專利名稱：一種注射用丹紅凍干粉針劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種丹紅制劑，具體涉及一種含丹參、紅花有效成分的注射用凍干粉針及其制備方法。
背景技術(shù)：
丹參，又名血生根、赤參、血參、紅根。為唇形科植物丹參Salviamiltiorrhiza Bge.根及根莖。丹參為傳統(tǒng)常用中藥材，有近2000年應(yīng)用歷史，明代《本草綱目》載“丹參有活血，通心包絡(luò)”的功效。丹參有效成份主要由水溶性成份酚酸類化合物和脂溶性成份丹參酮類化合物組成。丹參具有擴展血管、降低血壓、抗血栓、改善微循環(huán)、抗菌消炎的功效，對治療冠心病、心絞痛、心律過速、痤瘡等病癥具有顯著的療效。臨床廣泛用于心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、病毒感染等疾病的治療。丹參的傳統(tǒng)應(yīng)用方法為水煎液。
紅花，又名杜紅花、懷紅花、川紅花、草紅花、炒紅花。為菊科植物紅花Carthamus tinctorius L.的干燥花。紅花味辛，性溫。歸心、肝經(jīng)。紅花的藥理作用主要為活血化瘀，擴張血管，增加冠狀血流量及抗血栓形成，臨床上主要用于心血管系統(tǒng)疾病的防治，如防治動脈粥樣硬化，冠心病、脈管炎、心絞痛等。紅花還可以治療糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病腎臟損害、脊髓中央癥群、皮膚結(jié)節(jié)性紅斑、藥物性鼻炎等。紅花主要成分為黃酮類化合物，包括紅花黃色素、紅花素、紅花苷等多種有效成份，多為水溶性物質(zhì)。
丹紅注射液為丹參、紅花復(fù)方制劑，兼具丹參與紅花的藥理作用，研究證明具有活血化瘀、調(diào)經(jīng)止痛，擴張血管，增加冠狀血流量，降低血液粘度，清除自由基等作用。臨床廣泛用于治療冠心病、心絞痛、心肌梗塞、腦血栓等疾病。目前的丹參、紅花復(fù)方制劑為注射液，是采用常規(guī)的水提醇沉的方法制得的，不僅不利于產(chǎn)品的貯存和運輸，而且質(zhì)量和性能不穩(wěn)定，不利于臨床應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是公開一種注射用丹紅凍干粉針劑及其制備方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷。
本發(fā)明的注射用丹紅凍干粉針劑凍干前的組分和重量份數(shù)包括丹參和紅花的有效成分 0.1～10份賦形劑0.001～10份水0.01～5份使凍干前的溶液的pH為5.0～6.0的pH調(diào)節(jié)劑；所說的賦型劑是制劑學(xué)上可接受的任意常用的凍干賦型劑，優(yōu)選的賦型劑為甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖或右旋糖酐中的一種或幾種的混合物；所說的pH調(diào)節(jié)劑選自氫氧化鈉、碳酸氫鈉、碳酸鈉或鹽酸、磷酸、硝酸、硫酸中的一種或其混合物。
所說的丹參和紅花的有效成分是采用如下重量份數(shù)的原料藥制備的丹參1～5份，紅花1～5份；丹參和紅花的有效成分的制備方法為水提醇沉法，具體包括如下步驟(1)取丹參和紅花兩味藥材，分別加入5～15倍量的水，煎煮1～3小時，過濾；(2)濃縮至相對密度為1.10-1.20(約1.16)的清膏，加入重量濃度為80～95％的乙醇，使含醇量達到75％，冷藏15～30小時；(3)過濾，蒸發(fā)揮去乙醇至相對密度為1.00-1.10(約1.06)的清膏，加入重量濃度為80～95％的乙醇，使含醇量達到80％，冷藏15～30小時；(4)過濾，蒸發(fā)揮去乙醇至相對密度為1.00-1.10(約1.06)的清膏，用重量濃度為10～50％的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至8.5～9.5，煮沸0.5～2小時，1M鹽酸調(diào)節(jié)pH至5.5～6.5，過濾，加入重量濃度為80～95％的乙醇，使含醇量達到85％，冷藏15～30小時；(5)過濾，蒸發(fā)揮去乙醇至相對密度為1.10-1.20(約1.14)的清膏，加入總重量75％的水，即獲得丹參和紅花的有效成分。
本發(fā)明的注射用丹紅凍干粉針劑的制備方法包括如下步驟用重量濃度為20～50％的pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)丹參和紅花的有效成分的pH至5.0-6.0，加入賦形劑，溶解，補水至全量，過中空纖維微孔濾膜(截留分子量1000～10000)，除菌，灌裝，凍干，壓蓋，即獲得產(chǎn)品；本發(fā)明的丹紅凍干粉針劑的使用方法，與其他的凍干粉針劑相同，注射前，用滅菌注射用水溶解，配制成為重量濃度為2～80％的注射液，通過靜脈滴注途徑施加于需要治療的患者，劑量一般為200～800mg/公斤體重。
本發(fā)明的一種丹紅凍干粉針劑制備工藝，根據(jù)丹參中丹參素鈉和原兒茶醛均為水溶性成分，紅花中的黃酮類成分也易溶于水的性質(zhì)，采用直接水提法，然后醇沉除雜質(zhì)的提取方法，有效的保留了丹參中的酚酸類和紅花中的黃酮類有效成分。優(yōu)于國家藥品監(jiān)督管理局國家中成藥標準匯編(內(nèi)科 心系 分冊)“丹紅注射液”中，丹參稀乙醇溫浸兩次，合并紅花水溫浸兩次的提取工藝。應(yīng)用本發(fā)明方法制得的一種丹紅凍干粉針制劑疏松多孔、復(fù)溶性好，活性成分不被破壞，穩(wěn)定性得以提高，便于保證產(chǎn)品的質(zhì)量，同時也利于貯存和運輸。
具體實施例方式
實施例1直接水提法和先醇浸再水提丹參總酚酸的比較實驗丹參能夠增加冠狀動脈血流量、降血脂、抑制血栓形成或抗血栓、改善微循環(huán)作用。其主要有效成分為水溶性酚性酸丹參素鈉和原兒茶醛。脂溶性二萜醌類丹參酮IIA。本實驗以丹參素鈉和原兒茶醛為指標，比較丹參水溶性成分提取方法的優(yōu)劣。
1儀器與試藥液相泵LC-10ATvp，日本島津儀器公司；檢測器SPD-10vp，日本島津儀器公司；柱溫箱CTO-10Asvp，日本島津儀器公司；色譜柱C18200mm×4.6mm，10μm，大連依利特分析儀器有限公司；色譜工作站浙江大學(xué)智能信息研究所N2000雙通道色譜工作站；甲醇高效液相專用，江蘇淮陰塑料制品廠精細化工研究所；冰醋酸分析純，廣東汕頭市西隴化工廠。
2、方法與結(jié)果(1)色譜條件色譜柱C18200mm×4.6mm，10μm，大連依利特分析儀器有限公司；流動相甲醇∶1％冰醋酸＝13∶87；流速1.0ml/min；檢測波長280nm；柱溫25℃；定量方法外標法；丹參素鈉對照品保留時間為5.5min；原兒茶醛對照品保留時間為9min。
(2)含量測定方法對照品溶液的制備 精密稱取丹參素鈉、原兒茶醛對照品適量，分別加水制成每1ml各含50μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備供試品A取丹參干燥根150克，分別加稀乙醇900ml，80℃水浴，溫浸兩次，每次1小時，過濾，濾渣分別加水900ml，80℃水浴，溫浸兩次，每次1小時，過濾，合并各濾液，回收溶液至100ml，即得。
供試品B取丹參干燥根150克，分別加水1500ml，煎煮兩次，每次1小時，過濾，合并濾液，回收至100ml，即得。
(3)標準曲線的制備丹參素鈉在0.01～0.10mg/mL的濃度范圍內(nèi)與其相應(yīng)的吸收峰面積呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程A＝7.0×106C相關(guān)系數(shù)r＝0.9995。
原兒茶醛在0.01～0.10mg/mL的濃度范圍內(nèi)與其相應(yīng)的吸收峰面積呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程A＝5×107C相關(guān)系數(shù)r＝0.9997。
(4)精密度試驗精密量取供試品溶液10μl，連續(xù)進樣六次，丹參素鈉的RSD為0.30％；原兒茶醛的RSD為0.10％。
(5)加樣回收率試驗測定三個濃度梯度，每個濃度制備三個供試品。丹參素鈉的平均回收率為101.58，RSD為0.30％；原兒茶醛的平均回收率為99.50，RSD為0.40％。
(6)樣品測定 吸取供試品溶液10μl，進樣，根據(jù)外標法計算含量，結(jié)果如下

實施例2規(guī)格(1000瓶)(1)取藥材丹參7500g和紅花2500g，加入10倍量的水，煎煮兩次，每次1小時，過濾，合并濾液。
(2)濃縮至相對密度為1.18的清膏，加入90％的乙醇，使含醇量達到75％，冷藏24小時，。
(3)過濾，回收乙醇至相對密度為1.04的清膏，加入95％的乙醇，使含醇量達到80％，冷藏24小時。
(4)過濾，回收乙醇至相對密度為1.07的清膏，40％氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至9.0，加熱煮沸1小時，1M鹽酸調(diào)節(jié)pH至6.0，過濾，加入95％的乙醇，使含醇量達到85％，冷藏24小時。
(5)過濾，回收乙醇至相對密度為1.12的清膏，加入總重量75％的水。
(6)過濾，用重量濃度為1M鹽酸調(diào)節(jié)pH至5.81，加入注射用甘露醇1500g，溶解，補水至5000ml，混勻，過中空纖維微孔濾膜(截留分子量5000)，除菌，灌裝，凍干，壓蓋即得。
實施例3規(guī)格(1000瓶)(1)取藥材丹參7500g和紅花1500g，加入10倍量的水，煎煮兩次，每次1小時，過濾，合并濾液。
(2)濃縮至相對密度為1.15的清膏，加入90％的乙醇，使含醇量達到75％，冷藏24小時，。
(3)過濾，回收乙醇至相對密度為1.06的清膏，加入95％的乙醇，使含醇量達到80％，冷藏24小時。
(4)過濾，回收乙醇至相對密度為1.08的清膏，40％氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至9.0，加熱煮沸1小時，1M鹽酸調(diào)節(jié)pH至6.0，過濾，加入95％的乙醇，使含醇量達到85％，冷藏24小時。
(5)過濾，回收乙醇至相對密度為1.17的清膏，加總重量75％的水。
(6)過濾，重量濃度為4％的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至5.65，加入右旋糖酐1200g、注射用乳糖1000g，溶解，補水至5000ml，混勻，過中空纖維微孔濾膜(截留分子量5000)，除菌，灌裝，凍干，壓蓋即得。
實施例4規(guī)格(1000瓶)(1)取藥材丹參7500g和紅花1500g，加入10倍量的水，煎煮兩次，每次1小時，過濾，合并濾液；(2)濃縮至相對密度為1.13的清膏，加入90％的乙醇，使含醇量達到75％，冷藏24小時；(3)過濾，回收乙醇至相對密度為1.04的清膏，加入95％的乙醇，使含醇量達到80％，冷藏24小時；(4)過濾，回收乙醇至相對密度為1.05的清膏，40％氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至9.0，加熱煮沸1小時，1M鹽酸調(diào)節(jié)pH至6.0，過濾，加入95％的乙醇，使含醇量達到85％，冷藏24小時；(5)過濾，回收乙醇至相對密度為1.14的清膏，加總重量75％的水；(6)過濾，重量濃度為30％的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至5.83，加入右旋糖酐1500g、注射用蔗糖1200g，溶解，補水至5000ml，混勻，過中空纖維微孔濾膜(截留分子量5000)，除菌，灌裝，凍干，壓蓋即得。
實施例5穩(wěn)定性試驗結(jié)果1、注射用丹紅實施例1穩(wěn)定性試驗結(jié)果見表1。
表1 注射用丹紅實施例1穩(wěn)定性試驗結(jié)果


2、注射用丹紅實施例2穩(wěn)定性試驗結(jié)果見表2。
表2 注射用丹紅實施例2穩(wěn)定性試驗結(jié)果


3、注射用丹紅實施例3穩(wěn)定性試驗結(jié)果見表3。
表3注射用丹紅實施例3穩(wěn)定性試驗結(jié)果


穩(wěn)定性試驗結(jié)論對注射用丹紅實施例1、實施例2、實施例3三批中試樣品的初步穩(wěn)定性試驗?？己俗⑸溆玫ぜt的性狀、鑒別、澄明度、pH值、水分、無菌、過敏性、溶血性、刺激性、相關(guān)成分、含量，經(jīng)過九個月的考察，結(jié)果表明，所有項目指標均無明顯變化，符合臨床用注射用丹紅質(zhì)量標準草案，實施例6藥理毒理研究資料綜述一、主要藥效學(xué)研究犬冠脈結(jié)扎心肌缺血實驗結(jié)果表明，注射用丹紅8g生藥/kg、4g生藥/kg、2g生藥/kg對各時間點結(jié)扎犬收縮壓(SAP)、舒張壓(DAP)、平均壓(MAP)、心率(HR)、血清肌酸激酶(CK)均無明顯影響(P＞0.05)。該藥8g生藥/Kg能極顯著降低結(jié)扎犬梗塞心肌重量(P＜0.01)，極顯著降低梗塞區(qū)/心室百分率(P＜0.01)；注射用丹紅4g生藥/Kg、2g生藥/Kg能顯著降低結(jié)扎犬梗塞心肌重量、梗塞區(qū)/心室百分率(P＜0.05)。
注射用丹紅8g生藥/Kg能極顯著減少結(jié)扎犬0分鐘、5分鐘、20分鐘、30分鐘、120分鐘ΔN-ST個數(shù)(P＜0.01)，明顯減少結(jié)扎犬10分鐘、60分鐘ΔN-ST個數(shù)(P＜0.05)；注射用丹紅4g生藥/Kg能極顯著減少結(jié)扎犬0分鐘、20分鐘、30分鐘ΔN-ST個數(shù)(P＜0.01)，顯著減少結(jié)扎犬5分鐘、10分鐘、60分鐘、120分鐘ΔN-ST個數(shù)(P＜0.05)；注射用丹紅2g生藥/Kg能極顯著減少結(jié)扎犬0分鐘、20分鐘ΔN-ST個數(shù)(P＜0.01)，顯著減少結(jié)扎犬5分鐘、10分鐘、30分鐘、60分鐘、120分鐘ΔN-ST個數(shù)(P＜0.05)。
注射用丹紅8g生藥/kg能極顯著減少結(jié)扎犬5分鐘、30分鐘Δ∑-ST(P＜0.01)，顯著減少結(jié)扎犬10分鐘、20分鐘、60分鐘、120分鐘Δ∑-ST(P＜0.05)；注射用丹紅4g生藥/kg能極顯著減少結(jié)扎犬30分鐘Δ∑-ST(P＜0.01)，顯著減少結(jié)扎犬0分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘、60分鐘120分鐘Δ∑-ST(P＜0.05)；注射用丹紅2g生藥/kg能顯著減少結(jié)扎犬0分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘、30分鐘、60分鐘、90分鐘120分鐘Δ∑-ST(P＜0.05)。
注射用丹紅8g生藥/kg、4g生藥/kg能極顯著增加60分鐘、120分鐘結(jié)扎犬血清超氧化物歧化酶(SOD)(P＜0.01)；注射用丹紅2g生藥/kg能極顯著增加60分鐘結(jié)扎犬血清SOD(P＜0.01)，能明顯增加120分鐘犬血清SOD(P＜0.05)。
注射用丹紅8g生藥/kg、4g生藥/kg能極明顯降低60分鐘、120分鐘結(jié)扎犬血清血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)(P＜0.01)。
注射用丹紅8g生藥/kg能極顯著降低60分鐘結(jié)扎犬血清丙二醛(MDA)(P＜0.01)，能顯著降低120分鐘結(jié)扎犬血清MDA(P＜0.05)；注射用丹紅4g生藥/Kg能極顯著降低60分鐘結(jié)扎犬血清MDA(P＜0.01)，明顯降低120分鐘結(jié)扎犬血清MDA(P＜0.05)。
注射用丹紅8g生藥/kg能極顯著降低60分鐘結(jié)扎犬血清乳酸脫氫酶(LDH)(P＜0.01)，能顯著降低120分鐘結(jié)扎犬血清LDH(P＜0.05)；注射用丹紅4g生藥/kg能極顯著降低60分鐘結(jié)扎犬血清LDH(P＜0.01)，顯著降低120分鐘結(jié)扎犬血清LDH(P＜0.05)。
心臟血流動力學(xué)試驗結(jié)果表明，注射用丹紅8g生藥/kg、4g生藥/kg、2g生藥/kg對左心室舒張期末壓LVED、零負荷時左心室最大收縮力(Vpm)、心肌舒張參數(shù)(-dp/dtmax)、心肌耗氧指數(shù)TTI(mmHg.beats)均無明顯影響(P＞0.05)。
注射用丹紅4g生藥/kg能明顯降低5分鐘犬收縮壓(SAP)(P＜0.05)。注射用丹紅8g生藥/kg能明顯降低1分鐘、5分鐘、10分鐘、15分鐘、45分鐘、60分鐘犬舒張壓(DAP)(P＜0.05)；注射用丹紅4g生藥/kg能極明顯降低5分鐘、10分鐘、15分鐘、30分鐘犬舒張壓(DAP)(P＜0.01)，能顯著降低45分鐘、60分鐘、90分鐘、120分鐘犬舒張壓(DAP)(P＜0.05)。注射用丹紅2g生藥/kg能極明顯降低30分鐘45分鐘犬舒張壓(DAP)(P＜0.01)，明顯降低1分鐘、5分鐘、10分鐘、45分鐘犬舒張壓(DAP)(P＜0.05)。注射用丹紅8g生藥/kg能明顯降低1分鐘、5分鐘、10分鐘、犬平均動脈壓(MAP)(P＜0.05)；注射用丹紅4g生藥/kg能極顯著降低5分鐘、10分鐘犬平均動脈壓(MAP)(P＜0.01)能明顯降低1分鐘、15分鐘、30分鐘犬平均動脈壓(MAP)(P＞0.05)。
注射用丹紅8g生藥/kg能極顯著增加10分鐘、30分鐘、45分鐘、60分鐘、90分鐘犬冠脈流量(CF)(P＜0.01)能明顯增加15分鐘、120分鐘犬冠脈流量(CF)(P＜0.05)；注射用丹紅4g生藥/kg能極顯著增加30分鐘、45分鐘犬冠脈流量(CF)(P＜0.01)，顯著增加1分鐘、15分鐘、60分鐘、90分鐘、120分鐘犬冠脈流量(CF)(P＜0.05)；注射用丹紅2g生藥/kg能明顯增加1分鐘、10分鐘、15分鐘、90分鐘犬冠脈流量(CF)(P＜0.05)。
注射用丹紅8g生藥/kg能極顯著降低1分鐘、5分鐘、10分鐘、15分鐘、45分鐘、60分鐘犬總外周阻力(TPR)(P＜0.01)，顯著降低30分鐘、90分鐘、120分鐘犬總外周阻力(TPR)(P＜0.05)；注射用丹紅4g生藥/kg能極顯著降低1分鐘、5分鐘、10分鐘、15分鐘、45分鐘犬總外周阻力(TPR)(P＜0.01)，顯著降低60分鐘犬總外周阻力(TPR)(P＜0.05)。
注射用丹紅4g生藥/kg能極顯著降低1分鐘、15分鐘犬心率(HR)(P＞0.01)。
注射用丹紅8g生藥/kg能明顯增加1分鐘犬心輸出量(CO)(P＜0.05)；注射用丹紅4g生藥/kg能明顯增加1分鐘、30分鐘、45分鐘、60分鐘犬心輸出量(CO)(P＜0.05)。
注射用丹紅8g生藥/kg能極顯著增加60分鐘犬每搏輸出量(SV)(P＜0.01)能明顯增加1分鐘、10分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、90分鐘犬每搏輸出量(SV)(P＜0.05)；注射用丹紅4g生藥/kg能極顯著增加1分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘犬每搏輸出量(SV)(P＜0.01)，能明顯增加5分鐘、10分鐘、60分鐘、90分鐘犬每搏輸出量(SV)(P＜0.05)。
注射用丹紅8g生藥/kg能極明顯增加15分鐘犬左心室每搏做功(LVSWJ/beat)(P＜0.01)，能明顯增加1分鐘、5分鐘、10分鐘左心室每搏做功(LVSWJ/beat)(P＜0.05)；注射用丹紅4g生藥/kg能明顯增加30分鐘犬左心室每搏做功(LVSW J/beat)(P＜0.05)；注射用丹紅2g生藥/kg能明顯增加30分鐘90分鐘左心室每搏做功(LVSW J/beat)(P＜0.05)。
注射用丹紅4g生藥/kg能降低10分鐘、15分鐘犬左心室最大內(nèi)壓LVP(P＜0.05)。
注射用丹紅8g生藥/kg能明顯增加1分鐘、5分鐘、30分鐘犬心肌收縮參數(shù)(+dp/dtmax)(P＜0.05)；注射用丹紅4g生藥/kg能明顯增加30分鐘、45分鐘、60分鐘、120分鐘犬心肌收縮參數(shù)(+dp/dtmax)(P＜0.05)。
注射用丹紅8g生藥/Kg 1分鐘、5分鐘左心室心肌耗氧量(mlO2/min/g)顯著降低(P＜0.05)；注射用丹紅4g生藥/Kg 1分鐘左心室心肌耗氧量(mlO2/min/g)極顯著降低(P＜0.01)；4g生藥/Kg 5分鐘、10分鐘左心室心肌耗氧量(mlO2/min/g)顯著降低(P＜0.05)。
大鼠垂體后葉素致心肌缺血實驗表明，給藥前后自身比較可知，模型組5sec、10secT波明顯抬高，30sec、1min、5minT波明顯降低。陽性藥組只有1minT波顯著降低。高劑量組、中劑量組均無明顯降低，低劑量組10sec、30sec、1min、2minT波明顯降低。由給藥前后差值的組間比較可知，高劑量在5sec、10secT波前后差值(mv)均有顯著性降低(P＜0.05)，30sec有顯著性升高(P＜0.05)；中劑量在5sec、10sec有極顯著降低(P＜0.01)，30sec和5min有顯著性升高(P＜0.05)，低劑量在5sec極顯著降低(P＜0.01)，10see有顯著性降低(P＜0.05)。
給藥前后自身比較可知，模型組在給藥后5sec、10sec、2min、5min、10min、20min J點均明顯抬高。高劑量組5min、10min，中劑量組10sec、2min、5min、10min，低劑量組10min的J點明顯抬高。由給藥前后差值的組間比較可知，高劑量組在5sec、10sec J點前后差值(mv)均有極顯著性降低(P＜0.01)；5min、10min、20min J點前后差值(mv)有顯著性降低(P＜0.05)。中劑量在5sec有極顯著降低(P＜0.01)，10sec和20min有顯著性降低(P＜0.05)。低劑量在5sec極顯著降低(P＜0.01)，10sec有顯著性降低(P＜0.05)。
注射用丹紅各劑量組p-p間期(s)與模型組比較沒有顯著性差異。
豚鼠離體心臟灌注實驗表明，與模型組比較，高劑量組、中劑量組在復(fù)灌10min、20min、30min均有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)，可增強缺血再灌心肌收縮力。
與模型組比較，高劑組量在復(fù)灌10min、20min、30min，中劑量在復(fù)灌10min、20min、30min，低劑量在復(fù)灌30min均有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)，可增加離體心臟缺血再灌冠脈流量。
各給藥組對心率均沒有顯著影響(P＞0.05)。
小鼠耐缺氧實驗表明，注射用丹紅48和24g生藥/kg能極顯著延長小鼠常壓缺氧死亡時間(P＜0.01)。
對大鼠血液流變性及家兔體外血小板聚集率的影響實驗表明，注射用丹紅高、中、低三個劑量均能明顯降低模型大鼠全血粘度，與模型組比較差異均有顯著性(P＜0.05，P＜0.01)。
高、低兩個劑量組可降低大鼠紅細胞聚集指數(shù)，與模型組比較差異均有顯著性(P＜0.05)。
各給藥組均有顯著抑制ADP誘導(dǎo)大鼠最大血小板聚集率的作用。
注射用丹紅體外給藥，終濃度為444.4、222.2、111.1、55.6、27.8mg生藥/ml的各劑量對ADP誘導(dǎo)家兔血小板最大聚集率均有明顯的抑制作用，終濃度為444.4、222.2、111.1mg生藥/ml的三個劑量還能抑制血小板1min和5min聚集率，這些作用均呈劑量依賴關(guān)系(Y＝-11.24X+427.3，r＝0.814)。
注射用丹紅體外給藥，終濃度為444.4、222.2、111.1、55.6mg生藥/ml的各劑量對PAF誘導(dǎo)家兔血小板最大聚集率均有明顯的抑制作用，終濃度為444.4、222.2、111.1mg生藥/ml的三個劑量還能抑制血小板1min和5min聚集率，這些作用均呈劑量依賴關(guān)系(Y＝-10.037X+524.07，r＝0.963)。
二、一般藥理研究的試驗研究本試驗探討了注射用丹紅對家犬心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)及小鼠神經(jīng)系統(tǒng)的影響。結(jié)果表明，注射用丹紅16g生藥/kg、8g生藥/kg和4g生藥/kg三個劑量組和陰性對照組(5％葡萄糖注射液)經(jīng)股靜脈滴注給藥后180min內(nèi)，受試麻醉犬各劑量組各時間點血壓、呼吸頻率、呼吸幅度及各項心電圖指標給藥前后自身對照，無顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。表明該藥在受試劑量范圍內(nèi)對家犬心血管和呼吸系統(tǒng)均無明顯影響。
注射用丹紅對小鼠神經(jīng)系統(tǒng)試驗的結(jié)果表明，該藥96g/kg、48g/kg和24g/kg三個劑量組和陰性對照組(5％葡萄糖注射液)尾靜脈注射給藥后，三個劑量組對小鼠耳殼血管及尾色澤無明顯影響，高劑量組有部分動物出現(xiàn)活動減少，中、低劑量組小鼠未見活動明顯減少。該藥對小鼠機能協(xié)調(diào)無明顯影響。注射用丹紅各劑量組與閾下劑量的戊巴比妥鈉無協(xié)同作用。該藥高劑量組極顯著減少小鼠自發(fā)活動次數(shù)(P＜0.01)，中、低劑量組對小鼠自發(fā)活動沒有明顯影響(P＞0.05)。
三、急性毒性實驗注射用丹紅腹腔給藥小鼠LD50為270.00g/kg，95％可信限為229.35～317.86g/kg。
注射用丹紅靜脈給藥小鼠LD50為151.88g/kg，95％可信限為131.20～175.81g/kg。
四、大鼠長期毒性試驗研究注射用丹紅160g/kg，80g/kg，40g/kg(相當于人用劑量的80倍、40倍、20倍)生藥腹腔注射給藥，每天一次，連續(xù)給藥三個月，于給藥三個月及恢復(fù)期測量動物的血液學(xué)指標、血液生化學(xué)指標，并于實驗過程中觀察動物的一般表現(xiàn)，記錄食耗量和體重變化。于給藥三個月及恢復(fù)期每組分別取20只、10只動物進行系統(tǒng)尸解，計算臟器指數(shù)，并對臟器進行病理組織學(xué)檢測。
實驗結(jié)果表明，注射用丹紅于給藥三個月及恢復(fù)期對動物的一般表現(xiàn)、進食量、體重、臟器指數(shù)及臟器組織學(xué)均無明顯影響。
注射用丹紅高劑量組于給藥三個月使得嗜堿細胞顯著降低(P＜0.05)，但其值仍在正常范圍之內(nèi)；各劑量組給藥三個月及恢復(fù)期其他血液學(xué)各項指標數(shù)值與對照組相比無明顯差異。注射用丹紅高劑量組尿素氮顯著降低(P＜0.05)，肌酐極顯著升高(P＜0.01)；中劑量組于給藥三個月谷草轉(zhuǎn)氨酶及堿性磷酸酶極顯著降低(P＜0.01)，肌酐極顯著升高(P＜0.01)；尿素氮和肌酐顯著降低(P＜0.05)?；謴?fù)期低劑量組谷丙轉(zhuǎn)氨酶和堿性磷酸酶顯著降低(P＜0.05)；但其值仍在正常范圍之內(nèi)。除此之外，各組的其他各項指標與對照組相比均無明顯差異。
五、Beagle犬長期毒性試驗注射用丹紅120g/kg，60g/kg，30g/kg生藥(相當于人用劑量的60倍、30倍、15倍)，靜脈滴注給藥，每天一次，連續(xù)給藥三個月，于給藥前、給藥三個月及恢復(fù)期測量動物的心電圖、血液學(xué)指標、血液生化學(xué)指標及尿常規(guī)指標，并于實驗過程中觀察動物的一般表現(xiàn)和體重變化。于給藥三個月及恢復(fù)期每組分別取4只、2只動物進行系統(tǒng)尸解，計算臟器指數(shù)，并對臟器進行病理組織學(xué)檢測。實驗結(jié)果表明，注射用丹紅對動物的一般表現(xiàn)、心電圖、進食量、體重、臟器指數(shù)及臟器組織學(xué)均無明顯影響。
血常規(guī)指標檢測表明，注射用丹紅低劑量組于給藥結(jié)束嗜堿粒細胞極顯著升高(P＜0.01)，但其值仍在正常范圍之內(nèi)。動物各時期的其它血液學(xué)指標數(shù)值與對照組相比均無明顯差異。血生化指標檢測表明，注射用丹紅高劑量組于給藥結(jié)束血糖值顯著降低(P＜0.05)，但其值仍在正常范圍之內(nèi)。動物各時期的其它生化學(xué)指標數(shù)值與對照組相比均無明顯差異。
尿常規(guī)檢測表明，對照組在給藥前、給藥三個月及恢復(fù)期分別有4、2、1條Beagle犬出現(xiàn)隱血，未出現(xiàn)尿蛋白；高劑量組在給藥前、給藥三個月及恢復(fù)期分別有4、1、0條Beagle犬出現(xiàn)隱血，未出現(xiàn)尿蛋白；中劑量組在給藥前、給藥三個月及恢復(fù)期分別有3、2、1條Beagle犬出現(xiàn)隱血，未出現(xiàn)尿蛋白；低劑量組在給藥前、給藥三個月及恢復(fù)期分別有5、4、1條Beagle犬出現(xiàn)隱血，未出現(xiàn)尿蛋白。上述結(jié)果表明，給藥前、給藥三個月及恢復(fù)期隱血的出現(xiàn)與藥物無明顯相關(guān)性。結(jié)果表明，注射用丹紅三個劑量組(高、中、低劑量組)于給藥三個月及恢復(fù)期對犬的各項尿常規(guī)指標無明顯影響。
六、過敏性、溶血性和局部刺激性試驗研究1、靜脈刺激性試驗以無菌操作方法向家兔右、左耳緣靜脈滴注注射用丹紅及5％葡萄糖注射液10ml/kg，每日給藥一次，連續(xù)3次，未發(fā)現(xiàn)給藥的靜脈有明顯的刺激作用，注射藥物的靜脈血管與5％葡萄糖注射液對照組相比結(jié)構(gòu)正常，未見內(nèi)皮細胞損傷、血栓形成及其他病理變化。
1.溶血試驗注射用丹紅在試管里最高濃度為0.06g/ml生藥時對家兔紅細胞無溶血和凝集作用。
2.過敏性實驗本項實驗探討豚鼠對注射用丹紅是否具有過敏反應(yīng)。結(jié)果表明，在本實驗條件下，注射用丹紅對受試動物豚鼠無致敏作用。
3.被動皮膚過敏實驗注射用丹紅被動皮膚過敏實驗表明，卵白蛋白組發(fā)生被動皮膚過敏反應(yīng)，陰性對照組和注射用丹紅組均未發(fā)生被動皮膚過敏反應(yīng)(兩組皮膚內(nèi)層斑點均值均小于5mm)。
2、肌肉刺激試驗取白色家兔4只，其中兩只分別于左、右兩側(cè)股四頭肌處以無菌操作方法肌肉注射注射注射用丹紅(0.6g/ml生藥)2ml，另兩只家兔注入等容積5％葡萄糖注射液作為對照，給藥一次，給藥部位未見明顯充血、紅腫、變性、壞死。
權(quán)利要求
1.一種注射用丹紅凍干粉針劑，其特征在于，凍干前的組分和重量份數(shù)包括丹參和紅花的有效成分0.1～10份賦形劑 0.001～10份水 0.01～5份使凍干前的溶液的pH為5.0～6.0的pH調(diào)節(jié)劑；所說的賦型劑是制劑學(xué)上可接受的任意常用的凍干賦型劑；所說的丹參和紅花的有效成分是采用如下重量份數(shù)的原料藥制備的丹參1～5份，紅花1～5份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用丹紅凍干粉針劑，其特征在于，賦型劑為甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖或右旋糖酐中的一種或幾種的混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用丹紅凍干粉針劑，其特征在于，所說的pH調(diào)節(jié)劑選自氫氧化鈉、碳酸氫鈉、碳酸鈉或鹽酸、磷酸、硝酸、硫酸中的一種或其混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的注射用丹紅凍干粉針劑，其特征在于，所說的pH調(diào)節(jié)劑選自氫氧化鈉、碳酸氫鈉、碳酸鈉或鹽酸、磷酸、硝酸、硫酸中的一種或其混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1～4任一項所述的注射用丹紅凍干粉針劑，其特征在于，丹參和紅花的有效成分的制備方法包括如下步驟(1)取丹參和紅花兩味藥材，分別加入5～15倍量的水，煎煮1～3小時，過濾；(2)濃縮至相對密度為1.10-1.20(約1.16)的清膏，加入重量濃度為80～95％的乙醇，使含醇量達到75％，冷藏15～30小時；(3)過濾，蒸發(fā)揮去乙醇至相對密度為1.00-1.10(約1.06)的清膏，加入重量濃度為80～95％的乙醇，使含醇量達到80％，冷藏15～30小時；(4)過濾，蒸發(fā)揮去乙醇至相對密度為1.00-1.10(約1.06)的清膏，用重量濃度為10～50％的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至8.5～9.5，煮沸0.5～2小時，1M鹽酸調(diào)節(jié)pH至5.5～6.5，過濾，加入重量濃度為80～95％的乙醇，使含醇量達到85％，冷藏15～30小時；(5)過濾，蒸發(fā)揮去乙醇至相對密度為1.10-1.20(約1.14)的清膏，加入總重量75％的水，即獲得丹參和紅花的有效成分。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的注射用丹紅凍干粉針劑的制備方法，其特征在于包括如下步驟用重量濃度為2～50％的pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)丹參和紅花的有效成分的pH至5.0-6.0，加入賦形劑，溶解，補水至全量，混勻，過中空纖維微孔濾膜(截留分子量1000～10000)，除菌，灌裝，凍干，壓蓋，即獲得產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種注射用丹紅凍干粉針劑及其制備方法。其組分和重量份數(shù)包括丹參和紅花的有效成分0.1～10份，賦形劑0.001～10份，水0.01～5份，使凍干前的溶液的pH為5.0～6.0的pH調(diào)節(jié)劑。應(yīng)用本發(fā)明方法制得的一種丹紅凍干粉針制劑疏松多孔、復(fù)溶性好，活性成分不被破壞，穩(wěn)定性得以提高，便于保證產(chǎn)品的質(zhì)量，同時也利于貯存和運輸。
文檔編號A61P9/12GK1742792SQ200510094740
公開日2006年3月8日 申請日期2005年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月9日
發(fā)明者宋建國, 耿伯顯, 陳玲玲 申請人:南京易川藥物研究所