專利名稱：1－(2′－脫氧－2′－氟－3′－O－氨基酸酯－β－L－呋喃阿拉伯糖基)－5－甲基尿嘧 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-氨基酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶及其可藥用的鹽；一種制備1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-氨基酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)堿基的方法，包括應(yīng)用此方法制備本發(fā)明的化合物及優(yōu)選實(shí)施化合物；含它們的藥用組合物以及單獨(dú)使用1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-氨基酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶、或其可藥用的鹽、或其前藥、或它們與第二種抗病毒藥物聯(lián)合用于制備治療和/或預(yù)防急性和慢性HBV或EBV或HCV感染引起的疾病的藥物的用途。
背景技術(shù)：
專利WO9520595公開(kāi)了1-(2′-脫氧-2′-氟-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶(L-FMAU)及其5′-O衍生物具有抗HBV或EBV的活性。其后相關(guān)文獻(xiàn)Biochem.Pharmacol.，1996，51，941-947；Antimicrob.Agents Chemother.，1996，40，280-386；Antimicrob.Agents Chemother.，1998，42，833-839等進(jìn)一步報(bào)道1-(2′-脫氧-2′-氟-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶具有強(qiáng)的抗HBV或EBV作用，且抗EBV選擇性高于DHPG。在細(xì)胞內(nèi)它被dCyd激酶、dThd激酶和線粒體dPyrd激酶催化生成單磷酸酯衍生物。該單磷酸酯可進(jìn)一步被催化生成二磷酸酯和三磷酸酯衍生物。1-(2′-脫氧-2′-氟-5′-O-三磷酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶可抑制HBV、EBV的DNA合成，而本身不參與HBV/EBV的DNA合成。同時(shí)該三磷酸酯不抑制細(xì)胞的DNA聚合酶α、β、δ，故在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中均表現(xiàn)為低毒性，不抑制骨髓祖細(xì)胞，無(wú)細(xì)胞毒性，不影響線粒體功能，且即使停藥后，也未發(fā)現(xiàn)病毒感染有反跳現(xiàn)象。
遺憾的是1-(2′-脫氧-2′-氟-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶水溶性低，因此，嚴(yán)重影響其體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。Pharm.Res.，1995，121350-1353；Biopharm.Drug Dispos.，1996，17197-207；Antimicrob.Agents Chemother.，1997，41，214-2187等有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，1-(2′-脫氧-2′-氟-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶與血漿蛋白結(jié)合率低，只有15％；口服吸收很慢，而且其半衰其較短，生物利用度只有36±13％。
通過(guò)提高化合物的水溶性，可改善其體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，提高口服生物利用度，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的。另外，專利WO01/90121(US Serial NO 09/864,078)、WO01/92282(US Serial NO09/863,816)公開(kāi)了2′和3′分枝核苷(糖基的2′位或3′位帶4個(gè)非氫取代的核苷)糖基的羥基經(jīng)氨基酸?；甚バ揎棧芴岣咂潴w內(nèi)穩(wěn)定性和生物利用度；專利WO2004002422公開(kāi)了2′位帶甲基取代的分枝核苷類化合物其3′-羥基經(jīng)L-纈氨酸酯化修飾后在體內(nèi)的吸收、分布的研究結(jié)果，β-D-2′-C-甲基-3′-O-L-纈氨酸酯-呋喃核糖基胞嘧啶(Val-mCyd)經(jīng)口服給藥在胃腸道的粘液、或血液、或肝臟內(nèi)水解纈氨酸酯鍵轉(zhuǎn)變成母體化合物β-D-2′-C-甲基-呋喃核糖基胞嘧啶(MCyd)，仍然保持抗病毒活性。而Val-mCyd具有更好的體內(nèi)吸收效果，主要是，β-D-2′-C-甲基-3′-O-L-纈氨酸酯-呋喃核糖基胞嘧啶能通過(guò)胃腸道粘液中的氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)子的作用以主動(dòng)運(yùn)輸方式進(jìn)入血液。而一部分Val-mCyd在被完全吸收之前，在胃腸道的粘液中就水解纈氨酸酯鍵轉(zhuǎn)變成母體化合物MCyd，則通過(guò)核苷轉(zhuǎn)運(yùn)子的作用進(jìn)入血液。因此，與母體化合物MCyd相比，Val-mCyd以兩種方式被吸收，吸收效果更好，提高了口服生物利用度，同時(shí)對(duì)人體依賴核苷轉(zhuǎn)運(yùn)子的作用吸收其它核苷或核苷類似物進(jìn)入血液的競(jìng)爭(zhēng)有所緩解。
申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)，將1-(2′-脫氧-2′-氟-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶的3′-OH與氨基酸反應(yīng)成酯后，游離的氨基與酸反應(yīng)形成可藥用的鹽，可大大提高化合物的水溶性，改善母體化合物的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。另一方面，1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-氨基酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶及其可藥用的鹽在體內(nèi)水解3′-O-氨基酸酯鍵后，轉(zhuǎn)變成母體化合物1-(2′-脫氧-2′-氟-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶發(fā)揮抗HBV和EBV的作用。
專利WO2004052899和WO2004058792公開(kāi)了由2′-C-甲基-呋喃核糖構(gòu)成的核苷直接酯化制備其3′-O-纈氨酸酯的方法。申請(qǐng)人發(fā)明了一種1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-氨基酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)堿基等核苷類化合物的制備方法，應(yīng)用這種新方法制備了1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-氨基酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是對(duì)1-(2′-脫氧-2′-氟-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶分子中的3′-OH進(jìn)行適當(dāng)修飾，改善其溶解性，特別是1-(2′-脫氧-2′-氟-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶的水溶性，進(jìn)而改善其體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，提高口服生物利用度。同時(shí)保持母體化合物1-(2′-脫氧-2′-氟-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶的體內(nèi)抗HBV或HCV或EBV等病毒的活性。
申請(qǐng)人發(fā)明了一種1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-氨基酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)堿基等核苷類化合物新的制備方法，由2-脫氧-2-氟-3-O-(N-保護(hù)基)氨基酸酯-5-O-硅醚-呋喃阿拉伯糖基溴與5-甲基-2，4-雙-O-(三甲基硅基)嘧啶反應(yīng)，制備1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-氨基酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶及其可藥用的鹽。發(fā)現(xiàn)具有下列式(I)的化合物及其可藥用鹽與母體化合物1-(2′-脫氧-2′-氟-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶比較，水溶性明顯提高，進(jìn)而可改善母體化合物的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。
因此，本發(fā)明第一個(gè)方面涉及式I化合物或其可藥用鹽
其中核苷母體屬β-L-型異構(gòu)體，式(I)化合物的核苷組成部分β-L-型異構(gòu)體的含量至少大于90％，作為優(yōu)選實(shí)施方式β-L-型異構(gòu)體的含量至少大于95％。但作為選擇性實(shí)施方式式(I)化合物的核苷部分可以是β-L-型異構(gòu)體與β-D-型異構(gòu)體組成的混合體。式(I)化合物中氨基酸組成部分是L-型的天然氨基酸，L-型異構(gòu)體的含量至少大于90％，作為優(yōu)選實(shí)施方式氨基酸是L-纈氨酸，L-型異構(gòu)體的含量至少大于95％。但作為選擇性實(shí)施方式式(I)化合物的氨基酸可以是L-型的天然氨基酸、或D-型氨基酸、或烷基側(cè)鏈α位或β位或γ位或ω位帶氨基取代的羧酸、或苯環(huán)鄰位或間位或?qū)ξ粠О被〈聂人帷⒒?-吡啶或4-吡啶羧酸等非天然氨基酸、或L-型氨基酸與D-型氨基酸組成的混合體。因此，作為本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方式，式(I)化合物為1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶。
本發(fā)明的第二個(gè)方面涉及上述式(I)化合物的可藥用鹽，本發(fā)明化合物的可藥用鹽包括無(wú)機(jī)或有機(jī)酸鹽，其中包括但不限于鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，硝酸鹽，硫酸鹽，硫氫酸鹽，磷酸鹽，磷酸氫鹽，乙酸鹽，丁酸鹽，草酸鹽，三甲基乙酸鹽，乙二酸鹽，丙二酸鹽，藻酸鹽，羥乙酸鹽，乳酸鹽，丙酮酸鹽，α-酮戊二酸鹽，乙醇酸鹽，檸檬酸鹽，酒石酸鹽，丙二酸鹽，琥珀酸鹽，馬來(lái)酸鹽，富馬酸鹽，三氟乙酸鹽，苦味酸鹽，天冬氨酸鹽，葡萄糖酸鹽，α-甘油磷酸鹽，苯甲酸鹽，水楊酸鹽，對(duì)氨基水楊酸鹽，抗壞血酸鹽，甲磺酸鹽，乙磺酸鹽，苯磺酸鹽，對(duì)甲苯磺酸鹽和雙羥萘酸鹽等。作為優(yōu)選實(shí)施方式式(I)化合物的可藥用鹽為鹽酸鹽。
本發(fā)明的第三個(gè)方面涉及制備上述式(I)化合物的方法，其中包括以已知的糖苷為起始原料，經(jīng)硅烷化試劑選擇性保護(hù)其5-OH，其游離的3-OH與側(cè)鏈N-保護(hù)的氨基酸酯化，進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為糖基溴，與保護(hù)的堿基縮合的同時(shí)，脫去堿基保護(hù)基，再分別脫去核苷的5′-OH保護(hù)基和氨基酸側(cè)鏈氨基保護(hù)基制得目標(biāo)化合物，以及與酸反應(yīng)制備藥學(xué)上可接受的鹽等合成步驟。本方法與已公開(kāi)的由核苷直接酯化法制備其3′-O-氨基酸酯類化合物的方法相比較更具優(yōu)勢(shì)，其創(chuàng)新之處在于呋喃阿拉伯糖的羥基保護(hù)過(guò)程中先引入側(cè)鏈N-保護(hù)的氨基酸酯，再與保護(hù)的堿基縮合，3′-O-氨基酸酯既是目標(biāo)化合物(I)分子中的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)單元，同時(shí)直接作為其糖基多步合成過(guò)程中3′-OH的保護(hù)基，既提高了反應(yīng)選擇性，又減少了已公開(kāi)的合成方法中的保護(hù)/脫保護(hù)反應(yīng)，縮短了反應(yīng)步驟。
本發(fā)明第四個(gè)方面涉及至少一種式(I)化合物或其可藥用鹽、或它們的前藥在制備治療和/或預(yù)防急性和慢性HBV或HCV或EBV感染引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明第五個(gè)方面涉及至少一種式(I)化合物或其可藥用鹽、或它們的前藥與第二種抗病毒藥物聯(lián)合使用，用于制備治療和/或預(yù)防急性和慢性HBV或HCV或EBV感染引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明第六個(gè)方面涉及藥物組合物，其中包括至少一種式(I)化合物或其可藥用鹽、或它們的前藥以及藥用載體或賦形劑；或至少一種式(I)化合物或其可藥用鹽、或它們的前藥與第二種抗病毒藥物組合以及藥用載體或賦形劑。
本發(fā)明還涉及治療和/或預(yù)防由HBV或HCV引起的慢性肝炎，肝硬化，急性肝炎，突發(fā)性肝炎，慢性持久性肝炎和疲勞，以及與EBV感染有關(guān)的疾病等病癥的方法，包括給予有此需要的患者治療有效劑量的式(I)化合物或其可藥用鹽、或它們的前藥；或者治療有效劑量的式(I)化合物或其可藥用鹽、或它們的前藥與第二種抗病毒藥物組合。
本發(fā)明中的術(shù)語(yǔ)“HBV或HCV或EBV感染引起的疾病”是指慢性肝炎，肝硬化，急性肝炎，突發(fā)性肝炎，慢性持久性肝炎和疲勞，以及與EBV感染有關(guān)的疾病。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式，本發(fā)明化合物為具有下式I的化合物或其可藥用鹽 其中核苷母體屬β-L-型異構(gòu)體，式(I)化合物的核苷組成部分β-L-型異構(gòu)體的含量至少大于90％，作為優(yōu)選實(shí)施方式β-L-型異構(gòu)體的含量至少大于95％。但作為選擇性實(shí)施方式式(I)化合物的核苷部分可以是β-L-型異構(gòu)體與β-D-型異構(gòu)體組成的混合體。式(I)化合物中氨基酸組成部分是L-型的天然氨基酸，L-型異構(gòu)體的含量至少大于90％，作為優(yōu)選實(shí)施方式氨基酸是L-纈氨酸，L-型異構(gòu)體的含量至少大于95％。但作為選擇性實(shí)施方式式(I)化合物的氨基酸可以是L-型的天然氨基酸、或D-型氨基酸、或烷基側(cè)鏈α位或β位或γ位或ω位帶氨基取代的羧酸、或苯環(huán)鄰位或間位或?qū)ξ粠О被〈聂人帷⒒?-吡啶或4-吡啶羧酸等非天然氨基酸、或L-型氨基酸與D-型氨基酸組成的混合體。因此，作為本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方式，式(I)化合物為1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶。
本發(fā)明的第二個(gè)方面涉及上述式(I)化合物的可藥用鹽，本發(fā)明化合物的可藥用鹽包括無(wú)機(jī)或有機(jī)酸鹽，其中包括但不限于鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，硝酸鹽，硫酸鹽，硫氫酸鹽，磷酸鹽，磷酸氫鹽，乙酸鹽，丁酸鹽，草酸鹽，三甲基乙酸鹽，乙二酸鹽，丙二酸鹽，藻酸鹽，羥乙酸鹽，乳酸鹽，丙酮酸鹽，α-酮戊二酸鹽，乙醇酸鹽，檸檬酸鹽，酒石酸鹽，丙二酸鹽，琥珀酸鹽，馬來(lái)酸鹽，富馬酸鹽，三氟乙酸鹽，苦味酸鹽，天冬氨酸鹽，葡萄糖酸鹽，α-甘油磷酸鹽，苯甲酸鹽，水楊酸鹽，對(duì)氨基水楊酸鹽，抗壞血酸鹽，甲磺酸鹽，乙磺酸鹽，苯磺酸鹽，對(duì)甲苯磺酸鹽和雙羥萘酸鹽等。作為優(yōu)選實(shí)施方式式(I)化合物的可藥用鹽為鹽酸鹽。
本發(fā)明化合物及其可藥用鹽可以形成溶劑化物，例如水合物，醇合物等。本發(fā)明化合物還可以是前藥或可以在體內(nèi)代謝變化后釋放出活性成分的形式。本發(fā)明化合物或其可藥用鹽的前藥包括式(I)化合物或其可藥用鹽的5′-OH被5′-OR取代所生成的化合物，其中R是磷酸酯基(包括單磷酸酯基、雙磷酸酯基、三磷酸酯基、或包含在體內(nèi)代謝后形成磷酸酯基的前藥)，脂肪酸或芳香酸的?；?，低分子量的烷基，磺酸酯基(包括烷基或芳香烷基磺?；缂谆酋；蚱S基磺?；?，脂基(包括磷脂基)，膽甾醇衍生的取代基，氨基酸的酰基，多肽C端構(gòu)成的?；约霸隗w內(nèi)代謝變化后使R為氫或磷酸酯基的其它取代基。選擇和制備適當(dāng)?shù)那八幯苌锸潜绢I(lǐng)域技術(shù)人員公知的技術(shù)。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的式(I)化合物或其可藥用鹽可以按照申請(qǐng)人發(fā)明的1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-氨基酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)堿基新合成方法來(lái)制備。
具體來(lái)說(shuō)，按照申請(qǐng)人發(fā)明的1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-氨基酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)堿基新的合成方法，本發(fā)明的式(I)化合物是以已知的1-O-甲基-2-脫氧-2-氟-β-L-呋喃阿拉伯糖苷(II)為起始原料，經(jīng)硅烷化試劑選擇性保護(hù)其5-OH，其游離的3-OH與側(cè)鏈N-保護(hù)的氨基酸酯化，進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為2-脫氧-2-氟-3-O-(N-保護(hù)基)氨基酸酯-5-O-硅醚-α-L-呋喃阿拉伯糖基溴(VII)，與保護(hù)的堿基縮合的同時(shí)，脫去堿基保護(hù)基，再分別脫去核苷的5′-OH的硅醚保護(hù)基和氨基酸側(cè)鏈氨基保護(hù)基制得目標(biāo)化合物(I)，以及與酸反應(yīng)制備藥學(xué)上可接受的鹽。本方法與已公開(kāi)的由核苷直接酯化法制備其3′-O-氨基酸酯類化合物的方法相比較更具優(yōu)勢(shì)，其創(chuàng)新之處在于呋喃阿拉伯糖的羥基保護(hù)過(guò)程中先引入側(cè)鏈N-保護(hù)的氨基酸酯，再與保護(hù)的堿基縮合，3′-O-氨基酸酯既是目標(biāo)化合物(I)分子中的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)單元，同時(shí)直接作為其糖基多步合成過(guò)程中3′-OH的保護(hù)基，既提高了反應(yīng)選擇性，又減少了已公開(kāi)的合成方法中的保護(hù)/脫保護(hù)反應(yīng)，縮短了反應(yīng)步驟。
1-O-甲基-2-脫氧-2-氟-L-呋喃阿拉伯糖苷是一個(gè)已知化合物，有多種合成方法。專利WO02/079213及相關(guān)文獻(xiàn)Nucleosides NucleotidesNucleic Acids，2002，21(2)155-163報(bào)道了由L-阿拉伯糖經(jīng)過(guò)多步反應(yīng)制備1-O-甲基-2-脫氧-2-氟-L-呋喃阿拉伯糖苷(α、β異構(gòu)體混合物)的方法。本發(fā)明中所用起始原料是1-O-甲基-2-脫氧-2-氟-β-L-呋喃阿拉伯糖苷(II)，可參照有關(guān)文獻(xiàn)方法按合成路線1自行合成。將已知化合物2-脫氧-2-氟-1，3，5-三-O-苯甲?；?α-L-呋喃阿拉伯糖(III)在二氯甲烷溶劑中，與3.8mol.L-1HBr的醋酸溶液、或30％HBr/HOAc、或45％HBr/HOAc反應(yīng)，室溫反應(yīng)10-24小時(shí)，轉(zhuǎn)化成式(IV)表示的2-脫氧-2-氟-3，5-二-O-苯甲酰基-α-L-呋喃阿拉伯糖基溴(可參考J.Org.Chem.，1988，5385-88；J.Org.Chem.，1985，503644-47等文獻(xiàn)報(bào)道的方法；或?qū)＠鸚O95/20595公開(kāi)的方法)。式(IV)所示的化合物在K2CO3/MeOH條件下脫去3、5位苯甲酰基保護(hù)基，同時(shí)1位形成構(gòu)型轉(zhuǎn)化的糖苷，即本發(fā)明中所用起始原料1-O-甲基-2-脫氧-2-氟-β-L-呋喃阿拉伯糖苷(II)(1位糖苷鍵構(gòu)型轉(zhuǎn)化，可參考文獻(xiàn)Synthesis，1991，1005報(bào)道的方法)。
合成路線1式(II)所示的化合物合成過(guò)程中所用關(guān)鍵中間體1-O-乙酰基-2，3，5-三-O-苯甲?；?α-L-呋喃核糖可按文獻(xiàn)(L.Vargha，Chem.Ber.，1954，871351；Holy.A.，et al.，Synthetic Procedures in Nucleic AcidChemistry，VI，163-67)報(bào)道的方法，由L-木糖開(kāi)始合成，收率為20％；也可由更貴的原料L-核糖開(kāi)始合成(Holy.A.，et al.，SyntheticProcedures in Nucleic Acid Chemistry，VI，163-67)。由1-O-乙?；?2，3，5-三-O-苯甲酰基-α-L-呋喃核糖制備2-脫氧-2-氟-1，3，5-三-O-苯甲?；?α-L-呋喃阿拉伯糖(III)可參照文獻(xiàn)方法(J.Org.Chem.，1985，503644-47)。由此，可獲得本發(fā)明中所用起始原料1-O-甲基-2-脫氧-2-氟-β-L-呋喃阿拉伯糖苷(II)。
更具體地，可以采用如下所示的合成路線2合成本發(fā)明的式(I)化合物式(II)所表示的1-O-甲基-2-脫氧-2-氟-β-L-呋喃阿拉伯糖苷在無(wú)水四氫呋喃(THF)、或無(wú)水二氧六環(huán)、或無(wú)水乙二醇二甲醚(DME)、或干燥N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、或干燥N，N-二甲基乙酰胺(DMA)、或干燥二甲基亞砜(DMSO)溶劑、或THF/DMF混合溶劑中，與咪唑混合，冷卻到0℃攪拌30分鐘，再滴加三異丙基氯硅烷(TIPSCl)、或叔丁基二苯基氯硅烷(TBDPSCl)、或叔丁基二甲基氯硅烷(TBDMSCl)等羥基硅烷化試劑，或4-(二甲氨基)吡啶(DMAP)催化條件下，在室溫下攪拌反應(yīng)1-4小時(shí)，選擇性保護(hù)其5-OH，得到式(V)表示的1-O-甲基-2-脫氧-2-氟-5-O-硅醚保護(hù)基-β-L-呋喃阿拉伯糖苷。式(V)所示的化合物與N-芐氧羰基(Cbz)保護(hù)的氨基酸或其活化酯在二氧六環(huán)、或DMF、或THF、或THF/DMF、或二氧六環(huán)/H2O、或DMF/H2O、或THF/H2O溶劑中混合，冷卻到0℃，加入1-[3-(二甲氨基)-丙基]-3-乙基-碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)、或DIC/HOBt、或BOP/HOBt、或PyBOP/DIEA、或CDI/Et3N等交聯(lián)劑，DMAP催化條件下，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)10-24小時(shí)，生成式(VI)表示的1-O-甲基-2-脫氧-2-氟-3-O-(N-芐氧羰基)氨基酸酯-5-O-硅醚保護(hù)基-β-L-呋喃阿拉伯糖苷。式(VI)所示的化合物在干燥二氯甲烷溶劑中，與3.8mol.L-1HBr的醋酸溶液、或30％HBr/HOAc、或45％HBr/HOAc室溫下反應(yīng)10-24小時(shí)，轉(zhuǎn)化成式(VII)所表示的2-脫氧-2-氟-3-O-(N-芐氧羰基)氨基酸酯-5-O-硅醚保護(hù)基-α-L-呋喃阿拉伯糖基溴。式(VII)所示的溴基糖未經(jīng)分離，與經(jīng)過(guò)適當(dāng)保護(hù)的堿基在干燥乙腈、或干燥氯仿溶液中回流3-8小時(shí)，生成式(VIII)所表示的1-[2′-脫氧-2′-氟-3′-O-(N-芐氧羰基)氨基酸酯-5-O-硅醚保護(hù)基-β-L-呋喃阿拉伯糖基]堿基等核苷類化合物。式(VIII)所示的化合物在無(wú)水THF、或無(wú)水二氧六環(huán)、或無(wú)水DME、或干燥DMF、或DMA、或DMSO溶劑、或THF/DMF混合溶劑中，與四丁基氟化銨(TBAF)、或其它裂解硅醚保護(hù)基的試劑在0℃混合，室溫下攪拌10分鐘至3小時(shí)，脫去核苷的′-O-硅醚保護(hù)基，得到(IX)所表示的1-[2′-脫氧-2′-氟-3′-O-(N-芐氧羰基)氨基酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基]堿基等核苷類化合物。式(IX)所示的化合物在無(wú)水甲醇、或無(wú)水乙醇、或無(wú)水THF、或無(wú)水二氧六環(huán)、或無(wú)水DME、或干燥DMF、或DMA、或DMSO溶劑、或THF/DMF混合溶劑中，5％Pd-C、或10％Pd-C催化條件下吸氫4-8小時(shí)即可脫去N-芐氧羰基保護(hù)基，得到式(X)所表示的1-[2′-脫氧-2′-氟-3′-O氨基酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基]堿基。
合成路線2其中R′是三異丙基硅基(TIPS)、或叔丁基二苯基硅基(TBDPS)、或叔丁基二甲基硅基(TBDMS)等保護(hù)基；Cbz是芐氧羰基保護(hù)基；B是5-甲基尿嘧啶、5-乙基尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、胞嘧啶、5-碘尿嘧啶等堿基。當(dāng)本制備方法中式(X)化合物的堿基為5-甲基尿嘧啶(胸腺嘧啶)時(shí)，即為本發(fā)明權(quán)利要求的式(I)化合物。作為本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方式，式(I)化合物為1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶。
上述合成過(guò)程中，式(II)所示化合物中5-OH進(jìn)行硅醚保護(hù)、以及式(VIII)所示化合物中5′-O-硅醚保護(hù)基的脫去等保護(hù)/脫保護(hù)反應(yīng)條件可參考T.W.Greene；P.G.M.Wuts.“Protective Groups in OrganicSynthesis”，John Wiley & Sons，Inc.，Third Edition，1999，P.113-148。本制備方法中所用的N-芐氧羰基-L-氨基酸或其活化酯可以從美國(guó)Advanced ChemTech公司購(gòu)買；也可自行合成，制備側(cè)鏈N-芐氧羰基-L-氨基酸或其活化酯的技術(shù)是本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員所熟知的，具體可參考J.Am.Chem.Soc.，1957，795697；J.Am.Chem.Soc.，1964，861839等文獻(xiàn)報(bào)道的方法。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明式(I)化合物與酸反應(yīng)制備藥學(xué)上可接受的鹽的技術(shù)是本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員所熟知的。作為本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方式，式(I)化合物的可藥用鹽優(yōu)選為1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶鹽酸鹽，其成鹽反應(yīng)可按合成路線3所示方法來(lái)實(shí)施。
合成路線3作為本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方式，式(I)化合物為1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶，將其溶于無(wú)水乙醇，冰水冷卻下與鹽酸乙醇反應(yīng)，得到本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方式中的目標(biāo)化合物的鹽酸鹽，即1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶鹽酸鹽，用式(I′)。
有可能通過(guò)合成路線4所示的方法制備1-[2′-脫氧-2′-氟-3′-O-(N-叔丁氧羰基)-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基]-5-甲基尿嘧啶，用式(XIV′)表示，將式(XIV′)所示化合物溶于無(wú)水乙醇、或無(wú)水甲醇，向其中通入干燥HCl氣體可脫去N-Boc保護(hù)基，同時(shí)生成目標(biāo)化合物的鹽酸鹽。這一方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。
制備本發(fā)明的式(I)化合物也可參考專利WO2004052899和WO2004058792公開(kāi)的由呋喃核糖構(gòu)成的核苷制備其3′-O-L-纈氨酸酯的方法，有可能直接由1-(2′-脫氧-2′-氟-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶制備1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶，再與適當(dāng)?shù)乃岱磻?yīng)轉(zhuǎn)化成可藥用的鹽。
具體地，可參考合成路線4所示的技術(shù)方法合成本發(fā)明的式(I)化合物，這些技術(shù)方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。
式(XI)所表示的核苷1-(2′-脫氧-2′-氟-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶與三異丙基氯硅烷(TIPSCl)、或叔丁基二苯基氯硅烷(TBDPSCl)、或叔丁基二甲基氯硅烷(TBDMSCl)等羥基硅烷化試劑反應(yīng)，選擇性保護(hù)其5′-OH，生成式(XII)所表示的1-(2′-脫氧-2′-氟-5′-O-硅醚保護(hù)基-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶。在EDC、或DIC/HOBt、或BOP/HOBt、或PyBOP/DIEA或CDI/Et3N等交聯(lián)劑條件以及DMAP催化條件下，式(XII)所示化合物的3′-OH與N-Cbz保護(hù)或N-Boc保護(hù)的L-纈氨酸或其活化酯反應(yīng)，生成式(XIII)表示的1-[2′-脫氧-2′-氟-3′-O-(N-保護(hù)基)-L-纈氨酸酯-5′-O-硅醚保護(hù)基-β-L-呋喃阿拉伯糖基]-5-甲基尿嘧啶。式(XIII)所示的化合物與四丁基氟化銨(TBAF)、或其它裂解硅醚保護(hù)基的試劑反應(yīng)，脫去核苷的5′-O-硅醚保護(hù)基，得到式(XIV)所表示的1-[2′-脫氧-2′-氟-3′-O-(N-保護(hù)基)-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基]-5-甲基尿嘧啶。式(XIV)所示的化合物與脫N-保護(hù)基的試劑反應(yīng)，脫去其3′-O-L-纈氨酸酯的側(cè)鏈氨基保護(hù)基，可得到本發(fā)明的式(I)所表示的1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶，再與酸反應(yīng)制備式(I)化合物的可藥用鹽。上述制備式(I)化合物及其可藥用鹽的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。
合成路線4其中R′是三異丙基硅基(TIPS)、或叔丁基二苯基硅基(TBDPS)、或叔丁基二甲基硅基(TBDMS)等保護(hù)基；R″是芐氧羰基(Cbz)、或叔丁氧羰基(Boc))等保護(hù)基。
上述合成過(guò)程中，式(XI)所示化合物中5′-OH進(jìn)行硅醚保護(hù)、以及式(XIII)所示化合物中5′-O-硅醚保護(hù)基的脫去等保護(hù)/脫保護(hù)反應(yīng)條件可參考T.W.Greene；P.G.M.Wuts.“Protective Groups in OrganicSynthesis”，John Wiley & Sons，Inc.，Third Edition，1999，P.113-148。上述方法中所用的側(cè)鏈N-保護(hù)基-L-纈氨酸或其活化酯可以從美國(guó)Advanced ChemTech公司購(gòu)買；也可自行合成，制備側(cè)鏈N-保護(hù)基-L-纈氨酸或其活化酯的技術(shù)是本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員所熟知的。當(dāng)式(XIV)化合物中3′-O-L-纈氨酸酯的N-保護(hù)基為芐氧羰基(Cbz)時(shí)，經(jīng)5％Pd-C、或10％Pd-C催化氫化可脫去N-Cbz保護(hù)基生成式(I)化合物；當(dāng)式(XIV)化合物中3′-O-L-纈氨酸酯的N-保護(hù)基為叔丁氧羰基(Boc)時(shí)，將其溶于無(wú)水乙醇、或無(wú)水甲醇，向其中通入干燥HCl氣體即可脫去N-Boc保護(hù)基，同時(shí)生成式(I)化合物的鹽酸鹽。
本發(fā)明式(I)化合物與酸反應(yīng)制備藥學(xué)上可接受的鹽的技術(shù)是本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員所熟知的，可按合成路線3所示方法制備。
由于本發(fā)明的式(I)化合物或其可藥用鹽或它們的前藥具有抗HBV或HCV或EBV活性，其可用于治療和/或預(yù)防由HBV或HCV引起的慢性肝炎，肝硬化，急性肝炎，突發(fā)性肝炎，慢性持久性肝炎和疲勞，以及與EBV感染有關(guān)的疾病等病癥。
本發(fā)明的式(I)化合物或其可藥用鹽與第二種抗病毒藥物聯(lián)合使用，用于治療或預(yù)防由HBV或HCV引起的慢性肝炎，肝硬化，急性肝炎，突發(fā)性肝炎，慢性持久性肝炎和疲勞，以及與EBV感染有關(guān)的疾病等病癥。
可用于與本發(fā)明公開(kāi)的式(I)化合物或其可藥用鹽聯(lián)合用藥的抗病毒藥物包括但不限于1-(2′-脫氧-2′-氟-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶(Clevudine)、(-)-(2′R，3′S)-1-[2-(羥甲基)-1，3-氧硫雜戊烷-5-基]胞嘧啶(3TC，拉米夫定)、(1S，3R，4S)-9-[4-羥基-3-(羥甲基)-2-亞甲基環(huán)戊基]鳥(niǎo)嘌呤(Entecavir)、阿德福韋酯、伐昔洛韋、纈更昔洛韋、阿昔洛韋、干擾素、AZT、DDI(2′，3′-二脫氧肌苷)、DDC(2′，3′-二脫氧胞苷)，L-5-F-DDC和D4T等。干擾素是指干擾素α(包括干擾素α-2a、干擾素α-2b)、干擾素β(包括干擾素β-2b)、ω干擾素、干擾素γ(包括干擾素γ-1b)、以及PEG修飾的干擾素。
本發(fā)明的活性化合物可以本身形式給藥，或者以藥物組合物形式給藥，其中活性化合物與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑混合。按照本發(fā)明使用的藥物組合物通常是按常規(guī)方式配制的，使用一種或多種生理學(xué)上可接受的載體，包含賦形劑和助劑，它們有利于將活性化合物加工成可以在藥學(xué)上使用的制劑。適當(dāng)?shù)闹苿┤Q于所選擇的給藥途徑，可以按照本領(lǐng)域熟知的常識(shí)進(jìn)行制造。
可用于本發(fā)明的可藥用載體包括但不限于離子交換劑，氧化鋁，硬脂酸鋁，卵磷脂，血清蛋白如人血清蛋白，緩沖物質(zhì)如磷酸鹽，甘油，山梨酸，山梨酸鈉，飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，鹽或電解質(zhì)，如硫酸魚(yú)精蛋白，磷酸氫二鈉，磷酸氫鉀，氯化鈉，鋅鹽，膠態(tài)氧化硅，三硅酸鎂，聚乙烯吡咯烷酮，纖維素物質(zhì)，聚乙二醇，羧甲基纖維素鈉，聚丙烯酸酯，蜂蠟，聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物和羊毛脂。
本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或它們的前藥、或它們的水合物或醇合物可以利用各種給藥途徑或方式釋放至患者。適合的給藥途徑包括但不限于口服、透皮、經(jīng)粘膜、直腸、腸內(nèi)和腸胃外給藥，腸胃外給藥包括肌內(nèi)、皮下和靜脈內(nèi)注射。
本發(fā)明所用的術(shù)語(yǔ)“給藥”包括所有直接與間接釋放化合物到其預(yù)期作用部位的手段。
因此，根據(jù)給藥途徑的不同，本發(fā)明化合物可以制成任何適合于給藥的形式，其包括但不限于片劑、膠囊、氣霧劑、栓劑、用于食入或注射的液體劑型、眼或耳滴劑、舌下含片、營(yíng)養(yǎng)增補(bǔ)劑或局部制劑。
可以口服的藥物制劑包括膠囊劑和片劑等。病人吞咽有困難時(shí)，也可以采用舌下片或者其他非吞咽的方式給藥。
本發(fā)明化合物也可以配制用于腸胃外給藥或者透皮給藥或者經(jīng)粘膜給藥。或者采用栓劑或者埋植劑的方式給藥。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，在本發(fā)明化合物的基礎(chǔ)上，可以采用合適的藥物釋放系統(tǒng)(DDS)，以得到更有利的效果。
給藥方式以及有效劑量的選擇將根據(jù)所治療的疾病而異。給藥方式和劑量的確定在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)。
本發(fā)明化合物的單位劑型通常含有0.1至99重量％活性物質(zhì)，更優(yōu)選5至75重量％活性物質(zhì)。對(duì)于口服給藥，單位劑型可以含有1mg至1g本發(fā)明化合物或其可藥用鹽，更優(yōu)選為10mg至500mg，更優(yōu)選50mg與400mg之間，最優(yōu)選為50mg至200mg。對(duì)于腸胃外給藥，優(yōu)選含有0.1至25mg的本發(fā)明化合物或其可藥用鹽。
本發(fā)明所述的化合物或其可藥用鹽可以單獨(dú)給藥或與其他一種或多種本發(fā)明化合物聯(lián)合給藥，還可以與其它已知的抗病毒劑聯(lián)合的形式給藥。
具體實(shí)施例方式
下面的實(shí)施例用來(lái)說(shuō)明本發(fā)明，但對(duì)本發(fā)明不構(gòu)成任何限制。
實(shí)施例1 1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶1.1 1-O-甲基-2-脫氧-2-氟-5-O-三異丙基硅基-β-L-呋喃阿拉伯糖苷的合成將8.3g(0.05mol)1-O-甲基-2-脫氧-2-氟-β-L-呋喃阿拉伯糖苷溶于120ml無(wú)水四氫呋喃(THF)，向其中加入4.5g(0.066mol)咪唑，將反應(yīng)混合物冷卻到0℃攪拌30分鐘，再滴加12ml(0.056mol)三異丙基氯硅烷(TIPSCl)。加料完畢，撤離冷浴，反應(yīng)混合物自然恢復(fù)到室溫并攪拌2.5小時(shí)，TLC檢測(cè)原料轉(zhuǎn)化完全。在40℃以下減壓濃縮至1/3體積，向其中加入250ml飽和NH4Cl水溶液，以3×100ml乙酸乙酯提取，合并有機(jī)相，飽和食鹽水溶液洗滌一次，無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾，40℃以下減壓濃縮，殘留物經(jīng)硅膠柱層析分離(200-300目硅膠，洗脫劑正己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)，得無(wú)色糖漿狀物，重13.5g，收率84％。MS(FAB，M+1)323。
1.2 1-O-甲基-2-脫氧-2-氟-3-O-(N-芐氧羰基)-L-纈氨酸酯-5-O-三異丙基硅基-β-L-呋喃阿拉伯糖苷的合成將7.8g(0.03mol)N-芐氧羰基(Cbz)-L-纈氨酸溶于15ml二氧六環(huán)，氬氣保護(hù)下，冷卻到0℃并攪拌。另取5.8g(0.03mol)1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基-碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)溶于15ml蒸餾水，將EDC水溶液滴加到N-芐氧羰基-L-纈氨酸的二氧六環(huán)溶液中，0℃攪拌10分鐘。另取6.5g(0.02mol)1-O-甲基-2-脫氧-2-氟-5-O-三異丙基硅基-β-L-呋喃阿拉伯糖苷溶于15ml二氧六環(huán)，再將此溶液滴加到0℃的N-芐氧羰基-L-纈氨酸與EDC的混合溶液中，滴加完畢，向其中分批加入0.3g 4-(二甲氨基)吡啶(DMAP)。撤離冷浴，反應(yīng)混合物自然恢復(fù)到室溫并在氬氣保護(hù)下攪拌8小時(shí)，TLC檢測(cè)原料轉(zhuǎn)化完全。40℃以下減壓濃縮至1/3體積，向其中加入100ml蒸餾水，以3×50ml乙酸乙酯提取，合并有機(jī)相，飽和食鹽水溶液洗滌一次，無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾，40℃以下減壓濃縮，得無(wú)色糖漿狀物，重8.5g，收率76％。MS(ESI，M+1)556。
1.3 1-[2′-脫氧-2′-氟-3′-O-(N-芐氧羰基)-L-纈氨酸酯-5′-O-三異丙基硅基-β-L-呋喃阿拉伯糖基]-5-甲基尿嘧啶的合成將8.4g(15mmol)1-O-甲基-2-脫氧-2-氟-3-O-(N-芐氧羰基)-L-纈氨酸酯-5-O-三異丙基硅基-β-L-呋喃阿拉伯糖苷溶于20ml干燥二氯甲烷，冷卻到0℃，向其中緩慢滴加3.8mol.L-1HBr醋酸溶液8.9ml(33.8mmol)。滴加完畢，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，40℃以下減壓濃縮，3×25ml干燥苯帶殘留溶劑，再用30ml干燥乙腈帶一次殘留溶劑，將所得溴基糖粗產(chǎn)物重新溶于25ml干燥乙腈。
另取4.2g(33mmol)胸腺嘧啶、0.38g硫酸銨和21ml(16.1g，99.5mmol)1，1，3，3-六甲基二硅氮烷溶于150ml干燥乙腈中，加熱回流12小時(shí)直到反應(yīng)混合物澄清，然后冷卻到室溫。將上述溴基糖乙腈溶液滴加到2，4-雙-O-(三甲基硅基)胸腺嘧啶乙腈溶液中，然后加熱回流6小時(shí)，TLC檢測(cè)原料轉(zhuǎn)化完全。滴加10ml甲醇終止反應(yīng)，出現(xiàn)沉淀，將懸浮液在室溫下攪拌1.5小時(shí)，通過(guò)硅藻土濾餅濾除固體，以3×20ml乙腈洗滌，合并有機(jī)相，減壓濃縮至干。100ml二氯甲烷重新溶解殘留物，以2×60ml蒸餾水洗滌，2×60ml飽和NaHCO3溶液洗滌，2×60ml飽和食鹽水溶液洗滌，無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾，40℃以下減壓濃縮，得類白色固體，重5.55g，收率56.6％。MS(FAB，M+1)650。
1.4 1-[2′-脫氧-2′-氟-3′-O-(N-芐氧羰基)-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基]-5-甲基尿嘧啶的合成將4.86g(7.5mmol)1-[2′-脫氧-2′-氟-3′-O-(N-芐氧羰基)-L-纈氨酸酯-5′-O-三異丙基硅基-β-L-呋喃阿拉伯糖基]-5-甲基尿嘧啶溶于15ml干燥THF，冷卻到0℃，向其中滴加3ml 1mol·L-1四丁基氟化銨(TBAF)的THF溶液。撤離冷浴，反應(yīng)混合物自然恢復(fù)到室溫，攪拌30分鐘，TLC檢測(cè)原料轉(zhuǎn)化完全。滴加15ml飽和NaHCO3水溶液終止反應(yīng)，加入乙酸乙酯提取，合并有機(jī)相，飽和食鹽水溶液洗滌一次，無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾，40℃以下減壓濃縮，殘留物經(jīng)硅膠柱層析分離(200-300目硅膠，洗脫劑正己烷∶乙酸乙酯＝9∶1)，得白色固體，重3.4g，收率92％。MS(FAB，M+1)494。
1.5 1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶的合成將2.96g(6mmol)1-[2′-脫氧-2′-氟-3′-O-(N-芐氧羰基)-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基]-5-甲基尿嘧啶溶于35ml無(wú)水乙醇，向其中加入0.3g 5％的Pd-C，溫度25-30℃、壓力2Kg/cm2條件下吸氫4小時(shí)，濾除催化劑，40℃以下減壓濃縮，得白色固體，重2.05g，收率95％。MS(FAB，M+1)360。
實(shí)施例2 1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶鹽酸鹽將1.5g(4.18mmol)1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶溶于8ml無(wú)水乙醇，冰水冷卻下，向其中滴加鹽酸乙醇溶液直到反應(yīng)液呈酸性，攪拌30分鐘，濾集固體，無(wú)水乙醇洗滌，P5O2真空條件下干燥，得白色粉末狀固體，重1.52g，收率92％。
實(shí)施例3 1-O-甲基-2-脫氧-2-氟-β-L-呋喃阿拉伯糖苷(II)3.1 1-溴-2-脫氧-2-氟-3，5-二-O-苯甲酰基-α-L-呋喃阿拉伯糖的合成將9.3g(0.02mol)2-脫氧-2-氟-1，3，5-三-O-苯甲酰基-α-L-呋喃阿拉伯糖溶于45ml干燥二氯甲烷，冷卻到0℃，向其中緩慢滴加3.8mol.L-1HBr醋酸溶液11.8ml(0.045mmol)。滴加完畢，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)，40℃以下減壓濃縮，將殘留物重新溶于200ml二氯甲烷，分別用蒸餾水、飽和NaHCO3溶液和飽和食鹽水溶液洗滌，無(wú)水MgSO4干燥，過(guò)濾，40℃以下減壓濃縮，得無(wú)色糖漿狀物，重8.28g，收率97.6％。溴基糖粗品未經(jīng)純化直接用于下一步反應(yīng)。
3.2 1-O-甲基-2-脫氧-2-氟-β-L-呋喃阿拉伯糖苷的合成將上一步反應(yīng)所得的1-溴-2-脫氧-2-氟-3，5-二-O-苯甲?；?α-L-呋喃阿拉伯糖粗品溶于15ml干燥THF，向其中加入55ml無(wú)水甲醇和6.12g(44.4mmol)無(wú)水K2CO3粉末，滴加完畢，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌40小時(shí)，過(guò)濾，2×10ml無(wú)水甲醇洗滌固體，40℃以下減壓濃縮，殘留物經(jīng)硅膠柱層析分離(200-300目硅膠，洗脫劑正己烷∶乙酸乙酯＝3∶2)，得無(wú)色糖漿狀物，重2.2g，收率68％。MS(ESI，M+1)167。
權(quán)利要求
1.下式I所示的1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-氨基酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶及其可藥用的鹽 其中核苷母體屬β-L-型異構(gòu)體，式(I)化合物的核苷組成部分β-L-型異構(gòu)體的含量至少大于90％，作為優(yōu)選實(shí)施方式β-L-型異構(gòu)體的含量至少大于95％。但作為選擇性實(shí)施方式式(I)化合物的核苷部分可以是β-L-型異構(gòu)體與β-D-型異構(gòu)體組成的混合體。式(I)化合物中氨基酸組成部分是L-型的天然氨基酸，L-型異構(gòu)體的含量至少大于90％，作為優(yōu)選實(shí)施方式氨基酸是L-纈氨酸，L-型異構(gòu)體的含量至少大于95％。但作為選擇性實(shí)施方式式(I)化合物的氨基酸可以是L-型的天然氨基酸、或D-型氨基酸、或烷基側(cè)鏈α位或β位或γ位或ω位帶氨基取代的羧酸、或苯環(huán)鄰位或間位或?qū)ξ粠О被〈聂人帷⒒?-吡啶或4-吡啶羧酸等非天然氨基酸、或L-型氨基酸與D-型氨基酸組成的混合體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1，式(I)化合物優(yōu)選為1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶。
3.根據(jù)權(quán)利要求1，式(I)化合物及其可藥用的鹽優(yōu)選為1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶鹽酸鹽。
4.一種制備1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-氨基酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)堿基的方法，該方法包括以下步驟(1)使式(II)所表示的化合物 與三異丙基氯硅烷(TIPSCl)、或叔丁基二苯基氯硅烷(TBDPSCl)、或叔丁基二甲基氯硅烷(TBDMSCl)等羥基硅烷化試劑反應(yīng)，選擇性保護(hù)其5′-OH，得到式(V)表示的化合物 其中R′是三異丙基硅基(TIPS)、或叔丁基二苯基硅基(TBDPS)、或叔丁基二甲基硅基(TBDMS)等保護(hù)基；(2)使式(V)所示的化合物與N-芐氧羰基保護(hù)的氨基酸或其活化酯在一種或多種交聯(lián)劑存在條件下反應(yīng)，生成式(VI)所表示的化合物 其中Cbz是芐氧羰基，R′的定義同反應(yīng)(1)中化合物(V)中的定義；(3)使式(VI)所示的化合物與氫溴酸在醋酸條件下(HBr/HOAc)反應(yīng)，得到式(VII)所表示的化合物 其中Cbz和R′的定義同反應(yīng)(2)中化合物(VI)中的定義；(4)使式(VII)所示的化合物與經(jīng)過(guò)適當(dāng)保護(hù)的堿基進(jìn)行縮合反應(yīng)，生成式(VIII)所表示的化合物 其中堿基B選自5-甲基尿嘧啶(胸腺嘧啶)，5-碘尿嘧啶，胞嘧啶，5-乙基尿嘧啶；Cbz和R′的定義同反應(yīng)(2)中化合物(VI)中的定義；(5)使式(VIII)所示的化合物與四丁基氟化銨(TBAF)、或其它裂解硅醚保護(hù)基的試劑反應(yīng)，選擇性脫去核苷的5′-O-硅醚保護(hù)基得到(IX)所表示的化合物 其中堿基B同反應(yīng)(4)中化合物(VIII)中的定義；Cbz同反應(yīng)(2)中化合物(VI)中的定義，為芐氧羰基；(6)使式(IX)所示的化合物在5％Pd-C、或10％Pd-C等催化氫化條件下，脫去其3′-O-氨基酸酯的N-芐氧羰基保護(hù)基，得到(X)所表示的化合物。 其中堿基B同反應(yīng)(4)中化合物(VIII)中的定義；(7)(X)所示的化合物在乙醇、或甲醇溶液中與藥學(xué)上可接受的酸反應(yīng)，制得相應(yīng)的可藥用鹽。
5.根據(jù)權(quán)利要求4，權(quán)利要求1的化合物及其可藥用的鹽的制備方法。
6.根據(jù)權(quán)利要求5，權(quán)利要求1的化合物及其可藥用的鹽優(yōu)選為1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶及其鹽酸鹽。
7.權(quán)利要求1的化合物及其可藥用的鹽在制備治療和/或預(yù)防急性和慢性HBV或HCV或EBV感染引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7，權(quán)利要求1的化合物及其可藥用的鹽優(yōu)選為1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶及其鹽酸鹽。
9.應(yīng)用于制備治療和/或預(yù)防急性和慢性HBV或HCV或EBV感染引起的疾病的藥物中的權(quán)利要求1的化合物及其可藥用的鹽與第二種抗病毒藥物聯(lián)合使用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9，權(quán)利要求1的化合物及其可藥用的鹽優(yōu)選為1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶及其鹽酸鹽。
11.藥物組合物，包括治療有效劑量的一種權(quán)利要求1的化合物或其可藥用的鹽和可藥用載體或賦形劑，或治療有效劑量的一種權(quán)利要求1的化合物或其可藥用的鹽與第二種抗病毒藥物組合和可藥用載體或賦形劑。
12.根據(jù)權(quán)利要求11，權(quán)利要求1的化合物及其可藥用的鹽優(yōu)選為1-(2′-脫氧-2′-氟-3′-O-L-纈氨酸酯-β-L-呋喃阿拉伯糖基)-5-甲基尿嘧啶及其鹽酸鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及式I所示的1－(2′－脫氧－2′－氟－3′－O－氨基酸酯－β－L－呋喃阿拉伯糖基)－5－甲基尿嘧啶及其可藥用的鹽，式中各基團(tuán)的限定如說(shuō)明書(shū)所述；一種制備1－(2′－脫氧－2′－氟－3′－O－氨基酸酯－β－L－呋喃阿拉伯糖基)堿基的方法，包括應(yīng)用此方法制備式I所示的化合物及優(yōu)選實(shí)施化合物；含有式I化合物或其可藥用的鹽的藥物組合物，或含有式I化合物或其可藥用的鹽與第二種抗病毒藥物聯(lián)合的藥物組合物；式I化合物及其可藥用的鹽，或I化合物及其可藥用的鹽與第二種抗病毒藥物聯(lián)合用于制備治療和/或預(yù)防急性和慢性HBV或EBV或HCV感染引起的疾病的藥物的用途。
文檔編號(hào)A61P1/00GK1840538SQ20051005992
公開(kāi)日2006年10月4日 申請(qǐng)日期2005年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月1日
發(fā)明者李偉章 申請(qǐng)人:李偉章