專利名稱：殼囊孢菌素b在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種來源于紅樹植物內(nèi)生真菌-小穴殼菌HTF3(Dothiorella sp.HTF3)的殼囊孢菌素B化合物在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
紅樹林是生長(zhǎng)在港灣河口地區(qū)的淤泥灘涂上的木本植物群落，作為獨(dú)特的海陸邊緣生態(tài)系統(tǒng)在自然生態(tài)平衡中起著特殊的作用。紅樹林植物不僅是重要的經(jīng)濟(jì)植物，也是民間常用的藥用植物，如紅樹植物老鼠簕(Acanthus ilicifolius)的樹皮熬汁可以用于治血尿；角果木(Ceriops tagal)的樹皮搗碎可以止血、通便和治療惡瘡，種子榨油可以止癢和治療癬，還可治療凍瘡等。
紅樹植物中存在著豐富的內(nèi)生真菌，有報(bào)道認(rèn)為紅樹植物的藥用成分都是由其內(nèi)生真菌產(chǎn)生的，不多的文獻(xiàn)(1、Brady，S.，Wagenaar，M.W，Singh，M.，et al.The cytosporonesisolated from an endophytic fungus.Org.Lett.2000，2(25)4043-4046；2、Bandaranayake，W.M..Traditional and medicinal uses of mangroves.Mangroves and Salt Marshes，1998，2133-148；3、Bandaranayake，W.M..Bioactivities，bioactive compounds and chemicalconstituents of mangrove plants.Wetland Ecology and Management，2002，10421-452；4、Lin Y.，Wu X.，Deng z.，et al.The metabolites of the mangrove fungus Verruculina enalia No.2606 from a salt lake in the Bahamas.Phytochemistry，2002，59469-471)報(bào)道也已證明紅樹植物的內(nèi)生真菌確實(shí)可以產(chǎn)生具有新結(jié)構(gòu)和強(qiáng)的生理活性的化合物。但目前國(guó)內(nèi)外在這方面的工作才剛剛開始，為此其研究具有較高的理論價(jià)值和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種來源于紅樹植物內(nèi)生真菌(cytosporone B)的化合物在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明所用的紅樹植物內(nèi)生真菌-小穴殼菌HTF3(Dothiorella sp.HTF3)已保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC，中國(guó)武漢大學(xué)校內(nèi))，保藏號(hào)為CCTCC NOM203067，保減日期為2003年8月29日。
本發(fā)明所說的殼囊孢菌素B(cytosporone B)化合物的結(jié)構(gòu)式為 (3，5-二羥基-2-辛酮基)-苯乙酸乙酯所說的殼囊孢菌素B化合物可采用以下制備方法1)內(nèi)生真菌(Dothiorella sp.HTF3)的種子培養(yǎng)培養(yǎng)基以g為單位，馬鈴薯去皮、切碎20，水煮，在過濾后的濾液中加葡萄糖1～3，瓊脂1.5～2.0，海水定容至100ml，滅菌，制成試管斜面，挑取菌種接入斜面，室溫下培養(yǎng)5～15天；2)內(nèi)生真菌的發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基以g為單位馬鈴薯去皮、切碎20，水煮，在過濾后的濾液中加葡萄糖1～3，海水定容至100ml，滅菌，將斜面上培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基，室溫下培養(yǎng)5～15天；3)將上述發(fā)酵培養(yǎng)液過濾除去發(fā)酵液后得到菌體；4)菌體烘干，用乙酸乙酯反復(fù)浸泡，合并乙酸乙酯，減壓濃縮，所得的膏狀物用硅膠柱層析分離，石油醚/乙酸乙酯＝100/0到0/100進(jìn)行梯度洗脫，收集二者比例為1/1時(shí)的洗脫液，減壓濃縮即得到該化合物，含量為9mg/g菌體干重。
所得該化合物的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為無色油狀物；EMSm/z(rel.int.)323.3[M+H]+(100)，345.3[M+Na]+(11.4)，361.2[M+K]+(4.2)；1H NMR和13C NMR(400MHz，CDCl3，ppm)見表1。
本發(fā)明所說的殼囊孢菌素B化合物可用于制備抗真菌藥物。
本發(fā)明提供了一類來源于紅樹林內(nèi)生真菌的化合物殼囊孢菌素B對(duì)人體致病真菌和植物致病真菌有較好的抑制作用，可用于制備抗真菌藥物。
表1.殼囊孢菌素B的NMR數(shù)據(jù)

具體實(shí)施方式
實(shí)施例1以下實(shí)施例給出所說的殼囊孢菌素B化合物的制備方法。
1)內(nèi)生真菌的種子培養(yǎng)將20g馬鈴薯去皮、切碎，水煮30min，在過濾后的濾液中加葡萄糖1g，瓊脂1.6g，50％海水定容至100ml，滅菌，制成試管斜面，挑取菌種接入斜面，25℃下培養(yǎng)10天；2)內(nèi)生真菌的發(fā)酵培養(yǎng)將20g馬鈴薯去皮、切碎，水煮30min，在過濾后的濾液中加葡萄糖1.5g，50％海水定容至100ml，滅菌，將斜面上培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基，26℃下培養(yǎng)8天；3)將上述發(fā)酵培養(yǎng)液過濾除去發(fā)酵液后得到菌體；4)菌體烘干，用乙酸乙酯反復(fù)浸泡，合并乙酸乙酯，減壓濃縮，所得的膏狀物用硅膠柱層析分離，石油醚/乙酸乙酯＝100/0到0/100進(jìn)行梯度洗脫，收集二者比例為1/1時(shí)的洗脫液，減壓濃縮即得到該化合物，含量為9mg/g菌體干重。
本發(fā)明所說的殼囊孢菌素B化合物可用于制備抗真菌藥物，其抗真菌活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)如下
1)真菌指示菌株白色假絲酵母菌、黑曲霉菌、木霉菌、鐮刀菌、交鏈孢霉菌、白色面包霉菌、枝孢霉菌2)化合物cytosporone B的配置取一定量的cytosporone B，用甲醇溶解并調(diào)整濃度為1mg/ml，0.22μm孔徑的濾膜過濾除菌，4℃保存?zhèn)溆谩?br> 3)活性檢測(cè)(最低抑菌濃度MIC的測(cè)定)a用無菌水將在PDA(馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂)斜面培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的各指示菌洗下，制成孢子濃度為107個(gè)/ml的菌懸液，4℃保存?zhèn)溆?；b cytosporone B的樣品溶液按兩倍稀釋法，用甲醇稀釋成一系列的濃度梯度，取20μl加入到已在超凈工作臺(tái)的紫外燈下照射30min的96孔板中。用超凈工作臺(tái)的風(fēng)機(jī)鼓風(fēng)吹干甲醇；c真菌懸液用PD(馬鈴薯-葡萄糖)培養(yǎng)基稀釋成104個(gè)/μl的菌液，取100μl加入到上述96孔板上，25℃培養(yǎng)48h，肉眼觀測(cè)，沒有真菌生成的最小稀釋濃度即為MIC。
d實(shí)驗(yàn)結(jié)果cytosporone B對(duì)白色假絲酵母菌、黑曲霉菌、木霉菌、鐮刀菌、交鏈孢霉菌、白色面包霉菌、枝孢霉菌的MIC分別是0.156mg/ml、0.125mg/ml、0.0625mg/ml、0.0625mg/ml、0.07mg/ml、0.125mg/ml和1mg/ml。
權(quán)利要求
1.殼囊孢菌素B化合物用于制備抗真菌藥物的用途。
全文摘要
涉及一種來源于紅樹植物內(nèi)生真菌—小穴殼菌HTF
文檔編號(hào)A61P31/10GK1720909SQ20051008567
公開日2006年1月18日 申請(qǐng)日期2003年11月8日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月8日
發(fā)明者徐慶妍, 黃耀堅(jiān), 鄭忠輝, 宋思揚(yáng), 蘇文金 申請(qǐng)人:廈門大學(xué)