專(zhuān)利名稱(chēng)：一種治療肝炎的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種由硫普羅寧、黃芩苷和黃芪或其提取物制成的用于治療肝炎的藥物組合物，及其制備方法和用途，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
2、背景技術(shù)中國(guó)是病毒性肝炎的高發(fā)區(qū)，約有8％-10％的人群為乙肝病毒攜帶者，約為1.3億人，占全球乙肝病毒攜帶者的1/3，其中約有3000萬(wàn)人患慢性肝炎，平均年發(fā)病例數(shù)約140萬(wàn)左右，每年因肝炎病死亡約30萬(wàn)人。丙型肝炎病毒攜帶者0.38億人，加上其他類(lèi)型的肝炎，患肝炎的總?cè)藬?shù)近2億人，估計(jì)每年因病毒性肝炎導(dǎo)致直接經(jīng)濟(jì)損失300億～500億人民幣。因此，研究開(kāi)發(fā)安全有效的治療肝炎的藥物，成為迫切需要解決的問(wèn)題。
硫普羅寧化學(xué)名為N-(2-巰基丙酰基)-甘氨酸，是一種含游離巰基的甘氨酸衍生物。臨床用于改善各類(lèi)急慢性肝炎的肝功能，脂肪肝、酒精肝、藥物性肝損傷的治療及重金屬的解毒；硫普羅寧可降低放化療的毒副作用，并可預(yù)防放化療所致的外周白細(xì)胞減少和二次腫瘤的發(fā)生；對(duì)老年性早期白內(nèi)障和玻璃體渾濁有顯著的治療作用。硫普羅寧結(jié)構(gòu)式如下 黃芩苷是從中藥材黃芩(Scutellariabaicalensis georgi)中提取的一種黃酮類(lèi)化合物，具有廣泛的藥理作用。主要藥理作用有(1)抗菌作用。黃芩苷是黃芩中主要的抗菌活性成份，抗菌譜廣，可抑制多種細(xì)菌的繁殖與生長(zhǎng)。(2)抗炎作用。有對(duì)抗組織胺，抑制炎癥水腫，降低毛細(xì)血管通透性的作用，能抑制炎癥反應(yīng)的紅、腫、熱、痛。(3)利尿作用?？商岣邔?shí)驗(yàn)動(dòng)物的尿生成速度。(4)降壓作用?？梢鸲喾N實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血壓下降。(5)保肝作用。本品對(duì)乙型肝炎表面抗原、e抗原、核心抗原有較顯著的保護(hù)作用，對(duì)乙型肝炎病毒DNA復(fù)制也有抑制作用；用藥后能顯著降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶，對(duì)肝臟有較好的保護(hù)作用。本品降谷丙轉(zhuǎn)氨酶作用較好，用藥期間可見(jiàn)乙肝表面抗原陽(yáng)性度下降，但不鞏固。
黃芪為豆科植物蒙古黃芪(Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao)或膜莢黃芪(Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.)的干燥根，是一種常用中藥，味甘、性溫，有補(bǔ)氣升陽(yáng)、固表止汗、托毒排膿和生肌等功效。黃芪的主要藥理作用有(1)抗衰老。(2)清除自由基。(3)黃芪多糖可顯著提高機(jī)體的免疫力。(4)黃芪多糖可增強(qiáng)人體細(xì)胞的生理代謝作用，能顯著促進(jìn)骨髓造血細(xì)胞DNA合成，加快核細(xì)胞分裂過(guò)程，對(duì)體內(nèi)血糖水平有雙向調(diào)節(jié)作用。(5)黃芪多糖在體外具有增強(qiáng)LAK細(xì)胞殺傷活性的作用，在體內(nèi)對(duì)荷黑色素瘤B16細(xì)胞的小鼠具有顯著增強(qiáng)IL-2/LAK抗腫瘤作用，延長(zhǎng)其生存期。
目前，利用硫普羅寧、黃芩苷和黃芪的相互作用，配伍組方，用于制備治療肝炎方面的藥物，尚未見(jiàn)報(bào)道。
3、發(fā)明內(nèi)容為了滿(mǎn)足臨床需要，更好的治療肝炎，提高人民健康水平，本發(fā)明提供了一種新的藥物組合物及其制備方法。
本發(fā)明的藥物組合物主要由硫普羅寧、黃芩苷和黃芪制成，三者的重量配比為硫普羅寧1～100份、黃芩苷5～250份、黃芪10～10000份，優(yōu)選為硫普羅寧2～50份、黃芩苷10～100份、黃芪100～1000份，最佳為硫普羅寧10份、黃芩苷25份、黃芪400份。
本發(fā)明的藥物組合物中的黃芪可以用適宜的溶劑和方法制備得到提取物，提取物再與其它原料藥和藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任一制劑，提取物中所含的主要有效成分為黃芪多糖或黃芪總皂苷，提取物中的主要有效成分的總含量最好不低于30％。
黃芪可以用適宜的溶劑經(jīng)過(guò)提取加工得到黃芪提取物，提取溶劑優(yōu)選水或乙醇，黃芪的提取方法可以為浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法或連續(xù)提取法。如可通過(guò)醇提后上柱的方法制備得到黃芪提取物，還可以通過(guò)根據(jù)文獻(xiàn)方法制備。
本發(fā)明提供了一種以多糖為主要有效成分的黃芪提取物(以下簡(jiǎn)稱(chēng)黃芪多糖)的優(yōu)選制備工藝，具體如下取黃芪藥材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小時(shí)，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，提取液合并，濃縮至提取液體積與生藥材的比例為1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量達(dá)到70％，過(guò)濾，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗滌，再用適量水溶解，過(guò)濾，濾液過(guò)大孔樹(shù)脂，用水洗脫，收集水洗液，將水洗液濃縮至藥液體積與藥材比例為1∶2.5，加入乙醇使含醇量達(dá)到70％，得沉淀，將沉淀用95％乙醇和丙酮洗滌脫水，減壓干燥(60℃)，即得。
通過(guò)本工藝制備的黃芪提取物中，黃芪多糖得率為0.5～2％，黃芪多糖的含量不低于70％，。
黃芪多糖還可由如下工藝制備，但不僅限于下述方法方法一取黃芪藥材，加水回流提取三次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.15～1.23，加乙醇使含醇量達(dá)80％，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，沉淀加水溶解，濾過(guò)，再加乙醇使含醇量達(dá)85％，靜置24小時(shí)，濾過(guò)，收集沉淀，真空干燥即得。通過(guò)本工藝制備的黃芪提取物得率為2～4％，黃芪多糖含量不低于40％。
方法二取黃芪藥材，加10倍量80％乙醇提取4小時(shí)，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，每次2小時(shí)，每次加水10倍量，提取液合并，過(guò)濾，濾液加乙醇使含醇量達(dá)85％，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過(guò)本工藝制備的黃芪提取物得率為3～4％，黃芪多糖含量不低于35％。
本發(fā)明提供了一種以總皂苷為主要有效成分的黃芪提取物(以下簡(jiǎn)稱(chēng)黃芪總皂苷)的優(yōu)選制備工藝，具體如下取黃芪，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，第一次加水10倍量，二、三次均為8倍量，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含醇量為75％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，加于已處理好的大孔吸附樹(shù)脂柱上，先用2倍體積的水沖柱，再用4倍體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，即得。
通過(guò)本工藝制備的黃芪總皂苷提取物得率為0.5～2％，總皂苷含量不低于50％，黃芪甲苷含量不低于2.0％。
黃芪總皂苷還可由如下方法制備，但不僅限于下述方法方法一取黃芪，加水煎煮三次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含乙醇量為60％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，減壓濃縮、真空干燥，即得。通過(guò)本工藝制備的黃芪提取物得率為3～5％，總皂苷含量不低于30％，黃芪甲苷含量不低于1％。
方法二取黃芪，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理1次使含乙醇量為60％，冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，并減壓濃縮、真空干燥，即得。通過(guò)本工藝制備的黃芪提取物得率為2～4％，總皂苷含量為不低于40％，黃芪甲苷含量不低于1％。
上述藥物組合物，可用黃芪提取物代替黃芪投料制得，按照提取物相對(duì)于藥材的得率計(jì)算，本發(fā)明組合物可以有以下2種不同配比，按重量份數(shù)比分別為配比1硫普羅寧1～100份、黃芩苷5～250份、黃芪多糖0.1～150份優(yōu)選為硫普羅寧2～50份、黃芩苷10～100份、黃芪多糖1～15份；最優(yōu)為硫普羅寧10份、黃芩苷25份、黃芪多糖2～8份；配比2硫普羅寧1～100份、黃芩苷5～250份、黃芪總皂苷0.1～150份；優(yōu)選為硫普羅寧2～50份、黃芩苷10～100份、黃芪總皂苷1～15份；最優(yōu)為硫普羅寧10份、黃芩苷25份、黃芪總皂苷2～8份。
上述藥物組合物中，以黃芪多糖的含量最好不低于30％；黃芪總皂苷的含量最好不低于30％，黃芪甲苷含量最好不低于1％。黃芪多糖和黃芪總皂苷可按前述方法制得。
以上組成是按重量份作為配比的，在生產(chǎn)時(shí)可按照相應(yīng)比例增大或減小，如大規(guī)模生產(chǎn)可以以千克為單位，或以噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以以克為單位，重量可以增大或者減小，但各組成之間重量配比的比例不變。
以上重量配比的比例是經(jīng)過(guò)科學(xué)篩選得到的，對(duì)于特殊病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的比例，增加或者減少不超過(guò)100％。
本發(fā)明藥物組分的用量是經(jīng)過(guò)發(fā)明人進(jìn)行大量摸索總結(jié)得出的，各組分用量在上述重量份范圍內(nèi)都具有較好療效。
本發(fā)明提供了一種用于制備治療肝炎方面疾病的藥物，可用于甲肝、乙肝、丙肝等各種類(lèi)型的肝炎。
本發(fā)明的藥物組合物可以加一種或多種藥學(xué)上可接受的載體，以口服、鼻吸入或腸胃外給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑，如片劑、膠囊、軟膠囊、分散片、口服液、顆粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、緩釋片、緩釋膠囊、控釋片、控釋膠囊，制成液體制劑如水或油懸浮劑或其它液體制劑如糖漿等；用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射用的溶液、水或油懸浮劑等，如水針、凍干粉針、無(wú)菌粉針、輸液等。本組合物的優(yōu)選的劑型是注射劑或口服制劑。
本發(fā)明的藥物組合物可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，需要的時(shí)候可以添加各種藥學(xué)上可接受的載體。所述的載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤(rùn)滑劑等。
本發(fā)明的藥物組合物在制成注射劑時(shí)，為了增加其溶解度，可以加入聚山梨酯-80等增溶劑。輸液中可以加入用于調(diào)節(jié)滲透壓的等滲調(diào)節(jié)劑，例如，氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、乳酸鈉、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖。粉針中可加入賦形劑，例如，甘露醇、葡萄糖等。
本發(fā)明的組合物具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)本發(fā)明提供了一種新的用于治療肝炎的藥物組合物，滿(mǎn)足了臨床需要。
(2)首次通過(guò)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究證明本發(fā)明的藥物組合物對(duì)醋氨酚、D-氨基半乳糖、四氯化碳所致的小鼠急性肝損傷有保護(hù)作用，可以抑制鴨乙肝病毒的繁殖，可抗四氯化碳所致的大鼠肝纖維化。三藥具有協(xié)同增效作用，療效顯著。這是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所預(yù)想不到的。
(3)對(duì)本發(fā)明的藥物組合物各配比進(jìn)行了藥效學(xué)研究，得出了本發(fā)明組合物的最優(yōu)配比。
(4)本發(fā)明可以以藥材或提取物直接投料，制備工藝簡(jiǎn)單，可以使不同批次藥品間質(zhì)量差異小，藥品質(zhì)量更均勻穩(wěn)定。
(5)通過(guò)特殊安全性試驗(yàn)和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)證實(shí)，本發(fā)明的藥物組合物注射劑安全穩(wěn)定。
(6)硫普羅寧具有良好的抗肝炎作用，黃芩苷和黃芪作輔助藥可顯著提高抗肝炎活性，合并用藥療效確切，且減小了相對(duì)用藥劑量，具有廣泛的應(yīng)用前景。
以下通過(guò)實(shí)驗(yàn)例來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果，這些實(shí)驗(yàn)例包括本發(fā)明的藥物組合物的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，硫普羅寧、黃芩苷和黃芪多糖的組合物以下簡(jiǎn)稱(chēng)LHH組合物I，硫普羅寧、黃芩苷和黃芪總皂苷的組合物以下簡(jiǎn)稱(chēng)LHH組合物II。實(shí)驗(yàn)例中所用黃芪多糖取自實(shí)施例1、黃芪總皂苷取自實(shí)施例2。
實(shí)驗(yàn)例1 LHH組合物合并用藥藥效研究供試品空白對(duì)照組0.9％生理鹽水注射液，自制；模型組0.9％生理鹽水注射液，自制；
硫普羅寧組注射用硫普羅寧，河南省新誼藥業(yè)股份有限公司；黃芩苷組黃芩苷注射液，自制；黃芪多糖組黃芪多糖，自制，取自實(shí)施例1所制的黃芪多糖；黃芪總皂苷組黃芪總皂苷，自制，取自實(shí)施例2所制的黃芪總皂苷；LHH組合物I不同配比組注射用LHH組合物I(硫普羅寧+黃芩苷+黃芪多糖)不同配比，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例3)；LHH組合物II不同配比組注射用LHH組合物II(硫普羅寧+黃芩苷+黃芪總皂苷)不同配比，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例4)。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠，體重18～25g，雌雄各半。
實(shí)驗(yàn)方法取小鼠180只，隨機(jī)分成18組，每組10只，組別見(jiàn)下表?？瞻讓?duì)照組和模型組每日尾靜脈注射生理鹽水20ml/kg鼠重，每日1次，連續(xù)10d；給藥組尾靜脈注射給藥，每日1次，劑量見(jiàn)下表，連續(xù)10d。空白對(duì)照組在最后一次尾靜脈注射6h后腹腔注射生理鹽水。模型組和給藥組在最后一次尾靜脈注射6h后腹腔注射醋氨酚300mg/kg鼠重，各組在腹腔注射生理鹽水及醋氨酚16h后斷頭，取血液、肝臟，進(jìn)行生化指標(biāo)血清ALT(谷丙轉(zhuǎn)氨酶)和肝組織LPO(過(guò)氧化脂質(zhì))的測(cè)試，結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 LHH組合物對(duì)醋氨酚損傷小鼠肝組織ALT和LPO的影響
與空白對(duì)照組比較，◇◇P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與硫普羅寧組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與黃芩苷組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與黃芪多糖組比較，☆P＜0.05，☆☆P＜0.01；與黃芪總皂苷組比較，&P＜0.05，&&P＜0.01。
結(jié)論與空白對(duì)照組相比，模型組ALT和LPO的活性顯著升高，差異顯著(P＜0.01)，說(shuō)明造?？煽?。與模型組相比，硫普羅寧組、黃芩苷組、黃芪多糖組、黃芪總皂苷組和LHH組合物I和LHH組合物II各配比組ALT和LPO的活性明顯降低(P＜0.05，P＜0.01)，說(shuō)明各藥均對(duì)醋氨酚所致小鼠肝損傷有保護(hù)作用。其中LHH組合物I和LHH組合物II各配比組療效更好(P＜0.01)，均優(yōu)于單用硫普羅寧、黃芩苷、黃芪多糖或黃芪總皂苷，說(shuō)明硫普羅寧、黃芩苷和黃芪三藥合用，有協(xié)同增效作用。LHH組合物I和LHH組合物II各配比組中，均以硫普羅寧+黃芩苷+黃芪(100mg+250mg+4g)組療效最為顯著。
實(shí)驗(yàn)例2 LHH組合物對(duì)D-氨基半乳糖致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用供試品空白對(duì)照組0.9％生理鹽水注射液，自制；模型組0.9％生理鹽水注射液，自制硫普羅寧組注射用硫普羅寧，河南省新誼藥業(yè)股份有限公司；LHH組合物I低、中、高劑量組注射用LHH組合物I，硫普羅寧+黃芩苷+黃芪(100mg+250mg+4g)，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例3)；LHH組合物II低、中、高劑量組注射用LHH組合物II，硫普羅寧+黃芩苷+黃芪(100mg+250mg+4g)，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例4)。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠，體重20～25g，雌雄各半。
實(shí)驗(yàn)方法取小鼠90只，隨機(jī)分為9組，分別為空白對(duì)照組、模型組、硫普羅寧組、注射用LHH組合物I低、中、高劑量組和注射用LHH組合物II低、中、高劑量組，每組10只?？瞻讓?duì)照組和模型組每日尾靜脈注射生理鹽水20ml/kg鼠重，每日1次，連續(xù)10d；給藥組尾靜脈注射給藥，每日1次，劑量見(jiàn)下表，連續(xù)10d?？瞻讓?duì)照組在最后一次尾靜脈注射1h后腹腔注射生理鹽水，其余各組動(dòng)物均腹腔注射100g/L的D-氨基半乳糖500g/kg。24h后處死動(dòng)物取血，離心，取血清，全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。處死前動(dòng)物斷尾取血玻片法測(cè)定動(dòng)物凝血時(shí)間。檢測(cè)指標(biāo)為天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、血清白蛋白(ALB)、凝血時(shí)間(CT)。結(jié)果見(jiàn)表2。
表2 LHH組合物對(duì)D-氨基半乳糖致急性肝損傷小鼠血清AST、ALB含量和凝血時(shí)間(CT)的影響
與空白對(duì)照組比較◇◇P＜0.01，◇◇◇P＜0.001；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與硫普羅寧組比較，#P＜0.05，##P＜0.01結(jié)論與空白對(duì)照組相比，模型組天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)的活性顯著升高(P＜0.001)，血清白蛋白(ALB)數(shù)量顯著減少(P＜0.01)，凝血時(shí)間(CT)閑顯著延長(zhǎng)(P＜0.001)，說(shuō)明造模可靠。與模型組相比，硫普羅寧組、LHH組合物I和LHH組合物II各劑量組天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)的活性明顯降低(P＜0.05，P＜0.01)，血清白蛋白(ALB)數(shù)量明顯增加(P＜0.01)，凝血時(shí)間(CT)閑明顯縮短(P＜0.001)，說(shuō)明各藥均有保肝作用，對(duì)D-氨基半乳糖所致小鼠肝損傷有保護(hù)作用。LHH組合物I和LHH組合物II各劑量組療效均優(yōu)于單用硫普羅寧，說(shuō)明硫普羅寧、黃芩苷和黃芪三藥合用，有協(xié)同增效作用。其中LHH組合物I和LHH組合物II中、高劑量保護(hù)作用更明顯(P＜0.01)。
實(shí)驗(yàn)例3 LHH組合物對(duì)四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用供試品空白對(duì)照組0.9％生理鹽水注射液，自制；模型組0.9％生理鹽水注射液，自制；硫普羅寧組注射用硫普羅寧，河南省新誼藥業(yè)股份有限公司；LHH組合物I低、中、高劑量組注射用LHH組合物I，硫普羅寧+黃芩苷+黃芪(100mg+250mg+4g)，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例3)；LHH組合物II低、中、高劑量組注射用LHH組合物II，硫普羅寧+黃芩苷+黃芪(100mg+250mg+4g)，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例4)。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠，體重22～26g，雌雄各半。
實(shí)驗(yàn)方法取小鼠90只，隨機(jī)分為9組，分別為空白對(duì)照組、模型組、硫普羅寧組、注射用LHH組合物I低、中、高劑量組和注射用LHH組合物II低、中、高劑量組，每組10只?？瞻讓?duì)照組和模型組每日尾靜脈注射生理鹽水20ml/kg鼠重，每日1次，連續(xù)7d；給藥組尾靜脈注射給藥，每日1次，劑量見(jiàn)下表，連續(xù)7d?？瞻讓?duì)照組在最后一次尾靜脈注射2h后腹腔注射花生油10ml/kg，其余各組動(dòng)物均腹腔注射0.12％CCl4花生油溶液10ml/kg，禁食過(guò)夜。16h后斷頭處死動(dòng)物，取血清測(cè)試ALT、AST的值。斷頭取血后，立即剖腹取出肝臟、脾臟，吸去血液，剪去脂肪、系膜，精確稱(chēng)重肝臟、脾臟重量。結(jié)果見(jiàn)表3。
表3 LHH組合物對(duì)CCl4所致急性肝損傷小鼠肝、脾指數(shù)和血清ALT、AST含量的影響
與空白對(duì)照組比較◇P＜0.05，◇◇P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與硫普羅寧組比較，#P＜0.05，##P＜0.01結(jié)論CCl4模型組小鼠肝指數(shù)、脾指數(shù)較正常對(duì)照組小鼠數(shù)值增高(P＜0.05)，CCl4模型組小鼠血清ALT、AST值較正常對(duì)照組小鼠數(shù)值增高(P＜0.01)，說(shuō)明小鼠注射CCl4花生油溶液后肝臟損，造模成功，模型穩(wěn)定可靠。與模型組相比，LHH組合物I和LHH組合物II中、高劑量組小鼠肝指數(shù)、脾指數(shù)降低(P＜0.05)，肝、脾腫大減輕，LHH組合物I和LHH組合物II各劑量組血清ALT、AST值明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)，說(shuō)明本發(fā)明組合物對(duì)CCl4所致急性肝損傷有保護(hù)作用。其中LHH組合物I和LHH組合物II各劑量組療效均優(yōu)于單用硫普羅寧，說(shuō)明硫普羅寧、黃芩苷和黃芪三藥合用，有協(xié)同增效作用。
實(shí)驗(yàn)例4 LHH組合物抗鴨乙肝病毒作用供試品空白對(duì)照組0.9％生理鹽水注射液，自制；硫普羅寧組注射用硫普羅寧，河南省新誼藥業(yè)股份有限公司；陽(yáng)性對(duì)照組注射用阿昔洛韋，石藥集團(tuán)中諾藥業(yè)(石家莊)有限公司；LHH組合物I低、中、高劑量組注射用LHH組合物I，硫普羅寧+黃芩苷+黃芪(100mg+250mg+4g)，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例3)；LHH組合物II低、中、高劑量組注射用LHH組合物II，硫普羅寧+黃芩苷+黃芪(100mg+250mg+4g)，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例4)。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物市售1日齡北京鴨；DHBV(乙型肝炎病毒)陽(yáng)性血清，復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室。
實(shí)驗(yàn)方法4.1動(dòng)物模型北京鴨經(jīng)足靜脈注射0.2mlDHBV陽(yáng)性血清，7d后取血，分離血清，-20℃保存待檢。
4.2藥物治療篩選出感染成功的陽(yáng)性鴨54只，隨機(jī)分為9組，每組6只，分別為空白對(duì)照組、硫普羅寧組、陽(yáng)性對(duì)照組、注射用LHH組合物I低、中、高劑量組和注射用LHH組合物II低、中、高劑量組，每組6只?？瞻讓?duì)照組每日灌胃生理鹽水20ml/kg，每日2次，連續(xù)14d；給藥組灌胃給藥，每日2次，劑量見(jiàn)下表，連續(xù)14d。陽(yáng)性藥物作為治療對(duì)照組，以阿昔洛韋(ACV)按100mg/kg灌胃，2次/d，給藥2周。分別用于藥前(1d)、用藥第7天(T7)，用藥第14天(T14)和停藥后第7天(P7)。自鴨腿脛靜脈取血，分離血清，-20℃保存待檢。采用DHBV-DNA Dot Blot法，以雜交斑點(diǎn)吸光度值(A)作為標(biāo)本DHBV-DNA水平值。結(jié)果見(jiàn)表4。
結(jié)論陽(yáng)性對(duì)照(阿昔洛韋)組在給藥后第7天和第14天，與給藥前及與空白對(duì)照組比較，差異有顯著性(P＜0.01)，但停藥后又顯著升高，與給藥前比較差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。不同劑量LHH組合物I和LHH組合物II均對(duì)DHBV有抑制作用，且停藥后無(wú)反跳，其中中、高劑量組抑制作用更為明顯。LHH組合物I和LHH組合物II各給藥組療效均優(yōu)于單用硫普羅寧，說(shuō)明硫普羅寧、黃芩苷和黃芪三藥合用，有協(xié)同增效作用。
表4 LHH組合物對(duì)DHBV-DNA的抑制作用
注與空白對(duì)照組比較◇P＜0.05，◇◇P＜0.01；與給藥前相比@P＜0.05，@@P＜0.01。
實(shí)驗(yàn)例5 LHH組合物抗大鼠肝纖維化作用供試品空白對(duì)照組0.9％生理鹽水注射液，自制；硫普羅寧組注射用硫普羅寧，河南省新誼藥業(yè)股份有限公司；LHH組合物I低、中、高劑量組注射用LHH組合物I，硫普羅寧+黃芩苷+黃芪(100mg+250mg+4g)，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例3)；LHH組合物II低、中、高劑量組注射用LHH組合物II，硫普羅寧+黃芩苷+黃芪(100mg+250mg+4g)，自制(制備方法參見(jiàn)實(shí)施例4)。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，體重180～230g，雄性。
實(shí)驗(yàn)方法取健康大鼠10只，皮下注射花生油3ml/kg，每日1次，共10周，作為對(duì)照組。肝纖維化模型組應(yīng)用40％CCl4花生油溶液按3ml/kg皮下注射，每周2次，共8周，誘導(dǎo)肝纖維化模型。取肝纖維化模型大鼠80只，隨機(jī)分為8組，分別為模型組、硫普羅寧組、注射用LHH組合物I低、中、高劑量組和注射用LHH組合物II低、中、高劑量組，每組10只。除對(duì)照組外，其余各組繼續(xù)以40％CCl4花生油溶液3ml/kg皮下注射，每日1次。硫普羅寧組、注射用LHH組合物I低、中、高劑量組和注射用LHH組合物II低、中、高劑量組同時(shí)灌胃給藥相應(yīng)藥物，劑量見(jiàn)下表。繼續(xù)給藥2周。10周后宰殺大鼠，無(wú)菌操作取心血2ml，分離血清，-20℃保存，用放射免疫法檢測(cè)肝纖維化指標(biāo)透明質(zhì)酸(HA)和層粘蛋白(LN)；用生化法檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)，采用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果見(jiàn)表5。
結(jié)論與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠血清ALT、AST、HA、LN含量有顯著性差異，說(shuō)明模型穩(wěn)定可靠。硫普羅寧、LHH組合物I和LHH組合物II治療后肝纖維化大鼠血清ALT和AST均低于模型組，差異具有顯著性(P＜0.05或P＜0.01)，提示硫普羅寧、LHH組合物I和LHH組合物II有降酶和保護(hù)肝功能的作用；硫普羅寧、LHH組合物I和LHH組合物II治療后血清HA和LN水平均顯著低于模型組，差異具有顯著性(P＜0.05或P＜0.01)，提示硫普羅寧、LHH組合物I和LHH組合物II均有改善肝纖維化血清學(xué)指標(biāo)，具有抗肝纖維化的作用。其中，LHH組合物I和LHH組合物II組療效優(yōu)于硫普羅寧組，提示硫普羅寧、黃芩苷和黃芪三藥合用，有協(xié)同增效作用。
表5 LHH組合物對(duì)CCl4所致肝纖維化大鼠的血清學(xué)指標(biāo)的影響
與空白對(duì)照組比較◇◇◇P＜0.001；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與硫普羅寧組比較，#P＜0.05。
實(shí)驗(yàn)例6小鼠注射給藥急性毒性實(shí)驗(yàn)(1)實(shí)驗(yàn)方法供試品注射用LHH組合物I，劑型凍干粉針，規(guī)格硫普羅寧+黃芩苷+黃芪(100mg+250mg+4g)，來(lái)源于實(shí)施例3；注射用LHH組合物II，劑型凍干粉針，規(guī)格硫普羅寧+黃芩苷+黃芪(100mg+250mg+4g)，來(lái)源于實(shí)施例4。
受試動(dòng)物小鼠，每組雌雄各5只，雄性體重25～28g，雌性體重21～24g。
給藥途徑靜脈注射、腹腔注射。
觀察項(xiàng)目死亡數(shù)、一般狀態(tài)、體重、剖檢、半數(shù)致死劑量。
(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果按照急性毒性實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行預(yù)試，腹腔注射及靜脈注射兩給藥途徑皆無(wú)法測(cè)出藥物的半數(shù)致死量，也未見(jiàn)明顯的毒性反應(yīng)，故進(jìn)行一日內(nèi)最大給藥量實(shí)驗(yàn)。給藥劑量尾靜脈分別注射注射用LHH組合物I、注射用LHH組合物II各16mg/10g，腹腔分別注射注射用LHH組合物I、注射用LHH組合物II各16mg/10g，一日2次。
死亡數(shù)未出現(xiàn)死亡。
一般狀態(tài)；未見(jiàn)異常變化。
體重于給藥前1天，給藥日，給藥后1、3、7、14天測(cè)量；未見(jiàn)異常變化。
剖檢心、肝、肺、腎等組織未見(jiàn)異常變化。
(3)結(jié)論本實(shí)驗(yàn)中未出現(xiàn)死亡，推測(cè)注射用LHH組合物I、II對(duì)雌雄小鼠靜脈和腹腔注射給藥的最大耐受量均為32mg/10g，相當(dāng)于50kg體重人日最大用量1600mg的100倍。表明本品低毒，安全性高。
實(shí)驗(yàn)例7注射用LHH組合物穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)供試品注射用LHH組合物I，劑型凍干粉針，規(guī)格硫普羅寧+黃芩苷+黃芪(100mg+250mg+4g)，來(lái)源于實(shí)施例3；注射用LHH組合物II，劑型凍干粉針，規(guī)格硫普羅寧+黃芩苷+黃芪(100mg+250mg+4g)，來(lái)源于實(shí)施例4。
考察項(xiàng)目性狀、pH值。
長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果將本品各組合物置溫度25℃±2℃、相對(duì)濕度60％±10％的條件下放置6個(gè)月、12個(gè)月，各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本品各組合物粉針劑長(zhǎng)期放置基本穩(wěn)定。
具體實(shí)施方式
以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中各劑型的輔料可以用藥學(xué)上可接受的輔料替換，或者減少、增加。實(shí)施例3～17所用的黃芪多糖取自實(shí)施例1，黃芪總皂苷取自實(shí)施例2。
實(shí)施例1 以多糖為主要有效成分的黃芪提取物即黃芪多糖的制備黃芪多糖制備工藝取黃芪藥材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小時(shí)，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，提取液合并，濃縮至提取液體積與生藥材的比例為1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量達(dá)到70％，過(guò)濾，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗滌，再用適量水溶解，過(guò)濾，濾液過(guò)大孔樹(shù)脂，用水洗脫，收集水洗液，將水洗液濃縮至藥液體積與藥材比例為1∶2.5，加入乙醇使含醇量達(dá)到70％，得沉淀，將沉淀用95％乙醇和丙酮洗滌脫水，減壓干燥(60℃)，即得。
黃芪多糖的含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備取經(jīng)105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，精密稱(chēng)定，置100ml量瓶中，加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用。
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1ml～0.6ml共6份，分別置25ml量瓶中，加水至2.0ml，并加苯酚溶液(取苯酚300g，鋁片0.3g，碳酸氫鈉0.15g，混合蒸餾，收集182℃餾分，配制成5％水溶液)1.0ml，搖勻，迅速滴加濃硫酸5.0ml，搖勻，放置5min，置水浴中加熱15min，取出，迅速冷卻至室溫，另以2.0ml水同上平行操作作為空白對(duì)照，在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收值，計(jì)算回歸方程。
測(cè)定方法取黃芪提取物0.5g置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下的方法自“加水至2.0ml”起，依法測(cè)定吸收值，依回歸方程計(jì)算多糖的含量。
黃芪多糖的鑒別(1)取本品約0.2g，加水5ml溶解后，加堿性酒石酸銅試液5滴，加熱即產(chǎn)生紅色沉淀，冷卻，濾過(guò)，取濾液加鹽酸1滴使成酸性，水浴加熱10分鐘，放冷，調(diào)節(jié)pH值至中性，加堿性酒石酸銅試液0.5ml，水浴加熱即產(chǎn)生紅色的氧化亞銅沉淀。
(2)取本品約0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml搖勻，緩緩加入硫酸3ml，兩液面交界處顯紫紅色環(huán)。
黃芪多糖的含量和得率
根據(jù)上述工藝，制得黃芪提取物三批樣品，其含量和得率見(jiàn)上表。由結(jié)果可以看出，通過(guò)本工藝制備的黃芪多糖的得率為0.5～2％，多糖含量不低于50％。
實(shí)施例2 以總皂苷為主要有效成分的黃芪提取物即黃芪總皂苷的制備黃芪總皂苷制備工藝取黃芪，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，第一次加水10倍量，二、三次均為8倍量，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含醇量為75％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，加于已處理好的大孔吸附樹(shù)脂柱上，先用2倍體積的水沖柱，再用4倍體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，即得。
黃芪總皂苷鑒別實(shí)驗(yàn)鑒別實(shí)驗(yàn)一 取本品0.01g，加甲醇20ml，加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液加于中性氧化鋁柱(100～120目，5g，內(nèi)徑10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗滌2次，每次20ml；棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述兩種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，涼干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點(diǎn)；紫外光燈(365nm)下顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)。
鑒別實(shí)驗(yàn)二取本品0.01g，加乙醇30ml，加熱回流20分鐘，濾過(guò)，濾液加0.3％氫氧化鈉溶液15ml使溶解，濾過(guò)，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5～6，用乙酸乙脂15ml振搖提取，分取乙酸乙脂液，用鋪有無(wú)水硫酸鈉的濾紙濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋抑?ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪對(duì)照藥材2g，同法制成對(duì)照藥材溶液。吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(10∶1)作為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，涼干，置氨蒸氣中熏后置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。
黃芪總皂苷含量測(cè)定總皂苷的含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取于105℃干燥至恒重的黃芪甲苷對(duì)照品約10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml含黃芪甲苷0.1mg)。
供試品溶液的制備取本品0.1g，精密稱(chēng)定，加水25ml使溶解，移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次10ml，棄去水液，正丁醇至水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，移?5ml量瓶中，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
測(cè)定法 精密量取對(duì)照品溶液、供試品溶液各1ml，置25ml鈉氏比色管，置水浴中蒸干，放冷，加新鮮配制的5％香草醛-冰醋酸溶液0.4ml，高氯酸1.6ml，搖勻，放置5分鐘，置沸水浴中顯色15分鐘，取出，立即置冰浴中冷卻至室溫，加入8ml冰醋酸，搖勻，在538nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得。
黃芪甲苷的含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙睛-水(32∶68)為流動(dòng)相；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計(jì)算不低于4000。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 精密稱(chēng)取本品0.04g，精密稱(chēng)定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸過(guò)夜，再加甲醇適量，加熱回流4小時(shí)，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，放冷，通過(guò)D101型大孔吸附樹(shù)脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm)，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇30ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液10μl、20μl與供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，以外標(biāo)兩點(diǎn)對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。
黃芪總皂苷和黃芪甲苷的含量及得率
根據(jù)上述工藝，制得黃芪提取物三批樣品，其含量和得率見(jiàn)上表。由結(jié)果可以看出，通過(guò)本工藝制備的黃芪總皂苷提取物得率為0.5～2％，總皂苷含量不低于50％，黃芪甲苷含量不低于2.0％。
實(shí)施例3 LHH組合物I粉針劑的制備處方硫普羅寧100g黃芩苷 250g黃芪多糖50g(相當(dāng)于黃芪藥材4g)聚山梨酯80 25g甘露醇 100g無(wú)菌注射用水加至3000ml
共制備 1000支制備工藝1)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進(jìn)行無(wú)菌處理。
2)按照處方量稱(chēng)取原料和輔料。
3)將硫普羅寧和黃芪多糖加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。將黃芩苷加入少量注射用水，用少量氫氧化鈉溶液溶解完全，加入處方量的聚山梨酯80攪拌均勻。合并上述溶液，補(bǔ)加無(wú)菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.22um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)分裝于抗生素玻璃瓶中，半壓塞。將樣品放入凍干機(jī)中冷凍干燥。預(yù)凍-45℃5小時(shí)，低溫真空干燥-45℃～0℃20小時(shí)，然后升溫至25℃真空干燥3小時(shí)。
9)凍干結(jié)束，壓塞，軋蓋。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例4 LHH組合物II粉針劑的制備處方硫普羅寧100g黃芩苷 250g黃芪總皂苷 48g(相當(dāng)于黃芪藥材4g)聚山梨酯80 30g甘露醇 100g無(wú)菌注射用水加至3000ml
共制備 1000支制備工藝
1)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進(jìn)行無(wú)菌處理。
2)按照處方量稱(chēng)取原料和輔料。
3)將硫普羅寧加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。將黃芩苷和黃芪總皂苷加入少量注射用水，用少量氫氧化鈉溶液溶解完全，加入處方量的聚山梨酯80攪拌均勻。合并上述溶液，補(bǔ)加無(wú)菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.22um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)分裝于抗生素玻璃瓶中，半壓塞。將樣品放入凍干機(jī)中冷凍干燥。預(yù)凍-45℃5小時(shí)，低溫真空干燥-45℃～0℃20小時(shí)，然后升溫至25℃真空干燥3小時(shí)。
9)凍干結(jié)束，壓塞，軋蓋。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例5 LHH組合物I水針劑的制備處方硫普羅寧100g黃芩苷 250g黃芪多糖50g(相當(dāng)于黃芪藥材4g)聚山梨酯80 25g注射用水加至5000ml
共制備 1000支制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將硫普羅寧和黃芪多糖加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。將黃芩苷加入少量注射用水，用少量氫氧化鈉溶液溶解完全，加入處方量的聚山梨酯80攪拌均勻。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)將溶液熔封于玻璃安瓿中。
9)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘。
10)趁熱將樣品放入0.01％的亞甲藍(lán)溶液中檢漏。
11)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例6 LHH組合物II水針劑的制備處方硫普羅寧100g黃芩苷 250g黃芪總皂苷 48g(相當(dāng)于黃芪藥材4g)聚山梨酯80 30g注射用水加至5000ml
共制備 1000支制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將硫普羅寧加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。將黃芩苷和黃芪總皂苷加入少量注射用水，用少量氫氧化鈉溶液溶解完全，加入處方量的聚山梨酯80攪拌均勻。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)將溶液熔封于玻璃安瓿中。
9)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘。
10)趁熱將樣品放入0.01％的亞甲藍(lán)溶液中檢漏。
11)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例7 LHH組合物I氯化鈉輸液的制備處方硫普羅寧100g黃芩苷 250g黃芪多糖50g(相當(dāng)于黃芪藥材4g)聚山梨酯80 25g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml
共制備 1000瓶制備工藝1)前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將硫普羅寧和黃芪多糖加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。將黃芩苷加入少量注射用水，用少量氫氧化鈉溶液溶解完全，加入處方量的聚山梨酯80攪拌均勻。將氯化鈉用適量注射用水溶解完全，合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
3)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
4)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
5)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
6)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
7)灌裝于100ml的輸液瓶中。
8)115℃熱壓滅菌30分鐘。
9)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例8 LHH組合物II氯化鈉輸液的制備處方硫普羅寧100g黃芩苷 250g黃芪總皂苷 48g(相當(dāng)于黃芪藥材4g)聚山梨酯80 30g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml
共制備 1000瓶制備工藝1)前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將硫普羅寧加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。將黃芩苷和黃芪總皂苷加入少量注射用水，用少量氫氧化鈉溶液溶解完全，加入處方量的聚山梨酯80攪拌均勻。將氯化鈉用適量注射用水溶解完全，合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
3)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
4)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
5)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
6)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
7)灌裝于100ml的輸液瓶中。
8)115℃熱壓滅菌30分鐘。
9)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例9 LHH組合物I葡萄糖輸液的制備處方硫普羅寧100g黃芩苷 250g黃芪多糖50g(相當(dāng)于黃芪藥材4g)聚山梨酯80 25g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml
共制備 1000瓶制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將硫普羅寧和黃芪多糖加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。將黃芩苷加入少量注射用水，用少量氫氧化鈉溶液溶解完全，加入處方量的聚山梨酯80攪拌均勻。合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。將葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全，加熱煮沸15分鐘。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例10 LHH組合物II葡萄糖輸液的制備處方硫普羅寧100g黃芩苷 250g黃芪總皂苷 48g(相當(dāng)于黃芪藥材4g)聚山梨酯80 30g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml
共制備 1000瓶制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將硫普羅寧加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。將黃芩苷和黃芪總皂苷加入少量注射用水，用少量氫氧化鈉溶液溶解完全，加入處方量的聚山梨酯80攪拌均勻。合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。將葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全，加熱煮沸15分鐘。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例11 LHH組合物片劑的制備LHH組合物I處方硫普羅寧100g黃芩苷 250g黃芪多糖50g(相當(dāng)于黃芪藥材4g)淀粉40.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂5.0g羧甲淀粉鈉 10.0g
共制備 1000片LHH組合物II處方硫普羅寧100g黃芩苷 250g黃芪總皂苷 48g(相當(dāng)于黃芪藥材4g)淀粉40.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂5.0g羧甲淀粉鈉 10.0g
共制備 1000片制備工藝1)將硫普羅寧、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)和黃芩苷分別粉碎過(guò)100目篩備用。
2)按照處方量稱(chēng)取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將黃芪多糖(或黃芪總皂苷)、黃芩苷、硫普羅寧、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過(guò)20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過(guò)18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的片重壓片。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例12 LHH組合物膠囊劑的制備
LHH組合物I處方硫普羅寧100g黃芩苷 250g黃芪多糖50g(相當(dāng)于黃芪藥材4g)淀粉20.0g微晶纖維素 60.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂5.0g
共制備 1000粒LHH組合物II處方硫普羅寧100g黃芩苷 250g黃芪總皂苷 48g(相當(dāng)于黃芪藥材4g)淀粉20.0g微晶纖維素 60.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂5.0g
共制備 1000粒制備工藝1)將硫普羅寧、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)和黃芩苷分別粉碎過(guò)100目篩備用。
2)按照處方量稱(chēng)取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將黃芪多糖(或黃芪總皂苷)、黃芩苷、硫普羅寧、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過(guò)20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過(guò)18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的裝量裝入膠囊。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例13 LHH組合物顆粒劑的制備LHH組合物I處方硫普羅寧 100g黃芩苷 250g黃芪多糖 50g(相當(dāng)于黃芪藥材4g)糖粉 2000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包
LHH組合物II處方硫普羅寧 100g黃芩苷 250g黃芪總皂苷 48g(相當(dāng)于黃芪藥材4g)糖粉 2000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包制備工藝1)將蔗糖粉碎過(guò)100目篩備用。將硫普羅寧、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)和黃芩苷分別粉碎過(guò)100目篩備用。
2)按照處方量稱(chēng)取原料和輔料。
3)將硫普羅寧、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)、黃芩苷與糖粉以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材，4)過(guò)20目篩制顆粒。
5)顆粒在60℃的條件下烘干。
6)干顆粒過(guò)18目篩整粒。
7)取樣，半成品化驗(yàn)顆粒中主藥的含量，確定裝量。
8)包裝，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例14 LHH組合物滴丸劑的制備LHH組合物I處方硫普羅寧 100g黃芩苷250g黃芪多糖 50g(相當(dāng)于黃芪藥材4g)聚乙二醇6000 1000gLHH組合物II處方硫普羅寧 100g黃芩苷250g黃芪總皂苷48g(相當(dāng)于黃芪藥材4g)聚乙二醇6000 1000g制備工藝將硫普羅寧、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)和黃芩苷粉碎過(guò)100目篩后備用。將聚乙二醇6000在水浴中加熱熔融，待全部熔融后加入硫普羅寧、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)和黃芩苷，攪拌溶解，60目篩過(guò)濾，保持60℃滴入冷至10℃以下的液體石蠟中制成丸。
實(shí)施例15 LHH組合物軟膠囊劑的制備
LHH組合物I處方硫普羅寧 100g黃芩苷250g黃芪多糖 50g(相當(dāng)于黃芪藥材4g)大豆油300.0g大豆磷脂 40g蜂蠟 20g
共制備1000粒LHH組合物II處方硫普羅寧 100g黃芩苷250g黃芪總皂苷48g(相當(dāng)于黃芪藥材4g)大豆油300.0g大豆磷脂 40g蜂蠟 20g
共制備1000粒制備工藝將處方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蠟加熱熔融，混勻，放冷，加入黃芪多糖(或黃芪總皂苷)、黃芩苷、硫普羅寧研勻，壓制成軟膠囊即可。
實(shí)施例16 LHH組合物口服液體劑的制備LHH組合物I處方硫普羅寧 100g黃芩苷250g黃芪多糖 50g(相當(dāng)于黃芪藥材4g)聚山梨酯8025g苯甲酸鈉 15g甜菊甙10g純化水加至10000ml
共制備1000支LHH組合物II處方硫普羅寧 100g黃芩苷250g黃芪總皂苷48g(相當(dāng)于黃芪藥材4g)聚山梨酯8030g苯甲酸鈉 15g甜菊甙10g純化水加至10000ml
共制備1000支制備工藝1)將硫普羅寧和黃芪多糖(或黃芪總皂苷)加入配液量30％的水中加熱攪拌溶解完全。將黃芩苷加入少量水，用少量氫氧化鈉溶液溶解完全，加入處方量的聚山梨酯80攪拌均勻。合并上述溶液，補(bǔ)加純化水至全量。
2)將苯甲酸鈉和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全。
3)合并上述兩個(gè)溶液，補(bǔ)加水至全量。
4)過(guò)0.8um的微孔濾膜過(guò)濾。
5)半成品化驗(yàn)。
6)灌裝。成品全檢，包裝入庫(kù)。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于該組合物主要由下列重量份的原料藥制成硫普羅寧1～100份、黃芩苷5～250份、黃芪10～10000份。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于原料藥的重量份數(shù)為硫普羅寧2～50份、黃芩苷10～100份、黃芪100～1000份。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于原料藥的重量份數(shù)為硫普羅寧10份、黃芩苷25份、黃芪400份。
4.如權(quán)利要求1-3所述的任一藥物組合物的制備方法，其特征在于，其中的黃芪可以用適宜的溶劑和方法制備得到提取物，提取物再和藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任一制劑，提取物中所含的主要有效成分為黃芪多糖或黃芪總皂苷。
5.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于，提取物中的主要有效成分的總含量不低于30％。
6.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，該組合物還可以由下列原料藥制成硫普羅寧、黃芩苷和黃芪多糖或黃芪總皂苷，其重量配比為硫普羅寧1～100份、黃芩苷5～250份、黃芪多糖0.1～150份；或者為硫普羅寧1～100份、黃芩苷5～250份、黃芪總皂苷0.1～150份。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其原料藥的重量配比為硫普羅寧2～50份、黃芩苷10～100份、黃芪多糖1～15份；或者為硫普羅寧2～50份、黃芩苷10～100份、黃芪總皂苷1～15份。
8.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其原料藥的重量配比為硫普羅寧10份、黃芩苷25份、黃芪多糖2～8份；或者為硫普羅寧10份、黃芩苷25份、黃芪總皂苷2～8份。
9.如權(quán)利要求6-8所述的任一藥物組合物，其特征在于，其中的黃芪多糖的含量不低于30％；黃芪總皂苷的含量不低于30％，黃芪甲苷含量不低于1％。
10.如權(quán)利要求1-3、6-8所述的任一藥物組合物，其特征在于該組合物可以與藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任何一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開(kāi)了一種藥物組合物及其制備方法，該藥物組合物主要由硫普羅寧、黃芩苷和黃芪制成，其重量配比為硫普羅寧1～100份、黃芩苷5～250份、黃芪10～10000份。該組合物還可以由下列原料藥制成硫普羅寧、黃芩苷、黃芪多糖或總皂苷，其重量配比為硫普羅寧1～100份、黃芩苷5～250份、黃芪多糖0.1～150份，或者為硫普羅寧1～100份、黃芩苷5～250份、黃芪總皂苷0.1～150份。該藥物組合物可以制成任何一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。該藥物組合物具有抗肝炎作用，可用于甲肝、乙肝、丙肝等各種類(lèi)型的肝炎。
文檔編號(hào)A61P1/00GK1969937SQ20051010455
公開(kāi)日2007年5月30日 申請(qǐng)日期2005年11月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月22日
發(fā)明者黃振華 申請(qǐng)人:黃振華