專利名稱：一種藥物組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法，特別涉及一種具有補養(yǎng)肝腎、益氣活血作用的藥物組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
老年人口比例的增加已是世界趨勢，由于出生率下降，生活條件與醫(yī)療條件的改善，致60以上的人口比例急劇增加，與之相隨，與腦代謝障礙相關(guān)的疾病較過去增加了25倍。其中尤以老年性癡呆和早老性癡呆給家庭和社會帶來了沉重的負擔。據(jù)統(tǒng)計，美國老年人口約有12％的人都患有癡呆癥，并且還有500萬潛在病人；而日本官方機構(gòu)預(yù)測，日本人口老化在阻礙日本經(jīng)濟發(fā)展的諸因素中將成為僅次于資源、能源短缺和國際沖突的第三個不利因素。在過去的6年中，我國60歲以上的老年人口已從1982年的7.63％增至1988年的8.4％，目前預(yù)計已達1億多老年人。聯(lián)合國人口預(yù)測，到2000年，我國60歲以上的老年人將為1.3億，占總?cè)丝跀?shù)的10.5％。因此，用藥物來改善腦代謝的功能，調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)遞質(zhì)的作用，已日益受到社會和醫(yī)療界的重視。
“衰老”是生命自然的老化過程，這是不可抗拒而被眾多學(xué)者所公認。我國中醫(yī)理論將人體從發(fā)育生長至衰老死亡歸之為腎氣盛衰之演變過程。老年性癡呆和早老年性癡呆屬中醫(yī)老年性疾病的范疇，其發(fā)病機理多屬老年人腎氣虧損，精血不足，髓?？仗撍?。正如王清任《醫(yī)林必錯腦髓說》“高年無記性者，腦髓漸空。”用中藥以“延緩衰老”，改善其記憶力，緩解其臨床癥侯令人重視。中醫(yī)理論對此也有較多描述。先秦《山海經(jīng)》明確記述了126種中藥，指出懷木等的增強記憶、強壯身體的作用。漢朝《神農(nóng)本草經(jīng)》收藥365種，被列為上品中的115種，中品中的40種，下品類的10種有延緩衰老的功效，如“人參味甘微寒，主補五臟，久服輕身延年?！敝了未斓は凇陡裰劣嗾摗分幸浴瓣幤疥柮?，我體長春”為法則，制訂的元菟固本丸，以枸杞、菟絲等配制，意在益精補腎，達延緩衰老之目的。而《御制太平圣惠方》所載枸杞、鹿茸、菟絲、川芎等，皆以補腎為主，其次為活血之品。明代李時珍的《本草綱目》，詳記了“延年、耐老、增年”等功效的補益中藥177種，而此類藥中補腎之品占56％。綜上所述，在延緩衰老，提高老年人生存質(zhì)量和生命活力方面，中醫(yī)從理、法、方、藥對“腎”的陰陽盛衰方面非常注重，并進行了大量闡述。
與西醫(yī)相比，中醫(yī)治療有以下幾個特點強調(diào)辨證論治，注重復(fù)方的整體調(diào)治優(yōu)勢，改善臨床癥狀明顯，毒副作用小，且中藥有來源廣泛、價格低廉等特點，因此，充分發(fā)掘中醫(yī)藥的豐富經(jīng)驗，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對本病的研究和中醫(yī)藥治療最新進展，開發(fā)一種療效確切、價格低廉、適合我國國情、攜帶服用方便、無毒副作用的中成藥，具有十分重要的理論意義與臨床實用價值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的在于公開一種中藥組合物；本發(fā)明的另一個目的在于公開一種具有補養(yǎng)肝腎、益氣活血作用的藥物組合物；本發(fā)明的第三個目的在于公開一種藥物組合物的制備方法；本發(fā)明目的還在于公開一種藥物組合物的質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成及配比如下(按重量份)桑椹600-1500重量份 枸杞子600-1500重量份 鹿茸3-7重量份槐花400-800重量份 川芎800-1600重量份本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成優(yōu)選配比為(按重量份)桑椹650重量份 枸杞子1400重量份 鹿茸4重量份槐花750重量份 川芎900重量份本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成優(yōu)選配比為(按重量份)桑椹1000重量份 枸杞子1000重量份 鹿茸5重量份槐花600重量份 川芎1200重量份本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成優(yōu)選配比為(按重量份)桑椹1400重量份 枸杞子650重量份 鹿茸7重量份槐花450重量份 川芎1500重量份本發(fā)明組合物組方中桑椹味甘質(zhì)潤，益腎滋陰，為君藥，配枸杞補肝腎、養(yǎng)精血為其臣，君臣協(xié)同，其補腎精、養(yǎng)精血功效更佳，且有補而不膩的特點。佐以鹿茸，補陽生髓，方中還另配用行氣活血之品，可使經(jīng)脈通，瘀血消，氣血行。
本藥物組合物的制備方法鹿茸粉碎成細粉，過60目篩，備用；川芎加水8-12倍量，提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣與其余桑椹、枸杞子、槐花加水6-10倍量煎煮二至三次，每次0.5-2小時，合并煎液，濾過，濾液與蒸餾后的水溶液合并，靜置8-24小時，濾過，濾液濃縮至相對密度1.30～1.35(60-80℃)的清膏；清膏與上述細粉混合均勻，加入乙醇稀釋的川芎揮發(fā)油，得本藥物組合物，該藥物組合物可制成臨床可接受的劑型，包括片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液體制劑、滴丸等。
本組合物制劑的質(zhì)量控制方法含有如下鑒別和/或含量測定方法中的一種或幾種，本發(fā)明質(zhì)量控制方法中的鑒別及含量測定方法為鑒別方法選自如下方法中的一種或幾種a、取本藥物組合物制劑5g，加甲醇20ml，超聲提取15-30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取蘆丁對照品，加甲醇制成每1ml含4mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液5ul、對照品溶液1ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，經(jīng)6-9∶0.5-2∶0.5-2比例的醋酸乙酯-甲酯-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鋁乙醇溶液，待乙醇揮干后，置紫外燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
b、取本藥物組合物制劑10g，研細，加乙醚50ml，放置1-2小時，時時振搖，濾過，乙醇液自然揮干，殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液；另取川芎對照藥材細粉1g，加乙醚20ml，加熱回流1-2小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作為對照藥材浴液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液10ul、對照品溶液5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以7-10∶0.5-3比例的正己烷-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯兩個以上相同顏色的熒光主斑點。含量測定方法為用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；以40∶60比例的甲醇-0.1％磷酸溶液為流動相檢測波長為358nm；理論板數(shù)按蘆丁峰計算應(yīng)不低于2000；精密稱取經(jīng)120℃干燥至恒重的蘆丁對照品適量，加甲醇制成每1ml中含蘆丁20μg的溶液，即得對照品溶液；取本藥物組合物裝量差異項下的內(nèi)容物，研細，取0.2g，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇30ml，超聲處理15-30分鐘，取出放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；本藥物組合物制劑每6g含蘆丁(C27H30O6)不得少于22mg。
本藥物組合物具有補養(yǎng)肝腎，健腦，益氣，活血的作用。適用于老年肝腎陰虛，血瘀所至的腰膝酸軟、神倦乏力、記憶力減退、智能下降病情較輕者。本發(fā)明實現(xiàn)的制劑穩(wěn)定，質(zhì)量可控。
對本藥物組合物顆粒制劑的藥效學(xué)部分進行初步研究果蠅壽命試驗表明，以7.2％、3.6％、1.8％、0.9％生藥濃度的飼料飼養(yǎng)果蠅，其平均壽命天數(shù)和最高壽命天數(shù)與正常對照組比較有顯著的差異(P＜0.05、P＜0.01)；對老齡鼠腦細胞線離體單胺氧化酶-B測試表明，本藥物組合物顆粒能顯著降低其濃度，與正常老齡鼠腦細胞線離體單胺氧化酶一B比較，有顯著性差異，提示該藥物具有延緩衰老的作用；以高效液相一電化學(xué)檢測儀對中樞神經(jīng)遞質(zhì)的測試表明，本藥物組合物顆粒中、小劑量能改善中樞神經(jīng)遞質(zhì)NE、DA、5一HT的濃度，使中樞NE、DA的含量增加，5一HT的含量降低，具有延緩衰老和增強記憶的作用；小鼠跳臺、迷宮試驗測試表明，本藥物組合物顆粒制劑中小劑量能增強小鼠的記憶力；在促進其激素分泌方面，本藥物組合物顆粒制劑能提高下丘腦GnRH、TRH及腺垂體LH、TSH的含量，其外周血清TSH、T3、T4的水平也有相應(yīng)的變化；在免疫方面，本藥物組合物顆粒制劑具有提高其體液免疫和細胞免疫的作用；在體力及應(yīng)激試驗方面，本藥物組合物顆粒制劑具有抗缺氧及提高其應(yīng)激力等功效。下述實驗例用于進一步說明本發(fā)明實驗例1壽命試驗-對果蠅壽命的影響用低溫麻醉法收集24小時內(nèi)羽化的成蟲。挑選大小基本一致的果蠅，雌雄分養(yǎng)，用培養(yǎng)基培養(yǎng)29天，除空白對照外，均換成含藥培養(yǎng)基，果蠅隨機分組，每組雌雄各100只，分別放入各種含藥陽性藥物培養(yǎng)基中，每個飼養(yǎng)管(3×10cm)25只。每天更換一次培養(yǎng)基，若發(fā)觀死蠅，立即更換培養(yǎng)基。每天記錄果蠅死亡情況，直至全部死亡為止。每組最后一個死亡的成蠅為該組的最高壽命，成蠅壽命的代數(shù)和除以該組的果蠅為該組果蠅的平均壽命。結(jié)果見表1表1 本藥物組合物顆粒制劑對果蠅壽命的影響

與對照組比較 *P＜0.05 **P＜0.01表1結(jié)果表明，本藥物組合物顆粒制劑能顯著延長果蠅的平均壽命、最高壽命，因此具有抗衰老作用，且不同濃度本藥物組合物顆粒制劑的延長壽命作用有差異。
實驗例2對老齡鼠腦細胞線粒體MAO一B活性的影響60只24月齡老年大鼠，按體重、性別隨機分為五個組，分別灌服不同劑量的本藥物組合物顆粒制劑，喜得鎮(zhèn)及等容積生理鹽水，同時另設(shè)一成年對照組，每天一次，連續(xù)30天。于末次給藥后一小時，在無菌情況狀態(tài)下斷頭處死大鼠。即刻剝離全腦，置液氨中深凍，取額葉大腦皮層稱重約150mg，加入10倍體積0.2M鹼性緩沖液(約1.5ml，PH 7.4)，放入預(yù)冷的玻璃勻漿器中研磨，勻漿液置24KC超聲波搗碎，置顯微鏡下視野內(nèi)可見1-2個完整細胞。1000Xg，4℃，離心10分鐘，取上清液20000Xg，4℃，離心30分鐘。26～34％的苦參堿和16～24％的小檗堿制成。
具體實施例方式
十六本實施方式與具體實施方式
十四的不同點是含掛金燈甾類化合物的藥物組合物按重量百分比由50％的掛金燈甾類化合物、30％的苦參堿和20％的小檗堿制成。
具體實施例方式
十七本實施方式含掛金燈甾類化合物的藥物組合物按重量百分比由55～65％的掛金燈甾類化合物、30～40％的苦參堿和1～10％的麝香制成。
本實施方式制成的藥物組合物用于治療心肌缺血。表7是本實施方式藥物組合物治療心肌缺血的臨床藥效學(xué)報告。
用法用量每日服三次，每次按病人體重每千克服用本實施方式藥物組合物45mg。
對30例年齡55～60歲的男性心肌缺血患者進行10～20天治療，患者病情明顯好轉(zhuǎn)的占75％(心電T波恢復(fù)、ST段恢復(fù))，患者病情輕度改善的占10％(心電T波高度降低、ST段減小)，治療無效患者的占15％。本實施方式藥物治療心肌缺血的效果如表7所示，其中病情診斷采信正規(guī)醫(yī)院出具心電圖。
表7

液，加甲醇定容至10ml，按標準曲線的繪制項下操作，結(jié)果見表4.得平均回收率100.02％，RSD 4.12％.
表4加樣回收率試驗數(shù)據(jù)

2.7穩(wěn)定性試驗精密吸取牛蒡苷元標準液，按標準曲線的繪制項下方法操作，在0，0.5，1，2，4，8小時分別測一次吸光度，見表5。在8小時內(nèi)，吸光度值變化不明顯，說明樣品溶液較穩(wěn)定。
表5穩(wěn)定性試驗數(shù)據(jù)

3.含量測定精密稱取牛蒡子提取物5.0mg，加甲醇溶解，定容于50ml，于280nm處測定吸收度，根據(jù)標準曲線，計算出樣品中總木脂素類化合物及牛蒡苷類的含量。
經(jīng)過對多批樣品的含量測定，測得本提取物中總木脂素類化合物及牛蒡苷的含量為51％～80％，則其它成分的含量為20％～49％。
PS效應(yīng)細胞自然釋放孔O.D值KMK562細胞最大釋放孔O.D值結(jié)果見表4表4本藥物組合物顆粒制劑對大鼠脾細胞NK細胞活性的影響

老年組與成年組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001各劑量組、陽性組與老年組比較結(jié)果表明，隨著機體衰老的發(fā)生，其細胞免疫功能也隨之降低，因此自然衰老動物組的NK細胞活性明顯低于成年對照組。而本藥物組合物顆粒制劑0.25g/kg、3.75g/kg均能明顯提高衰老動物NK細胞活性(P＜0.05)，26.25g/kg則較老年組無顯著性差異，陽性藥物喜得鎮(zhèn)1.5mg/kg對衰老動物的NK細胞活性則具有明顯的降低作用(P＜0.001)。
實驗例5對大鼠脾細胞LAK細胞活性的影響用LTT法制備大鼠脾細胞懸液，取脾細胞懸液(濃度1-210/ml)接種于培養(yǎng)板，加入一定濃度的r1L-2100ul，在37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)3天。收集上述培養(yǎng)細胞作為效應(yīng)細胞，按1∶1的比例加入培養(yǎng)板，于37℃，5％CO2孵育18小時后，取反應(yīng)液100ul加入LDH底物液100ul反應(yīng)，用EL311S酶標儀讀數(shù)。結(jié)果見表5表5本藥物組合物顆粒制劑對大鼠脾細胞LAK細胞活性的影響

老年組與成年組比較**P＜0.01 ***P＜0.001各劑量組、陽性組與老年組比較，表5結(jié)果表明自然衰老動物組與成年對照組比較，對rIL-2誘導(dǎo)反應(yīng)性不敏感，LAK細胞活動性非常明顯的降低(P＜0.001)。而本藥物組合物顆粒11.25g/kg、3.750g/kg均能明顯提高衰老動物對rIL-2誘導(dǎo)反應(yīng)的敏感性，增強LAK細胞活性，本藥物組合物顆粒制劑26.25g/kg劑量組對rIL-2誘導(dǎo)反應(yīng)不敏感。
實驗例6對綿羊紅細胞所致小鼠溶血素抗體形成的影響60只小鼠按體重隨機分成五個組，分別口服不同劑量的本藥物組合物顆粒制劑、多抗甲素及生理鹽水，每天一次，連續(xù)10天，第10天各小組于腹腔注射3.5(V/V)稀釋的綿羊紅細胞(SRBC)懸液0.2ml/只免疫，再繼續(xù)給藥3天，于末次給藥24小時(免疫后四天)，小鼠眼眶取血，放置，離心，取其血清稀釋400倍，加入10％的綿羊紅細胞0.5ml，置冰浴中，加入以上生理鹽水1∶10稀釋過的豚鼠血清1ml參加反應(yīng)，隨即移置37℃恒溫水浴中保溫10分鐘，再移入冰浴中終止反應(yīng)，用2000r/min離心10分鐘，取上清液1ml，加3ml都氏試劑，放置10分鐘后，用721分光光度計(λ＝540nm)比色，記錄其O.D值。按下式計算每個樣品的半數(shù)溶血值(HC50)，進行組間比較顯著差。

結(jié)果見表6表6本藥物組合物顆粒制劑綿羊紅細胞所致小鼠溶血素抗體形成的影響

生理鹽水組與各劑量組、陽性藥物組比較*P＜0.05 **＜0.01表6結(jié)果表明，本發(fā)明顆粒26.25g/kg、11.25g/kg連續(xù)灌服13天，對綿羊紅細胞所致小鼠溶血素抗體生成具有明顯的促進作用。
用葡萄糖氧化酶法，根據(jù)葡萄糖試劑盒說明書操作取10ul血清+1ml工作液(R1∶R2＝1∶1)，混勻后37℃水浴20min，用半自動生化分析儀測定葡萄糖含量；其中，取10ul雙蒸水+1ml工作液作為空白管，取10ul標準液+1ml工作液作為標準品管。
3實驗結(jié)果表15牛蒡子提取物對小鼠血糖濃度的影響(x±s，mM)

注“()”內(nèi)為動物數(shù)。
表15中，分別為空白對照組，陰性對照組，陽性藥物組，實驗藥物組。造模后給藥前進行模型是否成功的篩選，小鼠尾靜脈取血測空腹血糖，血糖值大于空白組且統(tǒng)計學(xué)上有顯著性差異的動物認為造模成功(數(shù)據(jù)未顯示)。
如表15所示，陰性組小鼠血糖濃度明顯高于其他實驗組(t檢驗，**p＜0.01vs空白組)，表明此次用四氧嘧啶進行小鼠糖尿病造模成功。陽性組小鼠血糖濃度達到最低(t檢驗，**p＜0.01vs陰性組)，結(jié)果進一步提示實驗動物模型可靠。而牛蒡子提取物組小鼠血糖濃度基本恢復(fù)到對照組水平(t檢驗，**p＜0.01vs陰性組)。表明牛蒡子提取物對糖尿病模型小鼠具有顯著的降血糖作用。
實施例8將本發(fā)明所述的牛蒡子提取物用于進行抗糖尿大鼠腎臟病變實驗。實驗證明，該牛蒡子提取物具有顯著的改善糖尿大鼠腎臟病變作用。
1實驗材料1.1實驗動物采用清潔級三月齡雄性Wistar大鼠，體重180-200g，雌雄各半，隨機分組。由中科院動物實驗中心提供。
1.2實驗藥物本項研究所用牛蒡子原藥材購自徐州醫(yī)藥股份有限公司藥材分公司，產(chǎn)地江蘇徐州。經(jīng)本院生藥學(xué)課題組劉忠副教授鑒定，確定為菊科植物<p>表8對大鼠下丘腦和腺體GnRH、TRH及LH、TSH的影響

老年組與成年組比較**P＜0.01 ***P＜0.001各劑量組、陽性組與老年組比較。
注以上組織重量為濕重。
表8結(jié)果表明，老年大鼠下丘腦GnRH、TRH及腺垂體LH、TSH含量與成年對照組大鼠比較有顯著降低(P＜0.001)；而腦喜顆粒26.25g/kg、11.25g/kg、3.75g/kg，連續(xù)灌服30天，可顯著提高老年大鼠下丘腦GnRH、TRH及腺垂體LH、TSH含量(P＜0.01，P＜0.001)。
表9本藥物組合物顆粒制劑對老年大鼠血清TSH、T3、T4的影響

老年組與成年組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001各劑量組、陽性組與上組比較表9結(jié)果表明，老年大鼠血清中TSH、T3、T4含量與成年大鼠比較有明顯降低(P＜0.001)，除26.25g/kg劑量組的血清T4升高不顯著外(P＞0.05)，其余各劑量組則可顯著提高老年大鼠血清T3、T4、TSH的水平(P＜0.001，P＜0.01)。
表10本藥物組合物顆粒制劑對老齡大鼠外周血LH、Ts、E2及E2/Ts值影響

老年組與成年組比較*P＜0.05 **＜0.01 ***P＜0.001各劑量組、陽性組與老年組比較表10結(jié)果表明，老年大鼠外周血LH，Ts含量與成年大鼠比較有明顯降低(P＜0.001)，而本藥物組合物顆粒制劑26.25g/kg，11.25g/kg，可顯著提高老年大鼠外周血LH、Ts含量(P＜0.05，P＜0.001)，3.75g/kg對血清LH有明顯提高的作用(P＜0.001)，而對血清Ts無明顯影響。而本藥物組合物顆粒給藥組對E2的影響不明顯，E2/Ts比值較年對照組比較也無顯著差別，這種情況反應(yīng)出老齡鼠的靶腺特別是卵巢衰退后，本藥物組合物顆粒制劑可使下丘腦及垂體釋放激素和促激素分泌水平有所提高。
實驗例9益智試驗1、跳臺法50只小鼠按體重、性別隨機分為五個組，分別灌服不同劑量的本藥物組合物顆粒制劑、喜得鎮(zhèn)及生理鹽水，每天一次，連續(xù)23天，于末次給藥后開始訓(xùn)練。訓(xùn)練時將小鼠分別放入反射箱內(nèi)，讓其適應(yīng)3分鐘，然后通電。動物受到電擊時，其正常反應(yīng)是跳回跳臺以避電擊，小鼠雙足同時接觸銅柵為觸電，視為錯誤反應(yīng)。訓(xùn)練5分鐘并記錄5分鐘內(nèi)錯誤次數(shù)。訓(xùn)練后繼續(xù)每天給藥一次，連續(xù)7天，重新測試比較5分鐘內(nèi)錯誤次數(shù)，觀察其記憶情況，組間比較顯著差。結(jié)果見表11
表11本藥物組合物顆粒制劑對老齡小鼠跳臺試驗的影響

與生理鹽水組比較**P＜0.01 *P＜0.05表11中結(jié)果表明，本藥物組合物顆粒制劑26.25g/kg給18月齡小鼠灌服30天，能顯著減少給藥訓(xùn)練后小鼠雙足觸電后跳臺的錯誤反應(yīng)次數(shù)，說明能增加小鼠的記憶能力。
2、電迷路法使用MG一2迷宮裝置。
50只小鼠按性別、體重隨機分為五個組，分別口服不同劑量的本藥物組合物顆粒制劑、喜得鎮(zhèn)及生理鹽水，每天一次，連續(xù)23天，第24天小鼠接受訓(xùn)練，將小鼠放入起步區(qū)，令其停留1分鐘適應(yīng)環(huán)境，然后以電壓100V、頻率1次/秒的刺激，當小鼠偶然進入安全區(qū)，令其在，安全區(qū)內(nèi)停留30秒，以鞏固記憶；第二次以此安全區(qū)作為起步區(qū)，再給予第二次電刺激，小鼠再次逃到安全區(qū)，如此反復(fù)訓(xùn)練10次，以小鼠在多次電擊后能從起步區(qū)直接進入安全區(qū)作為正確反應(yīng)，記錄正確反應(yīng)次數(shù)。訓(xùn)練后繼續(xù)給藥7天，第8天檢測小鼠記憶情況，檢測方法、條件與訓(xùn)練時相同，記錄小鼠在連續(xù)5次電擊中的正確見表12表12本藥物組合物顆粒制劑對老齡小鼠電迷路法的影響

與生理鹽水比較*P＜0.05表12結(jié)果表明，本藥物組合物顆粒制劑26.25g/kg、11.25g/kg給18月齡小鼠連續(xù)灌服30天，對訓(xùn)練后小鼠在電迷宮中的直接進入安全區(qū)的正確反應(yīng)率無明顯影響，而3.75g/kg本藥物組合物顆粒制劑和1.5mg/kg的喜<p>2.6.1常規(guī)HE染色及PAS染色 取左腎組織，經(jīng)10％的中性福爾馬林緩沖液固定后，浸蠟、包埋、連續(xù)切片，厚約4m，常規(guī)HE及PAS染色，光鏡下觀察腎組織病理變化。在高倍鏡下觀察每張切片腎皮質(zhì)部分5個以上大小相似的腎小球，用IMS彩色圖像分析系統(tǒng)(上海申騰信息技術(shù)有限公司)分析每個腎小球陰染色陽性的基質(zhì)面積、腎小球總面積，以求得基質(zhì)陽性面積比值(陽性面積/腎小球總面積)。
2.6.2免疫組化法檢測 u-PA、PAI-1，c-fos、c-jun。每個實驗組鏡下5例切片，每張切片觀察10個大小相近的腎小球，根據(jù)軟件分析每個腎小球免疫組化染色陽性面積占整個腎小球面積的比值，統(tǒng)計每組免疫組化陽性面積百分比。
2.7統(tǒng)計分析本文中數(shù)據(jù)統(tǒng)計均用SPSS Version10.0(SPSS Inc.，2000)完成，其中各組均數(shù)以均數(shù)±標準差(±s)表示，資料統(tǒng)計采用One-Way ANOVA法分析，方差不齊時采用Dunnett T3法分析。統(tǒng)計顯著性水平為P＜0.05。
3.實驗結(jié)果3.1一般情況 空白對照組大鼠體重增長明顯，精神狀況良好，動作自如，反應(yīng)靈敏，毛皮有光澤。陰性對照組大鼠明顯消瘦，多飲多尿、精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，毛豎無光澤，動作遲緩。實驗藥物組精神狀況均良好，動作自如，反應(yīng)靈敏度較空白對照組稍差。陰性對照組及實驗藥物組大鼠進食量、飲水量均較空白對照組顯著升高；實驗藥物組進食量、飲水量均較陰性對照組低。
3.2生化指標的改變3.2.1第6周末肌酐清除率和24小時尿蛋白定量的變化見表16。
表16第6周末肌酐清除率、24小時尿蛋白的變化

與陰性對照組比較★P＜0.05。
表14結(jié)果表明本藥物組合物顆粒制劑三個劑量組給小鼠連續(xù)灌服20天可顯著延長小鼠在常壓缺氧條件下的存活時間。
實施例1桑椹650g 枸杞子1400g 鹿茸4g 槐花750g 川芎900g鹿茸粉碎成細粉，過60目篩，備用。川芎加水8倍量，提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣與其余桑椹、枸杞子、槐花加水8倍量煎煮三次，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液與蒸餾后的水溶液合并，靜置24小時，濾過，濾液濃縮至相對密度1.30～1.35(60-80℃)的清膏。清膏與上述細粉混合均勻，加入乙醇稀釋的川芎揮發(fā)油，制成片劑1000g，即得。
實施例2桑椹1000g 枸杞子1000g 鹿茸5g 槐花600g 川芎1200g鹿茸粉碎成細粉，過60目篩，備用。川芎加水10倍量，提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣與其余桑椹、枸杞子、槐花加水8倍量煎煮二次，每次1小時，合并煎液，濾過，濾液與蒸餾后的水溶液合并，靜置12小時，濾過，濾液濃縮至相對密度1.30～1.35(60-80℃)的清膏。清膏與上述細粉混合均勻，加乳糖適量制成顆粒，干燥，加入乙醇稀釋的川芎揮發(fā)油，混勻，制成顆粒1000g，即得。本品為棕黃色至棕褐色的顆粒；味甜，微苦。開水沖服，一次6g，一日2-3次。
實施例3桑椹1400g 枸杞子650g 鹿茸7g 槐花450g 川芎1500g鹿茸粉碎成細粉，過60目篩，備用。川芎加水12倍量，提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣與其余桑椹、枸杞子、槐花加水10倍量煎煮二次，每次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液與蒸餾后的水溶液合并，靜置12小時，濾過，濾液濃縮至相對密度1.30～1.35(60-80℃)的清膏。清膏與上述細粉混合均勻，加入乙醇稀釋的川芎揮發(fā)油，制成膠囊1000g，即得。
實施例4本組合物的鑒別方法取本藥物組合物制劑5g，加甲醇20ml，超聲提取20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取蘆丁對照品，加甲醇制成每1ml含4mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液5ul、對照品溶液1ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，經(jīng)8∶1∶1比例的醋酸乙酯-甲酯-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鋁乙醇溶液，待乙醇揮干后，置紫外燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
實施例5本組合物片劑的鑒別方法a、取本藥物組合物片劑5g，加甲醇20ml，超聲提取20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取蘆丁對照品，加甲醇制成每1ml含4mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液5ul、對照品溶液1ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，經(jīng)8∶1∶1比例的醋酸乙酯-甲酯-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鋁乙醇溶液，待乙醇揮干后，置紫外燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
b、取本藥物組合物片劑10g，研細，加乙醚50ml，放置1小時，時時振搖，濾過，乙醇液自然揮干，殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液；另取川芎對照藥材細粉1g，加乙醚20ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作為對照藥材浴液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液10ul、對照品溶液5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9∶1比例的正己烷-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯兩個以上相同顏色的熒光主斑點。
實施例6本組合物顆粒劑的含量測定方法用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；以40∶60比例的甲醇-0.1％磷酸溶液為流動相檢測波長為358nm；理論板數(shù)按蘆丁峰計算應(yīng)不低于2000；精密稱取經(jīng)120℃干燥至恒重的蘆丁對照品適量，加甲醇制成每1ml中含蘆丁20μg的溶液，即得對照品溶液；取本藥物組合物裝量差異項下的內(nèi)容物，研細，取0.2g，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇30ml，超聲處理15分鐘，取出放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；本藥物組合物每袋含蘆丁(C27H30O6)不得少于22mg。
實施例7本組合物顆粒劑的質(zhì)量控制方法本組合物顆粒劑的鑒別方法a、取本藥物組合物顆粒劑5g，加甲醇20ml，超聲提取20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取蘆丁對照品，加甲醇制成每1ml含4mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液5ul、對照品溶液1ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，經(jīng)8∶1∶1比例的醋酸乙酯-甲酯-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鋁乙醇溶液，待乙醇揮干后，置紫外燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
b、取本藥物組合物顆粒劑10g，研細，加乙醚50ml，放置1小時，時時振搖，濾過，乙醇液自然揮干，殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液；另取川芎對照藥材細粉1g，加乙醚20ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作為對照藥材浴液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液10ul、對照品溶液5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9∶1比例的正己烷-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯兩個以上相同顏色的熒光主斑點。
本組合物顆粒劑的含量測定方法用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；以40∶60比例的甲醇-0.1％磷酸溶液為流動相檢測波長為358nm；理論板數(shù)按蘆丁峰計算應(yīng)不低于2000；精密稱取經(jīng)120℃干燥至恒重的蘆丁對照品適量，加甲醇制成每1ml中含蘆丁20μg的溶液，即得對照品溶液；取本藥物組合物裝量差異項下的內(nèi)容物，研細，取0.2g，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇30ml，超聲處理15分鐘，取出放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；本藥物組合物顆粒劑每6g含蘆丁(C27H30O6)不得少于22mg。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的桑椹600-1500重量份 枸杞子600-1500重量份 鹿茸3-7重量份 槐花400-800重量份 川芎800-1600重量份。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的桑椹650重量份 枸杞子1400重量份 鹿茸4重量份 槐花750重量份 川芎900重量份。
3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的桑椹1000重量份 枸杞子1000重量份 鹿茸5重量份 槐花600重量份 川芎1200重量份。
4.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的桑椹1400重量份 枸杞子650重量份 鹿茸7重量份 槐花450重量份 川芎1500重量份。
5.權(quán)利要求1、2、3或4所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為鹿茸粉碎成細粉，過60目篩，備用；川芎加水8-12倍量，提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣與其余桑椹、枸杞子、槐花加水6-10倍量煎煮二至三次，每次0.5-2小時，合并煎液，濾過，濾液與蒸餾后的水溶液合并，靜置8-24小時，濾過，濾液濃縮至相對密度1.30～1.35的清膏；清膏與上述細粉混合均勻，加入乙醇稀釋的川芎揮發(fā)油，得本藥物組合物，該藥物組合物制成臨床接受的片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液體制劑、滴丸。
6.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為鹿茸粉碎成細粉，過60目篩，備用；川芎加水10倍量，提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣與其余桑椹、枸杞子、槐花加水8倍量煎煮二次，每次1小時，合并煎液，濾過，濾液與蒸餾后的水溶液合并，靜置12小時，濾過，濾液濃縮至相對密度1.30～1.35的清膏；清膏與上述細粉混合均勻，加入乙醇稀釋的川芎揮發(fā)油，得本藥物組合物，該藥物組合物制成臨床接受的片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液體制劑、滴丸。
7.如權(quán)利要求1、2、3或4所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中包括如下鑒別方法中的一種或幾種a、取本藥物組合物制劑5g，加甲醇20ml，超聲提取15-30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取蘆丁對照品，加甲醇制成每1ml含4mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液5ul、對照品溶液1ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，經(jīng)6-9∶0.5-2∶0.5-2比例的醋酸乙酯-甲酯-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鋁乙醇溶液，待乙醇揮干后，置紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點；b、取本藥物組合物制劑10g，研細，加乙醚50ml，放置1-2小時，時時振搖，濾過，乙醇液自然揮干，殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液；另取川芎對照藥材細粉1g，加乙醚20ml，加熱回流1-2小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作為對照藥材浴液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10ul、對照品溶液5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以7-10∶0.5-3比例的正己烷-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯兩個以上相同顏色的熒光斑點。
8.如權(quán)利要求7所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中包括如下鑒別方法中的一種或幾種a、取本藥物組合物制劑5g，加甲醇20ml，超聲提取20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取蘆丁對照品，加甲醇制成每1ml含4mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液5ul、對照品溶液1ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，經(jīng)8∶1∶1比例的醋酸乙酯-甲酯-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鋁乙醇溶液，待乙醇揮干后，置紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點；b、取本藥物組合物制劑10g，研細，加乙醚50ml，放置1小時，時時振搖，濾過，乙醇液自然揮干，殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液；另取川芎對照藥材細粉1g，加乙醚20ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作為對照藥材浴液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10ul、對照品溶液5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9∶1比例的正己烷-醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯兩個以上相同顏色的熒光主斑點。
9.如權(quán)利要求1、2、3或4所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中包括如下含量測定方法用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；以40∶60比例的甲醇-0.1％磷酸溶液為流動相檢測波長為358nm；理論板數(shù)按蘆丁峰計算應(yīng)不低于2000；精密稱取經(jīng)120℃干燥至恒重的蘆丁對照品適量，加甲醇制成每1ml中含蘆丁20μg的溶液，即得對照品溶液；取本藥物組合物裝量差異項下的內(nèi)容物，研細，取0.2g，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇30ml，超聲處理15-30分鐘，取出放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；本藥物組合物制劑每6g含蘆丁不得少于22mg。
10.如權(quán)利要求1、2、3或4所述的藥物組合物在制備具有延緩衰老作用、益智作用、提高免疫作用、或提高應(yīng)激力作用的藥物中的應(yīng)用。
11.如權(quán)利要求11所述的藥物組合物在制備具有延緩衰老作用的藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的延緩衰老是指延長壽命、降低腦細胞MAO-B活性、提高NE、DA含量、降低5-HT、提高NK細胞活性、提高對rIL-2誘導(dǎo)反應(yīng)的敏感性或增強LAK細胞活性。
12.如權(quán)利要求11所述的藥物組合物在制備具有益智作用的藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的益智是指增強記憶力或提高行為正確率。
13.如權(quán)利要求11所述的藥物組合物在制備具有提高免疫作用的藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的提高免疫是指提高下丘腦GnRH、TRH及腺垂體LH、TSH含量、提高血清T3、T4、TSH的水平或提高下丘腦及垂體釋放激素和促激素分泌水平。
14.如權(quán)利要求11所述的藥物組合物在制備具有提高應(yīng)激力作用的藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的提高應(yīng)激力是指增強體力或提高耐缺氧能力。
全文摘要
本發(fā)明公開一種用于治療老年肝腎陰虛所至的神倦乏力、記憶力減退者的藥物組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法。該藥物組合物含有桑椹、枸杞子、鹿茸、槐花、川芎；本藥物組合物具有補養(yǎng)肝腎，健腦，益氣，活血的作用；主治老年肝腎陰虛、血淤所至的腰膝酸軟、神倦乏力、記憶力減退、智能下降病情較輕者。本發(fā)明實現(xiàn)的制劑穩(wěn)定，質(zhì)量可控。
文檔編號A61K9/08GK1864719SQ20051007073
公開日2006年11月22日 申請日期2005年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月18日
發(fā)明者賀敏 申請人:重慶大易科技投資有限公司