專(zhuān)利名稱(chēng)：一種脾提取物、其制備方法及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種脾提取物、其制備方法及其用途，具體地說(shuō)，涉及一種由從除人以外的哺乳動(dòng)物脾臟組織中經(jīng)提取分離制備的脾提取物、其制備方法及用途，屬于藥物制劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
眾所周知，哺乳動(dòng)物體內(nèi)有不少人體所需的各種營(yíng)養(yǎng)成分及活性成分，進(jìn)而有不少針對(duì)從哺乳動(dòng)物的心臟、肝臟及肌肉組織中提取活性多肽的報(bào)道。
而脾臟是哺乳動(dòng)物的外周免疫器官，也是動(dòng)物體內(nèi)代謝最為旺盛的器官之一，由于其中含有豐富的細(xì)胞基本營(yíng)養(yǎng)成分及細(xì)胞因子，特別是促進(jìn)細(xì)胞代謝的活性成分如多肽類(lèi)物質(zhì)、游離氨基酸、核酸、各種糖類(lèi)，因而受到研究者的廣泛關(guān)注。國(guó)外對(duì)脾提取物的研究工作較早，目前已有用于化妝品的商品，如crydermine及增強(qiáng)免疫功能的保健品，如spleenP.M.G、IM-Encap、Gold-speen 500等。
申請(qǐng)?zhí)?3133572.1，發(fā)明名稱(chēng)為復(fù)合生物活性膠囊及其制備方法，公開(kāi)了一種復(fù)合生物活性膠囊，選用新生牛為初生十四小時(shí)之內(nèi)的小牛，取其腦、胸腺、肝、脾；選用懷孕二個(gè)月左右的綿羊，取其胚胎及胎盤(pán)，采用現(xiàn)代生物工程技術(shù)，從其中提取腦蛋白水解物、胸腺肽、轉(zhuǎn)移因子、胎盤(pán)肽、促肝細(xì)胞生成素等有效成份進(jìn)行科學(xué)配伍。該發(fā)明采用多種原料分別提取的生物活性成份，可根據(jù)不同對(duì)象按不同配料比例復(fù)合成膠囊或片劑；發(fā)明所述的復(fù)合生物活性膠囊，能調(diào)解人體生理機(jī)能，提高免疫力，延緩衰老，提高記憶力，抗疲勞，美容養(yǎng)顏，又能治療和預(yù)防肝、脾、腎及心臟血管疾病的發(fā)生。
《肉類(lèi)工業(yè)》2002年2期的“豬脾多肽的制備工藝研究”公開(kāi)了豬脾臟的制備工藝，工藝流程為脾臟--＞去脂肪--＞勻漿--＞脫脂--＞酶解--＞終止反應(yīng)--＞過(guò)濾--＞吸附脫色--＞凝膠層析--＞真空干燥--＞成品。具體工藝為取一定量的新鮮豬脾臟，去掉大塊的外表脂肪、表皮及皮下筋膜，加1∶1的10℃蒸溜水，用組織搗碎機(jī)勻漿，按4∶1的比例加正已烷或乙醚在常溫下密閉抽提2h脫脂，分離得到脫脂的脾臟勻漿；將400ml脾勻漿液，置于恒溫水浴鍋中，調(diào)節(jié)溫度至(50±2)℃，以Ca(OH)2乳液調(diào)節(jié)溶液至酶最適pH值，加入30g酶，反應(yīng)一段時(shí)間后，以1∶1HCl調(diào)pH至中性，同時(shí)升溫至80℃保持15min，使酶鈍化中止反應(yīng)，沙布過(guò)濾，濾液加5％的活性炭吸附脫色，抽濾，過(guò)G-15萄聚糖凝膠柱，收集范圍的溶液，50℃真空濃縮干燥，得脾臟多肽成品。該工藝采用的是酶解法，通過(guò)酶解脾臟中蛋白質(zhì)來(lái)獲得多肽，所得多肽成分組成易變動(dòng)，且并非原來(lái)天然存在的多肽。
目前，困擾人類(lèi)健康的疾病多是由于機(jī)體免疫機(jī)能下降造成的，所以應(yīng)不斷研究和開(kāi)發(fā)一些能提高人體免疫能力的藥物；以提高和改善機(jī)體免疫功能，激活和增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫功能，提高人體的抗疾病能力。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種脾提取物，所述脾提取物是由除人以外的哺乳動(dòng)物脾臟組織中提取制備的。
本發(fā)明的另一目的在于提供上述脾提取物的制備方法。
本發(fā)明的再一目的是提供上述脾提取物在制備治療原發(fā)性和繼發(fā)性細(xì)胞免疫缺陷病(如濕疹、血小板減少、多次感染綜合癥等)、呼吸道及肺部感染、習(xí)慣性感冒、慢性乙型肝炎、流行性腮腺炎、復(fù)發(fā)性口瘡等疾病治療藥物方面的用途，以及在制備治療放化療引起的白細(xì)胞減少癥，自血病、再生性障礙貧血、淋巴瘤及其他惡性腫瘤、改善腫瘤患者惡變質(zhì)、病毒感染、改善術(shù)后或重癥患者身體虛弱時(shí)輔助使用藥物方面的用途。
本發(fā)明所述的脾提取物，為從除人以外的哺乳動(dòng)物脾臟組織中提取而成，如下重量份比的組分多肽10～100份、游離氨基酸20～80份、核酸1～30份、總糖0～4份，所有組分分子量均小于10000道爾；該提取物與磺基水楊酸反應(yīng)，混勻，不發(fā)生混濁；與雙縮脲反應(yīng)，顯藍(lán)紫色至紫紅色；與茚三酮反應(yīng)，顯藍(lán)紫色；在260～270nm波長(zhǎng)處有吸收；苯酚—硫酸試劑反應(yīng)為陽(yáng)性。
本發(fā)明所述的脾提取物優(yōu)選含有如下重量份比的組分多肽20～80份、游離氨基酸30～60份、核酸5～20份、總糖1～4份，所有組分分子量均小于8000道爾頓；最優(yōu)選含有多肽32～48份、游離氨基酸40～60份、核酸8～12份、總糖1～3份，所有組分分子量均小于6000道爾頓。
本發(fā)明所述的脾提取物中游離氨基酸經(jīng)測(cè)定有下述氨基酸門(mén)冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸、組氨酸、甘氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、精氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、賴(lài)氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸等。
本發(fā)明所述的哺乳動(dòng)物可為豬、狗、牛、羊、鹿、馬或兔等。
從豬、狗、牛、羊、鹿、馬或兔等新鮮健康脾臟組織中均可提取本發(fā)明所述的脾提取物。
從生產(chǎn)成本、生產(chǎn)工藝、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定性、臨床療效等因素考慮，上述哺乳動(dòng)物腦組織優(yōu)選小牛脾臟組織作為脾提取物的生產(chǎn)原料。
本發(fā)明所述的脾提取物為從除人以外的哺乳動(dòng)物脾臟組織通過(guò)去脂肪、勻漿、凍融破碎、沉淀、超濾等步驟制得脾提取物，其分子量可通過(guò)選用截留分子量為10000或10000以下不同截留分子量的超濾膜來(lái)控制。
本發(fā)明所述的脾提取物的制備方法，包括如下步驟A)取經(jīng)過(guò)預(yù)處理的哺乳動(dòng)物脾臟，加水或生理鹽水勻漿，調(diào)節(jié)pH值，反復(fù)凍融后經(jīng)1-3次離心，取上清液過(guò)濾得清液I；B)清液I調(diào)節(jié)pH值；或者清液I調(diào)節(jié)pH值后加熱；然后進(jìn)行離心，取上清液過(guò)濾，得清液II；C)清液II冷凍融化后再過(guò)濾，取清夜超濾得脾提取物。
其中，所述的預(yù)處理是將新鮮的健康脾臟的雜質(zhì)、脂肪、表皮及皮下筋膜預(yù)先處理掉。
勻漿后調(diào)pH值至3.0～5.0，凍融次數(shù)為1～9次，通過(guò)反復(fù)凍融使細(xì)胞破碎，使細(xì)胞內(nèi)活性多肽、游離氨基酸、核酸、總糖等充分釋放。
本發(fā)明的制備方法中采用凍融方法，快速簡(jiǎn)便地從腦組織中提取多肽、氨基酸、核酸，該方法具有收率高，操作時(shí)間短，成本低的特點(diǎn)。
離心條件為3000～4000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為15～30分鐘。
離心過(guò)濾后，調(diào)pH值為6.0～7.5。
為了達(dá)到更好的離心效果，在一次離心過(guò)濾后，還可進(jìn)行一次加熱冷卻，再離心過(guò)濾。
具體地說(shuō)，本發(fā)明所述的脾提取物的制備方法，包括如下步驟A)取新鮮健康脾臟，剔除雜質(zhì)及脂肪組織，加0.5～2.5倍脾臟重量的注射用水或生理鹽水，勻漿，調(diào)節(jié)pH值3.0～5.0，反復(fù)凍融1～9次，最后一次融化后的勻漿液離心，離心條件為3000～4000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為15～30分鐘，取上清液過(guò)濾，得清液I；B)清液I調(diào)節(jié)pH值6.0～7.5后離心；或者調(diào)節(jié)pH值6.0～7.5并加熱，然后冷卻至常溫后離心，離心條件為3000～4000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為15～30分鐘，取上清液過(guò)濾，得清液II；C)清液II冷凍后融化，過(guò)濾，清液用超濾膜超濾1～2次，超濾液為脾提取物。所述的凍融為在-15℃以下冷凍，凍實(shí)后在10～40℃下融化。
上述B)步驟中，離心過(guò)濾后，加熱至50℃～90℃，加熱時(shí)間為15～30分鐘；冷卻至10～40℃。
更為優(yōu)選的，本發(fā)明所述的脾提取物的制備方法，包括如下步驟
A)取新鮮健康脾臟，剔除雜質(zhì)及脂肪組織，加1～2倍脾臟重量注射用水或生理鹽水，勻漿，調(diào)節(jié)pH值3.8～4.2，在-15℃～-25℃冷凍，凍實(shí)后在10～40℃下融化，重復(fù)凍融2～4次；最后一次融化后的勻漿液離心，離心條件為3500～4000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為15～20分鐘，取上清液過(guò)濾，得清液I；B)清液I調(diào)節(jié)pH值6.5～7.0后離心或調(diào)節(jié)pH值6.0～7.5并加熱，加熱60℃～80℃，加熱時(shí)間為15～20分鐘，冷卻至常溫后離心，離心條件為3500～4000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為15～20分鐘，取上清液過(guò)濾，得清液II；C)清液II-15℃～25℃冷凍，凍實(shí)后在10～40℃下融化，過(guò)濾，清液用截留分子量10000以下超濾膜超濾1～2次，得超濾液，即為脾提取物。
上述步驟中的離心時(shí)的溫度可以設(shè)定為常溫，也可以是0～4℃下進(jìn)行；所述的過(guò)濾為現(xiàn)有技術(shù)中通用的紙漿過(guò)濾或澄清板過(guò)濾；上述過(guò)程調(diào)pH值使用鹽酸和/或氫氧化鈉；對(duì)清液進(jìn)行超濾時(shí)，可采用截留分子量為6000～10000道爾頓的超濾膜或6000道爾頓以下的超濾膜超濾，為脾多肽提取物中的活性多肽分子量的控制步驟。比如，使用截留分子量1000、3000、5000、6000、8000或10000道爾頓的超濾膜，優(yōu)選使用截留分子量為6000道爾頓的超濾膜超濾。使用的超濾膜為市售產(chǎn)品，其生產(chǎn)商應(yīng)為行業(yè)認(rèn)可的生產(chǎn)單位，使用的濾膜型號(hào)與尺寸可根據(jù)具體的生產(chǎn)量、選用的超濾器尺寸來(lái)確定。
當(dāng)然，為了進(jìn)一步獲取所需分子量段的脾提取物，可以用不同的超濾膜進(jìn)行截取，取超濾液或截留液，這樣即可獲得分子量為1000-10000，1000-8000，1000-6000，1000-5000或3000-8000道爾頓等等所需的脾提取物。
為使本發(fā)明生產(chǎn)工藝、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，勻漿后采取調(diào)節(jié)pH值3.8～4.2后，再凍融，制備步驟B)中第一次離心后再調(diào)節(jié)pH值6.5～7.0，并加熱離心再冷凍除雜。
本發(fā)明所述的脾提取物可經(jīng)后處理，制成藥劑學(xué)上可接受的不同劑型，比如片劑、膠囊劑、口服液、小容量注射劑、大容量注射劑或凍干粉針劑等，優(yōu)選為小容量注射劑、凍干粉針劑，最優(yōu)選為小容量注射劑。所述的劑型可按照制備藥劑學(xué)上可接受的劑型的常規(guī)方法進(jìn)行。
本發(fā)明最優(yōu)選小容量注射劑的規(guī)格為，2ml；5ml；10ml，每ml含多肽為3.2～4.8mg、游離氨基酸為4.0～6.0mg、核酸為0.8～1.2mg、總糖100～300μg。。
肌內(nèi)注射一次2～8ml，一日1次或遵醫(yī)囑。
靜脈滴注一次10ml，溶于500ml的0.9％氯化鈉注射液或5％～10％葡萄糖注射液中，一日1次或遵醫(yī)囑。
本發(fā)明的研究人員經(jīng)過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)及藥效學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明所述的脾提取物藥物為免疫調(diào)節(jié)藥和腫瘤輔助治療藥。本品對(duì)機(jī)體免疫機(jī)能有雙向調(diào)節(jié)作用，能夠糾正機(jī)體免疫功能紊亂，具有激活和增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫功能的作用，能夠促進(jìn)T淋巴細(xì)胞成熟并可使未致敏淋巴細(xì)胞激活成為致敏淋巴細(xì)胞，從而提高了淋巴細(xì)胞免疫功能，觸發(fā)和增強(qiáng)機(jī)體對(duì)感染的抵抗力；還可誘生干擾素，直接阻止病毒蛋白質(zhì)的合成與復(fù)制，并能增強(qiáng)細(xì)胞表面抗原表達(dá)，促進(jìn)NK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性，調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞功能，可明顯改善機(jī)體細(xì)胞免疫功能；本品能刺激骨髓細(xì)胞增殖，產(chǎn)生大量白細(xì)胞，使造血功能得到提高；本品能提高機(jī)體對(duì)病毒和腫瘤的免疫能力，能夠抑制癌細(xì)胞的增殖，具有一定抗腫瘤作用；本品能促進(jìn)受損肝細(xì)胞的修復(fù)和白細(xì)胞的生成。
本發(fā)明所述的脾提取物的制備工藝穩(wěn)定成熟，通過(guò)凍融、離心、超濾等手段來(lái)提取脾臟中天然存在且具有特定比例組成的活性多肽、游離氨基酸、核酸、多種糖等活性成分，分子量可在10000道爾頓以下進(jìn)行控制，與目前主要的免疫調(diào)節(jié)藥物比較，本發(fā)明具有療效確切、可預(yù)見(jiàn)毒副作用小或無(wú)、成本低廉的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明所述脾提取物可用于原發(fā)性和繼發(fā)性細(xì)胞免疫缺陷病(如濕疹、血小板減少、多次感染綜合癥等)、呼吸道及肺部感染、習(xí)慣性感冒、慢性乙型肝炎、流行性腮腺炎、復(fù)發(fā)性口瘡等疾病治療藥物方面的用途，以及在作為治療放化療引起的白細(xì)胞減少癥，白血病、再生性障礙貧血、淋巴瘤及其他惡性腫瘤、改善腫瘤患者惡變質(zhì)、病毒感染、改善術(shù)后或重癥患者身體虛弱時(shí)輔助使用藥物方面的用途。
具體實(shí)施方式下面實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，但所述實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不是限制本發(fā)明。
實(shí)施例1本實(shí)施例提供每ml含多肽為8.0mg、游離氨基酸為10.2mg、核酸為2.2mg、總糖260μg的分子量小于6000道爾頓的脾提取物。其制備步驟如下A)取新鮮健康小牛脾臟10kg，除去筋膜及脂肪組織等雜質(zhì)，用注射用水洗滌，加10L注射用水，勻漿，調(diào)節(jié)pH值3.8，-20℃冷凍，凍實(shí)后取出在15℃水浴中融化，重復(fù)凍融2次，最后一次融化后的勻漿液離心，離心條件為4000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為15分鐘，取上清液過(guò)濾得到清液I。
B)將清液I調(diào)pH值6.5后，加熱80℃，加熱時(shí)間為15分鐘，冷卻至35℃后離心，離心條件為4000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為20分鐘，取上清液過(guò)濾，得清液II；
C)將清液II在-20℃冷凍，凍實(shí)后取出在12℃水浴中融化，過(guò)濾得的清液用截留分子量為6000的超濾膜(美國(guó)millipore公司，標(biāo)準(zhǔn)超濾系統(tǒng))超濾一次，超濾液即為脾提取物，分子量小于6000道爾頓，經(jīng)測(cè)定每ml含多肽為8.0mg、游離氨基酸為10.2mg、核酸為2.2mg、含總糖260μg。
同時(shí)提供含上述脾提取物的小容量注射液取上述脾提取物1000ml，加注射用水至2L，無(wú)菌過(guò)濾后灌裝，制成2ml/支的小容量注射劑，100℃滅菌15分鐘，包裝入庫(kù)，每ml含多肽為4.0mg、游離氨基酸為5.1mg、核酸為1.1mg、總糖130μg。
實(shí)施例2本實(shí)施例提供每ml含多肽為5.0mg、游離氨基酸為7.0mg、核酸為1.6mg、總糖180μg的分子量小于8000道爾頓的脾提取物。其制備步驟如下A)取新鮮健康豬脾臟10kg，除去筋膜及脂肪組織等雜質(zhì)，用注射用水洗滌，加20L注射用水，勻漿，調(diào)節(jié)pH值4.2，-18℃冷凍，凍實(shí)后取出在10℃水浴中融化，重復(fù)凍融一次，最后一次融化后的勻漿液離心，離心條件為3000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為30分鐘，取上清液過(guò)濾得到清液I；B)將清液I濾液調(diào)pH值7.0后，離心，離心條件為4000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為30分鐘，取上清液過(guò)濾，得清液II；C)清液II在-18℃冷凍，凍實(shí)后取出在25℃水浴中融化，過(guò)濾，上清液先用截留分子量為10000道爾頓的超濾膜(美國(guó)millipore公司，標(biāo)準(zhǔn)超濾系統(tǒng))超濾一次，取超濾液，再用截留分子量為8000道爾頓的超濾膜(美國(guó)millipore公司，標(biāo)準(zhǔn)超濾系統(tǒng))超濾一次，取超濾液，超濾液即為脾提取物，分子量小于8000道爾頓，經(jīng)測(cè)定每ml含多肽為5.0mg、游離氨基酸為7.0mg、核酸為1.6mg、總糖200μg。
同時(shí)提供含上述脾提取物的小容量注射液取上述脾提取物1000ml，加注射用水至2L，無(wú)菌過(guò)濾后灌裝，制成5ml/支的小容量注射劑，100℃滅菌15分鐘，包裝入庫(kù)，每ml含多肽為2.5mg、游離氨基酸為3.5mg、核酸為0.8mg、總糖100μg。
實(shí)施例3本實(shí)施例提供每ml含多肽為7.0mg、游離氨基酸為8.0mg、核酸為3.0mg、總糖360μg的分子量小于5000道爾頓的脾提取物。其制備步驟如下A)取新鮮健康羊脾臟10kg，除去筋膜及脂肪組織等雜質(zhì)，用注射用水洗滌，加15L注射用水，勻漿，調(diào)節(jié)pH值3.0，-15℃冷凍，凍實(shí)后取出在28℃水浴中融化，重復(fù)凍融4次，最后一次融化后的勻漿液離心，離心條件為3500轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為25分鐘，取上清液過(guò)濾得到清液I；B)將清液I濾液調(diào)pH值6.0后，加熱75℃，加熱時(shí)間為15分鐘，冷卻至25℃后離心，離心條件為3500轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為30分鐘，取上清液過(guò)濾，得清液II；C)清液II在-15℃冷凍，凍實(shí)后取出在15℃水浴中融化，過(guò)濾，上清液先用截留分子量為8000道爾頓的超濾膜(美國(guó)millipore公司，標(biāo)準(zhǔn)超濾系統(tǒng))超濾一次，取超濾液，再用截留分子量為5000道爾頓的超濾膜(美國(guó)millipore公司，標(biāo)準(zhǔn)超濾系統(tǒng))超濾一次，取超濾液，超濾液即為脾提取物，分子量小于5000道爾頓，經(jīng)測(cè)定每ml含多肽為7.0mg、游離氨基酸為8.0mg、核酸為3.0mg、總糖360μg。
同時(shí)提供含上述脾提取物的小容量注射液取上述脾提取物1000ml，加注射用水至2L，無(wú)菌過(guò)濾后灌裝，制成10ml/支的小容量注射劑，100℃滅菌15分鐘，包裝入庫(kù)，每ml含多肽為3.5mg、游離氨基酸為4.0mg、核酸為1.5mg、總糖180μg。
實(shí)施例4本實(shí)施例提供每ml含多肽為5.0mg、游離氨基酸為5.3mg、核酸為1.5mg、總糖160μg的分子量小于1000-10000道爾頓的脾提取物。其制備步驟如下A)取新鮮健康豬脾臟10kg，除去筋膜及脂肪組織等雜質(zhì)，用生理鹽水洗滌，加25L生理鹽水，勻漿，調(diào)節(jié)pH值5.0，-25℃冷凍，凍實(shí)后取出在40℃水浴中融化，重復(fù)凍融一次，最后一次融化后的勻漿液離心，離心條件為3000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為30分鐘，取上清液過(guò)濾得到清液I；B)將清液I濾液調(diào)pH值7.5后，加熱65℃，加熱時(shí)間為20分鐘，冷卻至20℃后離心，離心條件為4000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為30分鐘，取上清液過(guò)濾，得清液II；C)清液II在-18℃冷凍，凍實(shí)后取出在35℃水浴中融化，過(guò)濾，上清液先用截留分子量為10000道爾頓的超濾膜(美國(guó)millipore公司，標(biāo)準(zhǔn)超濾系統(tǒng))超濾一次，取超濾液，再用截留分子量為1000道爾頓的超濾膜(美國(guó)millipore公司，標(biāo)準(zhǔn)超濾系統(tǒng))超濾一次，取截留液，截留液即為脾提取物，分子量為1000-10000道爾頓，經(jīng)測(cè)定每ml含多肽為5.0mg、游離氨基酸為5.3mg、核酸為1.5mg、總糖160μg。
同時(shí)提供含上述脾提取物的小容量注射液取上述脾提取物1000ml，加注射用水至2L，無(wú)菌過(guò)濾后灌裝，制成5ml/支的小容量注射劑，100℃滅菌15分鐘，包裝入庫(kù)，每ml含有多肽2.5mg，每ml含游離氨基酸為2.65mg，每ml含核酸為0.75mg，每ml含總糖80μg。
實(shí)施例5本實(shí)施例提供每ml含多肽為8.0mg、游離氨基酸為10.0mg、核酸為2.0mg、總糖300μg的分子量小于6000道爾頓的脾提取物。其制備步驟如下A)取新鮮健康小牛脾臟10kg，除去筋膜及脂肪組織等雜質(zhì)，用注射用水洗滌，加10L注射用水，勻漿，調(diào)節(jié)pH值4.0，-20℃冷凍，凍實(shí)后取出在20℃水浴中融化，重復(fù)凍融2次，最后一次融化后的勻漿液離心，離心條件為4000轉(zhuǎn)/分，離心溫度設(shè)定為4℃，離心時(shí)間為15分鐘，取上清液過(guò)濾得到清液I。
B)將清液I調(diào)pH值6.5后，加熱80℃，加熱時(shí)間為20分鐘，冷卻至25℃后離心，離心條件為4000轉(zhuǎn)/分，離心溫度設(shè)定為4℃，離心時(shí)間為20分鐘，取上清液過(guò)濾，得清液II；C)將清液II在-20℃冷凍，凍實(shí)后取出在15℃水浴中融化，過(guò)濾，清液用截留分子量為6000道爾頓的超濾膜(美國(guó)millipore公司，標(biāo)準(zhǔn)超濾系統(tǒng))超濾一次，超濾液即為脾提取物，分子量小于6000，經(jīng)測(cè)定每ml含多肽為8.0mg、游離氨基酸為10.0mg、核酸為2.0mg、含總糖300μg。
同時(shí)提供含上述脾提取物的小容量注射液取上述脾提取物1000ml，加注射用水至2L，無(wú)菌過(guò)濾后灌裝，制成2ml/支的小容量注射劑，100℃滅菌15分鐘，包裝入庫(kù)，每ml含多肽為4.0mg、游離氨基酸為5.0mg、核酸為1.0mg、總糖150μg。
實(shí)施例6參照實(shí)施例1～3，脾提取物制備后，按公知的方法，先將提取物適當(dāng)濃縮后，加適量干燥淀粉混勻后制成軟材，過(guò)16目篩制成顆粒，干燥后加潤(rùn)滑劑混勻，用10mm沖模壓制成片，即得藥物片劑。
實(shí)施例7參照實(shí)施例4～5，脾提取物制備后，加入適宜的賦型劑(如右旋糖酐40、甘露醇等)，進(jìn)行除菌灌裝，按公知的方法，冷凍干燥制成凍干粉針產(chǎn)品。
實(shí)施例8參照實(shí)施例1～3，將脾提取物投入到稀配罐中；在濃配罐中投入0.9％最終配制總體積的氯化鈉，加入0.4‰活性炭煮沸脫炭過(guò)濾，冷卻后，將藥液過(guò)濾至稀配罐中，在稀配罐中補(bǔ)加注射用水至配液量，調(diào)PH為6.8～7.0，過(guò)濾。灌封于輸液瓶中，100℃流通蒸汽滅菌30分鐘，即得輸液產(chǎn)品。
實(shí)施例9參照實(shí)施例4～5，脾提取物制備后，按公知的方法，先將提取物適當(dāng)濃縮后，加適量干燥淀粉混勻后制成軟材，過(guò)16目篩制成顆粒，濃縮干燥后，整粒，裝袋，得顆粒劑。
實(shí)施例10參照實(shí)施例1～3，脾提取物制備后，按公知的方法，將脾提取物加適量注射用水，過(guò)濾，再加入單糖漿、苯甲酸鈉，再加水至1000毫升，冷藏，過(guò)濾。灌封于10ml口服液瓶中，以100℃流通蒸汽滅菌30分鐘，即得口服液。
實(shí)施例11參照實(shí)施例4～5，脾提取物制備后，按公知的方法，先將提取物適當(dāng)濃縮后，加適量干燥淀粉混勻后制成軟材，過(guò)16目篩制成顆粒，于60℃烘干干燥后整粒，裝膠囊，得膠囊劑。
實(shí)驗(yàn)例1本實(shí)驗(yàn)例為本發(fā)明實(shí)施例1所述的每ml含多肽為8.0mg、游離氨基酸為10.2mg、核酸為2.2mg、總糖260μg的分子量小于6000道爾頓的脾提取物的蛋白質(zhì)、高分子量物質(zhì)及其它項(xiàng)目的檢測(cè)。
性 狀 本品為淡黃色澄明液體。
pH 值 6.5。
蛋白質(zhì) 取本品2ml，加20％磺基水楊酸溶液2ml，混勻，不發(fā)生混濁。
取本品1ml，加茚三酮試液數(shù)滴，加熱，顯藍(lán)紫色。
取本品2ml，加雙縮脲溶液(取硫酸銅1.50g和酒石酸鉀鈉6.0g，加水500ml使溶解，邊攪邊加入10％氫氧化鈉溶液300ml，用水稀釋至1000ml，混勻)4ml，混勻，室溫放置15分鐘，溶液顯藍(lán)紫色至紫紅色。
取本品，加水制成每ml中含多肽50μg的溶液，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年附錄IV A)測(cè)定，在265±2nm的波長(zhǎng)處有最大吸收。
高分子量物質(zhì)照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版二部附錄V D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用凝膠色譜柱(如TSK GEL 2000SW 7.8mm×300mm，5μm)；流動(dòng)相為三氟醋酸-乙腈-水(0.05∶10∶90)檢測(cè)波長(zhǎng)為214nm。理論板數(shù)按胰島素峰計(jì)算應(yīng)不得低于3000。
對(duì)照品溶液的制備 取胰島素(分子量5800)適量，用流動(dòng)相制成每1ml中含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。
供試品溶液的制備 取本品，加流動(dòng)相稀釋成每1ml中含多肽1mg的溶液，作為供試品溶液。
測(cè)定法 取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按面積歸一化法計(jì)算，小于胰島素峰保留時(shí)間的峰面積之和不得過(guò)4.0％。
實(shí)驗(yàn)例2本實(shí)驗(yàn)例為本發(fā)明實(shí)施例1所述的規(guī)格2ml注射劑(分子量小于6000道爾頓，每ml含多肽為4.0mg、游離氨基酸為5.1mg、核酸為1.1mg、總糖130μg)的外觀性狀、pH值、蛋白質(zhì)、高分子量物質(zhì)及其它規(guī)定的注射劑檢查項(xiàng)目的檢測(cè)及定性分析。
性 狀本品為淡黃色澄明液體。
pH 值應(yīng)為5.5～7.5(中國(guó)藥典2000年版二部附錄VI H)。
蛋白質(zhì)取本品2ml，加20％磺基水楊酸溶液2ml，混勻，不發(fā)生混濁。
取本品1ml，加茚三酮試液數(shù)滴，加熱，顯藍(lán)紫色。
取本品2ml，加雙縮脲溶液(取硫酸銅1.50g和酒石酸鉀鈉6.0g，加水500ml使溶解，邊攪邊加入10％氫氧化鈉溶液300ml，用水稀釋至1000ml，混勻)4ml，混勻，室溫放置15分鐘，溶液顯藍(lán)紫色至紫紅色。
取本品，加水制成每ml中含多肽50μg的溶液，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年附錄IV A)測(cè)定，在265±2nm的波長(zhǎng)處有最大吸收。
高分子量物質(zhì)照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版二部附錄V D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用凝膠色譜柱(如TSK GEL 2000SW 7.8mm×300mm，5μm)；流動(dòng)相為三氟醋酸-乙腈-水(0.05∶10∶90)檢測(cè)波長(zhǎng)為214nm。理論板數(shù)按胰島素峰計(jì)算應(yīng)不得低于3000。
對(duì)照品溶液的制備 取胰島素(分子量5800)適量，用流動(dòng)相制成每1ml中含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。
供試品溶液的制備 取本品，加流動(dòng)相稀釋成每1ml中含多肽1mg的溶液，作為供試品溶液。
測(cè)定法 取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按面積歸一化法計(jì)算，小于胰島素峰保留時(shí)間的峰面積之和不得過(guò)4.0％。
其他 應(yīng)符合注射劑項(xiàng)下有關(guān)各項(xiàng)規(guī)定(中國(guó)藥典2000版二部附錄I B)。
實(shí)驗(yàn)例3本實(shí)驗(yàn)例為本發(fā)明實(shí)施例3提供的每ml含多肽為7.0mg、游離氨基酸為8.0mg、核酸為3.0mg、總糖360μg的分子量小于5000道爾頓的脾提取物中多肽定量測(cè)定測(cè)定。多肽含量測(cè)定取本品適量，加水制成每1ml中約含0.15mg的多肽的溶液，作為供試品溶液，精密量取1.0ml，照福林酚測(cè)定法測(cè)定。
試劑堿性銅溶液取氫氧化鈉10g，碳酸鈉50g，加水400ml使溶解，作為甲液；取酒石酸鉀0.5g，加水50ml使其溶解，另取硫酸銅0.25g，加水30ml使其溶解，將兩液混合，作為乙液。
臨用前，合并甲、乙兩液，并加水至500ml。
操作法 對(duì)照品溶液的制備取牛血清白蛋白對(duì)照品，加水制成每1ml中含0.3mg的溶液。
供試品溶液的制備 照各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法制備。
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備 精密量取對(duì)照品溶液0.0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml，分別置具塞試管中，各加水至1.0ml，再分別加入堿性銅試液1.0ml，搖勻，各加入福林酚試液(取福林試液中的貯備液1→16)4.0ml，立即混勻，置55℃水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)5分鐘，置冷水浴10分鐘，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版二部附錄VI B)在650nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度；以0號(hào)管作為空白。以對(duì)照品溶液濃度與相應(yīng)吸收度計(jì)算回歸方程。
測(cè)定法 精密量取供試品溶液1.0ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備項(xiàng)下的方法，“自加入堿性銅試液”起，依法測(cè)定，從回歸方程計(jì)算多肽的含量，并乘以稀釋倍數(shù)，即得。
實(shí)驗(yàn)例4本實(shí)驗(yàn)例為實(shí)施例4提供的每ml含多肽為5.0mg、游離氨基酸為5.3mg、核酸為1.5mg、總糖160μg的分子量小于5000道爾頓的脾提取物小容量注射液所含游離氨基酸定量測(cè)定。游離氨基酸測(cè)定取本品及標(biāo)準(zhǔn)氨基酸適量，用氨基酸分析儀或HPLC進(jìn)行氨基酸分析，其游離氨基酸含量應(yīng)為每1ml中含4.0～6.0mg。
每1ml含游離氨基酸為5.3mg/ml，其中門(mén)冬氨酸0.28mg/ml谷氨酸0.63mg/ml 絲氨酸0.19mg/ml組氨酸0.24mg/ml 甘酸0.29mg/ml蘇氨酸0.25mg/ml丙氨酸0.34mg/ml 精氨酸0.32mg/ml 纈氨酸0.29mg/ml蛋氨酸0.16mg/ml 異亮氨酸0.23mg/ml苯丙氨酸0.34mg/ml亮氨酸0.85mg/ml 賴(lài)氨酸0.52mg/ml 脯氨酸0.18mg/ml色氨酸0.09mg/ml 酪氨酸0.10mg/ml
實(shí)驗(yàn)例5本實(shí)驗(yàn)例為本發(fā)明實(shí)施例5所述每ml含多肽為8.0mg、游離氨基酸為10.0mg、核酸為2.0mg、總糖300μg的分子量小于6000道爾頓的脾提取物所含核酸定量測(cè)定。核酸測(cè)定取本品1.0ml，加水稀釋至50ml，作為供試品溶液。照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版二部附錄IV A)丁260nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸收值，按E1cm1％200計(jì)算核酸含量。
實(shí)施例5所述脾提取物含核酸為2.0mg。
實(shí)驗(yàn)例6本實(shí)驗(yàn)例為本發(fā)明實(shí)施例5所述每ml含多肽為8.0mg、游離氨基酸為10.0mg、核酸為2.0mg、總糖300μg的分子量小于6000道爾頓的脾提取物所含總糖定量測(cè)定。
總糖測(cè)定對(duì)照品溶液的制備稱(chēng)取干燥至恒重的葡萄糖約50mg，置50ml量瓶中，加蒸餾水溶解并定容至刻度，混勻。取此溶液5.0ml，加水定容至50ml，混勻，即得。
供試品溶液的制備取本品10ml，加水定容至50ml，作為供試品溶液。
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備精密量取對(duì)照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml分別置具塞試管中，各加入水至1.0ml，各加入5％苯酚溶液1.0ml，搖勻，加5ml硫酸，置37℃水浴中準(zhǔn)確加熱10分鐘，迅速冷卻至室溫，以0號(hào)管為空白，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版二部附錄IVA)，在487nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸收度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并進(jìn)行線(xiàn)性回歸，其相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.99。
測(cè)定法精密量取供試品溶液1ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備方法，自“各加入5％苯酚溶液1.0ml”起，依法測(cè)定。從回歸方程中求出總糖含量。
實(shí)施例5所述脾提取物所含總糖為300μg。
實(shí)驗(yàn)例7本實(shí)驗(yàn)例為本發(fā)明實(shí)施例5所述脾提取物小容量注射液(每ml含多肽為4.0mg、游離氨基酸為5.0mg、核酸為1.0mg、總糖150μg)的毒性實(shí)驗(yàn)√異常素性 取本品，依法檢查(中國(guó)藥典2000年版二部附錄XI C)，按靜脈注射法給藥，應(yīng)符合規(guī)定。
√過(guò)敏試驗(yàn) 取本品，依法檢查(附)，應(yīng)符合規(guī)定。供試動(dòng)物健康豚鼠，雌雄均可，體重250～350g，試驗(yàn)前及試驗(yàn)的觀察期內(nèi)，均應(yīng)按正常飼養(yǎng)條件飼養(yǎng)，做過(guò)本試驗(yàn)的動(dòng)物不得重復(fù)使用。
檢查法 取上述豚鼠6只，間日腹腔注射本品0.5ml，3次，然后分成兩組，每組3只，分別在第一次注射后第14日及第21日靜脈注射1.0ml，
結(jié)果判斷 靜脈注射后15分鐘內(nèi)均不得出現(xiàn)過(guò)敏性反應(yīng)，如豎毛，呼吸困難、噴嚏、干嘔或咳嗽3聲等現(xiàn)象中的兩種以上者或羅音、抽搐、虛脫或死亡現(xiàn)象之一者應(yīng)判為陽(yáng)性。
√細(xì)菌內(nèi)毒素 取本品，依法檢查(中國(guó)藥典2000年版二部附錄XI E)每1ml中含細(xì)菌內(nèi)菌素的應(yīng)小于2EU。
結(jié)論本發(fā)明藥物組合物注射液符合注射液要求，無(wú)任何毒性作用，應(yīng)用人體安全。
實(shí)驗(yàn)例8本實(shí)驗(yàn)例為本發(fā)明實(shí)施例5所述脾提取物小容量注射液(每ml含多肽為4.0mg、游離氨基酸為5.0mg、核酸為1.0mg、總糖150μg)在治療反復(fù)呼吸道感染臨床效果，說(shuō)明本發(fā)明注射液的良好療效。
臨床背景反復(fù)呼吸道感染患者50例，其中男性為28例，女性為22例。年齡8-15歲，平均11.3歲。所有病例均為反復(fù)呼吸道感染患者(有咳嗽、發(fā)熱、扁桃體腫大和肺內(nèi)羅音等癥狀)，患者免疫指標(biāo)的測(cè)定符合下列標(biāo)準(zhǔn)①I(mǎi)gA≤2s；②CD3和CD4均≤2s；③CD3≤2s及CD3/CD8＜1.5，至少符合上述3條中的1條。
治療方法患者均肌內(nèi)注射一次4ml本發(fā)明實(shí)施例5所述小容量注射劑，前兩周每周3次，以后每周2次.3個(gè)月為一療程。
療效判定免疫指標(biāo)的測(cè)定用藥前及療程結(jié)束后各檢驗(yàn)免疫指標(biāo)1次，治療前后進(jìn)行臨床觀察和記錄，每月隨訪(fǎng)1次。(1)顯效3個(gè)月未發(fā)病或僅發(fā)病1次，免疫指標(biāo)基本恢復(fù)正常。(2)有效發(fā)病次數(shù)減少或未減少，但病情較前輕，病程縮短，免疫指標(biāo)轉(zhuǎn)為正常或同前。(3)無(wú)效發(fā)病次數(shù)，病程均末改變，免疫指標(biāo)無(wú)變化或更低。
治療結(jié)果3個(gè)月治療后1、患者療效顯效31例，占62％，有效14例，占28％，無(wú)效5例，占10％，總有效率為90％。2、治療前后免疫指標(biāo)變化情況IgA(g/L)、CD3(％)、CD4(％)均顯著改善，均P＜0.01；IgG(g/L)、IgM(g/L)、CD8(％)、BC均有所改善但不明顯，均P＞0.05。3、治療前后癥狀體征變化治療后咳嗽、發(fā)熱、扁桃體腫大和肺內(nèi)羅音均明顯減輕，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理.治療前后差異有非常顯著意義(P均＜0.01)。
結(jié)論本發(fā)明所述小容量注射劑對(duì)機(jī)體免疫機(jī)能有雙向調(diào)節(jié)作用，能夠糾正機(jī)體免疫功能紊亂，具有激活和增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫功能的作用，能夠促進(jìn)T淋巴細(xì)胞成熟并可使未致敏淋巴細(xì)胞激活成為致敏淋巴細(xì)胞，從而提高了淋巴細(xì)胞免疫功能，觸發(fā)和增強(qiáng)機(jī)體對(duì)感染的抵抗力。反復(fù)呼吸道感染患者IgG、IgA、CD3、CD4/CD8明顯降低，表明其細(xì)胞免疫低下，免疫功能紊亂，這是反復(fù)呼吸道感染產(chǎn)生的重要原因。使用本發(fā)明所述小容量注射劑治療后7項(xiàng)免疫指標(biāo)均提高。隨著免疫指標(biāo)的提高，發(fā)病次數(shù)減少，且縮短了病程，臨床癥狀和體征均有減輕。說(shuō)明本發(fā)明小容量注射劑對(duì)患者機(jī)體免疫功能有恢復(fù)和增強(qiáng)作用。
實(shí)驗(yàn)例9本實(shí)驗(yàn)例為本發(fā)明實(shí)施例5所述脾提取物小容量注射液(每m1含多肽為4.0mg、游離氨基酸為5.0mg、核酸為1.0mg、總糖150μg)在治療慢性乙型肝炎臨床療效，說(shuō)明本發(fā)明注射液具有良好療效。
1、臨床背景慢性乙型肝炎患者60例，分為治療組和對(duì)照組，各男15例、女15例，年齡均為25-40歲，兩組病程均為1-2年，平均1.5年，所有患者均符合病毒性肝炎標(biāo)準(zhǔn)。
2、治療方法治療組應(yīng)用本發(fā)明注射液和常規(guī)保肝藥物治療，一次肌肉注射本發(fā)明注射液5ml，每周三次，一個(gè)月為一療程，對(duì)照組只應(yīng)用常規(guī)保肝藥物治療。用藥前后檢查肝功能及乙肝病毒五項(xiàng)指標(biāo)。
3、療效判定治愈HBsAg.HBeAg轉(zhuǎn)陰，肝功能恢復(fù)正常；基本治愈HBeAg轉(zhuǎn)陽(yáng)，肝功能恢復(fù)正常；好轉(zhuǎn)；以上三項(xiàng)有一項(xiàng)轉(zhuǎn)為正常；無(wú)效治療前后各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)變化。
4、治療效果治療組治愈15例，好轉(zhuǎn)10例，總有效率為83.3％；對(duì)照組治愈8例，基本治愈1例，好轉(zhuǎn)3例，總有效率4％。
實(shí)驗(yàn)例10白細(xì)胞減少癥是腫瘤患者放射治療、化學(xué)藥物治療中最常見(jiàn)的不良反應(yīng)之一。本例說(shuō)明了本發(fā)明研究人員在3年時(shí)間內(nèi)，應(yīng)用實(shí)施例1產(chǎn)品，治療放、化療白細(xì)胞減少癥124例，療效理想，其他實(shí)施例產(chǎn)品在應(yīng)用中，也具有相應(yīng)的效果。具體內(nèi)容如下對(duì)象癌患者124例，其中鼻咽癌15例，肺癌18例，食管癌24例，乳房癌32例，胃癌24例，大腸癌8例，口腔癌3例。
男66例，女58例。
年齡30-40歲為24例，41-50歲為46例，51-60歲為35例，61歲以上為19例。
放療68例，化療56例。
白細(xì)胞數(shù)低于1.0*109/L為2例，(1.1-2.0)*109/L為25例，(2.1-3.0)*109/L為48例，(3.1-4.0)*109/L為49例。
治療方法靜脈滴注，10mL/次，溶于500mL 0.9％氯化鈉注射液中，1次/日。兩周為一個(gè)療程。
療效標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)1個(gè)療程，白細(xì)胞數(shù)達(dá)到4.0*109/L以上者為顯效；比治療前升高50％以上而未達(dá)正常值為有效；未升高10％為無(wú)效。
治療結(jié)果顯效72例(占58％)；有效39例(占31％)；無(wú)效13例(占11％)?？傆行试?9％以上。
權(quán)利要求
1.一種脾提取物，其特征在于，所述的脾提取物為從除人以外的哺乳動(dòng)物脾臟組織中提取而成，含有如下重量份比的組分多肽10～100份、游離氨基酸20～80份、核酸1～30份、總糖0～4份，所有組分分子量均小于10000道爾頓。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脾提取物，其特征在于，所述的脾提取物含有如下重量份比的組分多肽20～80份、游離氨基酸30～60份、核酸5～20份、總糖1～4份，所有組分分子量均小于8000道爾頓；所述的脾提取物優(yōu)選含有如下組分多肽32～48份、游離氨基酸40～60份、核酸8～12份、總糖1～3份，所有組分分子量均小于6000道爾頓。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的脾提取物，其特征在于，所述的脾提取物為從除人以外的哺乳動(dòng)物脾臟組織通過(guò)去脂肪、勻漿、凍融破碎、沉淀、超濾等步驟提取而成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的脾提取物，其特征在于，所述的哺乳動(dòng)物為豬、狗、牛、羊、鹿、馬或兔中任意一種。
5.權(quán)利要求1～4所述的脾提取物的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟A)取經(jīng)過(guò)預(yù)處理的哺乳動(dòng)物脾臟，加水或生理鹽水勻漿，調(diào)節(jié)pH值，反復(fù)凍融后經(jīng)1-3次離心，取上清液過(guò)濾得清液I；B)清液I調(diào)節(jié)pH值離心，取上清液過(guò)濾得清液II；或者清液I調(diào)節(jié)pH值后加熱，離心，取上清液過(guò)濾得清液II；C)清液II冷凍融化后再過(guò)濾，取清液超濾得脾提取物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述方法中A步驟的勻漿后調(diào)pH值至3.0～5.0，凍融次數(shù)為1～9次，離心條件為3000～4000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為15～30分鐘；B步驟的調(diào)pH值為6.0～7.5，離心條件為3000～4000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為15～30分鐘；C步驟中用截留分子量10000以下的超濾膜超濾。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟A)取新鮮健康脾臟，剔除雜質(zhì)及脂肪組織，加0.5～2.5倍脾臟重量的注射用水或生理鹽水，勻漿，調(diào)節(jié)pH值3.0～5.0，反復(fù)凍融1～9次；最后一次融化后的勻漿液離心，離心條件為3000～4000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為15～30分鐘，取上清液過(guò)濾，得清液I；B)清液I調(diào)節(jié)pH值6.0～7.5后離心；或者清液I調(diào)節(jié)pH值6.0～7.5并加熱，然后冷卻至常溫后進(jìn)行離心；離心條件為3000～4000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為15～30分鐘，離心后取上清液過(guò)濾，得上清液II；C)清液II冷凍后融化，過(guò)濾，清液用截留分子量10000道爾頓以下的超濾膜超濾1～2次，超濾液為脾提取物。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟A)取新鮮健康脾臟，剔除雜質(zhì)及脂肪組織，加1～2倍脾臟重量注射用水或生理鹽水，勻漿，調(diào)節(jié)pH值3.8～4.2，-15℃～-25℃冷凍，在10～40℃下融化，重復(fù)凍融2～5次；最后一次融化后的勻漿液離心，離心條件為3500～4000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為15～20分鐘，取上清液過(guò)濾，得清液I；B)清液I調(diào)節(jié)pH值6.5～7.0后離心或調(diào)節(jié)pH值6.0～7.5，加熱60℃～80℃，加熱時(shí)間為15～20分鐘，冷卻至常溫后離心；離心條件為3500～4000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間為15～20分鐘，取上清液過(guò)濾，得清液II；C)清液II在-15℃～-25℃冷凍，凍實(shí)后在10～40℃下融化，過(guò)濾，清液用截留分子量8000道爾頓以下的超濾膜超濾1～2次，得超濾液，即為脾提取物。
9.根據(jù)權(quán)利要求7～8所述的制備方法，其特征在于，所述的脾提取物經(jīng)后處理制成藥劑學(xué)上可接受的不同劑型，如口服液、小容量注射劑、大容量注射劑、片劑、膠囊劑或凍干粉針劑。
10.權(quán)利要求1～4所述的脾提取物在制備治療原發(fā)性和繼發(fā)性細(xì)胞免疫缺陷病，如濕疹、血小板減少、多次感染綜合癥、呼吸道及肺部感染、習(xí)慣性感冒、慢性乙型肝炎、流行性腮腺炎、復(fù)發(fā)性口瘡疾病藥物；在制備治療放化療引起的白細(xì)胞減少癥、白血病、再生性障礙貧血、淋巴瘤及其他惡性腫瘤、改善腫瘤患者惡變質(zhì)、病毒感染、改善術(shù)后或重癥患者身體虛弱時(shí)藥物方面的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種從除人以外的哺乳動(dòng)物脾臟組織中提取制備的脾提取物，將哺乳動(dòng)物脾臟組織經(jīng)去脂肪、勻漿、凍融破碎、沉淀、超濾等步驟制得脾提取物，含有如下組分多肽、游離氨基酸、核酸、總糖，所有組分分子量均小于10000道爾頓；所述脾提取物在制備治療原發(fā)性和繼發(fā)性細(xì)胞免疫缺陷病(如濕疹、血小板減少、多次感染綜合癥等)、呼吸道及肺部感染、習(xí)慣性感冒、慢性乙型肝炎、流行性腮腺炎、復(fù)發(fā)性口瘡等疾病，在制備治療放化療引起的白細(xì)胞減少癥，白血病、再生性障礙貧血、淋巴瘤及其他惡性腫瘤、改善腫瘤患者惡變質(zhì)、病毒感染、改善術(shù)后或重癥患者身體虛弱時(shí)輔助用藥等藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P37/02GK1765371SQ20051010277
公開(kāi)日2006年5月3日 申請(qǐng)日期2005年9月15日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月2日
發(fā)明者郭智華 申請(qǐng)人:郭智華