專利名稱：丹參酮ⅱa滴丸及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種醫(yī)藥配制品及其生產(chǎn)方法，以及該制品的應(yīng)用，具體地說涉及一種丹參酮IIA滴丸及其制備工藝，以及丹參酮IIA滴丸的應(yīng)用，屬于中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
丹參是常用地中藥材，具有活血祛淤，安神寧心等功效，丹參藥材中含有多種活性成分，其藥理作用各有差異，由于提取工藝的差別，得到的丹參提取物含有的活性成分和比例各不相同。
現(xiàn)有中藥成藥的片劑、町劑、糖漿劑、干糖漿劑、沖劑、顆粒劑皆為浸膏制劑，這種浸膏制劑是以淀粉為添加載體，當其中的溶媒濃度有偏差，原料質(zhì)量不等時，其出膏率即不同，成品的有效成分亦參差不齊，影響到藥品的質(zhì)量與療效。由于浸膏制劑含有大量與藥效無關(guān)的成分，必然使劑量加大，也不利于藥效集中而迅速的發(fā)揮，此外，上述劑型還存在服用不方便的問題。
現(xiàn)售的各種丹參制劑由于劑型及制備工藝的限制，在療效上仍不能令人滿意，人們對療效更好且服用方便的丹參制劑存在很大的需求。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有丹參制劑在使用時劑量大、奏效慢的不足，本發(fā)明提供一種藥精、量少、奏效捷速、服用方便的丹參酮IIA滴丸，有效地解決了問題。
本發(fā)明還提供了該丹參酮IIA滴丸的制備方法及應(yīng)用。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是
一種丹參酮IIA滴丸，其特征在于它由下列重量份的原料組成丹參酮IIA 1份，基質(zhì)1-50份。
本發(fā)明中所說的基質(zhì)是制備滴丸的常規(guī)物質(zhì)，包括但不僅限于聚乙二醇6000、聚乙二醇4000、聚乙二醇1500、聚乙二醇1000、硬脂酸鈉、甘油明膠、泊洛沙姆、硬脂酸及單硬脂酸甘油酸中的一種或幾種。
本發(fā)明中所說的丹參酮IIA滴丸的制備方法是
將丹參生藥材粉碎，用乙醇加熱回流提取，溫度控制在50-80℃，然后減壓回收乙醇，得醇浸膏；將醇浸膏用熱水洗滌除去水溶性物質(zhì)，然后加入苯加熱溶解，苯溶液上中性氧化鋁柱，用苯洗脫，收集丹參酮IIA洗脫液，蒸餾除去苯，得丹參酮IIA粗品；按滴丸配方的組分和含量，將丹參酮IIA加入熔融的基質(zhì)中，混合均勻，加入制滴丸裝置，保溫85℃至90℃，滴入5℃至15℃的冷卻劑中，然后除去冷卻劑，選粒，即得丹參酮IIA滴丸。
本發(fā)明中所說的丹參酮IIA滴丸的另一種制備方法是將丹參生藥材粉碎，用乙醇加熱回流，溫度控制在50-80℃，然后減壓回收乙醇，得醇浸膏，用甲醇溶解，過濾除去不溶性物質(zhì)，濃縮濾液，上Sephadex LH-20，70％甲醇洗脫，收集橘紅色段洗脫液，蒸餾除去甲醇，得丹參酮IIA粗品；按滴丸配方的組分和含量，將丹參酮IIA加入熔融的基質(zhì)中，混合均勻，加入制滴丸裝置，保溫85℃至90℃，滴入5℃至15℃的冷卻劑中，然后除去冷卻劑，選粒，即得丹參酮IIA滴丸。
為了達到較好的提取效果，在上述制備過程中，向粉碎的丹參生藥材中加入2-6倍體積(g/ml)的60％-70％乙醇回流提取。
上述制備方法中為達到更好的療效，還可將丹參酮IIA粗品經(jīng)重結(jié)晶純化，使含量達70％以上。
常規(guī)地，滴丸的劑量或丸重，可根據(jù)生產(chǎn)需要通過調(diào)節(jié)滴丸裝置的滴液定量閥門來控制，優(yōu)選的丸重為0.020-0.045克。
在上述制備方法中所說的冷卻劑包括但不僅限于二甲基硅油、液體石蠟、植物油或冰水。
本發(fā)明的丹參酮IIA滴丸作為治療腦缺血性疾病藥物的應(yīng)用。經(jīng)實驗表明丹參酮IIA能有效地改善腦血循環(huán)，很顯然本發(fā)明的滴丸能用于防治腦缺血性疾病。
本發(fā)明的丹參酮IIA滴丸，經(jīng)亞急性毒性試驗觀察，未發(fā)現(xiàn)毒性。在制備過程中，有效成分丹參酮IIA的純度相應(yīng)提高，丸重僅0.020-0.045克，不僅有利于運輸、存貯、攜帶和使用，而且服用后崩解迅速，奏效快，便于腦血管病人的治療與預(yù)防，尤其是對于改善腦血循環(huán)，防治腦缺血性疾病有很好治效果。


圖1是本發(fā)明丹參酮IIA滴丸和尼莫地平對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦梗塞范圍的影響的比較。
圖2是本發(fā)明丹參酮IIA滴丸和尼莫地平對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦水腫的影響的比較。
圖3是本發(fā)明丹參酮IIA滴丸和尼莫地平對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦組織脂質(zhì)過氧化物(LPO)的影響的比較。
圖4是本發(fā)明丹參酮IIA滴丸和尼莫地平對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦組織超氧化物歧化酶(SOD)活性的影響的比較。
圖5是本發(fā)明丹參酮IIA滴丸和尼莫地平對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦組織一氧化氮(NO)含量的影響的比較。
圖6是本發(fā)明丹參酮IIA滴丸和尼莫地平對全腦缺血再灌注大鼠腦組織Na+-K+-ATP酶活性的影響的比較。
圖7是本發(fā)明丹參酮IIA滴丸和尼莫地平對神經(jīng)細胞缺氧缺糖損傷后細胞死亡率的影響的比較。
具體實施例方式
以下通過實施例來進一步闡述本發(fā)明藥物的制備方法。
實施例1丹參酮IIA滴丸的制備
將丹參酮IIA細粉5g加入50g熔融的聚乙二醇6000中，攪勻，以二甲基硅油為冷卻劑，滴制法制丸1000粒，除去冷卻劑，即得。
實施例2丹參酮IIA滴丸的制備
丹參生藥材500g粉碎成粉末，加1000ml的60％乙醇加熱回流提取3次，每次30-120分鐘，合并提取液，減壓回收乙醇，得醇浸膏；將醇浸膏用熱水洗滌除去水溶性物質(zhì)，然后加入苯加熱溶解，苯溶液上中性氧化鋁柱，用苯洗脫，收集紫紅色段丹參酮IIA洗脫液，蒸餾除去苯，得丹參酮IIA粗品；得丹參酮IIA粗品15g左右，重結(jié)晶，使其含量達75％；
取制得的丹參酮IIA 5g加入45g熔融的聚乙二醇4000中，攪勻，加入制滴丸裝置，保溫85℃，滴入5℃的二甲基硅油中制丸1000粒，收集放進糖衣罐紗布袋，吸盡冷卻劑，選粒，即得丹參酮IIA滴丸。
實施例3丹參酮IIA滴丸的制備
丹參生藥材500g粉碎成粉末，加3000ml的70％乙醇加熱回流提取3次，合并提取液，減壓回收乙醇，得醇浸膏；甲醇溶解，過濾除去不溶性物質(zhì)，濃縮濾液，上Sephadex LH-20，70％甲醇洗脫，收集橘紅色段丹參酮IIA洗脫液，除去甲醇，得丹參酮IIA粗品15g左右；
按以下組分和含量丹參酮IIA5g
聚乙二醇6000 30g
聚乙二醇4000 20g
將制得的丹參酮IIA加入熔融的聚乙二醇4000中，攪勻，上滴丸裝置，保溫90℃，滴入15℃的二甲基硅油中制丸1000粒，收集放進糖衣罐紗布袋，吸盡冷卻劑，選粒，即可。
實施例4制法與實施例2基本相同，不同之處在于組分為丹參酮IIA 5g、單硬脂酸甘油酸30g；制丸時冷卻劑為冰水。
實施例5制法與實施例2基本相同，不同之處在于組分為丹參酮IIA 5g、聚乙二醇600030g、泊洛沙姆5g。
實施例6制法與實施例2基本相同，不同之處在于組分為丹參酮IIA 5g、單硬脂酸甘油酸20g、泊洛沙姆5g；制丸時冷卻劑為冰水。
實施例7制法與實施例2基本相同，不同之處在于組分為丹參酮IIA 5g、聚乙二醇15005g。
實施例8制法與實施例2基本相同，不同之處在于組分為丹參酮IIA 5g、硬脂酸鈉50g、甘油明膠50g。制丸時冷卻劑為植物油。
實施例9制法與實施例2基本相同，不同之處在于組分為丹參酮IIA 5g、聚乙二醇6000100g、聚乙二醇100050g、硬脂酸100g；制丸時冷卻劑為液體石蠟。
實施例10本發(fā)明丹參酮IIA滴丸對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用實驗方法
SD大鼠，雌雄各半，體重300±50g，江寧青龍山動物繁殖場提供。許可證號SCXK(蘇)2002-0018。動物隨機分為5組，即丹參酮IIA高劑量組(25.0mg/kg/d)、低劑量組(12.5mg/kg/d)，尼莫地平組(6.0mg/kg/d)，模型組及假手術(shù)組，每組n＝8；其中假手術(shù)組及模型組均灌胃給予等體積的生理鹽水。各組動物均于手術(shù)前連續(xù)灌胃給藥3d，每天一次。所用的滴丸均按實施例2制備。該實驗方法適用于下述(1)-(7)。局灶性腦缺血再灌注動物模型的制備
第3天給藥后1h參考Longa等人的方法，采用頸內(nèi)動脈線栓法制備大鼠大腦中動脈閉塞(MCAO)模型。將大鼠用20％的烏拉坦(1.0g/kg)ip麻醉，仰臥固定在手術(shù)臺上，頸部正中切口，逐步分離右側(cè)頸總動脈、頸外動脈和頸內(nèi)動脈，并穿線備用。結(jié)扎并游離頸外動脈主干，暫時夾閉頸總動脈和頸內(nèi)動脈，將直徑為0.23mm、頭端燒圓的尼龍線經(jīng)頸外動脈插入頸內(nèi)動脈至大腦中動脈起始端，進線深度距頸內(nèi)、頸外動脈分叉處18-20mm左右可感到阻力，阻斷右側(cè)大腦中動脈血流。腦缺血期間，保持大鼠直腸溫度在37±0.5℃，2h后抽出尼龍線予以再灌注24h。假手術(shù)組進線深度10mm左右，不阻塞大腦中動脈。
(1)對局灶性腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能的影響
神經(jīng)行為缺陷的評分方法大鼠在腦缺血2h再灌注24h后，按照Longa的五分制評分標準進行分級評分無明顯神經(jīng)損傷癥狀為0分；不能完全伸展對側(cè)前爪為1分；向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈為2分；向?qū)?cè)傾倒為3分；不能自發(fā)行走，意識喪失為4分。
如表1所示假手術(shù)組未出現(xiàn)明顯神經(jīng)損傷癥狀，而其余各組均出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)功能障礙。與假手術(shù)組相比，模型組神經(jīng)行為評分顯著升高(P＜0.01)。與模型組比較，低劑量丹參酮IIA組的神經(jīng)行為評分明顯降低(P＜0.05)；高劑量組丹參酮IIA和尼莫地平組的神經(jīng)行為評分顯著降低更加顯著(P＜0.01)。
表1 丹參酮IIA和尼莫地平對局灶性腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能的影響的比較
(X±SD，n＝8)
與模型組相比*P＜0.05，**P＜0.01；與假手術(shù)組相比△△P＜0.01.
結(jié)果表明，丹參酮IIA能夠顯著改善局灶性腦缺血再灌注大鼠的神經(jīng)功能。
(2)對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦梗塞范圍的影響
腦梗塞范圍的測定大鼠在腦缺血2h再灌注24h后，迅速斷頭取腦，剔除低位腦干、小腦及嗅球。在電子天平上稱重后將腦組織做冠狀切片，厚度為2mm左右，然后立即置于2％的TTC(PB配置)溶液當中，37℃避光孵育30min。經(jīng)染色后，正常腦組織呈玫瑰紅色，而腦梗塞區(qū)呈白色，將白色組織仔細分離，分別稱重，以梗塞區(qū)質(zhì)量與腦切片總質(zhì)量的百分比作為梗塞范圍。
如圖1(其中X±SD，n＝8)所示，假手術(shù)組無腦梗死灶，而各給藥組和模型組動物腦均有不同程度的損傷，在腦組織切片的中央上方2mm處觀察到腦梗塞跡象。與假手術(shù)組相比，模型組的腦梗塞范圍(24.46±5.07％)顯著升高(P＜0.01)。與模型組比較，低劑量組的腦梗塞范圍(18.67±3.60％)明顯降低，兩者差異顯著(P＜0.05)；高劑量組(14.62±4.76％)和尼莫地平組(15.41±4.49％)的腦梗塞范圍降低更顯著(P＜0.01)。
結(jié)果表明本發(fā)明藥物能夠明顯減少腦組織的梗死范圍。
(3)對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦水腫的影響
腦水腫的測定以腦組織含水量作為腦水腫指標。腦梗塞范圍測量完畢以后，將腦組織置于105℃烤箱內(nèi)烘干至恒重，對照大腦濕重求出腦組織含水量腦組織含水量(％)＝(1-腦組織干重/腦組織濕重)×100％。
如圖2(其中X±SD，n＝8)所示，各組動物腦相對百分含水量如下假手術(shù)組為77.68±1.06％，模型組為80.22±0.68％，丹參酮IIA低劑量組為79.59±0.91％，丹參酮II A高劑量組為78.45±0.43％，尼莫地平組為78.38±1.30％。與假手術(shù)組相比，模型組的腦含水量顯著升高(P＜0.01)。與模型組比較，低劑量組的腦含水量有降低趨勢，但未達到統(tǒng)計學(xué)顯著(P＞0.05)；高劑量組和尼莫地平組的腦含水量均顯著降低(P＜0.01)。
結(jié)果表明丹參酮IIA能夠明顯減輕局灶性腦缺血再灌注大鼠的腦水腫程度。
(4)對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦組織脂質(zhì)過氧化物(LPO)的影響
腦組織脂質(zhì)過氧化物(LPO)的測定大鼠在腦缺血2h再灌注24h后斷頭處死，在冰盤上快速取腦，剔除低位腦干、小腦及嗅球，自大腦縱裂將腦切開。取右半腦秤重，按1∶9(w/v)加入冰冷生理鹽水，制成10％的腦組織勻漿。將勻漿液以3000r/min離心10min，取上清液。采用硫代巴比妥酸法(TBA法)測定丙二醛(MDA)的含量，通過MDA來反映LPO水平。組織蛋白測定用考馬斯亮藍蛋白測定法。操作均按試劑盒說明書進行，結(jié)果以nmol/mgprot表示。
如圖3(其中X±SD，n＝8)所示，大鼠在腦缺血2h再灌注24h后，腦組織MDA含量升高，模型組(6.98±0.74nmol/mgprot)和假手術(shù)組(4.47±0.33nmol/mgprot)相比差異顯著(P＜0.01)。與模型組比較，低劑量組的腦組織MDA含量(6.21±1.81nmol/mgprot)有降低趨勢，但未達到統(tǒng)計學(xué)顯著(P＞0.05)；高劑量組(4.92±0.87nmol/mgprot)和尼莫地平組(5.44±0.56nmol/mgprot)的MDA含量均顯著降低(P＜0.01)。
結(jié)果表明丹參酮IIA能使局灶性腦缺血再灌注大鼠的腦組織過氧化程度受到明顯抑制。
(5)對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦組織超氧化物歧化酶(SOD)活性的影響
腦組織SOD活性的測定取上述(4)方法制得的腦勻漿上清液，用黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶(SOD)活性，以每毫克組織蛋白在1ml反應(yīng)液中SOD抑制率達50％時所對應(yīng)的SOD量為一個SOD活力單位(U)，操作按試劑盒說明書進行。結(jié)果以U/mgprot表示。
如圖4(其中X±SD，n＝8)所示，大鼠在腦缺血2h再灌注24h后，與假手術(shù)組(312.79±32.17U/mgprot)相比，模型組腦組織SOD活性(244.80±25.80U/mgprot)明顯下降，兩者差異顯著(P＜0.01)。與模型組比較，低劑量組的腦組織SOD活性(259.06±39.61U/mgprot)有上升趨勢，但未達到統(tǒng)計學(xué)顯著(P＞0.05)；高劑量組(316.59±28.88U/mgprot)和尼莫地平組(296.04±20.08U/mgprot)的腦組織SOD活性顯著上升(P＜0.01)。
結(jié)果表明丹參酮IIA能使局灶性腦缺血再灌注大鼠的腦組織清除自由基的能力有顯著提高。
(6)對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦組織一氧化氮(NO)含量的影響
腦組織NO含量的測定取上述方法制得的腦勻漿上清液，采用硝酸還原酶化學(xué)比色法。NO在體內(nèi)很快轉(zhuǎn)變?yōu)镹O3-，應(yīng)用硝酸還原酶特異性地將NO3-還原為NO2-，通過顯色深淺來測定其濃度的高低，操作嚴格按說明書進行。其結(jié)果以μmol/mgprot表示。
如圖5(其中X±SD，n＝8)所示，大鼠在腦缺血2h再灌注24h后，與假手術(shù)組(0.86±0.32μmol/mgprot)相比，模型組腦組織NO含量(1.38±0.41μmol/mgprot)明顯上升，兩者差異顯著(P＜0.05)。與模型組比較，低劑量組的腦組織NO含量(1.33±0.65μmol/mgprot)有略有下降趨勢，但未達到統(tǒng)計學(xué)顯著(P＞0.05)；高劑量組(0.95±0.20μmol/mgprot)和尼莫地平組(0.91±0.40μmol/mgprot)的腦組織NO含量顯著下降(P＜0.05)。
結(jié)果表明丹參酮IIA能抑制局灶性腦缺血再灌注大鼠腦組織NO濃度的升高。
(7)對局灶性腦缺血再灌注大鼠海馬區(qū)超微結(jié)構(gòu)的影響
在2000倍電鏡下觀察大鼠海馬組織超微結(jié)構(gòu)。假手術(shù)組線粒體形態(tài)完好，內(nèi)外膜和脊清晰完整，超微結(jié)構(gòu)未見異常。模型組線粒體腫脹、破損，內(nèi)膜和嵴消失、溶解，甚至空泡化，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，核糖體減少，損傷嚴重。低劑量組線粒體腫脹，部分破損，其它尚完整，顯示保護作用。尼莫地平組線粒體部分腫脹破損，其它比較完整，顯示保護作用。高劑量組線粒體部分腫脹破損，大部分保持完整形態(tài)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張不明顯，顯示保護作用。
由實施例1、3-9制得的丹參酮IIA滴丸用于本實驗，結(jié)果與本實施例基本相同。
實驗例11.本發(fā)明丹參酮IIA滴丸對大鼠全腦缺血再灌注損傷的保護作用
實驗方法與實施例10基本相同，參考Longa等人方法制備全腦缺血再灌注動物模型
(1)對全腦缺血再灌注大鼠腦組織MDA和SOD的影響
大鼠在全腦缺血30分鐘再灌注60分鐘后，腦組織MDA含量明顯升高，而SOD活性下降，模型組和假手術(shù)組相比差異顯著(P＜0.05)。與模型組比較，高劑量組(25mg/kg/d)和尼莫地平組的腦組織MDA含量均顯著下降(P＜0.01)，SOD活性均明顯上升(P＜0.05)。提示丹參酮IIA能使全腦缺血再灌注大鼠的腦組織過氧化程度受到明顯抑制，同時對機體清除自由基的能力有顯著提高(表2)。
表2 丹參酮IIA和尼莫地平對全腦缺血再灌注大鼠腦組織MDA和SOD的影響的比較
(X±SD)
與模型組相比*P＜0.05，，*P＜0.01，與假手術(shù)組相比△P＜0.05.
(2)對全腦缺血再灌注大鼠腦組織Na+-K+-ATP酶活性的影響
如圖6(其中X±SD，n與表2相同)所示，大鼠在腦缺血30min再灌注60min后，與假手術(shù)組(5.06±0.54μmolPi/mgprot/h)相比，模型組腦組織Na+-K+-ATP酶的活性(4.18±0.54μmolPi/mgprot/h)明顯下降，兩者差異顯著(P＜0.05)。與模型組比較，低劑量組(4.57±0.52μ molPi/mgprot/h)和尼莫地平組(4.61±0.16μmolPi/mgprot/h)的腦組織SOD活性有上升趨勢，但未達到統(tǒng)計學(xué)顯著(P＞0.05)；高劑量組的腦組織SOD活性(5.40±0.65μmolPi/mgprot/h)顯著上升(P＜0.01)。
結(jié)果表明丹參酮IIA對全腦缺血再灌注大鼠的腦組織Na+-K+-ATP酶活性具有很好的保護作用。
(3)對全腦缺血再灌注大鼠腦組織病理組織學(xué)的影響
光鏡下觀察可見，假手術(shù)組大鼠神經(jīng)細胞、神經(jīng)膠質(zhì)細胞及毛細血管形態(tài)正常，結(jié)構(gòu)完整，核仁清晰，胞漿染成淡紅色。模型組細胞形態(tài)異常，出現(xiàn)核不清，神經(jīng)元部分出現(xiàn)嗜神經(jīng)元現(xiàn)象，部分固縮、退變，僅剩細胞輪廓，少數(shù)細胞出現(xiàn)嗜酸性變。低劑量組血管擴張、充血，少數(shù)神經(jīng)元固縮，部分出現(xiàn)嗜神經(jīng)元現(xiàn)象。尼莫地平組神經(jīng)元部分固縮，尼氏小體減少，血管擴張、充血，但病變較輕。高劑量組與模型組相比，神經(jīng)元細胞變性明顯減輕。說明丹參酮IIA對全腦缺血再灌注大鼠的腦組織細胞形態(tài)具有很好的保護作用。
(4)對全腦缺血再灌注大鼠腦皮質(zhì)超微結(jié)構(gòu)的影響
在2000倍電鏡下觀察大鼠腦皮質(zhì)區(qū)的超微結(jié)構(gòu)。假手術(shù)組線粒體形態(tài)完好，內(nèi)外膜和脊清晰完整，超微結(jié)構(gòu)無明顯異常。模型組線粒體腫脹、破損，部分內(nèi)膜和嵴消失、溶解，留下大塊空白區(qū)域，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，核糖體減少，損傷嚴重。低劑量組線粒體腫脹，內(nèi)膜和嵴部分破損，但部分體積較小的線粒體外膜完整，內(nèi)膜與嵴正常。尼莫地平組線粒體部分腫脹破損，嵴部分破損，外膜尚完整。高劑量組少數(shù)線粒體發(fā)生腫脹，嵴破損消失，大部分保持完整形態(tài)，損傷較輕。說明丹參酮IIA對全腦缺血再灌注大鼠的腦皮質(zhì)區(qū)超微結(jié)構(gòu)具有很好的保護作用，且高劑量組的保護作用尤為明顯。
由實施例1、3-9制得的丹參酮IIA滴丸用于本實驗，結(jié)果與本實施例基本相同。
實施例12.離體培養(yǎng)實驗，顯示丹參酮IIA滴丸對原代大鼠神經(jīng)細胞擬缺血再灌注損傷的保護作用
(1)對神經(jīng)細胞缺氧缺糖損傷后形態(tài)學(xué)的影響
正常對照組神經(jīng)細胞胞體飽滿，細胞周圍光暈明顯，折光性強，突起完整，交織成網(wǎng)狀。缺氧缺糖12小時再復(fù)氧復(fù)糖24小時后，神經(jīng)細胞逐漸退化，胞體腫脹變圓，立體感降低，細胞突起縮短，胞體折光性下降，網(wǎng)絡(luò)退化，部分細胞崩解死亡。丹參酮IIA組和尼莫地平組神經(jīng)細胞突起清晰，胞體呈錐形、圓形，神經(jīng)細胞形態(tài)趨于正常，僅少數(shù)的細胞腫脹、壞死，細胞突起很少斷裂，相互連接，網(wǎng)絡(luò)存在。
(2)對神經(jīng)細胞缺氧缺糖損傷后細胞死亡率的影響
如圖7(其中尼莫地平組，4ug/ml；丹參酮IIA低劑量組，5ug/ml；丹參酮IIA高劑量組，15ug/ml)所示，神經(jīng)細胞在缺氧缺糖12h再復(fù)氧復(fù)糖24h后，與正常對照組(11.8±2.1％)相比，模型組細胞死亡率(38.7±7.8％)明顯上升，兩者差異顯著(P＜0.01)。與模型組比較，低劑量組細胞死亡率(26.2±4.9％)明顯下降(P＜0.05)；高劑量組(23.2±4.9％)和尼莫地平組(21.5±5.0％)的細胞死亡率顯著下降(P＜0.01)。
表明丹參酮II A對神經(jīng)細胞缺氧缺糖損傷具有很好的保護作用。
(3)對神經(jīng)細胞缺氧缺糖損傷所致LDH和NO含量的影響
原代培養(yǎng)的大腦皮層神經(jīng)細胞缺氧缺糖損傷后，LDH和NO的含量明顯增加，正常對照組與模型組差異顯著(P＜0.01)。與模型組比較，丹參酮IIA 5μg/ml和15μg/ml兩個劑量都能明顯降低LDH的含量(P＜0.05或P＜0.01)；15μg/ml劑量還能明顯降低NO的含量(P＜0.05)，5μg/ml劑量組的NO含量也有下降趨勢，但未達到統(tǒng)計學(xué)顯著(表3)。
表.3丹參酮II A和尼莫地平對神經(jīng)細胞缺氧缺糖損傷所致LDH和NO含量的影響的比較(X±SD，n＝6).
與模型組相比*P＜0.05，**P＜0.01，與對照組相比△△P＜0.01
由實施例1、3-9制得的丹參酮IIA滴丸用于本實驗，結(jié)果與本實施例基本相同。
實驗例13崩解(溶散)時限及溶出速率檢測對照
檢測指標及方法
1)崩解(溶散)時限照崩解時限檢查法(中國藥典2000年版二部附錄XA)檢查
2)溶出速率
取樣品，照溶出度測定法(中國藥典2000年版二部附錄XC)，以鹽酸溶液(稀鹽酸24ml加水至1000ml)600ml為溶劑，轉(zhuǎn)速每分鐘100轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)5、10、20、30和45分鐘時，取溶液1ml立即經(jīng)不大于0.8μm的微孔濾膜濾過，取濾液經(jīng)HPLC測定其中丹參酮IIA的含量，計算出溶出度。HPLC色譜條件選用ODC-C18柱，流動相甲醇∶水(75∶25)，流速0.5ml/min，檢測波長270nm.
市售復(fù)方丹參片檢測結(jié)果1)崩解時間37分鐘；2)溶出速率(見表4)
表4 市售復(fù)方丹參片溶出速率
實施例1樣品檢測結(jié)果1)溶解時間3分鐘；2)溶出速率(見表5)
表5 實施例1樣品溶出速率
實施例2樣品檢測結(jié)果1)溶解時間4分鐘；2)溶出速率(見表6)
表6 實施例2樣品溶出速率
實施例3樣品檢測結(jié)果1)溶解時間5分鐘；2)溶出速率(見表7)
表7 實施例3樣品溶出速率
實施例4樣品檢測結(jié)果1)溶解時間6分鐘；2)溶出速率(見表8)
表8 實施例4樣品溶出速率
實施例5樣品檢測結(jié)果1)溶解時間5分鐘；2)溶出速率(見表9)
表9 實施例5樣品溶出速率
實施例6樣品檢測結(jié)果1)溶解時間7分鐘；2)溶出速率(見表10)
表10 實施例6樣品溶出速率
由實施例7-9制得的丹參酮IIA滴丸用于本實驗，結(jié)果也基本相同，這表明，本發(fā)明藥物溶解迅速，溶出度高，奏效快。
權(quán)利要求
1、一種丹參酮IIA滴丸，其特征在于它由下列質(zhì)量份的原料組成丹參酮IIA 1份，基質(zhì)1-50份。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹參酮IIA滴丸，其特征在于，所說的基質(zhì)是聚乙二醇6000、聚乙二醇4000、聚乙二醇1500、聚乙二醇1000、硬脂酸鈉、甘油明膠、泊洛沙姆、硬脂酸及單硬脂酸甘油酸中的一種或幾種的混合物。
3、一種制備權(quán)利要求1所說的丹參酮IIA滴丸的方法，其特征在于
將丹參生藥材粉碎，用乙醇加熱回流提取，溫度控制在50-80℃，然后減壓回收乙醇，得醇浸膏；將醇浸膏用熱水洗滌除去水溶性物質(zhì)，然后加入苯加熱溶解，苯溶液上中性氧化鋁柱，用苯洗脫，收集丹參酮IIA洗脫液，蒸餾除去苯，得丹參酮IIA粗品；
按權(quán)利要求1所說的組分和含量，將丹參酮IIA加入熔融的基質(zhì)中，混合均勻，加入制滴丸裝置，保溫85℃至90℃，滴入5℃至15℃的冷卻劑中，然后除去冷卻劑，選粒，即得丹參酮IIA滴丸。
4、一種制備權(quán)利要求1所說的丹參酮IIA滴丸的方法，其特征在于
將丹參生藥材粉碎，用乙醇加熱回流，溫度控制在50-80℃，然后減壓回收乙醇，得醇浸膏，用甲醇溶解，過濾除去不溶性物質(zhì)，濃縮濾液，上SephadexLH-20，70％甲醇洗脫，收集橘紅色段洗脫液，蒸餾除去甲醇，得丹參酮IIA粗品；
按權(quán)利要求1所說的組分和含量，將丹參酮IIA加入熔融的基質(zhì)中，混合均勻，加入制滴丸裝置，保溫85℃至90℃，滴入5℃至15℃的冷卻劑中，然后除去冷卻劑，選粒，即得丹參酮IIA滴丸。
5、根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的制備方法，其特征在于，所說的丹參酮IIA粗品經(jīng)重結(jié)晶純化，含量達70％以上。
6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所說的冷卻劑是二甲基硅油、液體石蠟、植物油或冰水。
7、權(quán)利要求1所述的丹參酮IIA滴丸作為治療腦缺血性疾病藥物的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種丹參酮IIA滴丸及其制備工藝，以及該丹參酮IIA滴丸的應(yīng)用，屬于中藥領(lǐng)域。本發(fā)明的丹參酮IIA滴丸，由下列重量份的原料組成丹參酮IIA1份，基質(zhì)1－50份。所述丹參酮IIA滴丸的制備方法是按所述滴丸的組分的含量，將丹參酮IIA加入熔融的基質(zhì)中，混合均勻，加入制滴丸裝置，保溫，滴入冷卻劑中，除去冷卻劑，選粒，即可。本發(fā)明的丹參酮IIA滴丸可做為治療腦缺血性疾病藥物應(yīng)用。由本發(fā)明制得的丹參酮IIA滴丸，不僅有利于運輸、存貯、攜帶和使用，而且服用后崩解迅速，奏效快，便于腦血管病人的治療與預(yù)防，尤其是對于改善腦血循環(huán)，防治腦缺血性疾病有很好治效果。
文檔編號A61K31/343GK1698597SQ20051003910
公開日2005年11月23日 申請日期2005年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月26日
發(fā)明者呂煒鋒, 奚濤, 任敏 申請人:呂煒鋒, 奚濤, 任敏