專利名稱：黃芪甲苷在制備治療糖尿病周圍神經(jīng)病變藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及黃芪甲苷(ASI)的新用途，特別是涉及黃芪甲苷在制備治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前我國(guó)的糖尿病患者超過(guò)3000萬(wàn)，WHO預(yù)測(cè)到2025年中國(guó)糖尿病人數(shù)將達(dá)5000萬(wàn)，我國(guó)已成為僅次于印度的世界第二大糖尿病國(guó)家[1]。糖尿病的危害主要來(lái)自并發(fā)癥，包括神經(jīng)病變、視網(wǎng)膜病變、血管病變和糖尿病腎病等。因?yàn)樯窠?jīng)細(xì)胞能量的獲得主要依賴于葡萄糖，所以高血糖引起的代謝紊亂很容易誘發(fā)神經(jīng)的病變；糖尿病神經(jīng)病變是糖尿病并發(fā)癥中發(fā)病最早和發(fā)生率最高的并發(fā)癥之一，病變累及周圍神經(jīng)和中樞神經(jīng)，尤以前者多見。糖尿病患者5年、10年和20年后周圍神經(jīng)病變的發(fā)病率分別達(dá)到30％、60％和90％。糖尿病周圍神經(jīng)病變(diabetes peripheral neuropathy，DPN)可累及全身的感覺神經(jīng)、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)和自主神經(jīng)，其中以感覺神經(jīng)最為常見。糖尿病患者并發(fā)周圍神經(jīng)病變時(shí)，早期出現(xiàn)肢端感覺異常，痛覺過(guò)敏(疼痛)以及隨后的痛覺遲鈍(麻木)等感覺神經(jīng)病變的癥狀，晚期可表現(xiàn)為肌張力下降，肌力減弱，甚至肌萎縮和癱瘓等運(yùn)動(dòng)神經(jīng)病變的癥狀。諸如糖代謝紊亂，神經(jīng)血管的損害，神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子缺乏，氧化應(yīng)激損傷、免疫損傷和遺傳因素等[2，3]誘因的共同作用，促使DPN的發(fā)生發(fā)展。由于DPN對(duì)神經(jīng)功能的損害幾乎不可逆性，目前臨床缺乏特異性治療方法，多采用控制血糖、調(diào)節(jié)代謝及改善微循環(huán)，以期糾正神經(jīng)缺血缺氧，增加神經(jīng)傳導(dǎo)功能。還有抗氧化、補(bǔ)充神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、免疫抑制劑等方法?？赏ㄟ^(guò)服用藥物來(lái)改善癥狀，因而有效的預(yù)防用藥和早期治療用藥顯得尤為重要。
治療糖尿病的中醫(yī)方劑多數(shù)含有黃芪成分，現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)科學(xué)也充分肯定黃芪對(duì)糖尿病的治療作用。本課題組在1984年最早報(bào)道了黃芪甲苷的抗炎作用，1987與本?；瘜W(xué)教研室合作，從黃芪中成功提取了單體化合物黃芪甲苷(Astragaloside IV，AS-IV)，并運(yùn)用質(zhì)譜和核磁共振進(jìn)行了定性，在此基礎(chǔ)上相繼報(bào)導(dǎo)了AS-IV的諸多藥理活性。AS-IV的藥理作用包括抗炎、免疫調(diào)節(jié)作用、降血壓、抗心肌損傷、改善異常血液流變性、刺激骨髓造血機(jī)能、抗氧化應(yīng)激、抗肝損傷、抗衰老和鎮(zhèn)靜作用，以及防治糖尿病。本課題組實(shí)驗(yàn)研究還發(fā)現(xiàn)，AS-IV能有效防治糖尿病腎病黃芪可以減少糖尿病大鼠的尿蛋白排出量，抑制轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)的合成與分泌，阻斷內(nèi)皮素受體，抑制腎臟NO的產(chǎn)生，抑制血小板聚集、改善微循環(huán)等，從而緩解腎小球肥大、減輕GBM增厚、抑制系膜外基質(zhì)增生而阻止腎小球硬化。而DPN與糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)理有諸多共通之處?；贒PN的發(fā)病機(jī)制和已有的工作基礎(chǔ)，我們擬研究AS-IV對(duì)大鼠糖尿病神經(jīng)病變的防治作用。
但至今未見到黃芪甲苷能治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的有關(guān)報(bào)導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容
1.發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于提供黃芪甲苷的新用途，即在制備治療糖尿病周圍神經(jīng)病變藥物中的新應(yīng)用。
2.技術(shù)方案本發(fā)明涉及黃芪甲苷作為制備治療糖尿病周圍神經(jīng)病變(diabetes peripheralneuropathy，DPN)的藥物中的應(yīng)用。
在黃芪甲苷中加入適當(dāng)?shù)妮o料，用常規(guī)的制備方法，可以制成片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液等口服制劑。
黃芪甲苷的藥理試驗(yàn)，以觀察其對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變的治療作用，實(shí)驗(yàn)證明(1)、黃芪甲苷(AS-IV)中高劑量治療組(100、200mg/kg)血糖和HbA1C與DPN模型組比較，表現(xiàn)出明顯的降血糖作用(P＜0.05，P＜0.01)。而且血漿胰島素的含量比DPN模型組明顯增多(P＜0.05，或P＜0.01)。
(2)、黃芪甲苷(AS-IV)低中高劑量治療組坐骨神經(jīng)GSH-Px的活力比DPN組顯著增加(P＜0.05，P＜0.01)。顯示黃芪甲苷(AS-IV)對(duì)DPN大鼠神經(jīng)組織有抗氧化作用。
(3)、糖尿病狀態(tài)下COX-2/COX-1活性大幅增加。黃芪甲苷(AS-IV)低中高劑量組的PGE2尿排泄率較DPN組明顯減少(P＜0.05或P＜0.01)，說(shuō)明黃芪甲苷(AS-IV)能抑制COX-2的活性；而TXB2排泄率的降低則不明顯，表明AS-IV對(duì)COX-1的抑制作用不明顯。
(4)、黃芪甲苷(AS-IV)低劑量治療組(50mg/kg)的神經(jīng)和血清中AGEs含量較DPN組下降不明顯，黃芪甲苷(AS-IV)中高劑量治療組降低神經(jīng)和血清中AGEs含量的作用非常顯著(P＜0.01，或P＜0.05)。
(5)、黃芪甲苷(AS-IV)低中高劑量治療組神經(jīng)和紅細(xì)胞中AR活性較DPN組顯著降低(P＜0.01)，表明黃芪甲苷(AS-IV)對(duì)AR有明顯的抑制作用.
(6)、黃芪甲苷(AS-IV)中高劑量治療組甩尾溫度均比DPN組低，有非常顯著性差異(P＜0.01)。運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度(MNCV)測(cè)定結(jié)果表明，DPN組的傳導(dǎo)速度較正常組大鼠顯著降低(P＜0.01)，而黃芪甲苷(AS-IV)中高劑量組對(duì)DPN的傳導(dǎo)速度下降有顯著的改善作用(P＜0.01)。
(7)、黃芪甲苷(AS-IV)低中高劑量治療組均能顯著地提高糖尿病大鼠Na+-K+-ATP酶活性(P＜0.05，或P＜0.01)。
(8)、黃芪甲苷(AS-IV)對(duì)DPN大鼠神經(jīng)組織光鏡下形態(tài)學(xué)顯示，與正常大鼠相比，DPN組大鼠坐骨神經(jīng)神經(jīng)外膜有大量的伊紅色無(wú)結(jié)構(gòu)的沉積物(糖基化蛋白)，并伴有纖維化形成。黃芪甲苷(AS-IV)低劑量組大鼠的形態(tài)學(xué)病變僅見輕微改善，而黃芪甲苷(AS-IV)中高劑量組改善則更為明顯。
(9)、黃芪甲苷(AS-IV)對(duì)DPN大鼠神經(jīng)組織電鏡下形態(tài)學(xué)顯示AS-IV低中高劑量組和EPS組的有髓纖維面積比DPN組顯著增加(P＜0.05，或P＜0.01)，AS-IV低中高劑量組的有髓纖維密度比DPN組減少(P＜0.05，或P＜0.01)。AS-IV低劑量組有髓神經(jīng)纖維髓鞘厚度不一，軸突有比較明顯的脫髓鞘改變；AS-IV中高劑量和EPS組病理改變則明顯減輕3.有益效果從以上藥理試驗(yàn)結(jié)果，可以得出本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)本發(fā)明對(duì)已知黃芪甲苷(AS-IV)發(fā)現(xiàn)了新的醫(yī)療用途，開拓了一個(gè)新的應(yīng)用領(lǐng)域，(2)本發(fā)明的黃芪甲苷(AS-IV)藥理效果好，作用強(qiáng)，預(yù)示著有良好的藥用前景，(3)本發(fā)明的黃芪甲苷(AS-IV)具有非常顯著的降低血糖和糖化血紅蛋白以及促胰島素分泌的作用，且呈明顯的劑量相關(guān)性。
(4)黃芪甲苷(AS-IV)低中高劑量治療組增加坐骨神經(jīng)GSH-Px的活力，抑制COX-2的活性示黃芪甲苷(AS-IV)對(duì)DPN大鼠有抗氧化和抗炎作用。
(5)黃芪甲苷(AS-IV)具有顯著降低神經(jīng)和血清中AGEs的含量，且呈明顯的劑量相關(guān)性。
(6)黃芪甲苷(AS-IV)具有非常顯著的降低醛糖還原酶(AR)的活性，呈明顯的劑量相關(guān)。
(7)黃芪甲苷(AS-IV)中高劑量治療組均能提高痛閾，提高糖尿病大鼠外周神經(jīng)內(nèi)Na+-K+-ATP酶活性，增加運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度。
(8)光鏡或電鏡下形態(tài)學(xué)顯示黃芪甲苷(AS-IV)有明顯的減輕DPN大鼠神經(jīng)組織的病理改變因此黃芪甲苷(AS-IV)作為AR的抑制劑對(duì)DPN有很好的治療效果。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1黃芪甲苷(AS-N)對(duì)DPN大鼠一般生理狀況的影響(1).材料和方法1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性Sprague-Dawley品系大鼠，體重180～210g，上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(滬)2003-0003。
2藥品、試劑和儀器黃芪甲苷(Astragaloside IV，AS-IV)，分子量784，由江蘇省&中國(guó)科學(xué)院藥用植物研究所從黃芪中提取，運(yùn)用HPLC經(jīng)歸一法證實(shí)AS I純度大于99％。鏈脲霉素(Streptozotocin，STZ)購(gòu)自Calbiochem公司，批號(hào)Lot.B51229。血糖檢測(cè)藥盒購(gòu)自浙江東甌生物工程有限公司，批號(hào)Lot2004030266。胰島素放免檢測(cè)藥盒購(gòu)自北京中國(guó)原子能科學(xué)研究院，批號(hào)Lot20040701。依帕司他(epalrestat，EPS)由江蘇揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)惠贈(zèng)。大鼠尿白蛋白放免分析藥盒購(gòu)自北京福瑞生物工程公司，批號(hào)Lot20050301。PGE2放免分析藥盒購(gòu)自解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所，批號(hào)Lot20040625。TXB2放免分析藥盒購(gòu)自解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所，批號(hào)Lot20040625。Na+-K+-ATP酶測(cè)試盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所，批號(hào)Lot20040702。羥脯氨酸測(cè)試盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所，批號(hào)Lot20040702。β-NADPHP購(gòu)自Sigma公司(Sigma Co.St，Louis，USA)批號(hào)123K7012。DL-甘油醛購(gòu)自Sigma公司(Sigma Co.St，Louis，USA)，批號(hào)Lot023K2512。其余化學(xué)試劑皆為分析純。
3糖尿病造模和藥物治療雄性SD大鼠，禁食12h后，腹腔一次性注射STZ75mg.kg-1(臨用前溶于0.1mmol.L-1檸檬酸鈉緩沖液，pH4.3)，72h后尾靜脈取血，測(cè)定空腹血糖＞13.9mmol.L-1者為造模成功。75只糖尿病大鼠按照血糖平行分組分為病理模型組(DPN)，黃芪甲苷(AS-IV)低劑量治療組(BL)，黃芪甲苷(AS-IV)中劑量治療組(BM)，黃芪甲苷(AS-IV)高劑量治療組(BH)，依帕司他治療組(EPS)，每組15只，另設(shè)10只正常大鼠為對(duì)照組(NS)，南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)動(dòng)物房飼養(yǎng)。糖尿病成模當(dāng)日作為實(shí)驗(yàn)第一天，黃芪甲苷(AS-IV)治療組的低中高劑量分別為3，6，12mg·kg-1，早晚各灌胃給藥一次，EPS治療組50mg.kg-1每天給藥一次，黃芪甲苷(AS-IV)和EPS均用1％羧甲基纖維素(1％CMC)配成混懸液，按5.0ml.kg-1體重灌胃給藥。實(shí)驗(yàn)中觀察各組大鼠的體重、進(jìn)食水量、尿量、毛發(fā)等一般狀態(tài)，每周稱體重1次。實(shí)驗(yàn)12周末測(cè)定各組大鼠的擺尾溫度閾值，收集24小時(shí)尿液，20％烏拉坦5ml.kg-1麻醉，八道生理記錄儀PowerLab/8SP測(cè)定大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度，處死大鼠，腹主動(dòng)脈收集血液，剝?nèi)蓚?cè)坐骨神經(jīng)，進(jìn)行各指標(biāo)測(cè)定。
4指標(biāo)測(cè)定用大鼠 擺尾溫度值(Tailflick threshold temperature，TTT)測(cè)定痛閾；用八道生理記錄儀(Powerlab/8SP，澳大利亞ADInstruments公司)，以單脈沖方波刺激進(jìn)行坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度(MNCV)測(cè)定；用葡萄糖氧化酶法測(cè)定空腹血糖；HbA1C以親和層析法測(cè)定；BUN用化學(xué)比色法測(cè)定，血漿胰島素、尿白蛋白、尿PGE2和TXB2由南京醫(yī)科大學(xué)同位素室采用放免法測(cè)定；血清和神經(jīng)組織中AGEs的含量用熒光分光光度法測(cè)定。紅細(xì)胞和坐骨神經(jīng)AR活性用熒光分光光度計(jì)測(cè)定；紅細(xì)胞和坐骨神經(jīng)Na+-K+-ATP酶活性測(cè)試盒按南京建成生物工程研究所試劑盒說(shuō)明進(jìn)行；坐骨神經(jīng)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活力的測(cè)定用紫外分光光度法；腓腸神經(jīng)纖維形態(tài)學(xué)采用光鏡，電鏡觀察和圖像分析。
5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有測(cè)定結(jié)果用x±SD表示，各組間比較采用單因素方差分析ANVOA，藥物治療組與DPN組比較采用Dunnett’s檢驗(yàn)，P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
6.結(jié)果(1).黃芪甲苷(AS-IV)對(duì)DPN大鼠一般生理狀況的影響正常對(duì)照組大鼠精神振奮，毛發(fā)純白光澤，活動(dòng)頻繁；進(jìn)食量和飲水量正常，尿量尿量正常，墊料干燥，體重增長(zhǎng)快。DPN病理模型組大鼠毛發(fā)枯黃、無(wú)光澤，精神萎靡，下腹部鼓脹，活動(dòng)少，耳廓、眼球蒼白，尾巴蒼白濕冷，豎毛弓背，攝食量多，飲水量較正常組明顯增多，尿量較正常組明顯增多且粘性，墊料極易潮濕，體重增長(zhǎng)緩慢，與DPN模型組相比，黃芪甲苷(AS-IV)高劑量治療組大鼠在以上各方面皆有有明顯改善，接近于正常對(duì)照組大鼠。黃芪甲苷(AS-IV)低劑量治療組的精神、活動(dòng)、外觀、攝食量和尿量則接近于DN模型組。黃芪甲苷(AS-IV)中劑量治療組和EPS陽(yáng)性治療組的整體表現(xiàn)則介于黃芪甲苷(AS-IV)低劑量治療組和高劑量治療組之間。每組均有若干只大鼠因相互撕咬或其他原因受傷感染致死。
至第7～8周開始同時(shí)并發(fā)白內(nèi)障，并且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，發(fā)病率和病情呈顯劑量相關(guān)。明顯加重。與DPN病理模型組相比，黃芪甲苷(AS-IV)高劑量治療組大鼠在各方面皆有很明顯的改善，白內(nèi)障發(fā)病率很低且病情明顯減輕；黃芪甲苷(AS-IV)中劑量治療組外觀、精神、活動(dòng)接近高劑量治療組，但攝食量、飲水量和尿量較之略多；黃芪甲苷(AS-IV)低劑量治療組毛發(fā)偏黃、無(wú)光澤，精神不振，攝食量、飲水量和尿量較中劑量組多，但比DPN模型組明顯少。EPS陽(yáng)性治療組的整體表現(xiàn)則介于黃芪甲苷(AS-IV)中劑量治療組和高劑量治療組之間。
(2).黃芪甲苷(AS-IV)對(duì)DPN大鼠腎功能的影響DPN組大鼠的腎指數(shù)、尿蛋白排泄率和血肌酐比正常組均明顯增高，表明糖尿病大鼠的腎功能損害比較嚴(yán)重。AS-IV低中高劑量治療組血肌酐比DPN組減少，(P＜0.05或P＜0.01)；AS-IV高劑量治療組尿蛋白排泄率比DPN組明顯減少(P＜0.05)(見表1)。
表1.AS-IV對(duì)DPN大鼠腎指數(shù)，尿蛋白排泄率和血清肌酐的作用(x±s)

注正常對(duì)照組與DPN組相比，##P＜0.01實(shí)施例2黃芪甲苷(AS-IV)對(duì)DPN大鼠血糖和糖化血紅蛋白的影響1.材料和方法(同實(shí)施例1)2結(jié)果DPN組大鼠的血糖和糖化血紅蛋白(HbA1C)明顯高于正常對(duì)照組，有非常顯著性差異(P＜0.01)。AS-IV低劑量治療組大鼠的血糖和HbA1C與DPN組相比，血糖下降不明顯；而AS-IV中高劑量治療組與DPN組比較，表現(xiàn)出明顯的降血糖作用(P＜0.01)，且HbA1C也明顯降低(P＜0.05)(見表2)。
表2.AS-IV對(duì)DPN大鼠血糖和糖化蛋白的作用(x±s)

注NS組與DPN組相比，##P＜0.01；藥物治療組與DPN組相比，*P＜0.05，**P＜0.01實(shí)施例3黃芪甲苷(AS-IV)對(duì)DPN大鼠的促胰島素分泌作用AS-IV對(duì)DPN大鼠的促胰島素分泌作用正常組大鼠血漿胰島素的含量比DPN組顯著增多(P＜0.01)，AS-IV低劑量治療組胰島素含量?jī)H輕微增加，AS-IV中高劑量組血漿胰島素的含量比DPN組明顯增多(P＜0.05)，提示AS-IV具有促胰島素分泌的作用。(見表3，)。
表3.AS-IV對(duì)DPN大鼠血漿胰島素的作用(x±s)

注NS組與DPN組相比，##P＜0.01；藥物治療組與DPN組相比，*P＜0.05，**P＜0.01實(shí)施例4黃芪甲苷(AS-IV)對(duì)DPN大鼠神經(jīng)組織AR和紅細(xì)胞AR的抑制作用1材料和方法(同實(shí)施例1)2結(jié)果DPN組大鼠坐骨神經(jīng)和紅細(xì)胞中AR活性較正常組顯著升高(P＜0.01)，表明高血糖時(shí)組織中AR活性被顯著激活。AS-IV中高劑量治療組AR活性較DPN組低(P＜0.01)，表明AS-IV對(duì)AR有抑制作用。EPS治療組AR活性與AS-IV中高劑量組接近，顯著低于DPN組(P＜0.01)，對(duì)AR表現(xiàn)出很強(qiáng)的抑制作用(見表4)。
表4.AS-IV對(duì)DPN大鼠神經(jīng)組織和紅細(xì)胞醛糖還原酶的作用(x±s)

注NS組與DPN組相比，##P＜0.01；藥物治療組與DPN組相比，**P＜0.01
實(shí)施例5黃芪甲苷(AS-IV)對(duì)糖尿病腎病大鼠的抗氧化作用及對(duì)DPN大鼠尿中COX-2的影響1材料和方法(同實(shí)施例1)2結(jié)果(1).黃芪甲苷(AS-IV)對(duì)DPN大鼠神經(jīng)組織的抗氧化作用DPN組大鼠與正常大鼠相比，坐骨神經(jīng)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)的活力明顯降低(P＜0.01)。AS-IV低中高劑量治療組坐骨神經(jīng)GSH-Px的活力比DPN組顯著增加(P＜0.05，P＜0.01)(見表5)。
表5.AS-IV對(duì)DPN大鼠神經(jīng)組織谷胱甘肽-過(guò)氧化物酶的作用(x±s)

注NS組與DPN組相比，##P＜0.01；藥物治療組與DPN組相比，*P＜0.05，**P＜0.01(2).黃芪甲苷(AS-IV)對(duì)對(duì)DPN大鼠尿中COX-2的影響正常組大鼠尿PGE2和TXB2排泄率極低，DPN組大鼠PGE2的排泄率是正常組的9倍，TXB2的排泄率是正常組的7倍，表明糖尿病狀態(tài)下COX-2/COX-1活性大幅增加。AS-IV低中高劑量組的PGE2排泄率較DPN組明顯減少(P＜0.05或P＜0.01)，說(shuō)明AS-IV能抑制COX-2的活性；而TXB2排泄率的降低則不明顯，表明AS-IV對(duì)COX-1的抑制作用有限(見表6)。
表6.AS-IV對(duì)DPN大鼠尿PGE2和TXB2排泄率的作用(x±s)

注NS組與DPN組相比，##P＜0.01；藥物治療組與DPN組相比，*P＜0.05，
實(shí)施例6黃芪甲苷(AS-IV)對(duì)DPN大鼠神經(jīng)組織AGEs和血清AGEs的影響1材料和方法(同實(shí)施例1)2結(jié)果DPN組大鼠神經(jīng)組織中的AGEs相對(duì)含量和血清中的AGEs相對(duì)含量與正常對(duì)照組相比明顯升高，有非常顯著性差異(P＜0.01)。AS-IV低劑量治療組的神經(jīng)和血清中AGEs含量較DPN組下降不明顯，ASI中高劑量治療組降低神經(jīng)和血清中AGEs含量的作用非常顯著(P＜0.01，或P＜0.05)。EPS治療組神經(jīng)和血清中AGEs含量也都有顯著性降低(P＜0.01)，說(shuō)明AS-IV和EPS有降低AGEs的作用，且ASI的作用呈劑量依賴性(見表7)。
表7.AS-IV對(duì)DPN大鼠神經(jīng)組織AGEs和血清AGEs的作用(x±s)

注NS組與DPN組相比，##P＜0.01；藥物治療組與DPN組相比，*P＜0.05，**P＜0.01實(shí)施例7黃芪甲苷(AS-IV)對(duì)DPN大鼠擺尾溫度和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度的影響1材料和方法(同實(shí)施例1)2結(jié)果DPN病理模型組大鼠的擺尾溫度值與正常組大鼠相比，顯著增高。AS-IV中高劑量治療組甩尾溫度均比DPN組低，有非常顯著性差異(P＜0.01)。運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度測(cè)定結(jié)果表明，正常組大鼠MNCV均值54.42m/s，符合正常生理情況下的神經(jīng)傳導(dǎo)速度，DPN組的傳導(dǎo)速度較正常組大鼠顯著降低(P＜0.01)，而AS-IV中高劑量組對(duì)DPN的傳導(dǎo)速度下降有顯著的改善作用(P＜0.01)。EPS對(duì)DPN大鼠的擺尾溫度和MNCV均有顯著的改善作用(P＜0.01)(見表8)。
表8.AS-IV對(duì)DPN大鼠擺尾溫度值和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度的作用(x±s)

注NS組與DPN組相比，##P＜0.01；藥物治療組與DPN組相比，*P＜0.05，**P＜0.01實(shí)施例8黃芪甲苷(AS-IV)對(duì)DPN大鼠坐骨神經(jīng)組織和紅細(xì)胞Na+-K+-ATP酶活性的影響1材料和方法(同實(shí)施例1)2結(jié)果DPN組大鼠神經(jīng)組織和紅細(xì)胞Na+-K+-ATP酶活性較正常組顯著降低(P＜0.01)。
與DPN組相比，AS-IV低中高劑量治療組均能顯著地提高糖尿病大鼠Na+-K+-ATP酶活性(P＜0.05，或P＜0.01)。陽(yáng)性藥EPS治療組也能顯著提高DPN組大鼠神經(jīng)組織和紅細(xì)胞膜Na+-K+-ATP酶活性(P＜0.05，或P＜0.01)(見表9)。
表9.AS-IV對(duì)DPN大鼠坐骨神經(jīng)組織和紅細(xì)胞Na+-K+-ATP酶活性的作用(x±s)

注NS組與DPN組相比，##P＜0.01；藥物治療組與DPN組相比，*P＜0.05，**P＜0.01實(shí)施例9黃芪甲苷(AS-IV)對(duì)DPN大鼠神經(jīng)組織形態(tài)學(xué)的影響1材料和方法(同實(shí)施例1)
2結(jié)果(1)黃芪甲苷(AS-IV)對(duì)DPN大鼠神經(jīng)組織光鏡下形態(tài)學(xué)的影響與正常大鼠相比，DPN組大鼠坐骨神經(jīng)神經(jīng)外膜有大量的伊紅色無(wú)結(jié)構(gòu)的沉積物(糖基化蛋白)，并伴有纖維化形成。AS-IV低劑量組大鼠的以上形態(tài)學(xué)病變僅見輕微改善，而AS-IV中高劑量組和EPS組的形態(tài)學(xué)改善則較為明顯(見表10)。
表10.AS-IV對(duì)DPN大鼠神經(jīng)外膜糖基化蛋白的作用

(2)黃芪甲苷(AS-IV)對(duì)DPN大鼠神經(jīng)組織電鏡下形態(tài)學(xué)的影響NS組大鼠有髓神經(jīng)纖維表面Schwann細(xì)胞膜完整，髓鞘結(jié)構(gòu)清晰，電子密度一致，軸突內(nèi)軸絲結(jié)構(gòu)清晰；DPN組大鼠有髓神經(jīng)纖維髓鞘厚度不一，電子密度不等，軸突有明顯的節(jié)段性脫髓鞘現(xiàn)象，且Ranvier結(jié)分布不均。AS-IV低劑量組有髓神經(jīng)纖維髓鞘厚度不一，軸突有比較明顯的脫髓鞘改變；AS-IV中高劑量和EPS組病理改變則明顯減輕(Fig11.)神經(jīng)纖維圖像定量分析結(jié)果，DPN組大鼠的有髓纖維面積比正常組顯著減少，而有髓纖維密度反而增加，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。AS-IV低中高劑量組和EPS組的有髓纖維面積比正常組顯著減少，但比DPN組顯著增加(P＜0.05，或P＜0.01)，AS-IV低中高劑量組的有髓纖維密度比正常組增加，ASI低高劑量組比DPN組減少(P＜0.05，或P＜0.01)。各組的軸突/髓鞘比值無(wú)顯著變化(見表11)。
表11.AS-IV對(duì)DPN大鼠腓腸神經(jīng)中有髓纖維為形態(tài)學(xué)的作用(x±s)

注NS組與DPN組相比，##P＜0.01；藥物治療組與DPN組相比，*P＜0.05，**P＜0.0權(quán)利要求
1.黃芪甲苷在制備防治糖尿病周圍神經(jīng)病變的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃芪甲苷，其特征是在黃芪甲苷中加入適當(dāng)?shù)妮o料，用常規(guī)的制備方法可以制成片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液。
全文摘要
本發(fā)明公開了黃芪甲苷的新用途，即在制藥中的新應(yīng)用。實(shí)際上是涉及黃芪甲苷在制備治療糖尿病周圍神經(jīng)病變藥物中的應(yīng)用。經(jīng)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究證明芐達(dá)賴氨酸具有非常顯著的降低血糖和糖化血紅蛋白以及促胰島素分泌的作用，能增加坐骨神經(jīng)GSH－PX的活力，抑制COX－2的活力，BDL對(duì)DPN大鼠有顯著的抗氧化和抗炎作用；具有顯著降低神經(jīng)和血清中AGES的含量，還具有顯著降低醛糖還原酶(AR)的活性，能提高痛閾，提高糖尿病大鼠外圍神經(jīng)內(nèi)Na
文檔編號(hào)A61K9/16GK1759843SQ20051009427
公開日2006年4月19日 申請(qǐng)日期2005年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月8日
發(fā)明者張銀娣, 余俊先, 孫視, 沈建平, 張涵慶, 劉玥輝 申請(qǐng)人:南京醫(yī)科大學(xué)