾臟的作用(x±SD，n＝10)

與空白對照組相比，**P＜0.0l，**P＜0.01。與EGCG組比較，###P＜0.00l與空白對照組相比，受試物能夠?qū)π∈笮叵僦笖?shù)及脾臟指數(shù)顯著升高，具有提高免疫功能作用。EGCG-Zn PVP固體分散體對小鼠胸腺指數(shù)及小鼠脾臟指數(shù)升高優(yōu)于純EGCG。
實施例9 對腎功能衰竭的作用一、實驗材料1.1動物NIH小鼠，18-22g，雌雄各半，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供。
1.2 EGCG，純度為99.6％，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供。
EGCG-Zn PVP固體分散體(EGCG-Zn∶PVP，質(zhì)量比為1∶6)，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供，聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學試劑批發(fā)部提供；使用時樣品分別用小動物腸溶膠囊(潮州市強基制藥廠提供)裝填灌胃給藥。
二、實驗方法內(nèi)毒素致動物急性腎衰模型選取小鼠50只，隨機分為5組，分別為正常對照組、病理模型組、EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組，每組10只。正常對照組、病理模型組小鼠分別灌胃給予等量PVP膠囊，EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組小鼠分別對應給予含EGCG或EGCG-Zn 50mg/Kg體重相應制劑受試樣品，然后立即尾靜脈注射內(nèi)毒素0.06g/kg(正常對照組注射等量的等量PVP膠囊)。5h后，小鼠摘眼球取血，測定血清尿素氮(BUN)和肌肝(Cr)濃度。取各小鼠一只腎分別制成100ml·L-1勻漿，測定谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性。
三、實驗結果與模型組相比，EGCG-Zn PVP固體分散體能夠有效抑制因內(nèi)毒素致小鼠血清BUN、Cr值升高，提高GSH-Px酶活性，對內(nèi)毒素致動物急性腎衰具有保護作用，優(yōu)于純EGCG。
表6 受試化合物對急性腎功能衰竭的作用(x±SD，n＝10) 與病理模型組相比，**P＜0.01，***P＜0.001.與EGCG組比較，###P＜0.001實施例10 對治療老年性癡呆癥的藥理作用一、實驗樣品EGCG，純度為99.6％，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供。EGCG-Zn PVP固體分散體(EGCG-Zn∶PVP，質(zhì)量比為1∶6)，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供，聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學試劑批發(fā)部提供；使用時樣品分別用小動物腸溶膠囊(潮州市強基制藥廠提供)裝填灌胃給藥。
實驗動物NIH系小鼠18-22g，60只，雌雄各半，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心；實驗藥品致老年癡呆藥物Amyloid β-蛋白(Aβ 1-42片段)，分子量4514.1，Sigma Chemical Co.出品，產(chǎn)品號[107761-42-2]。
二、方法與結果NIH系小鼠，60只，雌雄各半，隨機分為6組，每組10只，分別為正常對照組、空白模型組、EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組，每組10只。正常對照組、空白模型組小鼠分別灌胃給予等量PVP膠囊，EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組小鼠分別對應給予含EGCG或EGCG-Zn 50mg/Kg體重相應制劑受試樣品。各組NIH小鼠(正常組除外)，每只小鼠腹腔注射0.45％戊巴比妥鈉0.1ml/10g體重麻醉。碘酒、酒精消毒頭頂皮膚后，縱向正中切開顱頂皮膚，暴露顱骨，在bregzna點后2.0mm，左右旁開2.5mm處用注射器鉆一小孔，以5μl注射器緩速注入2μl Aβ溶液，濃度為7μg/μl，30分鐘內(nèi)注射完畢，留針5分鐘，取出注射器，縫合皮膚。造模次日開始給藥，連續(xù)30d每天灌胃一次。
跳臺法實驗跳臺法實驗的原理是反應箱底鋪有通36V電的銅柵，動物受到電擊。其正常反應是跳上箱內(nèi)絕緣的平臺以避免傷害性刺激。多數(shù)動物可能再次或多次跳至銅柵上，受到電擊又迅速跳回平臺，如此訓練5min，并記錄每只小鼠受到電擊的次數(shù)，即錯誤次錯誤次數(shù)，以此作為學習成績。24h后重復作試驗，此即記憶保持試驗。記錄受電擊的動物數(shù)，第一次跳下平臺的潛伏期和3min的錯誤次數(shù)。具體做法是給藥末次后次日開始訓練。將動物放入反應箱內(nèi)適應環(huán)境3min，然后立即通以36V的交流電。動物受到電擊，其正常反應是跳回平臺，以躲避傷害性刺激。小鼠雙足同時接觸銅柵為觸電，視為錯誤反應。多數(shù)動物可能再次或多次跳至銅柵上，受到電擊又迅速跳回平臺上，如此訓練5min(同一試驗中所有小鼠訓練時間相同)，記錄每鼠后5min的錯誤次數(shù)，以此作為學習成績。24h后重復作試驗，即記憶保持試驗。記錄動物第一次跳下平臺的潛伏期和3min內(nèi)的錯誤總數(shù)，同時計算動物出現(xiàn)錯誤反應的頻率。
表7 對Aβ所致小鼠癡呆模型跳臺法實驗的作用(x±SD，n＝10) 與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與EGCG組比較，#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001老年性癡呆癥是以大腦神經(jīng)細胞死亡，神經(jīng)纖維纏結，大腦神經(jīng)細胞和腦血管出現(xiàn)老年性斑塊為特征。往小鼠的海馬區(qū)注射Aβ蛋白造成大腦神經(jīng)細胞和腦血管形成老年性斑塊，從而形成癡呆模型。EGCG-Zn PVP固體分散體對老年癡呆模型小鼠腦記憶的獲得、鞏固均表現(xiàn)出明顯的增強作用，提示具有抗癡呆作用，優(yōu)于純EGCG。
實施例11 對動脈硬化的藥理作用一、實驗樣品實驗樣品EGCG，純度為99.6％，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供。EGCG-Zn PVP固體分散體(EGCG-Zn∶PVP，質(zhì)量比為1∶6)，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供，聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學試劑批發(fā)部提供；使用時樣品分別用小動物腸溶膠囊(潮州市強基制藥廠提供)裝填灌胃給藥。實驗動物SD系雄性大鼠，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供。
二、實驗方法選擇健康S.D.系大鼠，體重275±20g，雄性，共50只，隨機分組，分別為空白模型組、EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組，每組10只。空白模型組大鼠灌胃給予等量PVP膠囊，EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組大鼠分別對應給予含EGCG、EGCG-Zn 80mg/Kg體重相應制劑受試樣品。按表9連續(xù)給受試樣品15d，第16d禁食12h，給受試樣品1h后，用4％戊巴比妥鈉42mg/kg腹腔注射麻醉，仰臥體位固定動物手術臺上，進行頸動脈-頸靜脈環(huán)插管手術；將大鼠氣管分離，插入一短塑料管，隨時將氣管分泌物從套管中吸出。剖離左頸總動脈，右側頸外靜脈，取一段聚乙烯軟質(zhì)塑料細管(長管為7.3cm，內(nèi)徑0.15cm，管厚為0.03cm)，內(nèi)放一根8cm長的醫(yī)用縫合線，塑料管兩端用小管將肝素鈉水溶液(50U/ml)充滿聚乙烯管。將聚乙烯管的一端插入右側頸外靜脈，而另一端插入左頸總動脈，結扎固定。準備好后，打開血流，血流從左頸總動脈流至聚乙烯管內(nèi)，返回右外側靜脈管，準確開放血流15min后，立即中斷血液，迅速取出絲線，用電子分析天平稱總濕重?？倽裰亓繙p去絲線重得血栓濕重。
選擇健康SD系大鼠，體重275±20g，雄性，共50只，隨機分組，分為空白模型組、EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組，每組10只?？瞻啄Ｐ徒M大鼠灌胃給予等量PVP膠囊，EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組大鼠分別對應給予含EGCG、EGCG-Zn 80mg/Kg體重相應制劑受試樣品。按表9連續(xù)給受試樣品15d，第16d禁食12h，給受試樣品0.5h后，用戊巴比妥鈉溶液(30mg/kg體重)腹腔注射麻醉后解剖分離頸總動脈，插入聚乙烯管取血，用3.8％枸椽酸鈉作抗凝劑(抗凝劑∶血體積為1∶9)，800rpm離心5min，吸取上層乳白色的富血小板血漿(PRP)，剩余部分再以3000rpm離心10min，取上清液即貧血小板血漿(PPP)，用PPP調(diào)PRP，使血小板記數(shù)為60～90萬/mm3。
按比濁法，為了消除不同血小板數(shù)量的影響，用同一血樣的PRP和PPP作為縱生標(血小板聚集率)的零點和頂點，以PPP為100％，PRP為0％，這樣的相對測量就排除了血小板數(shù)量的影響。每支比濁管加入20μl PRP，用20μl誘導劑(4mM AA，或0.2M/L pH 7.4磷酸緩沖液配制3.0μM ADP)，誘導血小板聚集，10min內(nèi)測定血小板聚集率。
表8 對大鼠血栓形成的抑制作用(x±sD，n＝10) 與空白對照組比***p＜0.001與EGCG組比較，###P＜0.001
表9 對大鼠血小板聚集率的影響(x±SD，n＝10) 與空白對照組相比***P＜0.001與EGCG組比較，**P＜0.01，***P＜0.001由大鼠血栓形成及血小板聚集實驗結果可知，EGCG-Zn PVP固體分散體具有明顯的抗血栓形成作用及血小板聚集作用，提示其具有抗動脈硬化作用，優(yōu)于純EGCG。
實施例12 對大鼠脂代謝紊亂治療性給藥模型的藥理作用一、實驗樣品EGCG，純度為99.6％，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供。EGCG-Zn PVP固體分散體(EGCG-Zn∶PVP，質(zhì)量比為1∶6)，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供，聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學試劑批發(fā)部提供；使用時樣品分別用小動物腸溶膠囊(潮州市強基制藥廠提供)裝填灌胃給藥。
二、實驗動物SD系雄性大鼠，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供.
選擇健康S.D.系大白鼠，雄性，200±20g，在實驗環(huán)境下給普通飼料喂養(yǎng)，觀察6d，無發(fā)現(xiàn)異常。然后剪尾取血，分離血清，測定其各項血脂指標，淘汰異常血脂指標的動物，選取血脂指標正常者，共90只，供給食物和飲水，這批大鼠每天上午定時灌服高脂食物(80％豬油+4％膽酸鈉+4％膽固醇+12％蛋黃粉)20ml/kg體重，連續(xù)灌服30d。第31d禁食12h，剪尾取血，分離血清，測定甘油三酯TC含量，挑出高于600mg/dl的大鼠60只，隨機分為6組，即高脂對照組、EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組。高脂對照組大鼠分別灌胃給予等量PVP膠囊，EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組大鼠分別對應給予含EGCG或EGCG-Zn 50mg/Kg體重相應制劑受試樣品。連續(xù)給受試樣品25d，第26d禁食12h，將大鼠取血測定各項血脂指標。
表10 對大鼠脂代謝率紊亂治療性給藥血脂指標的影響(n＝10，x±SD)

與高脂對照組相比**p＜0.01，***p＜0.001與EGCG組比較，##P＜0.01，###P＜0.001由大鼠脂代謝紊亂預防性給藥及治療性給藥模型實驗結果表明與模型組相比，EGCG-Zn PVP固體分散體能夠?qū)Ω哐Y、高膽固醇癥具有明顯的治療作用，優(yōu)于純EGCG。
實施例13 對糖尿病模型的藥理作用一、實驗樣品EGCG，純度為99.6％，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供。EGCG-Zn PVP固體分散體(EGCG-Zn∶PVP，質(zhì)量比為1∶6)，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供，聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學試劑批發(fā)部提供；使用時樣品分別用小動物腸溶膠囊(潮州市強基制藥廠提供)裝填灌胃給藥。實驗試劑四氧嘧啶(Alloxan)，由SigmaChemical Co生產(chǎn)。
二、實驗動物NIH系小鼠，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供；三、方法與結果選擇健康NIH系小鼠，雄性，18～22g，80只，隨機選擇10只小鼠作為正常對照組，另外70只禁食12h后，腹腔注射四氧嘧啶250mg/Kg體重，6h后灌服2.5g/Kg的葡萄糖液，使小鼠安全渡過低血糖相，隨后小鼠提供食物和飲水，36h后再禁食12h，從小鼠眼眶靜脈取血，測定腹腔注射四氧嘧啶小鼠的血糖值，選擇血糖值大于200mg/dl的小鼠50只，隨機分成5組，高血糖模型組、EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組，每組10只。正常對照組、高血糖模型組小鼠分別灌胃給予等量PVP膠囊，EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組小鼠分別對應給予含EGCG或EGCG-Zn 40mg/Kg體重相應制劑受試樣品。連續(xù)給受試樣品12d。末次給受試樣品前禁食12h，小鼠給受試樣品后1h眼眶靜脈取血，采用血糖測定試劑盒測定血糖含量。
表11 對四氧嘧啶所致小鼠糖尿病模型的藥理作用(x±SD，n＝10)

與高血糖對照組相比**p＜0.01，***p＜0.001與EGCG組比較，##P＜0.01由四氧嘧啶所致小鼠糖尿病模型所致小鼠糖尿病模型實驗結果可知，與模型組相比，EGCG-Zn PVP固體分散體具有明顯的降血糖作用，優(yōu)于純EGCG。
實施例14 對乙肝病毒的藥理作用一、實驗樣品EGCG，純度為99.6％，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供。EGCG-Zn PVP固體分散體(EGCG-Zn∶PVP，質(zhì)量比為1∶6)，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供，聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學試劑批發(fā)部提供；使用時樣品分別用小動物腸溶膠囊(潮州市強基制藥廠提供)裝填灌胃給藥。
實驗動物新西蘭兔，由中山醫(yī)科大學實驗動物中心提供，自由飲水，普通兔飼料喂養(yǎng)。
實驗試劑HBsAg標準品，HBsAg濃度為1μg/L、2μg/L、5μg/L，由衛(wèi)生部臨床檢驗中心提供。HBeAg酶聯(lián)診斷試劑盒，深圳生物工程有限分司生產(chǎn)。HbsAg強陽性血清，由廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院檢驗科提供，為20份高效價HBsAg強陽性血清(HBsAg、HBeAg、抗-HBc、HBVDNA均為陽性)混合而成，置-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br> 二、方法與結果含藥血清的制備選取24只體重為2.0±0.2kg的新西蘭兔，隨機分成空白模型組、EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組，每組6只，雌雄各半?？瞻啄Ｐ徒M新西蘭兔分別灌胃給予等量PVP膠囊，EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組新西蘭兔分別對應給予含EGCG或EGCG-Zn 200mg/Kg體重相應制劑受試樣品。每天1次，連續(xù)7天。于最后一次給藥后1h，心臟采血，無菌分離血清，部分血清經(jīng)56℃30min滅活，部分不滅活，用0.45μm的微孔濾膜過濾除菌，置-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br> HBsAg陽性血清中HBsAg含量的標定將HBsAg強陽性血清用含20％小牛血清的生理鹽水1∶2、1∶4、1∶8、1∶16......1∶16384的倍比稀釋，隨后用ELISA法檢測各樣品和1μg/L、2μg/L、5μg/L HBsAg標準品的P/N值，重復做3次，每次均做雙份平行實驗。最后根據(jù)HBsAg濃度--P/N值標準曲線求出HBsAg強陽性血清中的HBsAg濃度，置-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br> 空白血清滅活與否對HBeAg的影響取滅活空白兔血清、未滅活空白兔血清、含20％小牛血清的生理鹽水各200μl分別與50μ1500μg/LHBsAg陽性血清在37℃下作用4h，每個樣品均做10孔，然后用HBeAg酶聯(lián)診斷試劑盒檢測作用后HBeAg的P/N值，并進行t檢驗分析。
含藥血清、空白兔血清各200μl分別與50μ500μg/L HBsAg陽性血清在37℃下作用4h，每個樣品均做10孔，然后用HBeAg酶聯(lián)診斷試劑盒檢測作用后HBeAg的P/N值，并進行t檢驗分析。
空白血清滅活與否對HbeAg的影響滅活空白兔血清、未滅活空白兔血清分別與500μg/LHBsAg陽性血清在37℃下作用4h，檢測作用后HBeAg的P/N值，結果未滅活空白兔血清對HBeAg具有抑制作用(P＜0.05)，且未滅活空白兔血清和滅活空白兔血清對HBeAg的影響有顯著性差異(P＜0.05)，故在以下的實驗中將家兔的空白血清和含藥血清均進行56℃30min滅活處理。
表12 空白血清滅活與否對HBsAg的影響(x±SD)

注與含20％小牛血清的生理鹽水比較△P＜0.05；與滅活空白兔血清比較***P＜0.001。
表13 含藥血清對HBeAg的抑制作用(X±SD)

注與滅活空白兔血清比較△P＞0.05，***P＜0.001與EGCG組比較，#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001與空白血清相比，EGCG-Zn PVP固體分散體對乙肝病毒具有明顯的抑制作用，優(yōu)于純EGCG。
實施例15 對乙酸燒灼誘導大鼠胃潰瘍模型作用實驗樣品EGCG，純度為99.6％，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供。EGCG-Zn PVP固體分散體(EGCG-Zn∶PVP，質(zhì)量比為1∶6)，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供，聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學試劑批發(fā)部提供；使用時樣品分別用小動物腸溶膠囊(潮州市強基制藥廠提供)裝填灌胃給藥。
實驗動物SD系雄性大鼠，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供選擇健康SD大鼠40只，雌雄各半，體重200±10g，實驗前大鼠禁食不禁水24h，用30mg/kg戊巴比妥鈉麻醉，無菌條件于劍突下2cm處打開腹腔，將內(nèi)徑5mm、長30mm的玻璃管垂直放于胃體部漿膜面上，向管內(nèi)加入乙酸0.02mL，1min后用棉簽蘸出乙酸，用無菌生理鹽水沖洗兩次，逢合切口。隨機分成6組，每組10只(雌雄各半)，即隨機分成空白模型組、EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組，每組10只，雌雄各半?？瞻讓φ战M大鼠灌胃給予PVP500mg/Kg體重(排除敷料對胃黏膜的影響)，EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組大鼠分別對應給予含EGCG或EGCG-Zn 200mg/Kg體重相應制劑受試樣品。連續(xù)給藥14d，第15d禁食不禁水24h后，眼眶靜脈叢取血3mL，其中2mL注入含10％EDTA-Na230μL和抑肽酶的試管中，混勻，4℃，3000rmp離心10min，分離血漿，-20℃保存待測；余下1mL注入玻璃管中，室溫靜置一段時間后分離血清，-20℃保存待測。血清NO和血漿ET測定按說明書操作。
脫頸椎處死大鼠，打開腹腔結扎幽門賁門取胃，向胃中注入4％甲醛溶液5mL，固定30min后沿胃大彎剪開，將胃外翻，洗去食物殘渣。潰瘍成圓形或橢圓形，測量潰瘍處的最長徑和最短徑，以他們的均值作為潰瘍指數(shù)[79]。在各組間進行統(tǒng)計比較，按公式1-1計算潰瘍抑制率。

與模型組相比，EGCG-Zn PVP固體分散體對該模型胃潰瘍具有顯著的抑制作用，優(yōu)于純EGCG。
表14 對乙酸燒灼性胃潰瘍的作用(x±SD，n＝10)

與模型組比較，***p＜0.001與EGCG組比較，#P＜0.05，###P＜0.001對血清NO與血漿ET含量的影響與模型組相比，EGCG-Zn PVP固體分散體具有升高血清NO水平作用，降低血漿ET水平作用，優(yōu)于純EGCG。
表15 對各組血清NO和血漿ET含量的影響(x±SD，n＝10)

與模型組比較，***p＜0.001，與EGCG組比較，###P＜0.001實施例16 大鼠棉球肉芽腫實驗實驗樣品EGCG，純度為99.6％，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供。EGCG-Zn PVP固體分散體(EGCG-Zn∶PVP，質(zhì)量比為1∶6)，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供，聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學試劑批發(fā)部提供；使用時樣品分別用小動物腸溶膠囊(潮州市強基制藥廠提供)裝填灌胃給藥。
實驗動物SD系雄性大鼠，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供選取體重健康的雄性SD大鼠40只，體重180-200g，隨機分成4組，分別為病理模型組、EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組，每組10只大鼠。大鼠在乙醚淺麻醉下腹部去毛并用75％酒精和碘酒消毒。在腹部正中做一個切口，將兩個滅菌棉球(每個棉球重20mg，高壓滅菌，各加入氨芐青霉素每個1mg/0.1ml，50℃烘箱烤干)分別植入大鼠兩側腋窩皮下(或兩側腹股溝皮下)，將切口縫合后用75％酒精和碘酒消毒。于手術后當天開始灌胃給藥，空白對照組大鼠灌胃給予等量PVP膠囊，EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組分別對應給予含EGCG或EGCG-Zn 60mg/Kg體重相應制劑受試樣品。每天一次，連續(xù)14d。15d頸椎脫臼處死，剝離并取出棉球肉芽組織，然后在60℃烘箱內(nèi)烘12h后稱干重，相比各組肉芽腫脹重量。實驗結果進行統(tǒng)計學處理并比較組間差異。
大鼠棉球肉芽腫實驗植入棉球后，大鼠傷口愈合良好。連續(xù)給藥14d后，空白對照組大鼠腋下肉芽腫非常明顯。與模型組相比，EGCG-Zn PVP固體分散體能夠明顯抑制棉球肉芽腫的增生，具有抗炎作用，優(yōu)于EGCG。
表16 對大鼠棉球肉芽腫的影響(x±s)

與空白對照組相比，P＜0.001；與EGCG組比較，***P＜0.001實施例17 抗腫瘤實驗實驗樣品EGCG，純度為99.6％，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供。EGCG-Zn PVP固體分散體(EGCG-Zn∶PVP，質(zhì)量比為1∶6)，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供，聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學試劑批發(fā)部提供；使用時樣品分別用小動物腸溶膠囊(潮州市強基制藥廠提供)裝填灌胃給藥。
實驗動物NIH純系小白鼠，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供，艾氏腹水瘤腫瘤、移植性肉瘤(S180)和移植性肝癌(HepA)細胞，由廣州中山大學腫瘤研究中心提供。
對小鼠移植性肉瘤S180的作用取小鼠50只，于小鼠右腋下皮下接種肉瘤S180細胞懸液(1.0×107個/L)0.2ml，接種次日隨機分為5組，分別為空白對照組、EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組，每組10只小鼠，空白對照組小鼠灌胃給予等量PVP膠囊，EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組分別對應給予含EGCG或EGCG-Zn 60mg/Kg體重相應制劑受試樣品。每天一次，連續(xù)10d，停藥次日處死動物，稱量體重、胸腺及脾臟重量，按下式計算抑瘤率抑瘤率(％)＝(1-給藥組平均瘤重/對照組平均瘤重)×100％。
對HepA小鼠生存期的影響取小鼠50只，于小鼠腹腔內(nèi)接種HepA細胞懸液(1.0×107個/ml)0.2ml，接種次日隨機分為5組，分別為空白對照組、EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組，每組10只小鼠，空白對照組小鼠灌胃給予等量PVP膠囊，EGCG組、EGCG-ZnPVP固體分散體組分別對應給予含EGCG或EGCG-Zn 60mg/Kg體重相應制劑受試樣品。每天一次，連續(xù)10d，記錄自然死亡的天數(shù)，按下式計算其生命延長率生命延長率＝(實驗組平均生存天數(shù)/對照組平均生存天數(shù)-1)×100％。
對小鼠艾氏腹水瘤的作用取小鼠50只，于小鼠腹腔接種艾氏腹水瘤(1.0×107個/L)0.2ml，接種次日隨機分為5組，分別為空白對照組、EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組，每組10只小鼠，空白對照組小鼠灌胃給予等量PVP膠囊，EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組分別對應給予含EGCG或EGCG-Zn 60mg/Kg體重相應制劑受試樣品。每天一次，連續(xù)10d，連續(xù)10d，記錄自然死亡的天數(shù)，按下式計算其生命延長率生命延長率＝(實驗組平均生存天數(shù)/對照組平均生存天數(shù)-1)×100％。抑瘤率(％)＝(1-給藥組平均瘤重/對照組平均瘤重)×100％。
表17 對小鼠移植性肉瘤S180的抑制作用(x±s，n＝10)

與空白對照組比較，**P＜0.01，***P＜0.001；與EGCG組比較，#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001表18 對HepA小鼠生存期的影響(x±s，n＝10)

與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與EGCG組比較，###P＜0.001表19 對艾氏腹水瘤小鼠生存期的影響(x±s，n＝10)

與空白對照組比較，*P＜0.01與EGCG組比較，##P＜0.01結果如表17-19所示，與空白組相比，EGCG-Zn PVP固體分散體對S180肉瘤有顯著的抑制作用，對艾氏腹水瘤小鼠、HepA小鼠生存期延長，優(yōu)于純EGCG。
實施例18 對四氯化碳所致大鼠急性肝損傷的保護作用實驗樣品EGCG，純度為99.6％，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供。EGCG-Zn PVP固體分散體(EGCG-Zn∶PVP，質(zhì)量比為1∶6)，由中山大學藥學院中藥與海洋藥物實驗室提供，聚乙烯吡咯烷酮PVP k30(簡稱PVP)，進口分裝，由廣州化學試劑批發(fā)部提供；使用時樣品分別用小動物腸溶膠囊(潮州市強基制藥廠提供)裝填灌胃給藥。實驗動物SD純系大白鼠，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供；取健康SD大鼠60只，雄性，體重230±25g，隨機分成6組，分別為正常對照組、空白對照組、EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組，每組10只大鼠，空白對照組、正常對照組大鼠灌胃給予等量PVP膠囊，EGCG組、EGCG-Zn PVP固體分散體組分別對應給予含EGCG或EGCG-Zn 60mg/Kg體重相應制劑受試樣品。從開始實驗之日起，正常對照組大鼠腹腔注射花生油5ml/kg，其余五組大鼠腹腔注射25％CCl4-花生油5ml/kg，連續(xù)給藥10天，第11天禁食，不禁水24h，給藥1h后取血離心3000rpm×10min，測定血清中ALT、AST、Alb含量。
與空白對照組比較，EGCG-Zn PVP固體分散體具有抗肝損傷作用，抑制血清中ALT和AST的含量，同時顯著的提高血清中Alb的含量，優(yōu)于純EGCG。
表20 對大鼠血清ALT、AST、Alb的影響(mean±SD，n＝10)

與空白對照組比較，***P＜0.001與EGCG組比較，**P＜0.0權利要求
1.一種EGCG-鋅絡合物固體分散體，其特征在于由EGCG-鋅絡合物和聚乙烯吡咯烷酮組成，其質(zhì)量比為1∶4～1∶30。
2.如權利要求1所述的EGCG-鋅絡合物固體分散體，其特征在于所述FGGCG-鋅絡合物和聚乙烯吡咯烷酮的質(zhì)量比為1∶6～1∶20。
3.如權利要求2所述的EGCG-鋅絡合物固體分散體，其特征在于所述EGCG-鋅絡合物和聚乙烯吡咯烷酮的質(zhì)量比為1∶7～1∶16。
4.一種權利要求1或2或3所述固體分散體的制備方法，其特征在于包括如下步驟將EGCG溶于去離子水，滴加飽和鋅鹽溶液，邊滴加邊攪拌，通氮氣保護，至沉淀完全，收集沉淀物，再用去離子水懸浮，收集沉淀物，得到EGCG-鋅絡合物；將EGCG-鋅絡合物和聚乙烯吡咯烷酮按比例混合溶解于水中，通氮氣保護，經(jīng)高壓均質(zhì)機均質(zhì)，過濾，濾液噴霧干燥得EGCG-鋅絡合物固體分散體。
5.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于所述鋅鹽溶液為可溶性鋅鹽。
6.如權利要求5所述的制備方法，其特征在于所述可溶性鋅鹽為醋酸鋅或氯化鋅。
7.權利要求1或2或3所述EGCG-鋅絡合物固體分散體在制備用于治療免疫功能低下、胃潰瘍、老年性癡呆癥、腎衰、高血脂癥、高膽固醇癥、動脈硬化、糖尿病、腦缺血、心肌缺血、心律失常、抗炎、病毒感染、腫瘤、自由基損傷、肝損傷的藥物或保健品中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種EGCG－鋅絡合物固體分散體及其制備方法與應用。EGCG－鋅絡合物固體分散體中EGCG－鋅絡合物與PVP－k30的質(zhì)量比為1∶4～1∶30，優(yōu)選比例為1∶5～1∶20，最佳比例為1∶6～1∶16。將EGCG溶于去離子水，滴加飽和鋅鹽溶液，邊滴加邊攪拌，通氮氣保護，至沉淀完全，收集沉淀物，再用去離子水懸浮，收集沉淀物，得到EGCG－鋅絡合物；將EGCG－鋅絡合物和聚乙烯吡咯烷酮按比例混合溶解于水中，通氮氣保護，經(jīng)高壓均質(zhì)機經(jīng)均質(zhì)，過濾，濾液噴霧干燥即可得到EGCG－鋅絡合物固體分散體。EGCG－鋅絡合物固體分散體解決了EGCG存在的各種缺點，在治療各種老年性疾病中療效顯著；克服了現(xiàn)有老年性疾病治療中普遍存在藥物適用癥單一、療效不盡理想的問題；制備方法簡單，應用前景廣闊。
文檔編號A61P3/00GK1762343SQ20051003698
公開日2006年4月26日 申請日期2005年9月5日 優(yōu)先權日2005年9月5日
發(fā)明者許東暉, 梅雪婷, 許實波 申請人:中山大學