專利名稱：一種巴豆生物堿注射制劑及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于制藥技術領域，具體涉及一種巴豆生物堿注射制劑及其制備方法。
背景技術：
巴豆為大戟科植物巴豆Croton tiglium L.的干燥成熟果實，主要含有巴豆油和生物堿。巴豆外用適量，研末涂患處，或搗爛以紗布包擦患處，具有蝕瘡作用，可用于惡瘡疥蘚、疣痔；巴豆霜具有峻下積滯、逐水消腫、豁痰利咽功效，用于寒積便秘、乳食停滯、下腹水腫、二便不通、喉風、喉痹。文獻[徐立生，等?？拱┧幬锇投股飰A、順鉑對紅細胞膜的作用。中華腫瘤雜志，1995，17(2)115]報道，巴豆堿通過對膜系統(tǒng)分子動力學的影響而降低了腫瘤細胞的惡性程度及其轉移活性，多膜流動性的影響，先使腫瘤細胞的惡性程度降低，再進一步促使癌細胞逆轉。文獻[劉秀德，等。巴豆總生物堿對癌細胞質(zhì)膜流動性及胞漿基質(zhì)的影響。山東中醫(yī)學院學報，1995，19(3)192]報道，給小鼠灌胃巴豆總生物堿，可使小鼠腹水型肝癌細胞質(zhì)膜ConA受體的測向擴散速度明顯增加，而胞漿基質(zhì)結構程度有所改變。由此看來，巴豆生物堿有很好的治療癌癥的作用。
雖然以上文獻提到了以巴豆生物堿為活性成分的中藥針劑，但是在資料檢索中未發(fā)現(xiàn)公開任何有關巴豆生物堿的提取、純化過程以及注射制劑的制備方法。

發(fā)明內(nèi)容
基于以上原因，本發(fā)明研究人員經(jīng)過反復實驗，找到一種從巴豆中提取、純化巴豆總生物堿的方法，并制備成注射制劑；藥效學試驗表明，本發(fā)明巴豆生物堿注射制劑具有很好的治療癌癥的作用；安全性評價試驗表明，本發(fā)明具有很好的注射給藥安全性。
本發(fā)明的一個目的是公開一種巴豆生物堿注射制劑。
本發(fā)明的另一個目的是公開上述巴豆生物堿注射制劑的制備方法。
本發(fā)明通過以下技術方案實現(xiàn)。
一、制備方法(1)巴豆生物堿有效部位的制備取巴豆藥材，干燥，粉碎，過20目篩，加入10-20倍量的酸性水溶液回流提取2次，每次2小時，合并提取液，放冷至室溫，靜置24小時，除去上層油脂，下層清液減壓濃縮至溶液∶藥材為1∶1，在0℃-4℃靜置12小時，除去上層油脂，下層清液過濾，濾液以4000轉/分的速度離心30分鐘，離心液用截留分子量為10000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的大孔吸附樹脂，先用水洗至無色，再換用3-6倍柱體積的30％-80％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到巴豆生物堿有效部位。
(2)制劑制備水針制劑的制備稱取巴豆生物堿有效部位2-4重量份用注射用水溶解，調(diào)pH值為5.0-6.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成每支2ml的水針制劑。
輸液制劑的制備稱取巴豆生物堿有效部位2-4重量份用注射用水溶解，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為5.0-6.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成每瓶100ml的輸液制劑。
粉針制劑的制備稱取巴豆生物堿有效部位2-4重量份用注射用水溶解，加入水溶性注射用賦形劑，調(diào)pH值為5.0-6.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，干燥，制備成粉針制劑。
上述的酸性水溶液為鹽酸、硫酸或醋酸的水溶液，pH值為3-5。
巴豆生物堿與酸成鹽，增大其在水中的溶解度；從巴豆中提取的巴豆油在低溫冷藏，可以很容易的除去；經(jīng)過離心、超濾、大孔吸附樹脂純化，最終得到以巴豆生物堿為主的有效部位。
二、含量測定巴豆生物堿含量測定采用紫外分光光度法；5批巴豆生物堿有效部位樣品均由廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司提供。含量測定結果見表1。
表1巴豆生物堿含量測定結果

由以上含量測定結果可以看出，巴豆生物堿在巴豆生物堿有效部位中的含量為70％-80％。
三、藥理實施例為了證實本發(fā)明巴豆生物堿注射制劑的治療效果，本發(fā)明研究人員對本發(fā)明巴豆生物堿注射制劑進行了如下的藥效學試驗。樣品均由廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司提供。
1、對小鼠移植S180的抑制作用在無菌條件下，取荷瘤動物，處死固定，用碘酊及酒精消毒操作部位皮膚，然后切開，選擇生長良好的瘤塊組織置組織勻漿器中，按1∶2的比例加入無菌生理鹽水制成細胞懸液，于實驗小鼠腋窩皮下接種0.2ml，每批接種30只，接種后次日隨機分組，為模型對照組、本發(fā)明巴豆生物堿注射制劑組，每組10只，腹腔注射給藥，劑量為100mg/kg。每日1次，連續(xù)10天，末次給藥后處死小鼠，稱體重，摘瘤稱重，計算抑制率。腫瘤生長抑制率(％)＝(對照組平均瘤重-治療組平均瘤重)/對照組平均瘤重×100％。結果見表2。
表2對小鼠移植S180的抑制作用(X±S)

注與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
由上表實驗結果可以看出，本發(fā)明巴豆生物堿注射制劑對小鼠移植腫瘤S180有明顯的抑制作用。
2、對小鼠移植胃癌的抑制作用在無菌條件下，取荷瘤傳代鼠，消毒腹部皮膚，用無菌空注射器抽吸腹水，以無菌生理鹽水作1∶2倍的稀釋，取雌性小鼠30只，每只鼠接種0.2ml，接種后次日隨機分組，為模型對照組、本發(fā)明巴豆生物堿注射制劑組，每組10只，腹腔注射給藥，劑量為100mg/kg。每日1次，連續(xù)10天，記錄小鼠存活時間，計算生命延長率。結果見表3。
表3對小鼠移植胃癌的抑制作用(X±S)

注與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
由上表實驗結果可以看出，本發(fā)明巴豆生物堿注射制劑對小鼠移植胃癌有明顯的抑制作用。
3、對小鼠移植P388的抑制作用取雌性小鼠30只，接種P388方法同上，接種后次日隨機分組，為模型對照組、本發(fā)明巴豆生物堿注射制劑組，每組10只，腹腔注射給藥，劑量為100mg/kg。每日1次，連續(xù)10天，記錄小鼠存活時間，計算生命延長率。結果見表4。
表4對小鼠移植P388的抑制作用(X±S)


注與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
由上表實驗結果可以看出，本發(fā)明巴豆生物堿注射制劑對小鼠移植P388有顯著的抑制作用。
以上藥效學實驗表明，本發(fā)明巴豆生物堿注射制劑具有很好的治療癌癥疾病的作用。
四、安全性評價1、血管刺激性考察取健康大耳家兔5只，將動物固定于兔箱內(nèi)，用酒精將皮膚消毒后，于右側耳緣靜脈處注射本發(fā)明巴豆生物堿注射制劑，于另一側對應部位注射同一體積的等滲葡萄糖水作為對照。每日注射1次，連續(xù)3次，觀察兔耳緣靜脈反應。于末次給藥24h后將兔放血處死，取下兩耳，用10％甲醛溶液浸泡，距注射部位1-4cm處，解剖取出靜脈，做組織切片檢查，觀察注射部位的反應。
結果試驗過程中，肉眼觀察兩耳靜脈注射部位處，未見紅腫、熱等刺激表現(xiàn)。表明給藥組切片部位組織形態(tài)無明顯差異，未見本品毒性所致的病理形態(tài)學改變(血管結構正常，無內(nèi)皮細胞損傷，無血栓形成及其他病理性變化)。
2、溶血毒性考察2％紅細胞混懸液的制備取兔耳緣靜脈取血10-20ml，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血。加10倍量的生理鹽水溶液，搖勻，離心，除去上清液，沉淀的紅細胞再用生理鹽水溶液洗滌2-3次，至上清液不呈紅色時為止。將所得的紅細胞用用生理鹽水配成濃度為2％的混懸液，即得。
試驗方法取試管6支，按下表中的配比量依次加入2％紅細胞混懸液和生理鹽水溶液，混勻，于37℃恒溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的藥液(以第6管為空白對照)，搖勻后，置37℃恒溫箱中，開始每隔15分鐘觀察1次，1小時后，每隔1小時觀察1次，共觀察2小時。
表5溶血試驗設計

結果以第3試管為準，各管均未染有紅色，顯微鏡下觀察未見有紅細胞破裂，說明本品不溶血，安全性好。
五、制備實施例實施例1取巴豆藥材，干燥，粉碎，過20目篩，加入20倍量的pH3的鹽酸水溶液回流提取2次，每次2小時，合并提取液，放冷至室溫，靜置24小時，除去上層油脂，下層清液減壓濃縮至溶液∶藥材為1∶1，在0℃靜置12小時，除去上層油脂，下層清液過濾，濾液以4000轉/分的速度離心30分鐘，離心液用截留分子量為10000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的D101大孔吸附樹脂，先用水洗至無色，再換用6倍柱體積的30％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到巴豆生物堿有效部位。
實施例2取巴豆藥材，干燥，粉碎，過20目篩，加入10倍量的pH5的硫酸水溶液回流提取2次，每次2小時，合并提取液，放冷至室溫，靜置24小時，除去上層油脂，下層清液減壓濃縮至溶液∶藥材為1∶1，在4℃靜置12小時，除去上層油脂，下層清液過濾，濾液以4000轉/分的速度離心30分鐘，離心液用截留分子量為10000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的AB-8大孔吸附樹脂，先用水洗至無色，再換用3倍柱體積的80％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到巴豆生物堿有效部位。
實施例3取巴豆藥材，干燥，粉碎，過20目篩，加入15倍量的pH4的醋酸水溶液回流提取2次，每次2小時，合并提取液，放冷至室溫，靜置24小時，除去上層油脂，下層清液減壓濃縮至溶液∶藥材為1∶1，在2℃靜置12小時，除去上層油脂，下層清液過濾，濾液以4000轉/分的速度離心30分鐘，離心液用截留分子量為10000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的NKA大孔吸附樹脂，先用水洗至無色，再換用5倍柱體積的45％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到巴豆生物堿有效部位。
實施例4取巴豆藥材，干燥，粉碎，過20目篩，加入12倍量的pH3.5的鹽酸水溶液回流提取2次，每次2小時，合并提取液，放冷至室溫，靜置24小時，除去上層油脂，下層清液減壓濃縮至溶液∶藥材為1∶1，在1℃靜置12小時，除去上層油脂，下層清液過濾，濾液以4000轉/分的速度離心30分鐘，離心液用截留分子量為10000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的D101大孔吸附樹脂，先用水洗至無色，再換用4倍柱體積的60％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到巴豆生物堿有效部位。
實施例5取巴豆藥材，干燥，粉碎，過20目篩，加入18倍量的pH4.5的硫酸水溶液回流提取2次，每次2小時，合并提取液，放冷至室溫，靜置24小時，除去上層油脂，下層清液減壓濃縮至溶液∶藥材為1∶1，在3℃靜置12小時，除去上層油脂，下層清液過濾，濾液以4000轉/分的速度離心30分鐘，離心液用截留分子量為10000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的D101大孔吸附樹脂，先用水洗至無色，再換用5倍柱體積的70％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到巴豆生物堿有效部位。
實施例6稱取上述巴豆生物堿有效部位400g用注射用水溶解，調(diào)pH值為5.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成每支2ml的水針制劑10000支。
實施例7稱取上述巴豆生物堿有效部位200g用注射用水溶解，加入葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成每瓶100ml的輸液制劑10000瓶。
實施例8稱取上述巴豆生物堿有效部位300g用注射用水溶解，加入甘露醇，調(diào)pH值為5.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，干燥，制備成粉針制劑10000支。
實施例9稱取上述巴豆生物堿有效部位250g用注射用水溶解，加入果糖，調(diào)pH值為5.3，用0.22μm微孔濾膜過濾，干燥，制備成粉針制劑10000支。
實施例10稱取上述巴豆生物堿有效部位350g用注射用水溶解，加入葡聚糖和果糖，調(diào)pH值為5.8，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成凍干粉針制劑10000支。
實施例11稱取上述巴豆生物堿有效部位220g用注射用水溶解，加入氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為5.6，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成每瓶100ml的輸液制劑10000瓶。
實施例12稱取上述巴豆生物堿有效部位270g用注射用水溶解，加入聚乙烯吡咯烷酮，調(diào)pH值為5.8，用0.22μm微孔濾膜過濾，干燥，制備成粉針制劑10000支。
實施例13稱取上述巴豆生物堿有效部位380g用注射用水溶解，加入右旋糖苷，調(diào)pH值為5.8，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成凍干粉針制劑10000支。
權利要求
1.一種巴豆生物堿注射制劑，其特征在于它是以巴豆生物堿重量百分含量為70％-80％的有效部位為活性成分制備成的注射制劑。
2.一種巴豆生物堿注射制劑的制備方法，其特征在于，其步驟為(1)巴豆生物堿有效部位的制備取巴豆藥材，干燥，粉碎，過20目篩，加入10-20倍量的酸性水溶液回流提取2次，每次2小時，合并提取液，放冷至室溫，靜置24小時，除去上層油脂，下層清液減壓濃縮至溶液∶藥材為1∶1，在0℃-4℃靜置12小時，除去上層油脂，下層清液過濾，濾液以4000轉/分的速度離心30分鐘，離心液用截留分子量為10000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的大孔吸附樹脂，先用水洗至無色，再換用3-6倍柱體積的30％-80％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到巴豆生物堿有效部位。(2)制劑制備水針制劑的制備稱取巴豆生物堿有效部位2-4重量份用注射用水溶解，調(diào)pH值為5.0-6.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成每支2ml的水針制劑。輸液制劑的制備稱取巴豆生物堿有效部位2-4重量份用注射用水溶解，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為5.0-6.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成每瓶100ml的輸液制劑。粉針制劑的制備稱取巴豆生物堿有效部位2-4重量份用注射用水溶解，加入水溶性注射用賦形劑，調(diào)pH值為5.0-6.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，干燥，制備成粉針制劑。
3.根據(jù)權利要求2的一種巴豆生物堿注射制劑的制備方法，所述的酸性水溶液為鹽酸、硫酸或醋酸的水溶液，pH值為3-5。
4.根據(jù)權利要求2的一種巴豆生物堿注射制劑的制備方法，所述的水溶性注射用賦形劑為甘露醇、右旋糖苷、果糖、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮中的一種或幾種。
5.權利要求1的巴豆生物堿注射制劑具有抗癌作用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種巴豆生物堿注射制劑，它是以巴豆生物堿重量百分含量為70％－80％有效部位為活性成分的注射制劑；本發(fā)明還公開了其制備方法。藥效學試驗表明，本發(fā)明注射制劑具有很好的治療癌癥的作用；安全性評價試驗表明，本發(fā)明注射制劑具有很好的注射給藥安全性。
文檔編號A61K131/00GK1899358SQ20051008702
公開日2007年1月24日 申請日期2005年7月22日 優(yōu)先權日2005年7月22日
發(fā)明者張晴龍 申請人:張晴龍