專利名稱：一種控制家畜性別及防治其子宮炎的制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種控制家畜性別及防治其子宮炎的制劑配方。
背景技術(shù)：
控制家畜的遺傳和表型性別可增加選育強(qiáng)度，獲得最大的遺傳進(jìn)展，提高母畜的繁殖效率，增加畜牧業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益，再者，性別控制還可防止牛的異性孿生不育癥，它的應(yīng)用必將促進(jìn)畜牧業(yè)的發(fā)展。當(dāng)前，控制性別的方法主要有三類受精前X、Y精子分離技術(shù)，附植前胚胎的性別鑒定技術(shù)，妊娠早期胎兒性別診斷技術(shù)。
受精前X、Y精子分離技術(shù)主要包括精子的核型分析法、免疫學(xué)方法、沉降法、流式細(xì)胞儀法。精子的核型分析法是用Quinaerine對精子染色后，根據(jù)Y染色體是否產(chǎn)生熒光來區(qū)別X、Y精子，有39-47％Y染色體顯示出熒光點(F-小體)；免疫學(xué)方法是用H-Y抗血清免疫親和柱層析方法對小鼠的精液進(jìn)行分離，H-Y陽性的小鼠精z液授精后得到了90％的雄性后代；沉降法是根據(jù)非平衡沉降或密度梯度的平衡沉降原理進(jìn)行的，離心富集X精子，其富集率為94％，盡管這一結(jié)果非常理想，但是后來沒有人能重復(fù)這些數(shù)據(jù)；流式細(xì)胞儀法分離X、Y精子是根據(jù)X、Y精子的密度大小(因X染色體帶有更多的DNA)進(jìn)行的，用這項技術(shù)生產(chǎn)的所有后代的形態(tài)都很正常，豬和兔的后代經(jīng)兩代繁殖表現(xiàn)出了正常的繁殖性能(Johnson，1994)。然而，當(dāng)前用流式細(xì)胞儀分離精子這項技術(shù)的主要缺陷是分離精子的效率太低，每小時只能分離3.5×105個精子，就很難在人工授精技術(shù)的常規(guī)使用中被接受。受精前X、Y精子分離技術(shù)是利用X、Y精子之間在物理和化學(xué)方面存在差異為出發(fā)點，如精子的大小、形狀、重量、密度、活力(含運動類型和速度)、表面電荷、DNA含量以及酶活性等，這些差異為X、Y精子的分離提供了理論依據(jù)，然而，這些方法分離后的X、Y精子的比例的改變不太穩(wěn)定，同時精子活力受到影響導(dǎo)致人工受精難度加大，換句話說，這些技術(shù)日前還不能真正地應(yīng)用于畜牧生產(chǎn)。(GREENFIELD A.Gene，celland organsrecent developments in the molecular genetics of mammaliansex determination[J].Mammalian Genome，1998，9683-687；葛寶生，李善如，張忠誠，陳永福，哺乳動物的性別控制，內(nèi)蒙古畜牧科學(xué)，1998，2期P16-17)附植前胚胎的性別鑒定技術(shù)主要是指免疫學(xué)方法、X染色體連鎖酶定量法、細(xì)胞遺傳學(xué)方法(核型分析)、分子生物學(xué)方法、胚胎克隆法。免疫學(xué)方法又包括間接免疫熒光法、囊胚形成抑制法、細(xì)胞毒法。間接免疫熒光法是將胚胎在含有H-Y抗血清或單克隆抗體的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，然后再加入熒光素標(biāo)記的第一抗體，在熒光顯微鏡下觀察是否呈現(xiàn)特異熒光，White等(1987)用染色體分析法對間接免疫熒光法鑒別的牛、豬和綿羊胚胎的結(jié)果進(jìn)行了驗證，在牛胚胎中雄性符合率為85％，雌性為97％；綿羊胚胎雄性符合率為84％，雌性為85％，豬胚胎雄性符合率為77％，雌性為86％(Wbite，1987；Wach-tel，1988)，然而，該法鑒定準(zhǔn)確率不是很高，主要是因為H-Y抗原是一個弱抗原，H-Y抗血清的特異性較差，判斷熒光胚或無熒光胚參與了較多的人為主觀因素；囊胚形成抑制法是利用H-Y抗體和胚胎發(fā)育的差異來可逆地抑制雄性桑堪胚向囊胚的發(fā)育，從而達(dá)到性別鑒定的目的；細(xì)胞毒法鑒定胚胎性別是用含有H-Y抗血清及補(bǔ)體的培養(yǎng)液培養(yǎng)胚胎，表達(dá)H-Y抗原的雄性胚胎有一定程度的細(xì)胞裂解或發(fā)育受阻不能形成正常的囊胚，此類胚胎判為雄性，因這種方法對雄性胚胎有損傷性，故日前已很少使用。X染色體連鎖酶定量法是根據(jù)X染色體編碼的酶的活性雌性是雄性的兩倍這一事實，用此法鑒定胚胎性別的準(zhǔn)確率為64％，但是，鑒于X染色體失活機(jī)理和失活時間還不很清楚，加之酶活性差異甚微，故本法難以應(yīng)用。細(xì)胞遺傳學(xué)方法(核型分析)是經(jīng)典的胚胎性別鑒定法，在胚胎發(fā)育早期，雌性胚胎中的一條X染色體處于暫時失活狀態(tài)，在雌性胚胎細(xì)胞的核膜附近會出現(xiàn)一個著色較深的異染色質(zhì)小塊，稱為Barr氏小體，這種方法雖然準(zhǔn)確率達(dá)100％，但屬損傷法，再者得到中期分裂相的難度很大，也相當(dāng)費時，不適用于生產(chǎn)實際，只可用來驗證其它性別鑒定技術(shù)。分子生物學(xué)方法是從胚胎取10-20個細(xì)胞做原位雜交(Leonard等)，其胚胎性別鑒定準(zhǔn)確率為95％(81/85)，用PCR技術(shù)檢測SRY基因的有無即可判定胚胎的性別，1992年，曾溢濤和胡明信等參照人和小鼠的SRY基因序列設(shè)計了一對引物，對17枚胚胎樣本(其中4枚整胚，11枚切割胚，2枚二分胚)進(jìn)行PCR體外擴(kuò)增作對照驗證，其性別鑒定結(jié)果準(zhǔn)確率達(dá)100％，這種方法準(zhǔn)確度較高，只需取2-3個卵裂球細(xì)胞，且3h內(nèi)可完成，但是PCR擴(kuò)增SRY法的操作過程極易污染，且對胚胎有一定損傷，選出的胚胎妊娠率達(dá)到45％左右，經(jīng)濟(jì)效益不可觀。胚胎克隆法(核移植法)是將分離的卵裂球或成體細(xì)胞(核供體)與成熟并去核的卵母細(xì)胞(核受體)融合，不經(jīng)有性繁殖過程連續(xù)地復(fù)制遺傳相同的胚胎，并經(jīng)胚胎移植獲得大量性別一致的復(fù)制后代，用胚胎克隆方法來實現(xiàn)性別控制，具有誘人的前景，但日前該項技術(shù)在生產(chǎn)上還不成熟。(Johnson L A.Isolation of X-and Y-bearingspermatozoa preseletion[J].Therionenolony，1994(41)51-56；葛寶生，李善如，張忠誠，陳永福，哺乳動物的性別控制，內(nèi)蒙古畜牧科學(xué)，1998，2期P16-17)妊娠早期胎兒性別診斷技術(shù)是用核型分析、H-Y抗原、DNA探針鑒定經(jīng)羊膜穿刺得到的細(xì)胞，或者是直腸超聲波診斷法鑒定胎兒性別。這種方法只在農(nóng)場條件下鑒定牛(Curran，1992)和馬(Curran等，1989)胎兒的性別，是通過鑒別和確定生殖結(jié)節(jié)與周圍結(jié)腸的相對位置來鑒定胎兒的性別的。(聶光軍，奶牛的性別控制，中國奶牛，2002，539-41；陳從英，黃路生，陳靜波等，牛早期胚胎性別鑒定PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化研究[J]，畜牧獸醫(yī)學(xué)報2003，34(3)，209-212；朱曉華，趙力里，王志躍，家畜性別決定的機(jī)制及其控制的研究進(jìn)展[J]，動物科學(xué)與動物醫(yī)學(xué)，2001，18(1)22-24)控制外環(huán)境方法是通過調(diào)整家畜的營養(yǎng)、控制授精時間和子宮pH值等手段來實現(xiàn)對家畜性別比例的控制。母牛在飼料不足或飼喂酸性飼料類型后多產(chǎn)雄犢，反之飼料豐富或飼喂堿性飼料多產(chǎn)雌犢。排卵前一定時間輸精多產(chǎn)雌犢，控制授精時間的方法較簡便，但對掌握適時輸精的技術(shù)要求較高。Y精子對酸性環(huán)境的耐受力比X精子差，而堿性環(huán)境則相反，當(dāng)解凍液或母牛生殆道的pH值低于6.8時，Y精子的活力減弱，運動緩慢，失去了較多與卵子結(jié)合的機(jī)會故后代雄性牛犢數(shù)少，當(dāng)pH值大于7.0時，則Y精子的活力增強(qiáng)，有較多的與卵子結(jié)合的機(jī)會故后代雄性牛犢多。(姜忠玲，王國志，奶牛性別控制的研究途徑與現(xiàn)狀，黑龍江動物繁殖，第13卷第2期2004年P(guān)10-12；李馨，楊雋，郭志光，家畜性別控制研究現(xiàn)狀與展望，內(nèi)蒙古畜牧科學(xué)，1997，(2)15-18)控制外環(huán)境方法是難以穩(wěn)定其控制條件的，從而使家畜后代比例難以得到理想的控制，這種方式在生產(chǎn)上也只是輔助手段。(陳元明，蔡正華，劉殿奎等，不同授精時間對仔豬性比影響的研究，畜牧與獸醫(yī)，1996，26(3)，P251-254)子宮內(nèi)膜炎是家畜子宮粘膜的粘液性或化膿性炎癥，子宮感染是導(dǎo)致本病的主要原因。子宮內(nèi)膜炎多繼發(fā)于家畜難產(chǎn)處理、胎衣不下及子宮脫垂的治療處理過程中；家畜配種消毒不嚴(yán)格、生殖器官傳染病也是引起子宮內(nèi)膜炎的常見原因。子宮內(nèi)膜炎是引起家畜難配、難產(chǎn)的一種既常見又麻煩的不孕癥。家畜子宮內(nèi)膜炎隱性、急性、慢性病之分隱性子宮內(nèi)膜炎指家畜生殖器官無明顯異常，發(fā)情周期正常，但屢配不孕，只在發(fā)情時，從陰道流出的粘液帶有渾濁狀；急性子宮內(nèi)膜炎一般發(fā)生于流產(chǎn)后或產(chǎn)后胎衣不下時，體溫升高，食欲減退，精神沉郁，嚴(yán)重時拱背，努責(zé)，常做排尿姿勢，從陰道流出粘性或粘膿性分泌物，直腸檢查，發(fā)現(xiàn)子宮角粗大而肥厚，下沉，子宮收縮反應(yīng)微弱，觸摸時有波動感。慢性子宮內(nèi)膜炎是由急性子宮內(nèi)膜炎繼發(fā)而來，發(fā)情周期不正常，當(dāng)發(fā)情時，從陰道中可排出渾濁帶有絮狀物或膿汁的分泌物，外陰部常略帶腫脹、外翻。直腸檢查發(fā)現(xiàn)子宮角變粗、增大，收縮反映微弱，如有分泌物積聚，則感覺有輕微波動感。(北京農(nóng)業(yè)大學(xué)主編，家畜繁殖學(xué)(第二版)，農(nóng)業(yè)出版社，1988；張彥明，牛子宮內(nèi)膜炎的研究與臨床進(jìn)展，黃牛雜志，1998，24(1)，P34-37)目前治療家畜子宮內(nèi)膜炎的總體原則是消除炎癥，防止擴(kuò)散，促進(jìn)子宮機(jī)能恢復(fù)。利用抗生素、中藥或西藥清洗子宮及子宮內(nèi)用藥是當(dāng)前治療家畜子宮內(nèi)膜炎的常用方法，慢性卡他性和慢性卡他膿性子宮內(nèi)膜炎一般先用消毒性沖洗液(0.5％的來蘇兒或0.1％高錳酸鉀液)沖洗，再用5％熱鹽水沖洗，洗后灌注抗生素，待子宮病變明顯消失后，再用1％的生理鹽水或1-2％的小蘇打水沖洗，洗后灌注抗生素；慢性膿性子宮內(nèi)膜炎則先用0.1％碘溶液沖洗，再用0.1％雷佛奴兒或0.1％高錳酸鉀溶液沖洗，然后用5％的熱鹽水沖洗。當(dāng)子宮病變消失后，再用糖、小蘇打、鹽溶液(糖90克、小蘇打0.5-3克、食鹽1克、蒸餾水加至1000毫升)沖洗，然后向子宮內(nèi)灌注青霉素、鏈霉素；子宮積液、積膿及胎兒干尸化經(jīng)常先肌注苯甲酸雌二醇或己烯雌酚，待子宮頸口開張后，再肌注腦垂體后葉素或催產(chǎn)素，然后清除子宮內(nèi)容物，按卡他性或膿性子宮內(nèi)膜炎的沖洗灌注程序進(jìn)行處理，待治愈后，配種前4-8小時再向家畜子宮灌注抗生素；隱性子宮內(nèi)膜炎因病變較輕，在家畜發(fā)情當(dāng)天用1％小蘇打水或生理鹽水沖洗子宮，沖洗后導(dǎo)出洗液，再向子宮內(nèi)注入青霉素，鏈霉素或10％磺胺嘧啶鈉。在配種前4-8小時，再向子宮注入青霉素、鏈霉素；目前家畜子宮內(nèi)膜炎常用的灌注子宮的西藥有各種抗生素，如青霉素、鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、金霉素、紅霉素等和磺胺類藥物；中藥有苦參、當(dāng)歸、益母草、黃芩。以上各種方劑用量按家畜的體重定量。(Paisley L G，Mickelsen W D，Anderson P B.Mechanismsand therapy for retained fetal membrans and uterine infections ofcowsareview[J]，Theriogenology，1986，25353-381；王志榮，母牛隱性子宮炎的診斷治療，中國獸醫(yī)雜志，1995，21(10)，P43；王祖昆，黃勝，黃金祿等，新奶牛子宮炎防止藥物的研究，黑龍江動物繁殖，2003，11(4)，P7-8)利用抗生素類藥物治療子宮內(nèi)膜炎易產(chǎn)生殘留，而且過度使用抗生素，會使家畜子宮與陰道內(nèi)的有害菌群產(chǎn)生抗藥性；上述中藥復(fù)方制劑對子宮內(nèi)膜炎的治療較慢，而且難以治療中、重度子宮內(nèi)膜炎。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明利用下述方案實現(xiàn)了解決目前家畜性別控制繁育和其子宮內(nèi)膜炎治療中存在的問題。
本發(fā)明做成的制劑的主要成份和配比如下碘酊(5％)15-25ml(內(nèi)蒙古蒙東動物藥品廠)；甘油(分析純)5-20ml(天津大學(xué)化學(xué)試劑廠)；維生素B115-20ml(上海申廣動物保健品有限公司)；維生素A、D、E合劑5-10ml(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所)；氯化鈉(1％)15-25ml；(內(nèi)蒙古向陽赤峰獸藥廠)；硫酸鹽類(15-25％硫酸銅)15-25ml。(徐州摩爾醫(yī)藥試劑廠)。
將上述配伍成份按氯化鈉、硫酸鹽類、維生素B1、維生素A、D、E合劑、甘油、碘酊順序混合，在常溫下攪拌均勻。
本發(fā)明做成的制劑呈棕紅色液體，無沉淀，無懸浮顆粒。本發(fā)明做成的制劑注入家畜子宮體后約10-15小時，會隨著家畜子宮平滑肌的收縮而排出體外，制劑不會殘留在家畜子宮體內(nèi)。
本發(fā)明配方中的碘能氧化病原體胞漿蛋白的活性基因，并能與蛋白質(zhì)氨基結(jié)合使其變性，對細(xì)菌、芽胞、病毒、阿米巴原蟲都有很強(qiáng)的殺滅作用；甘油為潤滑性瀉藥，能潤滑并刺激腸壁，作用溫和。而本發(fā)明配方中的硫酸鹽類(硫酸銅)藥品性味酸疼，解毒殺蟲，止癢燥濕，止血止瀉、清熱消炎、收斂濕瘡等功效(《本草綱目》記載)，再者，硫酸鹽類(硫酸銅)易溶于水，水溶液呈弱酸性，水解的銅離子(Cu2+)能與蛋白質(zhì)結(jié)合成蛋白鹽；維生素E又叫生育酚，能維持生殖器官的正常機(jī)能，可提高子宮內(nèi)膜對雌激素的感受性作用；維生素A是維持生長，生殖和視覺功能的必需物質(zhì)，具有促進(jìn)胎兒、幼兒生長發(fā)育，增強(qiáng)人體免疫抗病的能力。
本發(fā)明做成的制劑注入家畜子宮體時，由于制劑的作用會使宮頸粘液變得粘稠濃厚，精子在里面游動受到限制，尤其是Y精子比X精子更難以穿過粘稠的宮頸粘液而與卵子結(jié)合，起到隔離一部分Y精子的作用。在用本發(fā)明做成的制劑治療家畜子宮疾病的同時，制劑中的碘、鉀、氯、鈉、碳、氫、銅和硫等離子，在丙三醇滲透壓的作用下，參與子宮內(nèi)膜組織、細(xì)胞原漿蛋白質(zhì)的結(jié)合使宮頸粘液變得粘稠濃厚，精子在里面游動受到限制，尤其是纖弱的Y精子比起魁梧強(qiáng)健的X精子更顯得元氣不足，無力穿過粘調(diào)的宮頸粘液去同卵子會見，從而影響了正常的性控比例。再者，本發(fā)明做成的制劑呈酸性，改變了家畜子宮局部環(huán)境的PH值，抑制了Y精子的活力，從而也影響了正常的性控比例，在適應(yīng)環(huán)境能力方面，X精子比Y精子強(qiáng)得多，一般來說，精子都是嗜堿而厭酸，尤以Y精子更為明顯，如果雌性家畜生殖道酸性偏高時，行動敏捷的Y精子很快變得遲鈍起來，但X精子對酸性耐受能力較強(qiáng)，受酸性環(huán)境影響不太大。
利用本發(fā)明做成的制劑改變家畜子宮內(nèi)的生理生化環(huán)境，抑制Y精子的活力，增強(qiáng)X精子授精機(jī)率，不會降低超排家畜胚胎的數(shù)量和質(zhì)量，雌性率可達(dá)80-90％。另外，由于操作簡便，成本低，比日前人工授精母牛的產(chǎn)母犢率48％提高了32％-42％，故可以在家畜生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。
具體實施例方式
本發(fā)明具體實施方式
如下在常溫下，將氯化鈉(1％)，15-25ml；硫酸鹽類(15-25％硫酸銅)，15-25ml；維生素B1，15-20ml；維生素A、D、E合劑，5-10ml；甘油(分析純)，5-20ml；碘酊(5％)，15-25ml依次混合，攪拌均勻。
家畜發(fā)情前2-4天，將本發(fā)明做成的制劑40-50ml注入其子宮內(nèi)，正常授精，產(chǎn)母率可達(dá)80-90％。
對家畜輕、中度子宮內(nèi)膜炎，將本發(fā)明做成的制劑40-50ml注入其子宮內(nèi)，間隔5-7天，連用2-3次，對家畜重子宮內(nèi)膜炎用藥3-5次，治愈率達(dá)98％以上。
實施例1配方(100ml毫升)主要成份與配比如下碘酊(5％)20ml；甘油(分析純) 10ml；維生素B1 20ml；維生素A、D、E合劑10ml；氯化鈉(1％) 20ml；硫酸銅(15-25％) 20ml。
將上述配伍成份按氯化鈉、硫酸鹽類、維生素B1、維生素A、D、E合劑、甘油、碘酊順序混合，在常溫下攪拌均勻。
在奶牛性周期12-16天內(nèi)，將本發(fā)明做成的制劑40-50ml注入其子宮內(nèi)，正常人工授精，產(chǎn)母率可達(dá)80-90％。
對奶牛輕、中度子宮內(nèi)膜炎，將本發(fā)明做成的制劑40-50ml注入其子宮內(nèi)，間隔5-7天，連用2-3次，對奶牛重子宮內(nèi)膜炎用藥3-5次，治愈率達(dá)98％以上。
實施例2配方(100ml毫升)主要成份如下碘酊(5％)25ml；甘油(分析純) 15ml；維生素B1 15ml；維生素A、D、E合劑5ml；氯化鈉(1％) 15ml；硫酸銅(15-25％) 25ml。
將上述配伍成份按氯化鈉、硫酸鹽類、維生素B1、維生素A、D、E合劑、甘油、碘酊順序混合，在常溫下攪拌均勻。
在母豬性周期15-18天內(nèi)，將本發(fā)明做成的制劑25-30ml注入其子宮內(nèi)，正常授精，產(chǎn)母率可達(dá)80-85％。
對母豬輕、中度子宮內(nèi)膜炎，將本發(fā)明做成的制劑25-30ml注入其子宮內(nèi)，間隔5-7天，連用2-3次，對母豬重子宮內(nèi)膜炎用藥3-5次，治愈率達(dá)98％以上。
權(quán)利要求
1.一種控制家畜性別及防治其子宮炎的制劑配方。其特征是該制劑影響家畜性別比例，并可治療家畜子宮內(nèi)膜炎等不孕癥。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，本發(fā)明做成的制劑的主要成份和配比如下碘酊(5％)，15-25ml；甘油(分析純)，5-20ml；維生素B1，15-20ml；維生素A、D、E合劑，5-10ml；氯化鈉(1％)，15-25ml；硫酸鹽類(15-25％硫酸銅)，15-25ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1-2的方法，其特征在于將權(quán)利要求2中所述的成份按氯化鈉、硫酸鹽類、維生素B1、維生素A、D、E合劑、甘油、碘酊順序混合，在常溫下攪拌均勻。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中之一所述的方法，其特征在于本發(fā)明做成的制劑呈棕紅色液體，無沉淀，無懸浮顆粒。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中之一所述的方法，其特征在于家畜發(fā)情前2-4天，將本發(fā)明做成的制劑40-50ml注入其子宮內(nèi)，正常授精，產(chǎn)母率可達(dá)80-90％。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4中之一所述的方法，其特征在于對家畜輕、中度子宮內(nèi)膜炎，將本發(fā)明做成的制劑40-50ml注入其子宮內(nèi)，間隔5-7天，連用2-3次，對家畜重子宮內(nèi)膜炎用藥3-5次，治愈率達(dá)98％以上。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種控制家畜性別及防治其子宮炎的制劑配方。本發(fā)明做成的制劑的主要成份和配比碘酊(5％)，15－25ml；甘油(分析純)，5－20ml；維生素B1，15－20ml；維生素A、D、E合劑，5－10ml；氯化鈉(1％)，15－25ml；硫酸鹽類(15－25％硫酸銅)，15－25ml。家畜發(fā)情前2－4天，將本發(fā)明做成的制劑40－50ml注入其子宮內(nèi)，正常授精，產(chǎn)母率可達(dá)80－90％。對家畜輕、中度子宮內(nèi)膜炎，將本發(fā)明做成的制劑40－50ml注入其子宮內(nèi)，間隔5－7天，連用2－3次，對家畜重子宮內(nèi)膜炎用藥3－5次，治愈率達(dá)98％以上。
文檔編號A61K31/07GK1931185SQ20051010276
公開日2007年3月21日 申請日期2005年9月15日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月15日
發(fā)明者白俊品, 童志清 申請人:白俊品, 北京頤和天韻新技術(shù)研究所