專利名稱：一種藥物組合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種由丹參素鈉和三七總皂苷提取物組成的藥物組合物，還涉及該藥物組合物的制備方法和其在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
丹參素(化學(xué)名為β-3，4-二羥基苯乳酸)是從丹參中提取獲得的，為丹參的有效成分。丹參素為有機(jī)酸，可與鈉離子成鹽。文獻(xiàn)報(bào)道丹參素在心腦血管疾病方面具有一定的保護(hù)作用江文德，陳玉華，王迎平，等.丹參素及兩種水溶性丹參成分抗心肌缺血和對冠狀動脈的研究.上海第一醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1982，9(1)13-94.；唐立輝，王孝銘，梁殿權(quán)，等.丹參素對大鼠心肌缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用.中國病理生理雜志，1989，6(2)65-9.；張力，王孝銘，梁殿權(quán)，等.丹參素對大鼠心肌缺血/再灌注致線粒體變化的影響及其作用機(jī)理的探討.中國病理生理雜志，1990，6(6)420-423.；常英姿，梁殿權(quán)，王孝銘，等.丹參素對氧自由基所致大鼠心肌線粒體H′-ATP酶損傷的保護(hù)作用.中國病理生理雜志，1991，7(5)449-452.；蘇曉華，梁殿權(quán)，王孝銘.丹參素(DS-182)對大鼠心肌線粒體氧自由基損傷的保護(hù)作用.中國病理生理雜志，1992，8(2)122-124.；顧楊洪，張彩英，黃桂秋，等.丹參三七總皂苷對牛內(nèi)皮細(xì)胞抗凝和纖溶功能的影響.上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1990，10(3)208-211.；李承珠，楊詩春，趙鳳娣，等.丹參素抗凝血作用的研究.中西醫(yī)結(jié)合雜志，1983，3(5)297-299.。
三七也是一味傳統(tǒng)的活血化瘀類中藥，大量的研究表明，三七的有效成分為三七皂苷類，三七總皂苷的有效成分主要有人參皂苷Rb1、Rg1、Re和三七皂苷R1，具有抗心肌缺血、抗腦缺血，抗自由基，抗缺血再灌引起的細(xì)胞損傷、抑制血栓，抑制血小板聚集，對缺血后的細(xì)胞有保護(hù)作用梁寧，趙懷清，周迎春，等.HPLC法同時(shí)測定三七總皂苷中人參皂苷Rg1、與Rb1的含量.中草藥，2002，33(8)704-705.；周迎春，趙懷清，梁寧，等.高效液相色譜法同時(shí)測定三七總皂苷中人參皂苷Rg1、Re、Rb1與三七皂苷R1含量.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，20(1)27-31.徐皓亮，李勇，饒曼人.三七皂苷Rg1對大鼠實(shí)驗(yàn)性血栓形成、血小板聚集率及血小板內(nèi)游離鈣水平的影響.中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，1998，12(1)40.；雷秀玲，董雪峰，陳植和，等.絡(luò)泰對大鼠實(shí)驗(yàn)性急性心肌缺血的保護(hù)作用及抗脂質(zhì)過氧化作用.天然產(chǎn)物研究與開發(fā).2001，13(4)58.；劉季春，陳朋.維拉帕米和三七總皂苷對犬心肌的保護(hù)作用.中華麻醉學(xué)雜志，1997，17(12)741.；唐旭東，姜建青，賃常文，等.三七總皂苷對心肌缺血/再灌注中中性粒細(xì)胞浸潤的影響及其核轉(zhuǎn)錄機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研完.成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，25(3)32.；馮培芳，秦南屏，喬樵，等.三七總皂苷改善高血壓病左室舒張功能的臨床與實(shí)驗(yàn)研究.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，1997，17(2)714.；劉建輝，翼風(fēng)云，王婷，等.三七總皂苷對實(shí)驗(yàn)性腦缺血腦血流及血腦屏障的影響作用.河北醫(yī)藥，2002，24(4)249.；姚小皓，李學(xué)軍.三七中人參三醇苷對腦缺血的保護(hù)作用及其機(jī)制.中國中藥雜志，2002，27(5)371.；林曙光.三七皂苷對高脂血清所致的培養(yǎng)主動脈平滑肌細(xì)胞增殖的作用.中國藥理學(xué)報(bào)，1993，14(4)314.。
本發(fā)明人通過大量的實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)明了一種由丹參素鈉和三七總皂苷提取物組成的藥物組合物，其對心腦血管疾病中的作用具有協(xié)同效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種由丹參素鈉和三七總皂苷提取物組成的藥物組合物，其中三七總皂苷提取物中含有100％＞三七總皂苷(包括人參皂苷Rg1、Re、Rb1與三七皂苷R1)≥50％，優(yōu)選為大于等于80％，小于100％，丹參素鈉與三七總皂苷的重量比為1∶(0.25～4)。
本發(fā)明提供了上述組合物在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了上述組合物在制備治療或預(yù)防心肌缺血的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了上述組合物在制備治療或預(yù)防腦損傷的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以以粉針劑、注射液、片劑、膠囊、軟膠囊、滴丸或口服液的形式存在，優(yōu)選為凍干粉針。本發(fā)明提供的各種劑型均可以采用藥學(xué)常規(guī)方法制備而成。
本發(fā)明提供的藥物組合物，其含有活性成分的含量范圍是5mg～500mg。
本發(fā)明提供的藥物組合物在用于心腦血管疾病時(shí)，其使用劑量范圍是75mg～3000mg，優(yōu)選為100mg～1000mg。
本發(fā)明所述的丹參素鈉優(yōu)選采用如下方法制備取丹參粉碎成粗粉(40～50目)，用氫氧化鈉溶液浸泡加熱提取二次，過濾后合并濾液，濃縮后用10％鹽酸酸沉，離心并分離沉淀，沉淀用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為中性使其溶解，按照比吸附量2∶1(樹脂量與藥材量)通過弱堿性大孔吸附樹脂吸附柱進(jìn)行吸附。用乙醇溶液50％(V/V)4～6倍柱體積洗脫除雜，用氫氧化鈉水溶液0.4％(m/V)2～4倍柱體積進(jìn)行洗脫，收集洗脫液用10％的鹽酸調(diào)節(jié)pH為中性，濃縮，放冷，靜置，得丹參素鈉結(jié)晶，過濾，洗滌，干燥，得丹參素鈉晶體。用水重結(jié)晶，得灰色至類白色的針狀晶體。
本發(fā)明所述的三七總皂苷提取物可以按文獻(xiàn)魏鳳玲，朱春波，朱立平，等.三七總皂苷提取工藝優(yōu)選.中國中藥雜志，2000，25(12)722，潘旭初.三七總皂甙的提取工藝.數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志，2003，16(5)437或唐紅芳，毛麗珍，徐世芳.正交試驗(yàn)法研究三七提取工藝.中草藥，2001，32(1)26-28中記載的的方法進(jìn)行提取，按唐光第.大孔吸附樹脂提取三七總皂甙工藝探討.中成藥，1990，12(8)57.方法進(jìn)行精制。
本發(fā)明所述的三七總皂苷提取物優(yōu)選采用下述方法制備將三七粉碎，分別用乙醇水溶液浸漬、滲漉，合并浸漬液和滲漉液，減壓濃縮，加適量水稀釋，上大孔樹脂柱，先用水洗脫，然后用不同濃度的乙醇溶液洗脫，收集高濃度洗脫液，減壓濃縮至無醇味。用70％乙醇溶解后過濾，濾液脫色，精制后，濃縮至比重為1.15后噴霧干燥即得。
本發(fā)明人進(jìn)行了下列試驗(yàn)來證實(shí)上述藥物組合物在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病方面的作用，其作用遠(yuǎn)強(qiáng)于單用同劑量丹參素鈉或三七總皂苷。
具體實(shí)施例方式
制備例1丹參素鈉的制備取丹參10kg粉碎成粗粉(40～50目)，用12倍量的0.4％氫氧化鈉溶液浸泡加熱提取二次，過濾后合并濾液，濃縮后用10％鹽酸酸沉，離心并分離沉淀，沉淀用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為中性使其溶解，按照比吸附量2∶1(樹脂量與藥材量)通過弱堿性大孔吸附樹脂D301M的吸附柱進(jìn)行吸附，即用20kg大孔樹脂D301M填充柱。用乙醇溶液50％(V/V)4～6倍柱體積洗脫除雜，用氫氧化鈉水溶液0.4％(m/V)2～4倍柱體積進(jìn)行洗脫，收集洗脫液用10％的鹽酸調(diào)節(jié)pH為中性，濃縮至1～2L，放冷，靜置，得丹參素鈉結(jié)晶，過濾，洗滌，干燥，得丹參素鈉晶體，用水重結(jié)晶，得灰色至類白色的針狀晶體。
制備例2三七總皂苷提取物的制備將10kg三七粉碎成粗粉(40～50目)，用10倍量65％的乙醇浸漬24h后，按中國藥典收載的方法，以每公斤每分鐘2ml速度緩慢滲漉，合并浸漬液和滲漉液，減壓濃縮至原體積的1/10，加適量水稀釋，按比吸附量1∶1(樹脂量與藥材量)通過D101大孔樹脂柱，先用5倍體積的水洗脫，再用40％的乙醇8倍柱體積洗脫，再用80％的乙醇洗脫收集洗脫液，減壓濃縮至無醇味。用70％乙醇溶解過濾后，經(jīng)堿性氧化鋁脫色，精制后，濃縮至比重為1.15后噴霧干燥即得，其中三七總皂苷含量為83.3％。
制備例3三七總皂苷提取物的制備將10kg三七粉碎成粗粉(40～50目)，用10倍量65％的乙醇浸漬2h再超聲1h后，按中國藥典收載的方法，以每公斤每分鐘2ml速度緩慢滲漉，合并滲漉液和浸漬液，減壓濃縮至原體積的1/10，加適量水稀釋，按比吸附量1∶1(樹脂量與藥材量)通過D101大孔樹脂柱，先用5倍體積的水洗脫，再用20％的乙醇8倍柱體積洗脫，再用80％的乙醇洗脫收集洗脫液，減壓濃縮至無醇味。用50％乙醇溶解過濾后，用藥用氧化鎂脫色，精制后，濃縮至比重為1.15后噴霧干燥即得，其中三七總皂苷的含量為71.2％。
制備例4三七總皂苷提取物的制備將10kg三七粉碎成粗粉(40～50目)，用10倍量55％的乙醇浸漬24h后，按中國藥典收載的滲漉法，以每公斤每分鐘2ml速度緩慢滲漉，合并滲漉液和浸漬液，減壓濃縮至原體積的1/10，加適量水稀釋，按比吸附量1∶1(樹脂量與藥材量)通過D101大孔樹脂柱，先用5倍體積的水洗脫，再用30％的乙醇8倍柱體積洗脫，再用80％的乙醇洗脫收集洗脫液，減壓濃縮至比重為1.15后噴霧干燥即得，其中三七總皂苷的含量為53.5％。
制備例5丹參素鈉與三七總皂苷提取物凍干粉針制備取丹參素鈉25g，三七總皂苷50g混合后加注射用水2000ml，調(diào)節(jié)pH值使其溶解，加甘露醇8g，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，灌入10ml西林瓶中，2ml/支，凍干，即得含丹參素鈉25mg，三七總皂苷50mg的凍干粉針。
制備例6丹參素鈉與三七總皂苷提取物凍干粉針制備取丹參素鈉25g，三七總皂苷6.25g混合后加注射用水2000ml，調(diào)節(jié)pH值使其溶解，加甘露醇20g，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，灌入10ml西林瓶中，2ml/支，凍干，即得含丹參素鈉25mg，三七總皂苷6.25mg的凍干粉針。
制備例7丹參素鈉與三七總皂苷提取物凍干粉針制備取丹參素鈉100g，三七總皂苷400g混合后加注射用水5000ml，調(diào)節(jié)pH值使其溶解，加甘露醇40g，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，灌入20ml西林瓶中，5ml/支，凍干，即得含丹參素鈉100mg，三七總皂苷400mg的凍干粉針。
制備例8丹參素鈉與三七總皂苷提取物組合物滴丸劑制備取丹參素鈉4g，三七總皂苷1g混合后，加入32g聚乙二醇4000，加熱至80℃熔融，攪拌均勻，以二甲基硅油為冷卻劑用滴丸機(jī)滴制為滴丸，使每粒含丹參素鈉4mg，三七總皂苷1mg。
制備例9丹參素鈉與三七總皂苷提取物組合物片劑制備取丹參素鈉100g，三七總皂苷400g混合后，以淀粉為添充劑，以5％的淀粉漿作為粘合劑，制粒，加入硬脂酸鎂，混勻，用壓片機(jī)壓制為片劑。每片含丹參素鈉100mg，三七總皂苷400mg。
試驗(yàn)例1丹參素鈉和三七總皂苷提取物組合物對大鼠心肌缺血損傷的影響(1)材料丹參素鈉按制備例1制備。
三七總皂苷提取物按制備例2制備，其中劑量是以三七總苷的量來計(jì)。
丹參素鈉與三七總皂苷提取物組合物按丹參素鈉與三七總皂苷的重量比進(jìn)行混合。
氯化硝基四氮唑藍(lán)(N-BT)，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥材供應(yīng)站提供。
實(shí)驗(yàn)動物普通級SD大鼠，雄性，體重280g-350g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心動物實(shí)驗(yàn)中心提供。合格證號魯動質(zhì)字200106005號。
方法和結(jié)果中，三七總皂苷組的劑量是以三七總皂苷的量來計(jì)算。
(2)方法與結(jié)果動物隨機(jī)分為模型對照組(生理鹽水)、硝苯地平組(6mg/kg)、丹參素鈉組(2.5mg/kg)、丹參素鈉組(7.5mg/kg)、三七總皂苷組(5mg/kg)、三七總皂苷組(15mg/kg)、丹參素鈉(2.5mg/kg)+三七總皂苷(5mg/kg)小劑量組、丹參素鈉(5mg/kg)+三七總皂苷(2.5mg/kg)小劑量組、丹參素鈉(6mg/kg)+三七總皂苷(1.5mg/kg)小劑量組、丹參素鈉(1.5mg/kg)+三七總皂苷(6mg/kg)小劑量組、丹參素鈉(5mg/kg)+三七總皂苷(10mg/kg)劑量組、丹參素鈉(3mg/kg)+三七總皂苷(12mg/kg)劑量組、丹參素鈉(33mg/kg)+三七總皂苷(67mg/kg)劑量組、丹參素鈉(100mg/kg)+三七總皂苷(200mg/kg)劑量組、丹參素鈉(15mg/kg)+三七總皂苷(30mg/kg)口服劑量組。每組10只。禁食12小時(shí)后，ip.烏拉坦(1.2g/kg)麻醉，測肢體II導(dǎo)聯(lián)心電圖。剪去左胸前皮毛，碘酒及酒精消毒，沿胸骨左緣1cm處，剪開胸壁肌肉及二條肋骨，迅速打開胸腔，暴露心臟，在動脈圓錐與左心耳之間結(jié)扎左冠狀動脈，立即將心臟放回，排擠出胸腔空氣，用止血鉗閉合胸腔，造成大鼠急性心肌缺血模型。硝苯地平組在麻醉前灌胃給藥，丹參素鈉(15mg/kg)+三七總皂苷(30mg/kg)口服劑量組連續(xù)給藥3天，于第2天給藥后禁食16小時(shí)后，第3天給藥30分鐘后手術(shù)，其余各組術(shù)后隨即靜脈注射相應(yīng)藥物。記錄給藥前及給藥后1.5h、3h心電圖，測量心電圖J點(diǎn)的升高值，6h后取出心臟，以冷生理鹽水洗凈后，-20℃冰箱冷凍過夜。次日，將冷凍的心臟由結(jié)扎處至心尖部等厚切成5片，浸入新鮮配制的0.25％N-BT磷酸緩沖液(pH7.4)中。37℃水浴振搖10～15min。用濾紙吸干切片表面的染色液，分離染色部分和未染色部分，稱重，記算梗死面積。梗死面積(％)＝梗死部分重量/(非梗死部分重量+梗死部分重量)×100％。數(shù)據(jù)用X±s表示，以組間t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
結(jié)果如表1所示，心肌缺血6小時(shí)后，模型組大鼠心肌出現(xiàn)明顯的灶狀缺血區(qū)，達(dá)到26％左右。2.5mg/kg丹參素鈉組與5mg/kg三七總皂苷組均未能降低肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖J點(diǎn)的升高、減少缺血面積；7.5mg/kg丹參素鈉組與15mg/kg三七總皂苷組、組合物口服劑量組丹參素鈉(15mg/kg)+三七總皂苷(30mg/kg)均在一定程度上降低肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖J點(diǎn)的升高、減少缺血面積；組合物劑量組丹參素鈉(2.5mg/kg)+三七總皂苷(5mg/kg)、組合物劑量組丹參素鈉(5mg/kg)+三七總皂苷(2.5mg/kg)、組合物劑量組丹參素鈉(1.5mg/kg)+三七總皂苷(6mg/kg)、組合物劑量組丹參素鈉(6mg/kg)+三七總皂苷(1.5mg/kg)顯著地降低肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖J點(diǎn)的升高、減少缺血面積(與模型組比較，p＜0.01)，組合物劑量組丹參素鈉(2.5mg/kg)+三七總皂苷(5mg/kg)、組合物劑量組丹參素鈉(5mg/kg)+三七總皂苷(2.5mg/kg)、組合物劑量組丹參素鈉(1.5mg/kg)+三七總皂苷(6mg/kg)、組合物劑量組丹參素鈉(6mg/kg)+三七總皂苷(1.5mg/kg)對肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖J點(diǎn)的升高、減少缺血面積與7.5mg/kg丹參素鈉比較亦有顯著性差異(p＜0.05)；組合物劑量組丹參素鈉(5mg/kg)+三七總皂苷(10mg/kg)、組合物劑量組丹參素鈉(3mg/kg)+三七總皂苷(12mg/kg)顯著地降低肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖J點(diǎn)的升高、減少缺血面積(與模型組比較，p＜0.01)，對肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖J點(diǎn)的升高、減少缺血面積與15mg/kg三七總皂苷比較亦有顯著性差異(p＜0.05)；組合物劑量組丹參素鈉(33mg/kg)+三七總皂苷(67mg//kg)極其顯著地降低肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖J點(diǎn)的升高、減少缺血面積(與模型組比較，p＜0.001)；組合物劑量組8丹參素鈉(100mg/kg)+三七總皂苷(200mg/kg)非常顯著地降低肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖J點(diǎn)的升高、減少缺血面積(與模型組比較，p＜0.001)。
表1丹參素鈉、三七總皂苷、組合物對大鼠心肌缺血損傷的影響

與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
與丹參素鈉中劑量組比較，*P＜0.05；與三七總皂苷中劑量組比較，MP＜0.05試驗(yàn)例2丹參素鈉和三七總皂苷組合物對大鼠局部腦缺血損傷的影響(1)材料丹參素鈉按制備例1制備。
三七總皂苷提取物按制備例3制備，劑量以三七總皂苷的量計(jì)。丹參素鈉與三七總皂苷提取物組合物按丹參素鈉與三七總皂苷的重量比進(jìn)行混合。紅四氮唑美國Sigma公司產(chǎn)品，臨用前用生理鹽水配成4％溶液。
實(shí)驗(yàn)動物普通級Wistar大鼠，雄性，體重280g-350g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心動物實(shí)驗(yàn)中心提供。合格證號魯動質(zhì)字200106005號。
方法和結(jié)果中，三七總皂苷組的劑量是以三七總皂苷的量來計(jì)算。
(2)方法與結(jié)果動物隨機(jī)分為模型對照組(生理鹽水)、尼莫地平組(Nim，1.0mg/kg)、丹參素鈉組(2.5mg/kg)、丹參素鈉組(7.5mg/kg)、三七總皂苷組(5mg/kg)、三七總皂苷組(15mg/kg)、丹參素鈉(2.5mg/kg)+三七總皂苷(5mg/kg)小劑量組、丹參素鈉(5mg/kg)+三七總皂苷(2.5mg/kg)小劑量組、丹參素鈉(6mg/kg)+三七總皂苷(1.5mg/kg)小劑量組、丹參素鈉(1.5mg/kg)+三七總皂苷(6mg/kg)小劑量組、丹參素鈉(5mg/kg)+三七總皂苷(10mg/kg)劑量組、丹參素鈉(3mg/kg)+三七總皂苷(12mg/kg)劑量組、丹參素鈉(33mg/kg)+三七總皂苷(67mg/kg)劑量組、丹參素鈉(100mg/kg)+三七總皂苷(200mg/kg)劑量組、丹參素鈉(15mg/kg)+三七總皂苷(30mg/kg)口服劑量組。每組10只。每組10只。禁食12小時(shí)后，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，分離右側(cè)頸總動脈，夾閉頸內(nèi)、頸總動脈，頸外動脈近心端及遠(yuǎn)心端結(jié)扎，中間剪斷。將頸外動脈游離端拉至與頸內(nèi)動脈成一條直線，將栓線(選用直徑0.24mm尼龍線，長度5.0cm)由頸外動脈插入至顱內(nèi)，遇輕微阻力時(shí)停止，插入深度約為2cm。結(jié)扎頸外動脈開口，并打開頸總動脈動脈夾，消毒縫合傷口，造成右側(cè)大腦中動脈缺血模型；假手術(shù)組僅進(jìn)行右側(cè)頸總動脈、頸內(nèi)動脈、頸外動脈的分離(以上實(shí)驗(yàn)均在23℃～25℃進(jìn)行)。丹參素鈉(15mg/kg)+三七總皂苷(30mg/kg)口服劑量組連續(xù)給藥3天，于第2天給藥后禁食16小時(shí)后，第3天給藥30分鐘后手術(shù)，其余各組術(shù)后靜脈注射相應(yīng)藥物。24小時(shí)后按文獻(xiàn)劉小光，徐理納，一種能評價(jià)溶栓和抗溶栓的大鼠腦中動脈模型，藥學(xué)學(xué)報(bào)，1995，30662所述方法及標(biāo)準(zhǔn)觀察并記錄大鼠的行為障礙(A)提鼠尾觀察前肢屈曲情況，如雙前肢對稱伸向地面，計(jì)為0分，如手術(shù)對側(cè)前肢出現(xiàn)腕屈曲計(jì)為1分，肘屈曲計(jì)為2分，肩內(nèi)旋計(jì)為3分，既有腕屈曲和/或肘屈曲，又有肩內(nèi)旋者，計(jì)為4分。(B)將動物置于平地面上，分別推雙肩向?qū)?cè)移動，檢查阻力。如雙側(cè)阻力對等且有力，計(jì)為0分，如向手術(shù)對側(cè)推動時(shí)阻力下降者，根據(jù)下降程度不同分為輕、中、重三度，分別計(jì)為1，2和3分。(C)將動物雙前肢置一金屬網(wǎng)上，觀察雙前肢的肌張力。雙前肢肌張力對等且有力者計(jì)為0分。同樣根據(jù)手術(shù)對側(cè)肌張力下降程度不同計(jì)為1，2和3分。(D)動物有不停地向一側(cè)轉(zhuǎn)圈者，計(jì)為1分。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)評分，滿分為11分，分?jǐn)?shù)越高，表示動物行為障礙越嚴(yán)重。
行為評分后處死大鼠，取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，冠狀切成5片，腦片用紅四氮唑(TTC)染色，正常組織經(jīng)染色后呈紅色，梗塞組織呈白色，染色后照相，用中國航空航天大學(xué)病理圖像分析軟件求梗塞面積比。數(shù)據(jù)用X±s表示，以組間t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
結(jié)果如表2所示，缺血24小時(shí)后，模型組大鼠表現(xiàn)出明顯的行為障礙，大鼠腦組織也出現(xiàn)明顯的灶狀缺血區(qū)，達(dá)到全腦24％左右。2.5mg/kg丹參素鈉與5mg/kg三七總皂苷組未能改善大鼠行為障礙、減少缺血面積；7.5mg/kg丹參素鈉與15mg/kg三七總皂苷組、丹參素鈉(15mg/kg)+三七總皂苷(30mg/kg)口服劑量組均在一定程度上改善大鼠行為障礙、減少缺血面積；組合物劑量組丹參素鈉(2.5mg/kg)+三七總皂苷(5mg/kg)、組合物劑量組丹參素鈉(5mg/kg)+三七總皂苷(2.5mg/kg)、組合物劑量組丹參素鈉(1.5mg/kg)+三七總皂苷(6mg/kg)、組合物劑量組丹參素鈉(6mg/kg)+三七總皂苷(1.5mg/kg)顯著改善大鼠行為障礙、減少缺血面積(與模型組比較，p＜0.01)，組合物劑量組丹參素鈉(2.5mg/kg)+三七總皂苷(5mg/kg)、組合物劑量組丹參素鈉(5mg/kg)+三七總皂苷(2.5mg/kg)、組合物劑量組丹參素鈉(1.5mg/kg)+三七總皂苷(6mg/kg)、組合物劑量組丹參素鈉(6mg/kg)+三七總皂苷(1.5mg/kg)對改善大鼠行為障礙、減少缺血面積與7.5mg/kg丹參素鈉組比較，亦有顯著性差異(p＜0.05)；組合物劑量組丹參素鈉(5mg/kg)+三七總皂苷(10mg/kg)、組合物劑量組丹參素鈉(3mg/kg)+三七總皂苷(12mg/kg)顯著改善大鼠行為障礙、減少缺血面積(與模型組比較，p＜0.01)，對改善大鼠行為障礙、減少缺血面積與15mg/kg三七總皂苷比較，亦有顯著性差異(p＜0.05)；組合物劑量丹參素鈉(33mg/kg)+三七總皂苷(67mg/kg)、組合物劑量8丹參素鈉(100mg/kg)+三七總皂苷(200mg/kg)極其顯著地改善大鼠行為障礙、減少缺血面積(與模型組比較p＜0.001)。
表2丹參素鈉、三七總皂苷及其組合物對大鼠腦缺血損傷的影響

與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
與丹參素鈉中劑量組比較，#P＜0.05；與三七總皂苷中劑量組比較，MP＜0.0權(quán)利要求
1.一種由丹參素鈉和三七總皂苷提取物組成的藥物組合物，其中三七總皂苷提取物中含有100％＞三七總皂苷(包括人參皂苷Rg1、Re、Rb1與三七皂苷R1)≥50％，丹參素鈉與三七總皂苷的重量比為1∶0.25～4。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，三七總皂苷提取物中優(yōu)選含有100％＞三七總皂苷(包括人參皂苷Rg1、Re、Rb1與三七皂苷R1)≥80％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其中丹參素鈉的制備方法優(yōu)選為取丹參粉碎成粗粉，用氫氧化鈉溶液浸泡加熱提取二次，過濾后合并濾液，濃縮后用10％鹽酸酸沉，離心并分離沉淀，沉淀用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值為中性使其溶解，按比吸附量2∶1通過弱堿性大孔吸附樹脂吸附柱進(jìn)行吸附，用50％乙醇洗脫4-6個(gè)柱體積去雜后，用0.4％的氫氧化鈉洗脫2-4個(gè)柱體積，收集洗脫液，用10％鹽酸調(diào)節(jié)PH為中性，濃縮，放冷、靜置、即得丹參素鈉結(jié)晶，再過濾、洗滌、干燥，得丹參素鈉晶體，用水重結(jié)晶，即得淡黃色至類白色的針狀晶體。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其中三七總皂苷提取物的制備方法優(yōu)選為將三七粉碎，分別用乙醇水溶液浸漬、滲漉，合并浸漬液和滲漉液，減壓濃縮，加適量水稀釋，上大孔樹脂柱，先用水洗脫，然后用不同濃度的乙醇溶液洗脫，收集高濃度洗脫液，減壓濃縮至無醇味，70％乙醇溶解后過濾，濾液脫色，精制后，濃縮至比重為1.15后噴霧干燥即得。
5.含有權(quán)利要求1-4任一所述的組合物的藥物，其活性成分的含量范圍是5～500mg。
6.權(quán)利要求要求1-4任一所述的組合物在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征是在制備治療或預(yù)防心肌缺血的藥物中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征是在制備治療或預(yù)防腦損傷的藥物中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求6-8任一所述的應(yīng)用，其使用劑量的范圍是75-3000mg。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種由丹參素鈉和三七總皂苷提取物組成的藥物組合物，其中三七總皂苷提取物中含有100％≥三七總皂苷≥50％，優(yōu)選為100％≥三七總皂苷≥80％。本發(fā)明還提供了該藥物組合物在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病中的藥物中應(yīng)用。
文檔編號A61K36/53GK1732964SQ200510080830
公開日2006年2月15日 申請日期2005年7月1日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月3日
發(fā)明者宋吉侖, 蔣王林, 張?zhí)? 張淑敏, 馬福祿, 劉廣 申請人:山東綠葉天然藥物研究開發(fā)有限公司