專(zhuān)利名稱(chēng)：丹皮有效組分及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥提取物，具體地說(shuō)涉及從丹皮中提取的有效組分及其制備方法，該有效組分主要含有芍藥苷、沒(méi)食子酰芍藥苷、牡丹皮皂甙h(Mudanpioside h)三種化合物。
背景技術(shù)：
冠心病和心絞痛是危害人類(lèi)健康的“第一殺手”，近年來(lái)，隨著我國(guó)人口老年化以及人們工作、生活、飲食結(jié)構(gòu)及環(huán)境等的變化，冠心病等心腦血管疾病的發(fā)生率也逐年增多，嚴(yán)重威脅著人民的身心健康。天然產(chǎn)物中許多活性物質(zhì)具有抗心肌缺血、缺氧作用，其中一些已開(kāi)發(fā)成治療冠心病和心絞痛的新藥，如治療冠心病的藥物地奧心血康，它是由從中藥中提取的8種甾體皂甙制成的純中藥制劑；心達(dá)康是以沙棘為原料提取加工而成的純天然藥物，其有效成分為沙棘總黃酮。因而從天然產(chǎn)物中尋找具有抗心肌缺血、缺氧生理活性的有效物質(zhì)，是發(fā)現(xiàn)、開(kāi)發(fā)新藥的有效途徑之一。我國(guó)藥用生物資源十分豐富，其生理活性物質(zhì)是研究和發(fā)現(xiàn)新藥先導(dǎo)化學(xué)物，開(kāi)發(fā)新藥的天然寶庫(kù)。目前，我國(guó)從天然產(chǎn)物中提取活性物質(zhì)，用于開(kāi)發(fā)成治療冠心病、安全性好、毒性低的新藥還很少，從天然產(chǎn)物中提取活性物質(zhì)，開(kāi)發(fā)成具有抗心肌缺血，用于治療冠心病和心絞痛的新藥，具有重要應(yīng)用價(jià)值和廣闊發(fā)展前景。
丹皮又名牡丹皮，系雙子葉植物藥毛茛科植物牡丹(Paeoniasuffruticosa Andr.)的根皮。分布河北、河南、山東、四川、陜西、甘肅等地。全國(guó)各地均有栽培，藥材主產(chǎn)安徽、四川、甘肅、陜西、湖北、湖南、山東、貴州等地，此外，云南、浙江亦產(chǎn)。其性微寒，味辛苦，涼，入心、肝、腎經(jīng)，具有清熱，涼血，和血，消瘀的功效。丹皮炮制最早見(jiàn)于我國(guó)梁代陶宏景所撰《集注》中，認(rèn)為“皆促破，去心?！薄侗静菥V目》等醫(yī)書(shū)中記載“丹皮木心不入藥，需去之?！毖芯勘砻鞯てずてし?Paeonol)、芍藥甙(Paeoniflorin)、羥基芍藥甙、苯甲酰芍藥甙(Benzoylpaeoniflorin)、苯甲酰羥基芍藥甙、芍藥苷元(Paeoniflorigenone)、6-羥基香豆素(6-hydroxycoumarin)和沒(méi)食子酸(GallicAcid)，以及苯甲酸、植物甾醇、蔗糖、葡萄糖、阿拉伯糖等。揮發(fā)油中含有苯甲酸(Benzoic Acid)、十四烷烴(Tetradecane)、2-羥基-4-甲氧基-苯乙酮(2-hydroxy-4-methoxy acetophenone)、2，6-雙特丁基對(duì)苯醌(2，6-ditert-butyl-p-Benzoquinone)、鄰苯二甲酸二乙酯(Diethyl Phthalate)、十四酸異丙酯(Isopropyl Myristate)等化合物(陳悅嬌等，廣州食品工業(yè)科技，2002，18(4)36-37)。吳少華等人首次從丹皮中分離得到了以下五種化合物白樺脂酸(Betulinic Acid)、白樺脂醇(Betulin)，齊墩果酸(Oleanolic Acid)、3β，23-dihydroxy-30-norolean-12，20(29)-dien-28-oic acid、3-O-methylpaeonisuffral(吳少華等，中草藥，2002，33(8)679-680)。
丹皮對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌缺血有減輕損傷程度作用，并能夠降低心肌耗氧量，增加冠脈流量，認(rèn)為丹皮有調(diào)節(jié)血行，疏通血脈之作用，因而對(duì)心肌缺血有保護(hù)作用(馬玉玲等，山西醫(yī)藥雜志，1984，13(4)212-214)。芍藥苷有抗血小板聚集作用，抗血栓形成的作用，對(duì)肝臟的保護(hù)作用和抗腫瘤作用。芍藥苷對(duì)心肌細(xì)胞Ica、L有阻斷作用(張廣欣等，中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2003，19(8)863-866)。芍藥苷可增加神經(jīng)細(xì)胞存活數(shù)量，降低死亡率，對(duì)抗KA所致的興奮性神經(jīng)損傷(吳玉梅等，中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2002，16(3)172-175)。芍藥苷對(duì)鈣超載所致PC12細(xì)胞損傷有顯著的保護(hù)作用(楊軍等，中國(guó)新藥雜志，2001，10(6)426-428)。芍藥苷增強(qiáng)血虛證小鼠骨髓造血干祖細(xì)胞的集落形成能力；芍藥苷可促進(jìn)骨髓基質(zhì)細(xì)胞分泌造血因子(G-CSF，GM-CSF，PDGF-α)等，抑制造血抑制因子(M-CIP)的分泌(高月，天津中醫(yī)藥，2003，20(6)47-51)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種丹皮有效組分，活性成分有芍藥苷、沒(méi)食子酰芍藥苷、牡丹皮皂甙h(Mudanpioside h)三種化合物。
本發(fā)明方法提供的丹皮有效組分中，芍藥苷的含量為10～25％，沒(méi)食子酰芍藥苷的含量為40～55％，牡丹皮苷h(Mudanpioside h)的含量為30～45％。
優(yōu)選的丹皮有效組分中，芍藥苷的含量為12～21％，沒(méi)食子酰芍藥苷的含量為42～51％，牡丹皮苷h(Mudanpioside h)的含量為32～41％。
最佳的丹皮有效組分中，芍藥苷的含量為14～18％，沒(méi)食子酰芍藥苷的含量為44～48％，牡丹皮苷h(Mudanpioside h)的含量為34～38％。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供丹皮有效組分的制備方法，通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)將丹皮藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取得提取液，將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯作為流動(dòng)相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的有效組分；制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱，流動(dòng)相為水和乙腈，梯度洗脫，收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分。
優(yōu)選的丹皮有效組分制備方法通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)將丹皮藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1∶0.8～1.2)，加熱回流0.8～1.2小時(shí)，提取1～3次，合并濾液得提取液，將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯(47～53∶1)作為流動(dòng)相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇(8～13∶1)作為流動(dòng)相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的有效組分；制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱，流動(dòng)相為水和乙腈，梯度洗脫，流速為2.8～3.2ml/min，柱溫為室溫。收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分。
最佳的丹皮有效組分制備方法通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)將丹皮藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1∶1)，加熱回流1小時(shí)，提取2次，合并濾液得提取液；將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯(50∶1)作為流動(dòng)相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇(10∶1)作為流動(dòng)相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的有效組分；制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱(Lichrospher C18；10.0mm×250mm，5μm)，流動(dòng)相為水(A)和乙腈(B)，梯度洗脫程序如下0分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為80％的水溶液、流動(dòng)相B為20％的乙腈溶液；40分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為20％的水溶液、流動(dòng)相B為80％的乙腈溶液；50分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為5％的水溶液、流動(dòng)相B為95％的乙腈溶液；流速為3ml/min，柱溫為室溫；樣品用100％乙醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離，在時(shí)間段14.2～18.4min收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供該丹皮有效組分加入藥用添加劑按照藥劑學(xué)允許的制備方法制成藥用制劑。
本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供該丹皮有效組分及其制劑在制備治療、預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的有益之處是從丹皮中提取分離的方法，使用了正相硅膠柱，能有效地除去糖、蛋白質(zhì)、氨基酸等雜質(zhì)，提高有效成分的含量，同時(shí)在制備方法中采用了制備色譜，能快速準(zhǔn)確的得到有效成分。本發(fā)明提供的丹皮有效組分，對(duì)心肌缺血有保護(hù)作用，其化學(xué)成分簡(jiǎn)單明確，在藥理研究上更易于闡明其作用機(jī)制，在生產(chǎn)中更易于藥物的質(zhì)量控制。


圖1為本發(fā)明丹皮有效組分的HPLC分析圖。
具體實(shí)施例方式
下面將結(jié)合本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容，該實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而對(duì)本發(fā)明并沒(méi)有限制。
實(shí)施例一丹皮有效組分的制備工藝將200g丹皮藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取得提取液，將提取液濃縮成浸膏16.8g，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯作為流動(dòng)相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品3.9g；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱，流動(dòng)相為水和乙腈，梯度洗脫。樣品用100％乙醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離，在時(shí)間段14.2～18.4min收集溶液，濃縮干燥后得到有效組分0.40g。
實(shí)施例二丹皮有效組分的制備工藝將500g丹皮藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1∶0.8～1.2)，加熱回流0.8～1.2小時(shí)，提取1～3次，合并濾液得提取液，將提取液濃縮成浸膏42g，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯(47～53∶1)作為流動(dòng)相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇(8～13∶1)作為流動(dòng)相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品11.8g；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱，流動(dòng)相為水和乙腈，梯度洗脫，流速為2.8～3.2ml/min，柱溫為室溫。樣品用100％乙醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離，在時(shí)間段14.2～18.4min收集溶液，濃縮干燥后得到有效組分1.04g。
實(shí)施例三丹皮有效組分的制備工藝取丹皮藥材250g，將其粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1∶1)，加熱回流1小時(shí)，提取2次，濾液合并得提取液。將提取液濃縮成浸膏得22g，將浸膏和硅膠拌樣，用正相硅膠柱進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯(50∶1)作為流動(dòng)相，得洗脫液I，然后改換氯仿和甲醇(10∶1)作為流動(dòng)相，得洗脫液II，濃縮干燥后得6.2g樣品。用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品。制備色譜的分離條件色譜柱為漢邦半制備柱(Lichrospher C18；10.0mm×250mm，5μm)，流動(dòng)相為水(A)和乙腈(B)，洗脫梯度見(jiàn)表2，流速為3ml/min，柱溫為室溫。樣品用100％乙醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離，在時(shí)間段14.2～18.4min收集溶液，濃縮干燥后得到有效組分0.58g。
實(shí)施例四丹皮有效組分的分析(1)上述丹皮提取物中芍藥苷、沒(méi)食子酰芍藥苷、牡丹皮苷h(Mudanpioside h)、的含量測(cè)定(高效液相色譜法)色譜條件色譜柱Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；采用梯度洗脫，流動(dòng)相A相為0.2％冰醋酸水溶液，流動(dòng)相B相為含0.2％冰醋酸的乙腈溶液；梯度洗脫程序如下0分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為90％的0.2％冰醋酸水溶液、流動(dòng)相B為10％的0.2％冰醋酸的乙腈溶液；10分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為50％的0.2％冰醋酸水溶液、流動(dòng)相B為50％的0.2％冰醋酸的乙腈溶液；30分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為5％的0.2％冰醋酸水溶液、流動(dòng)相B為95％的0.2％冰醋酸的乙腈溶液；流速0.5mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)全波長(zhǎng)；柱溫30℃；ELSD條件漂移管溫度100℃；氮?dú)饬魉?.4L/min供試品溶液的制備稱(chēng)取本品，用甲醇溶液溶解在容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定方法精密吸取供試品溶液，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
(2)上述丹皮提取物HPLC-ELSD指紋圖譜測(cè)定方法參見(jiàn)(1)上述丹皮提取物中的芍藥苷、沒(méi)食子酰芍藥苷、牡丹皮苷h(Mudanpioside h)含量測(cè)定(高效液相色譜法)。記錄色譜時(shí)間為30分鐘。
分析結(jié)果丹皮有效組分的HPLC-ELSD分析譜圖見(jiàn)圖1，圖1中的1、2、3號(hào)峰，分別是芍藥苷、Mudanpioside h和沒(méi)食子酰芍藥苷。三個(gè)峰的相對(duì)保留時(shí)間依次為9.8(芍藥苷)，10.67(沒(méi)食子酰芍藥苷)，10.97(牡丹皮苷h)。
本發(fā)明中，芍藥苷的結(jié)構(gòu)式為
本發(fā)明中，沒(méi)食子酰芍藥苷的結(jié)構(gòu)式為 本發(fā)明中，牡丹皮苷h(Mudanpioside h)的結(jié)構(gòu)式為 實(shí)施例五丹皮有效組分制劑取實(shí)施例三的丹皮有效組分0.5g與10.5g聚乙二醇-6000混合均勻，加熱熔融，化料后移至滴丸滴灌中，藥液滴至6～8℃液體石蠟中，除油，制得滴丸400粒。
實(shí)施例六丹皮有效組分制劑取實(shí)施例三的丹皮有效組分0.5g、葡萄糖4.5g、硫代硫酸鈉0.9g和蒸餾水1ml，上述組分混合均勻后，冷凍干燥，分裝500支，即得。
實(shí)施例七丹皮有效組分制劑取降香油1.5g，加入到13ml飽和的羥丙基β-環(huán)糊精中，攪拌溶解，濾過(guò)，濾葉低溫干燥，的降香油和羥丙基β-環(huán)糊精的包合物粉末。除上述降香油合羥丙基β-環(huán)糊精的包合物粉末外，再取實(shí)施例三的丹皮提取物0.5g、甘露醇5.5g、依地酸鈣鈉0.9g和蒸餾水2ml，上述組分混勻后，冷凍干燥，分裝300支，即得。
實(shí)施例八丹皮有效組分的藥理實(shí)驗(yàn)藥理模型乳鼠心肌細(xì)胞缺血缺氧模型原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)出生1～3天SD乳鼠處死后，取心臟，經(jīng)PBS液清洗后減成1mm3左右的碎塊。用0.125％胰蛋白酶(Sigma，USA)+0.05％膠原酶II(Gibco，USA)于37度消化3～4次。差速貼壁法分離成纖維細(xì)胞1.5小時(shí)后，細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至48孔板中(每孔約4×105細(xì)胞)。經(jīng)DMEM(Gibco，USA)加10％胎牛血清(Falcon，USA)培養(yǎng)3-6天的細(xì)胞供藥效篩選。篩選前1天替換為無(wú)血清培養(yǎng)液。培養(yǎng)3～6天的心肌細(xì)胞，PBS洗滌后加入含藥培養(yǎng)液。置于95％N2和5％CO2培養(yǎng)箱中缺氧6小時(shí)。然后在CO2培養(yǎng)箱中復(fù)氧3小時(shí)。取細(xì)胞上清液測(cè)定LDH含量。
給藥方案提取得到的丹皮有效組分用無(wú)糖Hanks液配成10-4g/mL供試液，脂溶性成分可加入少量DMSO助溶(DMSO終濃度控制在0.2％以下)。各組分在培養(yǎng)液中的終濃度控制在10-5g/mL。
乳酸脫氫酶含量測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶含量能夠表示細(xì)胞損傷程度。漏入上清液中的乳酸脫氫酶含量越高，表明細(xì)胞損傷也顯著。乳酸脫氫酶測(cè)定試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。測(cè)定方法為取30微升細(xì)胞上清液，加入50微升基質(zhì)緩沖液及10微升乳酸脫氫酶輔酶，37度振蕩15分鐘，再加入50微升2，4-二硝基苯肼，37度振蕩15分鐘。平行空白。取反應(yīng)液50微升加入200微升0.4mol/L氫氧化鈉溶液，靜置3～4分鐘后，用酶標(biāo)儀于450nm測(cè)定光度值。
藥效結(jié)果所有數(shù)據(jù)用均值±方差表示。采用單邊方差分析和T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。與模型組相比，P＜0.05認(rèn)為顯著有效。藥效結(jié)果見(jiàn)表1。根據(jù)心肌細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)檢測(cè)結(jié)果，丹皮有效組分對(duì)降低LDH釋放有非常顯著效果。
表1

實(shí)施例九丹皮有效組分的又一個(gè)藥理實(shí)驗(yàn)藥理模型臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)取健康新生兒臍帶，用30～50mlHanks液洗凈靜脈血管內(nèi)的殘留血跡。視臍帶長(zhǎng)度加入相應(yīng)量的0.1％膠原酶I，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱消化15～20分鐘。隨后將臍帶內(nèi)消化液小心收集到燒杯中，并用Hanks液將燒杯潤(rùn)洗兩次，一并收集到燒杯中分裝于離心管，900rpm離心10分鐘。吸去上清液，用M199培養(yǎng)液(含10％胎牛血清，100U/ml雙抗，0.15mg/ml Heparin，10uMVC)充分溶解沉淀。將所得細(xì)胞懸液分裝于5cm2培養(yǎng)瓶，置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。第二天換成采用含30ug/ml ECGS的M199培養(yǎng)液，之后每三天換一次培養(yǎng)液直至細(xì)胞鋪滿(mǎn)底面。所用細(xì)胞均為原代內(nèi)皮細(xì)胞。造模前將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)細(xì)胞接種至96孔板并培養(yǎng)一天，所用細(xì)胞量為3.5～4萬(wàn)/孔。造模時(shí)，吸棄舊的M199培養(yǎng)液，加入含藥無(wú)酚紅M199培養(yǎng)液，每孔總量為100ul。置于95％N2和5％CO2培養(yǎng)箱中缺氧12小時(shí)，然后在CO2培養(yǎng)箱中復(fù)氧2小時(shí)。取細(xì)胞上清液測(cè)定LDH含量和NO含量。
給藥方案 提取得到的丹皮有效組分用無(wú)糖Hanks液配成10-4g/mL供試液，脂溶性成分可加入少量DMSO助溶(DMSO終濃度控制在0.2％以下)。各組分在無(wú)酚紅M199培養(yǎng)液中的終濃度控制在10-5g/mL。
乳酸脫氫酶含量測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶含量能夠表示細(xì)胞損傷程度。漏入上清液中的乳酸脫氫酶含量越高，表明細(xì)胞損傷也顯著。乳酸脫氫酶測(cè)定試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。測(cè)定方法為取30微升細(xì)胞上清液，加入50微升基質(zhì)緩沖液及10微升乳酸脫氫酶輔酶，37度振蕩15分鐘，再加入50微升2，4-二硝基苯肼，37度振蕩15分鐘。平行空白。取反應(yīng)液50微升加入200微升0.4mol/L氫氧化鈉溶液，靜置3～4分鐘后，用酶標(biāo)儀于450nm測(cè)定光度值。
藥效結(jié)果所有數(shù)據(jù)用均值±方差表示。采用單邊方差分析和T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。與模型組相比，P＜0.05認(rèn)為顯著有效。藥效結(jié)果見(jiàn)表2。根據(jù)內(nèi)皮細(xì)胞乳酸脫氫酶檢測(cè)結(jié)果，丹皮有效組分對(duì)降低LDH釋放有非常顯著效果。
表2

無(wú)需進(jìn)一步詳細(xì)闡述，相信采用前面所公開(kāi)的內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員可最大限度地應(yīng)用。因此，前面的優(yōu)選具體實(shí)施方案應(yīng)被理解為僅是舉例說(shuō)明，而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
權(quán)利要求
1.一種丹皮有效組分，活性成分有芍藥苷、沒(méi)食子酰芍藥苷、牡丹皮皂甙h，其特征是芍藥苷的含量為10～25％，沒(méi)食子酰芍藥苷的含量為40～55％，牡丹皮苷h的含量為30～45％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的的丹皮有效組分，其特征是芍藥苷的含量為12～21％，沒(méi)食子酰芍藥苷的含量為42～51％，牡丹皮苷h的含量為32～41％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的的丹皮有效組分，其特征是芍藥苷的含量為14～18％，沒(méi)食子酰芍藥苷的含量為44～48％，牡丹皮苷h的含量為34～38％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的丹皮有效組分的制備方法，其特征是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)將丹皮藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取得提取液，將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯作為流動(dòng)相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品，用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的有效組分，制備色譜的分離條件為色譜柱采用半制備柱，流動(dòng)相為水和乙腈，梯度洗脫。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的丹皮有效組分的制備方法，其特征是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)將丹皮藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇＝1∶0.8～1.2，加熱回流0.8～1.2小時(shí)，提取1～3次，合并濾液得提取液，將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯＝47～53∶1作為流動(dòng)相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇＝8～13∶1作為流動(dòng)相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得有效組分，用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的有效組分。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的丹皮有效組分的制備方法，其特征是制備色譜的分離條件為色譜柱采用半制備柱，流動(dòng)相為水和乙腈，梯度洗脫，流速為2.8～3.2ml/min，柱溫為室溫。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的丹皮有效組分的制備方法，其特征是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)將丹皮藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇＝1∶1，加熱回流1小時(shí)，提取2次，合并濾液得提取液；將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯＝50∶1作為流動(dòng)相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇＝10∶1作為流動(dòng)相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品，用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的有效組分。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的丹皮有效組分的制備方法，其特征是制備色譜的分離條件為色譜柱為半制備柱，流動(dòng)相為水A和乙腈B，梯度洗脫程序如下為0分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為80％的水溶液、流動(dòng)相B為20％的乙腈溶液；40分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為20％的水溶液、流動(dòng)相B為80％的乙腈溶液；50分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為5％的水溶液、流動(dòng)相B為95％的乙腈溶液；流速為3ml/min，柱溫為室溫；樣品用100％乙醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離，在時(shí)間段14.2～18.4min收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的丹皮有效組分，其特征是丹皮有效組分加入藥用添加劑按照藥劑學(xué)允許的制備方法制成藥用制劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的丹皮有效組分在制備治療、預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種丹皮有效組分，其活性成分的百分含量為芍藥苷10～25％，沒(méi)食子酰芍藥苷40～55％，牡丹皮苷h30～45％；制備方法是將丹皮藥材粉碎后加熱提取，將提取液濃縮成浸膏，與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行分離，將洗脫液濃縮干燥后得樣品，用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的有效組分。本發(fā)明的丹皮有效組分加入藥用添加劑按照藥劑學(xué)允許的制備方法制成藥用制劑并在制備治療、預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明方法使用了正相硅膠柱，能有效地除去糖、蛋白質(zhì)、氨基酸等雜質(zhì)，提高有效成分的含量，能快速準(zhǔn)確的得到有效成分，在生產(chǎn)中更易于藥物的質(zhì)量控制。
文檔編號(hào)A61K31/7042GK1799581SQ20051006043
公開(kāi)日2006年7月12日 申請(qǐng)日期2005年8月19日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月19日
發(fā)明者程翼宇, 賀慶, 王毅, 王學(xué)偉, 李云飛, 葛志偉, 胡興江 申請(qǐng)人:浙江大學(xué), 天津天士力現(xiàn)代中藥研究開(kāi)發(fā)有限公司