專(zhuān)利名稱(chēng)：一種人參總次苷藥物組合物及其制法和在制備治療心肌缺血及失血性休克藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含有人參有效部位的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用，特別是涉及一種人參總次苷藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
人參是中醫(yī)補(bǔ)氣之要藥。性味與歸經(jīng)甘、微苦，平。功能與主治大補(bǔ)元?dú)?，?fù)脈固脫，補(bǔ)脾益肺，生津，安神。用于體虛欲脫，肢冷脈微，脾虛食少，肺虛喘咳，津傷口渴，內(nèi)熱消渴，久病虛贏，驚悸失眠，陽(yáng)痿宮冷；心力衰竭，心原性休克。
中醫(yī)和中西醫(yī)結(jié)合臨床已證實(shí)，人參及其制劑有增強(qiáng)心肌收縮力、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠脈血流量、減少心肌耗氧量、保護(hù)心肌再灌注損傷、抑制血小板聚集、抗凝血酶等藥理活性，臨床應(yīng)用于胸痹心痛(冠心病)、動(dòng)脈硬化等疾病的治療。
胸痹心痛的病因主要是“胸中陽(yáng)微不運(yùn)，久則陰乘陽(yáng)位而為痹結(jié)”(《類(lèi)證治裁●胸痹篇》)，“或因身受寒邪，口食冷物，內(nèi)有郁熱，素有頑痰死血，或因惱怒氣滯而成胸痛”(《古今醫(yī)鑒●心痛門(mén)》)。
人到中年之后，體質(zhì)下降，五臟漸衰，臟腑功能失調(diào)，素體陽(yáng)氣不足，復(fù)受寒暑等邪氣侵襲，或飲食不節(jié)，嗜食肥甘，或思慮勞倦，或情志失調(diào)而致胸痹心痛。其病位在心，涉及肺、脾、肝、腎諸臟。病理變化為臟腑氣血陰陽(yáng)失調(diào)，心血不足，心陽(yáng)不振，導(dǎo)致氣滯、寒凝、痰濁、瘀血等阻滯心脈，致心脈痹阻，氣滯血瘀而發(fā)病。病機(jī)為本虛標(biāo)實(shí)，本虛即心氣、心血、心陰虧虛或心腎陽(yáng)虛；標(biāo)實(shí)即氣滯、寒凝、痰濁、瘀血阻痹心脈等，發(fā)病過(guò)程中本虛與標(biāo)實(shí)往往互為因果而使病情加重，呈現(xiàn)虛實(shí)夾雜、標(biāo)本同現(xiàn)的復(fù)雜證候。治則以調(diào)和陰陽(yáng)、溫補(bǔ)陽(yáng)氣、疏通氣血為大法。氣為血之帥，氣行血?jiǎng)t行。補(bǔ)氣振陽(yáng)，活血化瘀是治療胸痹心痛的重要法則。
現(xiàn)代科研結(jié)果表明人參的主要生物活性成分是人參皂苷。紅參和生曬人參雖然都含有皂苷，但其皂苷單體有所不同，紅參中含有生曬參中沒(méi)有的皂苷——人參皂苷Rg2、Rg3、Rh1、Rh2等。這些新的皂苷是在人參加工過(guò)程中，經(jīng)過(guò)蒸制、干燥時(shí)，人參皂苷水解產(chǎn)生的次生皂苷。
這些次生皂苷具有許多新的活性，例如人參皂苷Rh1、Rh2、Rg3有明顯的抗癌活性，對(duì)癌細(xì)胞有誘導(dǎo)再分化作用，可誘導(dǎo)癌細(xì)胞重新分化為健康細(xì)胞，其它皂苷單體卻沒(méi)有這種作用，或者作用強(qiáng)度較弱。人參皂苷Rg3對(duì)膠原或ADP誘導(dǎo)的血小板聚集有較強(qiáng)的抑制作用。人參皂苷Rh1對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白有明顯的抑制作用。
另外，近年運(yùn)用血清藥理學(xué)理念研究人參皂苷的體內(nèi)代謝的結(jié)果表明，原人參皂苷在人體內(nèi)吸收率很低(人參皂苷Rb1口服僅吸收1％)，真正被人體吸收的活性成份是經(jīng)腸菌代謝產(chǎn)生的次生皂苷。王本祥教授在研究人參皂苷體內(nèi)代謝過(guò)程時(shí)發(fā)現(xiàn)，口服人參皂苷Rg1后，吸收入血的生物活性成份主要是經(jīng)腸菌代謝產(chǎn)生的次生皂苷Rh1。
嚴(yán)永清教授在研究生脈飲的活性成份過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)生脈飲復(fù)方共同煎煮的比單味藥分煎的療效好，復(fù)方共同煎煮后，湯液中的人參皂苷主要是人參次生皂苷Rg2、Rg3、Rh1，原人參皂苷已消失。這一研究結(jié)果表明復(fù)方生脈飲的主要生物活性成份是人參皂苷Rg2、Rg3、Rh1。
但是，這些皂苷天然含量極低，例如Rg3在白參中的含量?jī)H為0.0003％，在紅參中的含量約為0.03％，而Rh2和C-K在天然人參中并不存在，僅在紅參中含有Rh2約0.001％。而C-K為人參皂苷的腸道菌代謝產(chǎn)物。這些人參次生皂苷化合物由于獲取困難，要進(jìn)行藥物開(kāi)發(fā)必需的公斤級(jí)量幾乎是不可能的。因此，采用新的方法制備上述化合物具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是克服原人參皂苷在人體內(nèi)吸收利用率很低、生物活性較弱的缺點(diǎn)，提供一種人參總次苷藥物組合物。人參次生皂苷是人參中活性較強(qiáng)的有效成分，天然人參中活性成分人參次生皂苷的含量極低。
本發(fā)明之一是人參總次苷藥物組合物，是通過(guò)如下途徑實(shí)現(xiàn)的。
本發(fā)明是一種人參總次苷藥物組合物，其特征在于所述的人參總次苷藥物組合物包含組分①以人參原二醇為苷元的人參皂苷包括人參皂苷Rg3，人參皂苷Rh2；和②以人參原三醇為苷元的人參皂苷包括人參皂苷Rg2，人參皂苷Rh1，人參皂苷Rh3，人參皂苷Rf，三七皂苷R2；
按重量百分比計(jì)，以人參原二醇、人參原三醇為苷元的人參皂苷的和在20％以上。
其中人參皂苷Rg3包括人參皂苷20-(S)-Rg3和/或人參皂苷20-(R)-Rg3；人參皂苷Rg2包括人參皂苷20-(S)-Rg2和/或人參皂苷20-(R)-Rg2；人參皂苷Rh1包括人參皂苷Rh120-(S)-Rh1和/或人參皂苷20-(R)-Rh1；按重量百分比計(jì)Rg3為10-30％，優(yōu)選12-20％；Rg2為1-20％，優(yōu)選4-16％；Rh1為1-10％，優(yōu)選3-5％。
按重量百分比計(jì)，以人參原二醇、人參原三醇為苷元的人參皂苷的和在50％以上。
所述的用于提取人參總次苷藥物組合物的植物為五加科人參屬植物；他們?yōu)楦鞣N人參、西洋參、三七、竹節(jié)參，其中優(yōu)選的的植物為人參須。
所述的人參總次苷藥物組合物的提取制備方法包括水解步驟；所述的水解步驟用無(wú)機(jī)酸或者有機(jī)酸作為水解催化劑，優(yōu)選醋酸作為水解催化劑。
在具體實(shí)施中，所述的藥物組合物可以含有治療有效量的人參總次苷提取物、三七總次苷提取物、添加劑、賦形劑及醫(yī)學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的人參總次苷藥物組合物是人參提取物經(jīng)弱酸水解，提取制備的總次生皂苷。其主要成分生源關(guān)系為人參皂苷Rb類(lèi)(原生苷)水解產(chǎn)生的人參皂苷Rg3(次生苷)，人參皂苷Re類(lèi)(原生苷)水解產(chǎn)生的人參皂苷Rg2(次生苷)，以及人參皂苷Rg1類(lèi)(原生苷)水解產(chǎn)生的人參皂苷Rh1(次生苷)。經(jīng)過(guò)系統(tǒng)的探索，我們已經(jīng)篩選出良好的高壓液相梯度洗脫條件，本發(fā)明的20-(S)-Rg3，20-(R)-Rg3，20-(S)-Rg2，20-(R)-Rg2，20-(S)-Rh1，20-(R)-Rh1能達(dá)到良好的分離效果。
本發(fā)明的目的之二是提供一種人參總次苷藥物組合物的制備方法。
本發(fā)明之二的人參總次苷藥物組合物的制備方法是這樣實(shí)現(xiàn)的。
本發(fā)明的人參總次苷藥物組合物的制備方法，包括如下步驟(1)人參總皂苷提取液制備將人參屬植物，用水或者有機(jī)溶劑提取，再將提取液濃縮；(2)水解液制備用無(wú)機(jī)酸或者有機(jī)酸為催化劑水解上述的濃縮提取液，(3)樹(shù)脂吸附水解液通過(guò)大孔樹(shù)脂吸進(jìn)行附柱，
(4)脫除雜質(zhì)吸收了水解液的吸附柱再經(jīng)過(guò)水洗脫、堿水洗脫、濃度在35％以下的乙醇洗脫除去雜質(zhì)；(5)洗脫、濃縮、干燥脫除雜質(zhì)后用濃度在35％以上的乙醇洗脫吸附柱，收集35％以上的乙醇洗脫液，濃縮成流浸膏，真空干燥，得人參總次苷藥物組合物。
所述的步驟(2)中的催化劑選自冰醋酸、丙酸、鹽酸、硫酸。所述水解反應(yīng)在80-100℃條件下進(jìn)行，所述的水解時(shí)間為3-8小時(shí)；優(yōu)選冰醋酸水解反應(yīng)在99℃條件下進(jìn)行，水解時(shí)間為5小時(shí)。
所述的步驟③中的大孔樹(shù)脂為苯乙烯類(lèi)大孔樹(shù)脂，包括苯乙烯類(lèi)大孔樹(shù)脂、乙基苯乙烯類(lèi)大孔樹(shù)脂、甲基苯乙烯類(lèi)大孔樹(shù)脂。
所述的步驟④中的堿水是由選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀所配成的水溶液，濃度為0.1％-5.0％。優(yōu)選氫氧化鈉為0.3-0.7％，氫氧化鉀0.4-0.8％，碳酸鈉或碳酸鉀0.6-1.5％。洗脫除去雜質(zhì)用的乙醇濃度在35％以下，優(yōu)選15-25％。
在所述步驟⑤中，洗脫吸附柱的乙醇濃度在35％以上，優(yōu)選60-80％。
本發(fā)明的目的之三是提供一種人參總次苷藥物組合物在制備下列藥物中的應(yīng)用在制備治療心陽(yáng)不振，心氣虛弱，氣滯血瘀導(dǎo)致的胸痹心痛的藥物中的應(yīng)用；在制備治療心肌缺血的藥物中的應(yīng)用；在制備治療失血性休克的藥物中的應(yīng)用。
在制備治療心力衰竭的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明之三的人參總次苷藥物組合物的適應(yīng)癥是這樣實(shí)現(xiàn)的。
本藥品是根據(jù)人參的功能主治，結(jié)合現(xiàn)代中醫(yī)臨床應(yīng)用人參治療冠心病的實(shí)際療效，參考國(guó)內(nèi)外有關(guān)人參藥理學(xué)研究的最新進(jìn)展，提取制備人參的有效部位一人參總次生皂苷，研制的主治心陽(yáng)不振，心氣虛弱，氣滯血瘀導(dǎo)致的胸痹心痛的新藥。
我們采用現(xiàn)代制藥工程技術(shù)手段，由人參中提取制備以人參皂苷Rg2、Rg3、Rh1為主要成份的人參總次苷有效部位。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究表明，1.人參總次苷具有顯著改善犬急性心肌缺血的作用，明顯減輕由心外膜電圖標(biāo)測(cè)的心肌缺血程度(∑-ST)；2.減小經(jīng)N-BT染色所顯示的梗塞區(qū)面積；可明顯增加心肌缺血時(shí)的冠脈血流量，促進(jìn)側(cè)支循環(huán)開(kāi)放和建立，增加心肌的供氧；3.可明顯升高心肌缺血時(shí)血漿6-酮-前列腺素F1a(6-Keto-PGF1a)的水平和6-Keto-PGF1a/TXB2的比值；4.可顯著抑制垂體后葉素引起的大鼠心肌缺血；5.能夠顯著性防治大鼠冠脈結(jié)扎引起的心肌缺血，其作用顯著優(yōu)于人參總皂苷(P＜0.01)；6.有非常顯著的抗心原性休克作用，對(duì)缺血所致麻醉犬休克模型，在劑量相同的情況下，人參總產(chǎn)量次苷在給藥后約20min開(kāi)始發(fā)揮作用，而人參總皂苷在給藥后約40min開(kāi)始發(fā)揮作用，作用效果較弱；一般情況下，人參總次苷在20、30、40min時(shí)間點(diǎn)，與人參總皂苷相比，作用效果有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)，在作用速度和作用效果方面優(yōu)于人參總皂苷；7.對(duì)BaCl2引起大鼠心律失常的動(dòng)物模型，人參總次苷200mg/kg能顯著延緩VP、VT出現(xiàn)的時(shí)間(P＜0.05、P＜0.05)，顯著縮短心律失常持續(xù)時(shí)間(P＜0.05)，100、50mg/kg可顯著縮短心律失常持續(xù)時(shí)間(P＜0.05、P＜0.05)；8.人參總次苷200mg/kg預(yù)先給藥7d，對(duì)試驗(yàn)大鼠頸動(dòng)靜脈旁路血栓的形成有抑制作用；9.人參總次苷對(duì)ADP誘發(fā)的血小板聚集有抑制作用，尤其是高劑量組，對(duì)體外的血小板聚集有顯著的抑制作用；10.對(duì)離體大鼠心臟缺血再灌注，可以提高冠脈流量，在一定時(shí)間內(nèi)提高心跳力量，并對(duì)缺血心肌有一定的保護(hù)能力?；谝陨蟼鹘y(tǒng)的中醫(yī)理論和中醫(yī)臨床經(jīng)驗(yàn)及藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)科研成果，研制了以人參總次苷為主要成份的主治心陽(yáng)不振，心氣虛弱，氣滯血瘀導(dǎo)致的胸痹心痛的新藥。為了方便患者服用研制成口服片劑。
藥效試驗(yàn)研究的主要結(jié)果1、人參總次苷對(duì)犬對(duì)犬心肌缺血的影響(1)、人參總次苷對(duì)實(shí)驗(yàn)性犬急性心肌梗塞的作用 實(shí)驗(yàn)采用結(jié)扎犬冠狀動(dòng)脈前降支(LAD)造成急性心肌梗塞模型。用心外膜電圖(EECG)標(biāo)測(cè)心肌缺血程度(∑-ST)和心肌缺血范圍(N-ST)；以定量組織學(xué)法(N-BT染色法)測(cè)定心肌梗塞范圍(MIS)；實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，人參總次苷具有顯著改善犬急性心肌缺血的作用，明顯減輕由心外膜電圖標(biāo)測(cè)的心肌缺血程度(∑-ST)；減小經(jīng)N-BT染色所顯示的梗塞區(qū)。陽(yáng)性對(duì)照藥地奧心血康、人參根皂苷和人參莖葉皂苷也顯示相同的減小心肌梗塞面積的作用。
(2)、人參總次苷對(duì)大鼠心肌缺血的作用 采用垂體后葉素引起的大鼠心肌缺血，觀察藥物對(duì)標(biāo)準(zhǔn)心電圖II中ST段的變化和T波升高的影響。結(jié)果顯示與空白對(duì)照組比較，人參次苷100-200mg/kg可顯著對(duì)抗ST的變化、T波的升高(P＜0.05或P＜0.01)，其效應(yīng)與劑量相關(guān)，表明人參次苷可顯著抑制垂體后葉素引起的大鼠心肌缺血；在同等實(shí)驗(yàn)條件下，人參總皂苷100mg/kg只表現(xiàn)使T波抬高程度減輕，合心爽50mg/kg可顯著性抑制ST波、T波的變化(P＜0.05或P＜0.01)。
(3)、人參總次苷對(duì)冠脈結(jié)扎引起大鼠心肌缺血的影響 對(duì)大鼠冠脈結(jié)扎模型，預(yù)先連續(xù)給藥7d，施行冠脈結(jié)扎手術(shù)，在各觀察時(shí)間點(diǎn)記錄心電ECGII、心率、收縮壓、舒張壓等生理指標(biāo)。結(jié)果顯示，人參總次苷100-200mg/kg均能非常顯著抑制J點(diǎn)的變化(P＜0.01)，且有明顯的量效關(guān)系，對(duì)缺血心臟心率和血壓未見(jiàn)有顯著性影響(P＞0.05)，表明能夠顯著性防治冠脈結(jié)扎引起的心肌缺血，其作用顯著優(yōu)于人參總皂苷(P＜0.01)。在同等實(shí)驗(yàn)條件下，合心爽50mg/kg也能夠顯著性防治冠脈結(jié)扎引起的心肌缺血作用，所選人參總皂苷100mg/kg劑量、地奧心血康100mg/kg劑量在本模型上作用不十分顯著。
2、人參總次苷對(duì)動(dòng)物血流動(dòng)力學(xué)的影響采用麻醉開(kāi)胸犬觀察給藥后血流動(dòng)力學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)的變化。結(jié)果表明，結(jié)扎麻醉犬冠狀動(dòng)脈形成心肌缺血后，冠脈血流量有短時(shí)間代償性增加，增加幅度10％左右。人參總次苷藥后可見(jiàn)明顯增加冠脈流量，可明顯增加心肌缺血時(shí)的冠脈血流量，促進(jìn)側(cè)支循環(huán)開(kāi)放和建立，增加心肌的供氧。三個(gè)劑量組藥后15~180min冠脈血流量均有明顯升高，60min~120min增加冠脈血流量的作用最為顯著，與藥前及生理鹽水組比較，均有明顯差異(P＜0.01和P＜0.0.001)。陽(yáng)性對(duì)照藥合心爽藥后有顯著增加缺血心臟冠脈血流量的作用；地奧心血康對(duì)缺血心臟冠脈流量也有增加作用，增加幅度約為10％；人參根皂苷和人參莖葉皂苷也同時(shí)增加冠脈流量。
3、人參次苷對(duì)犬心原性休克的影響采用麻醉犬失血性休克模型，在給藥后各時(shí)間點(diǎn)，觀察動(dòng)脈收縮壓(SBP)，左心室收縮壓(LVSP)、心率等生理指標(biāo)。選用參脈注射液作對(duì)照藥，并與人參總皂苷比較。結(jié)果表明，人參總次苷100-200mg/kg使失血性休克引起的動(dòng)脈收縮壓和舒張壓下降顯著升高(P＜0.05)、左心室收縮壓顯著升高(P＜0.05、P＜0.01)，對(duì)于左心室的作用較為明顯，低劑量50mg/kg也表現(xiàn)出顯著作用，并且明顯優(yōu)于人參總皂苷200mg/kg。表明人參總次苷有非常顯著的抗心原性休克作用。對(duì)缺血所致麻醉犬休克模型，在劑量相同的情況下，人參總次苷在給藥后約20min開(kāi)始發(fā)揮作用，而人參總皂苷在給藥后約40min開(kāi)始發(fā)揮作用，作用效果較弱；一般情況下，人參總次苷在20、30、40min時(shí)間點(diǎn)，與人參總皂苷相比，作用效果有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)，其后時(shí)間點(diǎn)，作用效果無(wú)顯著性差異，這也說(shuō)明，人參總次苷在作用速度和作用效果優(yōu)于人參總皂苷。
4、人參總次苷對(duì)BaCl2引起大鼠心律失常的影響采用大鼠舌下靜脈注射BaCl2引起心律失常。預(yù)先連續(xù)給藥7d，施行造模，在各觀察時(shí)間點(diǎn)記錄心電ECG II、心率等生理指標(biāo)，觀察和計(jì)算室性早搏(VP)出現(xiàn)的時(shí)間、室性心動(dòng)過(guò)速(VT)出現(xiàn)的時(shí)間及室顫(VF)發(fā)生率、心律失常持續(xù)時(shí)間。結(jié)果顯示，人參總次苷200mg/kg能顯著延緩VP、VT出現(xiàn)的時(shí)間(P＜0.05、P＜0.05)，顯著縮短心律失常持續(xù)時(shí)間(P＜0.05)，100、50mg/kg可顯著縮短律失常持續(xù)時(shí)間(P＜0.05、P＜0.05)；陽(yáng)性對(duì)照藥合心爽不僅顯著延緩VP、VT出現(xiàn)時(shí)間(P＜0.01、P＜0.01)，縮短心律失常持續(xù)時(shí)間(P＜0.01)，還有效抑制了VF發(fā)生率(P＜0.05)；所選人參總皂苷100mg/kg劑量、地奧心血康100mg/kg劑量在本模型上作用不顯著。
5、人參總次苷對(duì)體內(nèi)血栓形成的影響人參總次苷200mg/kg預(yù)先給藥7d對(duì)試驗(yàn)大鼠頸動(dòng)靜脈旁路血栓的形成有抑制作用，可見(jiàn)陽(yáng)性藥和受試物各組血栓重量都低于對(duì)照組，陽(yáng)性藥地爾硫卓和對(duì)照組比較有顯著差異(P＜0.05)，受試物高劑量照組比較有顯著差異(P＜0.05)，隨著藥物劑量的增加，其血栓形成抑制率也增高。
6、人參總次苷對(duì)血小板集聚的影響人參總次生皂苷對(duì)ADP誘發(fā)的血小板聚集有抑制作用，尤其是人參總次皂苷高劑量組，對(duì)體外的血小板聚集有顯著的抑制作用，抑制率甚至高于阿斯匹林陽(yáng)性對(duì)照組。說(shuō)明人參總次皂苷能興奮血小板膜上的腺苷酸環(huán)化酶，并抑制磷酸二酯酶的活性，使血小板內(nèi)的cAMP水平顯著提高，從而能夠很好的抑制血小板的聚集。
以人參總皂苷作對(duì)照比較，在人參總次苷的劑量與人參總皂苷的劑量相同或低于它的時(shí)候，人參總次苷對(duì)血小板聚集的抑制作用要明顯強(qiáng)于人參總皂苷的作用效果，說(shuō)明人參總次苷即使是在較小劑量的情況下，對(duì)血小板的聚集也有抑制作用。
毒性評(píng)價(jià)人參總次苷小鼠灌胃給藥最大給藥量為8g/kg。
人參總次苷給小鼠腹腔注射，經(jīng)Bliss法計(jì)算LD50及95％平均可信限范圍為0.246±0.023g/kg。
本發(fā)明的人參總次苷藥物組合物，如人參總次苷口腔崩解片的服用方法口腔含服，一次1～2片。一日3次；注意事項(xiàng)1.在醫(yī)生指導(dǎo)下，按用法用量服用。
2.不宜與藜蘆同服。
3.感冒發(fā)燒時(shí)不宜服用。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎心肌缺血的影響實(shí)驗(yàn)犬共分八組，每組6只空白對(duì)照組，生理鹽水3ml/kg、合心爽組，5mg/kg、地奧心血康組，200mg/kg、人參根總皂苷組(簡(jiǎn)稱(chēng)根總皂苷)，200mg/kg、人參莖葉總皂苷(簡(jiǎn)稱(chēng)莖葉總皂苷)200mg/kg劑量組、人參總次苷25mg/kg劑量組、人參總次苷50mg/kg劑量組、人參總次苷100mg/kg劑量組。實(shí)驗(yàn)藥物用蒸餾水配制成同體積(3ml/kg)，經(jīng)十二指腸給入。
動(dòng)物經(jīng)戊巴比妥鈉(30mg/kg)麻醉，手書(shū)，做心包床；分離冠狀動(dòng)脈左旋支，放置電磁流量計(jì)(MF-1100型，日本光電)探頭，測(cè)定心臟冠脈血流量(CCBF)；分離冠狀動(dòng)脈前降支中段，穿線以備結(jié)扎，造成急性實(shí)驗(yàn)性心肌缺血模型；縫置多點(diǎn)固定式心外膜電極，連接多道生理記錄儀(RM-6100型，日本光電)，描記心外膜電圖。結(jié)扎冠脈15min，進(jìn)行記錄，作為給藥前對(duì)照值，經(jīng)十二指腸給予實(shí)驗(yàn)藥物或生理鹽水，于藥后15、30、45、60、90、120、180min記錄30個(gè)標(biāo)測(cè)點(diǎn)心外膜電圖，以S-T段升高大于2mv為判斷標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算心肌缺血程度(S-T段升高總mv數(shù)∑-ST)及心肌缺血范圍(S-T段升高總點(diǎn)數(shù)N-ST)。藥后180min記錄完畢，立即取下心臟，心臟結(jié)扎線以下，平行冠狀溝均勻地將心室部分橫切5片，置于N-BT染液中，常溫染色15min。以多媒體彩色病理圖象分析系統(tǒng)(MPIAS-500型，北京)測(cè)量每片心肌雙側(cè)的梗塞區(qū)(N-BT非染色區(qū))與非梗塞區(qū)(N-BT染色區(qū))，計(jì)算每片心肌的面積，心室總面積和梗塞區(qū)總面積。計(jì)算梗塞區(qū)占心室及占全心臟的百分比。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以t檢驗(yàn)判斷其顯著性。
1犬心肌缺血程度(∑-ST)的影響結(jié)果見(jiàn)表1，生理鹽水對(duì)照組心肌缺血程度(∑-ST)無(wú)明顯變化；根總皂苷和莖葉總皂苷200mg/kg劑量也可顯著抑制心肌缺血，降低∑-ST；人參總次苷三個(gè)劑量組均可降低心肌缺血程度，90~180min時(shí)作用較為明顯，人參總次苷在50-100mg/kg劑量時(shí)使∑-ST下降幅度與根總皂苷和莖葉總皂苷接近或略高，均在50％以上。鈣拮抗劑合心爽藥后可迅速降低心肌缺血程度，而且可持續(xù)至藥后180min；地奧心血康也可降低心肌缺血程度，180min時(shí)作用最明顯；與藥前及與對(duì)照組比較均差異顯著(P＜0.01)。
以上結(jié)果表明，人參總次苷作用要強(qiáng)于人參根總皂苷和人參莖葉總皂苷。
2對(duì)犬心肌缺血范圍(N-ST)的影響結(jié)果見(jiàn)表2，對(duì)照組給入生理鹽水后，心肌缺血范圍(N-ST)無(wú)明顯改變。合心爽藥后可減小心肌缺血范圍(N-ST)，藥后90-180min作用明顯，與藥前及與對(duì)照組比較均差異顯著(P＜0.05)；地奧心血康對(duì)心肌缺血范圍(N-ST)也有一定降低作用；人參各部分總皂苷未見(jiàn)明顯改變。人參總次苷100mg/kg劑量藥后90-180min作用明顯，與藥前及與對(duì)照組比較均差異顯著(P＜0.05)。
以上結(jié)果表明，人參總次苷對(duì)實(shí)驗(yàn)性急性犬心肌缺血有明顯的改善作用，可顯著減輕心肌缺血程度(∑-ST)，作用優(yōu)于人參各部分總皂苷。
3對(duì)犬急性心肌梗塞范圍(N-BT染色法測(cè)定)的影響結(jié)果見(jiàn)表3，以定量組織學(xué)N-BT染色法顯示心肌梗塞范圍，生理鹽水對(duì)照組動(dòng)物心肌梗塞區(qū)分別占心臟及心室的7.41±1.67％和16.75±3.40％；合心爽組梗塞區(qū)占心臟及占心室的百分比有顯著縮小。地奧心血康組心肌梗塞區(qū)面積分別占心臟及心室的3.43±1.39％、8.01±3.04％，分別較生理鹽水對(duì)照組降低53.74％和52.17％；人參總次苷三個(gè)劑量組可減少動(dòng)物心肌梗塞區(qū)面積，心肌梗塞區(qū)面積分別占心臟及心室的3.20±1.85％、7.85±4.74％，分別降低了56.81％、53.13％，與生理鹽水對(duì)照組比較均有非常顯著性差異(均P＜0.001)。人參根、莖葉總皂苷也可顯著減小心肌梗塞面積，作用略低于人參總次苷，但無(wú)顯著性差異。
結(jié)果表明，人參總次苷在低于人參根、莖葉總皂苷的劑量下，能達(dá)到或略超過(guò)二者的作用效果。
4對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌缺血犬冠脈血流量的影響結(jié)果見(jiàn)表4，結(jié)扎麻醉犬冠狀動(dòng)脈形成心肌缺血后，冠脈血流量有短時(shí)間代償性增加，增加幅度10％左右。合心爽藥后有顯著增加缺血心臟冠脈血流量的作用；地奧心血康對(duì)缺血心臟冠脈流量也有增加作用，增加幅度約為10％；根總皂苷和莖葉總皂苷也同時(shí)增加冠脈流量，人參總次苷藥后可見(jiàn)明顯增加冠脈流量，三個(gè)劑量組藥后15~180min冠脈血流量均有明顯升高，60min~120min增加冠脈血流量的作用最為顯著，與藥前及生理鹽水組比較，均有明顯差異(P＜0.01和P＜0.0.001)，藥物作用強(qiáng)度與根總皂苷和莖葉總皂苷相當(dāng)。
結(jié)果表明，人參總次苷在低于人參根、莖葉總皂苷的劑量下，能達(dá)到二者相同的的作用效果。
表1 各給藥組對(duì)犬急性心肌缺血程度(∑-ST)的影響(心外膜電圖標(biāo)測(cè))(X±SD)

注與藥前自身比較# P＜0.05 ## P＜0.01；與對(duì)照組比較* P＜0.05，** P＜0.01
表2.各給藥組對(duì)犬急性心肌缺血程度(N-ST)的影響(心外膜電圖標(biāo)測(cè))(X±SD)

注與藥前自身比較# P＜0.05 ## P＜0.01 ### P＜0.001；與對(duì)照組比較* P＜0.05，** P＜0.01
表3 各給藥組對(duì)犬急性心肌梗塞范圍的影響(X±SD)

注與對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
表4 各給藥組對(duì)犬冠脈血流量(ml/100g.min-1)的影響(X±SD)

注與藥前自身比較# P＜0.05 ## P＜0.01 ### P＜0.001；與對(duì)照組比較* P＜0.05，** P＜0.01
實(shí)施例四對(duì)戊巴比妥鈉所致大鼠心力衰竭模型的影響健康SD大鼠，體重250～350g，雄性50只。隨機(jī)分為5組對(duì)照組(給等體積溶媒對(duì)照)、根總皂苷組(200mg/Kg)、人參總次苷高、中、低劑量組(200、100、50mg/Kg)。灌胃給藥，連續(xù)7d，每組10只，給藥體積5ml/kg。
大鼠稱(chēng)重后，用3％的戊巴比妥鈉麻醉，反背固定，分離右頸總動(dòng)脈和左股動(dòng)脈靜脈，做動(dòng)脈插管，接八道生理儀壓力傳感器，靜脈插管待給戊巴比妥鈉，連接心電口導(dǎo)聯(lián)。記錄以下指標(biāo)正常值左室內(nèi)收縮壓(LVSP)、動(dòng)脈收縮壓(SBP)、動(dòng)脈舒張壓(DBP)等指標(biāo)。用微量輸液器0.15ml/min滴注3％的戊巴比妥鈉0.5ml，再改換為0.2％的戊巴比妥鈉0.15ml/min滴注3～5ml致動(dòng)脈壓下降到50％，dP/dt下降到30％左右，維持10min，即為心衰，記錄心衰時(shí)各項(xiàng)指標(biāo)。經(jīng)十二指腸給藥，給藥15min，在給藥結(jié)束后20、30、45、60、90min記錄各項(xiàng)指標(biāo)。計(jì)算各指標(biāo)平均值標(biāo)準(zhǔn)差，在各時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組進(jìn)行組間t檢驗(yàn)，判斷顯著性差異。
結(jié)果1、對(duì)戊巴比妥鈉所致心力衰竭大鼠LVSP的作用表5結(jié)果表明，根總皂苷45-90min內(nèi)也能顯著升高LVSP；人參總次苷各給藥組使心衰動(dòng)物L(fēng)VSP在給藥后20-90min均升高，在各時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組相比，均有顯著性差異(P＜0.05、P＜0.0)。劑量高作用時(shí)間快、持久，強(qiáng)度大，表明人參總次苷具有增強(qiáng)左室的收縮力，增強(qiáng)射血作用，有利于心臟功能的恢復(fù)；表明相同作用劑量下，人參總次苷作用時(shí)間較根總皂苷，并且作用強(qiáng)度高于根總皂苷。
2、對(duì)戊巴比妥鈉所致心力衰竭大鼠SBP的作用表6結(jié)果表明，給藥后，人參總次苷50-200mg/kg在不同的時(shí)間內(nèi)各使SBP值均升高(P＜0.05或P＜0.01)，200mg/kg在30-90內(nèi)有顯著性作用，作用強(qiáng)度和時(shí)間優(yōu)于同劑量的根總皂苷。
3、對(duì)戊巴比妥鈉所致心力衰竭大鼠DBP的作用表7結(jié)果表明，給藥后，人參總次苷50-200mg/kg各劑量DBP均升高，與對(duì)照組相比，在30-90min高劑量組有顯著性差異(P＜0.05、P＜0.01)。中、低劑量組有所升高，但與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。根總皂苷60-90min內(nèi)也能顯著升高DBP。
以上結(jié)果表明，人參總次苷可以顯著增強(qiáng)左室的收縮力，增強(qiáng)射血作用，提高心臟功能，改善心衰，其作用強(qiáng)度和作用時(shí)間由于同劑量下的人參根總皂苷。
表5 對(duì)戊巴比妥鈉所致大鼠心力衰竭模型LVSP的作用 注與對(duì)照組相比*P＜0.05，**P＜0.01表6.對(duì)戊巴比妥鈉所致大鼠心力衰竭模型SBP的作用
表7.對(duì)戊巴比妥鈉所致大鼠心力衰竭模型DBP的作用 實(shí)施例五對(duì)失血性休克犬的影響取健康雜種犬36只，雌雄兼有，隨機(jī)分為六組空白對(duì)照組(等容量蒸餾水)、參麥注射液10mg/Kg組、人參根總皂苷(簡(jiǎn)稱(chēng)根總皂苷)200mg/Kg組、人參總次苷高劑量組、中劑量組、低劑量組(200、100、50mg/Kg)。戊巴比妥納(30mg/Kg)靜脈注射麻醉，仰臥固定，氣管插管，調(diào)節(jié)八道生理記錄儀。右側(cè)股動(dòng)脈插管，連接壓力轉(zhuǎn)換器測(cè)量動(dòng)脈收縮壓(SBP)，分離右側(cè)股靜脈備用放血，右頸總動(dòng)脈插管至左心室，連接壓力轉(zhuǎn)換器測(cè)量左心室收縮壓(LVSP)，連接心電口導(dǎo)。待穩(wěn)定后記錄各參數(shù)正常值。經(jīng)右股靜脈放血，當(dāng)動(dòng)脈平均壓降至小于正常值2/3時(shí)停止放血，即為休克狀態(tài)，待穩(wěn)定后記錄。右側(cè)腹部開(kāi)約4cm小口，取十二指腸，注射受試物溶液(2ml/kg)，縫合傷口。在給藥后10、20、30、40、60、90、120min分別記錄各項(xiàng)指標(biāo)。
結(jié)果表8結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，參麥注射液在30-120min各時(shí)間點(diǎn)，人參總次苷高劑量在30-120min各時(shí)間點(diǎn)，中劑量在60-120min各時(shí)間點(diǎn)有顯著性差異(P＜0.05、P＜0.01)。與根總皂苷相比，人參總次苷高、中劑量組升壓作用顯著優(yōu)于前者(P＜0.05)。
表9結(jié)果表明，在各時(shí)間點(diǎn)，各給藥組左心室收縮壓均高于對(duì)照組，與對(duì)照組相比，參麥注射液在30-120min各時(shí)間點(diǎn)，根總皂苷組在40-120min各時(shí)間點(diǎn)，人參總次苷高劑量在20-120min各時(shí)間點(diǎn)，中劑量在30-120min各時(shí)間點(diǎn)，低劑量在60-120min時(shí)間點(diǎn)有顯著性差異(P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01)。與根總皂苷組相比，人參總次苷高劑量組左心室收縮壓較高，高劑量在20、30min時(shí)間點(diǎn)有顯著性差異(P＜0.05)，中劑量組左心室收縮壓與根總皂苷組相當(dāng)。
以上結(jié)果表明，人參總次苷具有升高血壓等改善血流動(dòng)力學(xué)的作用，對(duì)失血性所致休克有顯著的治療作用。作用時(shí)間較根總皂苷快，強(qiáng)度較根總皂苷強(qiáng)。
表8人參總次苷對(duì)麻醉犬失血性休克模型動(dòng)脈收縮壓的影響(x±s)單位kPa 注組間t檢驗(yàn)，與對(duì)照組相比*P＜0.05，**P＜0.01；與根總皂苷組相比# P＜0.05，## P＜0.01(下同)
表9人參總次苷對(duì)麻醉犬失血性休克模型左心室收縮壓的影響(x±s)單位kPa 注與對(duì)照組相比*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.01；與根總皂苷組相比# P＜0.05 ## P＜0.01
實(shí)施例六對(duì)大鼠心律失常的影響取70只SD大鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為對(duì)照組，合心爽組，地奧心血康200mg/kg組，根總皂苷200mg/kg組，人參總次苷200、100、50、25mg/kg劑量組，給藥第七天，于給藥后30min，10％三氯水合乙醛300mg/kg腹腔注射麻醉后，仰位固定于鼠臺(tái)上，描記一段正?？趯?dǎo)聯(lián)心電圖后，舌下靜脈給氯化鋇4mg/kg，并立即連續(xù)觀察，描記給氯化鋇后1、5、10、15、20、25、30min時(shí)各時(shí)刻的心電圖，計(jì)算心率，與給藥前對(duì)照值相比較，并比較心律失常出現(xiàn)時(shí)間和持續(xù)時(shí)間。計(jì)算室性早搏(VP)、室性心動(dòng)過(guò)速(VT)及室顫(VF)發(fā)生率。
結(jié)果表10結(jié)果顯示，注射BaCl2后各組心率出現(xiàn)顯著性減慢，人參總次苷200mg/kg劑量在藥后10min逐步恢復(fù)，100mg/kg劑量30min后逐步恢復(fù)；根總皂苷200mg/kg劑量20min后逐步恢復(fù)。
表11結(jié)果顯示，人參總次苷50-200mg/kg可顯著延緩心律失常的VP、VT出現(xiàn)時(shí)間(P＜0.05、P＜0.01)，可顯著縮短心律失常持續(xù)時(shí)間(P＜0.05、P＜0.01)，可顯著降低VF發(fā)生率(P＜0.05)；根總皂苷200mg/kg可顯著延緩心律失常的VP、VT出現(xiàn)時(shí)間(P＜0.05)，可顯著縮短心律失常持續(xù)時(shí)間(P＜0.01)，其作用與人參總次苷100mg/kg作用相近。
以上結(jié)果表明，人參總次苷可顯著改善BaCl2引起的心律失常，抑制室顫(VF)發(fā)生率，同劑量下其作用優(yōu)于根總皂苷。
表10 靜脈注射BaCl2后，各組心率(次/min)的變化(X±S，n=10)

注表示每組大鼠各時(shí)間點(diǎn)與給氯化鋇之前的比較(*P＜0.05，**P＜0.01)表11 人參總次苷對(duì)BaCl2致大鼠心率失常的保護(hù)作用(X±S，n=10)

注*表示給藥組與對(duì)照組比較(*P＜0.05 **P＜0.01)
實(shí)施例七對(duì)體內(nèi)血栓形成的影響取大鼠70只，雌雄各半，體重250-300g，隨機(jī)分成7組，每組10只，預(yù)養(yǎng)一周。人參總次苷高、中、低劑量組(200、100、50mg/kg)及對(duì)照組合心爽組(50mg/kg)、地奧心血康組(200mg/kg)、根總皂苷組(200mg/kg)和空白對(duì)照組(水)灌胃7d。
血栓形成抑制率的測(cè)定給藥第七天，每只大鼠于給藥后30min用戊巴比妥鈉麻醉，分離左頸外靜脈和右頸總動(dòng)脈，取三段聚乙烯管組成的套管，其中間段置一根5cm的稱(chēng)重四號(hào)手術(shù)線，以肝素生理鹽水(50U/ml)充滿(mǎn)聚乙烯管，當(dāng)管的一端插入頸外靜脈后，夾住管的一端將絲線固定的一端管插入右頸總動(dòng)脈，手術(shù)完成后立即開(kāi)放血流，15min后中斷血流，迅速取處絲線稱(chēng)重?？傊亓繙p去絲線重量即為血栓濕重。按以下公式計(jì)算血栓形成抑制率。
對(duì)各組血栓重量的平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，t檢驗(yàn)判斷藥物的顯著性作用，通過(guò)抑制率判定藥物的作用強(qiáng)度。
結(jié)果結(jié)果見(jiàn)表28，人參總次苷100-200mg/kg可顯著抑制大鼠頸動(dòng)靜脈旁路血栓的形成(P＜0.05)，抑制率最高為29％。根總皂苷200mg/kg對(duì)血栓的形成有抑制作用趨勢(shì)，但沒(méi)有顯著性差異，抑制率約16％。對(duì)照藥合心爽和地奧心血康均有顯著抑制血栓形成作用(P＜0.05)，抑制率分別為33％和23％。
以上結(jié)果表明，人參總次苷100-200mg/kg對(duì)試驗(yàn)性大鼠頸動(dòng)靜脈旁路血栓的形成有顯著的抑制作用，顯著優(yōu)于根總皂苷200mg/kg。
表16人參總次苷對(duì)試驗(yàn)大鼠頸動(dòng)靜脈旁路血栓形成的抑制作用

與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.0權(quán)利要求
1.一種人參總次苷藥物組合物，其特征在于所述的人參總次苷藥物組合物包含以下組分①以人參原二醇為苷元的人參皂苷，包括人參皂苷Rg3；②以人參原三醇為苷元的人參皂苷，包括人參皂苷Rg2和人參皂苷Rh1；按重量百分比計(jì)，以人參原二醇、人參原三醇為苷元的人參皂苷的和在20％以上。
2.如權(quán)利要求1所述的人參總次苷藥物組合物，其特征在于其中人參皂苷Rg3是人參皂苷20-(S)-Rg3和/或人參皂苷20-(R)-Rg3；人參皂苷Rg2是人參皂苷20-(S)-Rg2和/或人參皂苷20-(R)-Rg2；人參皂苷Rh1是人參皂苷Rh120-(S)-Rh1和/或人參皂苷20-(R)-Rh1；按重量百分比計(jì)Rg3為10-30％，Rg2為1-20％，Rh1為1-10％；按重量百分比計(jì)，以人參原二醇、人參原三醇為苷元的人參皂苷的和在50％以上。
3.如權(quán)利要求1所述的人參總次苷藥物組合物，其特征在于所述的用于提取人參總次苷藥物組合物的植物為人參須。
4.如權(quán)利要求1所述的人參總次苷藥物組合物，其特征在于所述的人參總次苷藥物組合物的提取制備方法包括水解步驟；所述的水解步驟用無(wú)機(jī)酸或者有機(jī)酸作為水解催化劑。
5.如權(quán)利要求1～4之一所述的人參總次苷藥物組合物，其特征在于所述的藥物組合物包括治療有效量的人參總次苷提取物、添加劑、賦形劑及醫(yī)學(xué)上可接受的載體。
6.如權(quán)利要求1～5之一的人參總次苷藥物組合物的制備方法，包括如下步驟(1)人參總皂苷提取液制備將人參屬植物，用水或者有機(jī)溶劑提取，再將提取液濃縮；(2)水解液制備用無(wú)機(jī)酸或者有機(jī)酸為催化劑水解上述的濃縮提取液；(3)樹(shù)脂吸附水解液通過(guò)大孔樹(shù)脂柱吸附；(4)脫除雜質(zhì)通過(guò)了水解液的吸附柱再經(jīng)過(guò)水洗脫、堿水洗脫、濃度在35％以下的乙醇洗脫除去雜質(zhì)；(5)洗脫、濃縮、干燥脫除雜質(zhì)后用濃度在35％以上的乙醇洗脫吸附柱，收集此次的乙醇洗脫液，濃縮成流浸膏，真空干燥，得人參總次苷藥物組合物。
7.如權(quán)利要求6的人參總次苷藥物組合物的制備方法，其特征在于所述的步驟(2)中的催化劑選自冰醋酸、丙酸、鹽酸、硫酸，所述水解反應(yīng)在80-100℃條件下進(jìn)行，所述的水解時(shí)間為3-8小時(shí)；所述的步驟(2)中的催化劑為冰醋酸，水解反應(yīng)在99℃條件下進(jìn)行，水解時(shí)間為5小時(shí)；所述的步驟(3)中的大孔樹(shù)脂為苯乙烯類(lèi)大孔樹(shù)脂，包括苯乙烯類(lèi)大孔樹(shù)脂、乙基苯乙烯類(lèi)大孔樹(shù)脂、甲基苯乙烯類(lèi)大孔樹(shù)脂；所述的步驟(4)中的堿水選自下列物質(zhì)氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀所配成的水溶液，濃度為0.1％-5.0％；洗脫除去雜質(zhì)用的乙醇濃度為15-25％；所述的步驟(5)中，洗脫吸附柱的乙醇濃度為60-80％。
8.如權(quán)利要求1～5之一的人參總次苷藥物組合物在制備主治心陽(yáng)不振，心氣虛弱，氣滯血瘀導(dǎo)致的胸痹心痛的新藥中的應(yīng)用。
9.如權(quán)利要求1～5之一的人參總次苷藥物組合物在制備主治心肌缺血的新藥中的應(yīng)用。
10.如權(quán)利要求1～5之一的人參總次苷藥物組合物在制備主治失血性休克的新藥中的應(yīng)用。
11.如權(quán)利要求1～5之一的人參總次苷藥物組合物在制備主治心力衰竭的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種人參總次苷藥物組合物及其制法和在制備治療心肌缺血及失血性休克藥物中的應(yīng)用。人參總次苷藥物組合物主要有效成分是20－(S)－Rg3，20－(R)－Rg3，20－(S)－Rg2，20－(R)－Rg2，20－(S)－Rh1和20－(R)－Rh1，人參總次苷藥物組合物制備方法是人參屬植物提取物經(jīng)酸水解后，通過(guò)大孔樹(shù)脂分離純化濃縮所得的提取物。人參總次苷藥物組合物可用于制備治療心陽(yáng)不振，心氣虛弱，氣滯血淤導(dǎo)致的胸痹心痛，心肌缺血，失血性休克等藥物組合物。
文檔編號(hào)A61P9/10GK1718193SQ20051008385
公開(kāi)日2006年1月11日 申請(qǐng)日期2005年7月14日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月14日
發(fā)明者孫從新, 鄭禮 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)藥研究開(kāi)發(fā)中心有限公司