專(zhuān)利名稱(chēng)：非腺嘌呤在制備促進(jìn)傷口愈合的藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及非腺嘌呤的用途，具體地說(shuō)是非腺嘌呤在制備促進(jìn)傷口愈合的藥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
我們知道，傷口愈合是受傷組織恢復(fù)到正常組織結(jié)構(gòu)的基本過(guò)程。雖然大部分傷口愈合很快，但是組織損傷或恢復(fù)緩慢仍是臨床所面臨的主要挑戰(zhàn)。傷口無(wú)法愈合大多同人體受到的某些損害有關(guān)，例如糖尿病、感染或免疫抑止。糖尿病患者極易引發(fā)下肢慢性潰瘍，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致死亡。傷口愈合是一種復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程，其特點(diǎn)是分為幾個(gè)連續(xù)的階段受傷、血液凝固、發(fā)炎、組織形成和組織重建。皮膚受傷經(jīng)常伴隨出血，從而導(dǎo)致血小板聚集，形成血液凝塊，這樣傷口愈合的過(guò)程就開(kāi)始了。隨后，免疫細(xì)胞移往傷口周?chē)?，修?fù)開(kāi)始，這便進(jìn)入發(fā)炎階段。在到達(dá)傷口附近的免疫細(xì)胞中，除了巨噬細(xì)胞外，中性粒細(xì)胞是最主要的免疫細(xì)胞。發(fā)炎過(guò)程是組織修復(fù)的開(kāi)始，而白細(xì)胞有序的聚集則是保證發(fā)炎過(guò)程順利進(jìn)行所必需的。隨著發(fā)炎的繼續(xù)，通過(guò)纖維增生和血管生成，組織和細(xì)胞外基質(zhì)開(kāi)始形成。所有這些環(huán)節(jié)都必須協(xié)調(diào)推進(jìn)，而且各種細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子和其他活性分子缺一不可。在這個(gè)有條不紊的過(guò)程中，任何一個(gè)環(huán)節(jié)的缺失都會(huì)造成傷口無(wú)法愈合。
鳥(niǎo)苷是一種天然健康產(chǎn)品，鳥(niǎo)苷是一種含有鳥(niǎo)嘌呤和D-核糖成分的核苷，它帶有輕微的鹽味，常常存在于胰腺、三葉草、咖啡植被和松樹(shù)花粉中。人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)鳥(niǎo)苷天然存在于一些植物中并可以從中進(jìn)行分離，例如冬蟲(chóng)夏草屬、松樹(shù)根莖和苜蓿屬植物分泌物或者紫花苜蓿植被。其化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖6所示。
鳥(niǎo)苷在營(yíng)養(yǎng)學(xué)方面的影響，尤其是對(duì)慢性脊柱損傷的運(yùn)動(dòng)功能改善和髓鞘再生的改善，其動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究是我們對(duì)人類(lèi)機(jī)體進(jìn)行臨床試驗(yàn)的基礎(chǔ)?；?003年Jiang等人的研究成果，對(duì)創(chuàng)傷性脊髓損傷35天的大鼠連續(xù)7天應(yīng)用鳥(niǎo)苷(經(jīng)腹腔注射，8毫克/千克/天)，可以發(fā)現(xiàn)脊髓的功能恢復(fù)和髓鞘再生。
對(duì)小鼠經(jīng)口腔或經(jīng)腹腔應(yīng)用鳥(niǎo)苷可以防止由于谷氨酸鹽產(chǎn)生的興奮性中毒所引起的癲癇和死亡，而這種興奮性中毒在臨床上與癲癇、中風(fēng)和神經(jīng)變性等疾病的治療存在一定的關(guān)聯(lián)性。其他的研究結(jié)果同樣證明了鳥(niǎo)苷的抗驚厥作用，另外，也有研究發(fā)現(xiàn)鳥(niǎo)苷在小鼠中的促遺忘作用和抗焦慮作用，這是由于鳥(niǎo)苷在調(diào)節(jié)谷氨酸鹽興奮系統(tǒng)作用中的功能相似的原因。
鳥(niǎo)苷可促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖，從而在阻止星形膠質(zhì)細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡的過(guò)程中起到一定作用。鳥(niǎo)苷還可以促進(jìn)損傷后神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的釋放，促進(jìn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)中更多的嘌呤釋放。在機(jī)體對(duì)損傷的反應(yīng)中，鳥(niǎo)苷還可對(duì)小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和毛細(xì)管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生作用。
鳥(niǎo)苷是在多種營(yíng)養(yǎng)學(xué)效應(yīng)中所包含的一種嘌呤核苷。人體損傷后，鳥(niǎo)苷和其他的嘌呤、腺苷從神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中釋放出來(lái)，并且處于正常水平。盡管對(duì)P1和P2腺苷受體進(jìn)行了大量廣泛的研究，但是鳥(niǎo)苷發(fā)生作用的部位仍然是目前研究的熱點(diǎn)。最近的一項(xiàng)對(duì)大鼠大腦鳥(niǎo)苷結(jié)合部位的研究顯示存在G-偶聯(lián)鳥(niǎo)苷受體。G-蛋白依賴(lài)性信號(hào)標(biāo)志途徑，包括MAP激酶途徑和PI3-Kinase/AKT/PKB途徑(可抑制能引起編程性細(xì)胞死亡的胱門(mén)蛋白酶)可以調(diào)節(jié)鳥(niǎo)苷的多種營(yíng)養(yǎng)學(xué)作用，例如防止星形膠質(zhì)細(xì)胞編程性細(xì)胞死亡的保護(hù)作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供非腺嘌呤比如鳥(niǎo)苷、鳥(niǎo)嘌呤和肌苷等作為制備治療和促進(jìn)傷口愈合的藥中的應(yīng)用。
本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題采用的技術(shù)方案是非腺嘌呤比如鳥(niǎo)苷、鳥(niǎo)嘌呤和肌苷等，用其中的一種即可，能用來(lái)治療和促進(jìn)傷口愈合。特別是能增進(jìn)健康小白鼠和患先天性糖尿病的小白鼠損傷皮膚的傷口愈合。同時(shí)也證實(shí)了傷口愈合過(guò)程中，非腺嘌呤通過(guò)激活細(xì)胞內(nèi)的生物酶(如納豆激酶)起作用。


以下將描述相關(guān)的圖表圖表1為不同濃度鳥(niǎo)苷促進(jìn)Balb/c小鼠傷口愈合效果圖。
圖表2為不同濃度鳥(niǎo)嘌呤促進(jìn)小鼠傷口愈合效果圖。
圖表3為250um肌苷促進(jìn)小鼠傷口愈合效果圖及6-硫代鳥(niǎo)嘌呤抑制肌苷促進(jìn)傷口愈合效果圖。
圖表4為25ug/ml抗-NGF抑制250um鳥(niǎo)苷促進(jìn)傷口愈合效果圖。
圖表5為250um鳥(niǎo)苷促進(jìn)先天性糖尿病小鼠的皮膚傷口愈合。
圖表6為鳥(niǎo)苷化學(xué)結(jié)構(gòu)圖。
名詞中英文對(duì)照非腺嘌呤non-adenine based purines鳥(niǎo)苷guanosine鳥(niǎo)嘌呤 guanine肌苷inosine神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF6-硫代鳥(niǎo)嘌呤6-TG具體實(shí)施方式
為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面將用鳥(niǎo)苷、鳥(niǎo)嘌呤和肌苷等的試驗(yàn)及結(jié)果說(shuō)明其在制備促進(jìn)傷口愈合的藥中的應(yīng)用。本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)、效果在以下的詳細(xì)描述中越發(fā)明顯。涉及本發(fā)明的最優(yōu)方案時(shí)對(duì)于詳盡的描述和具體的例子，我們只作注解，有了詳盡的描述，在不改變本發(fā)明的宗旨和發(fā)明領(lǐng)域的前提下，對(duì)其略做修改和變化是輕而易舉的事情。
本發(fā)明已經(jīng)證實(shí)了非腺嘌呤鳥(niǎo)苷、鳥(niǎo)嘌呤和肌苷能通過(guò)激活納豆激酶在促進(jìn)傷口愈合時(shí)起到有效作用。
因此，本發(fā)明還提供了一種通過(guò)對(duì)生物體使用有效劑量的納豆激酶激動(dòng)劑促進(jìn)傷口愈合的方法。
“有效數(shù)量”一詞在此意指為達(dá)到理想的效果，在必需的時(shí)間內(nèi)所使用的有效的劑量。
“生物體”一詞在此意指所有的動(dòng)物，包括人在內(nèi)，但被治療的最好是人。
“納豆激酶激動(dòng)劑”一詞在此指任何通過(guò)激活納豆激酶促進(jìn)傷口愈合的分子或化合物。不論一種分子或化合物是否通過(guò)納豆激酶起到作用，都能夠通過(guò)檢測(cè)納豆激酶抑制劑(比如6一硫代鳥(niǎo)嘌呤)對(duì)該分子或化合物活動(dòng)的影響來(lái)檢測(cè)。不論一種分子或化合物是否能夠促進(jìn)傷口愈合，都能通過(guò)各種體外或體內(nèi)模型檢測(cè)出來(lái)，包括本文描述的模型。具體說(shuō)來(lái)，納豆激酶激動(dòng)劑指鳥(niǎo)苷、鳥(niǎo)嘌呤或肌苷。
本發(fā)明的整體研究方案及過(guò)程如下本發(fā)明首先選擇的動(dòng)物是Balb/c雌鼠，6-8周大，有先天性糖尿病。
手術(shù)傷口的形成整個(gè)手術(shù)過(guò)程都嚴(yán)格遵循了AREB 102條款，高度警惕。在CAF的外科手術(shù)室進(jìn)行手術(shù)，給小鼠吸入異氟烷(3-5％)和氧氣(1L/min)，使其麻醉。用夾子夾起小鼠背部的毛，這是對(duì)皮膚最后的準(zhǔn)備工作，然后用濃度為70％的酒精消毒。用鑷子和剪刀在被麻醉的Balb/c小鼠背部留下兩個(gè)全層皮切割傷口(直徑1cm)，然后消毒，傷口至少間隔1cm完好的皮膚。
處理方法把1.5％(w/v)的羧甲基化纖維素(CMC)(sigma)0.15g融解在10ml PBS中，然后將溶液通過(guò)一個(gè)0.2μmHT Tuffryn膜片過(guò)濾，將最后的溶液等分裝入蓋塑膠小試管，保存于-20℃低溫下備用。
治療首先將1.41mg鳥(niǎo)苷融解于0.5ml的1M氫氧化鈉中，然后加入4.5mlddH2O；再加入同等量的3％CMC貯備溶液，混和溶液，然后將溶液通過(guò)一個(gè)0.2μmHT Tuffryn膜片過(guò)濾，將溶液保存于-20℃低溫備用。
本發(fā)明所用的其他濃度的鳥(niǎo)苷，也都是通過(guò)這種方法制成的。根據(jù)想要制成的濃度，每次實(shí)驗(yàn)所要融解的鳥(niǎo)苷劑量根據(jù)濃度的不同而變化。最終的藥劑由鳥(niǎo)苷、CMC和PBS的貯備溶液混和而成。
在實(shí)驗(yàn)中所用的肌苷、鳥(niǎo)嘌呤和6-硫代鳥(niǎo)嘌呤的準(zhǔn)備方法同鳥(niǎo)苷相同。制作貯備溶液時(shí)，先將每種化合物溶于蒸餾水，最后在其貯備溶液中加入3％CMC和PBS貯備溶液。
0.5％透明質(zhì)酸處理方法將250mg透明質(zhì)酸溶于25ml消毒過(guò)的PBS，然后加入相同量的濃度為3％CMC的儲(chǔ)備溶液，混合溶液，然后將溶液儲(chǔ)存在-20℃低溫備用。
NBTI(500μm)處理方法將4.19mg NBTI和2.5ml二甲基壓砜(BDH)制成4000μm NBTI(Sigma)的貯備溶液。將其與3％CMC和PBS貯備溶液混合做溶體處理，再將最后的溶液通過(guò)HT Tuffryn膜片過(guò)濾并儲(chǔ)存在-20℃低溫備用。
神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)和抗NGF抗體處理方法按照2μg/μl的比例使用2.5S NGF，按照25μg/ml的比例使用抗NGF。
所有的藥劑在使用之前都需要加熱到37℃，然后用移液管把藥劑局部施用到每個(gè)傷口表面，用移液管的邊緣使藥劑擴(kuò)散到整個(gè)傷口。
手術(shù)傷口閉合的測(cè)量將小鼠隨機(jī)分到不同的治療小組，每組有4-7只，整個(gè)觀察過(guò)程中，研究人員也無(wú)法分辨。手術(shù)后連續(xù)7天，每天用20μl藥劑局部處理傷口。到第4，5，6，7天，傷口邊緣形成和傷口試劑取得后，就可以去掉夾子了。手術(shù)后第二天和以后每隔一天都要將傷口情況記錄到透明的塑料紙上，然后通過(guò)使用IPLab(Scanalytics Inc.，8550 Lee Highway，Suite 400 3.5版)把傷口面積量化。所有的實(shí)驗(yàn)都需要重復(fù)2-3次，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性，因?yàn)樵趥谟下史矫?，不同組的小鼠之間存在差別，每個(gè)實(shí)驗(yàn)都有其溶劑對(duì)照組。
數(shù)據(jù)分析傷口愈合面積通過(guò)測(cè)量每只小鼠每個(gè)傷口的相對(duì)閉合傷口和原始傷口面積得出，平均傷口愈合閉合面積就是同一個(gè)治療小組的小鼠每天傷口閉合面積的平均值。這樣，每個(gè)小組的小鼠每天的平均傷口愈合面積就可繪成圖表，并且可以同其他治療小組進(jìn)行對(duì)比。每天平均結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)誤差也可以計(jì)算出來(lái)。
組織學(xué)研究第1，2，3，4，5天，受傷的小鼠被二氧化碳麻醉后，將切割下的身體側(cè)面皮膚組織，包括整個(gè)受傷區(qū)域及其下層的肌肉，放入10％的福爾馬林磷酸鹽緩沖液固定1個(gè)周。把每個(gè)標(biāo)本做最大維度的切割，用于組織學(xué)觀察；酒精和二甲苯的濃度不斷升高，組織脫水；用石蠟包埋；將切片置于玻璃片之上；再用蘇木精、伊紅染色，做成5mm厚的切片。
將所有切片放到暗視野顯微鏡下觀察，并將所有顯著變化拍照。
傷口愈合結(jié)果為驗(yàn)證活體內(nèi)局部施用嘌呤在可以促進(jìn)傷口愈合的假說(shuō)，我們對(duì)其在健康的Balb/c幼鼠(6-8周大)和先天性糖尿病的小鼠所起到的促進(jìn)作用進(jìn)行了研究，受傷后沒(méi)有被治療的小鼠會(huì)自療這一結(jié)果得到了確認(rèn)。因此，這些實(shí)驗(yàn)研究了同溶劑對(duì)照組進(jìn)行對(duì)比，局部施用藥物后對(duì)傷口閉合的促進(jìn)作用。因?yàn)樵趧?dòng)物身上進(jìn)行的傷口愈合會(huì)有偏差，所以每個(gè)實(shí)驗(yàn)都有溶劑對(duì)照組。
實(shí)施例1局部施用鳥(niǎo)苷促進(jìn)小鼠皮膚傷口愈合從圖表1中可以看出，Balb/c小鼠的手術(shù)傷口每天都用鳥(niǎo)苷濃度為50μm-5000μm的羧甲基化纖維素進(jìn)行治療。我們的實(shí)驗(yàn)證實(shí)了同溶劑對(duì)照組(圖表1，p＜0.001，n＝8)相比每天一次局部施用250μm鳥(niǎo)苷能夠增強(qiáng)傷口愈合，更高濃度的鳥(niǎo)苷(1000μm-5000μm)對(duì)動(dòng)物的傷口愈合不會(huì)產(chǎn)生更強(qiáng)的促進(jìn)作用。圖表1同時(shí)表明，鳥(niǎo)苷治療組50％的傷口閉合需要1.6天，而溶劑對(duì)照組(p＜0.001，n＝10)需要3天。
本實(shí)施例所指的鳥(niǎo)苷局部施用在Balb/c小鼠的皮膚傷口上。如該方法所述，每天為每一只小鼠測(cè)量傷口閉合面積并且表示為第二天的面積于前一天面積之比。同溶劑對(duì)照組的小鼠相比，每天一次施用250μm鳥(niǎo)苷對(duì)傷口閉合非常有效(p＜0.0001，n＝8)。
對(duì)傷口的組織學(xué)觀察證實(shí)了這些發(fā)現(xiàn)。
鳥(niǎo)苷通過(guò)細(xì)胞內(nèi)機(jī)制增進(jìn)傷口愈合為了進(jìn)一步證實(shí)轉(zhuǎn)運(yùn)鳥(niǎo)苷到細(xì)胞內(nèi)是細(xì)胞作用機(jī)理所必需的，我們同時(shí)使用NBTI(轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞內(nèi)的一種嘌呤)和鳥(niǎo)嘌呤，結(jié)果發(fā)現(xiàn)500umNBTI抑制了鳥(niǎo)苷促進(jìn)傷口愈合。
鳥(niǎo)苷通過(guò)釋放NGF增進(jìn)傷口愈合NGF能促進(jìn)小鼠的傷口愈合，所以我們想知道鳥(niǎo)苷是否通過(guò)釋放NGF來(lái)促進(jìn)傷口愈合。結(jié)果表明同時(shí)使用250um鳥(niǎo)苷和2ug/20ul的2.5S NGF同單獨(dú)使用250um鳥(niǎo)苷對(duì)傷口愈合的程度起近似的促進(jìn)作用，而且25ug/ml抗NGF抗體抑制了250um鳥(niǎo)苷促進(jìn)傷口愈合，如圖表4所示。這就表明鳥(niǎo)苷通過(guò)釋放NGF促進(jìn)傷口愈合。
實(shí)施例2鳥(niǎo)苷能促進(jìn)糖尿病小鼠的傷口愈合臨床證據(jù)表明糖尿病患者傷口代謝紊亂經(jīng)常會(huì)導(dǎo)致傷口難以修復(fù)。為了證實(shí)鳥(niǎo)苷是否能夠促進(jìn)糖尿病小鼠的傷口愈合，我們研究了對(duì)先天性糖尿病小鼠的皮膚傷口局部施用250um鳥(niǎo)苷后的效果，用試驗(yàn)小鼠模擬了II型糖尿病人。糖尿病小鼠的傷口比正常小鼠(Balb/c)愈合的慢。我們發(fā)現(xiàn)同溶劑對(duì)照組相比，每天一次局部施用250um鳥(niǎo)苷能加快傷口愈合，在第二天就能見(jiàn)效，如圖表5所示。
實(shí)施例3鳥(niǎo)嘌呤促進(jìn)小鼠的傷口閉合證實(shí)了鳥(niǎo)苷能夠促進(jìn)小鼠的傷口愈合后，我們還想證明其他非腺嘌呤，比如鳥(niǎo)嘌呤、肌苷在我們的實(shí)驗(yàn)中是否也能增進(jìn)皮膚傷口愈合。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，如圖表2所示，同溶劑對(duì)照組(p＜0.001，n＝8)相比，使用250μm和1000μm鳥(niǎo)嘌呤也可以有效的促進(jìn)傷口愈合。鳥(niǎo)嘌呤使50％的傷口愈合時(shí)間減少，250μm治療組需要1.6天，1000μm組需要3.1天。
鳥(niǎo)嘌呤有促進(jìn)傷口愈合的作用表明在活體內(nèi)傷口愈合不需要核糖分子。
實(shí)施例4肌苷促進(jìn)小鼠的傷口閉合同樣的，和溶劑對(duì)照組相比，用250μm肌苷治療小鼠，也能夠非常有效地增進(jìn)傷口愈合。用肌苷治療的50％的傷口愈合需要1.2天，而溶劑對(duì)照組需要2.8天。而同時(shí)使用1000um6-硫代鳥(niǎo)嘌呤和250um肌苷的小鼠則需要2天。如圖表3所示。
6-硫代鳥(niǎo)嘌呤抑制鳥(niǎo)苷、肌苷、鳥(niǎo)嘌呤的作用肌苷、鳥(niǎo)苷可以促進(jìn)金魚(yú)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)機(jī)制的生成，但是作為一種納豆激酶抑制劑，高濃度的6-硫代鳥(niǎo)嘌呤(6-TG)會(huì)抑制這種作用。因此我們想知道鳥(niǎo)苷和肌苷在促進(jìn)傷口愈合的同時(shí)，是否也對(duì)細(xì)胞內(nèi)機(jī)制(納豆激酶)的生成有促進(jìn)作用。所以我們研究了6-TG的作用，在用鳥(niǎo)苷和肌苷促進(jìn)小鼠的傷口愈合時(shí)，它是一種納豆激酶抑制劑。我們用濃度50um--1000um的6-TG同250um鳥(niǎo)苷、250um肌苷做了一系列試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果表明，低濃度的6-TG不足以抑制250um非腺嘌呤促進(jìn)傷口愈合，但高濃度的6-TG(1000um)就會(huì)抑制肌苷、鳥(niǎo)苷、鳥(niǎo)嘌呤促進(jìn)傷口愈合。如圖表3所示。
對(duì)上述實(shí)施例的討論以上提到的結(jié)果說(shuō)明，對(duì)健康幼鼠和糖尿病小鼠局部施用250μm鳥(niǎo)苷能夠明顯提高傷口治愈率。而且，使用其他非腺嘌呤(肌苷、鳥(niǎo)嘌呤)也能夠促進(jìn)正常小鼠的傷口愈合。
嘌呤類(lèi)似物6-硫代鳥(niǎo)嘌呤抑制了鳥(niǎo)苷、肌苷、鳥(niǎo)嘌呤對(duì)傷口愈合的促進(jìn)作用。加入鳥(niǎo)苷或肌苷能夠增強(qiáng)PC12細(xì)胞中NGF的作用，同時(shí)能刺激雛雞交感神經(jīng)原的分化。在PC12細(xì)胞中，NGF激活了多個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)反應(yīng)和具有47-49kda絲氨酸/蘇氨酸激酶部分特性的納豆激酶。嘌呤類(lèi)似物6-硫代鳥(niǎo)嘌呤(6-TG)選擇性地抑制細(xì)胞內(nèi)被NGF激活的47-49kda納豆激酶。6-TG只對(duì)納豆激酶有特定的作用，對(duì)其他信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子(例如蛋白激酶A、蛋白激酶C、Ca2+鈣調(diào)素或絲裂原活化蛋白激酶)及早期應(yīng)答基因(例如c-fos基因)的誘導(dǎo)沒(méi)有影響。在我們的研究中，當(dāng)6-TG的濃度降低到不能抑制鳥(niǎo)苷促進(jìn)傷口愈合時(shí)，兩者之間的競(jìng)爭(zhēng)尤為明顯。但是把6-TG的濃度提高到1000μm，就會(huì)抑制鳥(niǎo)苷、肌苷、鳥(niǎo)嘌呤加快傷口愈合的作用。
因此，我們確定在6-TG充當(dāng)納豆激酶的抑制劑時(shí)，鳥(niǎo)苷和肌苷就作為激動(dòng)劑起作用。肌苷、鳥(niǎo)苷和6-TG結(jié)構(gòu)相似，它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)的活動(dòng)就具有協(xié)調(diào)性。如果是鳥(niǎo)嘌呤，我們認(rèn)為它會(huì)轉(zhuǎn)化為鳥(niǎo)苷，繼而促進(jìn)傷口愈合。
NBTI是轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞內(nèi)的一種嘌呤抑制劑，它的使用更進(jìn)一步證實(shí)了鳥(niǎo)苷在細(xì)胞內(nèi)的活動(dòng)機(jī)制。500μm NBTI降低了鳥(niǎo)苷對(duì)傷口愈合的促進(jìn)作用。因此，觀察到的小鼠身上嘌呤核苷對(duì)傷口愈合的促進(jìn)作用受細(xì)胞內(nèi)嘌呤敏感激酶的控制。
糖尿病小鼠的傷口愈合患先天性糖尿病(BKS.Cg-m+/+leprdb)的小鼠是臨床上可再出現(xiàn)的傷口不可修復(fù)的例子。純合子突變表現(xiàn)為肥胖、不孕、高血糖、抗胰島素，最終發(fā)展成嚴(yán)重的糖尿病。這些動(dòng)物的癥狀同成人糖尿病的癥狀類(lèi)似，并且傷口愈合明顯延遲。正如此，它們?cè)?jīng)被用作模型系統(tǒng)來(lái)測(cè)試治療延遲愈合藥劑的藥效。
我們發(fā)現(xiàn)250μm鳥(niǎo)苷能有效地促進(jìn)患先天性糖尿病小鼠的傷口愈合，這種促進(jìn)作用最早發(fā)生在治療過(guò)程的第二天。我們據(jù)此認(rèn)為出現(xiàn)在最初愈合過(guò)程中的巨噬細(xì)胞對(duì)鳥(niǎo)苷治療傷口愈合是至關(guān)重要的。
其他的機(jī)制也對(duì)非腺嘌呤促進(jìn)傷口愈合起作用。細(xì)胞外非腺嘌呤能引起多種不同類(lèi)型的細(xì)胞再生，包括腦血管內(nèi)皮細(xì)胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞。因此，嘌呤可以引起巨噬細(xì)胞(巨噬細(xì)胞和小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的功能相似)、血管內(nèi)皮細(xì)胞或成纖維細(xì)胞的再生，繼而引起傷口愈合率的升高。
另外一種在愈合過(guò)程起作用的機(jī)制就是那些在傷口愈合過(guò)程中配合其他生長(zhǎng)因子起作用的嘌呤。先前用嘌呤做的實(shí)驗(yàn)證實(shí)了嘌呤能刺激中樞神經(jīng)系統(tǒng)營(yíng)養(yǎng)因子的釋放。正因?yàn)槿绱耍B(niǎo)苷才可以通過(guò)配合其他生長(zhǎng)因子促進(jìn)傷口愈合。
我們得出結(jié)論像鳥(niǎo)苷、肌苷、鳥(niǎo)嘌呤這些非腺嘌呤能促進(jìn)普通療法和基因療法的小鼠傷口愈合。因此，它們可以成為正常個(gè)體或傷口難愈的個(gè)體潛在藥劑。
本發(fā)明參考了許多到目前認(rèn)為可取的例證，但并不僅僅局限于這些已公開(kāi)的例證，相反，本發(fā)明意在涵蓋各種修正和附加聲明中所包括的各種修正相應(yīng)的排列。
權(quán)利要求
1.非腺嘌呤在制備促進(jìn)傷口愈合的藥中的應(yīng)用。
2.非腺嘌呤在制備促進(jìn)患先天性糖尿病的損傷皮膚的傷口愈合的藥中的應(yīng)用
3.非腺嘌呤是鳥(niǎo)苷或鳥(niǎo)嘌呤或肌苷。
全文摘要
本發(fā)明涉及非腺嘌呤在制備促進(jìn)傷口愈合的藥中的應(yīng)用，非腺嘌呤比如鳥(niǎo)苷、鳥(niǎo)嘌呤和肌苷等，用其中的一種即可，能用來(lái)治療和促進(jìn)傷口愈合。特別是能增進(jìn)健康小白鼠和患先天性糖尿病的小白鼠損傷皮膚的傷口愈合。本發(fā)明在促進(jìn)傷口愈合過(guò)程中，納豆激酶抑制劑抑制化合物生效的同時(shí)，非鳥(niǎo)嘌呤通過(guò)激活細(xì)胞內(nèi)的生物酶(如納豆激酶)起作用。
文檔編號(hào)A61P17/02GK1864697SQ20051004359
公開(kāi)日2006年11月22日 申請(qǐng)日期2005年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月16日
發(fā)明者姜淑翠, 羅士博, 王濟(jì)中, 夏樹(shù)松 申請(qǐng)人:威海楓葉科技開(kāi)發(fā)有限公司