專利名稱：半胱胺及其衍生物在制備提高疫苗抗體效價藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領域，具體來說涉及含有半胱胺及其衍生物在制備提高人用或獸用疫苗的抗體效價、提高機體免疫應答反應及抗病力中的藥劑中的應用。本發(fā)明還涉及此用途的藥物組合物及注射劑。
背景技術：
傳染病是人和動物普遍存在的、危害極大的疾病，有許多傳染病是人畜共患的。近年來，由于幾種動物傳染病的出現(xiàn)，嚴重地威脅到人類的健康。因此控制動物傳染病的發(fā)生就是為了更好地保證人類的健康。根據(jù)科學研究表明，人和動物疾病發(fā)生的生理、病理過程是一樣的，所以對其預防和治療原則也是一樣的，即可以通過相同的途徑來達到預期目的。
疫苗是控制和消滅傳染病的有力武器，隨著科學的發(fā)展，疫苗的研究日新月異，但是隨著疫苗種類、技術水平、應用范圍的進展，出現(xiàn)的問題越來越多，科研任務隨之加重。為了達到較好的免疫效果，在制備疫苗時不可避免地要用到佐劑。佐劑是指與抗原一起或預先注入機體后，能增強機體對該抗原特異性免疫應答或改變免疫應答類型的物質。常用的免疫佐劑有氫氧化鋁、卡介苗、短小棒狀桿菌、細菌內毒素、多聚肌甘酸、雙鏈多聚腺甘酸、尿甘酸以及多種由氨基酸和代謝增強劑如D-核糖組成的組合物佐劑。近年來，隨著分子生物學的快速發(fā)展，多肽疫苗、亞單位疫苗、基因缺失疫苗、核酸疫苗不斷涌現(xiàn)，無論在數(shù)量上還是質量上，對疫苗佐劑的要求都越來越高。人們在不斷地積極尋找新型佐劑，但大多尚處于實驗研究階段。而且，由于疫苗作用的充分發(fā)揮與多方面的因素有關，所以如何提高疫苗抗體的效價成為關鍵，即不僅僅可以從研究開發(fā)新的佐劑著手，還可以利用有效的生理活性物質來改善機體的免疫反應和抗體生成能力。
根據(jù)現(xiàn)代神經-內分泌-免疫網絡的生理概念，對機體的內分泌、特別是各種細胞因子、生長因子的內分泌進行合理的調節(jié)來改善動物的免疫反應效果和類型是非常有效的?；趩蝹€細胞因子、生長因子使用的療法根據(jù)現(xiàn)代經驗是復雜的，它們是細胞因子受體的自身調節(jié)機制的相關結果，而且繼而免疫體系的效率降低了。人們還知道，經外源性細胞因子激活免疫體系不是有充分價值的，而且它的天然成分是丟失的。因此，希望制備一種能提高疫苗抗體效價的免疫刺激物質，它能活化在生理水平上的體系，意味著在天然調節(jié)相關和控制的范圍之內。
半胱胺是自然界廣泛存在的一種非常活躍的物質，它具有廣泛的生理調節(jié)作用。例如它是動物體內生長抑素(SS)的耗竭劑，可以通過消耗SS而提高可以促進動物生長的生長激素(GH)水平，起到類似外源GH的作用，促進動物的生長和泌乳。半胱胺已經在醫(yī)藥領域以及促進動物生長、改善肉質和提高奶牛泌乳中作為添加劑直接應用或制作成預混合飼料應用。US專利No.4,711,897公開了動物喂養(yǎng)方式和包括半胱胺的飼料組合物。然而，尚未有關于半胱胺及其衍生物提高人用和獸用疫苗的抗體效價、提高機體免疫應答反應及抗病力的報道。

發(fā)明內容
(一)、要解決的技術問題本發(fā)明的目的在于利用半胱胺生理調節(jié)的作用，提供一種半胱胺及其衍生物在制備提高人用和獸用疫苗的抗體效價和提高機體免疫應答反應及抗病力中的藥劑中的應用，從而提供“活化在生理水平之上”的提高疫苗抗體效價的生理調節(jié)和/或免疫刺激組合物，它們區(qū)別于直接的外源性細胞因子和生長因子及其它合成的疫苗佐劑。
(二)、技術方案為達到上述目的，本發(fā)明提供了半胱胺或其衍生物在制備用于提高疫苗的抗體效價和提高機體免疫應答反應及抗病力的藥物組合物中的應用。本發(fā)明同時提供了一種提高疫苗的抗體效價和提高機體免疫應答反應及抗病力的藥物組合物及注射劑。
本發(fā)明是基于如下根據(jù)第一，半胱胺的性質非?；顫姡欠浅Ｈ菀籽趸妥冑|的物質，不易在常溫和自然環(huán)境下存放和使用，如果要在動物中應用必須進行穩(wěn)定化處理。第二，眾所周知，且在技術背景中所提到的有關半胱胺的專利文獻中，都有對半胱胺可以調節(jié)動物機體內分泌的特性進行了說明，半胱胺可以提高GH水平，從而促進動物的生長和泌乳。然而，由于內分泌和免疫之間網絡的存在，半胱胺也可以間接地調節(jié)胰島素樣生長因子(IGF)、β-內啡肽(β-END)、腫瘤壞死因子(TNF)、細胞因子如白介素-2、6(IL-2、IL-6)。第三，上述IGF、β-END、TNF和IL-2、IL-6都與免疫相關，且IL-2可以直接作為疫苗佐劑應用。本發(fā)明從上述根據(jù)中得到啟示我們完全有可能用半胱胺制備出一種“活化在生理水平之上”的提高疫苗抗體效價的生理調節(jié)和/或免疫刺激組合物，直接添加在飼料中應用和/或作為佐劑應用。
本發(fā)明所述的應用，是將半胱胺及其衍生物單獨作為飼料添加劑與用于某種動物的合適基礎飼料生產最終飼料，采用該最終飼料喂養(yǎng)該種動物；或制成適用于人服用的藥劑；或者將其單獨制備成注射劑直接或與礦物油乳化后作為佐劑預先或注射疫苗時注入人和動物機體內。
或者，是將半胱胺及其衍生物和醫(yī)藥上可被接受的載體配制成藥物組合物，本發(fā)明的藥物組合物含有如下兩種主要成分按重量百分比計1～95％半胱胺或其衍生物和1～80％的醫(yī)藥上可接受的穩(wěn)定劑。其中半胱胺的衍生物包括其鹽類、輔酶A、牛磺酸、胱胺、泛硫乙胺等，它的鹽包括鹽酸半胱胺或其它藥用酸加成鹽。在本發(fā)明中術語“穩(wěn)定劑”與術語“包含化合物宿主材料”具有同樣的意義，因此兩者可以相互交換使用。上述兩種主要成分的配比優(yōu)選為半胱胺1～75％和穩(wěn)定劑1～60％，更優(yōu)選為半胱胺1～40％和穩(wěn)定劑10～40％?；蛘?，由于使用的穩(wěn)定劑與包含化合物宿主材料表示同一組分，它們都代表環(huán)糊精和/或它的衍生物，將其統(tǒng)一為一個術語，權利要求書也如此。
半胱胺的化學結構式是HS-CH2-CH2-NH2。以下提及的術語“半胱胺”表示半胱胺及其鹽類化合物。半胱胺及其鹽是本技術領域的技術人員熟知的。
半胱胺鹽的化學通式是C2H7NS.X，其中X可以是鹽酸鹽、磷酸鹽、酒石酸氫鹽、水楊酸鹽等。使用的半胱胺優(yōu)選地具有藥用標準，其中碳、氫、氮和硫的含量分別約為31.14重量％、9.15重量％、18.16重量％和41.56重量％。
所述包含化合物宿主材料可選自環(huán)糊精和/或它的衍生物，它們選自甲基β-環(huán)糊精(M-β-CD)、羥丙基(hydropropyl)β-環(huán)糊精(HP-β-CD)、羥乙基(hydroethyl)β-環(huán)糊精(HP-β-CD)、聚環(huán)糊精、乙基β-環(huán)糊精(E-β-CD)和/或支化環(huán)糊精。環(huán)糊精的化學通式是(C6O5H9)n.(C6O5H9)2。
值得注意的是由于它的分子內徑是約6～8埃，該內徑使得它特別合適作為制備含半胱胺組合物的包含化合物宿主材料，該制備包括使用包含工藝，因此優(yōu)選使用環(huán)糊精的β-CD形式。以下提及的“環(huán)糊精”表示環(huán)糊精和/或它的衍生物?？梢允褂镁哂蟹€(wěn)定和保護半胱胺免于降解的任何環(huán)糊精衍生物。例如，可以使用上述任何一組環(huán)糊精或其衍生物。使用的包含化合物宿主材料的實際含量依賴于用于制備含半胱胺的組合物的半胱胺實際含量。
上述組合物還可以含有如下成分醫(yī)藥上可被接受的填充劑、粘合劑或包被載體。
所述填充劑可以選自粉狀纖維素、淀粉、二氧化硅和/或硫酸鈣(如CaSO4.2H2O)等。其含量范圍以該組合物總重量計為1～90％，如果在含半胱胺的組合物中填料的含量超過90％，會因此降低主要活性成分的含量，和在改進由與其混合的飼料喂養(yǎng)的動物時，含半胱胺的組合物效果較差。
上述粘合劑的含量為5～50％，優(yōu)選為10～40％，更優(yōu)選為15～35％。實際含量會依賴于使用的半胱胺，包含化合物宿主材料和其它成分的實際數(shù)量。粘合劑可以選自羥丙基淀粉、微生物藻酸鹽、微結晶纖維素和淀粉。如果組合物中粘合劑的含量小于5％，生產的組合物顆粒會缺乏要求的硬度，組合物的制造變得非常困難。然而如果粘合劑的含量大于50％，獲得的組合物會具有過度的硬度，這會導致組合物難以被腸道吸收。
上述包被載體的含量為1～20％，優(yōu)選為1～15％，更優(yōu)選為2～10％。實際含量會依賴于使用的半胱胺，包含化合物宿主材料和其它成分的實際數(shù)量。包被載體在組合物中可顯示為多層結構，并且優(yōu)選在PH值1.5～3.5下保持不溶解。包被載體在一些實施方案中優(yōu)選為固體載體，該固體載體是在動物腸內可被酶解代謝的包衣。包衣材料優(yōu)選腸溶包衣材料，它允許在堿性環(huán)境的腸中被溶解。包衣材料可以選自下列物質鄰苯二甲酸醋酸纖維素、類鄰苯二甲酸醋酸淀粉、鄰苯二甲酸甲基纖維素、鄰苯二甲酸的葡萄糖或果糖類衍生物、丙烯酸類和甲基丙烯酸類共聚物、聚甲基乙烯基醚、馬來酸酐共聚物的部分酯化物質，蟲膠或甲醛明膠(formogelatine)。如果包衣材料的含量小于1％，組合物的顆粒可能不完全由用作保護層的包衣材料覆蓋。含半胱胺的組合物可因此在由腸吸收入動物血流之前降解。另一方面，如果包衣材料的含量超過20％，組合物中的活性成分不能有效地從組合物釋放。因此，達不到提高疫苗效價或機體免疫力的希望調節(jié)。
該組合物還可以含有0.05～0.3％調味劑和矯臭氣味劑，它們可以是食用香料、甜味劑、味精類或食鹽等。
可將該組合物制成適用于人服用的藥劑如片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服劑、滴鼻劑、噴霧劑或其他醫(yī)藥學上可接受的劑型。
還可以將該組合物與用于動物的合適基礎飼料生產最終飼料，采用該最終飼料喂養(yǎng)該動物。
在最終的飼料中該組合物的含量為50～1000ppm組合物?；蛘撸暳匣景?0～500ppm半胱胺或其衍生物。
用于本發(fā)明的半胱胺的組合物形式為小顆粒的形式，每個顆粒的優(yōu)選直徑基本為0.28～0.90mm。采用本技術領域的技術人員已知的微囊化方法制備這些顆粒?？梢允褂玫囊环N物質是以上描述的包含化合物宿主材料(它可主要包括環(huán)糊精)。包含化合物宿主材料是用作分子膠囊以包合半胱胺分子的大分子物質，因此將組合物中的半胱胺保護和與光、熱量、周圍的空氣和水分隔絕。從而保持半胱胺的穩(wěn)定性。用于微囊化方法的包合化合物宿主材料優(yōu)選為含有6～12個葡萄糖分子的環(huán)狀多糖化合物，在Bacillus屬桿菌存在下產生的環(huán)糊精糖苷轉移酶和淀粉作用制備該環(huán)狀多糖化合物。使用急性、亞急性和慢性毒性試驗的各種研究顯示該大分子物質是非毒性的。在微囊化方法之后，可以采用上述包衣材料的至少一層和優(yōu)選多層途敷每個顆粒。
以下提供用于本發(fā)明的含半胱胺的組合物制備方法的更詳細描述。
在內襯聚四氟乙烯和裝配有聚四氟乙烯涂敷攪拌器的帶夾套反應器中，加入3500～5000g的75％的鹽酸半胱胺乙醇溶液并用氮氣保護。使用的半胱胺的純度，熔點和燃燒殘余物優(yōu)選分別是98％或以上，66～70℃和0.05％或以下。然后在氮氣保護下將1100～1700g β-環(huán)糊精加入到反應器中，β-環(huán)糊精的質量是根據(jù)食品添加劑的要求，干基純度大于98％，干燥失重小于10.0％，燃燒殘余物小于0.2％，重金屬的含量小于10ppm，砷含量小于2ppm。然后將混合物在40℃下加熱3小時。停止加熱后繼續(xù)攪拌兩小時，然后在40～50℃的溫度下真空干燥產物之后，將由此獲得的產物研磨和過40目篩。可能與組合物成分接觸的所有設備部件應當優(yōu)選由不銹鋼制成。
然后在罐類型混合器中，在干燥環(huán)境氮氣保護下加入4000～5000g(按干基重量計)上述所得的經過包含的半胱胺、3000～4300g填料，和1300～1700g粘合劑。充分混合上述成分，可以加入適量的無水乙醇。獲得的混合物為具有適當硬度的軟材料，其硬度以手掌輕握成形為球、輕觸使球形混合物破碎為宜。在氮氣保護下用成粒機對混合物就行造粒，將獲得的小顆粒立即引入流化床干燥器，在40～50℃的溫度下在基本真空環(huán)境中干燥。
然后采用如下配方制備腸包衣材料鄰苯二甲酸醋酸纖維素8.0g、鄰苯二甲酸二乙酯2.4ml，乙酸乙酯33.0ml和乙酸異丙酯33.6ml。在氮氣保護下將上述腸包衣材料至少一層但優(yōu)選多層均勻地涂敷上述獲得的顆粒。腸包衣材料僅可以在堿性環(huán)境中溶解，這可防止該組合物在動物胃中的時候半胱胺會刺激動物的胃粘膜。
然后在真空干燥器中在40～50℃的溫度下使含半胱胺的組合物顆粒完全干燥除去所有的溶劑，并將獲得的顆粒冷卻到室溫，與適量的調味劑和氣味劑混合。
上述得到的組合物表現(xiàn)為具有平滑表面的小顆粒狀(或微粒)，顆粒的直徑優(yōu)選為0.28～0.90mm，并具有良好的流動性能，容易與各種動物飼料共混。本發(fā)明的組合物也具有優(yōu)異的穩(wěn)定性，將所得組合物采用密閉塑料袋包裝和在冷、暗和干燥位置貯存一年之后，它們的性能基本保持不變。因此，它們滿足食品添加劑的要求。
本發(fā)明還提供了另一種用于注射到機體內以提高疫苗的抗體效價和提高機體免疫應答反應及抗病力的注射劑，該注射劑總含有0.25～75％的半胱胺、或其衍生物(包括其鹽類、輔酶A、?；撬?、胱胺、泛硫乙胺)及其前體物質(包括胱胺酸、半胱胺酸等)。還可以含有下列成分中的一種或幾種維生素C(穩(wěn)定劑)0.1～5％、水溶性維生素E(穩(wěn)定劑)0.1～5％、甘露寡糖(代謝增強劑)1～7.5％、D-核糖(代謝增強劑)0.2～7.5％。
將上述組合物溶于0.1～100倍體積的(w/v)的生理鹽水中，即得本發(fā)明注射劑，可將其直接或與礦物油乳化后作為佐劑預先或注射疫苗時注入機體內。每次注射到機體的量為0.1～100ml，注射次數(shù)為1～10次。
(三)、有益效果該技術方案是根據(jù)現(xiàn)有的常規(guī)疫苗佐劑使用方法而設計的，它可以在注射疫苗前或注射疫苗時使用。這樣使用起來就比較方便，成本也會相應的降低，發(fā)揮作用也更加迅速。由于是單獨使用(而不是與飼料一起使用)，它的使用劑量會受到更加嚴格的控制。
本發(fā)明是從生理的角度出發(fā)，根據(jù)現(xiàn)代神經-內分泌-免疫網絡的機理，通過調節(jié)機體自身生理反應來提高機體對疫苗的反應性，而不是直接從外部添加的相類似作用的物質如細胞因子、激素等；是活化在生理水平之上的體系，是在天然調節(jié)相關和控制的范圍之類。本身作為一種動物體內天然存在的物質，它不會給機體帶來無法預計的副作用。
具體實施例方式
以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
實施例1在內襯聚四氟乙烯和裝配有涂敷聚四氟乙烯攪拌器的夾套反應器中，在氮氣保護下加入3500g的75％的鹽酸半胱胺乙醇溶液，再加入1100gβ-環(huán)糊精，然后將混合物在40℃下加熱攪拌3小時。停止加熱后繼續(xù)攪拌2小時，在45℃的溫度下真空干燥產物，所得產物研磨和過40目篩。
在罐類型混合器中，在干燥環(huán)境保護下加入4000g(按干基重量計)上述所得的經過包含的半胱胺、2000g粉狀纖維素，和1000g羥丙基淀粉以及1700g微晶纖維素。充分混合上述成分，加入適量的無水乙醇。獲得的混合物為具有適當硬度的軟材料。在氮氣保護下用成粒機對混合物就行造粒，將獲得的小顆粒立即引入流化床干燥器，在40～50℃的溫度下在基本真空環(huán)境中干燥。
然后采用如下配方制備腸包衣材料鄰苯二甲酸醋酸纖維素8.0g、鄰苯二甲酸二乙酯2.4ml，乙酸乙酯33.0ml和乙酸異丙酯33.6ml。在氮氣保護下將上述腸包衣材料至少一層但優(yōu)選多層均勻地涂敷上述獲得的顆粒。腸包衣材料僅可以在堿性環(huán)境中溶解，這可防止該組合物在動物胃中的時候半胱胺會刺激動物的胃粘膜。
然后在基本真空的干燥器中在45℃的溫度下完全干燥含半胱胺的組合物顆粒并除去所有溶劑。還可以將獲得的顆粒冷卻到室溫，與適量的調味劑和矯臭劑(食用香料)混合。
上述得到的組合物表現(xiàn)為具有平滑表面的小顆粒狀(或微粒)，顆粒的直徑優(yōu)選為0.40mm，并具有良好的流動性能。
將所得組合物采用密閉塑料袋包裝和在冷、暗和干燥位置貯存一年之后，它們的主要活性成分-半胱胺或其衍生物含量基本不變、使用效果保持不變。
實施例2在內襯聚四氟乙烯和裝配有涂敷聚四氟乙烯攪拌器的夾套反應器中，在氮氣保護下加入4000g的75％的半胱胺乙醇溶液，再加入1300g甲基β-環(huán)糊精，然后將混合物在40℃下加熱攪拌3小時。停止加熱后繼續(xù)攪拌2小時，在45℃的溫度下真空干燥產物，所得產物研磨和過40目篩。
在罐類型混合器中，在干燥環(huán)境保護下加入4000g(按干基重量計)上述所得的經過包含的半胱胺、3000g二氧化硅，和1300g微晶纖維素以及1700g微生物藻酸鹽。充分混合上述成分，加入適量的無水乙醇。獲得的混合物為具有適當硬度的軟材料。在氮氣保護下用成粒機對混合物就行造粒，將獲得的小顆粒立即引入流化床干燥器，在40～50℃的溫度下在基本真空環(huán)境中干燥。
然后采用如下配方制備腸包衣材料鄰苯二甲酸醋酸纖維素8.0g、鄰苯二甲酸二乙酯2.4ml，乙酸乙酯33.0ml和乙酸異丙酯33.6ml。在氮氣保護下將上述腸包衣材料至少一層但優(yōu)選多層均勻地涂敷上述獲得的顆粒。
然后在基本真空的干燥器中在45℃的溫度下完全干燥含半胱胺的組合物顆粒并除去所有溶劑。還可以將獲得的顆粒冷卻到室溫，與適量的調味劑和矯臭劑(食用香料)混合。
實施例3稱取下列物質半胱胺300.0g、維生素C5.0g、甘露寡糖20.0g，將上述物質溶于300ml的生理鹽水中，充分溶解混合均勻后保存在密閉的試塑料劑瓶中，即得本發(fā)明的注射劑。
實施例4稱取下列物質半胱胺鹽酸鹽450.0g、?；撬?0.0g、維生素C5.0g、水溶性維生素E10.0g、甘露寡糖10.0g、D-核糖15.0g，將上述物質溶于1000ml的生理鹽水中，充分溶解混合均勻后保存在密閉的試塑料劑瓶中，即得本發(fā)明的注射劑。
實施例5提高免疫性能實驗小鼠灌服實施例1組合物(M)試驗方案詳見表1。
表1.小鼠灌服M試驗方案

試驗動物分組和接種潔凈C57BL/6N雄性小鼠220只，共分為4組，每組6個重復，每個重復8只，飼養(yǎng)于潔凈舍，余28只用于預試驗。預試期7天，正試期30天。
每組選10只(每個重復3只)于試驗結束前5日每只腹腔接種2％(2*10^8個/ml)綿羊紅細胞0.5ml，試驗結束眼睛取血致死，取脾臟測定抗體生成細胞。
試驗結果小鼠灌服M免疫器官相對重量詳見表2；小鼠灌服M白細胞數(shù)、脾淋巴細胞轉化率、抗體生成細胞和NK細胞殺傷率見表3；小鼠灌服M后30天血清IL-2，IL-6和IGF-1的含量詳見表4。
表2.小鼠灌服M后30天免疫器官相對重量單位mg/100g

表3單位*10^9個/升，刺激指數(shù)(SI)，OD值和殺傷率(％)

表4.單位pg/ml，pg/ml，ng/ml

由上述結果可見，小鼠灌服實施例1的組合物，可顯著改善小鼠的免疫功能，特別是細胞免疫功能，具體表現(xiàn)為胸腺相對重量增加，脾淋巴細胞轉化率提高。
實施例6提高免疫性能實驗試驗選擇健康的AA肉雞出雛苗雞288羽(經雌雄鑒別)，分兩系列試驗進行。日糧水平按飼養(yǎng)標準配制。
系列一分為試驗1組和對照2組，10羽/籠，8籠/組，80只/組，公母分飼，飼養(yǎng)49天；系列二分為試驗1組和對照2組，8羽/籠，8籠/組，64只/組，公母分飼，飼養(yǎng)63天。
前1～20日齡時，試驗1、2組均按200mg/kg體重添加本發(fā)明的組合物(實施例1所得)在小肉雞料中。對照1、2組添加等量的無活性成分的載體混合物。21日齡后，試驗1，2組按400mg/kg體重添加本發(fā)明的組合物(實施例1所得)，對照1、2組添加等量的無活性成分的載體混合物。
系列1于7日齡接種雞新城疫II系疫苗，于14、21日齡每組宰殺8只(雌、雄各4只)，分別取血樣，制備血清待測；于28、35、42、49日齡每組選取8只(雌、雄各4只)分別采集血樣，制備血清待測，-20℃保存?zhèn)溆谩?br> 系列2于21日齡接種雞新城疫IV系疫苗，于28、35、42、49、56、63日齡時每組選取8只(雌雄各4)分別采集血樣，制備血清待測，-20℃保存?zhèn)溆谩?br> 其日糧配方如下
營養(yǎng)標準項目(％)前期料(1-20日齡) 中期料(21-42日齡) 后期料(43-63日齡)代謝能(Mcal/Kg) 2.950 3.0503.050粗蛋白 21.92 19.0617.63亞油酸 1.52 1.73 1.70鈣 1.00 0.85 0.85有效磷 0.47 0.42 0.40食鹽0.35 0.35 0.35賴氨酸 1.14 0.96 0.90蛋氨酸 0.54 0.47 0.44蛋+胱 0.88 0.78 0.73鈉 0.17 0.14 0.14鉀 0.81 0.78 0.72原料組成項目(％)前期料(1-20日齡) 中期料(21-42日齡)后期料(43-63日齡)0280玉米60.11 63.5 67.260102大豆粕 29.82 29.2 25.700045魚粉(進)3.90 1.00 1.500508植物油 2.05 2.20 1.760505磷酸氫鈣1.45 1.60 1.400504石粉1.15 1.00 0.890506蛋氨酸 0.22 0.20 0.190511食鹽0.30 0.30 0.300507賴氨酸 - --預混料 1.00 1.00 1.00合計100.00100.00 100.00
每千克1％預混料中維生素、礦物質含量錳10000mg 鹽酸硫胺素260mg鋅7500mg 核黃素960mg銅800mgD-泛酸鈣1300mg鐵10000mg 煙酸8000mg碘45mg 膽堿66000mg硒44.7mg VB122.7mgVA1100000IU葉酸120mgVD33360000IU鹽酸吡哆醇530mgVE3600IU 生物素24mgVK3260mg實驗結果表1系列一14～49日齡免疫性能

表2系列二21～63日齡免疫性能

由上述表格中數(shù)據(jù)可以看出系列一試驗中，AA肉雞1日齡添加本發(fā)明的提高疫苗抗體效價的組合物，7日齡免疫，14日齡至21日齡免疫性能逐漸加強達峰值，28日齡雖然開始下降，但是仍顯著高于對照組；系列二試驗中，AA肉雞1日齡添加本發(fā)明的提高疫苗抗體效價的組合物，21日齡免疫，免疫前采樣1次至免疫后28日齡免疫性能加強，顯著高于對照組。35～63日齡期間，兩系列肉雞血清抗體效價表現(xiàn)為顯著性波動性變化，但總體平均水平均無顯著性差異。
本試驗資料表明，AA肉雞日糧添加本發(fā)明的提高疫苗抗體效價的組合物，在免疫前期能夠顯著提高免疫性能。
實施例7提高免疫應答反應實驗試驗動物與分組選擇1日齡的SPF雞160羽(公母隨機)隨機分為4組，為對照組1組、對照2組、試驗1組和試驗2組，40只/組，每組再隨機分成兩小組(A、B)，A組標記翅號，B組不標記。
試驗方案對照1組和對照2組一直飼喂基礎日糧，試驗1組和試驗2組從1日齡開始按200mg/kg體重添加本發(fā)明的組合物(實施例2所得)，直到21日齡；從22日齡開始按400mg/kg體重添加本發(fā)明的組合物(實施例2所得)，直到試驗結束。
雞新城疫弱毒疫苗(進口優(yōu)質)接種方式對照1組和試驗1組在8日齡免疫接種雞新城疫疫苗，滴鼻點眼，每只雞1只份。對照2組和試驗2組在8日齡免疫接種雞新城疫弱毒疫苗(首免)，滴鼻點眼，每只雞1只份；在22日齡時加強免疫(二免)，滴鼻點眼，每只雞1只份。其它免疫按正常免疫程序執(zhí)行。
各組雞在1日齡采血一次，8日齡首次免疫，首免前采血一次，首免后1周內每3天采血一次，免疫一周后(17日齡)每周采血一次，分離血清后檢測新城疫抗體效價。試驗1組和對照1組試驗期為54天。試驗2組和對照2組免疫兩次，試驗2組和對照2組在22日齡二免后開始一周內每3天采血一次，31日齡后每周采血一次，試驗2組和對照2組試驗期為70天。每次輪流從A、B兩組中隨機抽取10只。檢測新城疫抗體效價?？贵w(HI)效價結果平均值見表3和表4。
表3試驗1組及對照1組新城疫抗體(HI)檢測平均值(XLog2)

表4試驗2組及對照2組新城疫抗體(HI)檢測平均值(Xlog2)

由上述表格中數(shù)據(jù)可以看出試驗1組和對照1組新城疫(ND)抗體的平均水平雖沒有顯著差異，但試驗1組最高點的水平(24日齡)和免疫后的基礎水平(49日齡后，抗體水平維持一定的基礎水平)顯著高于對照組，說明本發(fā)明的提高疫苗抗體效價的組合物能促進試驗雞只的免疫應答反應，通過提高應答記憶和加快對病毒再次感染時的反應速度及加強免疫應答強度來實現(xiàn)的。從試驗2組和對照2組的試驗證實了這種可能性。在21日齡前，兩組之間沒有顯著的差異，但22日齡加強免疫后，試驗組抗體水平下降幅度顯著低于對照組，而隨后(22～38日齡)抗體水平又顯著高于對照組。在52日齡后，兩組抗體水平都達到穩(wěn)定的基礎水平，但試驗組顯著高于對照組。在整個試驗階段，試驗組的平均水平顯著高于對照組(P＜0.001)。
綜合本發(fā)明的提高疫苗抗體效價的組合物對SPF雞的生產性能影響和提高免疫應答反應來看，添加本發(fā)明的提高疫苗抗體效價的組合物可以顯著提高SPF雞的免疫應答反應，促進抗體的產生和維持。
實施例8生產特異性抗體的實施例3和例4的制品的活性用C3H小鼠血清免疫7天后，通過卵蛋白，用ELISA測定特異性抗體。根據(jù)實施例3和4分別(設定試驗1和試驗2)重復給定制品，3次0.4mli.P.。結果見下表

從表中結果可以清楚地看出，根據(jù)實施例3和4的注射用組合物制品顯著地促進了特異性抗體的產生。
實施例9提高免疫應答反應實驗選用SPF雞，在8日齡進行雞新城疫疫苗注射，在注射前，對照組注射0.5mL生理鹽水；試驗1組注射0.5ml實施例3制品；試驗2組注射0.5ml實施例4制品。7天后，進行雞新城疫疫苗抗體效價檢測，結果如下

注**表示與對照組相比差異顯著。
上表結果表明，根據(jù)實施例3和4的注射用組合物制品顯著地促提高了疫苗抗體的效價。
權利要求
1.半胱胺及其衍生物在制備提高人用或獸用疫苗抗體效價和提高機體免疫應答反應及抗病力的藥劑中的應用，其特征在于，所述半胱胺衍生物選自其前體物質、半胱胺鹽類、輔酶A、?；撬帷㈦装泛头毫蛞野分械囊环N或幾種。
2.如權利要求1所述的應用，是將半胱胺及其衍生物單獨作為飼料添加劑與用于某種動物的合適基礎飼料生產最終飼料，采用該最終飼料喂養(yǎng)該種動物；或制成適用于人服用的藥劑；或者將其單獨制備成注射劑直接或與礦物油乳化后作為佐劑預先或注射疫苗時注入人或動物機體內。
3.如權利要求1所述的應用，是將半胱胺及其衍生物和醫(yī)藥上可被接受的載體配制成藥物組合物，該組合物含有按重量百分數(shù)計1～95％的半胱胺及其衍生物和1～80％的穩(wěn)定劑，其中所述的穩(wěn)定劑選自甲基β-環(huán)糊精、羥丙基β-環(huán)糊精、羥乙基β-環(huán)糊精、聚環(huán)糊精、乙基β-環(huán)糊精或支化環(huán)糊精中的一種或幾種；該組合物的制劑形式為片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服劑、滴鼻劑、噴霧劑或其他醫(yī)藥學上可接受的劑型。
4.如權利要求3所述的應用，其中所述藥物組合物含有以重量百分數(shù)計1～75％的半胱胺及其衍生物和1～60％的穩(wěn)定劑。
5.如權利要求3所述的應用，其中所述藥物組合物含有以重量百分數(shù)計1～40％的半胱胺或其衍生物和1～40％的穩(wěn)定劑。
6.如權利要求3所述的應用，其中所述藥物組合物含有以重量百分數(shù)計30％的半胱胺或其衍生物和10％的穩(wěn)定劑。
7.如權利要求3～6任一項所述的應用，其特征在于，所述的藥物組合物含有獸醫(yī)藥上可被接受的填充劑1～90％、粘合劑10～40％、包被載體1～15％、調味劑和氣味劑0.05～0.3％中的一種或幾種。
8.如權利要求7所述的應用，其特征在于，所述的填充劑選自粉狀纖維素、淀粉、二氧化硅和硫酸鈣等中的一種或幾種。
9.如權利要求7所述的應用，其特征在于，所述的粘合劑選自羥丙基淀粉、微生物藻酸鹽、微結晶纖維素和淀粉等中的一種或幾種。
10.如權利要求7所述的應用，其特征在于，所述的包被載體是一層或多層在pH值1.5～3.5下不溶解的固體載體，其載體選自鄰苯二甲酸醋酸纖維素、類鄰苯二甲酸醋酸淀粉、鄰苯二甲酸甲基纖維素、鄰苯二甲酸的葡萄糖或果糖類衍生物、丙烯酸類和甲基丙烯酸類共聚物、聚甲基乙烯基醚、馬來酸酐共聚物的部分酯化物質，蟲膠或甲醛明膠中的一種或幾種。
11.如權利要求3～6中任一項所述的應用，其特征在于，所述的藥物組合物應用于動物時，在制備的最終飼料中所占比例為50～1000ppm。
12.如權利要求1所述的應用，是將半胱胺及其衍生物和醫(yī)藥上可被接受的載體配制成注射劑，該注射劑含有0.25～75％的半胱胺或其衍生物，所述輔料選自下列成分中的一種或幾種，維生素C 0.1～5％、水溶性維生素E 0.1～5％、甘露寡糖1～7.5％、D-核糖0.2～7.5％，余量為注射用生理鹽水。
13.如權利要求11所述的應用，是將注射劑直接或與礦物油乳化后作為佐劑預先或注射疫苗時注入人和動物機體內，每次注射到機體內的量為0.1～100ml，注射次數(shù)為1～10次。
全文摘要
本發(fā)明提供了半胱胺及其衍生物的一種新用途，即在制備提高人用或獸用疫苗抗體效價和提高機體免疫應答反應及抗病力中的藥劑中的應用。所述應用是將半胱胺及其衍生物單獨應用，或者將其制備成藥物組合物?？梢詫⒃摻M合物與用于某種動物的合適基礎飼料生產最終飼料，采用該最終飼料喂養(yǎng)該種動物；或采用該組合物制成適用于人服用的藥劑。還可以將半胱胺或其衍生物單獨或者連同穩(wěn)定劑、代謝增強劑溶于水制備注射劑，直接或與礦物油乳化后作為佐劑預先或注射疫苗時注入人和動物機體內。
文檔編號A61K31/185GK1772295SQ20051010554
公開日2006年5月17日 申請日期2005年9月27日 優(yōu)先權日2005年9月27日
發(fā)明者聞芹堂, 池豪, 徐金先 申請人:華擴達動物科技(I.P.5)有限公司